UNIDAD 1

LABORATORIO DE QUIMICA FORENSE

Cromatografa de papel
Tcnicas de separacin, es decir que
permiten separar solutos que estn
mezclados en un disolvente, en funcin de
su afinidad por dos fases diferentes.
Laboratorios
anlisis cualitativos

Esta tcnica la cre M. TSWEET cuando

separo distintos pigmentos de las plantas.
La fase mvil, puede ser un lquido o un
gas en el cual estn mezclados las
sustancias a separar.
La fase estacionaria es el lecho a travs
del cual va a moverse la fase mvil

En la cromatografa en papel se utiliza una

hoja de papel de celulosa de elevada
pureza recubierta de un capa de agua
asociada a las fibras de celulosa, que es la
que constituye la fase estacionaria.

La fase mvil, en la que ir disuelta la

muestra, es lquida tambin y est
formada por disolvente cuya naturaleza
se elige en funcin de los componentes
que se pretenden separar.

Se aplica la muestra sobre el papel en un

extremo de ste. Introduccin del papel
en la cubeta que contiene el
disolvente.
Atraviesa el papel por
capilaridad arrastrando los componentes
de la mezcla.

Separacin en funcin de la afinidad por las dos

fases, las ms solubles en agua se quedarn cerca
del punto donde se aplic la muestra, y las menos
solubles en agua y ms solubles en el disolvente
llegarn ms lejos.
Las sustancias separadas se identifican mediante
diversos procedimientos fsicos o qumicos.

Cromatografa en capa fina

Es una tcnica muy utilizada para la
identificacin y determinacin de pureza
de compuestos.
Tambin puede utilizarse como tcnica de
separacin a muy pequea escala.

La fase estacionaria es una capa fina de gel

de slice u otro soporte con propiedades
adsorbentes dispuesta sobre un soporte
de
vidrio
o
aluminio
que
denominaremos placa
El fluyente o fase mvil ser la mezcla de
disolventes adecuada

La sustancia de inters se adherir a la

fase estacionaria o se mover con la fase
mvil, viajando una distancia que es
inversamente proporcional a la afinidad
por la fase estacionaria.

La fase estacionaria puede ser de papel, de

celulosa o de un gel de silicato (vidrio
molido bien fino) unido a una superficie
slida (una placa de vidrio, aluminio, plstico
o papel).
Se colocan las muestras a un centmetro del
borde en uno de los extremos de la placa, se
deja secar, se coloca la placa en un envase
(tanque de desarrollo) que ya contiene una
pequea cantidad del solvente.

Se tapa y se deja correr por un rato. El

solvente subir por capilaridad e ir
arrastrando las molculas, las cuales se
movern segn la afinidad que muestren por
la fase estacionaria. Si la mezcla demuestras
que se est analizando presenta color, se
vern los distintos colores migrando a
distintas velocidades. Si son incoloras hay
que someter la placa a algn tratamiento con
una sustancia desarrolladora (developer)

CROMATOGRAFA DE GASES (GC)

La cromatografa de gases es la tcnica a

elegir para la separacin de compuestos
orgnicos e inorgnicos trmicamente
estables y voltiles

La tecnica analitica de mas amplia

utilizacion

Tipos de cromatografia de gases

La cromatografa gas-lquido
La cromatografa gas-slido

Tipos de cromatografia de gases

La cromatografa gas-lquido (GLC, de gasliquid chromatography)

lleva a cabo la separacin por medio del

reparto de los componentes de una
mezcla qumica, entre una fase gaseosa
que fluye (mvil) y una fase lquida
estacionaria sujeta a un soporte slido

Tipos de cromatografia de gases

La cromatografa gas-slido (GSC, de gassolid choromatography)

utiliza un absorbente slido como fase

estacionaria. La disponibilidad de detectores
verstiles y especficos, y la posibilidad de
acoplar el cromatgrafo de gases a un
espectrmetro de masas o a un
espectrofotmetro de infrarrojo, amplan
an ms la utilidad de la cromatografa de
gases.

