Las bacterias y la temperatura

Cmo afecta la temperatura a las bacterias?

Las bacterias prefieren las temperaturas moderadas, pero algunas son capaces de adaptarse
al fro y sobrevivir dentro de los refrigeradores y freezers, mientras que otras hasta necesitan
cierta intensidad de calor para poder multiplicarse. Pero lo ms usual es que el calor las
destruya, el fro las inhiba y la temperatura media favorezca su desarrollo. Entonces, para
evitar la proliferacin de bacterias la opcin es cadena de calor o cadena de fro.
Cmo se clasifican las bacterias en relacin a la temperatura?
Las bacterias se dividen en cuatro grupos:
1. Termfilas: las bacterias viven y se multiplican entre 40C y 90C, cuya temperatura ptima
es de 55 75C. Este tipo de bacteria es uno de los problemas a resolver por la industria
conservera, que utiliza las altas temperaturas para el procesamiento de los alimentos.
2. Mesfilas: las bacterias crecen entre 5 y 47C, cuya temperatura ptima es de 30 45C.
Como estas bacterias causan enfermedades son capaces de desarrollarse a la temperatura
corporal.
3. Psicrfilas: las bacterias se desarrollan entre 5 y 20C, cuya temperatura ptima es de 12
15C. Las bajas temperaturas son las ms favorables para este tipo de bacterias.
4. Psicrotrofas: las bacterias crecen entre 5 y 35C, cuya temperatura ptima es de 25 30C.
Estas bacterias son capaces de multiplicarse a bajas temperaturas, pero no es su
temperatura ideal de desarrollo.
La formacin de familias o comunidades?
La formacin de familias o comunidades caracteriza a los seres humanos y a las bacterias.
Tanto las bacterias como las personas viven en comunidad y casi nunca estn solas.
Otras personas y otras bacterias pueden ayudar a vivir mejor?
Entre las bacterias, muchas de ellas contribuyen a los procesos tecnolgicos para la
fabricacin del yogur o los embutidos secos. Tambin hay bacterias que intervienen en la
degradacin de nuestros desperdicios y ayudan a disminuir la contaminacin ambiental.
Muchas veces el esfuerzo "conjunto" de los seres humanos y de las bacterias ha brindado
grandes soluciones a problemas sanitarios

PSEUDOMONAS AERUGINOSA
Gloria Sobern

Instituto de Biotecnologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Introduccin
Pseudomonas aeruginosa es una bacteria gram-negativa perteneciente a la rama de las
proteobacterias, misma a la que pertenecen las enterobacterias(Fig. 1)(54,84).Dentro del
gnero Pseudomonas se encuentran tambin algunas otras especies como P. fluorescens, P.
putida, P. syringae y P. alcaligenes. P. aeruginosa se encuentra ampliamente distribuida en
la naturaleza(11,31),se puede aislar de muestras de suelo, aguas pristinas y contaminadas,
asi como de plantas y animales. Todas las cepas son potencialmente patgenas para el
hombre y algunas pueden infectar tambin a plantas como Arabidopsis thaliana(62),y a
invertebrados como Caenorhabditis elegans(73).Esta bacteria es capaz de utilizar una
enorme variedad de compuestos orgnicos como sustrato para crecer, capacidad que le
permite colonizar nichos en los que son escasos los nutrimentos que otros organismos
pueden asimilar. Se ha reportado el aislamiento de P. aeruginosa de ambientes tan
inhspitos como son el combustible de avin, soluciones de clorhexidina y el jabn(31).
Para empezar este captulo es interesante mencionar que P. aeruginosa tiene importancia
para el hombre tanto porque le representa problemas, como porque puede ser til en el
tratamiento de la contaminacin ambiental(Fig. 2).Contrariamente a lo que parece, todos
nosotros estamos en contacto diariamente con Pseudomonas aeruginosa, ya que se
encuentra en bajas cantidades en nuestros alimentos y en algunos artculos de
limpieza(31).De hecho, se obtienen aislamientos de esta bacteria a partir de entre el 2 y el
8% de las heces de personas sanas(31),lo que nos muestra que nuestro contacto con esta
bacteria es cotidiano y slo representa una amenaza para nuestra salud en condiciones
especiales, como veremos a continuacin.
P. aeruginosa representa un problema importante de salud en centros hospitalarios,
especialmente cuando se trata de pacientes con cancer(1)o quemados(41).Una vez que se
establece la infeccin, P. aeruginosa produce una serie de compuestos txicos que causan
no slo dao tisular extenso, sino adicionalmente interfieren con el funcionamiento del
sistema inmune(18, 46).Entre las protenas que intervienen en la infeccin de P.
aeruginosa encontramos toxinas, como las exotoxinas A y S, as como enzimas hidrolticas
que degradan las membranas y el tejido conjuntivo de diversos rganos(18,46).Esta
situacin se ve agravada por la dificultad para tratar las infecciones por P. aeruginosa, ya
que esta bacteria presenta una muy alta resistencia natural a distintos antibiticos y a
desinfectantes(30,72).

Existe un grupo poblacional especialmente vulnerable a las infecciones con P.

