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Captulo

7
VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Ciclo do cido
Ctrico

7
Ciclo do cido Ctrico

Objetivos
1.

Descrever a obteno de acetil CoA pela descarboxilao oxidativa do


piruvato nas mitocndrias.

2.

Reconhecer que o ciclo do cido ctrico a via de oxidao do grupo acetila da


acetil CoA com formao de trs NADH e de um FADH 2 alm da formao de
um ATP (ou GTP) por fosforilao ao nvel do substrato.

3.

Identificar a reao catalisada pela citrato sintase como a primeira reao do


ciclo do cido ctrico e reconhecer as substncias participantes.

4.

Identificar as substncias participantes das rea es do ciclo do cido ctrico


catalisadas por: isocitrato desidrogenase, complexo do
cetoglutarato,
succinil CoA sintetase (succinato tiocinase), succinato desidrogenase e
malato desidrogenase.

5.

Explicar a reao catalisada succinil CoA sintetase (succinato tiocinase) na


formao de ATP ao nvel do substrato.

6.

Calcular o nmero de compostos de alta energia (ATP) sintetizados pela


oxidao de um mol acetil CoA no ciclo do cido ctrico.

7.

Descrever os mecanismos de regulao do ciclo do cido ctrico.

8.

Descrever a entrada e sada de intermedirios do ciclo do cido ctrico.

O ciclo do cido ctrico (tambm chamado de ciclo de Krebs ou


ciclo dos cidos tricarboxlicos) o estgio final da oxidao dos
combustveis metablicos. Os tomos de carbono entram no ciclo na
forma de grupos acetila derivados dos carboidratos, cidos graxos e
aminocidos. O grupo acetila ligado a coenzima A (acetil-CoA)
oxidado em oito reaes mitocondriais para formar duas molculas de
CO 2 com a conservao da energia livre liberada em trs molculas
de NADH, uma de FADH 2 e um composto de alta energia (GTP ou
ATP). O NADH e o FADH 2 so oxidados e os eltrons so conduzidos
pela cadeia mitocondrial transportadora de eltrons com a liberao
de energia conservada na forma de ATP sintetizado a partir de ADP e
Pi por meio de processo denominado fosforilao oxidativa (ver
Captulo 8). A reao lquida para o ciclo do cido ctrico :

191

192

MOTTA

Bioqumica

Quadro 7.1 Descoberta do ciclo do cido ctrico

A operao do ciclo do cido ctrico foi deduzida


por Hans Krebs em 1937 a partir de observaes
sobre a velocidade de consumo de oxignio durante
a oxidao do piruvato por suspenses de msculos
peitorais de pombos. Esses msculos ativos no vo,
exibem uma velocidade de respirao muito alta e
so apropriados para as investigaes metablicas.
O consumo de oxignio foi monitorado com o auxlio
de um manmetro, um aparelho que permite a
medida das alteraes no volume de um sistema
fechado a presso e temperatura constantes.
Estudos anteriores, principalmente os realizados
por Albert Szent Gyrgyi (1935), mostraram que o
succinato, o fumarato, o malato e o oxaloacetato
estimulavam o consumo de oxignio por esses
msculos. Krebs mostrou que o piruvato tambm
aumentava o consumo de oxignio.

Alm disso, ele tambm observou que a


oxidao do piruvato podia ser grandemente
estimulada pelo oxaloacetato, cis-aconitato, isocitrato
e
-cetoglutarato. Os efeitos dessas substncias
eram completamente suprimidos pela adio de
malonato,
um
inibidor
competitivo
da
succinato d esidrogenase. A adio do malonato
tambm acumulava citrato,
cetoglutarato e
succinato. Pelo fato da adio do piruvato e
oxaloacetato suspenso ter resultado no acmulo
de citrato, Krebs concluiu que a via operava como um
ciclo. Somente em 1951 foi demonstrado que a
acetil-CoA o intermedirio que condensa com o
oxaloacetato para formar citrato.
Krebs publicou sua descoberta no peridico
Enzimologia j que a revista Nature recusou o artigo
original.

Acetil CoA + 3 NAD + + FAD + GDP + P i + 2 H 2 O


2 CO 2 + 3 NADH + FADH 2 + CoASH + GTP + 3 H +
Alm do papel na gerao de energia, o ciclo do cido ctrico
tambm fonte de unidades monomricas para a biossntese de
carboidratos, lipdeos e aminocidos no-essenciais.
Nesse contexto ser examinado como o piruvato, derivado da
glicose e outros acares atravs da via glicoltica, oxidado
acetil CoA e CO 2 para entrar no ciclo do cido ctrico (Figura 7.1).
O piruvato atravessa a membrana externa da mitocndria via
canais aquosos de protenas transmembranas chamados porinas (ver
Seo 9.4). A piruvato translocase, uma protena da membrana
mitocondrial interna, transporta especificamente o piruvato do espao
intermembrana para a matriz mitocondrial em simporte com o H + (ver
Seo 9.4.B).
Piruvato
CO 2
2e
Acetil-CoA

GTP

Ciclo do
cido ctrico

2CO2

8e
Figura 7.1
Associao da gliclise e o ciclo do cido ctrico. O piruvato produzido
na gliclise convertido em acetil CoA, o combustvel do ciclo do cido
ctrico. Os eltrons removidos so transportados pelo NADH e FADH 2 para a
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons no interior das mitocndrias

7 Ciclo do cido ctrico


que fornece energia para a sntese de ATP.

