UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE

OAXACA
Facultad de Ciencias Qumicas
Asignatura: Fitoqumica
Evaluacin Fitoqumica de la Especie:

Bouvardia ternifolia
Titular: M.C. Elizabeth Escobar Chvez
Alumnos:
Cruz Hernndez Diego Sait
Patricio Jimnez Vctor Eduardo
Ros Ros William de Jess
Ruiz Ros Brbara Grisel
Zrate Ramos Rosa Andrea

7mo Semestre

Grupo: A

Ciclo Escolar: 2014 2015

}

Enero de 2015, Oaxaca de Jurez; Oaxaca

Fitoqumica. Facultad Ciencias Qumicas- UABJO

NDICE
1.
2.

INTRODUCCIN. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
OBJETIVOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
2.1 General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4
2.2 Especficos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4
3. MARCO TERICO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
3.1 Antecedentes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
3.2 Generalidades. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
3.2.1 Localizacin del lugar de muestreo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
3.2.2 Especie recolectada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
3.3 Marco Referencial. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
3.3.1 Colecta y Herborizacin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
3.3.2 Diafanizado. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
3.3.3 Separacin de pigmentos vegetales por cromatografa en columna. . . . . . . . . . . . . 9
3.3.4 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en drogas en polvo. . . . . . . . . . . . 10
3.3.5 Extraccin selectiva de componentes en un material vegetal con diferentes
disolventes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
4. MARCO METODOLGICO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
4.1 Colecta y Herborizacin de las plantas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11
4.2 Diafanizado. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
4.3 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en droga en polvo. . . . . . . . . . . . . . . . . 12
4.4 Separacin de compuestos vegetales por cromatografa en columna. . . . . . . . . . . . . . . 12
4.5 Extraccin selectiva de componente en un material vegetal con diferentes disolventes. . . .13
4.5.1 Fraccin A. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
4.5.2 Fraccin B. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
4.5.3 Fraccin C. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
4.5.4 Fraccin D. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
4.5.5 Fraccin E. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
4.6 Determinacin de metabolitos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
4.7 Determinacin de saponinas, Cumarina y aminocidos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
4.7.1 Saponinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
4.7.2 Protenas-Aminogrupos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15
4.7.3 Reconocimiento de cumarinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
5. RESULTADOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
5.1 Colecta y Herborizacin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
5.2 Diafanizado. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
5.3 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en droga en polvo. . . . . . . . . . . . . . . . . 16
5.4 Separacin de compuestos vegetales por cromatografa en columna. . . . . . . . . . . . . . . 17
5.5 Extraccin selectiva de componente en un material vegetal con diferentes disolventes. . . .18
5.6 Determinacin de metabolitos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
5.6.1 Fraccin A. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
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5.6.2 Fraccin B. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
5.6.3 Fraccin C. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
5.6.4 Fraccin D. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
5.6.5 Fraccin E. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
5.7 Determinacin de saponinas, Protenas-Aminogrupos y Cumarinas. . . . . . . . . . . . . . . .21
6. CONCLUSIONES. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
7. GLOSARIO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23
8. ANEXOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
9. REFERENCIAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36

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1. INTRODUCCIN
La herbolaria, conocida tambin como medicina alternativa, es una tradicin mdica muy
antigua, basada en el uso de plantas

y hierbas para prevenir y curar enfermedades,

la

Organizacin Mundial de la Salud (OMS) reconoce su efectividad al incluirla en los esquemas

pblicos de salud.
La tradicin herbolaria es el conocimiento de las propiedades curativas de las plantas en
Mxico ha sido y sigue siendo un recurso para buscar la cura a las enfermedades ms comunes.
Nuestro pas ha sido geogrficamente privilegiado, ya que posee una de las floras ms ricas en el
planeta. Y su herbolaria se ha enriquecido por la observacin y paciencia de los pueblos que
durante siglos, han buscado su poder en la curacin. Todos los pueblos del mundo han usado las
plantas medicinales para atender sus problemas de salud y una gran mayora, siguen haciendo uso
de ellas actualmente. Los mdicos tradicionales y sus plantas medicinales han dejado de ser
calificados negativamente y comienzan a establecerse programas y proyectos para la
investigacin, aplicacin e industrializacin de los productos.
La Herbolaria Mexicana es muy variada y antigua, los indgenas mexicanos la utilizaban y lo
siguen haciendo hasta nuestros das. La importancia y relevancia de las plantas medicinales en
Mxico es conocida a nivel mundial. Desde tiempos antiguos la naturaleza ha sido la fuente de
recursos ms valiosa que el ser humano ha tenido a su disposicin, le ha proporcionado no solo
alimento sino que adems, le ha ayudado a recuperar o mantener su salud.
El hombre primitivo empez a utilizar las hojas, races, frutos y semillas de las plantas, probando
y experimentando, sin saber para qu servan ni cmo funcionaban, pero aprendiendo de sus
experiencias y trasmitiendo ese conocimiento de generacin en generacin. Hoy tenemos acceso a
diferentes fuentes de informacin y contamos tambin con estudios que confirman como las
plantas adems de servir de alimento nos pueden ayudar a mejorar nuestra salud.
Cada planta posee un aroma caracterstico, un grupo de propiedades e indicaciones en la que
puede ser utilizada. Los aceites esenciales obtenidos de diferentes plantas han sido usados para
propsitos teraputicos desde hace cientos de aos. Chinos, hindes, egipcios, griegos y romanos
usaron los aceites esenciales en medicinas, cosmticos y perfumes.

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2. OBJETIVOS
2.1 Objetivo general

Llevar a cabo la identificacin de la especie recolectada, as como sus propiedades

fitoqumicas; mediante las pruebas qumicas, pruebas estructurales macroscpicas y
microscpicas.

2.2 Objetivos especficos

Colecta y herborizacin
Desarrollar una coleccin de plantas con el objetivo de emplearlas como material didctico.
Desarrollar la tcnica de colecta y herborizacin, llevando a cabo el proceso de prensado,
secado, identificacin, etiquetado y encamisado; para su entrada al herbario.
Diafanizado
Desarrollar la tcnica de Dizeo de Strittmater (diafanizado) permitiendo la clarificacin del
material vegetal para el grado de resolucin en la identificacin y caracterizacin de la
especie de la planta.
Separacin de pigmentos vegetales por cromatografa en columna:
Familiarizarse con las tcnicas ms comunes que existen para preparar una columna
cromatografa, la tcnica de elusin y recoleccin de fracciones.
Obtener destreza en separar componentes de una muestra vegetal.
Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en drogas en polvo:
Reconocer una droga vegetal a travs de una marcha que involucre pruebas microscpicas.
Realizar pruebas de identificacin de estomas, tricomas, oxalato de calcio, carbonato de
calcio y almidn.
Extraccin selectiva de componentes en un material vegetal con diferentes disolventes:
Aplicar una marcha sistemtica y establecer los principales grupos fitoqumicos presentes.
Obtener un extracto total (crudo o bruto) del material vegetal seco y molido.
Fraccionar el extracto total para su posterior anlisis qumico.

