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RESUMO
Este texto, objetiva primariamente, atender o corpo discente envolvido em trabalhos acadmicos, pesquisas cientficas,
dissertaes e teses que, em funo do curto perodo de permanncia em suas atividades no curso, carecem de metodologias com
desenvolvimento detalhado da rotina de laboratrio que os tornem auto-suficientes, em suas anlises, a despeito dos vrios manuais
publicados. O mesmo contm informaes bsicas sobre limpeza de vidrarias, preparao da amostra e leitura em vrios equipamentos.
Tambm mostra didaticamente mtodos de determinao de nutrientes em material vegetal, incluindo as transformaes matemticas
das leituras, para unidades padronizadas. Descreve, ainda, mtodos de obteno de extratos por digesto via seca incinerao; via
mida Kjedahl, extraes com cidos diludos. Para as leituras das amostras so utilizadas tcnicas de titulao, colorimetria,
fotometria de emisso e espectrometria de absoro atmica. As referncias bibliogrficas, utilizadas como leitura complementar,
auxiliam no direcionamento dos leitores a dados adicionais no caso de ser necessrio um aprofundamento maior. Espera-se que as
informaes contidas nesse texto auxiliem os operadores na conduo de suas anlises pertinentes s metodologias explicitadas.
Palavras-chave: Metodologia; nutrientes; anlise; digesto; laboratrio.
ABSTRACT
The presented text has as main purpose support students and junior researchers in their laboratory work, e. g., thesis and
dissertations. This is due considering that in this case, in special, the time dispended in the laboratory is generally short and not
continuous. In this sense, it is necessary to present an operational laboratory method rich in specific details that normally are not
considered in the methods available in the published literature enabling the operators to be auto sufficient. The descriptions contain
basic information about glassware cleaning, sample preparation and readings in different equipments. It also presents the methods of
nutrient determination in a didactic way for vegetable materials, including mathematical transformations of the readings, step by step, in
the different equipments to standard units. Additionally, describes methods for dry digestion incineration; wet digestion kjeldahl, and
diluted acid extractions. For sample readings, techniques as titration, colorimetry, flame photometry, and atomic absorption
spectrophotometry are described also. The bibliography cited in the text is recommended for additional readings in cases where a
deeper knowledge is required. It is expected that the information, presented in the text, will be useful for the operators in conducting their
analyses while utilizing the described methods.
Key-words: Methodology; nutrients; analysis; digestion; laboratory.
M. Sc. Curso de Ps-Graduao em Agronomia-Cincia do Solo, Rua dos Funcionrios, 1540, 800035-050 Curitiba-PR, langmartins@terra.com.br;
Dr., Prof. Snior do Departamento de Solos e Engenharia Agrcola da UFPR, Rua dos Funcionrios, 1540, 80035-050, Curitiba, PR. Email:
reissman@ufpr.br.
INTRODUO
As etapas analticas em um laboratrio de
nutrio de plantas requerem consideraes em
relao a vrias medidas operacionais. Antes de iniciar
as anlises, as amostras devem ser preparadas de
acordo com uma srie de critrios.
A anlise foliar um procedimento analtico
de diagnstico que, alm da aplicao nas reas
agrcolas e florestais para fins produtivos, encontra
amplo espao na pesquisa ambiental. A pesquisa
nutricional propriamente dita um procedimento que,
segundo JONES JR. (1998), representa uma tcnica
que determina o teor do nutriente na matria seca
das plantas, ou elemento qumico, de uma
determinada parte da planta, normalmente
representado pelas folhas. A interpretao dos teores
de nutrientes encontrados nestes rgos permite,
atravs de diferentes mtodos de interpretao, avaliar
seu estado nutricional. Serve tambm para o clculo
da exportao de nutrientes por parte de uma cultura,
analisando-se pormenorizadamente o material objeto
da colheita ou, na agrostologia, para o clculo da
dosagem de sais complementares na alimentao de
animais. Na pesquisa ambiental, a anlise foliar, ou
dos tecidos vegetais como um todo, permite que esta
tcnica seja aplicada na fitorremediao, atravs da
seleo de plantas que possam minimizar impactos
da poluio qumica, quer seja em ambiente aqutico
ou terrestre. Neste aspecto so selecionadas plantas
com alto poder de extrao de elementos qumicos
poluentes. Assim como no estudo da exportao de
nutrientes por parte de uma cultura agrcola ou
florestal, o produto da sua composio qumica pela
biomassa exportada indica o contedo na respectiva
biomassa. Nesse sentido a escolha do mtodo
analtico tem valor preponderante.