aeruginosa formado por los enfermos de fibrosis qustica(26,27,59).P. aeruginosa coloniza
muy eficientemente el tracto respiratorio de estos pacientes, y a medida que progresa la
infeccin se seleccionan derivados mucoides de la bacteria que producen grandes
cantidades del exopolisacrido alginato(Fig. 3).Una vez que se establece una infeccin por
cepas mucoides de P. aeruginosa en los pulmones de pacientes con fibrosis qustica, estos
estn en la etapa terminal de la enfermedad. Esto se debe a que estas cepas no pueden ser
eliminadas por el sistema inmune y, hasta el momento, no existe un tratamiento efectivo
contra cepas mucoides.
Por otra parte, en ambientes acuosos esta bacteria se adhiere a superficies, produciendo una
especie de agregado llamado biopelcula(12)(Fig. 4).La formacin de estos cmulos de
bacterias y material extracelular representa un problema de salud pues contamina
dispositivos que se implantan dentro del cuerpo, como por ejemplo dispositivos
intrauterinos, catteres(48)o vlvulas cardiacas. Las biopelculas tambin representan un
problema en el proceso de produccin de diversas industrias pues provocan taponamiento y
corrosin de conexiones y filtros.
Asimismo, P. aeruginosa presenta problemas en la industria alimentaria ya que puede
descomponer los alimentos que se mantienen en refrigeracin al mantener un metabolismo
basal en estas condiciones y producir enzimas hidrolticas(69).
Sin embargo, a la vez que P. aeruginosa causa al hombre distintos problemas, esta bacteria
tiene diversas aplicaciones biotecnolgicas, sobre todo en el rea ambiental. As se sabe que
es uno de los pocos organismos capaces de degradar alcanos de cadena ramificada(65);que
produce biosurfactantes que son tiles para la limpieza de suelos contaminados con
hidrocarburos(42)o con metales pesados(45);y que produce enzimas, como la lipasa, con
distintas aplicaciones potenciales(69).
Desde un enfoque bsico P. aeruginosa representa un modelo de gran inters que, como
veremos ms adelante, ha sido estudiada desde mltiples enfoques. De hecho P.
aeruginosa es una de las bacterias ms estudiadas a nivel molecular y su genoma ha sido
totalmente secuenciado recientemente(72,www.pseudomonas.com).En este captulo
revisaremos brevemente distintos aspectos de la biologa de esta bacteria que tiene tantas y
tan diversas relaciones con el hombre.
Dentro de esta introduccin es importante mencionar que P. aeruginosa sobresale entre las
bacterias por su extraordinaria capacidad de adaptacin, ya que, como mencion
anteriormente, vive en ambientes muy diversos. Muchos autores incluso la han considerado
como un organismo ubicuo(11,31,72,www.pseudomonas.com)aunque no se ha
documentado su presencia en ambientes extremos. Por otra parte, es el nico caso conocido
de una bacteria ambiental en la que todos los aislamientos son potencialmente patgenos
para el hombre(11,31,72,www.pseudomonas.com).Es tambin una caracterstica particular
de esta bacteria el arreglo de los genes que intervienen en la virulencia de la bacteria, ya
que no estn codificados en las llamadas "islas de patognesis" como en las dems bacterias
patgenas(29),sino
se
encuentran
interdispersas
en
su
cromosoma(72,www.pseudomonas.com).

La colonizacin de distintos ambientes por P. aeruginosa y la patogenia de los aislamientos

ambientales nos plantean interrogantes evolutivas muy importantes que hacen fascinante el
estudio de P. aeruginosa. Entre otras podemos hacernos las siguientes preguntas: qu
ventaja selectiva le da la produccin de los factores de virulencia a P. aeruginosa viviendo
en el medio ambiente? cmo puede P. aeruginosa adaptarse a ambientes tan diversos?, y
por qu es distinto el arreglo gentico de los genes que intervienen en la virulencia de la
bacteria al de otras bacterias patgenas? El estudio de esta bacteria nos permitir, pues,
contestar problemas fundamentales acerca de la manera en la que se adapta a mltiples
condiciones ambientales.
Estructura del Genoma
Recientemente se concluy la secuencia completa del genoma de la cepa PAO1, que es la
cepa tipo de P. aeruginosa y que fue aislada de un paciente con otitis media. Esta secuencia
ya se encuentra disponible en el internet(www.pseudomonas.com)y su anlisis fue
recientemente publicado(72).El tamao aproximado del nico cromosoma
circular(www.pseudomonas.com)que forma el genoma de esta bacteria es de cerca de 6.3
millones de pares de bases, con mucho el de mayor tamao de los genomas de bacterias
secuenciados hasta ahora(Tabla 1).Esta cepa, al igual que muchos otros aislamientos de P.
aeruginosa, no contiene plsmidos.
Ms de la mitad de los genes de P. aeruginosa PAO1 presentan una homologa cercana y un
arreglo transcripcional en operones similar a los de Escherichia coli(71,72).Tambin es
aparente que P. aeruginosa presenta homologa en la secuencia y en la organizacin
gentica con bacterias ambientales, incluso con bacterias gram-positivas(71,72).El 32% de
los genes predichos a partir de la secuencia del genoma de esta bacteria no tienen
homologa con las secuencias depositadas en los bancos de datos, lo que sugiere que se
trata de genes que codifican para actividades enzimticas novedosas(71,72).Del anlisis del
genoma de esta bacteria es notorio la gran abundancia de genes que parecen codificar para
bombas que sacan compuestos de la clula(71,72).La abundancia de estos transportadores
pudiera estar relacionada con su alta resistencia a distintos compuestos txicos(49,88)y, en
ltima instancia, con su extraordinaria versatilidad.
El proyecto de secuenciacin del genoma de la cepa PAO1 fue realizado por la fundacin
para la Fibrosis Qustica, la universidad de Washington, y la compana PathoGenesis. El
inters de estas organizaciones es fundamentalemnete clnico, ya que su objetivo principal
es encontrar nuevos frmacos y otras herramientas para combatir las infecciones por P.
aeruginosa.
Variabilidad Gentica
Contrariamente a lo que ocurre con otras bacterias patgenas, no existen clonas de P.
aeruginosa asociadas con el desarrollo de una enfermedad, por lo que la frecuencia de las
distintas clonas es la misma entre los aislamientos ambientales y clnicos(63).Esto es, en
una determinada regin geogrfica se encuentra que la frecuencia con la que se aisla una
cepa es la misma si se muestrean hospitales, pacientes con distinto tipo de infecciones o se
toman muestras ambientales(63).Sin embargo existe una gran variabilidad gentica entre

distintos aislamientos de esta bacteria an aisladas en la misma regin. Esta variabilidad

