Revitalizacin de la cepa

problema
Cualquiera que haya sido el mtodo empleado en la conservacin de
las cepas microbianas, cuando stas se recuperan para hacer nuevos
lotes para su conservacin o para trabajar con ellas, se recomienda
no utilizar directamente las clulas que se han estado guardando, porque
stas vienen de una situacin de estrs ms o menos fuerte (sobre todo
cuando se han conservado por liofilizacin) y por lo tanto no son adecuadas
para ningn tipo de prueba. Primero habra que revitalizarlas o
rejuvenecerlas sembrndolas en un medio no selectivo, es decir, un medio
que asegure lo ms posible el crecimiento, y a partir de este primer
crecimiento ya se puede trabajar con ellas, cultivndolas en medios
selectivos cuando sea necesario.
Por esto mismo, lo primero que hacemos en sembrar la cepa
problema en agar nutritivo y en TSA, ambos medios generales, y
aprovechamos tambin para sembrar en agar MacConkey, que es un medio
selectivo, en el que se inhibe el crecimiento de las bacterias Gram positivas,
y es un medio diferencial, ya que permite diferenciar entre bacterias Gram
fermentadoras de lactosa (lact +), que forman colonias rosas, y bacterias
Gram no fermentadoras de lactosa (lact ), con colonias amarillo-naranja y
medio de color amarillo:

De esta forma vamos a comprobar varias cosas:

Si tenemos un cultivo puro o una mezcla de bacterias

Por otra parte, vemos en qu medio de cultivo crece mejor (AN
o TSA) y ese ser el medio de eleccin para el mantenimiento
de la cepa por transferencia peridica que debe realizar el
alumno. Desde esta placa se extraen 1-2 colonias y se
siembran en un tubo con agar inclinado, perfectamente

etiquetado. Se lleva a incubar a la estufa a 37 0C y cuando

comprobemos que hay crecimiento, se vuelve a resembrar en
otro tubo. De esta manera conseguimos el tubo 1 y el 2, que
sern colocados en las gradillas correspondientes del
frigorfico.
Comparando las placas de TSA y MacConkey se puede extraer
la conclusin de si la bacteria es Gram positiva (crece slo
en la placa de TSA) o bien, si es Gram negativa (crece en
las dos placas)
Si observamos cmo son las colonias en la placa de
MacConkey, podemos ya ir avanzando algo en su identificacin:
si las colonias son rosas es lactosa + y si son amarillas y
el medio es amarillo son lactosa .

De cualquiera de estas placas podemos hacer la tincin Gram y

comprobar al microscopio el tipo de bacteria, la morfologa y el tipo de
agrupacin que presenta. Por ejemplo, Gram +
cocos en racimos (estafilococos G+).
Prueba para confirmar la observacin microscpica
con tincin Gram: Prueba Gram KOH
Procedimiento:
-

Se coloca en un porta una gota de

KOH al 3% y 2-3 colonias de la cepa.
Se homogeniza con el asa de siembra describiendo crculos
durante 1 minuto

Si al levantar el asa de siembra se observa que se ha formado un

filamento mucoso, la prueba es positiva e indica que la bacteria es
GRAM NEGATIVA (el hidrxido de potasio con los lpidos de la pared Gforma una sustancia mucoide).