TECNICA DE FISH

Hibridacin
''in situ''
fluorescente.
Gutirrez, Cenia. Gonzales Herrera, Angela. Meja Caldern, Rossario.
Lainez Aguirre, Juan Jos
Es una tcnica molecular que permite localizar un determinado fragmento de la
secuencia de los cidos nucleicos y pone de manifiesto la presencia o ausencia
de secuencias gnicas especficas. Se puede aplicar sobre ncleos interfsicos
de extensiones celulares o cortes de tejido o directamente en cromosomas

TECNICA
FISH.

La tcnica FISH puede realizarse a los cromosomas

en metafase o en interfase.
Los cromosomas que son usualmente analizados por
FISH son los 13, 18, 21, X e Y, que son los ms
propensos a sufrir anomalas. Estn relacionados a
enfermedades como:

el sndrome de Patau (13)

el sndrome de Edwards (18)
el sndrome de Down (21),
el sndrome de Turner (X)
el sndrome del superhombre (Y), etc.

Tipos de sondas de FISH.

1. Sondas especficas de un locus: hibridan a
una regin particular de un gen. Esta
sonda es til cuando se ha aislado una
pequea parte de un gen y se quiere
averiguar en qu cromosoma se
encuentra.
2. Sondas alfoides o centromricas: son
sondas
que
contienen
secuencias
complementarias de las secuencias

OBJETIVOS
Puede
identificar
un
rango
de
mutaciones
La hibridacin
con
mltiples
sondas permiten
la deteccin de
productos
de
translocacin.

CONCLUSIONES
No
puede
detectar
pequeas
mutaciones.
Las sondas no
estas
comercialmnt
e disponibles
para todas las
regiones
cromosmicas.

TECNICA DE FISH Hibridacin

FISH o hibridacin fluorescente in situ es una tcnica

citogentica de marcaje de cromosomas mediante
la cual estos son hibridados con sondas que emiten
fluorescencia y permiten la visualizacin, distincin y
estudio de los cromosomas as como de las
anomalas que puedan presentar. Esta tcnica
permite la rpida determinacin de aneuploidas,
microdeleciones, duplicaciones, inversiones, as
como la adjudicacin de un marcador gentico a
un cromosoma (cartografa gentica).

''in situ'' fluorescente.

Qu es?

TECNICA DE FISH Hibridacin

''in situ'' fluorescente.

repetidas que se encuentran en los centrmeros de los cromosomas.

Como pueden utilizarse sondas de diferentes colores, cada cromosoma
puede ser marcado de manera distinta, con lo que se puede averiguar
si un individuo tiene el nmero correcto de cromosomas o si tiene un
cromosoma extra
3. Sondas de pintado cromosmico: son colecciones de sondas de un
tamao reducido, cada una de las cuales se hibrida a una secuencia
diferente a lo largo de todo un cromosoma. Utilizando estas libreras de
sondas, se puede marcar todo un cromosoma generando un cariotipo
espectral. De esta manera, se consiguen imgenes en color que
permiten examinar los cariotipos de una forma ms exacta. Esta tcnica
es particularmente til para examinar anormalidades cromosmicas

PASOS
En primer lugar, la muestra de DNA (cromosomas metafsicos o ncleos en
interfase)

se

DESNATURALIZA,

proceso

que

separa

las

hebras

complementarias de la estructura en doble hlice del DNA. A la muestra

desnaturalizada se le aade entonces la sonda de inters, marcada con un
fluorforo, que se asociar al DNA de la muestra en el sitio diana, en el proceso

TECNICA DE FISH Hibridacin

''in situ'' fluorescente.

denominado HIBRIDACIN, donde se vuelve a formar una doble hlice. La

seal emitida por la sonda se observa mediante un microscopio de
fluorescencia y as la muestra de DNA se puede clasificar segn la presencia o
ausencia de la seal.