A correta interpretao dos dados no depende
apenas de processos qumico-analticos avanados,
mas tambm, de processos sistemticos de coleta,
manuseio, armazenamento e processamento. De
acordo com BATAGLIA e SANTOS (2001) por
ocasio da amostragem que ocorrem os erros que
mais dificultam uma interpretao correta dos
resultados das anlises qumicas. Portanto,
fundamental que antes de se proceder a coleta de
material para anlise, tome-se conhecimento dos
procedimentos corretos de amostragem foliar ou de
diferentes tecidos, quer seja para avaliao do estado
nutricional, quer para fins de investigao ambiental.
Os cuidados no momento da amostragem do material
foram bem descritos por NOGUEIRA e SOUZA (2005).
Compreendem a discriminao cuidadosa de
variedades ou espcies, plantas com sintomas e
plantas sadias, idade fisiolgica, ramos com frutos,
enxerto e porta-enxerto e estado fitossanitrio. Alm
de evitar a mistura de amostras dessas diferentes
situaes, deve-se evitar coletar amostras que
sofreram adubao ou pulverizaes recentes, bem
como, amostras de plantas localizadas em estradas
ou
caminhos
de
movimento
intenso.
Complementarmente, JONES JR. (1998) enumera
2
PROCEDIMENTOS LABORATORIAIS E
PREPARO DAS AMOSTRAS
Primeiramente enxaguar os frascos para
armazenagem do material ou dos extratos para
anlise, com gua de torneira, em seguida deix-los
imersos por 24 h em uma soluo aquosa de cido
clordrico a 10% v/v (NOGUEIRA e SOUZA, 2005),
devidamente identificada e armazenada em lugar
seguro. Finalmente enxaguar trs a cinco vezes com
gua deionizada. Para o preparo, todo cuidado
necessrio sendo obrigatrio o uso de equipamentos
de proteo individual (EPI), que inclui, dependendo
do caso, culos, luvas, mscara, jaleco e avental
compatveis. fundamental tomar conhecimento dos
riscos e aes remediadoras no caso de acidente com
substncias agressivas.
Para a limpeza de pipetas, buretas e bales
volumtricos s devem ser usadas solues de
limpeza (HCl diludo e detergente 0,1 0,3%)
temperatura ambiente (STEYN, 1959). No caso da
secagem destes materiais em estufa, a temperatura
no deve ultrapassar 30 oC (HERRMANN, 1975).
Na utilizao da vidraria, sempre antes do uso,
conveniente a ambientao das mesmas com a
soluo a ser utilizada, a fim de minimizar a
contaminao.
O preparo do material segundo Jones Jr. e
CASE (1990) e JONES JR. et al. (1990) citando vrios
trabalhos, implica na descontaminao, secagem e
moagem. As amostras devem ser processadas o mais
rpido possvel aps a coleta. Caso isso no possa
ser efetuado de pronto, recomenda-se o transporte e
o armazenamento sob condies de refrigerao. No
Scientia Agraria, v.8, n.1, p.1-17, 2007.
DETERMINAES ANALTICAS
DIGESTO VIA MIDA
Nitrognio: O nitrognio no tecido vegetal
encontrado na forma orgnica integrando aminocidos
e protenas. Por ocasio da anlise convertido a
amnio atravs de uma digesto sulfrica com auxlio
de catalisadores como o K 2SO 4 e o CuSO 4 sob
aquecimento em bloco digestor. Elementos como
1
JACQUES, G.L.; VANDERLIP, R.L.; WHITNEY, D.A.; ELLIS JR., R.
Nutrient contents of washed and unwashed grain sorghum plant
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Processo da neutralizao do H 2 SO 4 : A
neutralizao do cido sulfrico deu-se da seguinte
forma:
Considerando-se que a amostra digerida foi
diluda em balo volumtrico de 100 mL e o volume
usado na destilao foi de 25 mL, tem-se:
Para neutralizao de 1 mol de H2SO4 so
necessrios 2 mol de NH3. Conseqentemente, para
neutralizao de H+ preciso 1 mol de NH3.
MUNTER, R.C.; GRANDE, R.A. Plant tissue and soil extract analysis
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Heyden and Sons, 1981. p. 653-672.
soluo de anlise.
Esta recomendao aproxima-se bastante do
procedimento de HILDEBRAND et al., (1976) que
sugerem a dissoluo das cinzas em HCl diludo a
10% com posterior diluio 1:10.
Em trabalho envolvendo o comportamento do
milho sob calagem com calcrio comercial e da
formao Irati, o mtodo relacionou com alta
significncia os teores do solo com os teores de
mangans nas folhas conforme pode ser constatado
na Figura 2 (ASSMANN et al., 1999).
g kg
-1
FSFORO
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
1
NORMALIDADE
Morfotipo Cinza
Morfotipo Amarelinha
FIGURA 1 Efeito da concentrao do cido clordrico na leitura de fsforo em matrizes de erva-mate. Adaptado de NEIVERTH et al.