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3. MARCO TERICO
3.1 Antecedentes
En el siglo XVI, Bernardino de Sahagn refiere: se usa como antipirtico, posteriormente,
Francisco Hernndez comenta: dado que la naturaleza de esta planta es caliente, seca y
astringente, se administra en los que sufren cansancio, ya que los fortalece y reanima; de igual
modo el polvo de las races cura eficazmente las llagas antiguas, encontrndose ms informacin
hasta el siglo XX en Maximino Martnez, que indica que es antidisentrico, antiespasmdico,
antirrbico, antitusgeno, para calor de corazn, estimulante y en hematemesis.
En sus estudios fitoqumicos realizados, se han aislado de las partes areas de esta planta
componentes peptdicos como el bouvardn que es un hexapptido cclico, formado por 2 Lalaninas, una D-alanina y 3 N-metil-L-tirosinas modificadas, adempas posee un anillo formado por
el acoplamiento oxidativo del oxgeno fenlico de una tirosina por el carbono orto del grupo
hidroxil fenlico de una tirosina adyacente (Jolad et al 1997) adems de los derivados desoxi y
metilados (Shivanand et al., 1997). En la su raz existe una elevada concentracin de los cidos
urslico y oleanlico (Prez et al.- 1998.), los cuales poseen actividades antiinflamatorias,
analgsicas, sedantes, hepatoprotectoras y sobretodo de inhibicin de la enzima acetil
colinesterasa (Chung et al., 2001; Jimpenez- Ferrer et al., 2015 (este ltimo utilizado como
tratamiento para contrarrestar la prdida progresiva de la memoria: Alzheimer).
Estudios farmacolgicos comprueban que el extracto metablico de las partes areas
presentan actividad antitumoral y citotxica; mediante una evaluacin en ratn administrados por
va intraperitoneal. La actividad citotxica fue observada en clulas tumorales de carcinoma in
vitro a una concentracin de 20 g/ml (Argueta, 1994). Los extractos hexnico y metanlico
presentaron efecto inhibitorio de la accin txica del veneno de Centruroides limpidus limpidus en
ratones (Jimnez- Ferrer et al., 2005). Se demostr en estudios preliminares que el Bouvardn
tiene alta efectividad contra la leucemis P388 y es ligeramente activo contra el melanoma B16.
Como antitumoral inhibe de la sntesis de protenas (Johnson et al., 1978). Adems tien un elevado
efecto contra el ciclo de divisin celular en el cultivo de clulas de Hmster Chino (Tobey et al.,
1978)

3.2 Generalidades
3.2.1 Localizacin del lugar de muestreo
Municipio de Ixtln de Jurez.
El lugar que se elijio para llevar a cabo la recoleccion de la planta a identificar fue el minicipio
de Ixtln de Jurez en el centro ecoturstico denominado Ecoturixtln que pertenece a este
municipo, el cual se encuentra aproximadamente a 3.1 km de distancia del centro de este
minucipio y aproximadamente a 2.5 km de distancia de la localidad de capilalpan de mendez. Es
sitio exacto donde se llevo a cabo la recoleccion tiene las siguentes coordenadas: latitud
1719'46.15"N y longitud 9627'27.04"O.

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Fig 1. Localizacin geografa del lugar de muestreo. Cortesa Google earth

El lugar de recoleccin se encuentra a unos 500 metros de la entrada del centro ecoturstico
ECOTURIXTLN

Fig 2. Lugar de entrada al sitio de muestre; Ecoturixtlan. Cortesa Google earth

El municipio de Ixtln de Jurez se encuentra hacia el noroeste de la cuidad de Oaxaca de

Jurez que es la cudidad capital (ruta en color rojo) aproximadamente a 39 km de distancia; el sitio
elejido para la recoleccion de igual manera se encuentra hacia el noroeste de la ciudad capital en
el centro ecoturstIco ECOTURIXTLN (ruta amarilla) aproximadamente a 41.3 km de distancia.

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Fig 3. Distancia entre el la capital Oaxaca de Jurez y el sitio de muestreo Ecoturixtlan. Cortesa Google earth

3.2.2 Especie Recolectada

Bouvardia ternifolia

Reino: Plantae
Subreino: Traqueobionta (plantas vasculares)
Superdivisin: Spermatophyta (plantas con semillas)
Divisin: Magnoliophyta (plantas con flor)
Clase: Magnoliopsida (dicotiledneas)
Subclase: Asteridae
Orden: Rubiales
Familia: Rubiaceae
Gnero: Bouvardia
Especie: Bouvardia ternifolia

Fig 4. Especie recolectada; Bouvardia

ternifolia. Cortesa de www.Conabio.gob

Descripcin
Es una planta herbcea, que llega a alcanzar los 3 m de altura, en el tallo y ramos hay presencia
de pelos blancos y cortos, sus hojas pueden ser de forma linear, lanceoladas o elpticas pero en la
mayora de los casos son de forma elptico-lanceoladas, llegan a medir de 1 a 10 cm de largo y 0.2
a 2.5 cm de ancho, tienen un pice agudo, base cuneiforme, nervacin pinnada y comnmente
verticiladas, en nmero de 3 a 4 por nodo, los peciolos miden entre 0.5 y 11 mm de largo, su
inflorescencia se encuentra de la parte terminal de las ramas en nmero de 3 a 40, con pedicelos
de 2 a 14 mm de largo. Las flores tienen corola de forma tubular de color salmn, rojo o naranja,
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en raras ocasiones de color blanco, el tubo mide de 5 a 30 mm de largo, con un anillo velloso
interno hacia la base, sus anteras miden de largo entre 2 y 4 mm, los lbulos de cliz son de forma
lanceolada o lineares con una longitud de 2 a 10 mm. . El fruto es una cpsula de 4.5 a 9mm de
largo y de 5 a 10 mm de ancho sin pelos; sus semillas miden de 2 a 3.5 de ancho (Rzedowski et al.,
2001).
Usos
Es utilizada para problemas del sistema circulatorio y digestivos, infecciones, desrdenes
mentales, nerviosos, inflamacin, problemas en el embarazo, parto, desrdenes del sistema
respiratorio, envenenamientos y dolor, as como para la disentera, rabia, clicos y diarrea,
sangrado, tambin se usa como tnico cardiaco, sus hojas y flores se usan para la erisipela, en
forma de cataplasma o ingerida como infusin es usada contra piquetes de insectos (plantas
completa o semillas). Hervida y tomada como t se usa contra el prurito. (Argueta, 1994; AguilarContreras et al., 1998).
Distribucin geogrfica
Es originaria de Mesoamrica y de Mxico. Se distribuye en zonas de bosque de pino-encino,
pastizales y matorral xerfilo, se le ha encontrado hasta los 300 msnm. En los Estados Unidos de
Amrica se ha localizado en los condados de Texas, Nuevo Mxico y Arizona, en Mxico en los
estados de Chihuahua, Coahuila, Distrito Federal, Durango, Guanajuato, Hidalgo, Estado de
Mxico, Michoacn, Morelos, Nayarit, Nuevo Len, Oaxaca, Puebla, Quertaro, San Lus Potos,
Sinaloa, Sonora, Tamaulipas, Tlaxcala, Veracruz (Villaseor et al., 1998). En Mxico se le conoce
como Donita, nucppuetel, candelilla, doto, en el estado de Sinaloa se le conoce como hierba del
indio, hierba de pasmo, en Coahuila y Durango se le conoce como mirto, Trompetilla, hierba del
burro, mirto de campo (Aguilar-Contreras et al., 1998; Martnez 1979).

