UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO CARLOS

CENTRO DE CINCIAS E DE TECNOLOGIA

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA

AVALIAO DE TRANSFERNCIA DE CALOR E MASSA DE

UM BIORREATOR AIRLIFT DE CIRCULAO INTERNA DE
BANCADA PARA A PRODUO DE CIDO CLAVULNICO

Marcel Otavio Cerri

So Carlos SP
2005

AVALIAO DE TRANSFERNCIA DE CALOR E MASSA DE

UM BIORREATOR AIRLIFT DE CIRCULAO INTERNA DE
BANCADA PARA A PRODUO DE CIDO CLAVULNICO

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO CARLOS

CENTRO DE CINCIAS E DE TECNOLOGIA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA

AVALIAO DE TRANSFERNCIA DE CALOR E MASSA DE

UM BIORREATOR AIRLIFT DE CIRCULAO INTERNA DE
BANCADA PARA A PRODUO DE CIDO CLAVULNICO

Marcel Otavio Cerri

Dissertao de Mestrado apresenta ao Programa

de Ps-Graduao em Engenharia Qumica da
Universidade Federal de So Carlos como parte
dos requisitos necessrios para a obteno do
ttulo de Mestre em Engenharia Qumica, rea de
concentrao em Pesquisa e Desenvolvimento de
Processos Qumicos.

So Carlos SP
2005

Ficha catalogrfica elaborada pelo DePT da

Biblioteca Comunitria da UFSCar

C417at

Cerri, Marcel Otvio.

Avaliao de transferncias de calor e massa em
biorreator Airlift de bancada para a produo de cido
clavulnico / Marcel Otvio Cerri. -- So Carlos : UFSCar,
2005.
116 p.
Dissertao (Mestrado) -- Universidade Federal de So
Carlos, 2005.
1. Engenharia bioqumica. 2. Bioreatores pneumtico. 3.
cido clavulnico. 4. Streptomyces clavuligerus. 5. Massa
transferncia. 6. Calor transmisso. I. Ttulo.
CDD: 660.63 (20a)

MEMBROS DA BANCA EXAMINADORA DA DISSERTAO

MESTRADO DE MARCEL OTAVIO CERRI, APRESENTADA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO CARLOS, EM 28 DE MARO
2005.

DE
AO
DA
DE

BANCA EXAMINADORA:

Prof. Dr. Alberto Colli Badino Junior

PPG-EQ/UFSCar - Orientador

Prof. Dr. Carlos Osamu Hokka

PPG-EQ/UFSCar

Prof. Dr. Jos Geraldo da Cruz Pradella

AB/IPT

Dedico este trabalho aos meus

pais por me apoiarem em todos os
momentos e sempre dando
oportunidade para eu chegar onde
estou.

AGRADECIMENTOS
Ao Prof. Dr. Alberto Colli Badino Jr. pela orientao deste trabalho,
profissionalismo, amizade e pacincia em ensinar.
Aos meus pais e meu irmo que sempre me apoiaram para eu
continuar estudando.
Ao Prof. Dr. Everaldo Csar Costa Arajo pelo auxlio nos clculos
de transferncia de calor no biorreator airlift.
minha namorada Adriana que desde que entrou na minha vida s
tem trazido alegrias e entusiasmo, tambm pela grande colaborao e
reviso deste trabalho.
Aos amigos de laboratrio, Dr. lvaro de Baptista Neto, pela
grande ajuda nas partes experimentais, Juliana pela ajuda e pacincia em
ensinar, Sheila, Luciana Brites, Luciana Futiwaki, Kamilla, Vanessa, Isara,
Patrcia, Fernando Ges e Clvis.
Aos meus amigos de graduao que ainda persistem em ficar no
Departamento de Engenharia Qumica, Marina, Antnio Carlos, Michael e
Fernando Ges.
Ao tcnico mecnico Oscar e ao tcnico de laboratrio Amadeus
pela ajuda cedida e sempre simpatia.
Aos meus amigos que me agentam, Augusto Carbol, Tiago
Varussa, Rafael (Presunto), Gerson (Fozzy), Nabil, Roberta, Richard e
todos os outros que no cabem aqui nesta folha.
A CNPQ pelo auxlio financeiro.

SUMRIO

RESUMO .....................................................................................................I
ABSTRACT ................................................................................................II
LISTA DE FIGURAS .................................................................................III
LISTA DE TABELAS .................................................................................VI
NOMENCLAUTURA ...............................................................................VIII
1. INTRODUO .......................................................................................1
2. REVISO BIBLIOGRFICA ...................................................................4
2.1. Biorreatores .........................................................................................4
2.1.1. Biorreatores tipo tanque agitado e aerado .......................................4
2.1.2. Biorreator tipo torre ou coluna de bolhas .........................................5
2.1.3. Biorreator airlift .................................................................................6
2.2. Emprego de Biorreator Airlift em Bioprocessos .................................10
2.3. Avaliao da Hidrodinmica e da Transferncia de Massa em
Biorreatores Airlift .....................................................................................14
2.4. Transferncia de Calor em Biorreatores Airlift...................................20
2.5. Antibiticos ........................................................................................22
2.6. cido clavulnico ...............................................................................25
2.7. Streptomyces clavuligerus .................................................................28
2.8. Produo de cido clavulnico por Streptomyces clavuligerus .........30
2.9. Demanda e Transferncia de Oxignio em Bioprocessos ................35
2.10. Consumo de potncia em Biorreatores ...........................................39
2.10.1. Consumo de potncia para o biorreator airlift ..............................39

2.10.2. Consumo de potncia em biorreatores convencionais .................40

2.11. Reologia de caldos fermentativos ...................................................42
3. MATERIAIS E MTODOS ....................................................................45
3.1. Biorreator airlift ..................................................................................45
3.2. Biorreator convencional .....................................................................50
3.3. Avaliao da Transferncia de calor em Biorreator airlift ..................51
3.4. Avaliao de Transferncia de Oxignio ...........................................55
3.4.1. Mtodo Dinmico considerando o Atraso da Resposta
do Eletrodo ...............................................................................................55
3.4.2. Mtodo do Sulfito ............................................................................59
3.5. Avaliao do arraste de gua do sistema biorreator mais
Condensador ............................................................................................61
3.6. Cultivos de Streptomyces clavuligerus para a produo do cido
clavulnico ................................................................................................62
3.6.1. Microrganismo ................................................................................62
3.6.2. Preservao do microrganismo e preparao de criotubos ...........63
3.6.3. Meios de Cultura ............................................................................64
3.6.3.1. Meio de cultura de Reativao (MR) ...........................................64
3.6.3.2. Meio de cultura de Inculo (MI) ...................................................64
3.6.3.3. Meio de cultura de Produo (MP) ..............................................65
3.6.4. Cultivo em Biorreatores para a produo de cido clavulnico .....65
3.6.4.1. Reativao ...................................................................................65
3.6.4.2. Etapa de Preparao do Inculo .................................................66
3.6.4.3. Cultivos em Batelada ...................................................................66

3.6.4.4. Aspectos prticos na execuo dos ensaios ...............................68

3.6.5. Mtodos Analticos .........................................................................68
3.6.5.1. Determinao da concentrao de glicerol (Cs) .........................68
3.6.5.2. Determinao da Concentrao de cido Clavulnico (Cp) .......69
3.6.5.3. Medidas Reolgicas ....................................................................70
4. RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................71
4.1. Determinao do coeficiente global de transferncia de calor (U) ....71
4.2. Avaliao do arraste de gua do sistema biorreator mais
condensador .............................................................................................76
4.3. Avaliao da transferncia de oxignio..............................................80
4.4. Comparao entre consumos de potncia de sistemas gaseificados
por unidade de volume e transferncia de oxignio nos biorreatores airlift
e convencional ..........................................................................................85
4.5. Comparao entre o mtodo dinmico e o mtodo do sulfito para a
determinao do coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio
(kLa) ..........................................................................................................88
4.6. Cultivo de Streptomyces clavuligerus para produo de cido
clavulnico ................................................................................................94
4.6.1. Cultivos em Biorreator tipo tanque agitado e aerado .....................94
4.6.2. Cultivos em Biorreator Airlift ...........................................................98
4.6.3. Comparaes entre cultivos em diferentes Biorreatores ..............101
4.6.4. Condies de cisalhamento empregadas nos cultivos .................105
5. CONCLUSES ..................................................................................110
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...................................................113

RESUMO
A importncia do biorreator airlift tem crescido no campo da
biotecnologia por aspectos como a sua alta transferncia de oxignio, obtida
atravs de consumo de potncia.
No presente trabalho foram avaliadas as condies de transferncia de
calor e massa, bem como a eficincia do condensador na reteno de gua, de
um biorreator airlift de circulao interna, onde o ar injetado pelo centro do tubo
interno, de bancada de 6 L de capacidade til. Tal biorreator dotado de tubo
interno (draft tube) oco funcionando como um trocador de calor para controle
de temperatura e de aspersor tipo cruzeta para asperso de ar.
Valores do coeficiente global de transferncia de calor (U) foram
determinados em diferentes condies de operao a partir de balano de
energia aplicado no sistema aps o mesmo atingir o estado estacionrio. Valores
de U variaram na faixa de 300 a 700 W.m-2.C-1, mostrando que o dispositivo de
troca trmica proposto foi eficiente na remoo de calor.Os resultados foram
correlacionados com a vazo de gua no interior do tubo interno e com a vazo
de alimentao de ar no biorreator.
Aps esta etapa, avaliou-se o arraste de gua do sistema biorreator mais
condensador em diferentes condies de vazo de ar e de temperaturas no
biorreator e no condensador. O condensador mostrou-se eficiente na reteno
de gua, obtendo valores de eficincia superiores a 80%, mas no solucionou
por completo o problema de perda de gua do sistema por arraste pelos altos
fluxos de ar em que se opera o biorreator airlift. A varivel vazo de ar foi a
varivel que influenciou mais significativamente o arraste de gua.
A transferncia de oxignio foi avaliada atravs do coeficiente
volumtrico de transferncia de oxignio (kLa). Para efeito de comparao,
valores de kLa foram obtidos no biorreator airlift operado numa faixa de vazo
especfica de alimentao de ar de 1 a 5 vvm e em biorreator convencional de 4
L, em diferentes condies de agitao (600, 800 e 1000 rpm) e aerao (0,5 e
1,0 vvm). Dois mtodos para determinao do kLa foram empregados, o mtodo
do sulfito e o mtodo dinmico considerando o atraso da resposta do eletrodo.
Este ltimo que gerou resultados entre 2 e 6 vezes inferiores, dependendo do
tipo do biorreator, pois avalia o kLa em meios coalescentes, similares maioria
dos caldos de fermentao.
Por fim, para validar a utilizao do sistema como biorreator, foram
realizados cultivos com Streptomyces clavuligerus visando produo de cido
clavulnico, um potente inibidor de -lactamases, enzimas produzidas por
microrganismos patognicos que clivam o anel dos antibiticos -lactmicos.
Foram realizados quatro cultivos, dois em biorreator airlift e dois em biorreator
convencional (Bioflo III) em duas diferentes condies de transferncia de
oxignio (kLa) e os resultados foram comparados em termos de produo do
cido clavulnico.
As concentraes mximas de cido clavulnico obtidas nos cultivos em
biorreator airlift foram superiores quelas obtidas em biorreator tipo tanque
agitado e aerado, com menores ndices de consistncia (K), mostrando maior
cisalhamento nos biorreatores airlift nas mesmas condies de transferncia de
oxignio.
Em termos globais, os resultados obtidos sugerem esse biorreator como
o mais adequado para este tipo de cultivo, justificado pelas adequadas
transferncias de calor e massa aliadas ao menor consumo de energia.

II

ABSTRACT
The importance of the airlift bioreactor has grown in the biotechnology
field by aspects as high oxygen transfer, with power input low.
In this work were study the conditions heat and mass transfer, as well
as the condenser efficiency in the water retention, of an airlift bench bioreactor of
internal circulation of useful capacity 6 L. Such bioreactor is endowed with hollow
draft tube working as a heat charger for temperature control and of aspersor type
crosspiece for aspersion of air.
Values of the heat transfer global coefficient (U) were certain in different
operation conditions starting from applied energy balance in the system after the
same to reach the steady state. Values of U varied in the range from 300 to 700
W.m-2.C-1, showing that the device of thermal change proposed was efficient to
heat removal. The results were correlated with the water flow inside the draft tube
and with the feeding air flow in the bioreactor.
After this stage, it was evaluated water drags of the bioreactor system
plus condenser in different conditions of air flow and temperatures in the
bioreactor and in the condenser. The condenser was shown efficient in the water
retention, obtaining efficiency superior values to 80%, but it didn't solve the
problem of water loss by water drag for the high air flows in that the airlift
bioreactor is operated. The variable air flow was the variable that influenced more
significantly water drags.
The transfer oxygen was evaluated through the oxygen transfer
volumetric coefficient (kLa). For comparison, kLa values were obtained in the airlift
bioreactor operated in a range of specific feeding air flow from 1 to 5 vvm and in
conventional bioreactor of 4 L, in different agitation conditions (600, 800 and
1000 rpm) and aeration (0,5 and 1,0 vvm). Two methods for kLa determination
were employees, the sulfite method and the dynamic method considering the
delay of the electrode answer. This last one that generated results between 2 and
6 times inferior, depending of bioreactor type, because it evaluates the kLa in
coalescent media, similar to most of the media fermentation.
Finally, to validate the use of the system as bioreactor, cultivations with
Streptomyces clavuligerus seeking to the production of clavulanic acid, a potent
inhibitor of -lactamase, enzyme producted by patogenics microorganism that
broke -lactamic rings of antibiotics. Four cultivations were accomplished, two in
airlift bioreactor and two in bioreactor conventional (Bioflo III) in two different
conditions of oxygen transfer (kLa) and the results were compared in terms of
clavulanic acid production.
The maximum clavulanic acid concentrations obtained in the cultivations
in airlift bioreactor were superior those obtained in conventional bioreactor, with
minors consistence index (K), showing larger shear rate in the airlift bioreactors in
the same conditions of transfer oxygen.
In global terms, the obtained results suggest that bioreactor as the most
appropriate for this cultivation type, justified for the appropriate heat and mass
transfers formed an alliance with the smallest energy consumption.

III

LISTA DE FIGURAS
Figura 2-1 Biorreator convencional tipo tanque agitado e aerado..............5
Figura 2-2 Biorreator tipo coluna de bolhas................................................6
Figura 2-3 Biorreator airlift com circulao externa.....................................8
Figura 2-4 Biorreator airlift de circulao interna.........................................8
Figura 2-5 Regimes de circulao em biorreatores Airlift..........................19
Figura 2-6 - Frmula estrutural de penicilinas e cefalosporinas................24
Figura 2-7 Frmula estrutural da molcula de cido clavulnico..............25
Figura 2-8 Participao do glicerol e ornitina na biossntese do cido
clavulnico.................................................................................................28
Figura 2-9 Imagens tpicas de Streptomyces clavuligerus
(Pinto, 2002)..............................................................................................29
Figura 2-10 - Caminho percorrido pelas molculas de oxignio em
processos aerbios (Bailey e Ollis, 1986).................................................38
Figura 3-1 Biorreator airlift e esquema da circulao do fluido................49
Figura 3-2 Desenho esquemtico com cotas e detalhe do aspersor.......50
Figura 3-3 Esquema para determinao experimental do coeficiente global
de transferncia de calor...........................................................................52
Figura 3-4 Diagrama do balano de energia do biorreator airlift.............53
Figura 3-5 Representao esquemtica da concentrao do oxignio em
funo do tempo para a definio da constante de atraso do eletrodo....57
Figura 4-1 Grfico do U calculado em funo de U experimental...........76
Figura 4-2 Grfico do arraste calculado versus arraste experimental.....79

IV

Figura 4-3 Exemplo do ajuste do modelo para determinao do

coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio................................81
Figura 4-4 Coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio kLa em
funo da vazo de ar...............................................................................83
Figura 4-5 Grfico do consumo de potncia especfica de sistema
gaseificados em funo do kLa..................................................................87
Figura 4-6 Esquema ilustrativo de solues coalescentes e nocoalescentes..............................................................................................89
Figura 4-7 Valores de kLa para o biorreator airlift em funo da vazo de
ar obtidos pelo mtodo dinmico e de sulfito............................................91
Figura 4-8 Valores de kLa para o biorreator convencional em funo da
vazo de ar obtidos pelo mtodo dinmico e de sulfito.............................93
Figura 4-9 Resultados do cultivo B1 em biorreator tipo tanque agitado e
aerado a 600 rpm e 0,5 vvm......................................................................95
Figura 4-10 Resultados do cultivo B2 em biorreator tipo tanque agitado e
aerado a 800 rpm e 0,5 vvm......................................................................96
Figura 4-11 Comparao entre os cultivos B1 e B2 , concentrao de
cido clavulnico (Cac) e oxignio dissolvido (%), ndice de escoamento
(K)..............................................................................................................97
Figura 4-12 Resultados do cultivo A1 em biorreator Airlift com aerao de
3 vvm.........................................................................................................98
Figura 4-13 Resultados do cultivo A2 em biorreator Airlift com aerao de
4,08 vvm....................................................................................................99

Figura 4-14 Comparao entre os cultivos A1 e A2, concentrao de cido

clavulnico (Cac) oxignio dissolvido (%) e ndice de consistncia
(K)...........................................................................................................100
Figura 4-15 Comparao dos cultivos A1 e B1, com a produo de cido
clavulnico (Cac), ndice de consistncia (K) e oxignio dissolvido
(OD).........................................................................................................102
Figura 4-16 Perfis de concentrao de cido clavulnico (Cac), ndice de
consistncia (K) e concentrao de OD para os cultivos A2 e B2..........103
Figura 4-17 Valores de produo de cido clavulnico para os cultivos A1,
B1, B2 e A2.............................................................................................105
Figura 4-18 Grfico do ndice de consistncia mxima em funo da
velocidade de cisalhamento....................................................................108
Figura 4-19 Grfico de produo de cido clavulnico mximo em funo
da velocidade de cisalhamento...............................................................109

VI

LISTA DE TABELAS

Tabela 2-1 Valores aproximados dos coeficientes globais de

transferncia de calor (U) para algumas situaes fsicas........................22
Tabela 3-1 - Caractersticas dos cultivos realizados em biorreator airlift e
convencional..............................................................................................67
Tabela 4-1 - Valores do coeficiente global de troca trmica (U) em
diferentes condies de operao........................................................... 72
Tabela 4-2 - Dados experimentais da avaliao do arraste de gua do
biorreator airlift...........................................................................................77
Tabela 4-3 - Valores do kLa para biorreator airlift para vazes especficas
de ar de 1 a 5 vvm.....................................................................................82
Tabela 4-4 - Valores de kLa para biorreator convencional em diferentes
condies de agitao e aerao..............................................................84
Tabela 4-5 - Condies de aerao no biorreator airlift que definem os
mesmos valores de kLa encontrados no biorreator convencional

85

Tabela 4-6 Potncias transferidas por unidade de volume e kLa em

diferentes condies de operao rea para os biorreatores airlift e
convencional..............................................................................................86
Tabela 4-7 - Resultados de kLa para o biorreator airlift pelo mtodo
dinmico e do sulfito..................................................................................90
Tabela 4-8 - Resultados de kLa para o biorreator convencional pelo
mtodo dinmico e do sulfito.....................................................................92
Tabela 4-9 - Condies de kLa para os cultivos B1, B2, A1 e A2.............94

VII

Tabela 4-10 Valores de nos diferentes tipos de biorreatores nas

condies de cultivo empregadas...........................................................107

VIII

NOMENCLATURA

V& ar

: vazo de alimentao de ar (m3.s-1).