7.1 Oxidao do piruvato a acetil CoA e CO2


Sob condies aerbicas, o piruvato presente na matriz
mitocondrial convertido em CO 2 e um fragmento de dois carbonos,
a acetil CoA em reao de descarboxilao oxidativa. A reao
catalisada pelo complexo da piruvato desidrogenase constitudo por
trs enzimas distintas: a piruvato desidrogenase (E1), a
diidrolipoil transacetilase (E2) e a diidrolipoi desidrogenase (E3)
associadas de modo no-covalente e cinco diferentes coenzimas. O
complexo est localizado exclusivamente na mitocndria das clulas
eucariticas. Devido a grande energia livre padro negativa dessa
reao sob condies fisiolgicas, o processo irreversvel o que
impede a reao inversa de formao do piruvato a partir do
acetil CoA.
Matriz mitocondrial

Citosol

Piruvato
translocase

Piruvato

COO
C

S-CoA

Complexo piruvato
desidrogenase

CH3

H+

CO2

HS-CoA

NAD+

Piruvato

CH3

NADH,H+

Acetil-CoA

A operao do complexo da piruvato desidrogenase requer cinco


coenzimas cujos papis funcionais so descritos a seguir.
1. Descarboxilao oxidativa do piruvato. A reao requer o co-fator
pirofosfato
de
tiamina
(TPP)
ligado

enzima
piruvato desidrogenase (E1). O TPP ataca o carbono da carbonila
do piruvato e libera o CO 2 deixando o grupo hidroxietil ligado ao
TPP para formar o hidroxietil TPP (HETTP).
CH3
+

CH3

N
C

S
O

C
C

N
C

CH3

OH

CH3
CO2
H

N
C

CH3

Hidroxietil-TPP

CH3
Piruvato

2. Transferncia do grupo hidroxietil do HETTP para a


diidrolipoil transacetilase (E2). O aceptor do hidroxietil o

193

194

MOTTA

Bioqumica

grupo prosttico lipoamida. A reao de transferncia regenera o


TPP da E1 e oxida o grupo hidroetil a um grupo acetila.
CH3
+

C S
C

CH3

CH3

CH3

CH3

H+

C S
CH3

O
C

S
S

HS
HS

S
Lipoamina

cido lipico

Lis

CH2

CH 2
CH2

CH2

O
CH2

CH2

CH2

NH
NH

(CH2 )4

CH
C

Lipoamina

3. Transferncia do grupo acetila para a coenzima A, em reao


catalisada pela diidrolipoil transacetilase.
Coenzima A
CoA

SH

Acetil CoA
O
CH3

CoA

CH3

HS

HS

HS

4. Regenerao do complexo da piruvato desidrogenase original. O


grupo diidrolipoato da E2 reduzido pela flavina adenina
dinuclotdeo (FAD) em presena de diidrolipoil desidrogenase
com a regenerao do lipoato.

7 Ciclo do cido ctrico

FAD

HS

FADH 2

HS

5. A FADH 2 reoxidada pela transferncia dos eltrons para o


NAD + para formar NADH. O NADH transfere os eltrons para a
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons que est acoplada
sntese de 2,5 molculas de ATP por meio da fosforilao
oxidativa. A reao total de converso de piruvato a acetil CoA
altamente exergnica G = 33,5 kJmol 1 . Como para cada
molcula de glicose, 2 piruvato so formados pela gliclise, so
sintetizadas 5 molculas de ATP.
NAD+

NADH + H +

FADH 2

FAD

A representao esquemtica da operao do complexo da


piruvato desidrogenase est resumida na Figura 7.2.
A atividade do complexo da piruvato desidrogenase regulada
por mecanismos alostricos e covalentes. O complexo ativado e
inibido alostericamente pelos efetores mostrados no Quadro 7.1.
Quadro 7.1 Principais efetores alostricos do complexo da piruvato desidrogenase.

