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Determinacin espectrofotomtrica de nitritos

Fecha de Entrega: 06/06/2014

Fecha de realizacin: 03/06/2014

Fundamento Terico
Los nitritos se pueden formar tanto por la oxidacion
del amoniaco como por la reduccin del nitrato, ya
que son una especie intermedia entre ambos. Estos
procesos ocurren en el mar por accin de bacterias u
otros organismos. Tanto el nitrito como muchas otras
sustancias se pueden convertir en compuestos
coloreados
para
ser
determinados
espectrofotomtricamente. La espectrofotometra
consiste en la absorcin de radiacin electromagntica
por parte de la sustancia, la cual est relacionada con
la concentracin del componente en la solucin. La
cantidad de radiacin absorbida por la muestra se
describe mediante la Ley de Beer.
Seccin experimental
Reactivos:
-

Disolucin madre de nitritos (NO2-) 7,030

0,021 mg/L.
Reactivo para la generacin de color.

Equipo:
-

Donde:
ArNH2= Amina aromtica
Ar-N=N-Ar-NH2= Colorante azoico

Formulas:

1) El volumen de la disolucin madre de nitritos

necesario para preparar la curva de calibracin
se determin utilizando la siguiente frmula:
C1V1=C2V2
Donde:
C1= Concentracin de la disolucin madre de nitritos.
V1= Volumen de la disolucin madre de nitritos.
C2= Concentracin de la disolucin deseada
V2= Volumen final de la disolucin.
2) La concentracin de la disolucin incgnita
Delfn se despejo de la siguiente ecuacin de
la curva de calibracin:

Espectrofotmetro Thermo modelo Spectronic

20D+

Datos preliminares

ArNH2 +NO2- +2H+ ArNN+ +2H2O

ArNN+ + HAr-NH2 Ar-N=N-Ar-NH2 +H+

Reacciones:

1) Reaccion de formacin de nitritos por la

accin de bacterias sobre el nitrgeno
amoniacal:
2NH3 +3O2 + bacterias 2NO2- + 2H+ +2H2O

2) Reacciones para la generacin de color:

y = 1,0281x - 0,0018
Donde:
y= Absorbancia de la muestra incognita Delfn
x= Concentracin de la muestra incognita Delfn
Datos experimentales
Cuadro#1. Datos para la curva de calibracin para la
determinacin espectrofotomtrica de nitritos a partir de una
disolucin madre de 7,030 0,021 mg/L a una longitud de onda
de 543 nm.
Numero de
muestra

Concentracin
(0,001 mg/L NO2-)

Absorbancia
( 0,001 nm)

0,05624

0,054

0,11248

0,112

0,16872

0,170

0,22496

0,233

0,28120

0,284

Blanco

0,00000

0,000

Grafico #1. Curva de calibracin para la determinacin espectrofotomtrica de nitritos a partir de una disolucin madre de 7,030 0,021 mg/L a una longitud de onda de 543 nm.
0.28

0.3

f(x) = 1.03x - 0
0.25 R = 1 0.23

0.2

Absorbancia ( 0,001 nm)

0.17

0.15
0.11

Cuadro#2. Medida de la absorbancia de la muestra incgnita

Delfn en el espectrofotmetro marca Thermo y modelo
Spectronic 20D+ para la determinacin espectrofotomtrica de
Repeticin

0.1
0.05
0.05

Absorbancia
( 0,001 nm)

0
0

0,197

0,211

0,212

Concentracin ( 0,0011mg/L)
Grafico 1: Curva de Calibracin.

nitritos.

Discusin de resultados
Resultados
La concentracin promedio obtenida de nitritos en la
muestra incgnita Delfn fue de 0,2034
0,0011 mg/L NO2-, con una desviacin
estndar relativa de 0,0061 y un porcentaje de
desvo relativo de 3,00 %.

