Pontificia Universidad Catlica de Chile

Facultad de Ciencias Biolgicas

Departamento de Gentica Molecular y Microbiologa
Biologa de Microorganismos
BIO 151E sc2

Informe n2:
Prcticas sobre mtodos de
identificacin bioqumica, gentica
molecular bacteriana, levaduras y
hongos filamentosos

Nombre alumno:
Profesores: Dras.
Jefe de ayudantes:
Ayudante:
Fecha de entrega:

Felipe Del Valle Batalla.

Beatriz Dez y Carolina Serrano.
Daniela Ruiz.
Isidora Suazo.
5 de Noviembre de 2014.

Introduccin y objetivos
La identificacin de bacterias Gram negativas en el laboratorio de microbiologa puede realizarse
con tests adecuados para estos propsitos como son los de la batera de identificacin bioqumica
convencional o la prueba API 10S (1). Ambos tests se basan en reacciones qumicas que
entregan como resultado cambios en el medio donde son realizadas las mediciones. Los cambios
apreciables pueden ser tales como produccin de algn color especfico, presencia de burbujas,
turbidez del medio y otros parmetros que varan con respecto a la condicin inicial debido al
microorganismo (M.O.) que se est sometiendo a la prueba (2).
La batera bioqumica convencional consiste en 11 diferentes pruebas organizadas en tubos de
ensayo con medios slidos y lquidos (3). Segn distintos aspectos se revelan cualidades
intrnsecas del microorganismo o la muestra a analizar, que en este caso se trat de una muestra
problema de carcter Gram negativo proporcionada por los ayudantes.
El sistema de identificacin API 10S que se emplea para enterobacterias y otros M.O. del tipo
Gram negativos consiste en 11 pruebas (1) dispuestas en microtubos que de manera anloga a
la batera bioqumica convencional muestran cambios luego de que son agregadas las muestras.
No solo los M.O. del tipo Gram negativos son de inters en las prcticas de laboratorio realizadas,
sino que tambin las partculas virales y su relacin con distintas especies de M.O. son motivo
de anlisis en cuanto a los procesos relacionados con la gentica molecular bacteriana. Los
procesos de transferencia gentica (4) entre dos M.O. tienen como propsito el beneficio para
uno de los individuos tales como factores de resistencia a antibiticos o virulencia, que sirven
para adaptaciones a nuevos ambientes. Dentro de las maneras en las que puede transferirse
informacin gentica entre dos bacterias estn los procesos de conjugacin, transformacin y
transduccin (5). Otro proceso importante es el de la transposicin genmica (6).
La conjugacin consiste en la transferencia de algn elemento mvil gentico desde una bacteria
hacia otra mediante un mecanismo de contacto directo entre estas dos. La conjugacin es un
proceso que requiere de una clula dadora que tiene un tipo especial de plsmido conjugativo y
una clula que no lo posee (7). Este contacto directo se efecta mediante el oganelo de la bacteria
dadora que recibe el nombre de Pili sexual que al hacer contacto con la bacteria receptora se
retrae permitiendo la formacin de un puente entre ambas y resultando esto en una transferencia
del plsmido conjugativo (7).
La transduccin (8) ocurre mediante la intermisin de un fago que se encarga normalmente de
escindir el DNA de la bacteria donante y que luego almacena en su propia estructura de la cabeza.
Este fago puede ser residente de la bacteria hasta en un ciclo llamado ltico y salir de ella
mediante la lisis en el ciclo lisognico e infectar otra bacteria a la cual podr donar la seccin de
DNA bacteriano que obtuvo desde la bacteria donante.
La transformacin es un proceso en el cual la bacteria, resumidamente, adquiere el material
gentico desde el exterior celular mediante su incorporacin por poros especializados presentes
en ella. El proceso de transformacin fue evidenciado y caracterizado por Griffith en S.
pneumoniae en 1928 (9). La transposicin es el movimiento de ciertos elementos del genoma a
otras secciones de ste mediante la asistencia de transposones.
2

