INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR

BEATRIZ CUEVA DE AYORA

TECNOLOGA EN AGROINDUSTRIAS
MICROBIOLOGA

Prctica #2

Tcnicas de microscopa y uso correcto del

microscopio ptico

INTEGRANTES
Cristhian Apolo
Melki Bravo
Diego Olmedo

PROFESORA:
Ing. Dayanna Herrera

OBJETIVOS GENERALES:

Conocimiento del microscopio, sus partes, funcionamiento y cuidado del

mismo.
Desarrollar destrezas para la utilizacin correcta del microscopio
compuesto.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Conocer la utilizacin de cada una de las partes del microscopio para el

funcionamiento correcto del mismo.

Capacitar en la observacin adecuada de muestras y reportar el
microorganismo identificado.

INTRODUCCIN:

Para todo el personal interesado en las ciencias biolgicas es fundamental el

conocimiento y manejo adecuado de equipos de magnificacin como
microscopios simples, compuestos, binoculares, electrnicos, etc.; usados en el
trabajo de campo o en laboratorio de Microbiologa, Biologa o ciencias afines.

Los dos principios fundamentales de la microscopia son el poder de

resolucin y el aumento o magnificacin.

Resolucin.- capacidad que posee un equipo para separar dos objetos

adyacentes, es decir, es la capacidad que tiene un microscopio de poder
distinguir dos objetos que se encuentran muy unidos uno al otro. Esto depende
de varios aspectos como: la longitud de la luz empleada, la densidad del medio
y las aperturas numricas de los lentes empleados en los objetivos y
condensador. Esta apertura numrica, hace referencia a la capacidad que
tienen estos lentes para recibir el cono de luz que pasa a travs de la muestra y
que es proveniente de la fuente. Tenga en cuenta que, mientras menor sea la
distancia que puede medirse entre dos puntos en un campo microscpico,
mayor es el poder de resolucin.

El poder de resolucin (d) de un microscopio se calcula a partir de la siguiente

frmula:

A medida que d es menor, el poder de resolucin de un microscopio es mayor.

Aumento o Magnificacin. El aumento o magnificacin, es la capacidad que

posee un microscopio de amplificar una imagen resuelta en varias veces su
tamao original; esta propiedad es independiente del poder de resolucin de un
microscopio y est ligada con el poder de aumento de los lentes objetivos y
oculares. El aumento de cualquier combinacin de objetivo y ocular es el
producto de los aumentos de estos componentes por separado, es decir,
multiplicando el aumento de cada uno por el valor del otro. Este aumento es
expresado generalmente en dimetros.

MARCO TERICO
MICROSCOPIO
Es un instrumento que permite ver objetos o microorganismos que no son
visibles a simple vista, su funcin es amplificar la imagen que queremos
observar con mayores detalles. El microscopio fue inventado por Zacharias
Janssen en 1590.
Existen distintos microscopios que se diferencian en factores tales como la
longitud de onda de iluminacin, la alteracin fsica de la luz en la muestra por
eso se los clasifica de la siguiente forma:

Microscopio ptico

Microscopio confocal

Microscopio simple

Microscopio electrnico

Microscopio compuesto

Microscopio electrnico de transmisin

Microscopio de luz ultravioleta

Microscopio electrnico de barrido

Microscopio de fluorescencia

Microscopio de iones en campo

Microscopio petrogrfico

Microscopio de sonda de barrido

Microscopio en campo oscuro

Microscopio de efecto tnel

Microscopio de contraste de fase

Microscopio de fuerza atmica

Microscopio de luz polarizada

Microscopio virtual

Partes bsicas y fundamentales del microscopio

Ocular: cerca del ojo del observador. Captura y ampla la imagen

formada en los objetivos.

Objetivos: lentes situadas en el revlver que permiten observar a travs

de los oculares.

Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la

preparacin.

Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.

Foco: enfoca mandando rayo de luz hacia el condensador para luego a

la muestra.

Tubo: es la cmara oscura que porta el ocular y los objetivos.

Revlver: portador de los objetivos de diferentes aumentos que rota

para poder utilizar a los mismos, as tener mayor aumento.

Tornillos macro y micromtrico: Son tornillos de enfoque, mueven la

platina o el tubo hacia arriba y hacia abajo. El macromtrico permite
desplazamientos amplios y el micromtrico permite desplazamientos
muy cortos, para el enfoque ms preciso.

Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que

se coloca el porta objeto con la muestra, que permite el paso de los
rayos de luz. Contiene dos tornillos para mover la preparacin de
adelante hacia atrs o de izquierda a derecha y viceversa.

Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de

enfoque asociados al tubo o a la platina. La unin con la base puede ser
articulada o fija.

Base o pie: Es la parte inferior del microscopio que permite que ste se
mantenga firme.