Cuando se quiere determinar una sustancia por

espectrofotometra, esta tiene que absorber la luz, la
cual es directamente proporcional a la concentracin
de la muestra, y esta absorcin se debe poder
distinguir de otras sustancias que se encuentren en la
disolucin. La absorcin en la regin ultravioleta
generalmente es de poca utilidad debido a que la
mayora de los compuestos absorben luz en esta
regin. Debido a esto, la regin del espectro visible es
la que normalmente se utiliza en este tipo de anlisis,
los cuales tambin llevan el nombre de anlisis
colorimtricos (1), debido a que los compuestos
forman un colorante azoico mediante diazoacin y
acoplamiento con una amina orgnica (2). En el caso
de los nitritos se utiliza el reactivo de Griess, el cual
detecta la presencia de nitritos y emite un color rosado
que se puede determinar a 543 nm

espectrofotomtricamente El colorante azoico se

forma por la reaccion de sulfamida y N-1
naftilendiamina en presencia de cido fosfrico (8).
Los niveles de nitritos son especialmente importantes
para ser determinados en el rea de alimentos,
principalmente embutidos, fluidos biolgicos y en el
rea de aguas naturales. Los nitritos pueden producir
compuestos cancergenos al reaccionar con aminas
secundarias y terciarias produciendo nitrosaminas.
Ademas interaccionan con los glbulos rojos de la
sangre y producen metahemoglobinemia, la cual
impide el transporte de oxgeno al cuerpo (3).
Tambin se ha comprobado que hay una mayor
concentracin de nitritos hay una descomposicin de
materia orgnica ms activa, sea en la zona euftica.
El nitrito tambin se encuentra junto con otras formas
de nitrgeno mineralizado como amoniaco y nitrato en
los suelos y se ha visto que no supera generalmente el
2%. Se acumulan tambin en suelos abonados con
fertilizantes nitrogenados a un pH superior a 7,7 (9).
Existen otros mtodos para determinar nitritos ademas
del mtodo colorimtrico. El principal es el mtodo
de cromatografa inica, consiste en utilizar resinas de
intercambio inico. Los iones que estn presentes se
van a separar gracias a las retenciones que sufren
cuando interaccionan con la fase fija de las columnas
cromatografas, y cuando se separan, la muestra pasa
por un detector que puede ser amperomtrico,
conductimtrico, UV, entre otros; y se reconoce la
seal obtenida con respecto al tiempo de retencin.
Con esto se obtienen cromatogramas en donde el lugar
de los mximos indica el in que est presente y el
rea muestra que cantidad de dicho ion est presente
en la muestra. Las principales aplicaciones de este
mtodo son en las aguas de consumo, aguas
minerales, bebidas, productos crnicos, productos
vegetales y alimentacin infantil (4). Otros mtodos
que existen para determinar nitritos son la
cromatografa liquida de alta presin, electroforesis
capilar y mtodos potenciomtricos (3).
Para la determinacin espectrofotomtrica de nitritos
se utiliz el Mtodo de la Curva de Calibrado. Este
consiste en medir varias disoluciones patrn de la
sustancia que se est analizando, y un blanco del

