Sei sulla pagina 1di 2

Analisi del DNA e dellRNA: Purificazione del DNA genomico e plasmidico. Purificazione dellRNA.

Isolamento dellRNA
messaggero. Analisi con metodi elettroforetici e di trasferimento.

Le classi di vettori e la costruzione di vettori ricombinanti: Il ruolo centrale di E. coli. La trasformazione dei batteri.
Le metilasi Dam e Dcm di E. coli. I plasmidi. Marcatori selettivi. I vettori lambda e i vettori M13. I vettori cosmidici. I
cromosomi artificiali: YAC, PAC, BAC e HAC. Gli enzimi di restrizione e modificazione. La ligasi.

La produzione di proteine ricombinanti: Espressione in E. coli. I vettori di espressione. I promotori costitutivi e


inducibili. Espressione in lievito: S. cerevisiae, P. pastoris, S. pombe. Espressione in cellule di insetto. Espressione in
cellule di eucarioti superiori: sistema Tet-on/Tet-off. Lutilizzo delle proteine ricombinanti nella ricerca scientifica e
nellindustria farmaceutica.

La PCR e le sue applicazioni in campo biomedico: Condizioni di reazione. Polimerasi termostabili. Primer
oligonucleotidici. PCR quantitativa. La PCR nella diagnosi di malattie genetiche. Il test di paternit. Le applicazioni
forensi. Clonaggio di prodotti di PCR.

Il sequenziamento del DNA: Le tecniche di base per il sequenziamento. Il sequenziamento automatico. Il


sequenziamento dei genomi. Il progetto genoma umano. Analisi dei dati di sequenza.

Strategie di clonaggio dei geni: Le librerie di DNA genomico e di cDNA. Analisi di una genoteca. Libridazione,
ilChromosome Walking e lanalisi differenziale.

Analisi di un promotore: Costruzione di plasmidi reporter. Saggio della mobilit elettroforetica. Footprinting.
Immunoprecipitazione della cromatina.

Studio delle interazioni proteina-proteina: Il doppio ibrido. La coimmunoprecipitazione. il fishing for partners.
Lanalisi mediante tecnologia SPR (Risonanza Plasmonica di Superficie).

Trasferimento di geni in cellule animali: Colture cellulari. Tecniche di trasfezione: chimica, per elettroporazione,
mediata da liposomi, peptidi. I vettori virali: adenovirus, virus adenoassociati, retrovirus, lentivirus.

Manipolazione genetica di animali: Iniezione nel pronucleo. Cellule staminali embrionali. Metodi per la produzione di
topi transgenici. Trasferimento di DNA in altri vertebrati. Terapia genica: esempi e potenzialit.

Analisi post-genomiche: I cambiamenti globali dellespressione genica: Differential Display e Microarray. Analisi
proteomiche

Obiettivi formativi:
Il corso si propone di illustrare le principali tecniche e tecnologie utilizzate per la preparazione, lanalisi e lapplicazione
del clonaggio del DNA. Alla fine del corso lo studente dovr essere in grado di:
-conoscere le moderne tecniche di analisi genomica e le applicazioni delle tecnologie del DNA ricombinante in campo
biomedico.
-discutere criticamente un problema sperimentale di biologia molecolare, proponendo le tecniche adatte alla sua
soluzione.

Prerequisiti:
E' richiesto il conseguimento degli obiettivi relativi alle seguenti discipline: Biologia, Chimica Organica, Biochimica
Generale ed fortemente consigliata l'acquisizione degli obiettivi relativi alla Biologia Molecolare.

Testi di Riferimento:
Reece R.J.-Analisi dei geni e dei genomi -EdiSES- ISBN: 8879593463
Brown T.A.-Biotecnologie Molecolari-Zanichelli-ISBN: 978-88-08-16746-0
Pasternak J.J. - Biotecnologia Molecolare-Zanichelli- ISBN: 8808-14696-0