Curso de Inmunologa General Laboratorio

Introduccin a la inmunologa celular

Semestre 2015-1

EJERCICIO EXPERIMENTAL 5
Reacciones febriles
OBJETIVO
Determinar el titulo de anticuerpos contra diferentes antgenos bacterianos de una
muestra problema.
CMO?
A travs de la Reaccin de Widal, Huddlesson y Weil-Felix.
INTRODUCCIN:
La aglutinacin de una bacteria por un suero inmune especfico resulta de la
presencia de anticuerpos dirigidos contra los antgenos de la superficie bacteriana,
presentes en la cpsula, flagelos o pared. Estas reacciones son usadas para
estudios de composicin de antgenos bacterianos, para diagnosticar
enfermedades infecciosas buscando al agente causal, y para taxonoma en la
clasificacin de microorganismos.
El diagnstico de cuadros infecciosos se puede realizar mediante el hallazgo de
anticuerpos especficos en el suero de los pacientes contra una determinada
bacteria, as como seguir la evolucin del proceso en casos en que tenga
correlacin el ttulo de anticuerpos con el cuadro clnico; las mejores aplicaciones
de este caso son las reacciones febriles, utilizadas para el diagnstico y pronstico
de enfermedades causadas por bacterias de diversas especies, tal es el caso de
la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, as como las paratifoideas
causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo causado por el genero Rickettsias. En
donde el proceso infeccioso cursa con una elevacin marcada en la temperatura,
entre otros sntomas inespecficos.
La infeccin por estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo
humoral con la produccin de anticuerpos que pueden ser detectados con el
antgeno especfico, como sucede en la fiebre tifoidea causada por Salmonella
9,12,d,Vi (serotipo Typhj) "O" Y "H" (reaccin de Widal), la fiebre paratifoidea
causada por S. paratyphi A y B, la fiebre de malta o fiebre ondulante causada por
B. abortus, B. melitensis y B. Suis, (reaccin de Huddlesson) y la fiebre de tifo
causada por Rickettsia prowaseki (reaccin de Weil-Flix), en esta ltima se utiliza
como Ag a Proteus OX-19, OX-2 u OX-K ya que poseen determinantes
antignicos glucolpidos comunes con Rickettsia.
MATERIAL:
1. Placa de vidrio de 20 por 30 cm.
2. Antgenos febriles
3. Micropipetas de 10 I, 25 I y 5 I.
4. Aplicadores
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5. 500 L de suero problema o control positivo
METODOLOGIA:
1. Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antgeno que se
este usando. NOTA: El reactivo as como los sueros, deben alcanzar la temperatura
ambiente para comenzar la prueba.

2. Poner 0.04 mI del suero problema para cada uno de los antgenos que se
vayan a usar. (EL SUERO DEBE ESTAR TOTALMENTE CLARO).
3. Agitar el antgeno a utilizar para tener una suspensin uniforme.
4.
cantidades de suero. El gotero incluido proporciona una gota de 305. Mezclar el antgeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada
una de las cantidades de suero.
6. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecnico (120 rpm)
durante 2 minutos.
7. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la
aglutinacin macroscpica.
8. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
Suero control negativo: Suero de conejo el cual no ha sido inmunizado contra ningn
antgeno, por lo que no muestra ninguna aglutinacin con los antgenos en suspensin.
Suero Control Positivo: Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los
antgenos febriles en una suspensin

9. Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones, las cuales
se muestran en la tabla siguiente:
Mililitros del suero
0.08
0.04
0.02
0.01
0.005

Dilucin
1 :20
1:40
1 :80
1 :160
1 :320

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

El grado de aglutinacin se registra como sigue:
4+ Aglutinacin del 100% de los microorganismos
3+ Aglutinacin del 75% de los microorganismos
2+ Aglutinacin del 50% de los microorganismos
1+ Aglutinacin del 25% de los microorganismos
- Aglutinacin del 0% de los microorganismos
El titulo del suero ser la inversa de la dilucin ms alta en donde se observa una
aglutinacin del 50% de microorganismos (2+)
Registrar el ttulo del suero en el cual la ultima dilucin de una aglutinacin sea 2+.
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LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero
esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infeccin anterior. No siempre se
presenta produccin de aglutininas en infecciones bacterianas.
2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones
para ciertas enfermedades. La vacuna tfica puede producir aglutininas contra
antgenos Proteus.
3. En la reaccin de Huddleson, ttulos de 1:80 pueden considerarse ya de
significado clnico.
Nota: El diagnstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el laboratorio clnico
y el mdico, ya que la elevacin del ttulo en la muestra de suero con sintomatologa reciente y la
muestra de suero en fase convaleciente indicar la exactitud del diagnstico.

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