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4 GRUPO C
BIOQUMICA GENERAL
INTEGRANTES:
PRCTICA NO. 1
REACCIONES DE COLORACIN DE LAS PROTENAS
Objetivo:
Aprender a interpretar las reacciones de coloracin para la determinacin de
grupos atmicos y ciertos aminocidos presentes en las protenas.
Resumen
Las protenas son las molculas ms abundantes en las clulas, suponiendo
50% o ms de su peso. (1) No existe proceso biolgico alguno que no dependa
de la presencia o actividad de estas sustancias; cumplen funciones como:
enzimas, hormonas, anticuerpos o como receptores de muchas clulas. (2)
Ya que las protenas estn constituidas por aminocidos las reacciones que
presentaremos se basan en el reconocimiento de ciertos aminocidos mediante
la coloracin especfica, utilizando la albumina del huevo como solucin
problema y comprobando la presencia de aminocidos con reacciones
caractersticas de ciertos reactivos, se utiliza en anlisis bioqumicos para tener
informacin sobre la estructura qumica as como en clnicos para determinar la
deficiencia o disminucin de protenas importantes para el ser humano.
INDICE
Reactivo de millon 5-6
Reaccin Xantoproteica 7-9
Reaccin glioxlica 10-12
Reaccin de Cole 13-15
Reaccin de ninhidrina 16-18
Investigacin de tiogrupos 19-21
Reaccin de Molisch 22-23
Reaccin de Sakaguchi 24-25
Conclusion 30
Bibliografia 31
Introduccin
Las protenas estn formadas por aminocidos y son parte de la estructura
PLANIFICACIN V HEURSTICA
Conceptual
Pregunta Central
Fundamentacion
Prueba de Milln: Es especfica para
el aminocido tirosina, que contiene
un anillo de benceno al que se une
un grupo hidroxilo (-OH).
Metodologa
Conclusiones
Qu le sucede a la muestra
problema cuando se pone en
contacto con el reactivo de millon?
La tirosina se encuentra en la
albumina, sin embargo la prueba
resulto negativa, lo que representa
una posible descomposicin del
reactivo o alguna falla propia de la
manipulacin del reactivo.
Registro
1.- Despus de agregar el
reactivo y la muestra, se
form un precipitado
blanco.
2.- Al calentar sigui de
color blanco.
Sirve
para
caracterizar
los
aminocidos con grupos fenlicos.
Conceptos
Procedimiento
Fenmeno a observar
Aminocido: compuestos orgnicos que se combinan para formar protenas. Los aminocidos y las protenas son los
pilares fundamentales de la vida. El cuerpo humano utiliza aminocidos para producir protenas con el fin de ayudar al
cuerpo a:
Reaccin qumica: proceso qumico en el cual dos sustancias o ms, denominados reactivos, por la accin de un factor
energtico, se convierten en otras sustancias designadas como productos.
Tirosina: Es un neurotransmisor directo y puede ser muy eficaz en el tratamiento dela depresin, en combinacin con
otros aminocidos necesarios.
Grupo hidroxilo: es un grupo funcional compuesto de 1 tomo de oxgeno y 1 de hidrgeno, caracterstico de los
alcoholes. Tiene un nmero de oxidacin de 1 unidad, es sigma-aceptor y pi-dador.
cido ntrico-nitroso: es un compuesto qumico y un cido inorgnico monoprtico que se encuentra slo en solucin y
en sus sales, los nitritos. El cido nitroso se emplea para convertir aminas en diazos. Se trata de un agente mutgeno
que provoca la desaminacin oxidativa de la adenina y la citosina, originando transiciones.
Coagulo: Los cogulos sanguneos son masas que se presentan cuando la sangre se endurece pasando de lquida a
slida.
Grupos fenlicos: son compuestos orgnicos en cuyas estructuras moleculares contienen al menos un grupo fenol, un
anillo aromtico unido a al menos un grupo funcional.
Anillo de benceno: es un compuesto qumico de estructura muy estable. Se trata de un hexgono que tiene un tomo
de carbono unido a cada una de sus esquinas, es decir, cuenta con 6 tomos de carbono.