tiene caractersticas muy particulares(37,77),como a continuacin veremos. El tamao del
genoma de distintas cepas de P. aeruginosa vara entre 5 y 7 millones de pares de bases, y
comprende un mosaico de genes especficos de la especie que va del 70 al 90% de la
secuencia de DNA de una cepa. Esta proporcin vara de acuerdo con la cantidad de
informacin accesoria que cada cepa tiene, pero el orden de los genes propios de la especie
est conservado entre todos los aislamientos. Estos bloques de DNA se interrumpen por
secuencias especficas de cada cepa que pueden ser de entre 1 a 200 kb. La secuencia de los
genes comunes est altamente conservada entre los distintos aislamientos de esta bacteria, a
excepcin del gen pilA que codifica para la fimbria tipo IV y que presenta un gran
polimorfismo. De hecho la variabilidad de las secuencias especficas de P. aeruginosa es 10
veces menor que la que presentan distintas cepas de E. coli o Salmonella, lo que sugiere
una alta tasa de recombinacin entre la poblacin de esta bacteria. La alta frecuencia de
recombinacin entre las distintas clonas, comparada con la relativamente menor tasa de
mutacin espontnea, mantiene una informacin gentica comn a toda la especie. De este
modo, P. aeruginosa tiene una parte de su genoma altamente conservada y una proporcin
menor, pero significativa, que es distinta en cada clona de esta bacteria. La alta
conservacin entre cepas de la mayor parte del genoma de P. aeruginosa, aunada a la
presencia de genes clona especfico, podra explicar la capacidad de esta bacteria de
colonizar tan diversos nichos y de utilizar como sustrato una gran variedad de compuesto.
En un determinado nicho ecolgico toda la poblacin bacteriana puede explotar toda la
informacin gentica propia de la especie y, al mismo tiempo, cada clona contiene
secuencias propias que son blanco de una acelerada evolucin gentica.
Plsmidos
Una de las caractersticas de las bacterias del gnero Pseudomonas es su gran capacidad
para catabolizar distintos hidrocarburos aromticos y alifticos. Esta caracterstica
generalmente est codificada en plsmidos, llamados catablicos(22),que casi siempre se
encuentran en cepas de P. putida y rara vez en P. aeruginosa. En el caso de esta ltima
bacteria su enorme versatilidad metablica parece deberse al gran nmero de genes
cromosomales que codifican para enzimas con actividades novedosas(72).Los plsmidos
que se presentan en P. aeruginosa codifican para resistencias a antibiticos(28)o a
metales(8,67),y su extensa distribucin representa un problema clnico.
Es interesante mencionar que si bien son frecuentes los plsmidos que confieren resistencia
a antibiticos y metales pesados entre los aislamientos de P. aeruginosa, no lo son tanto
como para considerar que estos elementos genticos formen parte de su genoma. Por otra
parte, no existen datos que sugieran que los plsmidos tengan un papel en la alta tasa de
recombinacin que presenta esta bacteria.
Algunos plsmidos originalmente aislados de cepas de P. aeruginosa fueron importantes
para la construccin del mapa gentico de esta bacteria(34,35).Adems, ya que estos
plsmidos pueden replicarse en distintos fondos genticos, han sido utilizados en el estudio
gentico
de
distintas
bacterias
gram-negativas,
diferentes
a
las
enterobacterias(33,61).Tambin tienen importancia dentro de la ingeniera gentica pues a

partir de ellos se han construido mltiples vectores de clonacin capaces de replicarse en

diversas bacterias gram-negativas(61,79).
Resistencia Natural a Antibiticos
La membrana externa de las bacterias gram-negativas es una membrana semipermeable que
permite la difusin de solutos hidroflicos pequeos y tiene muy baja permeabilidad para
los compuestos hidrofbicos(87).La permeabilidad de la membrana externa depende
principalmente de las porinas, que son proteinas formadoras de poros con una baja
especificidad(86),y de los sistemas de transporte especficos(78)(Fig. 5). La baja
permeabilidad de las porinas de la membrana externa de P. aeruginosa tiene un papel
importante en el alto nivel de resistencia natural a los antibiticos de esta bacteria(30).
Sin embargo, es claro que en P. aeruginosa, tanto la resistencia a antibiticos intrnseca
como la adquirida, dependen principalmente de la presencia de un gran nmero de
transportadores que secretan estos compuestos al exterior de la clula. El mayor nmero de
estos transportadores se agrupan en dos familias, segun su parecido estructural, una de ellas
est formada por los sistemas llamados eflux(49,88),y la otra se denomina MFS, por sus
siglas en ingls (major facilitator superfamily)(72).Es notorio la gran abundancia de estos
dos tipos de transportadores en el genoma de la cepa PAO1 comparado con el nmero
encontrado en otras bacterias como E. coli(72,www.pseudomonas.com).Los sistemas eflux
estn formados por tres proteinas, un intercambiador droga-protn, presente en la
membrana interna, una proteina de membrana externa que parece formar un canal y una
proteina periplsmica que une a las dos proteinas membranales(Animacin 1)(88).El
sistema eflux que ms contribuye a la resistencia intrnseca de P. aeruginosa es el sistema
AcrAB/MexAB que es capaz de transportar una amplia variedad de antibiticos como:
quinolonas,
macrolidos,
cloranfenicol,
tetraciclina,
trimetroprima
y
lactmicos(60).Adems de los antibiticos, el sistema AcrAB/MexAB tambin puede
translocar soventes orgnicos(60).
"Sistema Sensor de Quorum"
Pseudomonas aeruginosa, al igual que otras bacterias cuenta con mltiples sistemas
regulatorios que le permiten modificar la expresin de distintos genes en respuesta de
cambios en el medio ambiente. Es ms, se trata de la bacteria en la que se ha encontrado la
mayor proporcin de genes que codifican para protenas que son potencialmente
reguladores transcripcionales(72).Uno de estos sistemas regulatorios, que tambin est
presente en muchas otras bacterias, responde no directamente a las condiciones medio
ambientales, sino fundamentalmente a cambios en una poblacin bacteriana, ya que
promueve el cambio en la expresin gentica en funcin de la densidad celular. Este
sistema regulatorio detecta cundo se ha llegado a una masa crtica de bacterias por lo que
se le ha denominado "sensor de quorum"(24,25,64).El mecanismo mediante el cual se
regula la expresin gentica en altas densidades celulares se basa en la produccin baja y
constante por cada clula de un compuesto difusible llamado autoinductor(Fig. 6
y7).Cuando el nmero de clulas llega a cierto umbral en el que la concentracin del
autoinductor es suficientemente elevada, este compuesto interacciona y activa a cierto
activador transcripcional que, a su vez, cambia el patrn de expresin gnica(Fig. 6 y7)