Q& : calor transferido por unidade de tempo do tubo interno oco para o
interior do biorreator airlift (W);

e : tempo de resposta do eletrodo (s)

: tenso de cisalhamento (Pa).

TI : vazo especfica de gua no interior do tubo interno (s-1)

resf : vazo especfica de gua para resfriamento (s-1)

ar : vazo especfica de ar (s-1)

& : velocidade de cisalhamento ou gradiente de velocidade (s-1).
AD : rea superficial da reigo de descida de lquido (m2)
As : rea superficial da regio de subida de lquido (m2).
C: concentrao real de oxignio dissolvido (mmol.L-1)
Ce: concentrao de oxignio dissolvido lido pelo eletrodo ou sinal do
eletrodo. (mmol.L-1)
CO2*: concentrao de saturao do oxignio ou a concentrao de
equilbrio com a presso parcial de oxignio na fase gasosa (mmol.L-1).
CO2: concentrao de oxignio dissolvido na fase lquida (mmol.L-1).
Cx : concentrao celular (g.L-1)
Cs: concentrao de substrato (glicerol) (mg.L-1)
Di : dimetro do impelidor (m)

IX

Di: dimetro do impelidor (m)

Dt : dimetro do tanque (m)
fc : fator de correo (-)
g : acelerao da gravidade (m.s-2)
He = constante de Henry (1,557.10-3 mmol.L-1.mmHg-1 a 30C);
HL : altura de lquido (m)
K : ndice de consistncia (Pa.sn).
ke: constante de atraso do eletrodo (s-1)
kLa: coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio (h-1).
M : massa molecular do gs (g.mol-1)
n : ndice de comportamento de escoamento (adimensional).
n : nmero de moles de Na2SO4 (mols)
N : freqncia de rotao (s-1)
NO2: velocidade de transferncia de oxignio (mmol.L-1.h-1).
NP : Nmero de potncia (-)
PC : potncia relativa a energia cintica (W)
Pe: presso na entrada do sistema (absoluta) (N.m-2)
PG : potncia total (W)
PI : potncia relativa a expanso isotrmica (W)
PO : consumo de potncia para o sistema no gaseificado (W)
Ps : presso na sada do sistema (absoluta) (N.m-2)
PT : presso total do sistema (absoluta).
Q: vazo volumtrica de alimentao de gs (m3.s-1)
QGS: vazo volumtrica de alimentao de gs

QLD: vazo volumtrica de lquido na regio de descida

QLS: vazo volumtrica de lquido na regio de subida
QO2 : velocidade especfica de respirao celular
Re : nmero de Reynolds (-)
T1 : Temperatura de gua na entrada do tubo interno (C)
T2 : Temperatura de gua na sada do tubo interno (C)
T3 : Temperatura de ar na entrada do reator (C)
T4 : Temperatura de ar na sada do reator (C)
T5 : Temperatura de gua na entrada de resfriamento do reator (C)
T6 : Temperatura de gua na sada de resfriamento do reator (C)
tC : tempo de circulao (s)
Tcond : Temperatura do condensador (C);
tm : tempo de mistura (s)
TMeio : Temperatura do biorreator (C)
U: coeficiente global de transferncia de calor (W.m-2.C-1);
UGS: velocidade superficial do gs na regio de subida (m.s-1)
ULD : velocidade superficial do lquido na regio de descida (m.s-1)
ULS : velocidade superficial do lquido na regio de subida (m.s-1)
V: volume do reator (m3)
vLD : velocidade linear de lquido na regio de descida
vLS : velocidade linear de lquido na regio de subida
YeO2 : frao molar de oxignio no gs de entrada;
t : tempo decorrido (s)
Tm: mdia logartmica da diferena de temperatura (C);

XI

: reteno gasosa
D : reteno gasosa na regio de descida
G : reteno gasosa na regio global
S : reteno gasosa na regio de subida
: viscosidade do fluido (kg.m-1.s-1)
: densidade do fluido (kg.m-3)
G : densidade do gs (kg.m-3)

Introduo

1 INTRODUO
Biorreatores so equipamentos utilizados para converter matrias
primas em produtos utilizando-se microrganismos, clulas animais ou
vegetais ou enzimas. Dentre os diversos tipos de biorreatores, os mais
amplamente em processos fermentativos, so os convencionais, tipo
tanque agitado e aerado e os no convencionais pneumticos tipo coluna
de bolhas e tipo airlift (Schgerl, 1987).
Biorreatores pneumticos tm se tornado interessantes na
biotecnologia, frente ao convencional tipo tanque agitado e aerado, por
conta de sua relativamente alta velocidade de transferncia de oxignio
aliada a um consumo de energia menor.
Biorreatores com circulao gerada a partir de gaseificao so
denominados de airlift. Estes tm caractersticas intermedirias entre o
tipo coluna de bolhas e o tipo tanque agitado e aerado. So aplicados
com xito em processos com necessidades de transferncias de calor e
massa eficientes como cultivos envolvendo microrganismos aerbios que
geram caldos de fermentao no-Newtonianos viscosos.
No laboratrio de Engenharia Bioqumica do Departamento de
Engenharia Qumica da UFSCar (LEB-DEQ/UFSCar), o primeiro modelo
de biorreator airlift de circulao interna do laboratrio foi proposto por
Gouveia et al. (2003). Tal sistema de 6 L de capacidade til continha um
aspersor tipo anel perfurado com injeo de ar na regio anular. Na
seqncia, Cassiano Filho (2003) avaliou a transferncia de oxignio

Introduo

nesse mesmo sistema com diferentes dimetros de tubo interno, tipo e

dimetro de aspersores e orifcios, utilizando o mtodo modificado do
sulfito de sdio para obteno do coeficiente volumtrico de transferncia
de oxignio (kLa), que gerou resultados de kLa inferiores quando
comparados aqueles obtidos em biorreator convencional tipo tanque
agitado e aerado (Bioflo III) com o mesmo mtodo de medida.
Ainda, o sistema utilizado por Cassiano Filho (2003) apresentou
como dispositivo de troca trmica, um encamisamento externo com
serpentina de mangueira de silicone, pouco eficaz para controlar a
temperatura do caldo de fermentao durante o processo de produo de
cido clavulnico, um inibidor de enzimas -lactamases que hidrolizam o
anel -lactmicos de penicilinas tornando-as inativas.
Com base nos trabalhos realizados e nos resultados encontrados
at o momento relacionados com o desempenho do biorreator airlift
projetado e construdo no DEQ/UFSCar; na busca de se efetuar melhorias
adicionais em termos transferncias de calor e massa, e de operao no
mesmo visando seu uso de forma eficiente em cultivos de longa durao
envolvendo microrganismos filamentosos aerbios, o presente trabalho
apresentou os seguintes objetivos:
- avaliao da transferncia de calor do sistema via determinao
do coeficiente global de transferncia de calor (U) em funo das vazes
de ar de alimentao e de gua, utilizando um tubo interno oco construdo
em ao inox, como dispositivo de troca trmica.

Introduo

- avaliao do arraste de gua do sistema em diferentes condies

de aerao e determinao da eficincia do condensador, para posterior
utilizao em cultivos de longa durao.
- avaliao da transferncia de oxignio no biorreator airlift
utilizando o mtodo de medida dinmico para o coeficiente volumtrico de
transferncia do oxignio (kLa) considerando o atraso do eletrodo e
comparao

dos

resultados

com

aqueles

obtidos

em

biorreator

convencional de bancada (Bioflo III).

- comparao entre valores do coeficiente volumtrico de
transferncia de oxignio (kLa) obtidos pelos mtodos do sulfito e
dinmico para os biorreatores convencionais e airlift.
- validao do sistema como um biorreator eficiente, para aplicao
em cultivos descontnuos para produo de cido clavulnico por
Streptomyces clavuligerus comparando seu desempenho em produo de
AC com resultados obtidos no biorreator convencional de bancada (Bioflo
III) em diferentes condies de agitao e aerao que definiram
diferentes valores de kLa.

Reviso Bibliogrfica

2 REVISO BIBIOGRFICA
2.1 Biorreatores
Biorreatores so todos os equipamentos utilizados para converter
matrias-primas em produtos utilizando-se microrganismos, clulas
animais ou vegetais ou enzimas. Microrganismos e clulas esto
constantemente envolvidos num ambiente adequado na tentativa de
prover condies timas de crescimento. Um biorreator mantm este
processo natural provendo condies adequadas como temperatura, pH,
substrato, sais nutricionais, vitaminas e oxignio (para organismos
aerbios), possibilitando que as clulas cresam e produzam os
metablitos (Schgerl, 1987). Embora existam diversos modelos de
biorreatores,

os

mais

comumente

empregados

em

cultivos

de

microrganismos e clulas, independentemente da escala so os

biorreatores convencional tipo tanque agitado e aerado e os no
convencionais pneumticos, tipos coluna de bolhas ou torre e airlift.

2.1.1 Biorreatores tipo tanque agitado e aerado

Esse

tipo

de

biorreator

conhecido

como

fermentador

convencional. A agitao realizada por meio de impelidores conectados

a um eixo giratrio e aerado pela parte inferior do biorreator.
O fermentador tipo tanque agitado o tipo mais importante
biorreator para processos industriais. A agitao do biorreator tipo tanque

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agitado tem vrias funes, como as transferncias de quantidade de

movimento, calor e massa, e homogeneizao das suspenses. A
otimizao de tarefas especficas para o biorreator convencional resultou
em diferentes tipos de impelidores, sendo mais utilizado impelidor tipo
turbina de seis ps planas ou tipo Rushton, com o aspersor de gs abaixo
do impelidor (Asenjo e Merchuk, 1994).
A Figura 2.1 apresenta as caractersticas de um tpico biorreator
convencional.

Figura 2-1 Biorreator convencional tipo tanque agitado e aerado

2.1.2 Biorreator tipo torre ou coluna de bolhas

Esse tipo de biorreator classificado como no convencional, ou
tambm pneumtico, apresenta uma constituio muito simples. A
homogeneizao do meio, bem como a aerao realizada via
borbulhamento de ar no fundo do frasco.

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A Figura 2.2 apresenta as caractersticas de um tpico biorreator

tipo coluna de bolhas.

Figura 2-2 Biorreator tipo coluna de bolhas

2.1.3 Biorreator airlift

Fermentador airlift um tipo especial de biorreator para
fermentao aerbia. Para este sistema importante promover a
transferncia de massa aumentando a rea interfacial (Onken, et al.1983).
O equipamento clssico para difuso do gs na fase lquida,
especialmente em fermentao aerbia o tipo tanque agitado e aerado,
na qual o ar difundido por agitao mecnica. Porm esse tipo de
fermentador apresenta uma srie de desvantagens, especialmente em
processos de grande escala, alto gasto de energia, alta complexidade de
construo e dificuldades no aumento de escala. (Onken, et al.1983).

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Estas desvantagens so superadas pelo biorreator airlift, pois no

apresenta partes mveis, na qual a difuso gs-lquido pela entrada de
ar por aspersor pneumaticamente (Onken, et al.1983).
A primeira aplicao dos princpios do airlift em fermentao foi em
Scholler-IG vat, na Alemanha na dcada de 50 para a produo de
levedura.
O meio de cultura nesse tipo de biorreator movido de baixo para
cima dentro de um tubo situado verticalmente no interior do frasco pelas
bolhas de ar produzidas no fundo do frasco de cultivo. Esse modelo
apresenta bons resultados, uma vez que h uma boa aerao e
homogeneizao do meio de cultura e pouco dano mecnico ao material
em cultivo (Park et al, 1989).
Duas

classes

bsicas

de

biorreatores

airlift

podem

ser

distinguidas (Chisti, 1989a):

- Airlift com circulao interna trata-se de uma nica coluna
dividida em duas regies internas de circulao. Estas regies so
denominadas

de

subida

(riser)

de

descida

(downcomer)

apresentadas na Figura 2-3.

- Airlift com circulao externa as regies de subida e de
descida de lquido ocupam dois tubos conectados por sees horizontais
prximas ao topo e a base da coluna do biorreator, apresentada na Figura
2-4.

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Figura 2-3 Biorreator airlift com circulao externa

Figura 2-4 Biorreator airlift de circulao interna

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Os loop reactors com circulao interna onde a mistura e a

circulao de lquido so induzidos pela injeo e movimentao de um
gs, mais conhecidos como biorreatores tipo airlift de circulao interna,
apresentam

um

tubo

concntrico

(tubo

interno).

movimento

ascendente do gs aspergido na base do reator carrega a fase lquida e

as clulas que compem o caldo de fermentao, pelo interior do tubo
interno ou pelo espao anular, dependendo da localizao do aspersor
(normalmente do tipo anel de vrios orifcios). No topo (cabea) do reator,
o gs se desprende do lquido e o lquido degaseificado desce pelo
interior do espao anular ou do tubo interno, distinta da regio por onde
ascendeu. Na base do biorreator, o fluido descendente encontra a
corrente ascendente de gs, uma regio de baixa presso, sendo
novamente carregado ascendentemente por esta, o que confere ao meio
reacional uma circulao interna contnua.
Os biorreatores airlift podem ser empregados em cultivos como
caldos mais viscosos, ao contrrio dos biorreatores tipo torre ou coluna de
bolhas, alm de no apresentar grandes problemas com relao a
coalescncia de bolhas. No entanto, a transferncia de massa entre os
elementos de fluido menor que a observada nos biorreatores
convencionais e, dependendo da escala, o perodo transiente de
circulao desde a base at o topo e novamente do topo at a base pode
ser importante (Chisti, 1989b).
Os biorreatores pneumticos tipo airlift tm atrado ateno no
campo da biotecnologia por aspectos como a sua alta transferncia de

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10

oxignio, obtida atravs de um relativo baixo consumo de potncia e

baixas tenses de cisalhamento (Chisti, 1989b).
Principalmente por proporcionar condies de baixo cisalhamento
os biorreatores airlift com circulao interna tm sido a melhor escolha
em processos nos quais a tenso de cisalhamento o fator determinante
do bom desempenho do mesmo (Chisti, 1989b).

2.2 Emprego de Biorreator Airlift em Bioprocessos

Nos ltimos anos os biorreatores airlift vm sendo cada vez mais
empregados em bioprocessos que antes utilizavam com maior freqncia
os biorreatores convencionais. Na seqncia so apresentados trabalhos
relevantes relacionados com o uso de biorreatores airlift em processos
fermentativos.
Ichi et al. (1993) desenvolveram um biorreator airlift com circulao
interna em escala comercial, para aplicao no cultivo de levedura
Candida utilis visando a extrao de RNA. A velocidade de transferncia
de oxignio e a produtividade em clulas neste biorreator foram muitos
superiores que as alcanadas em um biorreator convencional tipo tanque
agitado aerado.
Gavrilescu e Roman (1998) pesquisaram a produo de trs
antibiticos em dois biorreatores airlift com circulao externa e um com
circulao interna, comparando as suas eficincias com as de
biorreatores tipo agitado e aerado. Os antibiticos Bacitrin e Cefalosporina
C foram produzidos respectivamente por Bacilus lichenniformis e

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11

Cephalosporium acremonium cultivados em biorreator airlift com

circulao externa, e Nistatina foi produzida por Streptomyces noursei,
cultivada em um sistema de circulao interna.
Como resultado geral, a eficincia da transferncia de oxignio
(velocidade de transferncia de O2 em relao potncia aplicada) nos
biorreatores airlift foi cerca de 38% maior que a encontrada para
biorreatores convencionais, a razo entre a velocidade de transferncia
de oxignio em relao da produo de antibitico foi 22% maior no
sistema airlift. Alm do mais, a utilizao do airlift proporcionou um
aumento entre 30 40% na eficincia e economia de energia comparada
com o biorreator convencional.
Yuguo et al. (1999) pesquisaram a produo de cido ctrico por
Aspergillus niger em um biorreator airlift de circulao externa de 8,5 L de
volume. Obtiveram uma concentrao de cido ctrico de 10,6 g.L-1 com
65 horas de cultivo a uma vazo de ar de 1,3 vvm, sendo que em
biorreator de tanque agitado e aerado obtiveram uma concentrao de
cido ctrico de 9,6 g.L-1 com 200 rpm de freqncia de agitao e vazo
de ar de 1 vvm. Isto demonstra que o biorreator airlift de circulao
externa pode ser utilizado para produo de cido ctrico por Aspergillus
niger.
Jia et al. (1999) estudaram o efeito do leo de soja sobre a
transferncia de oxignio na produo de tetraciclina por Streptomyces
auroefacience CG-1 utilizando biorreator airlift. Os resultados mostraram
que o leo de soja alm de ser uma fonte de carbono vivel tambm um

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12

agente que diminui a tenso superficial na bolha de ar aumentando a

transferncia de oxignio.
Aleksieva e Peeva (2000) estudaram a biossntese de protease
cida, uma enzima hidroltica com aplicabilidade na indstria de
alimentos, atravs do cultivo de Humicola lutea 120-5 em um biorreator
airlift de circulao interna com tubo concntrico nos modos batelada e
contnuo, e compararam os resultados de produo com aqueles obtidos
em um biorreator convencional. No modo batelada, o desempenho dos
dois reatores foi similar, com as concentraes de clulas alcanando
valores mximo entre 11 e 12 g de massa seca. L-1. As atividades
proteolticas mximas estiveram entre 1100 e 1200 U.mL-1, pH que foi
iniciado em 5,8 alcanou o valor entre 3,0 e 3,5 e permaneceu
praticamente constante at o final da batelada. Houve diferenas
significativas no comportamento do crescimento de H. lutea. No biorreator
tipo tanque agitado e aerado o fungo cresceu na forma filamentosa. J no
airlift a falta de dos aparatos mecnicos gerou um ambiente favorvel
para os microrganismos, levando o H. lutea a crescer na forma de
pellets bem compactados. Aps 60 h, a forma de operao contnua foi
acionada. Os valores de concentrao de clulas estiveram entre 10 e 12
g massa seca.L-1, glicose residual, entre 4,0 e 6,0 g.L-1 e atividade
enzimtica entre 800 e 1000 U.mL-1. O regime permanente foi alcanado
aps 40 h do incio do modo contnuo. A taxa de diluio tima
empregada foi de 0,05 h-1. O processo foi operado por 14 dias com a
mxima atividade especfica de 90 U. mg-1 de massa seca de miclios e

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13

resultou em 38 U.mg-1 de glicose consumida. A produtividade volumtrica

(50 U.mL-1.h-1) foi aproximadamente trs vezes superior que a obtida no
modo batelada. A flutuao da atividade proteoltica (entre 800 e 1100
U.mL-1) foi atribuda a um escoamento inconstante de caldo. Estes
resultados indicaram que a produo de protease cida no biorreator airlift
foi comparvel alcanada no biorreator tipo tanque agitado. A maior
atividade proteoltica (2000 U.mL-1) obtida no biorreator convencional foi,
provavelmente, devido liberao da enzima no meio, causada pelo
rompimento das hifas (cisalhamento). O uso do biorreator airlift pode
contribuir para uma reduo de custo do processo, pois o consumo de
potncia deste est entre 17 a 64% menor que o de um biorreator
convencional, dependendo das vazes de aerao, que acarretam em
uma importante economia de energia.
Domingues et al. (2001) utilizaram um biorreator airlift de 5,5 L com
circulao interna, de tubo concntrico aerado na regio do tubo interno
(0,08 a 1,00 vvm) em cultivo contnuo (D=0,1 a 0,55 h-1) de leveduras
floculantes geneticamente modificadas para a produo de etanol a partir
de soro de queijo. O objetivo foi o de programar um processo de
tratamento alternativo do soro, subproduto da indstria de laticnios,
produzido em grande quantidade e altamente poluente. Ao final, produziuse o lcool com consumo total de lactose presente no soro. Com isso,
obteve-se um produto com valor econmico alm de solucionar o
problema ambiental.

