Electroforesis en gel de agarosa

La electroforesis es uno de los mtodos de separacin ms utilizados en la

biotecnologa, el cual consiste en la separacin de compuestos de carcter
biolgico, se utiliza una corriente elctrica controlada con el objetivo de
separar las molculas debido a su tamao, carga elctrica o punto isoelctrico
(molecular, 2012). Esta tcnica es utilizada para separar ADN y protenas. El
ADN tiene una carga negativa debida a los grupos fosfato que estn unidos a la
desoxirribosa por lo tanto migraran de un polo negativo (ctodo) a uno positivo
(nodo) debido a la diferencia de cargas. En esta tcnica se utiliza una matriz
porosa en forma de gel, generalmente gel de agarosa o poliacrilamida, la
poliacrilamida es formada por la polimerizacin de la acrilamida, es
qumicamente inerte e insoluble en agua, tiene la ventaja de que variando la
concentracin del polmero se puede modificar el tamao de poro (javeriana,
2003). La agarosa es un polisacrido obtenido de algas el cual tiene la
propiedad fsica de ser liquido arriba de los 50 grados Celsius y formar un gel al
momento de enfriarse, este gel est constituido por una matriz o trama
tridimensional de fibras polimricas embebida en gran cantidad de medio
lquido, que retarda el paso de las molculas (javeriana, 2003). La porosidad en
los geles es una propiedad importante, ya que los poros funcionan como una
malla, por lo cual al migrar el ADN al nodo, las partculas de menor tamao
podrn migrar con facilidad, mientras que las molculas de mayor tamao
quedaran cerca del lugar de partida. Se utiliza como solvente una solucin
buffer, esto con la finalidad de que la conductividad elctrica sea favorable y se
utiliza un pH neutro para garantizar que se conserve la carga negativa del ADN.
La electroforesis puede ser afectada por errores experimentales como la
temperatura durante la polimerizacin y la corrida del gel, velocidad de la
polimerizacin, niveles de catalizador, pureza del reactivo, tiempo de corrida y
preparacin de las muestras (javeriana, 2003).
Discusin de resultados
Al colocar el gel de agarosa en el espectro UV se pudieron observar tres
diferentes marcas de ADN, la segunda y tercera de izquierda a derecha
pertenecen al marcador de ADN (ladder) con colorante, el cual presenta
diferentes bandas a lo largo del gel, este marcador sirve como referencia para
saber el tamao de banda de ADN muestra que estamos analizando, el
marcador ladder contiene 11 fragmentos de ADN en un rango de 100 a 3000
bp, diferencindose por tamaos, las bandas ms cortas se encontraran en los
extremos del gel, mientras que las ms grandes estarn a pocos centmetros
del punto de inicio. La primera banda de izquierda a derecha corresponde al
ADN genmico que se extrajo anteriormente, este se encuentra a pocos
centmetros del punto de partida, esto se debe a que al ser un ADN genmica
este es muy grande y pesado, por lo tanto no puede migrar relativamente a
gran distancia en el gel de agarosa.