(24,25,64).En un gran nmero de bacterias gram-negativas los autoinductores son

derivados acilados de la lactonas de homoserina.
P. aeruginosa contiene ms de un sistema "sensor de quorum"(24,25),dos de estos sistemas
denominados Las y Rhl, han sido muy bien caracterizados a nivel molecular y sern los que
revisar en este captulo. Sin embargo, recientemente fue reportado mediante el anlisis de
la secuencia del genoma de la cepa PAO1 un tercer regulador transcripcional de la familia
de los activadores de la respuesta sensora de quorum llamado QscR, que a diferencia de los
otros dos sistemas mencionados, tiene un papel negativo en la regulacin de la respuesta
sensora de quorum(10).
Pseudomonas aeruginosa, al igual que otras bacterias cuenta con mltiples sistemas
regulatorios que le permiten modificar la expresin de distintos genes en respuesta de
cambios en el medio ambiente. Es ms, se trata de la bacteria con la mayor proporcin de
genes que codifican para protenas que son potencialmente reguladores
transcripcionales(72).Uno de estos sistemas regulatorios, que tambin est presente en
muchas otras bacterias, responde no directamente a las condiciones medio ambientales,
sino fundamentalmente a cambios en una poblacin bacteriana, ya que promueve el cambio
en la expresin gentica en funcin de la densidad celular. Este sistema regulatorio detecta
cundo se ha llegado a una masa crtica de bacterias por lo que se le ha denominado "sensor
de quorum"(24,25,64).El mecanismo mediante el cul se regula la expresin gentica en
altas densidades celulares se basa en la produccin baja y constante por cada clula de un
compuesto difusible llamado autoinductor(Fig. 6 y7).Cuando el nmero de clulas llega a
cierto umbral en el que la concentracin del autoinduuctor es suficientemente elevada, este
compuesto interacciona y activa a cierto activador transcripcional que, a su vez, cambia el
patrn de expresin gnica(Fig. 6 y7)(24, 25,64). En un gran nmero de bacterias gramnegativas los autoinductores son derivados acilados de la lactonas de homoserina.
P. aeruginosa es la nica bacteria gram-negativa reportada a la fecha que contiene ms de
un sistema "sensor de quorum"(24,25).Dos de estos sistemas denominados Las y Rhl, han
sido muy bien caracterizados a nivel molecular y sern los que revisar en este captulo. Sin
embargo, recientemente detectamos mediante el anlisis de la secuencia del genoma de la
cepa PAO1 un tercer regulador transcripcional de la familia de los activadores de la
respuesta sensora de quorum. Denominamos PhzR a este tercer regulador por estar ligado a
los genes phz encargados de la sntesis de piocianina.
Se sabe que los sistemas Las y Rhl participan de una manera central en la expresin de los
genes que tienen que ver con la virulencia de P. aeruginosa, a los que me refer en la
introduccin de este captulo. Se sabe, tambin, que estos dos sistemas reguladores
interaccionan entre si de una manera muy compleja para promover la expresin de los
genes involucrados en la patognesis de P. aeruginosa(38,56,57,58)(Animacin 2).
El sistema "sensor de quorum" basado en el activador transcripcional LasR promueve la
transcripcin de distintas proteasas involucradas en la virulencia de esta bacteria como son
las elastasas A y B y la proteasa alcalina, asi como la exotoxina S(51,52)(Animacin 2).El
autoinductor con el que interacciona LasR es el N-(3-oxododecanoil)-homoserina lactona, o
PAI1, que se sintetiza por la reaccin catalizada por la enzima sintetasa de autoinductor

LasI(51,52).Este sistema "sensor de quorum" slo depende de la densidad celuar y no de la