3.3 Marco referencial

3.3.1 Colecta y Herborizacin
La palabra herbario originalmente se refera a un libro de plantas medicinales, pero en la
actualidad denota una entidad que maneja una coleccin de ejemplares vegetales en una
secuencia de clasificacin aceptada, que est disponible para su consulta (Lpez y Rosas, 2002).
Los ejemplares contenidos en los herbarios son imprescindibles para la realizacin de estudios
florsticos, ecolgicos, fitogeogrficos y sistemticos.
Para esto debe de llevarse un proceso que consta de puntos importantes, como lo son: colecta,
prensado y secado, montaje, identificacin y etiquetado. Siguiendo pues estos pasos podemos
llegar a tener una especie lista para poder ser ingresada a un herbario
3.3.2 Diafanizado
El mtodo consiste fundamentalmente en la utilizacin de hidrxido de sodio (NaOH) diluido.
Aunque para el estudio de un sistema vascular complicado sean indispensables cortes en serie, la
diafanizacin de las flores en una solucin dbil de NaOH permite su observacin por
transparencia y puede servir, adems, como control de ejemplares seleccionados. (Mtodo
sencillo ideado por los doctores Irving W. Bailey y Charlotte G.) El NaOH no slo restablece la
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forma y tamao originales del material seco, sino que tambin hace desaparecer las inclusiones
celulares que no dejan ver con claridad los haces. Tambin sirve para ablandar el material que
luego podr ser incluido y cortado en serie.
Se puede aplicar a hojas y a flores enteras o parte de flores (spalos, ptalos, carpelos,
estambres, etc.), para ver el sistema vascular y otros detalles. En el caso de las hojas, si son
pequeas pueden tratarse enteras, pero si son grandes conviene cortarlas en trozos transversales.
Se debe controlar el tiempo segn la consistencia de la flor u hojas.
Por lo comn el sistema vascular se ve ms claramente en alcohol por que los ejemplares sin
montar pueden ser fcilmente manejados para examinarlos desde cualquier ngulo. Para obtener
preparaciones definitivas se puede montar el material sin colorear pasndolo por alcohol absoluto
(96%). La claridad de la disposicin de los hacecillos depende del ndice de refraccin del medio y
de la consistencia de los tejidos. La solucin de hidrato cloral se aade con el propsito de
quitarle opacidad. Los doctores Irving W. Bailey y Charlotte G. han credo que la tcnica de
diafanizado ha pasado a ser inadvertida ya que al ser una tcnica sencilla puede ser de utilidad
aadiendo observaciones personales a materiales de herbario.
3.3.3 Separacin de pigmentos vegetales por cromatografa en columna
La cromatografa en columna se emplea en la separacin de mezclas y purificacin de
sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa generalmente, slice o almina
contenida en una columna. El disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o
bien por aplicacin de la presin. El tamao de la columna est determinado por la cantidad de
mezcla a separar. La velocidad a la cual el disolvente fluye a travs de la columna se denomina
velocidad de elusin y es importante en la efectividad de la separacin.
El tiempo que la mezcla a separar permanece en la columna es directamente proporcional a la
magnitud de equilibrio entre la fase mocil y estacionaria. Compuestos similares pueden
eventualmente separarse si permanecen en la columna el tiempo suficiente. El tiempo que una
sustancia permanece en la columna, depende de la velocidad de flujo del disolvente y esta es
afectada en gran medida por el empaquetamiento de la fase estacionaria dentro de la columna y,
en menor medida, por la presin y temperatura del sistema.
Pasos a seguir en una cromatografa en columna:
1. Preparacin de la columna: se mezcla el adsorbente con el disolvente y se vierten en el
interior de la columna. Previamente se coloca en el extremo inferior un trozo de algodn
o lana de vidrio, para evitar que el absorbente se escape por el extremo de la columna.
Existe una gran variedad de absorbentes como son: silica gel, oxido de aluminio, carbn
activado, silicato de magnesio, celulosa, almidn, etc.
2. Siembra de la columna: la muestra, disuelta en el disolvente, se introduce por la parte
superior de la columna y se deposita sobre la superficie del adsorbente. Deber
presentar un aspecto de disco de espesor delgado y uniforme. Si la muestras es lquida se
puede sembrar directamente, si es slida se siembra una solucin concentrada de la
misma es un disolvente adecuado de baja polaridad.
3. Desarrollo/elusin de la muestra: una vez sembrada la muestra se permite el paso de la
fase mvil a travs de la fase estacionaria y se van recogiendo fracciones consecutivas
del eluyente, que sern examinadas posteriormente para determinar su composicin.
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Fig 5. Preparacin de una Columna para CC.

3.3.4 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en drogas en polvo

Los estomas son pequeos poros de las plantas localizadas en la superficie de sus hojas.
Constan de dos grandes clulas de guarda y oclusivas rodeadas de clulas acompaantes. La
separacin que se produce entre las dos clulas de guarda llamada ostiolo regula el tamao total
del poro y, por tanto, la capacidad de intercambio de gases y de prdida de agua de la planta.
Los tricomas son apndices epidrmicos de forma, estructura y funciones muy diversas dentro
de los tricomas se consideran los pelos granulares y protectores, las escamas, diferentes tipos de
papilas, y tambin los pelos radicales.
El carbonato de calcio puede encontrarse impregnado o incrustado en las paredes de las
clulas o como proyecciones de dichas paredes, conocidas como cistolitos. Se encuentra en las
hojas de Cannabis sativa y en plantas de las familias Urticaceae, Moraceae, Cannabinaceae,
Acanthaceae y otras. El carbonato de calcio se identifica por el hecho de que se disuelve con
efervescencia en presencia de cido actico, clorhdrico y sulfrico.
El oxalato de calcio se encuentra en forma de cristales caractersticos de mucha importancia en
el diagnstico para identificar las drogas vegetales; estos cristales se forman a causa del exceso de
oxalato de calcio en las clulas o del exceso del cido oxlico en las clulas. Las formas ms
comunes de oxalato de calcio son: prismas (en hojas de sen, hiosciano, madera de cuasia, races de
glicirrhiza, corteza de cscara sagrada), rosetas (en rizomas de ruibarbo, hojas de estramonio)
agujas (races de ipeca y corteza de canela), rafidios o grupos de agujas (bulbos de escila) y
microcritales o arena.

Fig 6. Diferentes cristales que pueden encontrarse en la

prueba de oxalato de calcio.

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Estos cristales se identifican por su insolubilidad en una solucin de cido actico o de
hidrxido de sodio y su solubilidad sin efervescencia en una solucin de cido clorhdrico.
El almidn tiene una importancia farmacutica considerable. Existe en forma de granos de
varios tamaos en casi todos los organismos de la planta, en especial en las races, rizomas, frutos
y semillas. El almidn se identifica mediante examen microscpico y se confirma por el color azul
que se desarrolla frente a una solucin de lugol. El almidn es un polisacrido vegetal formado por
dos componentes: la amilosa y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo
debido no a una reaccin qumica sino a la adsorcin o fijacin de yodo en la superficie de la
molcula de amilosa. Como reactivo se usa una solucin de Lugol que contiene yodo y yoduro de
potasio.
3.3.5 Extraccin selectiva de componentes en un material vegetal con diferentes disolventes
El estudio fitoqumico de una droga vegetal de la que se conocen usos populares o informacin
de toxicidad, se realizan con la finalidad de aislar y poder identificar los diferentes tipos de
compuestos que en la planta se llegan a biosintetizar (cuales pueden tener o no alguna actividad o
toxicidad); proceso que recibe el nombre, tamizaje fitoqumico, marcha fitoqumica, estudio
fitoqumico sistmico, o screening fitoqumico.
El proceso de screening fitoqumico consiste en poder efectuar una extraccin del material
vegetal que permita obtener la mayor parte de los constituyentes qumicos (extracto total). Por
esta razn es conveniente usar un solvente universal que solubilice la mayora de los compuestos,
siendo los ms usados, el metanol y el etanol. El extracto total se fracciona mediante cambios de
pH y particin con solventes de menor polaridad (generalmente usado el cloroformo), obteniendo
as una serie de fracciones sobre las que se realizaran ensayos, los cuales nos permitirn obtener
datos sobre los grupos fitoqumicos presentes en la muestra vegetal.

4. MARCO METODOLGICO
4.1 Colecta y Herborizacin de las plantas
El primer paso consisti en la colecta de la planta a estudiar, donde para ser considerada,
aparte de la subjetividad por parte d equipo de trabajo, como es la apariencia agradable, se tom
encueta que el sitio deba ser hmedo y que la planta ocupara suficiente rea alrededor del sitio.
Se cortaron 5 ejemplares de manera cuidadosa localizadas en un rea de 1 metro, cuidando que
estuviera en condiciones adecuadas (se excluyeron las plantas maltratadas tanto por predadores
como por el ambiente) y se colocaron por separado entre un pliego de papel peridico, se rotulo el
papel enumerando del 1 al 5, se anot la fecha, la temperatura prxima y habiendo terminado de
rotular colocamos los peridicos entre dos pedazos de cartones con un tamao similar al contorno
de la prensa donde se aseguraron y guardaron los ejemplares para su trasporte, conservacin y
secado antes de realizar los estudios. Tambin se recolectaron de manera arbitraria una gran
cantidad de aproximadamente 200 gramos de los ejemplares, para realizar las extracciones
necesarias. Una vez trasportado las muestras al laboratorio se continu con el secado. Para esto se
sigui el siguiente curso: a) durante los 5 das siguientes a la colecta el peridico fue cambiado
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diariamente y siendo rotulado, registrando la fecha para llevar el curso del secado; b) a partir del
da seis posteriores a la colecta, se cambiaba cada dos das el papel peridico. En este momento la
planta y presentaba mayor sequedad; y pasados 15 despus de la colecta, los ejemplares estaban
completamente secos y ya no se les cambiaron los peridicos.
Una vez seco, montamos una de las plantas sobre cartulina y la sujetamos con hilo de algodn
para fijarlo a la cartulina. Despus de haber montado la planta, etiquetamos con todas sus
caractersticas y propiedades despus de haber hecho todos los estudios correspondientes.