disolvente. Luego se
determina cada una de sus
absorbancias a una determinada longitud de onda.
Para el caso del nitrito esta fue de 543 nm. La
concentracin de la muestra incgnita se encontraba
entre los lmites de las concentraciones de esos
patrones. En esta curva se representa la absorbancia en
funcin de la concentracin (2-10). Finalmente la
concentracin de la muestra incgnita Delfn se
despejo de la ecuacin de la recta. Como se puede
observar en el Grafico 1, el eje y representa las
absorbancias y el eje x las concentraciones, por
tanto, al sustituir la y por la absorbancia de la
muestra incgnita medida en el espectrofotmetro, se
puede fcilmente averiguar su concentracin.
A pesar de que este mtodo de la curva de calibracin
es lento debido a la manipulacin y el proceso que
requiere preparar todos los patrones, es el mejor
mtodo a utilizar cuando las curvas no son lineales,
debido a que los otros mtodos resultan ser poco
seguros (2). El Mtodo de los Mnimos Cuadrados es
la base de las curvas de calibracin en
espectrofotometra,
en
donde
la
variable
independiente en el eje de las ordenadas (sea las
absorbancias) se grafica contra la variable dependiente
en el eje de las abscisas (sea las concentraciones).
Los
que
se
esperara
es
que
la grfica se aproxime a una lnea recta, lo cual es
muy difcil debido a los errores aleatorios del
procesos, por lo tanto el mtodo de los mnimos
cuadrados ajusta la mejor lnea recta que conecte
todos los puntos. La aptitud de este mtodo depende
del valor del cuadrado del coeficiente de correlacin
lineal (R2), el cual debe ser mayor a 0,998 e
idealmente 1, para garantizar un anlisis adecuado
(11). En el Grafico 1 se puede observar que el valor
de R2 fue de 0,9994, un valor bastante acertado para la
vialidad del mtodo.
En la determinacin espectrofotomtrica de nitritos,
los principales errores que se pudieron presentar
pueden deberse tanto a errores personales,
principalmente a la hora de tomar las alcuotas
correspondientes, y a un tipo de error instrumental que
afecta a las celdas espectrofotomtricas.

El aforo de las pipetas generalmente suele ser un

proceso que conlleva en muchas ocasiones a
desviaciones en los resultados, ya sea por la presencia
de burbujas en la punta de la pipeta despus de aforar,
o por pequeas desviaciones con respecto al menisco
(que este se encuentre un poco ms abajo o arriba de
la lnea de aforo). Igualmente los instrumentos como
las pipetas, pueden contener o entregar volmenes un
poco distintos a los indicados en su graduacin,
debido al uso de estos instrumentos a temperaturas
leve o significativamente diferentes de la temperatura
que se us para su calibracin (5).
Las celdas espectrofotomtricas presentan el problema
de que en las paredes de estas se pueden producir
perdidas de radiacin por reflexin de las interfaces,
en donde Puede haber una absorcin significativa en
las paredes de la celda. Estas prdidas pueden ser
bastante considerables. Tambin se puede presentar el
fenmeno de prdidas por dispersin en la solucin,
ya que el haz de luz puede sufrir una disminucin de
potencia durante su pasaje a travs de la solucin,
como consecuencia de la dispersin producida por las
molculas de gran tamao o por las partculas no
homogneas (5). Igualmente no se descarta la
posibilidad de que a la hora de limpiar las celdas,
quedara algn rastro de grasa o que estas estuvieran
rayadas. La grasa, polvo y las huellas dactilares
producen variaciones en la transmitancia de la cubeta
(6). Ademas, al mantener las muestras descubiertas
pueden entrar pequeas partculas de polvo a la
disolucin, y el polvo dispersa la luz, que aparece en
un espectrofotmetro como absorbancia. (1). Es
preciso indicar que se recomienda siempre trabajar
con la misma cubeta para todas las repeticiones de
muestras a analizar. Esto debido a que no todas las
cubetas son exactamente iguales, ademas de que
algunas pueden presentar una ralladura por donde para
la luz y tal vez las otras no. La utilizacin de distintas
cubetas en la determinacin espectrofotomtrica de
nitritos pudo influenciar en la desviacin de los
resultados de las tres repeticiones.
Finalmente otras fuentes de error que no pueden ser
controladas pero que pueden afectar los resultados
pudieron ser las fluctuaciones producidas en la
corriente elctrica, la inestabilidad de fuentes de