composicin del medio de cultivo, por lo que se supone que se expresa siempre que se
alcanza una elevada densidad de P. aeruginosa, como sera el caso de cualquier tipo de
infeccin.
La proteina RhlR promueve la transcripcin de los genes rhlAB(Animacin 2)que codifican
para una de las enzimas que producen el biosurfactante ramnolpido(2,51,52).Se ha
reportado que otros metabolitos que tambin participan en la virulencia de la
bacteria(Animacin 2),como la piocianina(3,13),estn tambin bajo el control del sistema
Rhl(2,52)El autoinductor con el que interacciona RhlR es el N-(butanoil)-homoserina
lactona, o PAI2 que es producido por la autoinductor sintetasa RhlI. La transcripcin del
gen rhlR depende de la activacin por LasR-PAI1, por lo que los dos sistemas "sensor de
quorum" forman una cascada regulatoria encabezada por LasR(Animacin 2)
(38,56,57,58).El sistema Rhl, a diferencia del sistema Las, slo se expresa en condiciones
de limitacin de ciertos nutrimentos, como el fosfato o el nitrgeno, de modo que en un
medio rico, an en altas densidades celulares, no se expresan los factores regulados por
RhlR(56).An no se conocen los sistemas reguladores que determinan la expresin
diferencial del sistema Rhl dependiendo de la disponibilidad de nutrimentos.
Virulencia en Plantas e Invertebrados
En un muestreo de cepas de P. aeruginosa se determin que el aislamiento clnico PA14 era
capaz de infectar a la planta Arabidopsis thaliana, y que utilizaba factores de virulencia
comunes para infectar a esta planta y al ratn, que fue el modelo animal
usado(61).Asimismo, posteriormente se demostr que la cepa PA14 era capaz de infectar al
gusano Caenorhabditis elegans causandole una muerte rpida (4 a 24 hrs) en un medio con
alta sal, o una muerte lenta (2 a 3 das) en un medio con baja sal (73). Se analiz un grupo
de mutantes de la cepa PA14 que ya no eran capaces de matar a C. elegans mediante la
infeccin rpida y se encontr que algunas mutantes, como las afectadas en el
gen mexA (involucrado en los sistemas eflux) y en dos genes sin homlogos conocidos,
tenan adems una reduccin significativa en su virulencia en ratones(73).Por otra parte,
una mutante en el gen phzB que codifica para una enzima en la va de produccin de la
piocianina, presenta slo una reduccin del 18% en su virulencia al ratn. Mientras que la
mutante en el gen hrpM, que codifica para un factor de virulencia en plantas, no disminuye
la capacidad de infeccin a estos roedores. En cuanto a los factores involucrados en la
infeccin lenta, se han identificado mutantes en diversos reguladores transcripcionales
como gacS, lasR y mtrR (que regula la expresin del sistema eflux AcrAB/MexAB), que
muestran una reduccin en su virulencia en ratones del 50%(73).
Estos resultados muestran que algunas cepas de P. aeruginosa tiene la capacidad de infectar
huespedes tan diversos como son plantas, animales invertebrados y mamferos, y que
algunos factores de virulencia participan en todas estas interacciones patognicas, mientras
que otros factores slo participan en alguna de ellas. Ya que todas las cepas deP.
aeruginosa son patgenas para ratones, mientras que slo un grupo de ellas pueden
infectar A. thaliana y a C. elegans, se puede concluir que dentro de la informacin especie
especfica se encuentra codificada la capacidad de causar enfermedad en mamferos y que
el resto de interacciones patognicas se debe a informacin slo presente en ciertas clonas.

La cepa PA14 resulta un modelo muy interesante en el estudio de la interaccin patognica

ya que se ha demostrado que este aislamiento tambin es capaz de infectar a la
mosca Drosophila melanogaster, al gusano Galleria mellonella y al hongo Dictyostelium
discoideum. Se ha reportado que una mutante en el gen lasR de la cepa PA14 tiene una
virulencia disminuida en todos los modelos antes mencionados, as como en ratn y en
plantas. Esto muestra que la respuesta sensora de quorum juega un papel central en la
patogenia de P. aeruginosa.
Varios de los modelos eucariotes con los que la cepa PA14 presenta una interaccin
patognica presentan un sistema gentico bien definido y en algunos casos, como C.
elegans y D. melanogaster se cuenta ya con la secuencia completa de sus genomas, o
parcial en el caso de A.. thaliana. Esto permitir que en un futuro cercano se conozcan los
elementos del husped que estn involucrados en la infeccin por P. aeruginosa.
Produccin de Alginato
La inmensa mayora de los aislamientos clnicos o ambientales de P. aeruginosa son cepas
no mucoides, ya que producen cantidades muy pequeas del exopolisacrido llamado
alginato(11).Sin embargo, como mencion antes, en los pulmones de los enfermos de
fibrosis qustica se seleccionan muy frecuentemente cepas mucoides, que son el factor
principal de morbilidad y mortalidad en estos pacientes(26,27,59).Esta situacin ha
promovido el estudio de la produccin de alginato por P. aeruginosa.
El alginato es un copolmero lineal con enlaces -1,4 de D-manuronato y su epmero C-5,
L-guluronato(Fig. 8).La va de su biosntesis ha sido completamente dilucidada desde hace
varios aos(Animacin 3)(44).Asimismo se conocen con gran detalle los mecanismos
regulatorios que intervienen en el control de la expresin de este polisacrido(44).
Se ha determinado que la causa ms frecuente de la conversin a mucoida de las cepas
de P. aeruginosa en los pulmones de los pacientes con fibrosis qustica es la mutacin en el
gen que codifica para la proteina MucA, que es un factor antisigma(17,33,43,66,84).Veamos lo que esto significa. En bacterias la RNA polimerasa est
constituida por varias subunidades, y una de ellas, la subunidad sigma, determina qu genes
van a ser transcritos por la enzima. De este modo, los genes del metabolismo general de la
bacteria tienen una secuencia caracterstica que los hace ser reconocidos por la RNA
polimerasa conteniendo el factor sigma D. Otros genes, como aquellos que se expresan en
estrs calrico o en la fase estacionaria de crecimiento son transcrito por la RNA
polimerasa con otros factores sigma, llamados alternativos. Los genes que codifican para
las enzimas biosintticas de alginato en P. aeruginosa son transcritos por la RNA
polimerasa asociada con el factor sigma AlgU, o sigma E. En las cepas silvestres de P.
aeruginosa el factor anti-sigma MucA inactiva al factor sigma AlgU(Fig. 9).En los
pulmones de los enfermos de fibrosis qustica se seleccionan mutantes mucA que inactivan
a este factor anti-sigma y, por tanto, tienen una alta actividad de AlgU que promueve una
alta transcripcin de los genes biosintticos para alginato.
Es interesante mencionar que los aislamientos mucoides de enfermos de fibrosis qustica
producen muy bajos niveles de proteasas y otros factores de virulencia regulados por el