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14

Snchez et al. (2002) estudaram a reologia do caldo de cultivo de

Beta vulgaris utilizando biorreator airlift de 10 L. Culturas de clulas
vegetais so consideradas uma alternativa para produo de metablitos
secundrios. Beta vulgaris produz pigmentos solveis em gua, utilizados
na indstria de alimentos e farmacutica. O biorreator airlift aerado com
vazo de ar de (0,2 vvm), atingindo um valor de kLa de 19 h-1. O caldo
apresentou caractersticas no-Newtonianas que gerou problemas de
mistura do caldo e disperso do gs, obtendo uma produo de pigmento
menor que a relatada em reatores convencionais agitados e aerados.
Gouveia

et

al.

(2003)

caracterizou

hidrodinmica

transferncia de oxignio em um biorreator airlift com circulao interna,

de tubo concntrico, com aerao no espao anular utilizando-se anel
perfurado, a partir de variaes na geometria e vazo de alimentao do
ar. A importante concluso deste trabalho que coeficiente de
transferncia de massa afetado por pequenas mudanas nas relaes
geomtricas.

2.3 Avaliao da Hidrodinmica e da Transferncia

de Massa em Biorreatores Airlift
Na seqncia encontra-se uma breve descrio dos parmetros
mais relevantes envolvidos no projeto e no desempenho de biorreatores
airlift (Chisti 1989):
- Velocidade superficial do gs: a velocidade superficial do gs na
regio de subida (UGS) , na verdade, a nica varivel de operao

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15

disponvel no sistema Airlift. Trata-se da razo entre a vazo volumtrica

de alimentao do gs (QGS) e da rea da seo transversal da regio de
subida (AS).

U GS =

Q GS
AS

Eq. 2-1

- Reteno gasosa: define-se como reteno gasosa a frao de

volume da fase gasosa na mistura gs-lquido presente no biorreator,
podendo este ser divido em reteno gasosa global (G), reteno gasosa
na regio de subida (S) e reteno gasosa na regio de descida (D)
(Chisti,1989).

G =

VG
A . + A D . D
= S S
VG + VL
AS + A D

Eq. 2-2

Dado que a fase lquida circula continuamente pelo biorreator,

definem-se as vazes volumtricas nas regies de subida (QLS) e de
descida (QLD).
Q LS = U LS .A S

Eq. 2-3

Q LD = U LD .A D

Eq. 2-4

Pela equao de continuidade:

Q LS = Q LD

U LS .A S = U LD .A D

v LS .A S .(1 S ) = v LD .A D .(1 D )

Eq. 2-5

Eq. 2-6

onde vLS e vLD so velocidades lineares de lquido nas regies de

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16

subida e descida, respectivamente. Rearranjando a equao anterior temse que:

D =

v .A

v LS .A S
. S LS S 1
v LD .A D
v LD .A D

D = . S

v LS .A S
v LD .A D

Eq. 2-7

Eq. 2-8

= 1

Eq. 2-9

Obs: atravs da relao acima, nota-se que impossvel a

condio de =1. Quando D=0, no h recirculao de gs pela regio de
descida, logo, esta ser a situao que ter que ser ultrapassada para se
iniciar a circulao no reator. Nesta situao, calcula-se o S crtico (Chisti,
1989):

CRTICO

=1

v LD .A D
v LS .A S

Eq. 2-10

- Velocidade Superficial do Lquido: A velocidade de circulao do

lquido (UCL) gerada a partir da diferena das retenes gasosas das
regies de subida e de descida, mas as variveis que tm um valor
significativo de tratamento do fenmeno so as velocidades superficiais
do lquido na regio de subida e descida, ULS e ULD, respectivamente
(Gavrilescu e Tudose, 1998b).
- Velocidade linear do lquido: As velocidades lineares do lquido
nas regies de subida e descida, vLS e vLD, respectivamente, so as

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17

velocidades superficiais do lquido nas respectivas regies, subtraindo-se

a parcela referente ao gs, como j disposto anteriormente.
- Tempo de Mistura: definido como o tempo necessrio para que
uma substncia se misture igualmente no biorreator. O tempo de mistura
(tm) muito difcil de ser correlacionado devido a sua alta sensibilidade em
relao ao local onde o traador injetado para a sua deteco (Chisti,
1989a). A sua deteco dada atravs de um ensaio tipo pulso. Quando
o valor da varivel estudada se estabiliza o tempo de mistura
determinado.
- Tempo de Circulao: O tempo de circulao (tC) diferente do
tempo de mistura (tm). Trata-se do tempo necessrio para apenas uma
volta por todo biorreator. Esta varivel tambm medida atravs de
ensaio tipo pulso, sendo determinada apenas na primeira volta.
-

Transferncia

de

oxignio:

coeficiente

volumtrico

de

transferncia de oxignio (kLa) um parmetro de extrema importncia a

ser avaliado em biorreatores em geral, j que no caso dos cultivos
aerbios o principal objetivo garantir uma transferncia de oxignio
adequada para suprir a demanda do processo.
Os parmetros definidos anteriormente para biorreatores airlift
so diretamente afetados pelas caractersticas geomtricas do sistema
que inclui a relao entre as reas de subida e descida, distncias entre a
base do reator e o limite inferior do tubo interno, entre outras. Ainda, devese salientar que diferentes tipos de aspersores podem ser empregados no
projeto e construo desses biorreatores, afetando diretamente o

Reviso Bibliogrfica

18

desempenho desses equipamentos.

Os tipos de aspersores mais difundidos no projeto de um biorreator
airlift so do tipo tubo perfurado ou placa porosa. Em condies de
operao com alta turbulncia, amplamente utilizada, o tamanho da bolha
na disperso torna-se independente do seu tamanho na origem. No
biorreator de coluna de bolhas a posio do aspersor oferece poucas
opes, j no caso do airlift no h essa limitao. O fluxo de lquido
sobre e ao redor do aspersor afetam a distribuio do gs. Segundo Chisti
(1989a), este assunto tem sido negligenciado na literatura existente.
Fields et al. (1983) estudaram a disperso de traador em
biorreatores airlift de tubos concntricos operados com a mistura ar-gua,
utilizando trs diferentes comprimentos de tubo interno, verificando a
diferena de tempo mdio de circulao. Verificaram tambm a mistura
com a presena ou no de aditivos diminuiu o tamanho das bolhas.
Chisti et al. (1986) pesquisaram a transferncia de oxignio e
hidrodinmica em biorreatores tipo coluna de bolha e airlift. Trabalharam
com trs fases, utilizando fibras celulsicas como slido. A hidrodinmica
e a transferncia de oxignio foram discutidas para diferentes
configuraes de biorreatores. Os autores mostraram que coeficiente
volumtrico de transferncia de oxignio (KLa) e reteno gasosa ()
correlacionaram-se satisfatoriamente com a velocidade superficial de gs
na regio de subida (Usg) de acordo com a equao tipo que segue:

Reviso Bibliogrfica

19

k L a = a Usg b

= c Usg d

Eq. 2-11

Onde a, b, c e d so parmetros dependentes da geometria do

biorreator, das propriedades fsicas dos fluidos e do regime de
escoamento. A presena de slidos resultou em um decrscimo acima de
80 % no kLa e reteno gasosa comparado com solues sem slidos.
Heijinen et al. (1997) determinaram trs regimes de circulao em
biorreator airlift de circulao interna, baseados em medidas e em
observao visual da presena da fase gasosa na regio de descida. A
Figura 2-5 ilustra os regimes de circulao.

Figura 2-5 Regimes de circulao em biorreatores Airlift

Regime I: o gs no est presente na regio de descida. Este

regime ocorre somente em baixas vazes especficas de alimentao de
ar (ar), quando a velocidade de circulao do lquido no suficiente
para induzir bolhas para a regio de descida.
Regime II: estratificao e estagnao das bolhas na regio de
descida. Com valores maiores para a vazo especfica de alimentao de
ar, a velocidade do lquido na regio de descida torna-se praticamente

Reviso Bibliogrfica

20

igual velocidade de subida do aglomerado de bolhas. Logo, uma

distribuio axial do tamanho das bolhas observada. A transio deste
regime para o seguinte mais gradual. Portanto, s vezes mais difcil
determinar o ponto exato de transio para o regime III, onde h a
completa recirculao do gs.
Regime III: recirculao de bolhas. Em altos valores de vazo de
alimentao de ar, a velocidade do lquido na regio de descida
suficientemente alta para a recirculao das bolhas que so arrastadas do
separador (regio de mistura) para a regio de descida.

2.4 Transferncia de Calor em Biorreatores Airlift

Nos processos fermentativos, devido existncia de reaes
bioqumicas no interior das clulas, h liberao de calor para caldo de
cultivo. Uma vez que as clulas desenvolvem suas atividades metablicas
em condies timas de temperatura, faz-se necessrio retirada
contnua de calor do meio reacional, o que realizada atravs da
passagem de fluido de resfriamento (gua) no interior de dispositivos de
troca trmica como camisa dgua e serpentinas. No projeto de
biorreatores, portanto, deve-se levar em conta a transferncia de calor no
sistema, que pode ser avaliada em diferentes condies de operao, a
partir da determinao dos coeficientes de transferncia de calor. Como
difcil quantificar os coeficientes convectivos individuais de transferncia
de calor nas regies interna e externa do dispositivo de troca trmica, a
determinao do coeficiente global de transferncia de calor (U) pode ser

Reviso Bibliogrfica

21

utilizada nesta avaliao. Deve-se lembrar que U engloba os coeficientes

convectivos individuais internos e externos e a espessura e condutividade
trmica do material de construo (vidro ou ao inoxidvel). Normalmente,
dada a alta vazo de fluido de resfriamento dentro do dispositivo de troca
trmica e alta condutividade trmica dos materiais de construo aliada
pequena espessura da parede de separao, a maior parte da resistncia
deve-se pelcula estagnada no interior do caldo de fermentao e,
portanto, U apresenta valores prximos de hCaldo.
Existem

poucas

informaes

na

literatura,

relacionadas

determinao e valores do coeficiente global de transferncia de calor (U)

em biorreatores. Alguns trabalhos informam valores ou faixas do
coeficiente convectivo da pelcula de caldo e outros propem correlaes
para estimar esse parmetro em funo das propriedades fsicas do
fluido, da geometria do biorreator e das condies de operao (Chisti,
1989). MacAdams (1954) apud Doran (1995) cita que o coeficiente
individual de transferncia de calor para aquecimento ou resfriamento de
gua encontra-se na faixa de 300 a 17.000 W.m-2.C-1. Quanto a
informaes relacionadas a caldos de cultivo, Chakravart (1971) apud
Chisti (1989) informam que hCaldo varia entre 600 e 2.400 W.m-2.C-1
enquanto que Blakebrough et al. (1983) apud Chisti (1989) obtiveram
valores de at 8.000 W.m-2.C-1 para caldos de cultivos de Aspergillus
niger e Penicillium chrysogenum.
Holman (1983) apresenta valores aproximados dos coeficientes
globais de transferncia de calor em diferentes situaes. Tabela 2.1 que

Reviso Bibliogrfica

22

segue apresenta a tabela com os valores de U.

Tabela 2-1 Valores aproximados dos coeficientes globais de transferncia de
calor (U) para algumas situaes fsicas.
Valores aproximados dos Coeficientes Globais de Transferncia de Calor (U)
Situao Fsica
W.m-2.C-1
Condensador de Vapor
1100 5600
Aquecedor de gua de alimentao
1100 8500
Condensador de R-12 resfriado com gua
280 - 850
Trocador de Calor gua gua
850 1700
Trocador de calor de tubo aletado com gua no interior dos
tubos e ar sobre os tubos
25 55
Trocador gua leo
110 350
Vapor leo Combustvel leve
170 340
Vapor leo Combustvel pesado
56 170
Vapor Querosene ou Gasolina
280 1140
Trocador de calor de tubo aletado com vapor nos tubos e ar
sobre os tubos
28 280
Condensador de Amnia, gua nos tubos
850 1400
Condensador de lcool, gua nos tubos
255 680
Trocador de Calor Gs Gs
10-40

Num trabalho mais recente, Prakash et al. (2001) estudaram a

determinao local do coeficiente de transferncia de calor em biorreator
tipo coluna de bolhas de bancada durante o cultivo com Saccharomyces
cerevisiae. O coeficiente de transferncia local de calor foi relacionado
com a velocidade superficial do gs. Os valores encontrados ficaram na
faixa de 1000 a 8000 W.m-2.C-1, para velocidade superficial de gs
variando de 0 a 0,30 m.s-1.

2.5 Antibiticos
Em 1928, enquanto estudava variantes de estafilococos no
laboratrio do St. Marys Hospital, em Londres, Alexander Fleming
observou que um fungo que contaminava uma das culturas, causava
morte das bactrias em sua vizinhana. O meio em que o fungo se

Reviso Bibliogrfica

23

desenvolvia era acentuadamente inibidor para muitos microrganismos.

Como esse fungo pertencia ao gnero Penicillium, Fleming deu o nome
de penicilina substncia antibacteriana. Uma dcada mais tarde, a
penicilina tornou-se um agente teraputico sistmico graas s brilhantes
pesquisas de um grupo de pesquisadores na Universidade de Oxford,
dirigidas

por

Florey,

Chain

Abraham.

(http://www.infomed.hpg2.ig.com.br/penicilinas.html).
Os antibiticos so definidos como agentes antimicrobianos
sintetizados por microrganismos ou plantas que provocam a morte ou
inibem o crescimento de outros microrganismos, mesmo em pequenas
concentraes.
Dentre os antibiticos de maior destaque, podem ser citadas as
penicilinas e as cefalosporinas naturais produzidas industrialmente por via
fermentativa

partir

de

linhagens

dos

gneros

Penicillium

Cephalosporium. Esses antibiticos, denominados -lactmicos por

apresentarem na sua estrutura molecular um anel do mesmo nome, vm
sendo utilizados como matrias primas na produo via sntese qumica
de antibiticos semi-sintticos (Vandamme, 1984).
A Figura 6 que segue, ilustra as estruturas das penicilinas e
cefalosporinas.

Reviso Bibliogrfica

Penicilinas

24

Cefalosporinas

Figura 2-6 - Frmula estrutural de penicilinas e cefalosporinas

As bactrias possuem uma parede celular que envolve totalmente

a membrana citoplasmtica. Tal parede mantm a forma e protege tais
microrganismos de alta presso osmtica interna. Em bactrias Gramnegativas, a poro externa da parede celular consiste de uma dupla
camada lipdica (membrana externa). A parede celular contm um
complexo polmrico de ligao cruzada quimicamente distinto, os
peptideoglicanos. Ele constitudo de cadeias de glicano que consistem
de bandas lineares e resduos piraminosdicos alternados de dois amino
acares (N-acetilglicosamina e cido N-acetilmurmico), que apresentam
ligao cruzada com peptdeos. A composio dessa ligao peptdica
cruzada tpica de cada microrganismo e confere a rigidez final da
parede celular. A camada de peptideoglicanos das bactrias Grampositivas de 50 a 100 molculas enquanto que a das Gram-negativas
possui apenas uma ou duas.
As penicilinas so inibidoras seletivas da sntese da parede celular
bacteriana, embora seja apenas uma das aes desses frmacos,
melhor compreendido que as demais

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25

2.6 cido clavulnico

cido z - (2R,5R) 3 - (-hidroxietilideno) 7 oxo 4 oxa 1 azabiciclo [3,2,0] heptano-2-carboxlico o nome oficial do cido
clavulnico. Apresentam em sua estrutura dois anis: o anel -lactmico e
o anel oxalidino (Howart, 1976 apud Britto, 1998) como apresentado na
Figura 2-3. Possui baixa atividade antimicrobiana, necessitando de altas
concentraes para manifest-la, porm o interesse comercial por este
produto centra-se na sua utilizao como inibidor de -lactamases,
administrado em conjunto com outros antibiticos, potencializando a ao
destes no combate a bactrias resistentes. A Figura 2.7 apresenta a
estrutura molecular deste composto.

Figura 2-7 Frmula estrutural da molcula de cido clavulnico.

As combinaes de amoxicilina-cido clavulnico, ticarcilina-cido

clavulnico

ampicilina-cido

clavulnico

tm

se

mostrado

comprovadamente efetivas no tratamento clnico de vrias infeces

como as do trato respiratrio, urinrio, pele, tecidos e outros. Existem, no
entanto, situaes restritivas ao seu uso devido a alguns efeitos colaterais
causados por estas combinaes (Gresser, 2001).
Segundo Brown (1981), o cido clavulnico possui efeito sinrgico

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26

aos antibiticos -lactmicos apenas quando utilizado no combate a

microrganismos

produtores

de

-lactamases.

No

combate

microrganismos no produtores de -lactamases, mas sensveis aos

antibiticos -lactmicos, no so observadas melhoras no desempenho
dos antibiticos. Em estudo realizado com bactrias produtoras de lactamases, o autor mostra que a concentrao de amoxicilina necessria
para combater as infeces em presena de cido clavulnico 100
vezes menor do que quando este antibitico foi utilizado isoladamente.
O cido clavulnico um inibidor de -lactamase, enzima
produzida por algumas bactrias, responsvel pela clivagem do anel lactmico de penicilinas e cefalosporinas o que resulta na perda da
atividade antibacteriana e conseqente ineficcia desses antibiticos no
combate a infeces causadas por bactrias patognicas.
cido clavulnico apenas um modesto antibitico, efetivo contra
infeces bacterianas em humanos, mas um potente inibidor e inativador
das enzimas -lactamases que confere s bactrias resistncia contra os
antibiticos -lactmicos.
Haginaka et al. (1981) investigaram a estabilidade do cido
clavulnico em solues aquosas onde o pH variou de 3,2 a 10 a 35 C e
revelaram que a degradao em solues alcalinas dez vezes mais
rpida que a degradao em meio cido, sendo que a mxima
estabilidade foi com o pH 6,4.

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27

Bersanetti et al. (2000) tambm estudaram a velocidade de

hidrlise do cido clavulnico em diferentes valores de pH, entre 2,5 a
10C, a 20 C, recolhendo-se amostras periodicamente para a
determinao da concentrao de cido clavulnico. Os autores
observaram que a faixa de maior estabilidade ficou entre valores de pH de
5 a 7.
O cido clavulnico encontrado em medicamentos na forma de
sais de metais alcalinos, clavulanato de potssio, em conjunto com
antibiticos -lactmicos, como a amoxicilina (Baptista-Neto, 2000).
A biossntese do cido clavulnico considerada mais complexa
que as relatadas das penicilinas e cefalosporinas (Towsend, 2002).
Chen et al. (2003) pesquisaram a influncia do glicerol, da arginina
e ornitina na produo de cido clavulnico por Streptomyces clavuligerus
em cultivos em batelada e em batelada alimentada. Os autores mostraram
que a ornitina e arginina tiveram efeito positivo na biossntese do cido
clavulnico, mas obteve-se melhor resultado com a alimentao de
ornitina do que de arginina, sendo a ornitina um melhor estimulador para
a produo de cido clavulnico. A funo do glicerol tambm foi
pesquisada neste trabalho e concluiu-se que o mesmo tem funo muito
importante na produo de cido clavulnico, sendo o precursor na
formao da estrutura C3 desse composto, como ilustrado na Figura 8, e
que a ornitina o precursor na formao da estrutura C5 do cido
clavulnico. Este estudo, com alimentao intermitente de glicerol e
ornitina, resultou em um acrscimo de 270% (311 mg.L-1) na

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28

concentrao de cido clavulnico.