Procedimiento
Reaccin de milln
Colocar
Tubo de ensayo
3 mL clara de huevo
Calentar
Con un minuto al bao maria
solidifico con una coloracin blanca
PLANIFICACIN V HEURSTICA
Conceptual
Pregunta Central
Fundamentacion
Reaccin Xantoproteica: el cido
ntrico (HNO3) reacciona con el
radical fenilo de los aminocidos que
lo contienen, radical que se
transforma en hidroxi-benceno, que
da el color anaranjado caracterstico
de esta reaccin, de ah su nombre,
reaccin xantoproteica. (5)
Principios
El acido ntrico reacciona sobre grupos
bencnicos formando nitroderivados
aromticos. La nitracin del anillo
bencnico formando nitroderivados de
color amarillo, que se vuelven
anaranjados.La reaccin ocurre en
medio fuertemente alcalino.La prueba da
resultado positivo en aquellas protenas
con aminocidos portadores de
grupos aromticos.
Qu le sucede a la muestra
problema cuando se pone en
contacto con el cido ntrico?
Metodologa
Conclusiones
Esta prueba sirve para demostrar las
caractersticas de los aminocidos
que presentan anillo aromtico El
color aumenta en medio alcalino.
Esta prueba nos dio positivo y por lo
tanto podemos decir que la muestra
problema contiene aminocidos con
anillo aromtico como son: la
tirosina, fenilalanina y el triptfano.
Registro
1.
2.
3.
Conceptos
Reaccin xantoproteica; Acido
ntrico; Aminocido; Reaccin
qumica; precipitado; radical fenilo;
nitroderivados; nitracin; anillo
bencnico; alcalino.
1.
2.
3.
4.
Al agregar el HNO3 a la
muestra problema se forma un
precipitado blanco.
Al hervir la muestra, el
precipitado blanco cambia al
color amarillo y se disuelve en
parte coloreando el lquido.
Despus de alcalinizar la
muestra con el NaOH vira al
anaranjado.
Procedimiento
Se coloco 3 ml de la muestra
problema en el tubo de ensayo
Se le aadi 1 ml de HNO 3
concentrado.
Se hirvi 1 minuto en bao
mara.
Se alcanizo con 0.5 ml de
NaOH
Fenmeno a observar
cido ntrico: Es un lquido viscoso y corrosivo cuyo color vara de incoloro a amarillo
plido, que puede ocasionar graves quemaduras en los seres vivos. Es soluble en agua,
generndose calor.
Reaccin
qumica:
Proceso
termodinmico en
el
cual
una
o
ms
sustancias (llamadas reactantes), por efecto de un factor energtico, se transforman
cambiando su estructura molecular y sus enlaces, en otras sustancias llamadas
productos.
Radical fenilo: Se forma cuando el benceno le falta un hidrgeno (C6H5). El radical del
benceno se denomina fenilo.
Alcalino: Las sustancias alcalinas, ya sea en estado lquido o slido, tienen niveles de pH
superiores al promedio, lo cual las torna en lo opuesto a los cidos.
OBSERVACIONES
1. Al agregar el HNO3 a la muestra problema se forma un precipitado blanco.
PLANIFICACIN V HEURSTICA
Conceptual
Pregunta Central
Fundamentacion
Prueba de glicoxilica, tambin
conocida como reaccin de Adam
kiewiczs: Es una prueba estndar
para la identificacin de tiptofano
Es una disolucin de cido glioxilico
en agua.
Principios
Al ser el nico aminocido con el
grupo indol presente, la reaccin con
dicho aminocido presenta un anillo
violeta en la interface. Est
relacionado con el producto de
condensacin del aldehdo del cido
Glioxalico con los nitrgenos de dos
anillos indolicos.Al mezclarse con el
triptfano el grupo carbonilo del
cido glioxilico se condensa con el
grupo indol generando el color
purpura en presencia de cido
sulfrico.
Metodologa
Conclusiones
Qu le sucede a la muestra
problema cuando se pone en
contacto con la reaccin glioxilica?
Conceptos
Procedimiento
Se le agrega 3 ml de la reaccin
glicoxilica a una sustancia problema
con la misma cantidad
Se mezcla
Se agregan 2 ml de cido sulfrico
concentrado
Fenmeno a observar
INTERFACE: Zona de contacto entre dos fases y tambin con lo que est entre ellas.
(8.9)
(Imagen 1)
(Imagen 2)
PLANIFICACIN V HEURSTICA
Conceptual
Pregunta Central
Fundamentacion
Prueba de la Cole: Es especfica del
grupo indol caracterstico del
Triptfano. El anillo del indol se hace
reaccionar con cido Glioxlico en
presencia de cido Sulfrico
concentrado para formar un
compuesto violeta que se forma en
la interface entre la solucin de
protena y el cido sulfrico.