sistema sensor de quorum Las(46),pero producen niveles normales o elevados de

ramnolpidos, que se regula por el sistema sensor de quorum Rhl(50).Hasta el momento no
se conocen los mecanismos regulatorios que causan este fenmeno.
Formacin de Biopelculas
Cuando P. aeruginosa se adhiere a una superficie, las clulas se diferencian para formar
microcolonias cubiertas por una matriz extracelular que eventualmente llegan a constituir
una pelcula(12).Las biopelculas tienen una estructura muy compleja, en la que se pueden
distinguir canales por los que se intercambian oxgeno y otros sustratos con la fase
acuosa(Fig. 3). La matriz extracelular est constituida en parte por alginato(15),pero ste no
constituye el material ms abundante. Las bacterias que forman la biopelcula tienen un
metabolismo distinto a las celulas que crecen en medios lquidos (llamadas planctnicas),
uno de las diferencias ms aparentes es su disminuida sensibilidad a antibiticos y otros
agentes txicos(12,48).Se considera que la mayor proporcin de las clulas de P.
aeruginosa que viven en el medio ambiente se encuentran formando
biopelculas(12).Asimismo, el anlisis microscpico de los pulmones de pacientes con
fibrosis qustica muestra que P. aeruginosa tambin se encuentra dentro de este tipo de
estructuras(38).
Recientemente se demostr que el sistema Las "sensor de quorum" tiene un papel central en
la formacin de biopelculas, ya que mutantes en el gen lasI no producen estas esctructuras,
salvo en el caso en el que se adiciona el autoinductor PAI1(16).
Motilidad
P. aeruginosa tiene dos formas de desplazarse, en medios lquidos se desplaza "nadando"
mediante un nico flagelo polar(40),mientras que sobre las superficies se mueve,
independientemente de la presencia del flagelo, por un mecanismo llamado "twitching" que
depende de las fimbrias o pili tipo IV(33),estos dos tipos de desplazamiento estn
involucrados en la formacin de biopelculas(76).Por otra parte el anlisis de la secuencia
de la cepa PAO1, predice que P. aeruginosa, codifica para un total de cuatro sistemas de
quimotaxis y motilidad(72),dos de los que no han sido analizados funcionalmente an.
Los genes de P. aeruginosa que codifican para el flagelo y los que regulan su movimiento y
que, por tanto, estn involucrados en la quimiotaxis de la bacteria, tienen gran homologa
con los de E. coli y otras bacterias gram-negativas. Es interesante, sin embargo, que en P.
aeruginosa y P. putida existe un gen llamado motR(7)o fleN(14),sin otros homlogos
conocidos, que en P. aeruginosa regula el nmero de flagelos(Fig. 10 y11)y la velocidad de
nado. Esto es, mutantes en el gen motR tienen mltiples flagelos y se desplazan a mucho
mayor velocidad que la cepa silvestre. Al seleccionar mutantes afectadas en la formacin de
biopelculas se obtuvieron, entre otras, algunas que tenan inactivado el gen motR (datos no
publicados).
El desplazamiento tipo "twitching" es caracterstico de P. aeruginosa y depende de las
fimbrias tipo IV(29),que determinan la adhesin e infeccin de la bacteria a las clulas
epiteliales del husped(81).Se han descrito ms de 35 genes involucrados en la biognesis,

regulacin y funcionamiento de la fimbria tipo IV de P. aeruginosa(81).Muchos de estos

genes tienen homologa con genes involucrados en la secrecin de protenas y la
incorporacin de ADN a la clula en distintas bacterias.
En interesante mencionar que el activador transcripcional AlgR, que activa los genes para la
biosntesis de alginato, tiene un papel central en la expresin de la fimbria tipo
IV(80).Asimismo, se encontr que la proteina regulatoria ChpA determina el movimiento
twitching, la produccin de alginato y tambin diversos factores regulados por el sistema
"sensora de quorum".Esta protena ChpA es un regulador transcripcional que modula la
expresin de un sistema multifactorial de transduccin de seales, anlogo, pero ms
complejo, que el que regula la quimotaxis en otras bacterias al controlar la rotacin del
flagelo(81).Se desconoce el significado fisiolgico de la interaccin regulatoria entre la
produccin de alginato, el movimiento twitching, y la respuesta "sensora de quorum".
Secrecin de protenas
Practicamente todas las bacterias gram-negativas secretan protenas al medio extracelular.
Estas exoprotenas tienen que atravesar la envoltura celular compuesta por dos membranas,
la membrana plasmtica y la membrana externa. Se han reportado cuatro vas de secrecin
de protenas en bacterias gram-negativas, y tres de ellas estn presentes en P.
aeruginosa(72,75).
En la secrecin tipo I las exoproteinas pasan directamente al medio extracelular sin pasar
por el espacio periplsmico. En la translocacin por esta va no participa el pptido seal,
sino depende de la presencia de ciertas firmas de amino cidos en la regin carboxilo de las
protenas, as como del concurso de algunas protenas accesorias especficas para la
translocacin del polipptido a secretar. Los casos mejor estudiados de este tipo de
secrecin lo constituyen las proteasas de Erwinia chrysanthemi y la -hemolisina deE. coli.
En P. aeruginosa la proteasa alcalina codificada por el gen aprA se secreta por esta va;
participan en su secrecin las proteinas AprD, AprE, y AprF(75).
La va de secrecin tipo II, tambin llamada va de secrecin general, es la responsable de
la secrecin de la mayora de las proteinas extracelulares en bacterias gram-negativas,
aunque E. coli y Salmonella no la presentan. En esta ruta, la secrecin a travs de la
membrana interna depende del sistema Sec, presente en bacterias gram positivas y gram
negativas, y del pptido seal en el extremo amino de las protenas que se translocan. Una
vez en el espacio periplsmico, las protenas se translocan por un conjunto de 12 a 14
protenas, que en P. aeruginosa se denominan Xcp(75)(Animacin 4).Las protenas que se
transportan por el sistema Xcp en P. aeruginosa son, entre otras, la elastasa, la lipasa, la
exotoxina A, las fosfolipasas y la fosfatasa alcalina. Como mencion antes, la transcripcin
de los genes que codifican para varias de las protenas que se secretan por esta va est
regulada por el sistema "sensor de quorum" que adicionalmente regula a los genes xcp(9).
El sistema de secrecin tipo III transloca las proteinas directamente de la bacteria a la
clula eucariote, por lo que se encuentra presente en bacterias patgenas de plantas o
animales. En P. aeruginosa varias exotoxinas se translocan a las clulas eucariotes
mediante este sistema tipo III(21).Entre estas toxinas se encuentran las exotoxinas S y T

que bloquean la transduccin de seales de la clula infectada mediante su actividad de