Figura 2-8 - Participao do glicerol e ornitina na biossntese do cido

clavulnico

2.7 Streptomyces clavuligerus

A grande maioria dos produtos teraputicos utilizados no combate
s doenas infecciosas causadas por bactrias sintetizada atravs do
metabolismo secundrio de microrganismos isolados do solo, como
fungos e bactrias filamentosas, entre as quais incluem as do gnero
Streptomyces.
Streptomyces sp so actinomicetos que, em cultivo submerso,
produzem hifas vegetativas (miclios) que no se fragmentam com
facilidade. So microrganismos gram-positivos, aerbios, primariamente
habitantes do solo e semelhantes aos fungos (Pinto, 2002). Na Figura 2-9
ilustra imagens tpicas de Streptomyces clavuligerus

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29

Figura 2-9 Imagens tpicas de Streptomyces clavuligerus (Pinto, 2002).

Existem vrias espcies de Streptomyces, bactria filamentosa

estritamente aerbia, que produzem cido clavulnico entre as quais:
Streptomyces clavuligerus, Streptomyces jumonjenensis e Streptomyces
kasurahamanus (Butterwoth, 1984).
Streptomyces clavuligerus uma das espcies produtora de cido
clavulnico, alm de outros compostos -lactmicos, como a penicilina N,
a desacetoxicefalosporina C e a cefamicina C. Por se tratar de uma
bactria estritamente aerbia e filamentosa, o cultivo de Streptomyces
clavuligerus apresenta elevada a demanda de O2 e, simultaneamente,
gera caldos com alta viscosidade aparente, o que acaba por dificultar a
transferncia de O2 da fase gasosa para a fase lquida, reduzindo a
concentrao de O2 dissolvido, o que pode limitar o crescimento
bacteriano e a prpria biossntese do produto de interesse.

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2.8 Produo

30

de

cido

clavulnico

por

Streptomyces clavuligerus
Alguns trabalhos sobre a regulao e otimizao da sntese do
cido clavulnico tm sido reportados (Lebrihi et al., 1987), no entanto,
poucas informaes acerca do processo de produo industrial deste
composto apresentam-se disponveis na literatura. Trabalhos publicados
orientam que a linhagem de Streptomyces clavuligerus NRRL 3585,
produtora de cido clavulnico deva ser preservada na forma de
suspenso de esporos, numa faixa de temperaturas de -50C a -18C, em
soluo crioprotetora (glicerol 20% v/v) (Lebrihi et al., 1987).
Quanto composio do meio de cultura, Butterworth (1984) indica
a protena de soja como nutriente mais importante na biossntese do
cido clavulnico. Desta forma, a maioria dos meios de cultura relatados
so complexos, contendo farinha de soja como principal fonte de
nitrognio, associada a glicerol ou amido como fontes de carbono e
energia.
Os meios sintticos utilizados por Romero et al. (1984), que
apresentam como constituintes bsicos glicerol, sacarose e prolina (GSP)
alm de precursores, proporcionaram bons rendimentos tanto clulas
quanto em produtos (cido clavulnico e cefamicina C) e apresentam-se
como uma boa alternativa para a utilizao em cultivos com Streptomyces
clavuligerus.
Higgens e Kastner (1971) estudaram quanto aos provveis

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31

constituintes a serem adicionados no meio de cultura, deve ser lembrado

que, embora a glicose seja uma das fontes de carbono e energia mais
amplamente utilizadas para o crescimento celular devido a sua fcil
assimilao pela maioria dos microrganismos, esta no metabolizada
pelo Streptomyces clavuligerus.
Mayer e Deckwer (1996) estudaram a influncia do tipo da fonte
principal de nitrognio na biossntese do cido clavulnico, em biorreator
tipo tanque agitado (10 litros) operado em batelada alimentada, com
suplementao de glicerol. Utilizando farinha e extrato de farinha de soja,
os autores constataram a superioridade da primeira. Quando utilizado o
extrato de farinha de soja, o crescimento celular e a produo de cido
clavulnico ocorreram simultaneamente, sendo que durante a etapa de
suplementao a concentrao de produto manteve-se constante ou, em
alguns casos, decresceu. Em contrapartida, a utilizao de farinha de soja
gerou uma velocidade de crescimento celular trs vezes maiores na fase
inicial, sem a formao de produto, a qual ocorreu apenas na etapa de
suplementao, sem que fosse observada a decomposio do cido
clavulnico.
Lee e Ho (1996) utilizaram diferentes leos como principais fontes
de carbono para o crescimento e produo de cido clavulnico por
Streptomyces clavuligerus. Foi observado que o leo de dend foi a
melhor fonte de carbono para a produo do cido clavulnico, enquanto
que as utilizaes tanto de cido palmtico quanto de esterico resultaram
em baixa produo e, quando utilizada a sacarose nenhuma produo foi

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32

observada. Tambm demonstraram que a bactria Streptomyces

clavuligerus no sintetiza cido clavulnico na presena de sacarose,
sendo observada produo apenas quando utilizados glicerol ou leos
vegetais como fonte de carbono.
Na mesma linha, Lebrihi et al. (1987) investigaram o fenmeno da
represso por fosfato na biossntese de cefamicina C e cido clavulnico
e observaram que na presena de K2HPO4 concentrao de 2mM, as
atividades

especficas

das

enzimas

cefamicina-sintetase

cido

clavulnico-sintetase foram superiores, quando comparadas s atividades

das mesmas em presena de K2HPO4 concentrao de 75mM.
Quanto s condies de agitao empregadas em cultivos com
Streptomyces clavuligerus, com conseqentes influncias na morfologia
do microrganismo e na produtividade de cido clavulnico, Belmar-Beiny
e Thomas (1991), trabalhando em biorreator tipo tanque agitado (5 litros),
operado em diferentes freqncias de rotao (490, 990 e 1300 rpm),
observaram uma crescente fragmentao do miclio com o aumento da
freqncia de rotao. No entanto, foram obtidas concentraes similares,
tanto de massa celular quanto de cido clavulnico, nas diferentes
condies de agitao empregadas, indicando que nessas condies a
morfologia do microrganismo no afetou as cinticas de crescimento e de
sntese do produto.
Quanto influncia do oxignio, a literatura reporta que a produo
de

antibiticos

por

Streptomyces

clavuligerus

est

diretamente

relacionada com os nveis de concentrao de oxignio dissolvido no

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33

meio de cultivo.
Trabalhando no processo de produo de cefamicina C por
Streptomyces clavuligerus em fermentador de 10 litros, Rollins et al.
(1988b) observaram que a produo do metablito secundrio
influenciada pelo histrico do cultivo. Durante a fase de crescimento
celular (trofofase) em cultivos em batelada, a concentrao de oxignio
dissolvido caiu a nveis prximos de zero, retardando o aparecimento e
diminuindo a produo final de cefamicina C. O controle da concentrao
de oxignio dissolvido em 50 e 100% do valor de saturao no alterou
significativamente a velocidade especfica de crescimento celular (x)
durante a trofofase, mas elevou a produo final do antibitico em 2 a 3
vezes. Os resultados demonstraram que o controle da concentrao de
oxignio dissolvido durante a trofofase melhora nitidamente a eficincia e
a durao da biossntese de cefamicina C. Quando a biossntese do
antibitico e o crescimento celular ocorrem simultaneamente, dado que
ambos os processos requerem oxignio, a demanda pode proporcionar
quedas severas na concentrao de oxignio dissolvido e afetar
negativamente a produo de cefamicina C.
Yegneswaran

et

al.

(1988)

constataram

influncia

da

porcentagem de oxignio no gs de alimentao na produo de

antibiticos por Streptomyces clavuligerus durante cultivos em batelada
em fermentador de 50 litros utilizando-se meio definido (sinttico). Os
cultivos foram realizados freqncia de rotao de 300 rpm e vazo
especfica de ar de 1 vvm (volume de ar por volume de meio por minuto)

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34

diferenciando-se na composio em oxignio do gs de alimentao.

Foram realizados dois cultivos utilizando-se ar (21% em O2) e uma
mistura de ar com nitrognio (14% em O2), respectivamente. Foi
observado que a produo de antibiticos no foi afetada pela condio
reduzida de oxignio (14% em O2) nas primeiras 50 horas de
fermentao. No entanto, aps o crescimento cessar, ou seja, ao final da
trofofase, a concentrao de antibiticos permaneceu constante quando
foi utilizado ar como gs de aerao e caiu cerca de 1/3 do valor
anterior quando foi utilizada a mistura com menor teor de O2. Segundo os
autores, esses resultados sugerem que as biossnteses das enzimas
responsveis tanto pela produo quanto pela hidrlise dos antibiticos,
podem ser reguladas pelas condies de aerao.
Gouveia (2001) investigou a produo de cido clavulnico por
Streptomyces clavuligerus NRRL3585 visando o desenvolvimento do
processo de produo. Estudou a melhor fonte de nitrognio em meio de
cultura contendo glicerol como principal fonte de carbono e energia. Um
extrato protico de soja, comercializado como Samprosoy 90 NB (Bunge
Alimentos S.A.) proporcionou melhores resultados.
Cassiano Filho (2003) pesquisou o emprego de biorreator airlift
para a produo de cido clavulnico por Streptomyces clavuligerus,
comparando a produo com aquela em biorreator convencional, e aps
avaliao da capacidade da transferncia de oxignio pelo mtodo do
sulfito modificado. Foram realizados cultivos em diferentes condies de
transferncia de oxignio. A produo de cido clavulnico foi similar

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35

quela obtida em biorreator convencional, o que aliado com as condies

de menores tenses de cisalhamento e consumo de potncia atestam a
sua utilizao em bioprocessos. Diferente do esperado, os cultivos em
biorreatores airlift no promoveram condies de limitao por falta de
oxignio, tal como previam os resultados obtidos a partir do mtodo do
sulfito modificado.
Rosa et al. (2005) estudaram os efeitos das condies de
cisalhamento e da concentrao de oxignio dissolvido sobre a produo
de cido clavulnico forma estudados atravs de cultivos descontnuos
em biorreator de bancada em diferentes freqncias de rotao e vazo
fixa de ar, um cultivo com controle da concentrao de OD em 50% do
valor de saturao com ar e um cultivo em que a concentrao de OD foi
mantida em valores superiores a 30% do valor de saturao com ar e a
freqncia de rotao foi fixada em 800 rpm. Foram verificadas alteraes
na quantidade e velocidade de produo de cido clavulnico, bem como
crescimento do microrganismo e fatores relacionados com a demanda de
O2. A produo de cido clavulnico foi fortemente influenciada pela
condio de cisalhamento imposta atravs de diferentes freqncias de
rotao utilizadas, aliada a altas concentraes de O2 dissolvido.

2.9 Demanda e Transferncia de Oxignio em

Bioprocessos
A concentrao de oxignio dissolvido no meio de cultura tem
grande influncia em bioprocessos que envolvem microrganismos

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36

aerbios (Shuler e Kargi, 1992).

Um problema peculiar relacionado ao oxignio em bioprocessos
a sua baixa solubilidade quando comparado a outros nutrientes presentes
em um meio fermentativo, associado em alguns casos, grande demanda
provocada por altas velocidades globais de respirao celular (Bailey e
Ollis, 1986).
Alm

da

baixa

solubilidade

do

oxignio,

processo

de

transferncia de oxignio da fase gasosa para a fase a fase lquida no

caso de cultivos de bactrias ou fungos filamentosos enfrenta resistncias
fsicas devido gerao de caldos mais viscosos medida que o cultivo
evolui. Ainda, devido ao aumento da concentrao celular e o aumento da
velocidade especfica de respirao celular (QO2), o consumo de oxignio
aumentado. Assim, em cultivos aerbios descontnuos o consumo de
oxignio varia durante o processo (Rosa, 2002).
A concentrao de oxignio dissolvido no caldo de fermentao
depende da velocidade especfica de respirao do microrganismo (QO2)
em conjunto com a concentrao celular (Cx), cujo produto QO2.Cx a
prpria demanda de oxignio do bioprocesso, alm da transferncia de
oxignio da bolha de ar para o caldo de fermentao.
Para atender a demanda de oxignio, h a necessidade de uma
transferncia contnua de oxignio para o caldo de fermentao Para o
equacionamento da transferncia de massa, pode-se representar a
velocidade de transferncia de oxignio (NO2) do ar para o meio atravs
da equao abaixo:

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N O 2 = k L a (CO* 2 CO 2 )

37

Eq. 2-12

onde :
NO2: velocidade de transferncia de oxignio (mmol.L-1.h-1).
kLa: coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio (h-1).
CO2*: concentrao de saturao do oxignio ou a concentrao de
equilbrio com a presso parcial de oxignio na fase gasosa (mmol.L-1).
CO2: concentrao de oxignio dissolvido na fase lquida (mmol.L-1).
Para entender demanda de oxignio em bioprocessos com
microrganismos aerbios, a velocidade de transferncia de oxignio deve
ser igual ou superior a velocidade global de respirao mantendo a
concentrao de oxignio dissolvido constante e acima do seu valor
crtico. A variao da concentrao de oxignio dissolvido em cultivos
aerbios em batelada, dada pela equao:

dC O 2
= N O 2 QO 2 Cx
dt

Eq. 2-13

O processo de transferncia de oxignio desde uma bolha de ar

at a estrutura celular no um processo simples. As vrias etapas que
interferem neste processo esto esquematizadas na Figura 2-10.

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38

Figura 2-10 - Caminho percorrido pelas molculas de oxignio em processos

aerbios (Bailey e Ollis, 1986)

As resistncias existentes esto relacionadas com as seguintes

etapas: R1: difuso atravs da pelcula estagnada de gs; R2: passagem
atravs da interface; R3: difuso atravs da pelcula estagnada de lquido;
R4: transporte atravs do caldo; R5: difuso atravs da pelcula estagnada
externa ao agregado celular; R6: passagem pela interface caldo agregado
celular; R7: difuso atravs do agregado celular; R8: passagem pela
membrana celular; R9: difuso no citoplasma.
A resistncia global transferncia de massa igual soma das
resistncias e suas magnitudes dependem da hidrodinmica da bolha e
da fase lquida, composio e da reologia do caldo fermentativo, da
concentrao e da atividade celular, assim como de fenmenos
interfaciais existentes e outros fatores (Bailey e Ollis, 1986).

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2.10

39

Consumo de potncia em Biorreatores

A potncia transmitida ao fluido tem forte influncia nos processos

de transferncia de quantidade de movimento, calor e massa do processo
sendo, portanto, um parmetro de extrema importncia no projeto, na
operao

na

ampliao

de

escala

de

fermentadores.

Independentemente do modelo de biorreator, para transferir calor e massa

de forma eficientes h, consumo de energia cujo montante depende das
condies de agitao e ou aerao empregados.

2.10.1

Consumo de potncia para o biorreator airlift

A potncia transferidas ao fluido nas diferentes condies de

aerao em biorreatores airlift pode ser quantificada a partir de equaes
propostas originalmente por Chisti (1989).
A potncia total transferida ao fluido (PG) por unidade de volume
(V) se divide em duas parcelas; a primeira devida a expanso isotrmica
do gs desde a asperso at a superfcie do fluido (PI) e a segunda
devida energia cintica das bolhas transferida ao fluido (PC). As
equaes que seguem expressam os respectivos consumo de potncia.
pe
PI G QG R T
=
ln s
p
V
V M

Eq. 2-14

PC G QG R T
=
V
2 V

Eq. 2-15

PG PI PC
=
+
V
V
V

Eq. 2-16

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40

onde:
PG

potncia total (W)

PI

potncia relativa a expanso isotrmica (W)

PC

potncia relativa a energia cintica (W)

densidade do gs (kg.m-3)

acelerao da gravidade (m.s-2)

UGS

velocidade superficial do gs na regio de subida (m.s-1)

pe

presso na entrada do sistema (absoluta) (N.m-2)

ps

presso na sada do sistema (absoluta) (N.m-2)

volume do reator (m3)

massa molecular do gs (g.mol-1)

Segundo Chisti (1989), o clculo da potncia relativa energia

cintica pode ser desprezada, pois alcana no mximo 1,5 % do consumo
de potncia total.

2.10.2

Consumo

de

potncia

em

biorreatores

convencionais
Nos fermentadores convencionais a energia transmitida ao fluido,
principalmente, atravs dos impelidores e, portanto, o consumo de
potncia durante a agitao deve-se, quase na sua totalidade
resistncia que o caldo exerce sobre as ps dos impelidores quando
esses so rotacionados (Badino, 1997).
O requerimento de potncia em tanques agitados no gaseificados
(PO) foi objeto de estudo de Rushton et al. (1950a, 1950b), que

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41

desenvolveram o conceito de nmero de potncia (NP). Os autores

mediram as exigncias de potncia na agitao fluidos Newtonianos em
tanques com e sem chicanas, utilizando diferentes impelidores e
relacionaram os resultados experimentais baseando-se na relao entre
os adimensionais de potncia (NP) e nmero de Reynolds (Re).

Re =

N Di2

NP =

PO

N Di5

Eq. 2-17

Eq. 2-18

onde:
PO

consumo de potncia para o sistema no gaseificado (W)

freqncia de rotao (s-1)

Di

dimetro do impelidor (m)

densidade do fluido (kg.m-3)

viscosidade do fluido (kg.m-1.s-1)

Para o impelidor tipo turbina de seis ps planas de uso muito

comum em fermentadores convencionais, Rushton et al. (1950a, 1950b)
encontraram o valor de 6,2 para NP sob regime turbulento de agitao. J
Bates et al. (1963) e Treybal (1980) encontraram o valor de 5,0.
Um problema freqente encontrado nas estimativas de consumo de
potncia o fato de se ter um sistema com relaes geomtricas distintas
daqueles do sistema a partir do qual os diagramas foram obtidos. Aiba
apud Badino (1997) sugerem um fator de correo (fc) para multiplicar o
valor do consumo de potncia obtido de diagramas de literatura.

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fc =

42

( Dt / Di ) * ( H L / Di ) *
( Dt / Di )( H L / Di )

Eq. 2-19

Onde o asterisco identifica as relaes geomtricas distintas do

sistema padro.
Michel; Miller apud Badino Jr. (1997) propuseram uma correlao
para estimar o consumo de potncia em sistemas gaseificados (PG),
baseando-se em dados experimentais prprios e naqueles obtidos por
Oyama; Endoh (1955). A correlao de grande poder de ajuste a dados
experimentais apresentada como segue:

P 2 N D3
PG = 0,706 0 0,56 i
Q

0, 45

Eq. 2-20

onde:
Q: vazo volumtrica de alimentao de gs (m3.s-1)
A constante 0,706 depende da geometria do sistema, e as
unidades so a do sistema internacional (SI).

2.11

Reologia de caldos fermentativos

A reologia estuda o mecanismo de escoamento de fluidos,

estendendo-se

para

suspenses

mesclas

inclui

fenmenos

irreversveis e deformaes causadas pelo cisalhamento.

A grande maioria dos caldos de fermentaes, sobretudo aqueles
decorrentes

de

cultivos

de

microrganismos

filamentosos,

so

reconhecidos como no Newtonianos. Grande parte ou quase a totalidade

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43

desses caldos so caracterizados como fluidos pseudoplsticos que

seguem o modelo da lei de potncia descrito pela equao:

= K & n

Eq. 2-21

onde:

: tenso de cisalhamento (Pa).

& : velocidade de cisalhamento ou gradiente de velocidade (s-1).

K : ndice de consistncia (Pa.sn).
n : ndice de comportamento de escoamento (adimensional).
Quando n<1, o fluido caracterizado como pseudoplstico.
Solues polimricas de alto peso molecular e grande parte das
suspenses, entre as quais se incluem caldos de fermentao com
microrganismos filamentosos, so exemplos de fluidos pseudoplsticos
[Roels et al. (1974) apud Badino Jr (1997)].
Quando n>1, o fluido denominado dilatante. Suspenses de
amido, de silicato de potssio e de areia so exemplos de fluidos
dilatantes.