El estudio de los organismos pertenecientes al reino Fungi tambin es parte de las prcticas del
laboratorio de microbiologa, por lo que es importante poder notar las diferencias morfolgicas
generales y microscpicas que existen entre distintos tipos de microorganismos de este reino. En
particular la subdivisin ms importante se establece entre los hongos filamentosos y las
levaduras (10).
Los primeros presentan ramificaciones y estas pueden ser del tipo septado o sifonado si es que
tienen subdivisiones internas o no (11). Estas ramificaciones dan origen a las estructuras de
reproduccin del hongo en cuestin y por lo general las colonias se presentan visualmente como
algodonosas. Las levaduras son ms similares en su forma de colonia a la de las bacterias, y su
tipo de reproduccin es asexual por yemacin (12). Algunos integrantes del reino Fungi son
patgenos u oportunistas, mientras que otros pueden ser contaminantes ambientales.
La importancia de algunos hongos es notable, como el caso del filamentoso Penicillium notatum
(P. notatum) de donde se obtiene la penicilina, o la levadura Sacharomiyces cerevisiae (S.
cerevisiae) que es usado como cepa cervecera y panadera (13).
Los objetivos propuestos para los prcticos realizados son:
1.- Reconocer e identificar una muestra problema entregada con el mtodo de la batera
bioqumica convencional y el test API 10S
2.- Lograr evidenciar satisfactoriamente alguno de los tipos de adquisicin de material gentico
en bacterias.
3.- Describir y discriminar tipos de hongos filamentosos y levaduras a partir de observaciones
macroscpicas y microscpicas.

Materiales y mtodos
Los materiales y mtodos a continuacin se detallan de acuerdo al prctico que correspondan
de manera correlativa.

Prctico (anexo) 3: Identificacin mediante batera bioqumica

convencional y sistema API 10S
Materiales y reactivos:
- Mechero bunsen.
- Puntas de plstico.
- Asas de platino.
- Pipetas Pasteur.
- Muestra problema n 8.
- Gotario.
- Batera bioqumica de identificacin convencional.
- Test API 10S.
- Indicador azul de bromotimol.
- Reactivo de Kovacs.
- Indicador Alfa Naftol.
- Reactivo TDA.
- Suero fisiolgico.
- Reactivo de James, NIT 1 y NIT 2.
- KOH al 40%.
- Aceite de parafina.
- Reactivo oxidable.

Mtodos:
1) Se realiz la inoculacin de la muestra problema n 8 a la batera bioqumica convencional
siguiendo las instrucciones como aparecen en la gua de trabajos prcticos (14). Se puso especial
cuidado en la siembra de medios semitendido realizndola en profundidad y luego zigzagueando
la superficie. Se dej incubar y en el siguiente prctico (n4) se aadieron los reactivos e
indicadores correspondientes, finalmente se anotaron los resultados de las reacciones de
acuerdo a la tabla disponible en la gua de trabajos prcticos (15).
2) Se llenaron los microtubos de la prueba API 10S con la suspensin bacteriana correspondiente
a la muestra problema n 8, posteriormente se incub. En el siguiente prctico (n4) se siguieron
las instrucciones de la gua de trabajos prcticos (14) al momento de agregar reactivos e
indicadores correspondientes. Finalmente se anotaron los resultados de las reacciones de
acuerdo a las descripciones de las disponibles en la gua de trabajos prcticos (14) y todo el test
API 10S fue interpretado por un software computacional que determin el M.O. que se encontraba
en la muestra problema n 8.

Prctico 4: Gentica molecular bacteriana

Materiales y reactivos:
- Mechero bunsen.
- Cultivo de cepa de Salmonella entrica (WT) (S. entrica WT).
- Lisados de fago transductor P22 de cepas 14028/Cherry y MST1063
- Placas con agar Luria (LB), Luria Kanamicina-Ampicilina, Luria ampicilina.
- Placa de agar McConkey Kanamicina.
- Cepa E. coli CC1000 y Salmonella 2C
- Puntas de plstico.
- Placas verdes.
- Agar blando LB.
- Rastrillo de siembra.
- Tubos eppendorff.
- Estufa.
- Placas con lisados de fago P22 y H5.