FISH en metafase

TECNICA DE FISH Hibridacin

''in situ'' fluorescente.

Cuando las clulas estn en metafase, sus

cromosomas se encuentran condensados para
la divisin celular. Para detenerlas en metafase,
se
emplea
COLCHICINA,
un
agente
despolimerizante
de
los
microtbulos
encargado de separar las cromtidas
hermanas de un cromosoma, impidiendo el
avance de la divisin celular. Este tipo de FISH
se utiliza para detectar microdeleciones
especficas, translocaciones o para identificar
material extra de origen desconocido.
La sensibilidad de estos ensayos es en todos los
casos mejor que la de la citogentica de rutina,
pero depende del sndrome en concreto. Como Sndrome de Williams, donde
el 96% de los pacientes con diagnstico confirmado poseen una delecin en
el gen de la elastina.

Sndrome del maullido (cri-du-chat)

Sndrome de Kallman
Sndrome de Miller-Dieker
Sndrome de Williams
Sndrome de Smith-Magenis
Sndrome de Wolf-Hirschhorn
Deficiencia de esteroide-sulfatasa
Sndrome de Prader-Willi/Angelman
Sndrome DiGeorge/Velo-Cardio-Facial/CATCH 22/Shprintzen

FISH de interfase
El FISH en interfase tiene la ventaja de que no
es necesario cultivar previamente las clulas
durante diversos das antes de poder analizar
sus cromosomas. Adems, cuando las clulas
se encuentran en interfase, la cromatina est
en torno a 10 000 veces ms descondensada
que en metafase, lo cual permite una mayor
resolucin a la hora de detectar anomalas
pequeas (24 horas)

Se emplea sobre todo para la deteccin de

aneuploidias
o
grandes
deleciones,
duplicaciones en clulas fetales o tumorales.

Un buen ejemplo es el ENSAYO DE ANEUPLOIDA, que se realiza sobre clulas

del fluido amnitico cuando hay una fuerte indicacin clnica de una de las
trisomas ms comunes. Se desnaturalizan los ncleos de la muestra, se hibridan
con sondas especficas para los cromosomas 13, 18, 21, X e Y, y en 24 horas se
dispone de los resultados. La prueba de aneuploida suele incluir tambin una
citogentica de rutina para confirmar los resultados o detectar cualquier
anomala no detectada por la FISH de interfase.

2. Anomalas numricas.

Alteraciones en cromosomas sexuales: Alta frecuencia de mosaicismo

en pacientes implica que, en muchos casos, slo se den defectos leves
en el desarrollo. Gran relevancia en Medicina Reproductiva con
problemas de fertilidad. Tales son los casos de sndrome de Klinefelter,
trisoma X y monosoma X.
Edad materna avanzada, aborto de repeticin de causa desconocida
y/o fallo de implantacin: Ms de la mitad de los casos son debidos a
alteraciones en los cromosomas 13, 16, 18, 21, 22, X e Y. En estos casos,
la seleccin de aquellos embriones normales para los cromosomas
citados, aumenta las probabilidades de conseguir una gestacin a
trmino.
Factor masculino grave: Con este estudio embrionario, se pueden evitar
las alteraciones cromosmicas surgidas en la descendencia de aquellos
grupos de pacientes con calidad seminal baja y que tienen que recurrir
a la tcnica de microinyeccin intracitoplasmtica del espermatozoide
(ICSI).

TECNICA DE FISH Hibridacin

1. Esta tcnica ha resultado ser muy til en el campo de la medicina

reproductiva, con aplicacin en el
diagnstico gentico
preimplantatorio (DGP). forma muy precoz de diagnstico que,
apoyndose en las tcnicas de reproduccin asistida, posibilita el
estudio de embriones antes de ser transferidos al tero materno y, por
consiguiente, antes de que se lleve a cabo la implantacin embrionaria.

''in situ'' fluorescente.

APLICACIONES EN LA MEDICINA