Efetores positivos (ativadores)

Efetores negativos (inibidores)

Coenzima A

ATP

NAD +

NADH

AMP

Acetil CoA

Ca

2+

cidos graxos de cadeia longa

195

196

MOTTA

Bioqumica

NAD+
FAD
SH
5

SH
S

OH
CH 3

CO2

TPP

Diidrolipoil
desidrogenase

Hidroxietil-TPP

O
CH3

Piruvato
desidrogenase

Diidrolipoil
transacetilase

Piruvato

TPP

O
CH3

HS

O
C

HS

Lipoamida
1

FAD

S
HS

NADH + H +

CH3

CoA

Acetil-CoA
CoA

Acetil-diidrolipoamida
Figura 7.2
Operao do complexo da piruvato-desidrogenase. TTP = pirofosfato de tiamina. O lipoato tem dois
grupos tis ( SH) que formam uma ligao dissulfeto ( S S ) por oxidao.

Os mecanismos de regulao alostrica do complexo so


complementados por modificaes covalentes de protenas. O
complexo inibido por fosforilao pela ao de protena-cinase
(altos teores de piruvato, CoASH e NAD + inibem a cinase) e ativado
por desfosforilao pela ao de fosfatases quando os nveis de [ATP]
mitocondrial declinam.
A seguir a frmula d coenzima A (CoA):

7 Ciclo do cido ctrico

Grupo acetil
O
S
Resduo de
-mercaptoetilamida

CH3

CH2
CH2
NH
C

CH2

Adenosina-3-fosfato

CH 2

NH2

NH

Resduo de
cido pantotnico

HO

H3 C

CH3

CH2

O
O

CH2
H

OH

O
Acetil-coenzima A (acetil-CoA)

A. Destinos metablicos do acetil-CoA


Os principais destinos metablicos do acetil CoA produzido na
mitocndria incluem: (1) completa oxidao do grupo acetila no ciclo
do cido ctrico para a gerao de energia; (2) converso do excesso
de acetil CoA em corpos cetnicos (acetoacetato,
hidroxibutirato e
acetona) no fgado; (3) transferncia de unidades acetila para o
citosol com a subseqente biossntese de molculas complexas como
os esteris e cidos graxos de cadeia longa.

197

198

MOTTA

Bioqumica

Piruvato

Aminocidos

cidos graxos

Acetil-CoA

Ciclo do cido
ctrico

Corpos cetnicos

Esteris-cidos
graxos

Figura 7.3
Destinos do acetil-CoA

7.2 Reaes do ciclo do cido ctrico


A oxidao de acetil CoA realizada pelo ciclo do cido ctrico
em oito reaes sucessivas onde entra o grupo acetila (dois carbonos)
e saem duas molculas de CO 2 . (Figura 7.4).

7 Ciclo do cido ctrico

199

O
CH 3

CoA

Acetil-CoA
COO
C

NADH

H2 O

CH2

CH2

HO

COO

NAD+

COO

CoASH

1. Citratosintase

CH2

Oxaloacetato
COO
HO

COO

COO

8. Malatodesidrogenase

Citrato
COO

2. Aconitase

CH2

CH 2
COO
L -Malato

HO

COO

HO

COO
Isocitrato

7. Fumarase

NAD+

H2 O
Ciclo do
cido ctrico

COO

3. Isocitratodesidrogenase

NADH

CH
HC

CO2

COO

COO

Fumarato

CH 2

FADH 2

CH 2

6. Succinatodesidrogenase

COO
FAD

4. -Cetoglutaratodesidrogenase

CO 2

CH2

CoASH

CH2

COO

CoASH

-Cetoglutarato

COO
5. SuccinilCoA-sintetase

COO

NAD+

CH2
CH2

Succionato
GTP
GDP + Pi

Coa

NADH

Succinil-CoA
Figura 7.4
Reaes do ciclo do cido ctrico. O ciclo oxida duas unidades de carbono com a produo de duas molculas de
CO 2 , uma molcula de GTP, trs molculas de NADH e uma molcula de FADH 2 .

1. Condensao da acetil-CoA com o oxaloacetato. A etapa


inicial do ciclo do cido ctrico a condensao do acetil CoA com o

200

MOTTA

Bioqumica

oxalacetato para formar citrato e CoA livre, em reao irreversvel


catalisada pela citrato sintase. A condensao aldlica ocorre entre o
grupo metlico da acetil CoA e o grupo carboxlico do oxaloacetato,
com hidrlise da ligao tioster e a produo de coenzima A livre. A
reao altamente exergnica ( G = 31,5 kJmol 1 ).
COO

