Informe de Laboratorio 2

INFORME DE LABORATORIO
PRCTICA N2
ELECTROFORESIS DE PROTENAS DEL SUERO HUMANO
CROMATOGRAFA EN PAPEL
ANDRS HERNANDO POLO GUZMN

JOHN CAMILO OCHOA HERNNDEZ
JAVIER MADRIGAL MEJA
ISABELA DUQUE SCHWEIZER
KAREN JOHANA CASTAO PREZ
YERLIN JAVIER QUIONEZ BECERRA
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE MEDICINA
MEDELLN - ANTIOQUIA
2015-1
CONTENIDO
1.
INTRODUCCIN..................................................................................................... 3
2.
OBJETIVOS............................................................................................................ 4
2.1.
OBJETIVOS GENERALES.............................................................................. 4
2.1.1.
ELECTROFORESIS.................................................................................. 4
2.1.2.
CROMATOGRAFA EN PAPEL................................................................4
2.2.
OBJETIVOS ESPECFICOS............................................................................4
2.2.1.
ELECTROFORESIS.................................................................................. 4
2.2.2.
CROMATOGRAFA EN PAPEL................................................................5
3.
MARCO CONCEPTUAL......................................................................................... 6
4.
METODOLOGA................................................................................................... 10
4.1.
MATERIALES................................................................................................. 10
4.1.1.
ELECTROFORESIS................................................................................ 10
4.1.2.
CROMATOGRAFA EN PAPEL..............................................................12
4.2.
5.
PROCEDIMIENTO......................................................................................... 14
4.2.1.
ELECTROFORESIS................................................................................ 14
4.2.2.
CROMATOGRAFA EN PAPEL..............................................................14
RESULTADOS...................................................................................................... 16
5.1.
ELECTROFORESIS....................................................................................... 16
5.2.
CROMATOGRAFA EN PAPEL.....................................................................17
6.
CLCULOS........................................................................................................... 19
7.
ANLISIS.............................................................................................................. 20
7.1.
ELECTROFORESIS....................................................................................... 20
7.2.
8.
CONCLUSIONES.................................................................................................. 29
8.1.
ELECTROFORESIS....................................................................................... 29
8.2.
9.
BIBLIOGRAFA..................................................................................................... 31
10.
ANEXOS............................................................................................................ 32
10.1.
ANEXO 1: Fichas de Seguridad...............................................................32
10.2.
ANEXO 2: Diagramas de Flujo.................................................................41
10.3.
ANEXO 3: Procedimientos y Frmulas (Clculos).................................42
1. INTRODUCCIN
Las macromolculas hacen parte esencial de la conformacin de los seres vivos,

motivo por el cual su estudio y anlisis resulta de vital importancia; en una
disciplina como lo es la Medicina, resultan de especial inters aquellas que
conciernen al cuerpo humano, dando explicacin a las enfermedades que puedan
presentarse por la deficiencia o exceso de alguna de ellas en el organismo y
buscando soluciones a estas, con el fin de mejorar la calidad de vida del paciente,
la cual se consagra la misin del futuro mdico.
Considerando lo anterior, es preciso conocer la composicin de las
macromolculas, para lo cual es necesario desarrollar tcnicas que posibiliten
diferenciar los componentes de una mezcla en la cual las mismas estn presentes,
tales como la electroforesis, la cual permite separar molculas por su masa
relativa o su punto isoelctrico, y la cromatografa, la cual es una tcnica de
fraccionamiento que permite separa los componentes de una mezcla empleando
el arrastre capilar selectivo. En el presente informe se dar cuenta de los
resultados de la prctica con su respectivo anlisis, donde no solamente se le da
un valor importante a la parte cuantitativa sino tambin a la cualitativa, ya que
mediante la descripcin y la comparacin pueden definirse las implicaciones que
se derivan de los resultados observados.
2. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVOS GENERALES

2.1.1. ELECTROFORESIS
Efectuar una electroforesis de protenas del suero humano con
muestras control y muestras problema, con el fin de comprender las
generalidades de esta tcnica en condiciones no desnaturalizadas y
no reductoras, y analizar las bandas resultantes.
2.1.2. CROMATOGRAFA EN PAPEL
Efectuar una separacin cromatogrfica de diferentes pigmentos en
papel, con el fin de comprender las generalidades de la tcnica de
cromatografa y analizar las bandas resultantes.
2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Establecer los valores normales de las protenas en el plasma

sanguneo.
Realizar un paralelo entre las bandas resultantes de las muestras
control (normales) y las bandas resultantes de las muestras
problema.
Identificar qu posibles patologas pueden presentarse por la
deficiencia o el exceso de ciertas protenas en el plasma
sanguneo.
Precisar el efecto que tiene la polaridad del eluyente sobre la

separacin cromatogrfica.
Evaluar el comportamiento de la muestra con respecto a la fase

mvil y el comportamiento de esta ltima con respecto a la fase
estacionaria.
Identificar los componentes que resultan de las diferentes
muestras y explicar los cambios de coloracin observados.
Determinar el factor de retardo (Rf) entre las distancias recorridas
por cada uno de los componentes observados y la distancia
recorrida por el eluyente correspondiente.
3. MARCO CONCEPTUAL
Las macromolculas son la base estructural y funcional de los seres vivos. Su

configuracin est compuesta por una gran cantidad de subunidades, lo que
supone la elevada masa molecular que poseen dichas molculas, superior a
10000 Dalton; adems, su estructura puede ser extendida o ramificada.
Las macromolculas pueden clasificarse como orgnicas o inorgnicas, resultando
las primeras de especial inters, entre las que se encuentran aquellas que
participan en el organismo humano, tales como protenas, carbohidratos, lpidos y
cidos nucleicos. Dependiendo del tipo de estructura que alcancen, cada
macromolcula responder a una funcin determinada. Estos niveles son:
Estructura Primaria: Corresponde a las subunidades en cadena que

forman en su manera ms sencilla la macromolcula.
Estructura Secundaria: Corresponde a la estructuracin que adquiere la
cadena principal de la macromolcula, por ejemplo, las formas de -Hlice
o Lmina- en las protenas que se presentan segn los puentes de
hidrgeno que se den entre sus aminocidos.
Estructura Terciaria: Corresponde a la disposicin espacial de la
molcula, otorgndole una forma tridimensional. En el caso de las
protenas, se clasifican como fibrosas o globulares.
Estructura Cuaternaria: Corresponde a la organizacin estructural que
comprende la unin de ms de una cadena de polmeros para formar
oligmeros. Este tipo de estructura solo lo alcanzan las protenas.
A continuacin se presenta la definicin y caracterizacin de cada una de las

macromolculas mencionadas anteriormente:
Carbohidratos: Tambin conocidos como glcidos o sacridos, cuya funcin
reside en el almacenamiento de energa y en la estructuracin de los seres vivos.
Los carbohidratos estn conformados por tomos de carbono, hidrgeno y
oxgeno, los cuales se organizan de manera tal que, en torno a una cadena de
carbonos, se ubican grupos hidroxilo y radicales de hidrgeno, adems, esta
estructura cuenta con un grupo carbonilo con una funcin qumica aldehdo o
cetona; es por esta razn que se definen como polihidroxialdehdos y
polihidroxicetonas. De esta manera, los carbohidratos pueden ser clasificados
segn su complejidad:
Monosacridos: Son los ms simples de los carbohidratos, por tanto, se

consideran como las unidades bsicas de los mismos (monmeros), los cules
estn conformados por cadenas de 3 a 7 carbonos, por ejemplo, ribosa (5
carbonos), fructosa (6 carbonos), glucosa (6 carbonos). Su continua
agregacin da lugar a la formacin de sacridos ms complejos.
Disacridos: Se forman a partir de la unin de dos monosacridos mediante