(Bennet

Myers

1978).

Ao

contrrio

dos

fluidos

pseudoplsticos, a viscosidade aparente (ap) aumenta com a velocidade

de cisalhamento ( & ) para fluidos dilatantes.
Quando n=1, o fluido caracterizado como Newtoniano e, nesse
caso, o ndice de consistncia (K) a prpria viscosidade do fluido.
Warren et al. (1995) apud Badino Jr. (1997) examinaram as
reologias dos caldos e as morfologias de trs actinomicetos em cultivos

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44

submersos. Os caldos foram caracterizados como pseudoplasticos. Os

ndices de comportamento de escoamento (n) mantiveram-se entre 0,20 e
0,25. Os ndices de consistncia (K) aumentaram com a concentrao
celular (Cx), apresentando um decrscimo no final do cultivo. Os
comprimentos mdios das hifas situaram-se na faixa de 15-25 m, no se
alterando acentuadamente com as variaes nos ndices de consistncias
(K).
Badino

et

al.

(1999)

descreveram

os

dados

reolgicos

experimentais em termos do modelo da lei da potncia, durante o cultivo

de Aspergillus awamori para a produo de glicoamilase. O ndice de
consistncia foi convenientemente relacionado com a concentrao
celular e com condies de cisalhamento representadas pela freqncia
de agitao (N) e pela vazo de alimentao de ar (Q).

K = 0,32 Cx 3, 29 N 4,33 Q 0,39

Eq. 2-22

Os sinais dos expoentes indicaram que o aumento da freqncia

de agitao (N) e da vazo de alimentao de ar (Q) contriburam para
diminuir o ndice de consistncia (K). Por outro lado, um aumento na
concentrao celular (Cx) contribuiu para aumentar o parmetro reolgico.

Materiais e Mtodos

45

3 MATERIAIS E MTODOS
3.1 Biorreator Airlift
O biorreator airlift utilizado no presente trabalho tem seis litros de
volume til, que compreende cilindro externo confeccionado em

material transparente (vidro) e base, tampos superior e inferior,

cilindro interno, aspersor e condensador confeccionados em ao
inoxidvel.

Os

diversos

itens

que

constituem

biorreator

apresentam geometrias e relaes entre dimetros internos do

cilindro

interno

(Di1)

externo

(De1),

distncias

entre

as

extremidades do cilindro interno e a base do reator (H1) e o nvel de

meio reacional (H2) e tipo de aspersor de modo a obter um
biorreator com dispositivos eficientes de transferncias de calor e
massa de ampla aplicao.
O biorreator airlift descrito a seguir por referncia Figura 32.
O biorreator airlift compreende uma base sendo instalados
sobre dita base: o cilindro externo transparente, o cilindro interno
dotado de entrada de gua e sada de gua para o controle de
temperatura, e aspersor de gs. A diferena de dimetros dos
cilindros e gera um espao anular por onde circula o meio reacional

Materiais e Mtodos

46

impulsionado pela quantidade de gs injetada pelo aspersor. O

cilindro externo transparente dotado de tampa inferior e superior.
A tampa superior dotada de um condensador para evitar perdas
de gua durante os processos. O sentido da movimentao do meio
reacional est ilustrado na Figura 3-1.
O biorreator inclui um condensador, tipo casco e tubos, o que
assegura uma eficiente reteno de gua no sistema durante a
operao.
Conforme comentado acima, o biorreator airlift apresenta sua
aplicabilidade ampliada em parte da geometria de sua construo e
das relaes entre dimetros internos de cilindros interno e externo
(Di1/De1) e distncias entre a extremidade do cilindro interno e a
base do reator (H1) e entre a extremidade do cilindro interno e o
nvel do meio reacional (H2).
As distncias e relaes geomtricas do sistema encontram-se
nas seguintes faixas estabelecidas como segue:

Materiais e Mtodos

47

H1 = 4,1 cm

De2 = 19,0 cm

H2 = 4,1 cm

De1 = 13,6 cm

H3 = 32,9 cm

DI1 = 8,0 cm

H4 = 41,1 cm

DI2 = 9,0 cm

H5 = 60,0 cm
0,1 H4 = H1=H2 e Di1/De1= 0,588
A Figura 3-2 anexa apresenta um desenho esquemtico com
um detalhe do aspersor em forma de cruzeta, dotado de perfuraes
para sada de gs, e o significado das dimenses H1 a H5, Di1, Di2 e
De1. H4 a distncia da base at a altura do meio reacional, e H5
a distncia total entre as tampas e do biorreator. As perfuraes do
aspersor tm 0,5 mm de dimetro e so espaadas de 5 mm ao
longo do comprimento das hastes do aspersor.
Concentrao de oxignio dissolvido (OD) e pH so medidos
por sondas esterilizveis instaladas em aberturas laterais, sendo
acopladas a medidores/transmissores.
O meio reacional ou meio de cultura de fermentao
introduzido no biorreator pneumtico atravs de bomba peristltica.
Aps o trmino da reao ou do cultivo, o meio reacional ou caldo

Materiais e Mtodos

48

de fermentao retirado do biorreator atravs de abertura

localizada na tampa inferior.
O fechamento do biorreator como segue: o cilindro externo
apresenta flanges nas duas extremidades. As tampas inferior e
superior apresentam sulcos nas faces internas onde so encaixados
anis (o-rings) de silicone. Anis de ao inoxidvel so montados
entre as flanges. Para fechamento das tampas, os anis de silicone
so encostados nas flanges e quatro parafusos recartilhados,
rosqueados a mo para minimizar a tenso, so utilizados para unir
os tampos com os anis de ao inoxidvel, prensando as flanges.

Materiais e Mtodos

Figura 3-1 - Biorreator airlift e esquema da circulao do fluido

49

Materiais e Mtodos

50

Figura 3-2 Desenho esquemtico com cotas e detalhe do aspersor

3.2 Biorreator Convencional

O biorreator convencional utilizado no presente estudo foi um New
Brunswick Scientific Co. Inc (Bioflo III), tipo tanque agitado e aerado
(Bioflo III), com volume til de 4 L, dimetro interno de 0,17 m, altura de
lquido de 0,20 m, dotado de 4 aletas defletoras e com dois impelidores
tipo turbina de seis ps planas de dimetro 0,076 m.

Materiais e Mtodos

3.3 Avaliao

51

da

Transferncia

de

calor

em

Biorreator airlift
A transferncia de calor no biorreator airlift foi avaliada a partir da
determinao do coeficiente global de transferncia de calor (U)
utilizando-se a metodologia proposta que segue, uma vez que no se
encontrou nenhum estudo especfico na literatura relacionando como a
determinao do coeficiente global de transferncia de calor em
biorreatores tipo airlift. O aparato experimental utilizado encontra-se
ilustrado na .......50
3, salientando que o biorreator foi isolado utilizando como
revestimento l de rocha na sua rea lateral.
As variveis medidas para a determinao de U foram as
temperaturas nos pontos 1, 2, 3, 4 e 5 e 6, vazo alimentao de ar,
vazo de alimentao de gua no sistema de resfriamento e vazo de
gua no tubo interno.
A entrada de gua no tubo interno oco era proveniente do banho
termostatizado e teve valor pr-estabelecido.

Materiais e Mtodos

52

Figura 3-3 Esquema para determinao experimental do coeficiente global de

transferncia de calor.

Aps checar todas as conexes e certificar a estabilidade da

temperatura do banho, dava-se incio ao experimento, observando-se a
temperatura de todos os pontos at atingir-se o estado estacionrio,
normalmente por volta de quarenta minutos para total estabilizao do
sistema. Ento, todas as temperaturas e vazes eram anotadas. Foram
realizados

trinta

trs

experimentos

com

diferentes

estados

estacionrios.
O sistema contou com uma alimentao de gua de resfriamento,
pois para determinao de coeficiente global de troca trmica (U), foi
necessria uma diferena substancial entre as temperaturas do sistema
(T6) e do tubo interno oco (T2). Com a alimentao de uma corrente de
gua no reator foi possvel aumentar a diferena entre T1 e T2 e ter

Materiais e Mtodos

53

maiores diferenas entre as temperaturas para maior preciso nos

clculos
Na Figura 3-4 apresenta-se em diagrama do balano de energia
realizado no biorreator airlift. A perda de energia para o ambiente foi
considerada igual a zero, pois o reator foi totalmente isolado com l de
rocha.

Figura 3-4 - Diagrama do balano de energia do biorreator airlift

Para o clculo do coeficiente global de troca trmica (U) foi

considerado que o tubo interno oco do biorreator airlift atuou como um
trocador de calor de passagem nica, resultando na seguinte equao:

Q& = U A Tm

Eq. 3-1

Materiais e Mtodos

54

Onde:
Q& : calor transferido por unidade de tempo do tubo interno oco para
o interior do biorreator airlift (W);
U: coeficiente global de transferncia de calor (W.m-2.C-1);
Tm: mdia logartmica da diferena de temperatura (C);
Onde:

Tm =

(T1 T5 ) (T2 T5 )
T T
ln( 1 5 )
T2 T5

Eq. 3-2

A: rea de troca trmica (0,255 m2).

Os ndices das temperaturas da equao 3-2 so referentes
Figura 3-3.
Para determinar a velocidade de transferncia de calor do tubo
interno oco para o interior do biorreator foi utilizada a equao 3-3:

Q& = m& 1 Cp (T1 T2 )

Eq. 3-3

Para diferentes condies experimentais foi determinado a

temperatura de bulbo seco e bulbo mido da corrente ar de entrada e
sada do biorreator airlift. A partir dessas medidas, tambm possvel
determinar a velocidade de transferncia de calor, utilizando-se dados da
corrente de ar. No entanto, foi escolhido realizar o clculo utilizando o
tubo interno oco, porque apresentou a maior diferena de temperatura e,
portanto, maior preciso nos clculos.
A rea de troca trmica foi calculada, sendo somados a rea

Materiais e Mtodos

55

interna e externa do tubo interno. Conhecendo a mdia logartmica da

diferena de temperatura (Tm) e velocidade de transferncia de calor
(Q), foram determinados valores do coeficiente global de transferncia de
calor (U) para diferentes condies experimentais testadas.

3.4 Avaliao de Transferncia de Oxignio

A transferncia de oxignio foi avaliar a partir da determinao do
coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio (kLa) nos biorreatores
airlift e no convencional modelo Bioflo III (New Brunswick Scientific, Co)
em diferentes condies de agitao e aerao, Valores de kLa foram
obtidos por dois mtodos diferentes, mtodo dinmico e mtodo do sulfito,
o que permitiu comparar valores de kLa nos dois biorreatores obtidos por
diferentes mtodos.

3.4.1 Mtodo Dinmico considerando o Atraso da Resposta

do Eletrodo
O mtodo dinmico utilizado no presente trabalho, para a
determinao do coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio
(kLa), foi proposto por Chisti (1989).
Para o clculo do coeficiente volumtrico de transferncia de
oxignio deve-se levar em conta o atraso do eletrodo, o qual ocorre
devido ao fato de o oxignio dissolvido no seio do liquido difundir atravs
da membrana do eletrodo que isola o meio lquido da superfcie do
catodo, onde o oxignio reduzido gerando o fluxo de eltrons.

Materiais e Mtodos

56

Com o objetivo de corrigir e identificar esse atraso do eletrodo,

Aiba et al.(1973) propuseram que o sinal do eletrodo (Ce), varia no tempo
proporcionalmente diferena entre a concentrao real de oxignio
dissolvido (C) e o sinal do eletrodo (Ce), ou seja:
dC e
1
= k e (C C e ) = (C C e )
dt
e

Eq. 3-4

Onde:
C: concentrao real de oxignio dissolvido
Ce: concentrao de oxignio dissolvido lido pelo eletrodo ou sinal
do eletrodo.
ke: constante de atraso do eletrodo (s-1)
e : tempo de resposta do eletrodo (s)

A constante de atraso do eletrodo (ke) pode ser determinada

atravs de um ensaio em degrau, ou seja, equilibrando-o em atmosfera de
nitrognio gasoso (eletrodo indicando o valor zero) e, em seguida,
retirando o eletrodo da atmosfera de nitrognio e introduzindo-o
imediatamente no ar atmosfrico.
Com os valores do sinal do eletrodo registrados em funo do tempo,
obtidos pela exposio do eletrodo ao ar atmosfrico, obtm-se o tempo
de resposta ( e ) como sendo igual ao tempo onde o sinal do eletrodo
atingiu 63,2 % do seu valor mximo, de acordo com a .............53
. A constante de atraso do eletrodo (ke) calculada como sendo o
inverso do tempo de resposta.

Materiais e Mtodos

57

A simulao desse ensaio est representada na Figura 3-5, na

qual pode-se ter uma clara idia da determinao da constante de atraso
do eletrodo (ke).

Figura 3-5 Representao esquemtica da concentrao do oxignio em funo

do tempo para a definio da constante de atraso do eletrodo

O mtodo dinmico consiste em se dispor no biorreator, de um

eletrodo para a determinao da concentrao de oxignio dissolvido.
Aerando-se o sistema, calibra-se o eletrodo na posio 100% (Ce = Cs =
100). Em seguida borbulha-se nitrognio no lquido, a fim de eliminar todo
o oxignio dissolvido do meio, at que o eletrodo indique o valor zero (C =
Ce = 0).
A seguir, em um dado instante, inicia-se a aerao do meio
liquido, nas condies em que se pretende obter o valor de kLa,
passando-se ento a registrar o sinal do eletrodo (Ce) ao longo do tempo
(t). Esse sinal sai do zero, aumentando at atingir a saturao (Cs), ou
seja, at que o sinal do eletrodo indique o valor 100%.

Materiais e Mtodos

58

Para a determinao do kLa faz-se uso da Equao 3-5:

dC
= k L a (Cs C )
dt

Eq. 3-5

A Equao 3-5 integrada para a condio inicial de C=C0 e t=t0

resultando na Equao 3-6:

C = Cs (Cs C 0 ) exp k L a( t t 0 )

Eq. 3-6

A determinao do kLa pela Equao 3-5 seria estritamente

correta somente se o eletrodo medisse a concentrao real de oxignio
dissolvido. Na realidade, isto no ocorre devido ao atraso na resposta do
eletrodo. Como mencionado anteriormente, o tempo de resposta do
eletrodo ( e ) pode ser descrito como uma equao de primeira ordem,
como mostra a Equao 3-4.
Introduzindo-se na Equao 3-4 o valor de C em funo do tempo,
obtido a partir da Equao 3-6 e agora, integrando-se a equao
resultante com a condio inicial Ce = Ce0 (t = t0), obtm-se:
Ce = Ce0 e ke.(t t 0 ) + Ces (1 e ke.(t t 0 ) ) +

ke.(Ces C0 )
(e ke.(t t 0 ) e k L a.(t t 0 ) ) Eq. 3-7
ke k L a

A partir dos resultados experimentais de Ce em funo do tempo,

pode-se, utilizando a Equao 3-7 e um algoritmo de Maquard obter o
valor de kLa, conhecendo-se previamente o valor de ke.
A transferncia de oxignio pelo mtodo dinmico foi avaliada em
biorreatores Bioflo III e airlift em diferentes condies de aerao e ou

Materiais e Mtodos

59

agitao, indicados na Tabela 3-1.

3.4.2 Mtodo do Sulfito

O coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio (kLa) foi
determinado pelo mtodo de sulfito modificado (Vilaa et al. 1999). Para
tal, foram adicionados cristais de sulfito de sdio (NaSO3, 8,83 g.L-1) no
biorreator airlift na presena do catalisador CuSO4.5H2O (0,70 g.L-1) sob
certa condio de aerao, ocorrendo a reao que segue:

Na 2 SO3 + 1 O2 CuSO
4 Na 2 SO4
2
Uma determinada quantidade de sulfito de sdio garante a
concentrao de oxignio dissolvido prxima a zero durante um grande
intervalo de tempo. Como a transferncia de oxignio da fase gasosa
para a fase liquida etapa limitante do processo, a velocidade
volumtrica de transferncia de oxignio (No2) pode ser calculada
conhecendo-se a estequiometria da reao, a quantidade de Na2SO4
adicionada e o tempo decorrido para a reao completar-se.

No 2 =

0,5 n
V .t

Eq. 3-8

Onde:
n = nmero de moles de Na2SO4 (mols)
V = volume de reao (L)
t = tempo decorrido (s)
A concentrao de saturao do oxignio dissolvido (Cs)

Materiais e Mtodos

60

calculada pela equao que segue, desprezando o efeito da presena de

sais no meio reacional.

C s = He YOe2 PT

Eq. 3-9

Onde:
He = constante de Henry (1,557.10-3 mmol.L-1.mmHg-1 a 30C);
YeO2 = frao molar de oxignio no gs de entrada;
PT = presso total do sistema (absoluta).
O coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio (kLa) pode
ser calculado a partir do valor da velocidade de transferncia de oxignio
(No2) e da concentrao de saturao de oxignio na gua (Cs):

kLa =

NO2
CS

Eq. 3-10

A presena de sulfito de sdio nesse mtodo formou o meio no

coalescente, impedindo a unio das bolhas, o que leva a um aumento na
rea interfacial de troca de massa e por conseqncia, no coeficiente
volumtrico de transferncia de oxignio (kLa).

3.5 Avaliao do arraste de gua do sistema

biorreator mais condensador
Biorreator airlift opera com altas vazes de ar (1 a 5 vvm), a
passagem de ar pelo sistema acaba provocando um arraste de gua para
fora do biorreator, fazendo com que ocorra uma diminuio do nvel de

Materiais e Mtodos

61

lquido ao longo dos cultivos, podendo numa situao limite, o nvel

chegar altura do tubo interno e impedir a circulao do meio reacional, o
que levaria o sistema a um colapso em termos de transferncia de calor e
massa.
A soluo encontrada para este problema foi a construo de um
condensador (Cassiano Filho, 2003). No entanto, mesmo operando com o
condensador, fez-se necessrio a quantificao desse arraste, uma vez
que se pretende utilizar o equipamento em cultivos de longa durao.
Utilizou-se para este procedimento dois banhos termostatizados
para controlar as temperaturas do biorreator e do condensador. O
condensador contm 16 tubos internos com dimetro 5,5 mm e
comprimento igual a 30 cm, apresentando uma rea de troca trmica de
830 cm2. A Figura 3-2 que segue, ilustra o condensador acoplado.
Foram realizados vinte e quatro experimentos, variando a
temperatura do biorreator airlift (25 e 35 C), temperatura do condensador
(15 e 25 C) e vazo de alimentao de ar, 6, 18 e 30 Lmin-1, 1, 3 e 5 vvm
respectivamente.
No incio de cada ensaio, o biorreator foi alimentado com 6 Litros
de gua. O sistema operou de 8 a 24 horas dependendo da velocidade de
arraste. No final mediu-se o volume restante de gua no biorreator. A
perda de gua foi calculada como sendo a diferena entre os volumes
inicial e final.
O mesmo procedimento foi realizado sem a presena do
condensador, tendo como objetivo poder avaliar a eficincia do mesmo

Materiais e Mtodos

62

em termos de reteno de gua, sendo a eficincia do condensador

calculada segundo a equao que segue:

Eficincia =

Perdasemcondensador Perdacondensador
100
Perdasemcondensador

Eq. 3-11

3.6 Cultivos de Streptomyces clavuligerus para a

produo do cido clavulnico
3.6.1 Microrganismo
Nos ensaios realizados, foi utilizada a linhagem de Streptomyces
clavuligerus ATCC 27064, adquirida da American Type Culture Collection.
Com o intuito de se evitar problemas ligados a viabilidade dos
microrganismos durante os cultivos, foram preparados estoques de
clulas preservadas em criotubos de 5 mL, contendo 3,5 mL de clulas
vegetativas congeladas a -70C em ultrafreezer, em soluo crioprotetora
de glicerol (20% v/v).