Mtodos:
1) Se observ las placas de lisis proporcionadas y se anot las diferencias que se apreciaban
entre ellas a escala macroscpica.
2) Se utiliz una punta plstica para sembrar los fagos P22 y H5 en placas verdes segn la gua
de procedimientos de laboratorio (16). Se enviaron a incubar y en el siguiente prctico (n5) se
anotaron las diferencias observables.
3) Se siguieron las indicaciones segn la gua de laboratorio (16) para realizar la mezcla de fago
con la S. entrica WT. Se envi a incubar el tubo eppendorff y luego se realiz una siembra en
agar LB utilizando el rastrillo de siembra. En el posterior prctico (n5) se observ la lisis en las
placas.
4) Siguiendo los pasos de la gua de trabajos prcticos (17), se realiz la movilizacin de
plasmidios por conjugacin. Hubo un cambio con respecto a la gua y es que se agreg toda la
muestra de E. coli. En el prctico siguiente (17) se observ lo ocurrido y se describi.
5) Se siguieron las instrucciones de la gua (17) para la prctica sobre transduccin de plsmidos
y los resultados fueron descritos y anotados en el prctico siguiente (n5).
6) Siguiendo las instrucciones de la gua de laboratorio (17) se realiz la siembra con fagos y S.
entrica WT y en el prctico n5 se analizaron los resultados de este procedimiento, describiendo
sus caractersticas.

Prctico 5: Levaduras y hongos filamentosos

Materiales y reactivos:
- Mechero bunsen
- Asa de platino.
- Set regular para tincin Gram.
- Microscopio.
- Portaobjetos y cubreobjetos.
- Aceite de inmersin.
- Azul de lactofenol.
- Pinzas.
- Tinta china.
- Cultivos de Rhodotorula, Cryptococcus neoformans, Aspergillus niger, Mucor, Candida
albicans (C. albicans) y P. notatum.

Mtodos:
1) Se realizaron observaciones macroscpicas de los cultivos disponibles (Hongos filamentosos
y levaduras) y luego se anotaron segn la clasificacin disponible en la gua de trabajos prcticos
(18).
2) Se efectu una tincin de Gram segn los pasos de la gua de trabajos prcticos (19) sobre un
frotis de C. albicans. Se observ y describi su morfologa microscpica segn la clasificacin de
la gua (18). Luego, con la misma levadura se realiz un examen al fresco como se indica en la
gua (19) y se anotaron las caractersticas microscpicas observables. El ltimo procedimiento
para las levaduras se trat del examen al fresco de cpsula que se realiz con Cryptococcus
siguiendo los pasos de la gua de trabajos prcticos, anotando luego la morfologa microscpica
apreciable.
3) Para los hongos filamentosos y su descripcin microscpica se hizo un examen al fresco como
se detalla en la gua de trabajos prcticos (18) y posteriormente se anotaron las caractersticas
ms notables haciendo nfasis en aquellas que tenan que ver con las estructuras que contienen
las esporas.

Resultados
Los resultados para el prctico anexo 3 de anlisis mediante la batera bioqumica convencional
se encuentran resumidos en la siguiente tabla.
Tabla 1: Resultados para batera bioqumica convencional para M.O. aplicado a la muestra problema 8.

Medio
Caldo glucosado en campana
Agar manitol
Agar citrato
Caldo urea

Resultado Observacin
Hay gas atrapado en la campana.
+
+
+

Cultivo de color amarillento.

No se aprecia crecimiento.
Coloracin fucsia del medio.

Caldo corriente

Posterior a la adicin del reactivo de

Kovacs se aprecia que no hay reaccin y
se mantiene un color amarilloanaranjado.

Caldo Voges-Proskauer Tubo 1

Luego de agregar los reactivos, el color

permanece caf bastante oscuro.

Caldo Voges-Proskauer Tubo 2

Al agregar gota de reactivo, comienza a

aparecer un color anaranjado.