un enlace glicosdico. Los principales disacridos son: Maltosa, lactosa,
sacarosa.
Oligosacridos: Se forman a partir de la unin entre 3 y 10 monosacridos
mediante enlaces glicosdicos.
Polisacridos: Son polmeros que se forman a partir de la unin de ms de 10
monosacridos mediante enlaces glicosdicos. Segn la funcin que
desempeen pueden clasificarse como polisacridos estructurales o de reserva
energtica.
cidos Nucleicos: Se dividen en ARN y ADN, los cuales estn formados por
nucletidos, que, a su vez, estn conformados por una pentosa y un grupo fosfato
en conjunto con una base nitrogenada en especfico, que puede ser adenina,
guanina, citosina, timina o uracilo.
La diferencia entre ambos cidos nucleicos radica en que el ADN tiene una
estructura circular, que en ltimas forma una cadena de doble hlice, adems,
contiene en sus nuclecidos un azcar desoxirribosa y la base nitrogenada timina
como excepcin; por el contrario, el ARN tiene una estructura extendida de una
cadena simple, adems, contiene en sus nuclecidos un azcar ribosa y la base
nitrogenada uracilo como excepcin.
Protenas: Son molculas orgnicas de gran complejidad constituidas por
cadenas de aminocidos, cuya estructura consta de un carbono () al que estn
unidos un grupo carboxilo, un grupo amino, un tomo de hidrgeno y un grupo
radical (cadena lateral). Los aminocidos se unen por medio de un enlace
peptdico entre el grupo amino y el grupo carboxilo, formando as dipptidos,
oligopptidos y polipptidos, tratndose en esta ltima clasificacin de hasta 4000
aminocidos.
Entre las funciones biolgicas de las protenas se encuentran el trasporte de
sustancias, la defensa contra infecciones, la formacin de estructuras celulares y
tisulares, el trasporte de mensajes qumicos, la contraccin y el movimiento
muscular y la catlisis de reacciones qumicas, las cuales estn asignadas a
protenas especficas.
Protenas en el Plasma
fracciones de la sangre.
por agua, electrolitos,
sustancias reguladoras
continuacin:
-
Sanguneo: El plasma sanguneo es una de las dos

Adems de las clulas sanguneas, est compuesto
nutrientes, sustancias nitrogenadas no proteicas,
y protenas, las cuales sern presentadas a
Albmina: Se sintetiza en el hgado, posee carga neta negativa y se

encuentra en concentraciones normales entre 3.5 y 5.0 g/dL en la sangre.
Su funcin es mantener la presin onctica para que se distribuyan
7
correctamente los lquidos corporales; esta distribucin se da entre el

compartimiento intravascular y el extravascular
Fibringeno: Es soluble en el plasma sanguneo, tiene una longitud
aproximada de 46 nm y un peso de 340 kDa. En sus extremos est cargada
negativamente lo que permite su solubilidad, adems de la repulsin de
otras molculas para impedir la agregacin y posibilitar el continuo flujo de
sangre. Su funcin principal es la formacin de cogulos sanguneos que
impiden la extravasacin de sangre.
Globulina: Es un conjunto de protenas presentes en tejidos animales y
vegetales, las cuales son hidrofbicas y solubles en soluciones salinas.
Entre sus protenas ms importantes se encuentran los anticuerpos, las
seroglobulinas, la legumina, la lactoglobulina, entre otras. Se divide en
globulina -1, -2, , gamma (), cuyas concentraciones normales en la
sangre son 0.1 a 0.3 g/dL, 0.6 a 1.0 g/dL, 0.7 a 1.2 g/dL, 0.7 a 1.6 g/dL,
respectivamente.
Lpidos: Tambin denominados como grasas, no entran en la clasificacin de

macromolculas; sin embargo, al ser biomolculas estn implicadas en funciones
biolgicas tales como el almacenamiento de energa, la composicin estructural de
las membranas, el aislamiento trmico, la trasmisin de seales qumicas de
clula a clula, entre otras.
Los lpidos estn principalmente conformados por tomos de carbono, hidrgeno y
oxgeno, que tambin pueden presentar tomos de fsforo, azufre y nitrgeno en
su estructura. Son sustancias solubles en compuestos orgnicos apolares e
insolubles en agua. Los lpidos se pueden clasificar como: cidos grasos, lpidos
saponificables y lpidos insaponificables.
ELECTROFORESIS
La electroforesis es una tcnica de laboratorio que emplea la corriente elctrica
para separar biomolculas por medio de una matriz gelatinosa, considerando el
tamao y la carga elctrica de estas.
Al colocar molculas ionizadas en un campo elctrico, estas son atradas hacia el
polo que posee carga opuesta, por lo que en cierto momento todas las molculas
positivas evidenciarn una tendencia a buscar el ctodo (polo negativo) y las
negativas, el nodo (polo positivo).
Debido al movimiento aleatorio de las molculas, dado que poseen energa
cintica, es necesario utilizar un gel de alto peso molecular que impida que las
molculas se dispersen de manera desordenada, lo que imposibilitara observar y
comparar el comportamiento de dichas molculas con precisin. En resumen, la
funcin del gel es evitar que las molculas se dispersen, creando cierta resistencia
que permita que la migracin de las molculas sea mucho ms lenta y su

ensanchamiento de frente sea ms reducido, facilitando as su posterior anlisis.
CROMATOGRAFA
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin de mezclas que se efecta a
partir de la retencin selectiva; as, las molculas tienden a disgregarse segn la
similitud de polaridad que tengan con el eluyente empleado. De este modo, la
funcin que cumple este mtodo sera separar los componentes de una mezcla
con el fin de poder analizar y medir la proporcin de cada uno de manera
independiente.
La cromatografa consta de dos fases:
Fase Estacionaria: Es el soporte poroso.

Fase Mvil: Es el disolvente (eluyente).
El factor de retardo, tambin denominado relacin de frentes, se define el cociente

entre la distancia recorrida por el componente especfico y la distancia recorrida
por el eluyente, ambas tomadas a partir del punto de origen, representando la
velocidad de migracin del primero en la direccin de flujo del segundo.
Fichas de Seguridad: (Ver Anexo 1)
4. METODOLOGA
4.1. MATERIALES
Cmara de Electroforesis: Consiste en un recipiente que posee un

electrodo en cada uno de sus extremos, uno negativo, indicado con
color negro, y otro positivo, indicado de color rojo. El objetivo de este
equipo es la realizacin de prcticas de electroforesis, mediante la
movilizacin de cargas.
Figura 1. Cmara de Electroforesis

Tomado de: http://llgdata.wiessoft.de/InetServ/LLG/img/9584720_1.JPG
Fuente de Poder: Es un regulador de voltaje que garantiza la

proporcin de una intensidad determinada de voltaje segn la
actividad.
Figura 2. Fuente de Poder

Tomado de: http://www.probiotek.com/wp-content/uploads/2014/01/EPS300X.jpg
10
Micropipetas de 10 y 20 L: Consiste en un cilindro graduado,

dotado de un sistema que permite tomar y depositar una precisa
cantidad de lquido.
Puntas para Micropipetas: Elemento que, en conjunto con la

3. Micropipetapequeas de lquidos del
Micropipeta, posibilita tomarFigura
cantidades
Tomado de: http://mco-s2-p.mlstatic.com/micropipeta-pipeta-automatica-volorden de micro ().variable-rangos-1205-MCO18272186_8589-O.jpg
Figura 4. Punta para Micropipeta

Tomado de: https://www.labbox.com/es/productos/f0300/x340/TIPE/
Recipientes Plsticos: Empleados para realizar la tincin y el

desteido del gel de agarosa.
Figura 5. Recipientes Plsticos

Tomado de: http://ciudad-buenos-aires.all.biz/envase-plasticog105730#.VPDlnHyG_js
11
Papel Cromatogrfico: Papel que posee una alta capilaridad.
Figura 6. Papel Cromatogrfico

Tomado de:
http://www.sartorius.es/typo3temp/pics/LT_FilterPap_1794_RGB_451e4f82f0.jpg
Tubos de Ensayo: Recipiente cilndrico de vidrio o plstico que

contiene las sustancias para la prctica, en este caso, los colorantes
y los eluyentes.
Figura 7. Tubo de Ensayo (Vidrio)

Tomado de:
http://www.medicalcenter.com.mx/tubo_de_ensayo
_con_labio_13x100_mm
Figura 8. Tubo de Ensayo (Plstico)

Tomado de:
https://www.3tres3.com/3tres3_common/tienda/im
g/tubos-de-ensayo-para-control-de-semen-1-5-ml1000-uds_618_3.jpg
Capilares: Cilindros huecos y delgados con caractersticas

capilares, utilizados para aplicar los pigmentos indicados en la
prctica.
Figura 9. Capilares
Tomado de: http://brandsd.com/wp-content/uploads/2013/06/51602.jpg
12
Alfileres: Utilizados para dar sostn a las tiras cromatogrficas

cuando se encontraban dentro de los tubo de ensayo.
Figura 10. Alfileres

Tomado de:
http://www.sanflex.com/images/productos/miniaturas_producto/thumb_produ
cto_11100050a.jpg
Regla: Utilizada para medir el avance del eluyente y el colorante.
Figura 11. Regla

Tomado de:
http://img1.wikia.nocookie.net/__cb20080104211715/inciclopedia/images/
6/67/Regla.jpg
Servilletas: Utilizadas para secar las tiras cromatogrficas y

limpiar posibles residuos de reactivos que hayan quedado sobre la
mesa de trabajo.
Figura 12. Servilletas

Tomado de:
http://www.cristalim.cl/images/productos/1302115128/g
r_servilletas1.jpg
13
4.2. PROCEDIMIENTO
La prctica de Laboratorio se dividi en dos partes:
Parte A: Electroforesis de protenas de suero humano en geles de agarosa.