3.6.2 Preservao do microrganismo e preparao de

criotubos
A preservao da bactria Streptomyces clavuligerus ATCC 27064
a partir de sua forma liofilizada se deu da seguinte maneira:
- Preparou-se 5 tubos de ensaio com 5 mL de meio de cultura
lquido para recuperao contendo: triptona (5 g.L-1); extrato de levedura
(3 g.L-1), e gua destilada, q.s.p.(1L), pH 7,0 -7,2.

Materiais e Mtodos

63

- Transferiu-se de 0,5 a 1 mL desse meio de um dos tubos com

pipeta de Pasteur para o frasco de liofilizado para hidratar o miclio.
Retornou-se este volume para o tubo de ensaio original.
- Partindo deste tubo inoculou-se os tubos restantes, cerca de 1 mL
para cada um dos quatro tubos restantes, sendo os mesmos mantidos por
um perodo de 7 a 10 dias a 30 C.
- Aps este perodo, transferiram-se os contedos de cada 2 tubos
para erlenmeyers de 250 mL contendo 40 mL de meio lquido para a
propagao do miclio (inculo de 20 % v/v): glicerol 20,0 g; extrato de
levedura 1,0 g; peptona bacteriolgica 10,0 g; MgSO4.7H2O 0,75 g;
K2HPO4 2,5 g; soluo de sais: (MnCl2.4H2O (1,0 g); FeSO4.H2O (1,0 g);
ZnSO4.H2O (1,0 g)), gua destilada, q.s.p 1 L, pH 6,8 ajustado com
NaOH.
- Incubou-se em mesa incubadora a 30 C por 24 horas, aps este
perodo diluiu-se as suspenses com glicerol de modo a conter 10 % v/v e
foram transferidos 3,5 mL desta suspenso para criotubos de 4 mL e
estes congelados a -70 C, constituindo-se o estoque de trabalho.

3.6.3 Meios de Cultura

Os meios de cultura utilizados no presente trabalho tiveram como
base as pesquisas realizadas at o momento na rea de Engenharia
Bioqumica do DEQ/UFSCar referentes produo de cido clavulnico
por Streptomyces clavuligerus.

Materiais e Mtodos

64

3.6.3.1 Meio de cultura de Reativao (MR)

O meio de cultura de reativao teve a seguinte composio (g.L-1):
glicerol (15,0); extrato de levedura (1,0); peptona bacteriolgica (10,0);
MOPS (3-[N-Morpholino]-propanesulfonic acid) (21,0); MgSO4.7H2O
(1,0); K2HPO4 (2,5). A soluo de sais teve a seguinte composio (g.L-1):
MnCl2.4H2O (1,0); FeSO4.H2O (1,0); ZnSO4.H2O (1,0).
O pH foi ajustado em 6,8 com NaOH e o meio autoclavado por 15
minutos a 120 C.
3.6.3.2 Meio de cultura de Inculo (MI)
O meio de cultura de inculo teve a seguinte composio (g.L-1):
glicerol (15,0); extrato de levedura (1,0); MOPS (3-[N-Morpholino]propanesulfonic acid) (21,0); MgSO4.7H2O (0,75); K2HPO4 (0,8);
Samprosoy 90 NB (20,0); leo de soja (1,0). A soluo de sais teve a
seguinte composio (g.L-1): MnCl2.4H2O (1,0); FeSO4.H2O (1,0);
ZnSO4.H2O (1,0).
O pH foi ajustado em 6,8 com NaOH e o meio autoclavado por 15
minutos a 120 C.
3.6.3.3 Meio de cultura de Produo (MP)
O meio de cultura de produo (MP) teve a mesma composio do
meio de cultura de inculo (MI) excetuando-se o tampo MOPS e
adicionando-se 0,1 g.L-1 de antiespumante (Dow Corning Medical
Antifoam C Emulsion 30% Simethicone Emulsion USP).

Materiais e Mtodos

65

3.6.4 Cultivo em Biorreatores para a produo de cido

clavulnico
A partir de valores de kLa obtidos em diferentes condies de
agitao e/ou aerao nos biorreatores airlift e Bioflo III, foram realizados
dois cultivos em biorreatores convencional e dois cultivos em biorreator
airlift e em duas diferentes condies de transferncia de oxignio
visando a produo de cido clavulnico por Streptomyces clavuligerus.
Os cultivos em biorreator Bioflo III foram realizados a 600 e 800 rpm e 0,5
vvm os cultivos em biorreator airlift foram realizados a 3 e 4,08 vvm, que,
de

acordo

com

os

resultados,

definem

mesmas

condies

de

transferncia de oxignio (kLa) nos biorreatores.

3.6.4.1 Reativao
Na etapa de reativao foram inoculados 4 Erlenmeyers de 500
mL, contendo 50 mL de meio de reativao (MR), cada um deles com um
criotubo conservado sob congelamento em soluo de glicerol 10% v/v a 70 C. Os Erlenmeyers eram mantidos em incubador rotativo por 24
horas, a 28 C a 250 rpm. Ao final, os contedos dos dois frascos eram
reunidos para utilizao na etapa de preparao de inculo.
3.6.4.2 Etapa de Preparao do Inculo
Na etapa de preparao do inculo, 20 erlenmeyers de 500 mL
contendo 50 mL de meio de inoculao (MI) eram inoculados com 5 mL
da suspenso de clulas obtida na etapa de reativao. Os erlenmeyers

Materiais e Mtodos

66

eram mantidos em incubador rotativo por 24 horas a 28 C e 250 rpm. Ao

final, os contedos dos frascos eram reunidos para inoculao do reator,
sendo 400 mL para o biorreator convencional de bancada tipo tanque
agitado e aerado, modelo BIOFLO III da New Brunswick Scientific Co.
Inc. (USA) e 600 mL para o biorreator airlift.
3.6.4.3 Cultivos em Batelada
Todos os cultivos foram realizados em batelada, sendo dois no
biorreator airlift e dois no biorreator convencional Bioflo III. Os biorreatores
apresentam de sistemas de medida de concentrao de oxignio
dissolvido, controle de pH, temperatura e vazo de ar, sendo que o
biorreator convencional apresenta tambm e controle da freqncia de
rotao dos impelidores. Os cultivos foram realizados nas seguintes
condies de agitao e/ou aerao:

Materiais e Mtodos

67

Tabela 3-1 Caractersticas dos cultivos realizados em biorreator

airlift e convencional
Vazo de ar
Nome
Biorreator
Rotao (rpm)
(vvm)
B1

Convencional

0,50

600

A1

Airlift

3,00

B2

Convencional

0,50

800

A2

Airlift

4,08

Os ensaios em biorreator convencional foram realizados com um

volume til de 4 L, sendo 3,6 L do meio de produo (MP) e 0,4 L (10%
v/v) de inculo, preparado em mesa incubadora rotativo. Os ensaios em
biorreator airlift foram realizados com um volume til de 6 L, sendo 5,4 L
do meio de produo (MP) e 0,6 L de inoculo (10% v/v), preparado em
mesa incubadora rotativo.
Os ensaios A1 e B1 foram realizados em condies operacionais
que definem o mesmo valor de kLa de 137 h-1, determinado previamente,
assim como os ensaios A2 e B2 tambm foram realizados num outro valor
de kLa de 199,7 h-1.
Os cultivos tiveram durao entre 54 a 60 horas e foram realizados
aos pares, sendo primeiro os cultivos A1 e B1, seguido dos cultivos A2 e
B2. Amostras de 30 mL foram retirados de seis em seis horas para
anlise da concentrao de glicerol (Cglic), ndice de consistncia do caldo
(k), concentrao de cido clavulnico (Cac) e ndice de comportamento

Materiais e Mtodos

68

do fludo (n). A concentrao de oxignio dissolvido foi medida da cada

uma hora de cultivo.
3.6.4.4 Aspectos prticos na execuo dos ensaios
Durante a execuo dos cultivos foram encontradas algumas
dificuldades, entre quais cabe destacar a formao de espuma.
A grande formao de espuma altera o nvel de lquido no reator o
que pode causar o arraste do caldo fermentativo, bem como sua
contaminao. Para minimizar a formao de espuma no reator
adicionado antiespumante, que embora resolva o problema da espuma,
provoca

interferncia

no

oxignio

dissolvido.

Para

evitar

essas

perturbaes optou-se por utilizar nos ensaios uma suspenso de

antiespumante diludo dez vezes em gua. Para aperfeioar o cultivo
entrou-se em contato com a Empresa Try-On, que desenvolveu
conjuntamente um controlador de antiespumante, baseado no controle de
nvel de espuma. Quando a espuma atinge o contato, na altura desejada,
fecha-se o circuito e o equipamento liga a bomba peristltica, que injeta
antiespumante no biorreator de forma programada. O teste foi realizado
no cultivo B2, e os resultados obtidos foram bastante satisfatrios.

3.6.5 Mtodos Analticos

3.6.5.1 Determinao da concentrao de glicerol (Cs)
O glicerol foi quantificado por cromatografia lquida de alta
eficincia (CLAE), utilizando-se uma coluna Shodex KS-802 (Lompak-

Materiais e Mtodos

69

Warters) e como eluente (fase mvel) gua Mili-Q. O equipamento foi

operado a 34C e 1,0 mL/min e tempo de reteno de 13 minutos.
As amostras foram diludas em bales volumtricos e filtradas com
a finalidade de primeiro garantir que estivessem dentro da faixa de
calibrao e segundo para assegurar que estivessem livres de slidos em
suspenso. A curva de calibrao foi construda com a injeo de
amostras nas seguintes concentraes 0,1; 0,25 e 0,5 g.L-1.
3.6.5.2 Determinao da Concentrao de cido Clavulnico (Cp)
A concentrao de cido clavulnico foi determinada pelo mtodo
de espectrofotomtrico proposto por Bird et al. (1982), que se baseia na
derivatizao do cido clavulnico com uma soluo de imidazol e leitura
de absorbncia utilizando o no comprimento de onda de 311 nm de feixe
ultravioleta. Este mtodo foi realizado como descrito na seqncia:
Leitura da Absorbncia A (ABSA):
- Em tubos de ensaios so adicionados 5 mL de soluo de
imidazol (60 g.L-1 e pH 6,8) em 1 mL de amostra ou padro contendo
cido clavulnico em concentrao inferior a 50 mg.L-1 e a mistura so
incubadas por 15 minutos a 30C.
- Em um tubo de ensaio so misturados 1 mL de gua com 5 mL
da mesma soluo de imidazol, sendo a mistura incubada sob as mesmas
condies.
- A leitura zero do espectrofotmetro ajustada utilizando a
soluo obtida no passo anterior e em seguida realizada a leitura do

Materiais e Mtodos

70

meio reacional obtido no primeiro passo e anotado o valor da absorbncia

(ABSA).
Leitura da Absorbncia B (ABSB)
- Em tubos de ensaios, uma mistura contendo 5 mL de gua
destilada e 1 mL de amostra ou padro contendo cido clavulnico
incubada por 15 minutos a 30C.
- A leitura zero do espectrofotmetro ajustada utilizando gua e
em seguida a leitura da absorbncia da soluo obtida no primeiro passo
e anotada o valor de ABSB.
Calcula-se o valor da absorbncia do composto derivatizado
utilizado a equao: ABS = ABSA ABSB.
A curva de calibrao da concentrao do composto derivatizado
linear com a absorbncia (ABS) para concentraes de cido clavulnico
menores que 50 mg.L-1.
3.6.5.3 Medidas Reolgicas
Os comportamentos reolgicos dos caldos de fermentao foram
avaliados utilizando-se um remetro Brookfield, modelo LV-DVIII+ munido
de dispositivos de cilindros concntricos.
Foram obtidos reogramas, ou seja, curvas de tenso de
cisalhamento () em funo do gradiente de velocidade de cisalhamento
( & ). Supondo serem os fluidos pseudoplsticos o modelo da velocidade
de cisalhamento dado pela equao que se segue da Lei da Potncia foi
ajustado aos valores experimentais:

Materiais e Mtodos

= K n

71

Eq. 3-12

onde:
K: ndice de consistncia (dina.cm-2.sn)
n: ndice de comportamento do escoamento (-)
Os valores dos parmetros reolgicos K e n foram obtidos por
regresso no linear, sendo que o valor do ndice de consistncia (k) tem
forte relao com a concentrao celular (Cx) sendo um parmetro
importante de acompanhamento da fermentao. J que em termos de
concentrao de clulas apresentam slidos insolveis em suspenso.

Resultados e Discusso

71

4 RESULTADOS E DISCUSSO
4.1 Determinao

do

coeficiente

global

de

transferncia de calor (U)

O sistema antigo de troca de calor do biorreator airlift era por
encamisamento externo por serpentina de silicone. Este tipo de
aquecimento era pouco eficaz, no mantendo o caldo de fermentao na
temperatura desejada.
Para melhorar essa caracterstica do biorreator, foi desenvolvido no
laboratrio de Engenharia Bioqumica DEQ/UFSCar o sistema de
aquecimento onde o lquido de aquecimento passa dentro do tubo interno
que foi construdo com um espao interno.
Nos ensaios realizados, o coeficiente global de transferncia de
calor (U) variou com trs parmetros, vazo especfica de gua no interior
do tubo interno ( TI ), vazo especfica de ar ( ar ) e vazo especfica de
gua para resfriamento ( resf ) do sistema. Cabe informar que as vazes
especficas foram calculadas como sendo as vazes volumtricas
divididas pelos volumes do tubo interno (0,38 L) e do biorreator (6 L).
A tabela 4-1 apresenta os valores do coeficiente global de troca
trmica (U) nas diferentes condies de operao empregadas.

Resultados e Discusso

72

Tabela 4-1 Valores do coeficiente global de troca trmica (U) em diferentes

condies de operao.

Ensaio
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33

TI (s-1)

resf (s-1)

ar (s-1)

x102

x103

x102

(W.m-2.C-1)

1,38
1,38
1,38
1,38
1,38
1,38
1,38
1,38
1,38
2,89
2,89
2,89
2,89
2,89
2,89
2,89
2,89
2,89
4,10
4,10
4,10
4,10
4,10
4,10
4,10
4,10
4,10
1,38
3,01
4,35
3,42
2,24
2,89

0,70
0,70
0,70
1,27
1,27
1,27
1,94
1,94
1,94
0,70
0,70
0,70
1,27
1,27
1,27
1,94
1,94
1,94
0,70
0,70
0,70
1,27
1,27
1,27
1,94
1,94
1,94
5,84
3,24
1,12
1,12
1,08
0,98

1,67
3,33
5,00
1,67
3,33
5,00
1,67
3,33
5,00
1,67
3,33
5,00
1,67
3,33
5,00
1,67
3,33
5,00
1,67
3,33
5,00
1,67
3,33
5,00
1,67
3,33
5,00
5,55
5,55
5,55
5,55
5,55
5,55

328,5
333,4
426,8
299,1
351,1
303,2
311,0
314,7
314,7
527,2
503,9
571,5
429,8
472,0
484,8
429,8
478,5
478,5
609,6
609,6
645,6
555,4
555,4
555,4
525,0
634,0
305,3
465,6
677,9
636,0
466,0
436,8
321,6

Em posse dos dados experimentais da Tabela 4-1, foi proposto um

modelo que relacionasse os valores de U com as variveis estudadas, do
tipo:

Resultados e Discusso

z = P1 x P 2 y P 3 w P 4

73

Eq. 4-1

Onde a varivel dependente (z) o coeficiente global de

transferncia de calor (U), e as variveis independentes: TI , resf e ar ,
respectivamente.
O ajuste da correlao com o auxlio do software Microcal Orign 7.0
pelo algoritmo de regresses no lineares Levenberg-Marquardt.
0,088
0,104
U = 2272,80 TI0,543 ar
resf

Eq. 4-2

Onde:
Coeficiente global de transferncia de calor (U) (W.m-2.C-1);
Vazo especfica de gua no tubo interno TI (s-1);
Vazo volumtrica de alimentao de ar ar (s-1);
Vazo especfica de gua do sistema resf (s-1).
Os valores dos parmetros ajustados com os respectivos erros,
considerando grau de confiana de 95% e o correspondente coeficiente
de correlao so apresentados na seqncia:
P1 = 2272,80
P2 = 0,543
P3 = 0,088
P4 = - 0,104
R2 = 0,93

517,20
0,032
0,025
0,026

Conclui-se que o ajuste foi bom e que o fator que mais influencia o
U a vazo especfica de gua no tubo interno ( TI ). Atuando diminuindo
a espessura estagnada no interior do tubo interno e, conseqentemente

Resultados e Discusso

74

aumentando o valor do coeficiente convectivo interno. As medidas foram

realizadas em uma faixa de vazo especfica onde foi possvel medir uma
diferena de temperatura (T) no termmetro com pequeno erro.
O segundo parmetro que mais influenciou U foi a vazo especfica
de ar, pois atua diminuindo a espessura da pelcula estagnada no lado
externo do tubo interno. Quanto terceira varivel, a vazo especfica de
gua ( resf ) do sistema, j era esperado que a mesma influenciasse
negativamente a transferncia de calor, pois retira calor de sistema.
Os valores do coeficiente global de transferncia de calor (U)
ficaram na faixa de 300 a 700 W.m-2.C-1, dentro da faixa indicada por
MacAdams (1954) (300 a 17.000 W.m-2.C-1) para trocadores de calor. Os
valores obtidos de U no foram maiores, pois se trabalhou com baixas
vazes de gua no tubo interno para obter preciso nas medidas.
Holman

(1983)

apresenta

valor

do

coeficiente

global

de

transferncia de calor para o trocador de calor guagua entre valores

de 850 a 1700 W.m-2.C-1. Comparando com o sistema do presente
trabalho, os resultados podem ser considerados bastante satisfatrio pois
se trabalhou com gua-ar e obteve-se um valor mximo de700 Wm-2C-1.
Os valores indicados na literatura referem-se ao coeficiente
individual de transferncia de calor (h). No presente trabalho determinouse o coeficiente global de transferncia de calor (U), funo dos
coeficientes individuais das pelculas estagnadas interna (hi) e externa
(he) ao tubo oco e da condutividade trmica do ao inoxidvel (k). Como

Resultados e Discusso

75

apresenta alto valor e a espessura da parede de metal muito pequena,

o clculo de U fica condicionado aos valores dos coeficientes individuais
(hi e he) que so funes das vazes de fluidos no interior e no exterior do
tubo oco. Em outras palavras, no foi possvel, nas condies ensaiadas
determinar as contribuies individuais de hi e he no clculo de U. Como,
por razes experimentais, a faixa de vazo de gua no interior do tubo
oco foi limitada (5,3 a 16,5 g.s-1), pode-se deduzir que os valores
encontrados para U localizados no incio da faixa de literatura foram
limitados por esta razo.
Os valores de U mostraram-se bastante satisfatrios em relao ao
sistema antigo de aquecimento utilizado neste mesmo biorreator airlift que
era com encamisamento externo, para um exemplo qualitativo, o tempo
para estabilizao de temperatura partindo-se de 20 at 28 C diminuiu de
uma hora para dez minutos, mostrando a melhora significativa no
biorreator airlift de circulao interna com o encamisamento interno.
Para ilustrar a fidelidade do ajuste no Grfico da Figura 4-1, podese concluir que os valores de U calculados diferiram dos valores de U
experimentais dentro de uma faixa de 10% de erro, que pode ser
considerado bastante satisfatrio para o ajuste.