4.2 Diafanizado
Se toman 3 hojas de la planta, cortndolo desde del brazo que lo une a la rama. Introducimos
las hojas en un vaso de precipitado de 100 ml, las cubrimos con etanol completamente y dejamos
ebullir el etanol durante 10 minutos (el tiempo en que las hojas se decoloraron) Inmediatamente
agregamos sobre el vaso un volumen de hidrxido de sodio al 5% similar a la cantidad de alcohol
sobrante despus de la ebullicin y mantenemos en calentamiento. Cuando se evaporo la mayor
parte de la mezcla alcoho-hidroxido lavamos 3 veces con agua destilada, y adicionamos hipoclorito
de sodio comercial hasta cubrir las hojas realizando pequeas movimientos. Desechamos y
lavamos con agua destilada 3 veces una vez que se observa el aclaramiento de las hojas. Despus
de aclarar las hojas, las colocamos en una placa de vidrio y vertimos sobre ellas hidrato de clorato
hasta baarlas por completo y dejamos secar.

4.3 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en droga en polvo

Despus diafanizado se realizaron una serie de procedimientos (pruebas) para determinar
primeramente la observacin de estomas, el en cul con ayuda de un bistur se ras la parte
superior de la hoja diafanizada, agregando safranina por un minuto y posteriormente un lavado
con agua para la eliminacin de exceso llevndolo directamente al microscopio a 10x con el fin de
observar y clasificar al tipo de estoma perteneciente. Para la presencia de carbonatos de calcio en
nuestra hoja, se coloc una pequea cantidad de muestra en un tubo de ensayo y adicionamos
cido sulfrico diluido con el fin de determinar la presencia de carbonatos de calcio al haber
efervescencia. En nuestra tercera prueba; la determinacin de almidn se mont en un
portaobjetos con un poco de muestra en agua y se llev al microscopio para la observacin de
grnulos seguido de la adicin de una gota de Lugol para observar si stos (los grnulos) se tenan
en azul con el fin de confirmar la presencia de almidn en nuestra muestra. En nuestra ltima
prueba, la observacin de tricomas epidrmicos (pelos) en un portaobjeto se coloc un poco de
muestra donde adicionamos hidrato de cloral que posteriormente se calent suevamente (en
parrilla elctrica); la observacin se hizo al microscopio 10x y 40x.

4.4 Separacin de compuestos vegetales por cromatografa en columna

Se elabor una columna cromatografa haciendo uso de una pipeta Pasteur. Para ello, primero
se coloc un poco de algodn en la punta de la pipeta, posteriormente se llen a la mitad con
silica gel, luego se le agregaron partes iguales (de la mitad restante) primero de carbonato de
calcio y posteriormente de azcar glass. En el extremo final se le coloc otro pequeo tapn de
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algodn. Simultneamente a la elaboracin de la columna cromatogrfica, en un mortero se
coloc un poco de muestra de la planta recolectada y se tritur agregndole un poco de ter de
petrleo. Despus de triturada, a esa misma mezcla se le agreg 1 ml de CCl4 y 1 ml de metanol.
La columna cromatogrfica elaborada se fij a un tubo, despus se le agreg la cantidad suficiente
de la muestra (que previamente fue mezclada con los disolventes antes mencionados) hasta que el
algodn de la parte superior de la columna se humedeci, posteriormente se le agreg disolvente
(una mezcla de ter de petrleo, tetracloruro de carbono y metanol) hasta casi llenar el espacio
sobrante de la pipeta Pasteur. Con ayuda de una jeringa se efectu vaco. La mezcla de disolvente
se agreg en fracciones hasta que se lograron observar los cuatros colores, lo que indic la
separacin de los distintos componentes de nuestra muestra.

4.5 Extraccin selectiva de componente en un material vegetal con diferentes disolventes

4.5.1 Fraccin A
Para obtener la primera fraccin de la marcha se pesan 50 gramos de la muestra, se pulverizan
en un mortero, enseguida agregando etanol al 70% maceras la muestras y dejamos reposar 24
horas. Pasadas las 24 horas despus e la maceracin la muestra se llev a reflujo durante 1 hora,
posteriormente se filtra en caliente. El residuo obtenido fue lavado con una cantidad necesaria de
alcohol y filtramos nuevamente. Tanto el segundo filtrado como el primero realizado se guardaron
como fraccin A y de esta fraccin tomamos la mitad del volumen que se almaceno como fraccin
residual, mientras que el resto se llev a sequedad. Una vez seco redisolvemos con 20 ml de agua
caliente (a una temperatura entre 50-60 oC) y filtramos para obtener un filtrado acuoso cuyo
volumen fue divido en dos porciones iguales, uno para ensayar FL y LE, el otro se filtr
nuevamente para obtener u filtrado acuosos utilizado para analizar compuestos fenlicos y
taninos.
4.5.2 Fraccin B
La fraccin residual obtenida a partir de la fraccin A se llev a sequedad y despus que este
paso anterior se cumpli se le adicionaron 30 ml de HCl al 5% mientras se calentaba a una
temperatura entre 60-70 oC permaneciendo de esta manera durante 15 minutos. Filtramos en
caliente pasado el tiempo de calentamiento. El residuo obtenido del filtrado fue lavado con 20 ml
de HCl y nuevamente filtrado, donde el filtrado acuoso de este se almacena junto el filtrado
acuoso del primer filtrado en forma de filtrado acuoso cido I, mientras que el residuo se disolvi
en 30 ml de cloroformo y fue deshidratado con sulfato de sodio anhdrido, obteniendo la fraccin
B utilizado para ensayar esteroides y flavonoides.
4.5.3 Fraccin C
Al filtrado acuoso cido se le agrego 35 ml de hidrxido de amonio, alcalinizndolo a pH de
10.3. Despus realizamos una particin de la fase en dos ocasiones, en cada ocasin se le agrego
15 ml de cloroformo, conteniendo todo en un embudo de separacin y despus de mezclar
rigurosamente separamos la fase orgnica la cual fue lavada con 10 ml de agua destilada,
separando la fase orgnica de la acuosa, este ltimo se almaceno con la fase acuosa separada con
cloroformo. La fase orgnica obtenida se deshidrat con sulfato de sodio y fue filtrado, lo que se
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almaceno como fraccin C. De este filtrado separamos una cantidad de 5 mililitros para ensayar
esteroides y cardiotnicos. El resto llevo a sequedad, se redisolvi con 10 ml de cido clorhdrico y
filtramos. Con el filtrado obtenido ensayamos alcaloides.
4.5.4 Fraccin D
De nueva cuenta la fase orgnica de esta fraccin se obtuvo haciendo uso de la fase acuosa a la
cual se le efecto una particin con 2x15 ml de cloroformo, posteriormente la fase orgnica
obtenida se lav con 20 ml de solucin semisaturada de cloruro de sodio. Despus de efectuar
dicho procedimiento se deshidrato con sulfato de sodio anhidro y se filtr. El filtrado se reparti
en tres fracciones iguales de 5 ml cada uno aproximadamente. Se guardaron en frascos mbar
rotulados como D1 utilizada para evaluar flavonoides, carotenos y leucoantocianinas, D2 para
esteroides Y D3 para alcaloides, los tres se llevaron a sequedad.
4.5.5 Fraccin E
Obtencin de la fraccin E: esta fraccin se obtuvo haciendo uso la fase acuosa a la cual se le
efecto una particin con 2x15 ml de cloroformo, posteriormente la fase orgnica obtenida se
lav con 20 ml de solucin semisaturada de cloruro de sodio. La fase acuosa despus de realizar
este procedimiento se almacena como fraccin E. A esta fraccin obtenida se le determin su pH
el cual fue de 9.9 (bsico). Despus en 7 tubos de ensayo diferentes se agregaron 1 ml de dicha
fraccin a los cuales se le agregaron gotas de HCl concentrado hasta que el contenido de 2 tubos
alcanzara pH neutro utilizado para ensayar taninos, 2 con pH ligeramente cido para ensayar
compuestos fenlicos y 3 con pH cido para ensayar flavonoides, alcaloides y leucoantocianinas.