Parte B: Cromatografa en papel.
En una primera instancia se realiz un quiz para entonces proceder con la

explicacin de la prctica. Dadas las instrucciones y bajo la asesora de los
auxiliares del laboratorio, se inici con la Parte A, luego, en el intermedio de
esta, se dio inicio a la Parte B. Al dar por terminada la prctica, se recogieron
los resultados y se tabularon los datos para ser entregados en el pre informe.
Para esta parte de la prctica, el gel de agarosa estaba previamente
dispuesto en la cmara electrofortica.
Se inici el procedimiento agregando la solucin TBE en la cmara
de electroforesis, la cual cubri el gel en su totalidad. Luego, se
prepararon las mezclas de muestra control (20 L de suero + 10 L
de Buffer de carga) y muestra problema (16 L de suero + 8 L de
Buffer de carga). Se prosigui con la siembra de las muestras en los
pozos de gel de la siguiente manera: Un pozo de Buffer de carga, 3
pozos de muestra problema y 4 pozos de muestra control. Se tap la
cmara de electroforesis, se conectaron los electrodos a la fuente de
poder y se dej a 120V (voltios) durante 2 horas (en este tiempo se
dio inicio a la Parte B). Posteriormente, se tom el gel y se sumergi
en la solucin de teido (40% metanol, 5% cido actico, 0.1% Rojo
Ponceau) en un recipiente plstico, durante 15 min en agitacin
constante. Se lav el exceso de colorante y se puso el gel en la
solucin decolorante (40% metanol, 10% cido actico) durante 24
horas, despus de las cuales se tom la foto del resultado.
Se inicia la prctica midiendo un centmetro y medio en uno de los
extremos de cada tirilla de papel cromatogrfico, trazando una lnea
y marcando un punto central, donde se aplicaron con la ayuda de los
capilares, los pigmentos asignados (Mora en agua, mora en glicerol,
naranja de metilo, verde de Janus y una mezcla de estos dos
ltimos). Por cada pigmento haban dos tirillas, una para ser
14
introducida en agua y otra en MAE (20% metanol, 5% cido actico,

40% etanol). Se dispusieron las tirillas en los tubos de ensayo, con el
eluyente correspondiente, sujetas a alfileres. Al cabo de 30 min,
fueron retiradas y expuestas al secado en una servilleta. Los
avances de los componentes de los pigmentos fueron medidos, y
finalmente se tabul la informacin.
Diagramas de Flujo: (Ver Anexo 2)
15
5. RESULTADOS
5.1. ELECTROFORESIS
Las imgenes que se presentan a continuacin, corresponden a los resultados
de la electroforesis. Se nota que el Buffer de carga, el cual fue sembrado en el
primer pozo de derecha a izquierda, no present tincin. Las muestras, que s
presentaron tincin, se encuentran intercaladas, iniciando con la muestra
control y siguiendo con la muestra problema.
Muestra
Pozo
B
1
C
2
X
3
P
4
X
5
C
6
X
7
P
8
X
9
C
10
X
11
P
12
X
13
C
14
X
15
Tabla 1. Esquema de Distribucin para las Muestras en la Electroforesis
Control
Problem
a
Control
Problem
a
Control
Problem
a
Control
Figura 13. Bandas de protenas resultantes de la electroforesis de las

muestras de suero humano
16
X
16
5.2. CROMATOGRAFA EN PAPEL
Eluyente
Distancia
Eluyente
(cm)
H2O
8.7
MAE
H2O
9.85
Mora en
Glicerol
MAE
4.5
Naranja de
Metilo
H2O
MAE
9.4
4.9
Verde de
Janus
H2O
9.65
MAE
6.5
H2O
10
MAE
5.5
Muestra
Mora en
Agua
Naranja de
Metilo +
Verde de
Janus
Componentes
Observados
Comp. 1 (Rosado)
Comp. 1 (Rosado)
Comp. 2 (Amarillo)
Distancia /
Factor de
Regin
Retardo
Componente
(Rf)
(cm)
4.6
0.52874
4.8
0.80000
0
0.00000
Comp. 1 (Rosado)
Comp. 1 (Rosado Claro)
Comp. 2 (Rosado Oscuro)
Comp. 3 (Amarillo)
1
1.4
1.4 a 3.2
0
0.10152
0.31111
0.51111
0.00000
Comp. 1 (Amarillo)
Comp. 1 (Amarillo)
Comp. 1 (Azul)
Comp. 2 (Rosado)
Comp. 1 (Azul)
Comp. 1 (Azul)
Comp. 2 (Amarillo)
Comp. 1 (Azul)
Comp. 2 (Amarillo)
Comp. 3 (Verde)
0.6
4.6
0
8.2
1.5
0
0.7
1.5
1.7 a 3.3
1.5 a 1.7
0.06383
0.93877
0.00000
0.84974
0.23077
0.00000
0.07000
0.27273
0.45455
0.29091
Tabla 2. Distancias cromatogrficas de los eluyentes empleados y

los componentes resultantes de las muestras correspondientes, y la
relacin (Rf) respectiva entre ambas.
17
Figura 14. Separaciones cromatogrficas de Mora en Agua

en sus respectivos eluyentes
Figura 15. Separaciones cromatogrficas de Mora en

Glicerol en sus respectivos eluyentes
Figura 17. Separaciones cromatogrficas de Verde de Janus

en sus respectivos eluyentes
Figura 16. Separaciones cromatogrficas de Naranja de

Metilo en sus respectivos eluyentes
Figura 18. Separaciones cromatogrficas de la mezcla de

Verde de Janus y Naranja de Metilo en sus respectivos
eluyentes
18
6. CLCULOS
Procedimientos y Frmulas: (Ver Anexo 3)
19
7. ANLISIS
7.1. ELECTROFORESIS
En esta prctica fueron analizadas muestras de suero control (normal) con
respecto a muestras de suero problema, identificando las diferentes protenas
que tiene el plasma sanguneo, tales como la albmina, cuyo peso molecular
se encuentra en un rango de 50 a 75 kDa aproximadamente, la -1 globulina,
la -2 globulina, la globulina y la globulina. La concentracin de dichas
protenas en el suero puede indicar diferentes problemas en el cuerpo, por
ejemplo, deficiencias en el sistema inmunolgico, en el hgado o en otros
procesos donde estas protenas se encuentren involucradas. La globulina se
encuentra presente en los linfocitos, apoyando al sistema inmunolgico. Las
dems protenas se producen en el hgado; razn por la cual es posible
identificar una cirrosis; sin embargo estas protenas no actan nicamente en
dicho rgano, tambin se encuentran presentes en otras estructuras del
organismo, como los alveolos.
Albumi
-1
Globuli
na
-2
Globuli
na
-Globuli
na
-Globuli
na
Figura 19. Interpretacin de las bandas de protenas resultantes de la

electroforesis de las muestras de suero humano
20
En la foto de la electroforesis [Figura 19] se visualizan las concentraciones

de las protenas anteriormente mencionadas, estando unas ms
concentradas que otras. La albmina es la protena ms abundante en el
suero humano (1), cuyas concentraciones normales se encuentran entre el
58% y el 74%, lo que se puede constatar fcilmente en la electroforesis, ya
que la regin correspondiente a esta protena presenta un color rojo
intenso; adems, tambin se observa que la albmina se ubica en la parte