Objetivo

Proporcionar un gasto o flujo constante del gas transportador (fase

mvil)

Permitir la introduccin de vapores de la muestra en la corriente

de gas que fluye

Contener la longitud apropiada de fase estacionaria

Mantener la columna a temperatura apropiada (o la secuencia del

programa de temperatura)

Detectar los componentes de la muestra conforme eluyen de la

columna

Proveer una seal legible proporcional en magnitud a la cantidad de

cada componente

Requerimientos de un equipo de
cromatografa de gases

1.
2.
3.
4.
5.

6.

Los requerimientos bsicos

en un equipo de
cromatografa de gases son:
Gas de arrastre o
acarreador
Puerto de inyeccin
Una columna
Un detector
Un registrador o cualquier
otro dispositivo de salida
para medir la seal del
detector
Cromatogramas

Aplicaciones de la cromatografa
de gases

Evala la pureza de los reactantes y

productos de reaccin o bien a
monitorear la secuencia de la reaccin,
para los fabricantes de reactivos qumicos
su aplicacin para la determinacin de la
pureza es lo ms importante.

En la investigacin es un auxiliar
indispensable para diversas tcnicas de
evaluacin, entre las principales estn los
estudios cinticos, anlisis de adsorcin a
temperatura programada, determinacin
de reas especficas por adsorcin de gas
y determinacin de isotermas de
adsorcin

En el campo tambin pueden ser

aplicados, principalmente en estudios de
contaminantes del agua: insecticidas en
agua, pesticidas en aguas de lagos, lagunas,
ros; desechos industriales descargados en
ros o lagunas.

CROMATOGRAFA DE LQUIDOS DE
ALTA RESOLUCIN

La cromatografa de lquidos es un
mtodo de separacin fsica basado en la
distribucin de los componentes de una
mezcla entre una fase estacionaria y una
fase mvil que en este caso es un liquido.

La cromatografa liquida clasica se lleva a cabo

en una columna generalmente de vidrio, la cual
esta rellena con la fase estacionaria.

Luego de sembrar la muestra en la parte superior,

se hace fluir la fase movil a travs de la columna
por efecto de la gravedad. Con el objeto de
aumentar la eficiencia en las separaciones el
tamao de las partculas de fase fija se fue
disminuyendo hasta el tamao de los micrones lo
cual genero la necesidad de utilizar altas
presiones para lograr que la fase movil fluya a
velocidades razonables.

Dependiendo del tipo de fase estacionaria y del

tipo de fenmeno fsico que provoca la
separacin, la cromatografa liquida de alta
resolucin puede clasificarse en:

Cromatografa de adsorcin

Cromatografa de reparto o particin

Cromatografa de iones

Cromatografa de exclusin por tamao

Cromatografia de adsorcion:

La fase estacionaria es un solido y se

utiliza casi exclusivamente silice (silica) y
en casos discretos alumina.

Cromatografia de reparto o
particion.

Actualmente se utiliza como fase

estacionaria compuestos ligados
qumicamente a un soporte solido de silice.
Cromatografa fase normal
Cromatografa en fase inversa.

En la cromatografa en fase normal la fase

estacionaria es polar (como por ejemplo
silice) y la fase mvil es poco polar (hexano,
diclorometano, cloroformo).

En la cromatografa en fase inversa, el

compuesto unido qumicamente es no
polar, frecuentemente hidrocarburo
aliftico, y se emplean las fases mviles
son solventes polares (agua, metanol,
acetonitrilo).

Cromatografia de iones

Se utilizan columnas rellenas con fases

estacionarias con una determinada carga
que retienen iones de carga opuesta. Las
fases estacionarias para la modalidad
clasica de esta cromatografa son las
resinas de intercambio inico.

Cromatografa de exclusin por

tamao:

La fase estacionaria esta formada por

partculas de porosidad definida y
uniforme. Las molculas de mayor tamao
tienen menor capacidad para acceder a
los poros y por mantenerse excluidas
eluyen mas rpido, mientras que las de
menor tamao que pueden penetrar en
los poros y permanecer all mas tiempo
eluyen en ultimo lugar.

instrumentacin para cromatografa

de lquidos de alta resolucin

SISTEMAS DE BOMBEO
Debido a las elevadas presiones de
trabajo y al pequeo tamao de las
partculas de la fase estacionaria, se utiliza
una bomba que es la encargada de
introducir la fase mvil o disolvente a
travs de la columna.