4.6 Determinacin de metabolitos

i.

ii.

iii.

iv.

Flavonoides: se tomaron 0.5 ml de la fraccin correspondiente a determinar, directamente

sin retomar con igual volumen de agua agregamos unas pequea cantidad de granallas de Zn
y 0.2 ml de HCl. Dejamos reposar durante 1 hora y esperamos a observar la aparicin de
coloracin. Despus de una hora el cambio de color purpura estaba presente. Para confirmar
adicionamos 0.2 ml de alcohol amillico con 2 ml de agua destilada para diluir.( Reaccin de
shinoda).
Compuestos fenlicos: para la reaccin de FeCl3 tomamos 3 ml de la muestra y agregamos 3
gotas de FCl3 al 1%. Mientras que para la reaccin con gelatina tomamos 3 ml de muestra y
agregamos 10 gotas de solucin acuosa de gelatina al 0.5%.
Esteroides: Se mezclaron 1 ml de anhdrido actico y 1 ml de cloroformo (volmenes iguales)
y se dejaron enfriar a 0C en bao de hielo. Posteriormente 2 ml de la fraccin
correspondiente se pusieron en contacto con la mezcla de reactivos anteriores y el tubo fue
colocado en bao de hielo. Se agregaron por las paredes 1 gota de H2SO4 previamente
enfriado a 0C. Enfriamos y observamos la coloracin. (Prueba de Liebermann-Burchard).
Antraquinonas: Se agitaron suavemente 3 ml de la fraccin correspondiente con 5 ml de
NaOH 5% y se observ el color. (Reaccin de Borntrger).
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v.

Lpidos: colocamos una gota de la fraccin correspondiente en papel de filtro y lo dejamos

secar. Previamente se expuso a vapores de I2.

vi.

Hidratos de carbono: se toman 2 ml de la fraccin correspondiente, le agregamos 0.5 ml de

fenol al 5%, inmediatamente sobre las paredes del tubo lentamente adicionamos 2.5 ml de
H2SO4.

vii.

Alcaloides: tomamos 0.2 ml de la fraccin correspondiente y agregamos 2 gotas del reactivo

de Dragendorff.

viii.

Cardenlidos: sobre papal filtro agregamos una gota de la fraccin correspondiente,

agregamos 0.1 ml del reactivo de Kedde.

ix.

Leucoantocianinas: se toman 2 ml de la fraccin correspondiente, le agregamos 1 ml de HCl

concentrado, mezclamos y se calent en Bao Mara durante 10 minutos. Un vez enfriado le
agregamos 1ml de alcohol amlico.

4.7 Determinacin de saponinas, Cumarina y aminocidos

4.7.1 Saponinas
Se calent a bao Mara aproximadamente 0.5 g de droga seca y pulverizada con 8 ml de agua
en un tubo de ensaye, durante 30 minutos. Despus se dej enfriar y el tubo de ensaye se tap
con el dedo y se agit fuertemente por 15 segundos. Se observ si se present o no la formacin
de burbujas.
4.7.2 Protenas-Aminogrupos
Reaccin de la Ninhidrina
A 1 gramo (aproximadamente) de droga se le agrega 50 ml de agua y se calent a ebullicin
durante 2 minutos. Se filtr en caliente y se concentr a 5 ml. Sobre papel filtro se coloc 1 gota
de la solucin y se dej secar. Posteriormente se adicion una gota de solucin etanlica de
Ninhidrina al 0.2 %. Por ltimo se calent en estufa a 110-120 C.
4.7.3 Reconocimiento de cumarinas
En un tubo de ensaye se coloc aproximadamente 1 gramo de material vegetal macerado y se
agreg cantidad suficiente de etanol hasta cubrir el material. Se cubri la boca del tubo de ensayo
con un papel filtro blanco y se sujet con unas pinzas para tubo de ensaye. Al papel filtro se le
adicionaron unas gotas de NaOH diluido. Y se calent hasta ebullicin por 5 minutos, se enfri y
retir el papel filtro. El papel filtro se observ bajo luz ultravioleta a 365 nm.

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5. RESULTADOS
5.1 Colecta y Herborizacin
Se recolectaron 10 plantas completas de nuestra
especie, se prensaron y se llevaron a la facultad.
En base a las publicaciones de Diederich Franz
Leonhard von Schlechtendal, la planta recolecta es
llamada Bouvardia ternifolia, esto en base a la
comparacin de las partes de la planta como lo son:
pice: Acuminado
Borde: Aserrado
Peciolo: Peciolado
Fig 7. Especie Bouvardia ternifolia. Recolectada
en el lugar llamado: Ecoturixtlan.
Forma: Falcada
Base: Oblicua
Lo anterior se realiz en base a unas hojas de referencia que la titular de la materia nos
proporcion (Ver anexo D)

5.2 Diafanizado
Producto obtenido durante el diafanizado. Hojas blancas,
algunas partes un tanto transparentes, producto de los cambios
qumicos contenidos en las hojas, compuestos insaturados, que al
exponerse a reactivos como el hipoclorito se producen reacciones
qumicas que dan como resultado este cambio de color o
descoloramiento. Tal y como se describi anteriormente, este
mtodo sencillsimo y que dadas a las grandes dificultades que
existen para interpretar sistemas vasculares, en base a cortes
seriados nos facilita y acelera considerablemente investigaciones
de materiales de herbario, mtodo creado por los doctores Irving
W. Bailey y Charlotte G y que adems de citar las grandes ventajas
se cree que ha pasado ser inadvertida.
Fig 8. Producto terminado del proceso de
diafanizado, de la especie recolectada.

5.3 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en droga en polvo

De acuerdo a Dennis Bray, 2006; los estomas son aberturas en la epidermis, localizados sobre
todo en la superficie interior de la hoja, que tiene a su cargo el intercambio de gases del vegetal;
este echo nos dice que entre ms cantidad de estomas estn presentes en la planta existir un
mayor intercambio de gases, nuestra especie posee un estoma del tipo anisoctico o crucfera, y
encontrados en pequeas cantidades, lo que nos hace pensar que el intercambio de gases de
nuestra planta recolectada es poco.
Es el mismo Dennis Bray, 2006, quien menciona que los tricomas cumplen funciones de
proteccin, absorcin y secrecin. En el caso de los tricomas encontrados en la especie analizada,

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son del tipo unicelular; esto nos hace pensar que fungen con la funcin de proteccin y
almacenamiento de algunos metabolitos o componentes de la especie.
El hecho que el almidn y carbonatos nos arrojen un resultado negativo significa pues,
hablando primeramente del almidn que no posee grnulos de almidn, segn Rodrguez Ramos,
2007, el almidn juega un papel importante en la identificacin de las plantas y con un gran
inters de los arquelogos, por la evolucin que ha presentado diversas plantas con este
contenido.

Fig 9. Estomas observadas de la

especia recolectada.

Fig 10. Tricomas que se

apreciaron en la muestra.

Tabla 1. Determinaciones y resultados en la identificacin de adulteraciones o

falsificaciones en drogas.
Determinacin
Resultado
Estomas
Tipo II; anisoctico o crucfera
Tricomas
Unicelulares; en forma de espinas o
garras.
Almidn
Negativo
Carbonatos
Negativa

5.4 Separacin de compuestos vegetales por cromatografa en columna

CLOROFILA B

CLOROFILA
A

XANTOFILA
S
ANTOCIANINAS

CAROTENOS

Fig 11. Cromatografa en

columna a escala en pipeta
Pasteur.