superior del lado del nodo, lo cual indica que la molcula tiene una carga
neta negativa alta y tiene un peso molecular bajo. La globulina a un pH de
8.6 tiene una carga neta positiva, por esta razn, esta se ubica ms cerca
del ctodo.
Figura 20. Rangos Normales de una Electroforesis de Protenas del Plasma Sanguneo
Tomado de: http://www.edimeco.com/index.php/component/phocadownload/category/1publico?download=231:la-electroforesis-de-proteinas-mas-que-una-prueba-de-laboratorio
Comparando las dos muestras, control y problema, se evidencia que la

globulina present una disminucin en el suero problema, al igual que la 1 globulina y la -2 globulina, mientras que la globulina present un
aumento y la albmina se mantuvo aparentemente constante.
El aumento de la globulina puede indicar una hiperlipoproteinanemia o
una terapia de estrgenos, tambin puede sealar una deficiencia de hierro,
normalmente se ven aumentadas en mujeres embarazadas o en el ciclo de
menstruacin.
La disminucin de la globulina puede indicar una hipogammaglobulemia,
la cual puede lanzar un diagnstico de sndrome nefrtico, SIDA o un
tratamiento prolongado de esteroides. El sndrome nefrtico en las
21
muestras problema se descarta, dado que la albmina se encuentra dentro

de los rangos normales, lo cual no se presenta en este sndrome, donde la
concentracin de albmina disminuye y la -2 globulina aumenta
notablemente.
La -2 globulina se encuentra presente en los alveolos, permitiendo que no
colapsen. La disminucin de esta protena da indicios de un mal
funcionamiento de los alveolos, produciendo una hemoptisis, la expulsin
de sangre por la boca por medio de la tos. En la prctica, el suero problema
presenta esta disminucin, por lo cual puede inferirse que el individuo
posee problemas respiratorios, pero no necesariamente una hemoptisis.
La disminucin de la -1 globulina indica deficiencia de la -1 antriptisina, lo
cual puede indicar una cirrosis o una disminucin de las lipoprotenas de
alta densidad (HDL). Para el caso de la muestra problema en la prctica, la
cirrosis se descarta como posible enfermedad, ya que eso implicara la
disminucin de todas las protenas en el plasma sanguneo y la muestra
problema evidencia aumento de concentracin de la globulina en
comparacin con la muestra control; por lo tanto la nica posibilidad sera la
disminucin de lipoprotenas; sin embargo, para poder determinar esto con
certeza, se requieren exmenes ms especializados, tales como la
nefelometra o la turbidimetra. Otra posible situacin que pudo haber
generado la disminucin de la concentracin de esta protena, es que la
muestra se encontraba en estado de descomposicin; sin embargo, esta
tambin se descarta, ya que la concentracin de la globulina es muy
elevada y la de albmina se mantuvo dentro del rango normal.
La variacin de las concentraciones de las protenas tambin pueden ser
explicados desde un anlisis de las posibles causas de error en la prctica,
por ejemplo, la falta de tcnica al sembrar las muestras en los pozos, lo
cual se puede observar en la Figura 1, donde hay muestras no tan definidas
o ms concentradas.
Los patrones de protenas que evidencia la muestra problema apuntan a la
siguiente enfermedad: Anemia Ferropnica. Cuando el cuerpo necesita
hierro la transferrina, la cual transporta el hierro en el plasma, presenta un
aumento para compensar el dficit de hierro que hay en el organismo,
razn por la cual la concentracin de globulina aumenta. Esta enfermedad
es muy recurrente en nios, adolescentes y mujeres embarazadas; los
nios en su primer ao de vida demandan mucho hierro para su desarrollo
fsico, los adolescentes igualmente necesitan grandes cantidades de hierro
para su desarrollo, pero menos que en el primer ao de vida, adems a las
mujeres en esta etapa se les adiciona el periodo menstrual, por lo que son
ms vulnerables a tener una anemia por la prdida de sangre en la
menstruacin. Las mujeres embarazadas tambin tienden a desarrollar
22
anemia a raz del beb que est en gestacin; a medida que el embarazo
avanza, el beb requiere mayores cantidades de hierro, en el primer y
segundo trimestre las madres sufren frecuentemente de anemia. Las
causas generales de esta enfermedad son dietas no balanceadas o
perdidas de sangre significativas.
Al saber cul es la enfermedad indicada por la muestra, es posible clasificar

el suero en algn grupo; es decir, atribuirle un dueo. De esta manera, el
suero no puede pertenecer a una mujer embarazada dados los niveles de
albmina, ya que durante la gestacin los niveles de esta protena
disminuyen y en la muestra permanecen dentro del rango normal. Un nio
en el primer ao de vida tambin se descarta, ya que los niveles de
albmina estn en el rango de lo normal, adems, aunque hay un pequea
disminucin de la globulina, todava se encuentra dentro del rango de
normalidad. Por lo tanto, lo ms probable es que la muestra corresponda a
un adolescente o a un adulto y que la causa de la anemia sea una mala
alimentacin; si se trata de una mujer, podra decirse que presentan
abundante
sangrado de
enProtenas
la menstruacin,
porque
lo cual
puede
darse
la anemia,
Figura
21. Electroforesis
de un paciente
presenta
Anemia
Ferropnica
aumentando
a su vez, los niveles de globulina.
Tomado de: http://www.edimeco.com/index.php/component/phocadownload/category/1publico?download=231:la-electroforesis-de-proteinas-mas-que-una-prueba-de-laboratorio
23
Ahora bien, tambin pueden analizarse los densitogramas que se presentan

en la Gua de Laboratorio.
Figura 22. Electroforesis de Protenas de Muestra Control (A)

y Muestras Problema (B, C, D)
Tomado de: Gua de Laboratorio
La electroforesis de protenas (A) en la Figura 22 pertenece a una muestra de

suero control, lo que se toma como referencia con el fin de determinar las
diferencias entre las concentraciones de las protenas que se encuentran en el
plasma que presentan las muestras de suero problema (B, C, D) para deducir,
posteriormente, las enfermedades o anomalas que estas diferencias implican.
La grfica (B) indica una gammapata, la cual puede ser policlonal, o
monoclonal. Esta se da por el aumento de la globulina. La gammapata
policlonal, se da por el aumento de varios tipos de globulinas, caso contrario
a la gammapata monoclonal, que se da por el aumento de un solo tipo de
globulina. La muestra presenta una gammapata policlonal por la extensin de
la globulina. Como tal, se puede diagnosticar una enfermedad heptica
crnica, adems, la albmina presenta una disminucin significativa y la -2
globulina tuvo una leve disminucin, por tanto, la enfermedad es crnica, ya
que es generada por el mismo sistema inmune, razn por la cual la
concentracin de las globulinas se encuentra muy elevada.
En la grfica (C) se identifica una gammapata monoclonal; solo un punto de
las globulinas se elev. Por lo general, la albmina disminuye, la -2
globulina aumenta y las concentraciones de las dems protenas se
mantienen constantes o presentan una leve disminucin. Esta gammapata
monoclonal se da normalmente por un mieloma mltiple, amiloidosis primaria
o en la enfermedad de Gaucher.
En la grfica (D) se visualiza una hipogammaglobulinemia; la fraccin de las
globulinas est ausente en esta muestra de suero problema, normalmente las
otras protenas no se ven afectadas o hay un leve aumento de la -2
globulina, lo cual puede estar asociado a una variante del mieloma mltiple,
conocida como cadenas livianas, tambin puede darse por l enfermedad de
24
Bruton, el sndrome de Wiskott-Aldrich, una terapia inmunosupresora o un