radiacin o la respuesta no lineal del detector, las

cuales pueden ocasionar el funcionamiento incorrecto
del equipo (7).
De acuerdo con el resultado obtenido de 0,2034
0,00011 ppm, se puede concluir que el nivel de
nitritos en la muestra incgnita Delfn no es
considerado un nivel que pueda tener graves efectos
txicos en la salud, debido a que tanto el nitrito como
el nitrato se presenta en concentraciones toxicas
cuando superan los 45 ppm (9), valor bastante alejado
del que se determin en esta prctica. Por lo tanto,
se descarta el riesgo de que esta concentracin en el
cuerpo pueda producir metahemoglobinemia o de
presentar riesgo cancergeno o mutagnico.
Tambin se puede concluir la importancia de los
mtodos espectrofotomtricos en muchas reas como
por ejemplo alimenticia, ambiental, mdica y biosanitaria. En el caso de esta ltima rea, se ha
estimado que alrededor de un 95% de los anlisis
cuantitativos
se
realizan
por
medio
de
espectrofotometra. Una de las grandes ventajas que
tienen estos mtodos es su gran sensibilidad, pudiendo
analizar muestras con concentraciones entre 10-4 y 106
M. Ademas son mtodos de gran rapidez, a
diferencia de los mtodos clsicos de anlisis como
gravimetras y volumetras, lo que hace que muchas
veces se prefieran, a pesar de que los mtodos
espectrofotomtricos tengan la desventaja de que su
exactitud no es muy buena comparada con los
mtodos clsicos; sin embargo, su precisin es
bastante aceptable, con valores de 1 o 2% de
incertidumbres relativas. Es por esto que actualmente
la espectrofotometra UV-Visible es de las tcnicas
analticas ms utilizadas (7).
Referencias Bibliogrficas
1.

Harris,
D.
Anlisis
Qumico
Cuantitativo; Tercera edicin (Sexta
edicin original); Reverte, 2007, p
415.

2. Pino Prez, F: Prez Bendito, D.

Anlisis de elementos traza por
espectrofotometra
de
absorcin
molecular uv-visible. Universidad de
Sevilla, Sevilla, 1983, pp 163, 411.
3. Cabrera
Molina,
E;
Hernndez
Garciadiego, L; Gmez Ruiz, H;
Caizares Macas, M. Determinacin
de nitratos y nitritos en agua.
Comparacin de costos entre un
mtodo de flujo continuo y un
mtodo estndar. Journal of the
Mexican Chemical Society, vol. 47,
Sociedad Qumica de Mxico, Mxico,
2003.

4. Cromatografa Inica:
http://laboratoriotecnicasinstrumenta
les.es/analisisqumicos/cromatografa-inica
(Accesado el 04 de junio del 2014 a
las 6:44 pm).
5. Douglas A. Skoog, Donald M. West, F.
James Holler, Stanley R. Crouch.
Fundamentos de Qumica Analtica;
Octava Edicin; CENGAGE Learning,
2005, p 96-97, 728-729.
6. Captulo 5.- Instrumentos para la
medida prctica del color:
http://www.unirioja.es/cu/fede/color_
de_vino/capitulo05.pdf (Accesado el

03 de junio del 2014 a las 5:36 pm),

p 12.
7. Espectrofotometra de absorcin
ultravioleta-visible:
http://ocw.usal.es/cienciasexperimentales/analisis-aplicado-ala-ingenieriaquimica/contenidos/course_files/Tem
a_3.pdf (Accesado el 04 de junio del
2014 a las 3:23 pm), pp 6,11, 34-35.
8. Gallego Pic, A; Gonzlez Fernndez,
I; Snchez Gimeno, B; Fernndez
Hernando, P; Garcinuo Martnez, R;
Bravo Yage, J; Pradana Prez, J;
Navarro Pascual, R; Durand Alegra, J.
Contaminacin Atmosfrica. Editorial
UNED, 2012, p 185.
9. Snchez Molina, V; Valds Gonzlez,
J; Coto Campos, J; Sols Montiel, E;
Fernndez Araya, J; Mendelewicz
Goldwaig, M. Qumica Analtica
Experimental. Primera edicin,
Editorial EUNA, 2008, pp 139-140.
10.
Silva Garca, M. Tcnicos
Especialistas de Laboratorio del
Servicio Vasco de Salud-ozakidetza.
MAD-Eduforma, 2006, p 237.
11.
Curvas de Calibracin y Mtod
o Estadstico de Mnimos Cuadrados:
http://sisoyyomismo.files.wordpress.c
om/2012/02/practica-2-instrumentalqb.pdf (Accesado el 04 de junio del
2014 a las 8:52 pm)