ADP-ribosil-transferasa, as como la exotoxina Y, descrita recientemente, que eleva el Amp
cclico, pues tiene actividad de adenilato ciclasa. Las protenas que intervienen en el tipo de
secrecin III tienen homologa estructural con proteinas que intervienen en el ensamble del
flagelo(21).
Produccin de Biosurfactante
Un surfactante es un compuesto tenso-activo, esto es, que tiene propiedades detergentes. El
hombre usa una enorme cantidad de surfactantes sintetizados qumicamente en los diversos
productos de limpieza que consumimos. Muchsimos seres vivos producen surfactantes
para distintos fines, y a estos compuestos se le llama biosurfactantes(23).Los
biosurfactantes son importantes, por ejemplo, en nuestros pulmones en donde se produce un
surfactante que es fundamental en el intercambio de gases. La bacteria Serratia
liquefasciens produce un surfactante que le permite a las clulas desplazarse en una
superficie(20),mientras que el autoinductor de Bacillus subtilis es un biosurfactante
llamado surfactina(21).La naturaleza qumica de los biosurfactantes es muy variada, hay
pptidos polisacridos y glicolpidos, entre otros. Los biosurfactantes tienen un gran
potencial biotecnolgico ya que son tan efectivos o ms que los sintetizados qumicamente,
pero son totalmente biodegradables y no son txicos (23).
P. aeruginosa produce el biosurfactante ramnolpido como parte de la respuesta
dependiente del sensor de quorum RhlR(52).En las condiciones de laboratorio esta bacteria
produce dos formas de este glicolpido, una contiene una molcula de ramnosa y la otra
tiene dos(Figura 16).No es claro el papel que los ramnolpidos tienen para P. aeruginosa, se
ha postulado, por ejemplo, que P. aeruginosa usa estos biosurfactantes para solubilizar
sustratos hidrofbicos como el hexadecano(52),sin embargo muchos aislamientos no usan
hexadecano como fuente de carbono y todas las cepas producen ramnolpidos. Otras
posibilidades seran que estos biosurfactantes participaran en motilidad celular, en la
resistencia natural de la bacteria a metales, o como seales de deprivacin de nutrimentos
dentro de la respuesta sensora de quorum.
Las aplicaciones biotecnolgicas de los ramnolpidos son mltiples(42),pero su principal
utilidad es la limpieza de suelos contaminados con hidrocarburos(42)o con metales
pesados(45)(Fig. 12 y13).Recientemente se report que los ramnolpidos pueden matar en
bajas concentraciones a hongos zoospricos(Animacin 5 yFig. 14,15 y16)(70),que son
importantes patgenos de plantas comerciales, de modo que tambin tienen un potencial en
el control biolgico de estas plagas.
Dentro de mi laboratorio del Instituto de Biotecnologa de la UNAM, hemos reportado la
descripcin de la va metablica que interviene en la sntesis de los ramnolpidos(42)
(Animacin 6).Conocer esta va nos ha permitido establecer una estrategia para producir
ramnolpidos en cepas recombinantes de E. coli(Animacin 7).La ventaja de producir
ramnolpidos en esta enterobacteria es que la produccin de metabolitos por P. aeruginosa a
nivel industrial est restingida por tratarse de un patgeno oportunista.
Produccin de Polihidroxialcanoatos

P. aeruginosa almacena como reserva de carbono, en condiciones de limitacin de

nitrgeno, polihidroxialcanoatos (PHA) de 10 a 14 carbonos y, una vez que la bacteria se
encuentra en un medio propicio, se degradan mediante la -oxidacin(75).
En el laboratorio a mi cargo encontramos que gran parte de los PHA se sintetizan mediante
una ramificacin de la va general de la biosntesis de cidos grasos, a nivel de la enzima cetoacil reductasa (FabG). Tanto los monmeros de PHA como la parte lipdica de los
ramnolpidos son sintentizados en su mayor parte por la va general de sntesis de cidos
grasos, sin embargo a partir de la reduccin del intermediario cetoacilo-ACP, existe una
enzima (RhlG, Animacin 6)que es especfica para la sntesis de PHA y ramnolpidos(4).De
este modo, las mutantes en el gen rhlG producen niveles muy bajos de PHA(Fig. 17 y18)y
no producen ramnolpidos(4).
Los PHA tienen una amplia aplicacin biotecnolgica ya que a partir de ellos se pueden
producir plsticos biodegradables.
Degradacin de Alcanos de Cadena Ramificada
Algunos hidrocarburos se acumulan en el medio ambiente debido a su baja
biodegradabilidad. Este es el caso de los alcanos y alquenos de cadena ramificada,
especialmente aquellos con terminaciones en tres metilos o con carbonos
cuaternarios(65).Se han reportado cepas de P. aeruginosa que tienen la capacidad de
degradar este tipo de compuestos y que, por tanto, son tiles en la limpieza de sitios
contaminados con estos compuestos(65).
El surfactante de ms amplio uso en pases subdesarrollados es el alquilbenceno sulfonato
de cadena ramificada (ABSr), este detergente representa un problema de contaminacin
muy serio, ya que se acumula en ros y lagos debido a la baja tasa de degradacin de su
cadena lateral. En el laboratorio a mi cargo aislamos de una planta de tratamiento de aguas
domesticas e industriales una cepa de P. aeruginosa (W51D) capaz de degradar el
ABSr(68).La cepa tipo PAO1 no es capaz de degradar el detergente, sin embargo s degrada
el alqueno ramificado citronelol(6)(Fig. 19),que ha sido usado como modelo para estudiar
la va de degradacin de hidrocarburos ramificados.
La va de degradacin del ABSr en la cepa W51D muestra que este detergente se degrada
en parte por la ruta de degradacin del citronelol, que est presente en distintas cepas de P.
aeruginosa, pero que la mayor parte del surfactante se degrada por una nueva va
catablica(5).En esta nueva va el primer paso es la desulfonacin del surfactante, y
posteriormente se degrada completamente la cadena lateral hasta cido benzoico, para
finalmente romper el anillo aromtico y ser degradado por el ciclo de los cidos
tricarboxlicos(Animacin 8).
El grupo de investigacin coordinado por el Maestro Oscar Monroy de la Universidad
Metropolitana ha demostrado la utilidad de la cepa W51D en el tratamiento de aguas
residuales con un alto contenido de surfactantes del tipo de los alquil bencenos lineales.
Como se trata de un tratamiento anerobio, las bacterias no sobreviven ms que en los