Resolucin: Lmite y Poder

En 1866 el fsico y matemtico alemn Ernst Karl Abbe fu invitado por Carl
Zeiss (quien fabricaba y reparaba material ptico, Universidad de Jena) para
que fuera su director de investigacin. All analiz los efectos de la difraccin de
la luz en la formacin de la imagen en el microscopio. Plante una ecuacin
que permite optimizar el diseo de los microscopios (asocindose a Zeiss en
1875).

Definiendo el Lmite de resolucin como la distancia mnima entre dos puntos

para que stos (los puntos) se puedan distinguir como dos puntos. Esto
significa que presenta unidades de distancia, generalmente en nm, que
corresponde a las unidades de la longitud de onda de la luz utilizada.

El Poder de Resolucin (p) de un microscopio se relaciona con el Lmite de

Resolucin (d) de la siguiente manera:

p = 1/d. Se define como la capacidad

del microscopio de distinguir dos puntos separados como tales.

Cmo llegamos a conocer el Lmite de resolucin?
Necesitamos la longitud de onda de la luz utilizada y la Apertura Numrica.

Cmo encontramos la Apertura Numrica?

En el siguiente esquema se encuentra las relaciones entre el lente objetivo,
portaobjeto, aire y la luz que incide.

Se relacionan en la ecuacin:

Alfa es el ngulo FBM o el formado en el MBD. Es decir, la AN vara porque su

ngulo alfa es distinto segn el ndice de refraccin.
Se desea obtener el lmite de resolucin. Para ello se utiliza el lente llamado de
inmersin en dos condiciones distintas: Con y sin aceite de inmersin.
sen = 0,92; n = 1.00 y la = 550 nm?
sen = 0,93; n = 1.52 y la = 550 nm?

CELULAS
La clula es la unidad morfolgica y funcional de todo ser vivo, es el ser vivo de
menor tamao.
Tipos
1. las procariotas:
Arqueas y bacterias
2. las eucariotas:
Animales, vegetales, hongos y protistas

Estructura general de la clula

1. Todas las clulas estn rodeadas de una envoltura.
2. Contienen un medio interno acuoso, llamado citoplasma en la que
se encuentran los organelos, los cuales permiten realizar el
funcionamiento vital de cada clula.
3. Poseen material gentico en forma de ADN, que contiene las
instrucciones para el funcionamiento celular, as como ARN, sirve
para que ell ADN se exprese.
CELULAS VEGETALES

Son eucariticas, auttrofas que presentan una pared celular que evita cambios
de forma y posicin, contienen plastidios que sintetizan y almacenan alimentos,
los ms comunes son los cloroplastos que sintetizan azcares a partir de
dixido de carbono, agua y luz solar, casi todas las clulas vegetales poseen
vacuolas, que transportan y almacenan nutrientes y productos de desecho.
Sus clulas son de forma geomtrica como el hexagonal, esto gracias a la
pared celular.

LOS PROTOZOOS
Tambin llamados protozoarios, son unicelulares, eucariotas, hetertrofos,
depredadores o detritvoros que viven en ambientes hmedos o directamente
en medios acuticos, saladas o aguas dulces; su reproduccin puede ser
asexual por biparticin y tambin sexual por isogametos o por conjugacin
intercambiando material gentico, pertenecen al grupo de los protistas.
Clasificacin
1. Rizpodos o sarcodinos (Rhizopoda) como las amebas
2. Ciliados (Ciliophora) Como el paramecio
3. Flagelados o mastigforos (Mastigophora) como los Metamonada
tienen dos o mltiples flagelos y entre los uniflagelados estn los
coanoflagelados,
4. Esporozoos o Apicomplexa

Glbulos rojos
Los glbulos rojos, hemates o eritrocitos constituyen aproximadamente el 96 %
de los elementos figurados. Su valor normal (conteo) promedio es de alrededor
de 4.800.000 en la mujer, y de aproximadamente 5.400.000 en el varn,
hemates por mm (o microlitro).

Estos corpsculos carecen de ncleo y orgnulos (solamente en mamferos).

Su citoplasma est constituido casi en su totalidad por la hemoglobina, una
protena encargada de transportar oxgeno y contienen tambin algunas
enzimas. El dixido de carbono es transportado en la sangre (libre disuelto 8 %,
como compuestos carbodinmicos 27 %, y como bicarbonato, este ltimo

regula el pH en la sangre). En la membrana plasmtica de los eritrocitos estn

las glucoprotenas (CDs) que definen a los distintos grupos sanguneos y otros
identificadores celulares.

Los eritrocitos tienen forma de disco bicncavo deprimido en el centro. Esta

forma particular aumenta la superficie efectiva de la membrana. Los glbulos
rojos maduros carecen de ncleo, porque lo expulsan en la mdula sea antes
de entrar en el torrente sanguneo (esto no ocurre en aves, anfibios y ciertos
otros animales). Los eritrocitos en humanos adultos se forman en la mdula
sea.