sndrome de inmunodeficiencia adquirida.
Se realiz la separacin de diferentes pigmentos mediante cromatografa en
papel, utilizando dos fases mviles para evaluar el comportamiento de la
separacin; en este caso se utiliz MAE (una mezcla de metanol, etanol, cido
actico y agua) y Agua en cada una de las muestras como se puede observar
en la tabla de la seccin de resultados obtenidos.
Es de vital importancia en el momento de proceder con la tcnica de
separacin cromatogrfica conocer la naturaleza de la fase estacionaria, la
fase mvil y el soluto (muestra a separar) ya que estos interaccionan para
poder llevar a cabo la separacin; es decir, deben haber ciertas condiciones
para que se efecte una buena tcnica; por ejemplo, la fase estacionaria y la
fase mvil deben ser inmiscibles mutuamente, esto permite que la fase mvil
pueda transportar una muestra a travs de la fase estacionaria, de lo
contrario, si fueran miscibles esto no sucedera porque reaccionaran ambas
fases formando interacciones muy fuertes que no permitiran el
desplazamiento de la fase mvil a travs de la fase estacionaria, por lo tanto,
no habra separacin ya que la muestra se quedara atrapada. La distribucin
del soluto entre las fases es un tipo de balance entre las interacciones entre
las molculas del soluto y las molculas de cada fase, as se va dando el
proceso de separacin por atracciones y repulsiones entre las molculas.
En la separacin de la muestra de mora en agua en el cromatograma con
agua como eluyente, se observ la separacin de un componente de color
rosado, lo cual indica que hubo una separacin de interacciones polares entre
el soluto y el eluyente, dado que el agua es una molcula polar que permiti la
separacin de componentes polares en la muestra de mora en agua, es decir,
el componente rosado que se observa en el cromatograma est compuesto en
su mayora por sustancias de tipo polar que fueron arrastradas por la
naturaleza de la fase mvil. Si se observa el cromatograma en el que se utiliz
MAE y la misma muestra, se obtiene la separacin de dos componentes, uno
de color rosado y uno de color amarillo, as, se produjo un cambio de
coloracin al finalizar el proceso de separacin por cromatografa en
comparacin con el color que se present en el momento de sembrado de la
muestra. El componente rosado se ve ms arriba que el componente amarillo
con respecto a la lnea de sembrado; al calcular el Rf de cada sustancia se
obtiene un valor mayor para el componente rosado y el amarillo tiene un valor
de 0.0, lo que indica que el MAE es menos polar que el agua, por lo tanto el
componente amarillo sera de una naturaleza ms polar que el MAE, lo cual
no permiti su desplazamiento por la fase estacionaria; caso contrario al
componente rosado quien experimentalmente muestra una interaccin con el
eluyente MAE.
25
En resumen, a partir de la separacin anterior de mora en agua llevada a cabo

en los dos eluyentes, se puede afirmar que el agua, al ser un eluyente mucho
ms polar que el MAE, permite un arrastre de componentes polares, es decir
posibilita el desplazamiento de los componentes observados, razn por la cual
se ven como un solo color (rosado) a diferencia del MAE, que al ser menos
polar no pudo arrastrar el componente amarillo, produciendo as la diferencia
de colores en el cromatograma en dicho eluyente. Teniendo en cuenta lo
mencionado anteriormente se puede inferir que el componente amarillo est
compuesto por sustancias ms polares que el componente rosado.
En la observacin de los cromatogramas de la separacin de mora en glicerol,
utilizando agua como eluyente, se tiene un cantidad igual de componentes al
de mora en agua utilizando el mismo eluyente; es decir, se observa un color
rosado pero hay una diferencia entre la movilidad del soluto por la fase
estacionaria, ya que sus valores de Rf son diferentes con un valor menor para
la mora en glicerol, esto permite pensar en que al cambiar la naturaleza del
soluto se modificaron las interacciones de este con la fase estacionaria y la
fase mvil; lo cual puede evidenciarse al observar la distancia recorrida del
soluto (1.0 cm), la cual fue menor a la de mora en agua con el mismo
eluyente, por lo tanto, la mora en glicerol form una interaccin ms fuerte con
la cavidades porosas de la fase estacionaria, por lo que fue ms retenida, y no
permiti su avance a travs de la misma con la polaridad del eluyente
utilizado; caso contario a la separacin de mora en glicerol utilizando MAE
como eluyente, donde se evidenciaron dos componentes de color rosado, uno
oscuro y uno claro, que presentaron mayor arrastre; sin embargo entre la
mora en agua y la mora en glicerol utilizando este eluyente, se presenta el
mismo componente amarillo que no evidencia ningn avance.
La separacin de la muestra de Naranja de Metilo se realiz de igual manera
con los dos eluyentes, agua y MAE, para la cual se obtuvo un componente de
color amarillo para cada cromatograma realizado con la correspondiente fase
mvil. En la separacin realizada con agua se obtuvo un menor
desplazamiento del soluto que con la separacin realizada con MAE, lo cual
indica que soluto es de menor polaridad, de este modo, tiene afinidad por la
polaridad del MAE, provocando as su movilidad por la fase estacionaria.
En el cromatograma de la separacin del Verde Janus se puede observar de
igual forma un cambio en la coloracin en el sembrado y el color obtenido al
finalizar el proceso, en este caso, resultaron dos componentes, uno azul y uno
rosado para la separacin llevada a cabo con agua como eluyente; el
componente azul permaneci en la lnea de sembrado, por lo tanto, no se
desplaz a travs de la fase estacionaria lo que puede indicar que el eluyente
no pudo establecer una interaccin lo suficientemente fuerte para permitir la
movilidad por la fase estacionaria; es decir, su relacin de polaridad no era la
26
adecuada para producir una movilidad; sin embargo, fue efectiva para
desarrollar una buena separacin de los componentes, a diferencia de la
separacin en la que se utiliz MAE como eluyente, donde solo se obtuvo un
componente de color azul. De este modo, podra afirmarse que fue ms
eficiente la separacin realizada con una fase mvil polar como el agua.
La ltima separacin que se llev a cabo fue una mezcla de Naranja de Metilo
y Verde de Janus, de igual forma con las dos fases mviles (agua y MAE). Los
resultados obtenidos con agua como eluyente son dos componentes de color
amarillo y azul, lo cual era de esperar, ya que se trataba de una mezcla y se
tenan como referencia las dos separaciones anteriores de Naranja de Metilo y
Verde de Janus de manera individual, adems, se puede evidenciar una gran
aproximacin entre las distancias de recorrido de los solutos por la fase
estacionaria en relacin con la fase mvil en ambos casos, sus valores de Rf
son cercanos a los obtenidos en la separacin por cromatografa de cada uno
de los solutos individualmente; sin embargo, en el caso de Verde de Janus, no
se observ el componente rosado que se evidenci en la separacin anterior,
por lo tanto, puede deducirse que hubo un error en el proceso de separacin,
cuya posible causa reside en el hecho que la tirilla de papel cromatogrfico se
haya reclinado en las paredes del tubo de ensayo, el cual funcion como
cmara cromatogrfica; por consiguiente, esto hizo que el soluto no se
desplazar en una direccin recta hacia el extremo opuesto del sembrado sino
que se desplazara fuera del papel (hacia los lados), haciendo que el
componente se perdiera. Por otro lado, en el cromatograma en el que se
utiliz MAE como fase mvil, se obtuvieron resultados similares por las
razones mencionadas anteriormente, adicionalmente, se obtuvo un
componente de color verde que puede proceder del Verde de Janus el cual no
se evidenci cuando se hizo la separacin individual de el mismo, lo cual
poda atribuirse tambin a la ocurrencia de errores en el procedimiento de
separacin por cromatografa.
En general, como se puede observar en la tabla de resultados, las distancias
recorridas por lo solutos utilizando agua como eluyente fueron mayores que
en los casos donde se emple MAE en la fase estacionaria (celulosa); se
present una mayor relacin entre el agua y la celulosa, lo cual permiti un
mayor avance de la muestra en la fase estacionaria por capilaridad, a
diferencia del MAE que generaba una interaccin en donde permaneca ms
retenida, impidiendo su movilidad por la fase estacionaria en mayor medida.
Se debe considerar que se present la separacin de muchos componentes
que no eran visibles al ojo humano, por lo tanto, es necesario llevar a cabo
procesos de revelado por tincin para poder proceder con el clculo de los
factores de retardo (Rf); el cual es de suma importancia, ya que permite
identificar el tipo de sustancia en cuestin cuantitativamente, de este modo, su
valor est basado en lo experimental, lo que permite generar un valor nico
27
para cada sustancia (tipo de identificacin), basado en ciertas condiciones,