Segn Alicia Lamarque, la cromatografa

en columna es til en la separacin de
componentes, en este resultado, se puede
apreciar las diferente bandas, y por ende los
diferentes compuestos separados. Que de
acuerdo a Jimnez Suarez, estos
compuestos son en su mayora clorofilas y
carotenos.

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5.5 Extraccin selectiva de componente en un material vegetal con diferentes disolventes

Segn Gabriel Rodrguez, 2008 (et al. Universidad Politcnica de Madrid) la extraccin con
disolventes orgnicos permite obtener extractos completos de plantas, o de las fracciones
deseadas, de calidad alimentaria y fitofarmacutica sin demasiados costos de produccin. Adems
con la finalidad de poder determinar en cada una, metabolitos que sean de utilidad.
As pues, se extrajeron los componentes de nuestra muestra para poder obtener fracciones con
diferentes tipos de solventes, que permitirn realizar pruebas especficas de identificacin de
algunos metabolitos.
Tabla 2.Fracciones obtenidas de la muestra y el tipo de disolucin obtenida
(solvente).
Fraccin
Tipo de disolucin
Fraccin A
Etlica (Etanol)
Fraccin B
Acida (HCl)
Fraccin C
Clorofrmica (CHCl3)
Fraccin D
Clorofrmica (CHCl3)
Fraccin D1
Etlica (Etanol)
Fraccin D2
Clorofrmica (CHCl3)
Fraccin D3
Acida (HCl)
Fraccin E
Acuosa (H2O)

5.6 Determinacin de metabolitos

5.6.1 Fraccin A
La polaridad ser un propiedad importante de los metabolitos, pero de igual manera su
solubilidad en cada uno de los disolventes utilizados para obtener los extractos (etanoico,
clorofrmico, acuoso, cido y bsico); de modo que depender de estas propiedades que los
metabolitos estn presente en uno o en algunos de los extractos o en ninguno.
En el caso de los flavonoides, hubo presencia en el extracto etanlico debido al llevar a cabo la
reaccin de Shinoda se observ una coloracin rosa. En lo que respecta a los taninos, estos se
encontraron presentes en el extracto etanlico, llevando a cabo la reaccin con gelatina, en la que
se observ la aparicin de turbidez hasta la formacin de un precipitado. En lo que respecta a los
taninos, estos se encontraron presentes en el extracto etanlico, llevando a cabo la reaccin con
gelatina, en la que se observ la aparicin de turbidez hasta la formacin de un precipitado.
Mientras que en el extracto acuoso, su presencia fue mucho menor, ya que al llevar a cabo la
prueba con FeCl3 el cambio de color fue poco notable.
De acuerdo con los resultados obtenidos, la planta estudiada posee compuestos fenlicos en su
mayora (flavonoides, OH fenlicos y taninos). Lo cual de acuerdo con Gracia Nava Manuel, 2011
los compuestos fenlicos, entre los cuales se encuentran los flavonoides, presentan una amplia
ubicuidad en la naturaleza. Son responsables del buen funcionamiento de las plantas. Poseen una
estructura qumica adecuada para ejercer actividad antioxidante, la cual est ntimamente
relacionada con tales propiedades, por lo tanto la planta analizada tendra dichas propiedades.
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Tabla 3. Determinaciones y resultados realizados a

la Fraccin A
Determinacin
Flavonoides
Taninos
OH Fenlicos
Leucoantocianinas
Lpidos
Hidratos de Carbono

Resultado
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo

5.6.2 Fraccin B
De la fraccin B, con respecto a las antraquinonas (quinonas) fue el grupo de metabolitos que
no se encontraron en la planta estudiada. Por otra parte, los triterpenos y esteroides solo se
encontraron presentes en el extracto cido, los cuales se detectaron por medio de la prueba de
Liebermann-Buchard, en dnde se obtuvo una coloracin verde azulado, lo que indica la presencia
de esteroides. Con esto se comprueba que la planta posee este tipo de metabolito y segn
Viviana castilla 2009, las plantas sintetizan una gran variedad de esteroides, los cuales le dan
ciertas capacidades como una funcin hormonal y capacidad de participar en el mecanismo de
defensa frente a la infeccin con microorganismos patgenos.
Tabla 4. Determinaciones y resultados realizados a
la Fraccin B
Determinacin
Esteroides
Antraquinonas

Resultado
Positivo
Negativo

5.6.3 Fraccin C
De la cual lo que respecta a los alcaloides, fue el grupo de metabolitos que no se encontraron
en la planta estudiada, al igual que las quinonas y las saponinas. En lo que se refiere a las
leucoantocianinas, esteroides y cardenlidos tambin estuvieron ausentes.
Tabla 5. Determinaciones y resultados realizados a
la Fraccin C
Determinacin
Resultado
Alcaloides
Negativo
Cardenlidos
Negativo
Esteroides
Negativo
Leucoantocianinas
Negativo
5.6.4 Fraccin D
En esta fraccin solo en la D1 dieron positivos los flavonoides con la prueba de shinoda, que
como ya se haba mencionada estos metabolitos le otorgan un buen funcionamiento a las plantas
y de acuerdo a la estructura que poseen pueden ejercer una actividad antioxidante (Gracia Nava
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Manuel, 2011 ) y los metabolitos de tipo cardiotnicos que se presentaron en una porcin
considerable, debido a que en la prueba con el reactivo de Kedde se observ una coloracin
prpura demostrando as la presencia de dichos metabolitos. De este tipo de metabolitos no se
tiene registro en esta especie pero de acuerdo a Zeinsteger 2009 los glucsidos cardiotnicos se
encuentran en varios gneros pertenecientes a las familias Apocynaceae, Asclepiadaceae,
Celastraceae y otras, existen dos grupos bsicos de glucsidos en las plantas: Cardenlidos y
bufadienolicos, ambos con efectos directos sobre a funcin cardiaca, por lo que debido a que la
prueba fue positiva se pretende creer que junco con la capacidad de las leucoantocianinas estos
compuestos le brindan una propiedad importante a la planta en el control de desrdenes
cardiovasculares.
Tabla 6. Determinaciones y resultados realizados a
la Fraccin D (D1, D2 y D3)
Fraccin D1
Determinacin
Resultado
Flavonoides
Positivo
Cardiotnicos
Positivo
Leucoantocianinas
Negativo
Fraccin D2
Determinacin
Resultado
Triterpenoides y/o
Negativo
esteroides
Fraccin D3
Determinacin
Resultado
Alcaloides
Negativo
5.6.5 Fraccin E
Respecto al anlisis de compuestos fenlicos, este tipo de metabolitos fueron los ms
abundantes, debido a que se encontraron presentes en el extracto etlico y el extracto acuoso
cido. En lo que se refiere a las leucoantocianinas, hubo presencia muy considerable en el
extracto acuoso cido, llevando a cabo la reaccin de Rosenheim para su reconocimiento, y
obteniendo la presencia de un color rosa.
Con los resultados obtenidos, la planta estudiada posee compuestos fenlicos y
leucoantocianinas en su mayora a diferencia de la fraccin A que no pose estas ltimas por lo
cual de acuerdo con Gracia Nava Manuel, 2011 los compuestos fenlicos, entre los cuales se
encuentran los flavonoides, presentan una amplia ubicuidad en la naturaleza. Son responsables
del buen funcionamiento de las plantas y con la presencia de las leucoantocianinas, en su relacin
con el hombre, son utilizados para tratar desordenes cardiovasculares y prevenir algunos
cnceres. Al igual que la fraccin A se mencionara que de igual manera poseen actividad
antioxidante, se confirma en esta fraccin y que por lo tanto posee estas propiedades.