Principios
Metodologa
Conclusiones
Qu le sucede a la muestra
problema cuando se pone en
contacto con la reactivo de cole?
Registro
Fenmeno a observar
Se agregaron
2 mL de las
soluciones problemas, agregar una
gota de solucin diluida de formol,
despus se le adiciona una gota de
sulfato mercrico al 10%. Mezclar y
agregar algo ms de 2 mL de cido
sulfrico
concentrado.
Agitar
suavemente.
Conceptos:
PLANIFICACIN V HEURSTICA
Conceptual
Pregunta Central
Fundamentacion
Prueba de la Ninhidrina: La
ninhidrina descarboxila y desamina a
los aminocidos reducindose. La
forma reducida reacciona con otra
ninhidrina no reducida y con el
amoniaco y forma un compuesto de
color violceo.
Principios
La ninhidrina reacciona con un grupo
amino libre formando un compuesto
de color violceo.
La reaccin ocurre en caliente y en
un rango de pH entre 4 y 8.
La ninhidrina reacciona con grupo
imino formando un compuesto de
color rojo que cambia a color
amarillo.
Las aminas primarias dan + la
prueba sin liberacin de CO2.
Conceptos
Ninhidrina; Aminocido; Grupo
amino; grupo carboxilo libre; Prolina;
Hidroxiprolina.
Qu le sucede a la muestra
problema cuando se pone en
contacto con la Ninhidrina?
Metodologa
Conclusiones
Al aparecer un color violeta la
reaccin resulto positiva, por
los que la ninhidrina reacciona
con un amino libre para formar
un compuesto de esta
coloracin. Este resultado
tambin lo dan las peptonas,
los polipptidos y los
aminocidos con grupos
carboxilos y aminas libres.
Registro
1.- Al aadir la solucin
problema y el reactivo, se
tuvo una coloracin
ligeramente blanco opaco.
2.- Se hirvi por dos
minutos y se observ
cambio de coloracin a lila
y con cuatro minutos se
torno violeta.
Procedimiento
1.- A 5 mL de las
soluciones problemas, se
aade 0.5 mLde una sol.
de ninhidrina al 0.1%.
2.- Se hierve uno o dos
min y se deja enfriar.
Fenmeno a observar
Conceptos:
Ninhidrina:
Producto qumico utilizado para detectar amonaco o aminas primarias y
secundarias. Cuando se hace reaccionar con estas aminas libres, se produce un
color azul o morado oscuro conocido como prpura de Ruhemann. Se utiliza en
el anlisis de aminocidos de las protenas. La mayora de los aminocidos,
excepto prolina, son hidrolizados y reaccionan con la ninhidrina. Tambin,
ciertas cadenas de aminocidos se degradan. (10)
Aminocido:
Unidades qumicas o "bloques de construccin" del cuerpo que forman las
protenas. Las sustancias proteicas construidas gracias a estos 20
aminocidos forman los msculos, tendones, rganos, glndulas, las uas y el
pelo. Se dividen en esenciales y no esenciales. (11)
Grupo amino:
Grupo funcional derivado del amonaco o alguno de sus derivados alquilados por
eliminacin de uno de sus tomos de hidrgeno. Se frmula segn su procedencia como
-NH2, -NRH o -NR2.
Grupo carboxilo libre:
Los grupos Carboxilo frecuentemente se ionizan, liberando el H desde el grupo
hidroxilo como un protn libre (H +), con el O restante que lleva una carga
negativa. Esta carga se mueve de aqu para all, entre los dos tomos de
oxgeno, lo que hace relativamente estable el estado de ionizacin. (12)
Prolina: Aminocido cclico no polar, no esencial, su funcin principal en el
organismo es la de producir colgeno. La prolina puede sufrir hidroxilacin,
formndose hidroxiprolina.
Hidroxiprolina: Interviene en la estabilizacin de protenas, debido a la
PROCEDIMIENTO
Se coloca 3
mL de la
solucin de
albumina
para
despues
aadir 0.3
mL de
ninhidrina
al 0.1%.
Se calent
a bao
maria
(improvisad
o con un
vaso de
precipitado
y una placa
de
calentamie
nto)
Durante
cuatro
minutos.
Paso 3
Paso 2
Paso 1
Se observ
el cambio
de
coloracin
violeta.