dado que el Rf depende de la temperatura, la cantidad de muestra y otros
factores, as, se da el valor del Rf de un compuesto determinado
constantemente; adems, el Rf permite establecer una relacin entre las
fases, estacionaria y mvil, con el soluto ya que segn el valor se puede
inferir la interaccin que estos presentan a raz de la movilidad por la
capilaridad, tal como se evidencia en los valores observados en la tabla de
resultados de los cromatogramas.
28
8. CONCLUSIONES
8.1. ELECTROFORESIS
La variacin de las concentraciones de las protenas en el plasma

sanguneo se ve reflejada en las enfermedades que implica; por lo tanto, es
de suma importancia obtener el densitograma con el fin de evaluar la
disminucin o el aumento de ciertas protenas de manera ms precisa,
dado que a simple vista no se puede determinar a ciencia cierta la variacin
exacta que se present, tal es el caso de la gammapata policlonal, en la
cual normalmente no se presentan variaciones muy significativas sino
leves; por consiguiente, se hace necesario contar con el densitograma de
las protenas de la muestra de plasma.
La tcnica de electroforesis es un mtodo efectivo para conocer, y
posteriormente analizar, los cambios en las concentraciones de las
protenas presentes en el cuerpo humano, dado que utiliza una relacin
basada en los pesos moleculares y las cargas de las protenas para
separarlas, lo cual posibilita observar las diferentes concentraciones de
protenas en el suero sanguneo y compararlas de una manera visible con
otra muestra de suero control, con miras a dar una conclusin concreta,
esto es, identificar la presencia de alguna enfermedad en especfico o
afirmar que la persona se encuentra bien de salud, ya que la banda de
protenas sigue los mismo patrones de la muestra control.
Al conocer los valores normales de protenas en el plasma sanguneo, se
puede establecer un paralelo entre distintas muestras de suero; de este
modo, a partir de las modificaciones en las concentraciones de protenas
que se evidencien, pueden determinarse las posibles enfermedades que
presenta el paciente, tal como se evidenci en la seccin de Anlisis,
puntualizando cules podran ser las causas probables de dichas
enfermedades.
La naturaleza de la fase mvil resulta de gran importancia en el proceso de

separacin por cromatografa, ya que esta permite el arrastre del soluto
mediante interacciones ms polares o menos polares, por lo tanto, es
necesario establecer cul eluyente es el ms adecuado para realizar la
separacin de ciertas muestras.
La relacin de la fase mvil y la fase estacionaria tambin debe ser
considerada, debido a que esta ltima determina la distancia que el
29
eluyente puede recorrer, retenindolo o permitiendo que avance ms a

travs de esta fase.
La tcnica de separacin por cromatografa, en este caso en papel, es una
tcnica til para la separacin e identificacin cualitativa de componentes;
sin embargo, no posee selectividad por sustancias especficas, ya que, al
basarse en un proceso de separacin por interacciones moleculares y
capilaridad, existe la posibilidad de que se separen componentes de la
misma naturaleza, ms polar o menos polar, restndole a la tcnica una
mayor selectividad y eficiencia para la identificacin de un mayor nmero de
sustancias.
30
9. BIBLIOGRAFA
Curtis H. Biologa. 7a Ed. Madrid. Panamericana; 2008. p. 37-72

Mckee T. Bioqumica. 3a Ed. USA. Mc Graw Hill; 2003. p. 108-160, 200-234,
331-373, 562-600.
Murray R, Bender D, Botham K, Kennelly P, Rodwell V, Weil P. Bioqumica
Ilustrada de Harper. 28a Ed. Mxico D.F. Mc Graw Hill; 2009. p. 14-29, 545546.
Santillana. Biologa I. 2007. p. 26, 38.
Starr, Taggart, Evers. Biologa: La Unidad y La Diversidad de la Vida. 12 a
Ed. Cengage Learning; 2009. p. 40-48.
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Disponible
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Prueba de Laboratorio [internet]. Medelln: Editora Mdica Colombiana S.A;
2006. [consultado el 26 de febrero del 2015]. Disponible en:
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University of Maryland Medical Center [internet]. Baltimore, Estados Unidos:
University of Maryland Medical Center; 26 de mayo del 2014. [consultado el
1
de
marzo
del
2015].
Disponible
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http://umm.edu/health/medical/spanishency/articles/electroforesis-deproteinas-en-suero
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Normas de Diagnstico y Tratamiento [internet]. Buenos Aires, Argentina:
Comits de la SAP; 2001[consultado el 1 de marzo del 2015]. Disponible
en: http://www.sap.org.ar/docs/profesionales/consensos/162.pdf
31
10. ANEXOS
10.1. ANEXO 1: Fichas de Seguridad
32
Figura 23. Cuadro de Clasificaciones de la NFPA
Tomado de: http://www.compliancesigns.com/NFPA-Chart_1_Spanish.shtml
Ficha de Seguridad del Acido Actico (CH3COOH)
Figura 24. Rtulo NFPA para el cido Actico

Tomado de: http://www.quimicaregasa.com/img/archivos/Acido_acetico.pdf
a. Identificacin de Peligros
Inhalacin: Irritacin severa de la nariz y la garganta, nuseas, resfriado,
dolor en el pecho y dificultad respiratoria. Altas concentraciones puede
causar inflamacin en las vas respiratorias (bronconeumona) y
acumulacin de fluidos en los pulmones (edema). Nunca el olor o grado de
irritacin son indicativos de la concentracin de los vapores.
Ingestin: Quemaduras e inflamacin de la boca, el abdomen y la
garganta, vmito y deposicin con sangre. Irritacin tracto gastrointestinal
(esfago y estmago), espasmos estomacales, tambin puede resultar
vmito con sangre, daos en los riones. En grandes cantidades puede ser
fatal.
Las soluciones diluidas como el vinagre, no causan dao. El producto
concentrado puede producir daos severos , por ejemplo la ingestin al
menos de 1 mililitro puede producir perforacin Del esfago.
Piel: Es corrosivo, produce quemaduras, altamente irritante genera
enrojecimiento y dolor. Altas concentraciones de vapores pueden producir
sensibilizacin de la piel.
Ojos: Puede causar quemaduras irreversibles de la crnea. Vapores de
cido actico, o lquido pueden causar irritacin y lagrimeo. Soluciones
concentradas pueden causar severas quemaduras y dao permanente
(prdida de la visin).
b. Procedimientos de Primeros Auxilios
Inhalacin: Trasladar al aire fresco. Si no respira, administrar respiracin
artificial. Evitar la reanimacin boca a boca. Si respira con dificultad,
suministrar oxgeno. Mantener la vctima abrigada y en reposo. Buscar
atencin mdica inmediatamente.
Ingestin: No inducir el vmito. Lavar la boca con agua. Si est
consciente, suministrar abundante agua. No administrar nada si la persona
est inconciente. Mantener la vctima abrigada y en reposo. Buscar
atencin mdica inmediatamente.
33
Piel: Extraer la sustancia con un algodn impregnado de Polietilenglicol

400 posteriormente lavar la zona afectada con abundante agua y jabn,
mnimo durante 15 minutos. Luego retirar la ropa y calzado contaminados.
Si la irritacin persiste repetir el lavado. Buscar atencin mdica
inmediatamente.
Ojos: Lavar con abundante agua, mnimo durante 15 minutos. Levantar y
separe los prpados para asegurar la remocin del qumico. Si la irritacin
persiste repetir el lavado. Buscar atencin mdica inmediata
Nota para los Mdicos: Despus de proporcionar los primeros auxilios, es
indispensable la comunicacin directa con un mdico especialista en
toxicologa, que brinde informacin para el manejo mdico de la persona
afectada, con base en su estado, los sntomas existentes y las
caractersticas de la sustancia qumica con la cual se tuvo contacto.
Ficha de Seguridad del Metanol (CH3OH)
Figura 25. Rtulo NFPA para el Metanol