Agar corriente

Agar TSI
Agar LIA - Desaminacin de la Lisina

+
-

La cepa no presenta ningn tipo de

pigmentacin.
El tubo es completamente amarillo.
No se produjo reaccin.

Agar LIA - Descarboxilacin de la Lisina

Se presenta un color morado intenso en

tendido y profundidad.

Agar MIO

Produccin de H2S

No se observa motilidad de la bacteria

alrededor de la picadura.
No se aprecia reaccin.

Observaciones macroscpicas de resultados para la batera bioqumica (+: positivo, - : negativo).

En la siguiente tabla se detallan los 3 M.O. ms relacionados a los resultados de batera de

pruebas bioqumicas del prctico anexo 3.
Tabla 2: Identidad entre M.O. posibles y muestra problema n8.

Mximo
Puntaje
Porcentaje de
M.O.
puntaje (PM)
obtenido (PO)
identidad
K. pneumoniae
13
10
76,90%
Citrobacter freundii
13
9
69,23%
Enterobacter aerogenes
13
8
61,53%

Para la tabla anterior (Tabla 2) se asign 1 punto por coincidencia con la gua y 0 si no haba relacin. El porcentaje
de identidad se calcul como PO/PM.

Para el test API 10S correspondiente al anexo del prctico 3 aplicado a la muestra problema 8,
los resultados fueron los siguientes.
Tabla 3: Resultados del test API 10S para muestra problema 8.

Test
ONPG
GLU
ARA

Numeracin Reaccin
1
+
2
+
4
+

Total

Identidad
Certeza
K. pneumoniae 96,70%

LDC
ODC
CIT

1
2
4

+
+

H2S
URE
TDA

1
2
4

+
-

IND
OX
NO2

1
2
4

Se presentan los resultados para cada una de las pruebas (+: positivo, - : negativo) y adems se indica el porcentaje
de certeza que otorga el anlisis computacional del test junto con el M.O. de mayor similitud.

Las descripciones de placas de lisis del prctico n 4 se detallan en la siguiente tabla.

Tabla 4: Observaciones sobre placas de lisis con fagos P22 y H5.

Fago
P22
H5

Observaciones
Presencia de espacios circulares translucidos. Crculos irregulares y pequeos.
Son crculos grandes e irregulares con una argolla a su alrededor.

Observaciones macroscpicas que se realizaron sobre las placas de lisis entregadas por los ayudantes.

Las observaciones para las siembras en placa verde de fagos del prctico n 4 luego de su
cultivo se detalla en la siguiente tabla.
Tabla 5: Observaciones macroscpicas sobre fagos en placas verdes.

Fago

Observaciones

Colonias oscurecidas y no se aprecia

P22 en placa verde desarrollo en el zigzagueo realizado.
Colonias oscurecidas y no se aprecia
desarrollo en el zigzagueo Colonias
oscurecidas, sin embargo presentan
coloracin ms clara que placa verde
H5 en placa verde con p22
Se anotaron las observaciones examinando las placas a contraluz y de forma completa luego de su incubacin.

Para la concentracin de fagos se utiliz la formacin de placas de lisis por los fagos del
prctico n 4 y su observacin se detalla en la siguiente tabla.
Tabla 6: Observaciones sobre placas de lisis por fagos sembrados.

Placas de lisis
0

Concentracin del fago

Desconocida

Observaciones
Color opaco, no hubo
crecimiento del fago.

La observacin fue de carcter macroscpico y el 0 corresponde a que no se evidencia lisis en la placa.

En las siguientes tablas se detalla lo observado para las placas con antibiticos y sus
correspondientes siembras del prctico n 4.
Tabla 7: movilizacin plasmidos por conjugacin.

Placa
Placa LB Kanamicina-Ampicilina 3 cuadrantes
Placa LB Kanamicina-Ampicilina en todo
volumen

Observaciones
Creci slo Salmonella 2C
No se observa crecimiento de ningn M.O.

La observacin macroscpica se realiz tomando en cuenta todos los ngulos de la placa.