Resultados e Discusso

76

800
+ 10%

700
- 10%

-1

500

-2

Uexp (W.m .C )

600

400
300
200
100
0

100

200

300

400

500
-2

600

700

800

-1

Ucalc (W.m .C )

Figura 4-1 - Grfico do U calculado em funo de U experimental.

4.2 Avaliao do arraste de gua do sistema

biorreator mais condensador
Avaliar o arraste de gua do biorreator airlift um estudo
necessrio, pois para operaes durante longos perodos a perda de
gua um fator que interfere de forma muito importante no funcionamento
do biorreator durante cultivos de microrganismos.
Para o referido estudo foram relacionados trs parmetros,
importantes que interferem na quantidade de gua arrastada: temperatura
do biorreator (TB), temperatura do condensador (TC) e a vazo especfica
de ar ( ar ).

Resultados e Discusso

77

Na Tabela 4-2, so apresentados dados do experimento para

avaliar o arraste de gua do biorreator airlift com condensador.
Tabela 4-2 Dados experimentais da avaliao do arraste de gua do biorreator
airlift

Tb (C)

Tc(C)

Perda

ar

Arraste

(vvs)

(mL.h-1)

Eficincia
horria
(%)
(%/h)

25

15

0,05

18,4

0,31

37,3

35

15

0,05

24,3

0,41

47,7

25

25

0,05

20,4

0,34

30,5

35

25

0,05

34,0

0,57

26,7

35

25

0,0167

12,6

0,21

27,9

25

25

0,0167

7,2

0,12

39,2

25

15

0,0167

1,9

0,03

84,2

35

15

0,0167

5,1

0,09

70,8

35

25

0,0833

60,0

1,00

31,2

25

25

0,0833

57,1

0,95

______

35

15

0,0833

40,0

0,67

54,2

25

15

0,0833

39,1

0,65

26,6

A perda horria em %.h-1 refere-se a perda de gua do biorreator

relativo em relao ao volume inicial de 6 Litros.
A eficincia em % relaciona a perda horria do biorreator com
condensador e a perda horria do biorreator sem condensador.

Resultados e Discusso

78

calculada como sendo a diferena entre as perdas, dividindo pela perda

de gua do biorreator sem condensador.
Foram realizados doze experimentos e relacionados a perda
horria com a temperatura do condensador (TCond.), temperatura do
biorreator (TMeio) e com a vazo de ar ( ar ) do tipo da Equao 4-1 foi
ajustada aos valores experimentais.
A Equao 4-3 expressa a correlao ajustada com o auxlio do
software Microcal Orign 7.0 pelo algoritmo de regresses no lineares
Levenberg-Marquardt.
0,73
0,37
Perda = 0,669 1Ar,30 Tcond
Tmeio

Eq. 4-3

Onde:
Perda horria de gua (Perda): (% / h);
Temperatura do condensador (Tcond): (C);
Vazo de alimentao de ar ( ar ): (vvs);
Temperatura do biorreator (TMeio): (C).
Os valores dos parmetros ajustados com os respectivos erros,
considerando 95% de grau de confiana, juntamente com o coeficiente de
correlao so apresentados na seqncia:
P1 = 0,669

0,602

P2 = 1,30

0,13044

P3 = 0,73

0,14341

P4 = 0,37

0,206

R2 = 0.97

Resultados e Discusso

79

O coeficiente de correlao foi de 0,97 mostra que o modelo

descrito descreve muito bem os dados experimentais.
No grfico da Figura 4-2 mostra-se que a maioria dos valores de
arraste calculado diferem dos valores de arraste experimental dentro de
uma faixa de 10% de erro, que considerado bastante satisfatrio para o
ajuste.

1,0
+10%

Arraste exp (%/h)

0,8
-10%
0,6

0,4

0,2

0,0
0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

Arraste calc (%/h)

Figura 4-2 - Grfico do arraste calculado versus arraste experimental.

Conclui-se que o fator que mais contribui para o aumento de perda

de gua a vazo de ar, pois o fenmeno responsvel pelo arraste de
vapor por um gs no condensvel, que conhecido como stripping.
Parte da gua arrastada est na forma de vapor em equilbrio com a fase
liquida e parte arrastada mecanicamente pelo arrasto de gs.

Resultados e Discusso

80

O segundo parmetro que influenciou para perda de gua foi a

temperatura

do

condensador.

Quanto

maior

temperatura

do

condensador maior o arraste de gua para fora do sistema.

O terceiro parmetro considerado foi a temperatura no interior do
biorreator, que apresentou uma contribuio pequena, mas importante
para o aumento da perda de gua.

4.3 Avaliao da transferncia de oxignio.

Para a validao do sistema airlift como biorreator para uso
comercial faz se necessrio tambm a avaliao de capacidade de
transferncia de oxignio. O parmetro mais amplamente utilizado para
quantificar a transferncia de oxignio em biorreatores o coeficiente
volumtrico de transferncia de oxignio (kLa).
Tal como citado no item Materiais e Mtodos, os valores de kLa
foram determinados pelo mtodo dinmico considerando o atraso da
resposta do eletrodo.
A constante do atraso do eletrodo (ke) foi obtida em triplicata como
sendo igual a 0,0769 s-1.

Resultados e Discusso

81

Figura 4-3 - Exemplo do ajuste do modelo para determinao do coeficiente

volumtrico de transferncia de oxignio.

O grfico da Figura 4-3 apresenta um exemplo do ajuste do modelo

expresso pela Equao 3-7 para determinao do coeficiente volumtrico
de transferncia de oxignio (kLa), onde pode-se observar o excelente
ajuste obtido.
Na Tabela 4-3 apresenta os valores de kLa obtidos no biorreator
airlift operado em diferentes condies de aerao.

Resultados e Discusso

82

Tabela 4-3 Valores do kLa para biorreator airlift para vazes especficas de ar de
1 a 5 vvm

Vazo de ar

UGS

kLa

kLa

(vvm)

(m.s-1)

(s-1)

(h-1)

1,0

0,0199

0,0157

56,5

1,5

0,0298

0,0160

57,5

2,0

0,0398

0,0238

85,9

2,5

0,0497

0,0279

100,6

3,0

0,0597

0,0322

115,8

3,5

0,0696

0,0482

173,6

4,5

0,0895

0,0606

218,1

5,0

0,0995

0,0714

257,0

Os resultados obtidos do coeficiente volumtrico de transferncia

de oxignio (kLa) foram correlacionados com a velocidade superficial do
gs (UGS) a partir da correlao j conhecida e representada por Barboza
et. al (2000) pela equao 4-4 onde y a varivel dependente (kLa) e x a
varivel independente (UGS).
y = P1 x P 2

Eq. 4-4

A equao 4-5 ilustra a correlao ajustada considerando o grau de

confiana de 95%:
1,16
k L a = 0,985 U GS

Onde:

Eq. 4-5

Resultados e Discusso

83

kLa: coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio (s-1);

UGS: velocidade superficial do gs (m.s-1)
Na seqncia so apresentados os parmetros da Equao 4-5
ajustados com os respectivos erros, bem como o coeficiente de
correlao obtido no ajuste, mostrando que o modelo proposto ajustou-se
adequadamente aos valores experimentais.
P1
P2
R2

0,3437
0,985
1,16

0,1284
=
0, 96
A Figura 4-4 ilustra a correlao obtida (equao 4-5) ajustada aos

valores experimentais de kLa em funo da velocidade superficial do gs.

0,08
0,07
0,06

kLa (s-1)

0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0,00
0,00 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 0,10 0,11 0,12

UGS (m.s-1)
Figura 4-4 - Coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio kLa em funo
da vazo de ar ( ar ).

Resultados e Discusso

84

O coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio (kLa)

tambm foi determinado para o biorreator convencional tipo tanque
agitado e aerado Bioflo III a 28C operado diferentes condies de
agitao (600, 800 e 1000 rpm) e aerao (0,5 e 1,0 vvm) normalmente
utilizadas em cultivos.
A Tabela 4-4 apresenta os valores de kLa obtidas para o biorreator
convencional tipo tanque agitado e aerado.
Tabela 4-4 Valores de kLa para biorreator convencional em diferentes condies
de agitao e aerao.

Vazo de ar

Rotao

kLa

kLa

(vvm)

(rpm)

(s-1)

(h-1)

0,5

600

0,0380

136,8

1,0

600

0,0453

163,0

0,5

800

0,0555

199,7

1,0

800

0,0636

228,9

0,5

1000

0,0657

236,6

1,0

1000

0,0729

262,5

Para encontrar condies de operao ( ar ) no biorreator airlift que

definem mesmos valores de kLa encontrados no biorreator convencional,
foi utilizada Equao 4-5. Substituindo-se os valores de kLa obtidos em
diferentes condies de agitao e aerao, foi possvel calcular
condies de aerao correspondentes no biorreator airlift. A Tabela 4-5
apresenta os resultados encontrados.

Resultados e Discusso

85

Tabela 4-5 Condies de aerao no biorreator airlift que definem os mesmos

valores de kLa encontrados no biorreator convencional.

Biorreator convencional
N (rpm)

ar (vvm)

Biorreator airlift

kLa (h-1)

ar (vvm)
(Equao 4-5)

600

0,5

136,8

2,98

600

1,0

163,0

3,44

800

0,5

199,7

4,08

800

1,0

228,9

4,59

1000

0,5

236,6

4,77

1000

1,0

262,5

5,20

4.4 Comparao entre consumos de potncia de

sistemas gaseificados por unidade de volume e
transferncia de oxignio nos biorreatores airlift
e convencional
Os consumos de potncia dos sistema gaseificados por unidade de
volume foram calculado para biorreator airlift e biorreator convencional
nos diferentes condies de operao.
A Tabela 4.6 apresenta os valores dos consumos de potncia por
unidade de volume e do coeficiente volumtrico de transferncia de
oxignio (kLa) para diferentes vazes especficas de alimentao de ar

Resultados e Discusso

86

( ar ) para biorreator airlift e para diferentes condies de agitao e

aerao para biorreator convencional (Bioflo III).
Tabela 4-6 Potncias transferidas por unidade de volume e kLa em diferentes
condies de operao rea para os biorreatores airlift e convencional.

Biorreator Convencional

Biorreator Airlift
Vazo

Vazo
Rotao

Pg/V
de ar

(rpm)

-1

-1

(W.L )

kLa (h-1)

Pg/V
de ar
-1

(L.min )

-1

(W.L )

kLa (h-1)

(L.min )

600

2,0

4,58

136,8

6,0

0,070

56,5

600

4,0

3,84

163,0

9,0

0,105

57,5

800

2,0

11,33

199,7

12,0

0,140

85,9

800

4,0

09,51

228,0

15,0

0,175

100,6

1000

2,0

22,89

236,6

18,0

0,211

115,8

1000

4,0

19,22

262,5

21,0

0,246

173,6

27,0

0,316

218,1

30,0

0,351

257,0

O grfico da Figura 4-5 ilustra os valores de consumo de potncia

do sistema gaseificado por unidade de volume em funo do kLa.

Resultados e Discusso

87

Airlift
Conv. 1000 rpm

Conv. 600 rpm

Conv. 800 rpm

24

2 L.min

20

4 L.min

16
2 L.min

12
-1

Pg/V (W.L )

-1

-1

4 L.min

8
4

2 L.min

-1

4 L.min

-1

-1

-1

0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
40

80

120

160

200

240

280

-1

kLa (h )
Figura 4-5 Grfico do consumo de potncia especfica de sistema gaseificados em
funo do kLa.

Como ilustrao, observa-se no grfico da Figura 4-5 que para um

mesmo valor de kLa de 220 h-1, para o biorreator airlift necessrio
apenas 0,32 W.L-1 a passo que para o biorreator convencional gasta 9,0
W.L-1. Logo para transferir a mesma quantidade de oxignio, o biorreator
airlift consome 28 vezes menos energia que o biorreator convencional.

Resultados e Discusso

88

4.5 Comparao entre o mtodo dinmico e o

mtodo do sulfito para a determinao do
coeficiente volumtrico de transferncia de
oxignio (kLa)
Comparar dois mtodos para determinar o coeficiente volumtrico
de transferncia de oxignio se faz necessrio, pois os mtodos
determinam kLa em situaes diferentes.
O mtodo do sulfito determina o kLa em solues nocoalescentes, dado que a adio de sulfito de sdio e sulfato de cobre
forma uma soluo inica. Como resultado, uma vez formadas, as bolhas
no se unem formando bolhas maiores, em outras palavras, no
coalescem. Tal fato acaba por definir uma alta rea interfacial de troca de
massa, pois para um mesmo volume de ar a rea interfacial aumenta com
o nmero de bolhas.
O mtodo dinmico determina o kLa em meio coalescente, j que
se utiliza gua destilada como fase lquida. As bolhas de ar tendem a se
unir, formando bolhas maiores que diminuem a rea interfacial de troca de
massa.
A Figura 4-6 apresenta ilustraes de sistemas coalescentes e
no-coalescentes.

Resultados e Discusso

89

Figura 4-6 Esquema ilustrativo de solues coalescentes e no-coalescentes.

Caldos de fermentao em geral comportam-se como sistemas

coalescentes, logo, para comparar capacidade de transferncia de
oxignio de diferentes biorreatores convencionais e pneumticos mais
apropriado a utilizao do mtodo dinmico. Quando utilizado o mtodo
de sulfito de sdio, os valores de kLa obtidos para o biorreator
convencional apresentam valores bem superiores queles obtidos para
biorreator airlift (Cassiano Filho, 2003).
A Tabela 4-7 que segue, apresenta valores de kLa para o biorreator
airlift obtidos em diferentes condies de aerao pelo mtodo dinmico e
o mtodo de sulfito de sdio. Os valores de kLa obtidos pelo mtodo de
sulfito de sdio foram extrados da dissertao de Cassiano Filho (2003).

Resultados e Discusso

sulfito.

90

Tabela 4-7 - Resultados de kLa para o biorreator airlift pelo mtodo dinmico e do

Vazo de ar
(vvm)

Mtodo Dinmico
-1

Mtodo do Sulfito
-1

-1

-1

kLa (s )
0,016

kLa (h )
56,5

kLa (s )
0,036

kLa (h )
129,2

1,5

0,016

57,6

0,054

195,2

0,024

86,0

0,074

266,0

2,5

0,028

100,8

0,080

288,4

3,0

0,032

115,9

0,095

342,7

3,5

0,048

173,5

0,108

387,4

4,0

0,120

432,5

4,5

0,061

218,2

0,129

465,2

5,0

0,071

257,0

0,155

559,7

Observando-se os dados experimentais da tabela 4-7, nota-se que

o mtodo do sulfito gera valores muito maiores de kLa que o mtodo
dinmico que pode ser explicado pela ocorrncia de coalescncia no
sistema ar-gua e no coalescncia no sistema ar-gua-sulfito de sdio.
A Figura 4-7 ilustra a diferena entre valores do coeficiente
volumtrico de transferncia de oxignio (kLa) obtidos pelo mtodo
dinmico e do sulfito, para o biorreator airlift em diferentes condies de
aerao.

Resultados e Discusso

650
600

91

Mtodo Dinmico Sist Coalescente

Mtodo Sulfito Sist No-Coalescente

550
500
450

kLa (s-1)

400
350
300
250
200
150
100
50
0
0,00 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 0,10 0,11 0,12

UGS (m.s-1)
Figura 4-7 Valores de kLa para o biorreator airlift em funo da vazo de ar obtidos pelo
mtodo dinmico e de sulfito.

Observa-se que para dada uma vazo especfica de alimentao

de ar, os valores de kLa obtidos pelo mtodo do sulfito so entre duas e
quatro vezes maiores que os obtidos pelo mtodo dinmico.
A Tabela 4-8 que segue, ilustra valores de kLa para o biorreator
convencional obtido em diferentes condies de aerao pelos mtodos
dinmico e o do sulfito de sdio. Os valores de kLa obtidos pelo mtodo
de sulfito de sdio foram extrados do trabalho de Vilaa (1997).

Resultados e Discusso

92

Tabela 4-8 - Resultados de kLa para o biorreator convencional pelo mtodo

dinmico e do sulfito.

Mtodo Dinmico

Mtodo do Sulfito

Vazo

Vazo
kL a

kLa

Rotao

kLa

kLa

(rpm)

(s-1)

(h-1)

(rpm)

(s-1)

(h-1)

2,0

600

0,0380

136,8

1,2

500

0,1154

415,6

4,0

600

0,0453

163

1,2

700

0,1517

546,2

2,0

800

0,0555

199,7

1,2

1000

0,1786

642,9

4,0

800

0,0636

228,9

2,4

500

0,1677

603,9

2,0

1000

0,0657

236,6

2,4

700

0,2205

793,9

4,0

1000

0,0729

262,5

2,4

1000

0,3251 1170,5

4,0

500

0,1918

4,0

700

0,3086 1111,1

4,0

1000

0,4236 1525,0

Rotao
de ar
(L.min-1)

de ar
(L.min-1)

690,4

Na Figura 4-8 ilustra a diferena entre os valores do coeficiente

volumtrico de transferncia de oxignio obtido pelo mtodo dinmico e
do sulfito, obtidos para o biorreator convencional em diferentes condies
de agitao e aerao.

Resultados e Discusso

93

600 rpm MD
500 rpm MS

800 rpm MD
700 rpm MS

1000rpm MD
1000 rpm MS

0,45
0,40
0,35

0,25

-1

kLa (s )

0,30

0,20
0,15

Mtodo
Sulfito

0,10
0,05

Mtodo
Dinmico
0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

4,0

4,5

5,0

-1

Vazo de ar (L.min )

Figura 4-8 - Valores de kLa para o biorreator convencional em funo da vazo de ar

obtidos pelo mtodo dinmico e de sulfito.

Como comparao, para agitao de 1000 rpm e aerao de 4

L.min-1, o valor de kLa obtido pelo mtodo dinmico foi cerca de seis
vezes menor em comparao aquele obtido pelo mtodo do sulfito.
Ainda, como no biorreator convencional h partes mecnicas
fragmentando as bolhas, o que no h no biorreator airlift, a medida que
aumenta a freqncia de rotao (N), a diferena entre os valores de kLa
entre os mtodos se torna cada vez maior.
Conclui-se que o mtodo dinmico se mostra muito mais
representativo para expressar a transferncia de oxignio em cultivos do
que o mtodo do sulfito, que superestima os valores de coeficiente
volumtrico de transferncia de oxignio (kLa) pois geram um meio no
coalescente diferente da maioria dos caldos que so coalescentes.

Resultados e Discusso

4.6 Cultivo

de

94

Streptomyces

clavuligerus

para

produo de cido clavulnico

Para avaliar o sistema airlift como biorreator, foram realizados
quatro cultivos, dois em biorreator convencional (B1 e B2) em diferentes
condies de agitao e aerao que apresentam duas condies de
transferncia de oxignio (kLa) e dois cultivos em biorreator airlift (A1 e
A2) sob condies de aerao que definem mesmas condies de
transferncia de oxignio alcanadas no biorreator convencional. As duas
condies de cultivo que definem os mesmos valores de kLa esto
apresentadas na Tabela 4-7.
Tabela 4-9 - Condies de kLa para os cultivos B1, B2, A1 e A2.

Biorreator
Biorreator convencional
airlift
Cultivo

kLa (h-1)

N (rpm)

ar (vvm)

ar (vvm)

B1

136,8

600

0,5

B2

199,7

800

0,5

A1

136,8

3,00

A2

199,7

4,08

4.6.1 Cultivos em Biorreator tipo tanque agitado e aerado

Os resultados de concentrao de cido clavulnico (Cac),
concentrao de glicerol (Cglic), ndice de consistncia (K), ndice de

Resultados e Discusso

95

comportamento de escoamento (n).e de concentrao de oxignio

dissolvido (OD) esto ilustradas em funo do tempo de cultivo. Na Figura
4-9 encontram-se os resultados obtidos no cultivo B1 realizado em
biorreator convencional a 600 rpm e 0,5 vvm.