Reaccin de Tiogrupos
Fundamentacion
Se utiliza para caracterizar
aminocidos azufrados
Conclusiones
Qu le sucede a la muestra
problema cuando se pone en
contacto con
Reaccin de Tiogrupos?
Principios
La reaccin ser positiva con los
aminocidos que presenten
azufre en su estructura.
La formacin de un precipitado
negruzco de sulfuro de plomo,
mediante un lcali del azufre de
los aminocidos, que reacciona
con una solucin de acetato de
plomo, forma el sulfuro de plomo.
Registro
Se obtuvo una solucin con coloracin
oscura despus de colocarla en bao
Mara y posteriormente agregarle
solucin de acetato de plomo
Procedimiento
Se hierve durante unos minutos
una pequea cantidad de
muestra (clara de huevo o suero)
con unas gotas de NaOH.
Conceptos
Cistina, cistena, metionina,
Tiogrupos
Cistina: La cistina es un aminocido no esencial que se forma cuando se unen dos cistenas
a travs de un puente de sulfuro. (14)
Contiene gran cantidad de azufre que es fcilmente asimilable y nulo de toxicidad
Cistena: La cistena es un aminocido polar no cargado a pH neutro. Su smbolo es C en
cdigo de una letra y Cys en cdigo de tres letras Es un aminocido con azufre, al igual que
la metionina, conteniendo un grupo tiol (-SH). A pH ligeramente bsico este grupo se oxida y
dos cistenas pueden unirse por enlace disulfuro formndose la cistina. La cistena tambin
forma parte del glutation. (15)
PLANIFICACIN V HEURSTICA
Conceptual
Pregunta Central
Fundamentacion
Reaccin de molisch: tie cualquier
carbohidrato presente en una
disolucin. Se utiliza como reactivo
una disolucin alfa-naftol al 5% en
etanol de 96. Se le aade cido
sulfrico y aparece un anillo violeta
que separa al acido sulfrico. (19)
Principios
Reaccin con alfa-naftol al 5% en
etanol de 96. Se basa en la
deshidratacin de los carbohidratos
por la presencia de cido sulfrico o
cido clorhdrico para producir un
aldehdo, que se condensa con dos
molculas de alfa-naftol resultando
en la coloracin rosa/morado.
Metodologa
Conclusiones
Qu le sucede a la muestra
problema cuando se pone en
contacto con la reaccin molisch?
Registro
En la prctica de molish se observ
que el tubo de ensayo que contena
la albumina de huevo y las 4 gotas
de sol. Alcohlica al 1% de alfa
-naftol y que al agregarle los 2ml de
cido sulfrico concentrado se form
un anillo rojizo. El tubo de ensayo se
calent al agregar el acido sulfrico.
Conceptos
Procedimiento
En un tubo de ensayo se
aade 5ml de albumina de
huevo y 4 gotas de sol.
Alcohlica al 1% de alfanaftol.
Se agita y se aade 2ml de
cido sulfrico concentrado
sin que se mezcle.
Fenmeno a observar
La reaccin de molisch
Conceptos:
Reaccin de molisch: el cual tie cualquier carbohidrato presente en una
disolucin.
Carbohidrato: elemento principal en la alimentacin, se encuentra en azucares
y fibras.
Reaccin qumica: proceso qumico en el cual dos sustancias o ms,
denominados reactivos por la accin de un factor energtico se convierte en
otras sustancias designadas como producto.
Alfa-naftol: compuesto orgnico, solido blanco. De formula C10H2OH.
PLANIFICACIN V HEURSTICA
Conceptual
Pregunta Central
Fundamentacion
Prueba de Sakaguchi: El grupo
guanidinio presente en la cadena
lateral de la Arginina reacciona con
soluciones de alfa-naftol en
presencia de Bromo en medio
alcalino.
Metodologa
Conclusiones
Qu le sucede a la muestra
problema cuando se pone en
contacto con hidrxido de sodio al
5% y sol. -naftol?
Identificamos
estructuralmente
diferentes aminocidos presentes en
determinadas protenas o en su
defecto como aminocidos libres.
Principios
Registro
Procedimiento
Fenmeno a observar
Aminocido: compuestos orgnicos que se combinan para formar protenas. Los aminocidos y las protenas son los
pilares fundamentales de la vida. El cuerpo humano utiliza aminocidos para producir protenas con el fin de ayudar al
cuerpo a:
Reaccin qumica: proceso qumico en el cual dos sustancias o ms, denominados reactivos, por la accin de un factor
energtico, se convierten en otras sustancias designadas como productos.