SISTEMAS DE INYECCIN DE MUESTRA

los volmenes que se emplean han de ser muy pequeos, de
unas pocas dcimas de microlitro a tal vez 500
El mtodo ms simple es la utilizacin de una jeringa de alta
presin con un diafragma a la entrada de la columna. Est
limitado a una presin mxima de operacin de 1500 psi.

Columnas
En las columnas cromatogrficas es donde
se produce la velocidad diferencial delos
solutos que permite su separacin

DETECTORES
El papel del detector es indicar los momentos de
aparicin de los componentes, y proporcionar
indicacin cuantitativa y cualitativa de los mismos. El
detector utilizado depende de la naturaleza de la
muestra y deber reunir una serie de caractersticas
como son, tener una sensibilidad elevada, buena
estabilidad y reproducibilidad.

ESPECTROMETRIA
DE FLOURESENCIA
O FLUORIMETRIA

Llamada espectrofotometra o fluometra;

es
un
tipo
de
espectroscopia
electromagntica, la cual analiza la
fluorescencia de una muestra.

Involucra el uso de un haz de luz

comnmente de luz ultravioleta, que excita a
los electrones en las molculas de ciertos
componentes y causa entonces la emisin de
luz; tpicamente, pero no necesariamente, luz
visible. Su tcnica complementaria es el
espectro de absorcin .

El equipamiento que mide la fluorescencia es

llamado fluormetro o fluormetro.

INSTRUMENTOS

En la espectrometra de fluorescencia se
utilizan dos tipos generales de instrumentos:

Fluormetros de filtro. Utilizan filtros para

aislar la luz incidente y la luz fluorescente.

Espectrofluormetros. Usan monocromadores

de retculo de difraccin para aislar la luz
incidente
y
la
luz
fluorescente.

APLICACIONES

Es usada en los campos de investigacin

como el bioqumico, mdico y qumico,
entre otros, para el anlisis de
compuestos orgnicos.

Su uso tambin ha sido reportado en la

diferenciacin de tumores malignos y
benignos en la piel.

ESPECTROSCOPIA DE
ABSORCIN ATMICA

Es una tcnica para determinar la

concentracin de un elemento metlico
determinado en una muestra.
Puede utilizarse para analizar la
concentracin de ms de 62 metales
diferentes
en
una
solucin.

Usa la adsorcin de la luz para medir la

concentracin de la fase gaseosa de tomos. Ya
que la mayora de las muestras son slidas o
lquidas, los tomos o iones de los analitos
deben ser vaporizados a la flama o en un
horno de grafito.
Los tomos adsorben luz visible o ultravioleta
y hacen transiciones a niveles de energa ms
altos.

La sensibilidad depende del nmero de

tomos que se encuentran en el estado
fundamental.
La absorcin atmica da lugar, en general, a
una mayor sensibilidad que la fotometra de
llama para un gran nmero de elementos.
Adems, la absorcin atmica es una tcnica
que presenta menos interferencias y es ms
simple que la fotometra de llama

En absorcin atmica la baja energa no

es una desventaja tan importante ya que
la misin de la llama, en ese caso, es
nicamente atomizar la muestra y formar
un vapor de tomos sin excitar; por esta
razn es aplicable a un mayor nmero de
elementos que la fotometra de llama.

FOTOMETRIA DE LLAMA

Es una tcnica de emisin que utiliza una

llama como fuente de excitacin y un foto
detector electrnico como dispositivo de
medida. Se trata principalmente de un
mtodo de anlisis cuantitativo y es uno
de los mtodos ms sencillos y precisos
para el anlisis de metales alcalinos.

Funcin de las llamas

Tiene tres funciones bsicas

Permite pasar la muestra a analizar del estado
lquido a estado gaseoso.

Descompone los compuestos moleculares del

elemento de inters en tomos individuales o en
molculas sencillas.

Excita

estos

tomos

molculas.

CONDICIONES DE LA LLAMAS

Temperatura adecuada y que en ella se

forme un ambiente gaseoso.

El ruido de fondo de la llama no debe

interferir las observaciones a efectuar.

Llama tpica consta

de:
cono interno,
cono externo
zona entre
conos.