Cac

Cglic

40

300

25
200

20
15

100

10
5

0
0

10

20

30

40

50

60

0
70

-2

30

-1

CAC (mg.L-1) , OD (%)

35

CGLic (g.L ) , K (dina.cm .s ) , n x10 (-)

OD
400

Tempo (h)
Figura 4-9 Resultados do cultivo B1 em biorreator tipo tanque agitado e aerado a 600
rpm e 0,5 vvm.

A produo mxima de cido clavulnico (Cac) foi de 263,6 mg.L-1

em 48 horas.
O segundo cultivo em biorreator tipo tanque agitado (B2) foi
realizado nas condies de aerao e agitao de 800 rpm e 0,5 vvm. Na
Figura 4-10 apresenta-se os resultados do cultivo B2.

96

40

50

60

CAC (mg.L-1) , OD (%)

400

300

200

100

0
0

10

20

30

30
28
26
24
22
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
70

Cglic

-2

Cac

-1

OD
500

CGLic (g.L ) , K (dina.cm .s ) , n x10 (-)

Resultados e Discusso

Tempo (h)
Figura 4-10 Resultados do cultivo B2 em biorreator tipo tanque agitado e aerado a 800
rpm e 0,5 vvm.

Observa-se novamente, que no houve limitao por falta de

oxignio durante o cultivo B2 com oxignio dissolvido alcanando um
valor mnino de 60 %, em torno de cultivo, sendo este valor muito acima
do valor encontrado do cultivo B1. O cultivo alcanou a produo mxima
de cido clavulnico de 404 mg.L-1 em 54 horas, 53,2 % superior do valor
encontrado no cultivo B1, devido provavelmente a maior condio de
cisalhamento imposta ao caldo, o que se traduz em maior valor de
concentrao mnima de oxignio dissolvido, tal como observado por
Rosa et al. (2004).

Resultados e Discusso

97

A Figura 4-11 apresenta a comparao entre os cultivos B1 e B2,

em termos de concentrao de oxignio dissolvido (OD) e concentrao
de cido clavulnico (Cac) e ndice de consistncia (K).

OD B2

Cac B1

40
38
36
34
32
30
28
26
24
22
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2

450
400

CAC (mg.L-1) , OD (%)

Cac B2

350
300
250
200
150
100
50
0
0

10

20

30

40

50

60

OD B1

500

-2

K B2

K (dina.cm .s )

K B1

70

Tempo (h)
Figura 4-11 Comparao entre os cultivos B1 e B2 , concentrao de cido clavulnico
(Cac) e oxignio dissolvido (%), ndice de escoamento (K).

Quanto aos valores do ndice de consistncia (K), observa-se que

em maiores condies de cisalhamento (cultivo B2) o valor mximo
encontrado para esse parmetro foi inferior mesmo tendo alcanado uma
produo superior, indicando uma maior produo especfica (Cac/K) de
cido clavulnico.
A comparao entre os cultivos B1 e B2 mostra que o cultivo
operado em condies de menor kLa, obteve menor concentrao de
cido clavulnico (263,6 mg.L-1) e o oxignio dissolvido aproximou-se de

Resultados e Discusso

98

20%, valor baixo em comparao com o cultivo B2, que obteve

concentrao de 404 mg.L-1 com menor valor do oxignio dissolvido em
torno de 55%, concluindo que o kLa um parmetro muito importante a
ser considerado na execuo de cultivos.

4.6.2 Cultivos em Biorreator Airlift

O primeiro cultivo em biorreator airlift (A1) foi realizado na condio
de aerao de 3 vvm (18 L.min-1) com pH e temperatura controlados a 6,8
e 28 C, respectivamente. Na figura 4-12 encontram-se os resultados
obtidos no cultivo A1, de concentrao de cido clavulnico (Cac),
concentrao de glicerol (Cglic), ndices de consistncia (K), ndice de
comportamento de escoamento (n) e oxignio dissolvido (OD) ao longo

OD

500

Cac

Cglic

16
14

10

300

8
200

6
4

100

2
0
0

10

20

30

40

50

60

0
70

Tempo (h)
Figura 4-12 - Resultados do cultivo A1 em biorreator Airlift com aerao de 3 vvm.

-2

12

-1

CAC (mg.L-1) , OD (%)

400

CGLic (g.L ) , K (dina.cm .s ) , n x10 (-)

do tempo.

Resultados e Discusso

99

Observa-se que no cultivo A1 tambm no houve limitao por falta

de oxignio alcanando um valor mnimo de oxignio dissolvido de
22%,em 24 horas de cultivo, como ilustrado na figura 4-12. O cultivo
alcanou valor mximo de K em torno de 14 dina.cm-2.sn, inferior aos
cultivos em biorreator convencional, a produo mxima de cido
clavulnico foi de 454,3 mg.L-1 em 54 horas, um resultado superior aos
encontrados nos cultivos em biorreator convencional.
O segundo cultivo em biorreator airlift (A2) foi realizado com a
alimentao de ar de 4,08 vvm (25,4 L.min-1) e ocorreu nas condies de
pH e temperatura de 6,8 e 28 C, respectivamente. Os resultados do
cultivo A2 esto ilustrados na Figura 4-13.

Cac

Cglic

16
14

10

300

8
200

6
4

100
2
0

0
0

10

20

30

40

50

60

-2

12

-1

CAC (mg.L-1) , OD (%)

400

CGLic (g.L ) , K (dina.cm .s ) , n x10 (-)

OD
500

70

Tempo (h)
Figura 4-13 - Resultados do cultivo A2 em biorreator Airlift com aerao de 4,08 vvm.

Resultados e Discusso

100

Nesse cultivo tambm no foi observado limitao por falta de

oxignio chegando a concentrao de oxignio dissolvido ao valor de
47%. A produo mxima de cido clavulnico foi de 442,1 mg. L-1 em 60
horas de cultivo. Nesse cultivo, a concentrao de oxignio dissolvido no
pode ser registrado por problema no cabo do eletrodo de OD. Desta
forma, o perfil de OD foi obtido considerando o perfil de OD do cultivo A1
e as condies de transferncia de oxignio (kLa) dos dois cultivos,
supondo o mesmo perfil de velocidade global de respirao celular.
A Figura 4-14 apresenta a comparao entre os cultivos A1 e A2,
em termos de concentrao de oxignio dissolvido (OD)e concentrao
de cido clavulnico (Cac) e ndice de consistncia (K).

KA2

KA1

OD A2

OD A1

Cac A1

Cac A2
16

500
450

14
12
10

250

-2

300

200

150
100

50

0
-50

350

K (dina.cm .s )

CAC (mg.L-1) , OD (%)

400

0
0

10

20

30

40

50

60

Tempo (h)

Figura 4-14 Comparao entre os cultivos A1 e A2, concentrao de cido clavulnico

(Cac) oxignio dissolvido (%) e ndice de consistncia (K).

Resultados e Discusso

101

Observa-se que nesses cultivos, as predies de AC foram

similares e superiores obtida no cultivo B2 e com valores mximos de K
bem inferiores, repetindo os resultados de alta produo especfica de AC
(Cac/K).

4.6.3 Comparaes

entre

cultivos

em

diferentes

Biorreatores
Na seqncia sero apresentadas comparaes entre os cultivos
de Streptomyces clavuligerus para a produo de cido clavulnico nos
diferentes

biorreatores

empregados

em

diferentes

condies

de

operao, destacadas abaixo:

- Cultivo B1 : Biorreator tipo tanque agitado a 600 rpm e 0,5 vvm.
- Cultivo B2: Biorreator tipo tanque agitado a 800 rpm e 0,5 vvm.
- Cultivo A1: Biorreator Airlift aerado com 3 vvm.
- Cultivo A2: Biorreator Airlift aerado com 4,08 vvm.
Na figura 4-15 so apresentados os perfis do parmetro reolgico
ndice de consistncia (K), concentrao de cido clavulnico (Cac) e
oxignio dissolvido (OD) para os cultivos realizados no biorreatores airlift
(A1) e convencional agitado (B1), operados em condies que definem o
mesmo valor de kLa de 137 h-1.

Resultados e Discusso

KA1

102

KB1

ODA1

ODB1

Cac A1

Cac B1

500

40

450

35
30

300

25

250

20

200

15

150

-2

350

K (dina.cm .s )

CAC (mg.L-1) , OD (%)

400

10

100

50
0
0

10

20

30

40

50

60

0
70

Tempo (h)
Figura 4-15 Comparao dos cultivos A1 e B1, com a produo de cido clavulnico
(Cac), ndice de consistncia (K) e oxignio dissolvido (OD).

Observa-se que no cultivo A1 atingiu-se uma alta concentrao de

cido clavulnico com ndice de consistncia relativamente baixo,
comparado com o cultivo B1, que atingiu um alto valor de K e no obteve
uma alta concentrao de cido clavulnico.
O ndice de consistncia (K) uma varivel de processo
relacionada concentrao e morfologia celular, em outras palavras,
numa mesma condio de cisalhamento, quanto maior o K maior a
concentrao celular.
Portanto, no cultivo A1, sendo o consumo de glicerol similar, os
microrganismos foram mais cisalhados (Kmx = 14,3 dina.cm-2.sn ) e se
produziu mais cido clavulnico (Cacmx = 454,2 mg.L-1) enquanto no
cultivo B1 os microrganismos foram menos cisalhados devido menor

Resultados e Discusso

103

freqncia de rotao (Kmx = 36,1 dina.cm-2.sn ) e, comparativamente,

pouco cido clavulnico foi produzido (Cacmx = 263,6 mg.L-1).
Quanto aos valores de oxignio dissolvido, pode-se notar que para
o cultivo B1, aps a fase de alto consumo de oxignio (de 0 a 24 horas),
houve uma retomada para um patamar elevado de concentrao de
oxignio dissolvido. J para o cultivo A1 os valores de oxignio dissolvido
aps um decrscimo acentuado, no apresentaram uma retomada
perceptvel, mantendo-se num patamar constante e inferior.
Na Figura 4-16 so apresentados perfis do parmetro reolgico
ndice de consistncia (K), concentrao de cido clavulnico (Cac) e
concentrao de oxignio dissolvido para os cultivos A2 e B2, realizados
nas mesmas condies de kLa (199,7 h-1) em diferentes tipos de
biorreatores.
ODB2

Cac A2

500
450

CAC (mg.L-1) , OD (%)

400
350
300
250
200
150
100
50
0
0

10

20

30

40

50

60

Cac B2
30
28
26
24
22
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
70

ODA2

-2

KB2

K (dina.cm .s )

KA2

Tempo (h)
Figura 4-16 Perfis de concentrao de cido clavulnico (Cac), ndice de consistncia (K)
e concentrao de OD para os cultivos A2 e B2.

Resultados e Discusso

104

Observa-se que no cultivo A2 foi atingida uma alta concentrao de

cido clavulnico com ndice de consistncia relativamente baixo,
comparado com o cultivo B2, que atingiu um alto valor de K obtendo-se
tambm uma alta concentrao de cido clavulnico.
Conhecendo-se os consumos de glicerol que foram similares, mais
a influncia do cisalhamento traduzido no valor de K mximo (11,9
dina.cm-2.sn). provvel que tal condio tenha sido a responsvel pela
alta concentrao de cido clavulnico (Cacmx = 442,1 mg.L-1). J no
cultivo B2 observa-se um maior valor de K mximo (27,1 dina.cm-2.sn) e
uma menor concentrao mxima de cido clavulnico (Cacmx = 404
mg.L-1), o que mais uma vez sugere que a maior produo de cido
clavulnico est relacionada com altas condies de cisalhamento.
Quanto aos valores de concentrao de oxignio dissolvido
presentes na Figura 4-16, pode-se notar que para o cultivo B2, aps a
fase de alto consumo de oxignio (de 0 a 24 horas), houve uma retomada
para um patamar elevado de concentrao de oxignio dissolvido. J no
cultivo A2, os valores de concentrao de oxignio dissolvido aps um
decrscimo

acentuado,

apresentaram

uma

retomada

perceptvel,

mantendo-se em um patamar constante, no entanto menor que do cultivo

B2.

Resultados e Discusso

Cac A1

105

Cac A2

Cac B1

Cac B2

500
450
400
350
300
250
200
150
100
50
0
-50

10

20

30

40

50

60

Tempo (horas)

Figura 4-17 Valores de produo de cido clavulnico para os cultivos A1, B1,
B2 e A2.

Na Figura 4-17 onde esto ilustrados os perfis de concentrao de

cido clavulnico para todos os cultivos, observa-se que aquele que
apresentou maior concentrao de cido clavulnico foi o A1 (Cacmx =
454,3 mg.L-1), mostrando que o biorreator airlift se compara e at supera
o desempenho do biorreator convencional, apresentando algumas
vantagens como o menor consumo de energia.

4.6.4 Condies de cisalhamento empregadas nos cultivos

Para os cultivos realizados em biorreator airlift, os valores mximos
alcanados do ndice de consistncia do caldos (Kmax) apresentaram-se
muito menores que aqueles dos cultivos realizados em biorreator

Resultados e Discusso

106

convencional. Parece, portanto, que as condies de cisalhamento no

biorreator airlift foram maiores.
possvel calcular valores de velocidade mdia de cisalhamento
( & m ) para as diferentes condies de operao empregadas nos
biorreatores estudados, a partir de correlaes propostas na literatura.
Metzner et al. (1961) propuseram a seguinte correlao estimar a
velocidade mdia de cisalhamento ( & m ) entre a extremidade do impelidor
e a parede do tanque em sistemas com dois impelidores tipo turbina de 6
ps planas.

& m BC = 11,4 N

Eq. 4-6

Para o clculo das condies de cisalhamento no biorreator airlift

empregado no presente trabalho, pode-se empregar a correlao de
Nishikawa et al. (1977), originalmente proposta para biorreatores coluna
de bolhas e airlift de circulao externa, dada como segue:

& m AL = 5000 UGS

UGS =

V& ar
AS

Eq. 4-7

Eq. 4-8

Onde:

V& ar : vazo de alimentao de ar (m3.s-1).

As : rea superficial da regio de subida de lquido (m2).
UGS: velocidade superficial do gs na regio de subida (m.s-1)

Resultados e Discusso

107

A tabela que segue ilustra os valores de & m em que os cultivos

foram realizados.
Tabela 4-10 Valores de
cultivo empregadas

& m

nos diferentes tipos de biorreatores nas condies de

Biorreator Convencional

Biorreator Airlift

ar

kL a

& m

ar

kL a

& m

(s-1)

(vvm)

(h-1)

(s-1)

(vvm)

(h-1)

(s-1)

10,00

0,5

136,8

114,0

3,00

136,8

300,0

13,33

0,5

199,7

152,0

4,08

199,7

406,1

Os resultados da Tabela 4-10 mostram que os valores de & m nos

cultivos realizados em biorreator airlift foram muito superiores aos valores
de & m relacionados ao biorreator convencional nas mesmas condies
de transferncia de oxignio (kLa), o que corrobora com os baixos valores
de ndice de consistncia mximo (Kmax) obtidos nos cultivos, que so
ilustrados na Figura 4-18, a relao do Kmax em funo da velocidade de
cisalhamento.

Resultados e Discusso

108

40
35

25

-2

KMx (dina.cm .s )

30

20
15
10
5
0
0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

-1

(s )

Figura 4-18 Grfico do ndice de consistncia mxima em funo da velocidade

de cisalhamento.

No presente trabalho mais uma vez se prova, agora para biorreator

no convencional, que a produo de cido clavulnico afetada
positivamente por altas condies de cisalhamento, tal como observado
no trabalho de Rosa et al. (2005).
Para ilustrar como o aumento da velocidade de

cisalhamento

aumenta a produo de cido clavulnico apresentado na Figura 4-19

valores de produo de cido clavulnico mxima em funo da
velocidade de cisalhamento.

Resultados e Discusso

109

550
500
450

CAC Mx (mg.L-1)

400
350
300
250
200
150
100
50
0
0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

-1

(s )
Figura 4-19 Grfico de produo de cido clavulnico mximo em funo da velocidade
de cisalhamento.

Concluses

110

5 CONCLUSES
O presente trabalho de dissertao foi dividido em quatro etapas:
determinao do coeficiente global de transferncia de calor no biorreator
airlift, avaliao do arraste de gua do sistema biorreator mais
condensador, avaliao e comparao da transferncia de oxignio em
biorreatores airlift e convencional e cultivos em biorreatores airlift e
convencional de Streptomyces clavuligerus para a produo de cido
clavulnico.
Quanto avaliao da transferncia de calor no sistema, valores
obtidos para o coeficiente global de troca de calor (U) apresentaram
valores satisfatrios para uma biorreator que no opera com altas nem
rpidas variaes de temperatura. Os valores ficaram dentro da faixa
conhecida da literatura, mostrando que o novo dispositivo proposto para
controle de temperatura foi muito eficiente ao longo dos cultivos
realizados.
O coeficiente global de troca trmica (U) pde ser relacionado
adequadamente com variveis do sistema como a vazo de ar, a vazo
de gua do tubo interno e a vazo de gua para resfriamento por uma
correlao, a partir da qual foi possvel visualizar as influncias individuais
de cada uma das variveis na transferncia de calor, sendo a vazo
especfica de gua no interior do tubo interno oco a varivel que mais
influenciou nos valore de U.

Concluses

111

Quanto avaliao da eficincia do condensador, conclui-se que o

mesmo se mostrou eficiente, mas no solucionou totalmente o problema
de perda de gua do sistema por arraste pelos altos fluxos de ar que
passam pelo biorreator airlift. A eficincia chegou a valores superiores a
80%, mostrando a importncia do uso do condensador no biorreator.
Os resultados de kLa deixaram evidente a diferena entre dois
mtodos de determinao de coeficiente volumtrico de transferncia de
oxignio (kLa), quais sejam, mtodo dinmico e mtodo do sulfito,
comprovando que em sistemas no-coalescentes (gua-sulfito de sdio) a
transferncia de oxignio muito superior que em sistemas coalescentes
(gua). Valores do coeficiente volumtrico de transferncia de oxignio
(kLa), obtidos no biorreator airlift e no biorreator convencional (Bioflo III)
pelo mtodo dinmico considerando o atraso do eletrodo, apresentaram
valores similares nas faixas de variveis estudadas, mostrando ser esse
mtodo o mais adequado para comparar desempenhos de biorreatores
quanto transferncia de oxignio.
Em mesmas condies de transferncia de oxignio (kLa), o
biorreator airlift apresentou consumos de energia muito inferiores que
aqueles obtidos em biorreator convencional.
Os cultivos realizados em biorreatores airlift e convencional para a
produo de cido clavulnico por Streptomyces clavuligerus nas duas
diferentes condies de transferncia de oxignio testadas, comprovaram
que maiores produes foram obtidas nos cultivos realizados em
biorreator airlift, com valores mximos de K bem inferiores, resultando em

Concluses

112

altas produes especficas de AC (Cac/K). Os baixos valores do ndice

de consistncia mximo (Kmax) encontrados nos cultivos concordaram
com as condies de cisalhamento impostas aos caldos, quantificadas por
correlaes de literatura entre a velocidade mdia de cisalhamento ( & m ) e
as condies de agitao e aerao, mostrando que o aumento da
velocidade de cisalhamento contribui positivamente para a produo de
cido clavulnico como mostrado no estudo de Rosa et. al (2005).

Referncias Bibliogrficas

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(http://classweb.gmu.edu/achriste/385-Ch16ppt/sld016.htm),
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