Arginina: est implicada en la conservacin del equilibrio de nitrgeno y de dixido de carbono. Tambin tiene una gran
importancia en la produccin de la Hormona del Crecimiento, directamente involucrada en el crecimiento de los tejidos y
msculos y en el mantenimiento y reparacin del sistema inmunologico.
Cadena lateral: es un sustituyente o grupo qumico unido a un grupo funcional o a la cadena principal de una molcula
orgnica.
Solucin: es una mezcla de dos o ms componentes, perfectamente homognea ya que cada componente se mezcla
ntimamente con el otro, de modo tal que pierden sus caractersticas individuales.
Hipodromito de sodio: es una especie qumica de bromo en estado de oxidacin +1. Tambin se llaman bromitos las
sales de las que forma parte este ion.
Reaccin de Sakaguchi
Procedimiento
Colocar
2 gotas hipoclorito
de sodio
Tubo de ensayo
3 mL clara de huevo
Calentar
1 mL de hidrxido de sodio al 5%
CONCLUSIN
Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el
organismo, ya que cumple muchas funciones, estn constituidas por
aminocidos, por los cuales los mtodos se basan en el reconocimiento de los
aminocidos. Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman
con el agua soluciones coloidales.
Como sabemos en la existen muchos alimentos de que contienen protenas
(esenciales para la realizacin de ciertas reacciones bioqumicas del cuerpo);
son molculas que no podemos ver a Siempre vista y no contamos con el
equipo necesario para poder observarlo detalladamente, pero existen distintas
reacciones (como las realizadas anteriormente) para darnos cuenta que estn
presentes, en este caso la lbumina del huevo que contiene protenas (que
detectamos) a pesar de su baja concentracin de algunas de estas molculas
los marcaba tenuamente. Nos sali la duda conforme a la prctica de porque
en algunas sustancias se gelatinizo, pero no nos habamos dado cuenta que
slo le suceda a los tubos que les agregamos cido, estos al tener con acto
con la sustancia cambi la temperatura de nuestra muestra, una de las
propiedades la lbumina es que cuando se aumenta su temperatura tiende a
cuajarse, por lo tanto tiene que ver la variabilidad del calor.
Bibliografa
1)http://www.uco.es/master_nutricion/nb/Vaclavik/proteinas.pdf
2)http://html.rincondelvago.com/aminoacidos-y-proteinas_1.html
3)http://es.scribd.com/doc/2309987/Proteinas-y-sus-reacciones-visiten-mi-blogalli-estoy-subiendo-nuevos-archivos-http-quimicofiq-blogspot-com#scribd
4)http://www.blogdefarmacia.com/la-importancia-de-la-albumina/
5)http://iesptolosa.net/ies/dptos/dpto_biologia_geologia/bto_1/practica_de__prot
einas.pdf
6)http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_xantoproteica
7)http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Proteinas_8075.pdf
8)http://www.academia.edu/6410068/BIOQUIMICA_INF_4
9)Atko Viru.- Analisis y control del rendimiento deportivo.- Editorial paidotribo.isbn: 84-8019-718-8.-pag.:48
10)http://docsetools.com/articulos-informativos/article_60434.html
11)http://proteinas.org.es/aminoacidos
12)http://www.maph49.galeon.com/biomol1/carboxyl.html
13)http://www.rdnattural.es/plantas-y-nutrientes-paraelorganismo/aminoacidos/propolina/
14)http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wpcontent/uploads/2010/08/TP-Proteinas
15)http://www.rdnattural.es/plantas-y-nutrientes-para-elorganismo/aminoacidos/cistina/
16)http://www.natursan.net/metionona-aminoacido-esencial/
17)http://docencia.izt.uam.mx/japg/RedVirtualJAP/CursoDRosado/2_Estructurad
eCompuestosBioquimicos/9-1_ReaccionesIdentificacion.pdf
18)http://medmol.es/glosario/32/
19)http://es.slideshare.net/wilsondanielcaicedochacon/prueba-de-molish
20)http://docencia.izt.uam.mx/japg/RedVirtualJAP/CursoDRosado/2_Estructurad
eCompuestosBioquimicos/9-1_ReaccionesIdentificacion.pdf