Glbulos blancos
Los glbulos blancos o leucocitos forman parte de los actores celulares
del sistema inmunitario, y son clulas con capacidad migratoria que utilizan la
sangre como vehculo para tener acceso a diferentes partes del cuerpo. Los
leucocitos son los encargados de destruir los agentes infecciosos y las clulas
infectadas, y tambin segregan sustancias protectoras como los anticuerpos,
que combaten a las infecciones.
El conteo normal de leucocitos est dentro de un rango de 4.500 y 11.500
clulas por mm (o microlitro) de sangre, variable segn las condiciones
fisiolgicas (embarazo, estrs, deporte, edad, etc.) y patolgicas (infeccin,
cncer, inmunosupresin, aplasia, etc.). El recuento porcentual de los
diferentes tipos de leucocitos se conoce como "frmula leucocitaria" (ver
Hemograma, ms adelante).
Segn las caractersticas microscpicas de su citoplasma (tintoriales) y su
ncleo (morfologa), se dividen en:

Los granulocitos o clulas polimorfonucleares: son los neutrfilos,

basfilos y eosinfilos; poseen un ncleo polimorfo y numerosos grnulos
en su citoplasma, con tincin diferencial segn los tipos celulares.

Los agranulocitos o clulas monomorfonucleares: son los linfocitos y

los monocitos; carecen de grnulos en el citoplasma y tienen un ncleo
redondeado.

PASOS PARA LA OBSERVACIN DE MUESTRAS BAJO EL

MICROSCOPIO COMPUESTO

Coloque la preparacin a observar (portaobjeto con la muestra), sobre la

platina y sujtela con las pinzas del carro. Compruebe previamente que

el objetivo de menor aumento est en posicin de enfoque.

Realice el enfoque de la muestra, iniciando SIEMPRE por el objetivo de
menor aumento (4x o 5x, dependiendo del fabricante del microscopio),

as:
Gire el tornillo macromtrico para realizar el enfoque grueso de la

preparacin (observacin de la imagen).

Cuando observe la imagen, realice el enfoque fino girando el tornillo

micromtrico, hasta lograr total claridad de la imagen.

Si es necesario, mejore la iluminacin de la preparacin girando la perilla
reguladora de voltaje.

MATERIALES

Microscopio
Lamina portaobjeto y cubreobjetos
Muestra de agua estancada
Cebolla
Bistur
Gotero
Colorante azul de metileno
Palillos
Lanceta
Muestras para valorar: clula animal, vegetal, glbulos blancos y rojos

1.

2.

PROCEDIMIENTOS

3.

Microscopio

Observar las partes del microscopio reconociendo en qu lugar van

ubicadas para su utilizacin

4.

Clulas vegetales

Cortar con el bistur un poco de la epidermis de cebolla.

Colocarla en el porta objetos, aadirle 1 gota de azul de metileno y

cubrirla con el cubre objetos.

Colocar el porta objetos en la platina del microscopio y observar dicha
muestra calibrando el microscopio de acuerdo a la necesidad de
observacin de las estructuras celulares, el cual fue de 4x y 10x.

5.

Protozoos

Recolectar con una micropipeta una pequea cantidad de agua

estancada.
Colocar la muestra sobre el porta objetos y llevarla hacia la platina del
microscopio y observar dicha muestra en 4x.

6.
7.

Valoracin de glbulos blancos y glbulos rojos

Recolectar la muestra de sangre con la lanceta pinchando el dedo medio

Colocar la muestra en el porta objetos y colocar el cubre objetos y
llevarla hacia la platina del microscopio, para observar dicha muestra.

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GRFICOS

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34.

35.

RESULTADOS

36.

Cada una de las partes son fundamentales para una buena observacin
de microorganismos, por tanto los diferentes tipos de microscopios
tienen como mnimo estas partes observadas.

37.
38.

En las clulas del reino plantae (vegetales) se encontr como

caracterstica la pared celular, ligeramente separada de la membrana
celular, tambin contiene ncleo y citoplasma, y son de color verde.

39.
40.

En las clulas del reino protista (paramecio) se encontr que es un ser

vivo unicelular, que realiza movimiento y habita en el agua estancada,
lamentablemente no se pudo observar ms de sus caractersticas ya
que slo se lo observ en 4x de aumento y por tanto no se pudo
reconocer sus ncleos, citoplasma y cilios pero gracias al marco terico,
este microorganismo tiene dichas estructuras.

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50.
51.

CONCLUSIONES

1.

Toda clula vegetal tiene pared celular, cloroplastos, son eucariotas y

multicelulares.

52.
2.

Las clulas vegetales contienen su ncleo en diferente posicin, no

tienen lugar especfico.

53.
3.

Gracias a la observacin se concluye que el ser vivo ms pequeo que

puede haber es una clula.

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RECOMENDACION

1.

En las observaciones hay que ser atentos a ellas, ya que ciertas

manchas po formas no usuales pueden confundir al observador, por
ende diferir de conclusiones de acuerdo al marco terico.

70.
2.

A la hora de trabajar con microorganismo siempre se deben mantener

las normas de asepsia para no ser contaminados por los mismos

71.