e) 0,280 mg/L NO2- =

X= 9,96 10,00 mL NO2-

Apndice
CALCULOS PARA LOS VOLUMENES DE LA
DISOLUCION MADRE DE NO2- PARA
PREPARAR LA CURVA DE CALIBRACION.
a) 0,056 mg/L NO2-=
7,030 mg/L NO2- x X= 0,056 mg/L
NO2- x 250 mL

X=

7,030 mg/ L NO 2
0,056 mg/L NO 2x 250 mL

X= 1,99 2,00 mLNO2-

CONCENTRACION EXACTA DE LAS

MUESTRAS DE LA CURVA DE
CALIBRACION:
C1V1=C2V2

a) Patrn 1: 2,00 mL NO2-=

mg
x 2,00 0,006 mL
L
250 0,12mL

7,030 0,021
C2 =

C2 = 0,05624 0,00025 mg/L

b) 0,112 mg/L NO2 =

X=3,98 4,00 mL NO2c) 0,168 mg/L NO2- =
X= 5,97 6,00 mL NO22

d) 0,224 mg/L NO =
X= 7,97 8,00 mL NO2-

Incertidumbre:

0,006 2
0,05 2
0,12 2
0,021 2
+
+
+
2,00 mL 50,00 mL 250,00 mL 7,030 mg/ L

0,00438 x 0,05624

= 0,00025

b) Patrn 2: 4,00 mL NO2-=

C2 = 0,11248 0,00046
Incertidumbre:

0,01 2
0,05 2
0,12 2
0,021 2
+
+
+
4,00 mL 50,00 mL 250,00 mL 7,030 mg/L

= 0,00405 x 0,11248 = 0,00046

Incertidumbre:

0,02 2
0,05 2
0,12 2
0,021 2
+
+
+
10,00 mL 50,00 mL 250,00 mL 7,030 mg/ L

= 0,00376 x 0,28120 = 0,0011

CALCULOS DE LA CONCENTRACION DE LA
DISOLUCION INCOGNITA DELFIN.
Primera Repeticin:
y = 1,0237x -0,0018

c) Patrn 3: 6,00 mL NO2-=

0,197 nm= 1,0237x -0,0018

C2 =0,16872 0,00061

0,197nm + 0,0018 = 1,0237x

Incertidumbre:

0,01 2
0,05 2
0,12 2
0,021 2
+
+
+
6,00 mL 50,00 mL 250,00 mL 7,030 mg/ L

0,1988
=x
1,0237

0,1934 0,0011 mg/L NO2=x

= 0,00360 x 0,16872 = 0,00061

Segunda Repeticin:
d) Patrn 4: 8,00 mL NO2-=

0,2079 0,0011 mg/L NO2- = x

C2 = 0,22496 0,00091
Incertidumbre:

0,02 2
0,05 2
0,12 2
0,021 2
+
+
+
8,00 mL 50,00 mL 250,00 mL 7,030 mg/ L

= 0,00405 x 0,22496 = 0,00091

e) Patrn 5: 10,00 mL NO2-=

C2 = 0,28120 0,0011

Tercera Repeticin:
0,2089 0,0011 mg/L NO2- = x

PROMEDIO DE LAS CONCENTRACIONES.

X=

0,1934 +0,2079+0,2089
3

X = 0,2034 0,0011 mg/L NO2- mg/L NO2-

s= 0,0061
DESVIACION ESTANDAR.

PORCENTAJE DE DESVIO RELATIVO.

s=

0,0061

(0,19340,2034)2+(0,20790,2034)2 +(0,20890,2034)2%RSD= 0,2034

2

%RSD= 3,00%

x 100%