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Tabla 7. Determinaciones y resultados realizados a
la Fraccin E, realizado a diferentes pH
Fraccin E a pH neutro
Determinacin
Resultado
Reaccin con FeCl3
Positivo
Reaccin con gelatina
Negativo
Fraccin E a pH ligeramente cido (pH de 4.3)
Determinacin
Resultado
Reaccin con FeCl3
Positivo
Reaccin con gelatina
Positivo
Fraccin E a pH cido (pH de 1.3)
Determinacin
Resultado
Flavonoides (FL)
Ligeramente Positivo
Leucoantocianinas (LE)
Positivo
Alcaloides
Negativo

5.7 Determinacin de saponinas, Protenas-Aminogrupos y Cumarinas

El extracto se obtiene a partir de un infusin de la planta disecada con etanol, obteniendo un
extracto etanlico con el cual se evaluaron las saponinas, protenas-aminogrupos y cumarinas.
Donde se encontr presencia de protenas-aminogrupos, mediante la reaccin de la Ninhidrina al
obtener un color violeta. Mientras que la presencia se saponinas no se comprob y la presencia de
cumarinas fue muy poca. En este caso la presencia de protenas es algo lgico de encontrarse
positivas; en el caso de las cumarinas que son productos naturales que poseen una estructura que
consiste en un anillo bencnico unido a una pirona, la doctora Olga Lock de Ugaz menciona en su
manual de fotoqumica que las cumarinas son compuestos ampliamente distribuidos en las
plantas, principalmente en las familias Umbeliferae y rutaceae y que se encuentran distribuidas en
todas las partes de las plantas, y que de las cuales se ha comprobado un amplio grado de accin
biolgica, por ejemplo la accin anticoagulante, la accin antibacterial adems de aplicaciones
como saborizantes y su uso en perfumera ya que las cumarinas son aromatizantes. De igual
manera sea descrito que disminuyen la permeabilidad capilar y aumentan la resistencia de las
paredes capilares, actan como un tnico venoso por lo tanto nuestra planta poseera estas
propiedades solo en porcentaje bajo debido a que en la prueba no fue tan marcada la positividad.
Tabla 8. Resultados de las determinaciones de saponinas,
protenas-Aminogrupos y Cumarinas
Determinacin
Resultado
Saponinas
Negativo
Protenas-Aminogrupos
Positivo
Cumarinas
Ligeramente Positivo

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6. CONCLUSIONES
Para la caracterizacin, identificacin y/o clasificacin de una planta, los estudios fitoqumicos
correspondientes a la identificacin y valoracin de diversos metabolitos patrones, son pruebas
qumicas rudimentarias en el estudio biolgico y en el caso que nos concierne en el presente
trabajo, para la determinacin de las posibles propiedades farmacolgicas que presentan algunas
especies de acuerdo a los metabolitos que poseen.
Los resultados fsicos, micro y macroscpicos realizados a la planta recolectada determina que
se trata de la especie Bouvardia ternifolia perteneciente a la familia Rubiaceae y al gnero
Bouvardia, con nombres triviales como vara de flor, sombra de la virgen, trompetilla, lengua de
vbora, entre otras. En cuanto a sus metabolitos, al igual que en estudios retrospectivos, se tiene
que la especie contiene flavonoides, compuestos fenlicos positivos, posee esteroides entre otros
metabolitos concomitantes a otras especies con propiedades teraputicas en su gnero, validado
por los estudios previos. En este sentido podemos concluir que Bouvardia ternifolia es una especie
de planta que con los cuidados, manejos y usos adecuados, es un producto natural con
propiedades que estn en funcin de los metabolitos que posee. Siendo esta especie por su
amplia distribucin, una fuente considerable para la obtencin drogas con miras a la aplicacin
teraputica con actividades antioxidantes, siendo ensayadas y aplicadas principalmente en
afecciones cardiovasculares por dicha propiedad.

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7. GLOSARIO
Alcaloides: se trata de compuestos nitrogenados de carcter alcalino, son producidos casi
exclusivamente por los vegetales (aunque tambin pueden producirlos algunos animales, hongos,
as como sintetizarlos qumicamente). Algunos derivaran de aminocidos (lisina, tirosina y
triptfano).
Almidn: compuesto que sirve a casi todas las plantas como reserva de carbohidratos para uso
metablico, para el embrin vegetal de las semillas y para la hibernacin natural o los periodos de
sequa.
Aminocidos: como su nombre lo indica, son molculas; cidos orgnicos que tiene un grupo
carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2). Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters,
sern aquellos que formen parte en la estructura de las protenas.
Antocianinas: compuestos localizados en las vacuolas de las clulas vegetales. Clasificados como
flavonoides; son glucsidos que tiene un azcar en posicin 3. Son los responsables de la
pigmentacin de flores, frutas, dando colores como: rojo, rosa. Morado y azul.
Antraquinonas: compuestos orgnicos aromticos. Se localizan en vegetales superiores. Aunque
se han encontrado en insectos y microorganismos.
Cardiotnicos: son sustancias que producen mejora del trabajo cardiaco con menor consumo de
oxgeno y el mismo gasto de energa, haciendo que el corazn insuficiente recupere la fuerza de
contraccin, o inotropismo positivo, y la eficiencia mecnica.
Colecta herbaria: Colecta de recoleccin de ejemplares herbarios, en un espacio abierto o en un
espacio delimitado.
Compuestos fenlicos: los compuestos fenlicos constituyen un amplio grupo de metabolitos
secundarios de las plantas. Se caracterizan por presentar en su estructura un anillo de benceno, al
menos, un grupo hidroxilo (fenlico), generalmente funcionalizado. Productos secundarios del
metabolismo de las plantas y suelen ser, en parte, los responsables del color, el aroma y el sabor
de los alimentos que contienen.
Cromatografa en columna (CC): Cromatografa en donde la fase estacionaria esta uniformemente
situada en una columna cromatografa.
Cumarina: Las cumarinas son productos naturales que poseen una estructura que consiste en un
anillo bencnico unido a una pirona (un anillo heterocclico de seis miembros que contiene un
tomo de oxgeno y cinco carbonos sp2).

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Diafanizado: proceso por el cual una muestra vegetal se hace difana o transparente, mediante
tcnicas que igualan a los ndices de refraccin de la luz del interior del rgano con el medio que lo
contiene. Existen dos principios para realizar una diafanizacin; por maceracin y por
deshidratacin.
Droga: sustancia generalmente de origen vegetal, como la ofrece la naturaleza u obtenida a partir
de sencillas manipulaciones, siendo el principio activo la sustancia responsable de la actividad
farmacolgica de esta.
Esteroides: Los esteroides son un tipo de compuestos orgnicos derivados del ncleo del
ciclopentanoperhidrofenantreno; formando cuatro anillos fusionados, tres con seis tomos y uno
con cinco; posee en total 17 tomos de carbono.
Estomas: derivado de griego estoma que significa boca, son aberturas en la epidermis,
localizadas sobre todo en la superficie inferior de la hoja, que tienen a su cargo el intercambio de
gases del vegetal. Estas estructuras estn compuestas por dos clulas epidrmicas especializadas
denominadas clulas oclusivas que regulan el dimetro del poro.
Flavonoides: son compuestos, generalmente amarillos, que se encuentran en los jugos celulares y
en los ptalos de las flores de algunas plantas en forma de glucsidos de diversos azucares
(glucosa, galactosa, ramnosa o una pentosa) y cuyos aglucones son derivados del ncleo
fundamentalmente de la fenilbenzopirona.
Leucoantocianinas: son compuestos qumicos incoloros relacionados con antocianidinas y
antocianinas (flavan-3,4-dioles). Poseen una gran importancia en la elaboracin de los vinos ya
que son responsables de la astringencia y adems son los sustratos de las polifenoloxidasas nativas
de la una en la reaccin de oscurecimiento enzimtico del mosto.
Lpidos: conforman un grupo grande y heterogneo de sustancias de origen biolgico fcilmente
solubles en disolventes orgnicos como el metanol, acetona, cloroformo y el benceno. Pueden
clasificarse en hidrolizables, es decir que se rompen ante la agregacin de agua, y no hidrolizables.
Quinonas: son compuestos que normalmente existen en las plantas y resultan de la oxidacin de
compuestos fenlicos.
Saponinas: son compuestos que al agitarse en agua producen abundante espuma. Debido a esta
propiedad, a las plantas que las contienen se les usa como jabn desde pocas prehispnicas y aun
actualmente.
Tricomas: son apndices derivados de clulas epidrmicas que pueden presentar diversas formas
y suelen hallarse en todas las partes del vegetal. Los Tricomas cumplen funciones de proteccin,
absorcin y secrecin.
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8. ANEXOS
A)

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B)
RECOLECCIN Y HERBORIZADO

Plantas recolectada en el municipio de

Ixtln de Jurez en el centro recreativo
ECOTURIXTLN el da 13 de septiembre
de 2014.