Tabla 8: transduccin de plasmidos.

Placa
Siembra zig-zag LB Ampicilina
Siembra csped LB Ampicilina en todo volumen

Observaciones
Punto rosado-amarillo y no hubo crecimiento
de todo el cultivo.
No hubo crecimiento de ningn M.O.

La observacin macroscpica se realiz tomando en cuenta todos los ngulos de la placa.

Tabla 9: Mutagnesis usando fagos como transposones.

Placa

Observaciones

McConkey Kanamicina en zigzag

Crecimiento de colonia rosada de Salmonella

WT
No hubo crecimiento de ningn M.O.

McConkey Kanamicina en csped todo

volumen

La observacin macroscpica se realiz tomando en cuenta todos los ngulos de la placa.

En las tablas a continuacin se detallan las caractersticas macroscpicas observadas para los
distintos cultivos de hongos y levaduras del prctico n 5.
Tabla 10: Observaciones macroscpicas para levaduras.

Hongo

Forma

Elevacin

Borde

Superficie

Otros

C. albicans

Circular

Liso

Liso

C. neoformans

Circular

Levantadaconvexa
Pulvinada

Liso

Liso

Rhodotorula

Circular

Pulvinada

Liso

Liso

Color
lechoso
Color
lechoso
Color
rosado

Se realiz el anlisis macroscpico inspeccionando la placa por completo y a contraluz.

Tabla 11: Observaciones macroscpicas para hongos filamentosos

Hongo
Mucor

Caractersticas macroscpicas
Algodonado, opaco con fibras brillantes.
Presenta color lechoso y crecimiento en
toda la placa llenndola de fibras.

Aspergillus niger

La base del hongo presenta un relieve

irregular. En la parte superior de la placa se
aprecian pelos de coloracin negra,
estando algunos pegados a la base.

P. notatum

En su base presenta mucho relieve, en

forma de ptalos de flor. En la superficie de
la placa se puede apreciar bordes blancos
y zona cntrica de color verde azulado con
algunas estras.

Se realiz el anlisis macroscpico inspeccionando la placa por completo y a contraluz.

10

En las siguientes tablas se detallan las observaciones microscpicas de levaduras y hongos

filamentosos correspondientes al prctico n5.
Tabla 12: Evaluacin microscpica de levaduras con tincin Gram

Organismo sometido a tincin

Gram
C. albicans

Rhodotorula

C. neoformans

Observaciones
Agrupaciones celulares en racimo
que presentan una coloracin
violeta y en general cada unidad
es de tamao similar.
Se aprecian ms separadas y en
agrupaciones pequeas en
comparacin a la C. albicans. Su
coloracin es rojiza.
Hay gran presencia y no se puede
distinguir una agrupacin en algn
patrn especfico, todas tienen
tamaos similares y aparecen de
color violeta.

Se realiz una tincin Gram y luego se observ con objetivo 100x en inmersin.
Tabla 13: Observaciones microscpicas de levaduras con examen al fresco

Organismo sometido a examen al

fresco
C. albicans

Rhodotorula

C. neoformans

Observaciones
Abundante presencia y no se
aprecia un patrn marcado. Son
blancas en relacin al fondo azul
del marcaje.
Son unidades pequeas y
abundantes, un poco ms opacas
en comparacin a C. albicans y el
fondo azulado.
Unidades similares sin agrupacin
particular ms que un desorden
aleatorio. Son de color verdoso en
comparacin con el fondo
azulado.

Se realiz el examen al fresco con azul de lactofenol y luego se observ con objetivo 40x.

Tabla 14: Examen al fresco de cpsula de C. neoformans.

Organismo
C. neoformans

Observaciones
En general se nota una agrupacin de cocos
y diplococos y es evidente la presencia de
una cpsula central en cada unidad. No se
reconoce otro patrn de agrupacin mayor
que no sea racimo.

El examen al fresco se realiz con tinta china y se observ con objetivo 40x.

11

En la siguiente tabla se detallan las observaciones de importancia para reconocer estructuras

que producen esporas en los hongos filamentosos disponibles del prctico n5.