(2003).
160
Mn folha
120
80
40
0
10
13
16
19
22
25
Mn solo
FIGURA 2 Teores de mangans no solo extrado com DTPA-TEA (mg kg-1 M. S.) e no tecido das folhas da planta de milho obtido com
HCl diludo a 10% (mg kg-1 M. S.), modificado de ASSMANN et al. (1999).
Mtodo (%)
Elementos
Digesto
Nitro-perclrica
Digesto Cadinho
Porcelana
No Digesto
-1
HCl 0,33 mol L
Ca
K
Mg
Al
100,00
100,00
87,18
100,00
64,45
86,31
93,62
90,34
75,11
97,11
100,00
88,45
Soluo estoque
(mL)
cido sulfrico
-1
5 mol L
(mL)
gua deionizada
(balo de 100 mL)
Concentrao
-1
(g mL )
0,0
5,0
10,0
15,0
20,0
25,0
4
4
4
4
4
4
90
85
80
75
70
65
0
4
8
12
16
20
Soluo de aferio
(mL)
5
5
5
5
5
5
reativo
(mL)
2
2
2
2
2
2
Concentrao
-1
(g 5 mL )
0
20
40
60
80
100
matria seca (M.S.) utilizada, que deve ser levado em
conta no clculo. Da mesma forma a matria tambm
pode variar de 0,200 at 1,0 g. Quanto menos
biomassa for digerida, menor o volume do balo
volumtrico: 1 g M.S., balo de 100 mL; 0,5 g M.S.,
balo de 50 mL, e assim por diante. Estes
procedimentos foram adaptados de MALAVOLTA et
al. (1997).
Assumindo uma curva de 0 - 20 - 40 - 60 - 80
- 100 mg 5 mL-1, conforme a Tabela 4.
Absorbncia
0,0
0,150
0,297
0,450
0,608
0,750
[ P ] g 5mL
0,0
20,0
40,0
60,0
80,0
100,0
Curva de calibrao
0,8
Absorbncia
0,6
0,4
0,2
0
0
20
40
60
80
Concentrao ug 5mL-1
100
10
Como expressamos
concentrao em mg L-1 vem:
os
valores
de
POTSSIO
O princpio da determinao do potssio requer
o fotmetro de chama porque este equipamento
quantifica os ftons emitidos pelos tomos de
potssio, excitados pelo calor de uma chama de GLP
(gs liquefeito de petrleo), podendo atingir uma
temperatura de 700 oC (TOM,1997).
Marcha analtica
Preparo da soluo estoque de potssio:
Dissolver 0,9534 g de KCl em 500 mL de gua
deionizada, resultando em 1000 mg K L-1.
Soluo padro
11
-1
-1
mg L
mg mL
g mL
Emisso
0
5
10
20
40
0,000
0,005
0,010
0,020
0,040
0
5
10
20
40
0,0
5
12
22
40
SDIO
O princpio para determinao do sdio, por
se tratar de fotometria de emisso o mesmo
conforme citado acima para o potssio.
Marcha analtica
Preparo da soluo estoque de sdio: Dissolver
1,27105 g de NaCl em 500 mL de gua deionizada,
resultando em 1000 mg Na L-1 (mg L-1 = g mL-1).
Soluo padro
12
-1
-1
mg L
mg mL
g mL
Emisso
0
5
10
20
40
0,000
0,005
0,010
0,020
0,040
0
5
10
20
40
0
5
11
20
40
Marcha analtica
As curvas para determinao destes
elementos so preparadas a partir de uma soluo
estoque que contm quantidades definidas para
cada elemento por litro. As solues estoque so
preparadas a partir de padres comerciais P.A.,
contendo 1000 mg do elemento em ampolas
lacradas, conforme a Tabela 7.
TABELA 7 Composio da soluo padro de Ca, Mg, Fe e Mn.
Elemento
Concentrao
Ca
Mg
Fe
Mn
0,5g L
-1
0,1g L
1,0 g L-1
-1
1,0 g L
-1
13
14
ZINCO
Marcha analtica
Soluo padro de zinco: Pipetar em balo
volumtrico de 100 mL 0,0 - 0,01 - 0,03 e 0,05 mL da
soluo estoque, que contm 1g L-1 de Zn, adicionar
10 mL cido clordrico 0,1 mol L-1 (4,25 mL HClconc.
em balo volumtrico de 500 mL) e completar o
volume com gua deionizada. Com este procedimento
obtm-se a soluo para calibrao conforme abaixo
especificado.
15
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem aos revisores cientficos
pelas valiosas contribuies, que permitiram o
aperfeioamento do texto.
REFERNCIAS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
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Recebido em 04/10/2006
Aceito em 03/04/2007
17