DIAFANIZADO

Nuestra Planta se puede observar el color

verde intenso que tena al principio.
En la segunda imagen se observa el
producto obtenido durante el diafanizado.
Hojas blancas, algunas partes un tanto
transparentes, producto de los cambios
qumicos contenidos en las hojas,
compuestos insaturados, que al exponerse a
reactivos como el hipoclorito se producen
reacciones qumicas que dan como resultado
este cambio de color o descoloramiento.

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ESTOMAS
Anlisis estructural
Clulas adyacentes

Ostiolo

Estoma
Clulas oclusivas

B
B
B

Se muestran las estructura de los estomas, correspondientes a la clasificacin tipo II, anisoctico o crucfera, a 10X A) Se
observa la forma estructural de un estoma: ostiolos, clulas oclusivas y clulas adyacente. B) Imagen con contraste que
muestra el estoma rodeada de clulas adyacente irregulares.

TRICOMAS
Anlisis estructural

Se muestran imgenes a 10X de los tricomas que presenta la muestra. Estos tricomas son de tipo unicelulares A) Se
perciben los tricomas en forma de espinas o garras. En la parte superior hay mayor cantidad. B) Se muestra un
campo con contraste donde resalta ms la forma de espina que presentan los tricomas de esta especie.

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C)
FRACCIONES
Fraccin A
FLAVONOIDES

Prueba para determinacin de

flavonoides. La reaccin es positiva.
Imagen
que
correspondiente
despus de adicionar alcohol amlico.

LEUCOANTOCIANINAS

Prueba para determinacin de

LE. La reaccin es negativa al no
presentar el color indicada.

REACCIN CON
GELATINA

TANINOS Y COMPUESTOS
FENLICOS

Mediante la reaccin de FeCl3 la

coloracin fue verde grisceo
(OH adyacentes.)

LPIDOS

HIDRATOS DE CARBONO

Prueba para determinacin de hidratos

de carbono. El color rojo de la parte
inferior del tubo indica reaccin
positiva a hidratos de carbono

Positivo por presencia de

turbidez

POSITIVO (mancha marrn)

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Fraccin B

ANTRAQUINONAS (tambin dan

positivo las naftoquinonas).

ESTEROIDE

Presencia de grupo de esteroide por la

coloracin verde- Azulada.

Por la reaccin de Borntrger, el

resultado fue negativo.

Fraccin C
ALCALOIDES

ESTEROIDES
CARDENLIDOS

Reaccin negativa, no se present

un color purpura.

Al agregar reactivo de Dragendorff

no se observ ningn precipitado
que dio una prueba negativa.

La prueba resulto negativo pues

solo tomo un color amarillo y no
verde azulada.

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Fraccin D

LEUCOANTOCIANINAS (D1)

Al realizar la reaccin de
Rosenheim no se observ una
coloracin carmes, si no de color
amarillo claro.

FLAVONOIDES (D)

Al realizar la reaccin de Shindoa

no se logr observar una coloracin
prpura, si no transparente

ALCALOIDES (D3)

Al agregar el reactivo de
Dragendorff no se observ la
formacin de un precipitado pardo
anaranjado.

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Fraccin E
ALCALOIDES

Al agregar el reactivo de
Dragendorff no se observ la
formacin de un precipitado
anaranjado. Por ello el resultado
fue negativo.

TANINOS

Al realizar la reaccin de gelatina

no se observ la aparicin de
turbidez hasta un precipitado. El
resultado fue negativo.

FLAVONOIDES

Al efectuar la reaccin de Shinoda

se logr observar una ligera
coloracin rosa, por lo que el
resultado fue ligeramente positivo.

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C)
SAPONINAS
Al lleva a cabo la identificacin de
saponinas, no se observ
una
presencia de burbujas al momento de
la agitacin vigorosa. El resultado fue
negativo.

PROTEINAS Y AMINOGRUPOS

Al agregar una gota de solucin

etanlica de ninhidrina al 0.2% se
observ una coloracin violeta, por
lo que el resultado fue positivo.

CUMARINAS
Al agregar unas gotas de NaOH en
papel filtro y calentar hasta
ebullicin el tubo tapado con dicho
papel
y
posteriormente
al
observarlo bajo la luz UV se obtuvo
una
coloracin
amarilla
fluorescente.
Resultado
fue
positivo.

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D)

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9. REFERENCIAS

Fisiologa Vegetal. Lincoln Taiz y Eduardo Zeiger. TOMO 1.Universitat Jaume I. Espaa 2006.
Pag. 558.
Qumica Orgnica. L.O. Smith, Jr. y S.J. Cristol. 2 Edicin. Ed. Revert S.A. Espaa. 1982, Pag.
742
Qumica Orgnica. L.O. Smith, Jr. y S.J. Cristol. 2 Edicin. Ed. Revert S.A. Espaa. 1982. Pag.
754
Fisiologa Vegetal. Lincoln Taiz y Eduardo Zeiger. TOMO 1.Universitat Jaume I. Espaa 2006.
Pag. 551.
Fitoqumica orgnica. Deanna Mercano y Masahisa Hasagawa. 2 Edicin. Consejo de
desarrollo Cientifico y Humanstico de Venezuela. Venezuela. 2002. Pg. 212
Farmacologa Mdica. Defillo, B. A. Instituto Tecnolgico de Santo Domingo. 1990. Pg. 61
Manual de fitoterapia. Martnez, I. S. Editorial ELSEVIER. Barcelona, Espaa. 2007. Pg. 33
Diccionario de qumica fsica. Costa, J.M. DIAZ DE SANTOS EDICIONES. Espaa. 2005. Pg. 111
Estudio estructural y dinmico de sistemas organizados mediante sondas fluorescentes.
Otero, R. Universidad de Santiago de Compostela. Pg. 40
Tcnicas Aplicadas Al Estudio de la Anatoma Vegetal. Sandoval, E. 1 Edicin. Instituto de
Biologa, UNAM. Diciembre 2005. Pg. 155
Farmacologa Bsica y Clnica. Velzquez, B. 18 Edicin. Editorial Mdica Panamericana.
Madrid, Espaa. 2008. Pg. 7
Biologa: la vida en la tierra. Audesirk, T. Editorial Pearson. Pg. 45
Introduccin a la biologa celular. Bray, D. 2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos
Aires, Argentina. 2006. Pag. 701
Qumica orgnica bsica y aplicada: de la molcula a la industria. Primo Yfera. E. Volumen 2.
Editorial Revert. Barcelona, Espaa. 2007. Pag. 915
Biotecnologa alimentaria. Garca, M. Editorial LIMUSA. Mxico. 2004. Pag. 291
Bioqumica: texto y atlas. Koolman, J. 3 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Madrid,
Espaa. 2004. Pag. 46
Conceptos Introductorios a la Fitopatologa. Rivera, G. C. 1 Edicin. Editorial Universidad
Estatal a Distancia, San Jos, Costa Rica. 2007. Pag. 228
Qumica de la Flora Mexicana. Romo de Vivar, A. 1 Edicin. Investigaciones en el Instituto de
Qumica de la UNAM. 2006. Pag. 143
Introduccin a la biologa celular. Bray, D. 2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos
Aires, Argentina. 2006. Pag. 701

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