Tabla 15: Examen al fresco de hongos para identificacin de estructuras que producen esporas.

M.O. sometido a examen

Mucor

A. niger

P. notatum

Observaciones
Se nota una estructura filamentosa sifonada
pues no presenta tabiques en las
ramificaciones. Tambin es posible identificar
el esporangiforo con su correspondiente
esporangio notoriamente ms oscuro que el
cuerpo del hongo.
Se observa la estructura separada de las
ramificaciones en forma de tabique, adems
se aprecia la cabeza aspergilar ms oscura
conectada al resto del cuerpo del hongo
mediante el conidiforo.
Se aprecia la estructura separada mediante
tabiques dentro de los filamentos del hongo,
que a travs de otra subdivisin con el
conidiforo dan origen a los conidios que
muestran ramificaciones ms pequeas.

Las observaciones se realizaron bajo microscopio con objetivo de 40x.

12

Discusin
Con respecto a la parte del prctico anexo 3, partiendo de la base que el M.O. de la muestra
problema 8 pudiese ser K. pneumoniae de acuerdo a los resultados mostrados en las tablas 2 y
3 se puede afirmar sobre la batera bioqumica convencional que para el test de glucosa presenta
un resultado positivo ya que este M.O. es capaz de fermentar glucosa (20) y en su proceso hay
formacin de gas. De manera anloga, la K. pneumoniae es capaz de fermentar el manitol (20)
en el medio de cultivo del agar dando un resultado positivo a esta prueba.
Con respecto a la prueba del citrato, tambin el resultado es positivo pues K. pneumoniae es
efectivamente capaz de utilizarlo como nica fuente de carbono (20) en el tipo de agar en que se
cultiv. En cuanto a la prueba del caldo urea, esta dio positivo pero es posible que diera este
resultado porque la K. pneumoniae es considerada como positivo dbil (21) o negativo para esta
prueba y se hace cada vez ms positiva a medida que pasa el tiempo, como en este caso que la
incubacin fue de dos semanas.
En cuanto a la prueba del caldo corriente utilizando reactivo de Kovacs, donde se obtuvo un
resultado negativo, concuerda con el comportamiento de la K. pneumoniae pues esta no es capaz
de producir Indol (20) a partir del triptfano. Para la prueba de Voges-Proskauer si bien se
considera esta prueba ideal para separar E.coli de K. pneumoniae cuando se trata de un cultivo
puro como el de la muestra problema se puede afirmar que al ser negativo solo estara siendo
parte de una de estas dos bacterias, es decir, del gnero Klebsiella y especficamente en este
caso de K. pneumoniae subesp. Ozaenae (22).
Sobre la prueba en agar corriente de pigmentacin donde no se presenta resultado, esto debido
a que morfolgicamente este tipo de M.O. no presenta pigmentacin o presenta muy poca (23)
en agar normal. En relacin a la respuesta presentada en el agar TSI, se puede afirmar que el
resultado positivo se debe a que K. pneumoniae es capaz de fermentar los tres azcares (24)
que se contienen en la prueba dando como resultado el viraje amarillo-amarillo de la superficie y
la profundidad. En cuanto a la Descarboxilacin de la lisina, que da resultado positivo en el agar
LIA se condice con el comportamiento de K.pneumoniae (25). En relacin a la motilidad de la
bacteria, que no es apreciada en el agar MIO se puede decir que tambin coincide con lo
documentado en K. pneumoniae (26). Por ltimo, la produccin de H2S es negativa tal como lo
sera para un tipo de bacteria K. pneumoniae (27).
Con respecto a las pruebas realizadas en el test API 10S cuyos resultados se encuentran en la
Tabla 3, se puede discutir lo siguiente en relacin a las pruebas que no se consideran en la
batera bioqumica convencional. El test de ONPG da resultado negativo y esto demostrara que
la bacteria no es capaz de producir la enzima -galactosidasa, hecho que concuerda con las
caractersticas de K. pneumoniae (28).
En cuanto a los tests de GLU y ARA, estos dan positivo ya que la K. pneumoniae puede
efectivamente fermentar/oxidar la glucosa y la arabinosa (29). El test LDC presenta un resultado
positivo y el ODC presenta resultado negativo que se relaciona completamente con el
metabolismo de la K. pneumoniae ya que esta en todo su gnero excepto K. mobilis, puede
producir lisina descarboxilasa pero no ornitina descarboxilasa (30).