primeros reactores, evitandose as los problemas de liberar al medio ambiente grandes

cantidades de un patgeno potencial.
Algunas Consideraciones Evolutivas
Como hemos visto, P. aeruginosa tiene una extraordinaria capacidad para adaptarse a
diversos ambientes y tiene, adems, la particularidad de no presentar una poblacin clonal.
Esto es, la poblacin de estas bacterias comparte una gran parte de su genoma a travs de
mecanismos de recombinacin. Estas caractersticas plantean una serie de interrogantes
acerca de la manera en que esta bacteria ha evolucionado.
Uno puede cuestionarse cmo se seleccionan los elementos que participan en la patogenia
de P. aeruginosa. Surgen algunas preguntas como: Cmo pueden seleccionarse en el
medio ambiente las protenas que son especficas para la infeccin de clulas eucariotes?
Tal es el caso del sistema de secrecin de protenas tipo III, las exotoxinas A, T, Y y S y las
elastasas. Cul es la presin de seleccin que determina que todas las cepas de P.
aeruginosa presenten un sistema regulatorio tan complejo como el sensor de quorum,
encargado fundamentalmente de regular la expresin de los elementos involucrados en la
virulencia de la bacteria? Acaso la respuesta sensora de quorum representa alguna ventaja
selectiva para P. aeruginosa viviendo en el medio ambiente?
Para ejemplificar esta problemtica mencionar el caso de la cepa IGB83 de P. aeruginosa,
que aislamos a partir de un coco recolectado en la selva chiapaneca(55).Esta cepa presenta
una elevadsima produccin de enzimas hidrolticas y otros factores de virulencia como son
los ramnolpidos y la piocianina, regulados por la respuesta sensora de quorum. Es ms, la
virulencia de la cepa IGB83, a pesar de ser un aislamiento ambiental, es mucho mayor que
la de algunos aislamientos clnicos, como la cepa tipo PAO1.
Por otra parte, es tambin difcil entender cmo pueden conservarse las secuencias especie
especficas mediante la recombinacin entre cepas aisladas de sitios distantes
geograficamente y de ambientes con caractersticas totalmente distintas. Si se analiza, por
ejemplo, la secuencia de algunas regiones del genoma de las cepas IGB83 y PAO1 que no
codifican para genes esenciales, como el gen que codifica para la lipasa LipA y su regin
regulatoria, encontramos que tienen un 99% de identidad, an en la regin no codificante.
Asimismo, si comparamos la secuencia del gen motR, rhlG o de los genes rhl, que
partcipan en la produccin de ramnolpidos, entre las cepas PAO1, el aislamiento ambiental
PG201 y la cepa IGB83, encontramos que en todos los casos las secuencias presentan ms
de un 90% de identidad.
Es tambin importante entender cules son los mecanismos que determinan los lmites para
la recombinacin gentica en P. aeruginosa y cules son los mecanismos moleculares que
intervienen en el proceso de recombinacin. Preguntarnos, por ejemplo: Cmo se
reconocen entre s las cepas de P. aeruginosa? Existe un proceso de recombinacin con
bacterias cercanamente relacionadas como P. fluorescens o P. putida?
La informacin especfica de cada clona pareciera no tener un papel importante en la
evolucin de esta bacteria, sino ms bien tratarse de informacin accesoria con una

importancia coyuntural en determinado nicho ecolgico. Esta conclusin puede obtenerse,

precisamente, a partir de la falta de conservacin de estas secuencias entre los aislamientos
de P. aeruginosa, as como de su falta de coevolucin con genes esenciales de la bacteria
como aquellos que codifican para el RNA ribosomal. El papel de la informacin especfica
de cada clona pareciera ser anlogo al que juegan los plsmidos en otras bacterias.
P. aeruginosa es pues, una bacteria que coloniza exitosamente una enorme diversidad de
nichos, y que mantiene una poblacin con una secuencia genmica comn mediante la
recombinacin. Estas caracteristicas poblacionales nos llevan a cuestionar el papel que
tienen algunos principios de la teora de la evolucin darwiniana sobre la evolucin de esta
bacteria. Cmo podemos explicar el cambio evolutivo de esta bacteria mediante el criterio
de seleccin del ms apto, si la recombinacin gentica no permite definir a una clona o
individuo?Se puede hablar de deriva gnica en una poblacin en la que no hay barreras
geogrficas? Esto es, si los cambios evolutivos se dan cuando, por medio de la seleccin
natural, se selecciona al individuo que tiene una mayor capacidad reproductiva en un
determinado nicho ecolgico cmo se fijara un cambio gentico, si la informacin se
comparte por toda la poblacin?
Sin duda el estudio de la gentica molecular de P. aeruginosa nos permitir en el futuro
cercano contestar algunas de estas preguntas y formular otras, como parte del maravilloso e
interminable quehacer cientfico, de modo que vaya creciendo nuestro entendimiento de
este, sin duda extraodinario y temido organismo.