Tomado de: http://www.uacj.mx/IIT/CICTA/Documents/Quimicos/metanol.pdf
Inhalacion: Irrita las mucosas nasales y oculares. Produce asfixia, vrtigo,
tos, dolor de cabeza, nuseas, vmito, transtornos oculares, convulsiones e
inconsciencia.
Ingestin: Disturbios visuales, dolor abdominal, diarrea, vmito,
inconciencia. En casos graves: coma, paro respiratorio, ceguera,
convulsiones, acidosis metablica severa y muerte
Piel: Se absorbe por la piel presentando efectos iguales a la inhalacin.
Produce resequedad, enrojecimiento y dolor.
Ojos: Irritacin, dolor, lagrimeo, sensacin de quemadura y visin borrosa
Efectos Crnicos: Su eliminacin del cuerpo es lenta. Produce ceguera,
acidosis metablica, afecta el corazn y el sistema nervioso central, en
especial el nervio ptico, conduce a dolores de cabeza persistentes y visin
borrosa. Los efectos crnicos de sobrexposicin pueden incluir daos a los
riones y el hgado. La exposicin repetida o prolongada en contacto con la
piel conduce a dermatitis.
34

artificial (evitar el mtodo boca a boca). Si respira con dificultad, suministrar
oxgeno. Mantener la vctima abrigada y en reposo. Buscar atencin mdica
inmediatamente.
Ingestin: Lavar la boca con agua. Si est consciente, suministrar
abundante agua o de a beber una copa de whisky. No inducir el vmito.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
Piel: Retirar la ropa y calzado contaminados. Lavar la zona afectada con
abundante agua y jabn, mnimo durante 15 minutos. Si la irritacin persiste
repetir el lavado. Buscar atencin mdica
separar los prpados para asegurar la remocin del qumico. Si la irritacin
persiste repetir el lavado. Buscar atencin mdica.
Ficha de Seguridad del Etanol (CH3CH2OH)
Figura 26. Rtulo NFPA para el Etanol

Tomado de: http://iio.ens.uabc.mx/hojas-seguridad/alcohol_etilico.pdf
Inhalacin: Altas concentraciones del vapor pueden causar somnolencia,
tos, irritacin de los ojos y el tracto respiratorio, dolor de cabeza y sntomas
similares a la ingestin.
Ingestin: Sensacin de quemadura. Acta al principio como estimulante
seguido de depresin, dolor de cabeza, visin borrosa, somnolencia e
inconsciencia.
Grandes cantidades afectan el aparato gastrointestinal. Si es
desnaturalizado con metanol, puede causar ceguera.
Piel: Resequedad.
Ojos: Irritacin, enrojecimiento, dolor, sensacin de quemadura.
Efectos Crnicos: a largo plazo produce efectos narcotizantes. Afecta el
sistema nervioso central, irrita la piel (dermatitis) y el tracto respiratorio
superior. La ingestin crnica causa cirrosis en el hgado.
35

artificial. Si respira con dificultad, suministrar oxgeno. Mantener la vctima
abrigada y en reposo. Buscar atencin mdica inmediatamente.
Ingestin: Lavar la boca con agua. Inducir al vmito. No administrar
emticos, carbn animal ni leche. Buscar atencin mdica inmediatamente
(puede tratarse de alcohol desnaturalizado).
Piel: Lavar la piel con abundante agua. Retirar la ropa contaminada y lvela
con abundante agua y jabn.
separar los prpados para asegurar la remocin del qumico. Si la irritacin
persiste repetir el lavado. Buscar atencin mdica.
Ficha de Seguridad del Tris Borato (NH2C(CH2OH)3)
Figura 27. Rtulo NFPA para el TBE

Tomado de:
http://www.inr.gob.mx/Descargas/bioSeguridad/TrisBoratoEDTA.pdf
Inhalacin: Puede producir irritaciones en el sistema respiratorio
Ingestin: Irritante para la boca, la garganta y el estmago
Piel: El contacto provoca una irritacin de la piel
Ojos: Evtese el contacto con los ojos
Ingestin: No provocar vmitos sin consejo mdico.
Ojos: En caso de contacto con los ojos, lvenlos inmediata y
abundantemente con agua y acdase a un mdico.
Condiciones Mdicas Agravadas por la Exposicin: No conocidos.
Ficha de Seguridad de Agarosa (CH2OH-CHOH-CHOH-CHOH-CHOH-CH2OH)
36
Figura 28. Rtulo NFPA para la Agarosa

Tomado de: http://www.ctr.com.mx/pdfcert/Agarosa.pdf
Inhalacin: Nocivo leve, tos.
Piel: Irritaciones leves.
Ojos: Irritaciones leves.
Ingestin: Nocivo leve, molestias gastrointestinales.
Piel: Quitarse inmediatamente la ropa contaminada. enjuagar bien la
piel/mucosa afectada y durante al menos 15 minutos con abundante agua.
de ser posible, usar jabn. no realizar intentos de neutralizacin. colocar,
en su caso, un vendaje suelto.
Ojos: Lavar el ojo afectado, manteniendo el prpado bien abierto y
protegiendo el ojo no afectado con agua corriente.
Inhalacin: Tras la inhalacin de nieblas o vapores, aportar aire fresco y
mantener libres las vas respiratorias.
Ingestin: Tras la ingestin, beber inmediatamente gran cantidad de agua.
Ficha de Seguridad del Glicerol (C3H8O3)
Figura 29. Rtulo NFPA para el Glicerol

Tomado de: http://www.ctr.com.mx/pdfcert/Agarosa.pdf
Inhalacin: Nocivo leve.
Piel: Resequedad.
Ojos: Irritaciones leves.
Ingestin: Diarrea
37
Piel: Quitarse inmediatamente la ropa contaminada. enjuagar bien la

piel/mucosa afectada y durante al menos 15 minutos conabundante agua.
de ser posible, usar jabn. No realizar intentos de neutralizacin. colocar,
en su caso, un vendaje suelto.
Ojos: Lavar el ojo afectado manteniendo el prpado bien abierto y
protegiendo el ojo no afectado con agua corriente.
Inhalacin: Tras la inhalacin de nieblas o vapores, aportar aire fresco;
mantener libres las vas respiratorias.
Ingestin: Tras la ingestin, beber inmediatamente gran cantidad de agua.
Ficha de Seguridad del Rojo Ponceau (C20H11N2O10S3 Na3)
Figura 30. Rtulo NFPA para el Rojo Ponceau

Tomado de: http://www.ral-sa.com/fotos/fichas/4%20%20Electroforesis/GN1001050_decolorante%20rojo%20ponceau.pdf
Inhalacin: Irritaciones en vias respiratorias.
Piel: Irritaciones.
Ocular: Irritaciones.
Ingestin: Irritaciones en mucosas de la boca, garganta, esfago y tracto
intestinal.
Piel: Lavar abundantemente con agua. Quitarse las ropas contaminadas.
Ojos: Lavar con agua abundante manteniendo los prpados abiertos. Pedir
atencin mdica.
Ingestin: Beber agua abundante. Provocar el vmito. En caso de
malestar, pedir atencin mdica.
Inhalacin: Ir al aire fresco.
En caso de prdida del conocimiento nunca dar a beber ni provocar el
vmito.
Ficha de Seguridad del Azul de Bromofenol (C19H10Br4O5S)
38
Figura 31. Rtulo NFPA para el Azul de Bromofenol

Tomado de: http://www.ctr.com.mx/pdfcert/Azul%20de%20Bromofenol.pdf
Inhalacin : Altas concentraciones pueden producir irritacin temporal.
posibles molestias respiratorias.
Piel : Posibles irritaciones leves.
Ojos : Posibles irritaciones leves, molestias, lagrimeo.
Ingestin : Grandes dosis pueden causar irritacin gastrointestinal leve,
nocivo leve, posibles nuseas, vmitos y diarrea.
Inhalacin : Transportar a la persona al exterior y mantenerla en reposo en
una posicin confortable para respirar. Llame a un CENTRO DE
INFORMACIN TOXICOLGICA o a un mdico si se encuentra mal.
Asegrese de que respira aire puro.
Piel : Lave las prendas contaminadas antes de volverlas a utilizar. Lavar
con agua y jabn abundantes.
Despjese de la ropa afectada y lave toda la zona de piel expuesta al
producto con jabn suave y agua; a continuacin, enjuague con agua
caliente.
Ojos : Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las
lentes de contacto, si lleva y resulta fcil. Seguir aclarando. Si persiste la
irritacin ocular consulte a un mdico.
Ingestin : No provoque el vmito
Ficha de Seguridad del Verde de Janus (C30H31N6Cl)
Figura 32. Rtulo NFPA para el Verde de Janus