13

Los tests de CIT y H2S dan resultado positivo y negativo respectivamente ya que K. pneumoniae
si puede utilizar el citrato como nica fuente de carbono (20) y no puede producir H2S (27). La
prueba para URE es positiva aunque K. pneumoniae se considera como un productor de ureasa
bastante dbil (31), esto podra deberse a que se trate de una subespecie o cepa particular que
sea capaz de producir esta enzima en mayores cantidades. El test de IND es el nico que no se
condice con el comportamiento de la K. pneumoniae, que debera ser positivo (32) pero da
negativo porque pudo haber un problema con la utilizacin del reactivo de james al interpretar
mal la reaccin.
Cabe destacar que tambin la muestra 8 es la ms relacionada en la batera convencional con
un porcentaje de certeza de identidad de un 79,60%, que junto con el 96,70% otorgado por el API
10S dan seguridad para afirmar que sta se tratara de K. pneumoniae.
En cuanto a los resultados obtenidos para el prctico n4 se pueden analizar las tablas y explicar
lo ocurrido de la siguiente manera. Para la Tabla 4 se puede afirmar que la presencia de espacios
circulares translcidos se debe a que el fago P22 es capaz de inducir el ciclo ltico en el M.O.
presente en la placa que debera ser S. typhimurium sufriendo un proceso de transduccin
generalizada (33). Lo anterior hace suponer que el fago H5 no sera del tipo ltico pues su efecto
debe haber sido ms lento por el menor grado de lisis presente en la placa dando razn a que
este es un fago producto de una mutacin en el fago P22 que le confiere la capacidad de ser
lisognico (34).
Sobre la Tabla 5 es posible discutir que la poca diferencia entre las placas verdes en cuanto a la
opacidad del zigzagueo se podra deber a que el tiempo que transcurri desde que se cultivaron
las placas hasta que se examinaron fue suficiente para que los ciclos de ambos fagos (P22, ltico
y H5, lisognico) (34) alcanzaran niveles de lisis similares y no se pudiese encontrar diferencias
significativas reflejadas en la opacidad entre ellos.
La discusin sobre los resultados de la Tabla 6 radica en que la ausencia de cultivo puede
deberse principalmente a una falla de operacin en el momento de la siembra del agar que no
haya permitido el proceso de lisis y por lo tanto no se pudiera efectuar algn tipo de conteo de
fagos. Esta falla podra haber sido el hecho de mezclar el agar que se encontraba a 70C con el
fago que tiene una temperatura ptima de 37C (35) constituyendo en una destruccin de ste.
Sobre la Tabla 7 es necesario recalcar que solo creci Salmonella 2C y en la placa con todo el
volumen no creci nada, esto sugiere que probablemente haya habido contaminacin (36) del
agar (pues ocurri en la mayora de los grupos) o simplemente ste no contena los antibiticos,
de la misma manera se puede decir que la ausencia del antibitico hace que se pueda apreciar
el resultado de una posible conjugacin.

14

Con respecto a la Tabla 8 se puede inferir que la siembra en csped no fue satisfactoria
probablemente por un error de operacin, pero la que se realiz en zigzag muestra una mancha
que da coloracin Cherry correspondiente a una satisfactoria transmisin del gen de resistencia
a la ampicilina, que en este caso est mediado por el plsmido pUC8 (37).
Para la Tabla 9 cabe discutir que nuevamente en csped no hubo crecimiento probablemente
por algn error de operacin en la siembra o en su cultivo (la placa estaba congelada), pero la
que fue sembrada en zigzag muestra crecimiento de una colonia rosada de Salmonella WT
porque no hubo transferencia del transposn que adems se condice con que la Salmonella WT
sea capaz de fermentar la lactosa en el agar McConkey (38).
En relacin a las observaciones realizadas en el prctico n5 y resumidas en las Tablas 10 a 15
se pueden hacer las siguientes discusiones. Con respecto a la Tabla 10, las observaciones
resultaron satisfactorias ya que los cultivos presentaban caractersticas macroscpicas evidentes
aunque a veces estas coincidan lo que hace suponer que el mtodo de diferenciacin
macroscpico (39) es muy rudimentario en cuanto a levaduras.
Para la Tabla 11, se puede afirmar que las observaciones realizadas corresponden a un anlisis
satisfactorio pues coinciden con lo presupuestado para cada uno de los hongos filamentosos y
su caracterizacin macroscpica (40) es ms acertada en comparacin a la de las levaduras. En
cuanto a los resultados de las Tablas 12 y 13 conviene rescatar el uso de la tincin Gram para
hongos en cuanto a su mejor visualizacin, hacindolos parecer en su mayora Gram positivos
(41). El azul de lactofenol tiene como propsito hacer de medio de un contraste para poder tener
una mejor perspectiva de los hongos (42).
En la Tabla 14 se ve que la tincin de cpsula con tinta china permiti apreciar la cpsula (43)
del C. neoformans de manera satisfactoria y sirvi como medio de contraste. Finalmente, en la
Tabla 15 se pudieron apreciar los rganos productores de esporas de los M.O. P. notatum, Mucor
y A. niger tal como se describen en la literatura (44) sin tener ningn tipo de problema.

Conclusiones
Con respecto al objetivo 1: Se logr reconocer efectivamente la muestra problema entregada con
un porcentaje de certeza de un mximo de 96,7% y mnimo de 76,90% mediante el test API 10S
y la batera bioqumica convencional. La muestra problema n8 correspondera a K. pneumoniae.
Con respecto al objetivo 2: Se pudo apreciar efectivamente en ciertos casos la evidencia de
adquisicin de material gentico en bacterias.
Con respecto al objetivo 3: Se pudo evidenciar y describir todos los tipos de hongos y levaduras
disponibles de manera efectiva y satisfactoria.

15

Referencias bibliogrficas
1) Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica, MacFaddin J.,
3 Ed., Ed. Panamericana, Ao 2003, Pg. 194.
2) Microbiologa basada en la experimentacin, Gamazo, C., 2 Ed, Ed. Elsevier, Ao 2013,
Pg. 211.
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6) Gentica y genmica, de Frutos, R. 1 Ed, Ed. Universitat de valencia, Ao 2001, Pg. 22.
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8) Ref. 4. Pg. 143.
9) Microbiologa, Stanier, R., 2 Ed., Ed. Revert, Ao 1992, Pg. 276
10) Biologa I con enfoque en competentes, Oate, L., 1 Ed., Ed. Cengage. , Ao 2010, Pg.
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11) Ref. 9 Pg. 578.
12) Biologa y botnica tomo II, Santamarina M.P., 1 Ed., Ed. Universidad politcnica de
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13) Biotecnologa alimentaria , Garca, M., 5 Ed., Ed. Limusa, Ao 2004, pg. 287.
14) Ref. 3. Pg. 58.
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18) Ref. 3. Pgs. 33 35.
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25) Koneman. Diagnostico Microbiologico, Konemann, H., 6 Ed., Ed. Panamericana, Ao 2006,
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27) Tcnico Especialista en Laboratorio Del Servicio Gallego de Salud volumen II, Silva M.,
1Ed., Ed. Mad SL. , Ao 2006, Pg. 139.
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31) Introduction to Diagnostic Microbiology for the Laboratory Sciences, Dannessa, M., 1 Ed.,
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34) Davis, R., D. Botstein, and J. Roth. Ao 1980. Advanced Bacterial Genetics, p. 16-18. Cold
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40) Introduccin a la microbiologa, Garca, V., 2 Ed., Ed. EUNED, Ao 2004, Pg. 86.
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