Tomado de: https://www.labbox.com/FDS/ES/ES__Bromocresol%20green
%20ACS_BRCR-G0D-001_FDS_20110413__LABKEM_.pdf
39
No presenta ningun efecto toxico
Inhalacin: Asegrese de que respira aire puro.
Piel: Despjese de la ropa afectada y lave toda la zona de piel expuesta al
producto con jabn suave y agua; a continuacin, enjuague con agua
caliente.
Ojos: Enjuague inmediatamente con abundante agua. Consiga atencin
mdica si persiste el dolor o la irritacin.
Ingestin: No provoque el vmito. Enjuguese la boca.
Consiga atencin mdica de emergencia.
Ficha de Seguridad del Metil Naranja (C14H14N3NaO3S)
Figura 33. Rtulo NFPA para el Metil Naranja

Tomado de: http://www.qmaxsolutions.com/msds/mexico/NARANJA%20DE
%20METILO%20-----HDS%20Formato%2013%20Secciones,
%20QMax.PDF
Inhalacion: Nocivo, irritaciones.
Piel: Irritaciones, posible enrojecimiento y dolor.
Ojos: Irritaciones, posibles enrojecimiento y dolor.
Ingestin: Nocivo, nuseas, vmitos y diarrea, irritaciones en el tracto
gastrointestinal.
Inhalacin : Trasladar a la persona donde exista aire fresco. En caso de
paro respiratorio, emplear mtodo de reanimacin cardiopulmonar. Si
respira dificultosamente se debe suministrar Oxgeno. Conseguir asistencia
mdica de inmediato.
Piel : Lavar con abundante Agua, a lo menos por 5 minutos. Como medida
de carcter general, usar ducha de emergencia si es necesario.
Sacarse la ropa contaminada y luego lavarla.
De mantenerse la irritacin, solicitar ayuda mdica.
40
Ojos : Lavarse con abundante agua en un lavadero, entre 5 y 10 minutos

como mnimo, separando los prpados. De continuar la irritacin, enviar a
un servicio mdico.
Ingestin : Lavar la boca con bastante agua. Dar a beber abundante agua.
Inducir al vmito, slo si la persona est consciente.
10.2. ANEXO 2: Diagramas de Flujo
41
10.3. ANEXO 3: Procedimientos y Frmulas (Clculos)

42
Clculos de Rf para cada uno de los componentes separados en

cromatografa de papel.
1. Mora en Agua
Fase Mvil : Agua

Rf =
Fase Mvil Componte Rosado: MAE

Rf =
distanciarecorrida por la muestra 4.6 cms

=
=0.52874
distanciarecorrida por el eluyente 8.7 cms
4.8 cms
=0.80000
6.0 cms
Fase Mvil Componente Amarillo : MAE

Rf =
0.0 cms
=0.00000
6.0 cms
2. Mora en Glicerol
Fase Mvil: Agua

Rf =
Fase Mvil Componente Rosado Claro: MAE

Rf =
1.4 cms
=0.31111
4.5 cms
Fase Mvil Componente Rosado Oscuro: MAE

Rf =
1.0 cm
=0.10152
9.85 cms
2.3 cms
=0.51111
4.5 cms
Fase Mvil Componente Amarillo: MAE
43
Rf =
0.0 cms
=0.00000
4.5 cms
3. Naranja de Metilo
Fase Mvil : agua

Rf =
0.6 cms
=0.06383
9.4 cms
Fase Mvil : MAE

Rf =
4.6 cms
=0.93877
4.9 cms
4. Verde de Janus
Fase Mvil Componente Azul : Agua

Rf =
Fase Mvil Componente Rosado: Agua

Rf =
0.0 cms
=0.00000
9.65 cm
8.2 cms
=0.84974
9.65 cms
Fase Mvil : MAE

Rf =
1.5 cms
=0.23077
6.5 cms
5. Naranja de Metilo + Verde de Janus
Fase Mvil Componente Azul : Agua

Rf =
0.0 cms
=0.00000
10.0 cms
Fase Mvil Componente Amarillo: Agua

44
Rf =
Fase Mvil Componente Azul : MAE

Rf =
1.5 cms
=0.27273
5.5 cms
Fase Mvil Componente Amarillo: MAE

Rf =
0.7 cms
=0.07000
10.0 cms
2.5 cms
=0.45455
5.5 cms
Fase Mvil Componente Verde: MAE

Rf =
1.6 cms
=0.29091
5.5 cms
45

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INFORME DE LABORATORIO

ANDRS HERNANDO POLO GUZMN

ANEXO 1: Fichas de Seguridad...............................................................32

ANEXO 2: Diagramas de Flujo.................................................................41

ANEXO 3: Procedimientos y Frmulas (Clculos).................................42

Las macromolculas hacen parte esencial de la conformacin de los seres vivos,

2.1. OBJETIVOS GENERALES

2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Establecer los valores normales de las protenas en el plasma

2.2.2. CROMATOGRAFA EN PAPEL

Precisar el efecto que tiene la polaridad del eluyente sobre la

Evaluar el comportamiento de la muestra con respecto a la fase

Las macromolculas son la base estructural y funcional de los seres vivos. Su

Estructura Primaria: Corresponde a las subunidades en cadena que

A continuacin se presenta la definicin y caracterizacin de cada una de las

Monosacridos: Son los ms simples de los carbohidratos, por tanto, se

Disacridos: Se forman a partir de la unin de dos monosacridos mediante

Sanguneo: El plasma sanguneo es una de las dos

Albmina: Se sintetiza en el hgado, posee carga neta negativa y se

correctamente los lquidos corporales; esta distribucin se da entre el

Lpidos: Tambin denominados como grasas, no entran en la clasificacin de

que permita que la migracin de las molculas sea mucho ms lenta y su

Fase Estacionaria: Es el soporte poroso.

El factor de retardo, tambin denominado relacin de frentes, se define el cociente

Fichas de Seguridad: (Ver Anexo 1)

Cmara de Electroforesis: Consiste en un recipiente que posee un

Figura 1. Cmara de Electroforesis

Fuente de Poder: Es un regulador de voltaje que garantiza la

Figura 2. Fuente de Poder

Micropipetas de 10 y 20 L: Consiste en un cilindro graduado,

Puntas para Micropipetas: Elemento que, en conjunto con la

Figura 4. Punta para Micropipeta

Recipientes Plsticos: Empleados para realizar la tincin y el

Figura 5. Recipientes Plsticos

4.1.2. CROMATOGRAFA EN PAPEL

Papel Cromatogrfico: Papel que posee una alta capilaridad.

Figura 6. Papel Cromatogrfico

Tubos de Ensayo: Recipiente cilndrico de vidrio o plstico que

Figura 7. Tubo de Ensayo (Vidrio)

Figura 8. Tubo de Ensayo (Plstico)

Capilares: Cilindros huecos y delgados con caractersticas

Alfileres: Utilizados para dar sostn a las tiras cromatogrficas

Figura 10. Alfileres

Regla: Utilizada para medir el avance del eluyente y el colorante.

Figura 11. Regla

Servilletas: Utilizadas para secar las tiras cromatogrficas y

Figura 12. Servilletas

Parte A: Electroforesis de protenas de suero humano en geles de agarosa.

En una primera instancia se realiz un quiz para entonces proceder con la

introducida en agua y otra en MAE (20% metanol, 5% cido actico,

Diagramas de Flujo: (Ver Anexo 2)

Tabla 1. Esquema de Distribucin para las Muestras en la Electroforesis

Figura 13. Bandas de protenas resultantes de la electroforesis de las

5.2. CROMATOGRAFA EN PAPEL

Tabla 2. Distancias cromatogrficas de los eluyentes empleados y

Figura 14. Separaciones cromatogrficas de Mora en Agua

Figura 15. Separaciones cromatogrficas de Mora en

Figura 17. Separaciones cromatogrficas de Verde de Janus

Figura 16. Separaciones cromatogrficas de Naranja de

Figura 18. Separaciones cromatogrficas de la mezcla de

Procedimientos y Frmulas: (Ver Anexo 3)

Figura 19. Interpretacin de las bandas de protenas resultantes de la

En la foto de la electroforesis [Figura 19] se visualizan las concentraciones