O
C
CH2

COO
-

COO

CoA

CH3

CH2
H2 O

HO

COO

CH2
COO

CoA SH

A citrato-sintase inibida pelo ATP, NADH, succinil CoA e


steres acil CoA graxos. A velocidade de reao determinada pela
disponibilidade de acetil CoA e do oxaloacetato. O citrato tambm
est envolvido na regulao de outras vias metablicas (inibe a
fosfofrutocinase na gliclise e ativa a acetil CoA carboxilase na
sntese dos cidos graxos) e como fonte de carbono e equivalentes
redutores para vrios processos de sntese.
Alm da condensao com o acetil CoA para formar citrato, o
oxaloacetato pode ser transformado em piruvato, glicose
(gliconeognese) e aspartato.
2. Isomerizao do citrato em isocitrato via cis aconitato. A
aconitase catalisa a isomerizao reversvel do citrato e do isocitrato,
por meio do intermedirio cis aconitato. A mistura em equilbrio
contm 90% de citrato, 4% de cis aconitato e 6% de isocitrato. No
meio celular, a reao deslocada para a direita, porque o isocitrato
rapidamente removido na etapa seguinte do ciclo. A aconitase contm
um centro ferro enxfre que atua tanto na ligao do substrato como
na catlise da reao.

7 Ciclo do cido ctrico

COO
CH2
HO

COO

H2 O

COO
H2 O

CH2

COO

COO

CH 2

CH

COO

COO

Citrato

CH 2
H

COO

HO

COO

Aconitase

Isocitrato

3. Descarboxilao oxidativa do isocitrato para formar


-cetoglutarato, o primeiro NADH e CO 2 . Na etapa seguinte, o
isocitrato oxidado a
cetoglutarato pela enzima alostrica
isocitrato desidrogenase NAD + dependente. Junto oxidao ocorre
a perda simultnea de CO 2 (remoo do grupo -carboxlico). A
enzima necessita Mg 2+ ou Mn 2+ e ativada pelo ADP e inibida pelo
ATP e NADH.
COO
CH2
H

HO

COO
O

C
H

NAD

H + NADH

CH2
H

C
O

COO
O

C
O

CO2

CH2
H

C
O

CH2

H+

C
C

COO
H

C
O

Isocitrato

4. Oxidao e descarboxilao do
cetoglutarato para formar
succinil CoA, o segundo NADH e CO 2 . A converso do
cetoglutarato em um composto de alta energia, a succinil CoA,
catalisada pelo complexo enzimtico
cetoglutarato desidrogenase.
A reao semelhante reao do complexo da piruvatodesidrogenase utilizada na transformao do piruvato em acetil CoA.
Participam da reao a tiamina pirofosfato, lipoato, coenzima A, FAD
e
NAD + .
O
complexo
multienzimtico
consiste
da
cetoglutarato desidrogenase,
diidrolipoil transuccinilase
e
diidrolipoil desidrogenase como trs unidades catalticas. A reao
produz a segunda molcula de CO 2 e o segundo NADH do ciclo. O
complexo inibido pelo ATP, GTP, NADH, succinil CoA e Ca2+ .

C
O

-Cetoglutarato

201

202

MOTTA

Bioqumica

COO

COO
CoASH

CH2

CO 2

CH2

CH2
C

CH2
O

NAD+

NADH

COO
-Cetoglutarato

CoA

Succinil-CoA

5. Clivagem da succinil CoA com formao de GTP. A


succinil CoA sintetase (succinato tiocinase) hidrolisa a ligao
tioster de alta energia da succinil CoA ( G
=
32,6
kJmol 1 )para formar succinato. A energia liberada conservada como
trifosfato de guanosina (GTP) produzida a partir de GDP + P i ( G
= 30,5 kJmol 1 ), em uma fosforilao ao nvel do substrato. O teor
energtico do GTP equivalente ao do ATP.
COO

COO

CH2

CH2
C

CoA

GTP

Pi

CH2
CH2

GTP

CoA

SH

COO

Em presena da nucleosdio difosfato cinase e Mg 2+ , o GTP


convertido reversivelmente em ATP:
GTP + ADP

GDP + ATP

6. Oxidao do succinato para formar fumarato e FADH 2 . O


succinato oxidado a fumarato pela succinato desidrogenase. Essa
enzima necessita de flavina adenina dinucleotdio (FAD) ligada
covalentemente. Nas clulas dos mamferos, a enzima est
firmemente ligada membrana mitocondrial interna sendo um
componente da succinato ubiquinona, um complexo multiprotico
que participa da cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A
succinato desidrogenase fortemente inibida competitivamente pelo
malonato e ativada pelo ATP, fsforo inorgnico e succinato.
COO
H

COO
Succinato

Enz-FAD

Enz-FADH2

COO
C

Succinato-desidrogenase

C
OOC

Fumarato

7 Ciclo do cido ctrico

Os co-fatores participam da transferncia de eltrons do succinato


para a ubiquinona.
Q

QH 2

Enzima-FADH2

Enzima-FAD

7. Hidratao da liga dupla do fumarato para formar malato e


o terceiro NADH. O fumarato hidratado a L malato pela enzima
fumarase. A enzima estereoespecfica e catalisa a hidratao da
dupla ligao trans do fumarato.
COO
CH
HC

H2 O
Fumarase

COO
H

OH

COO

COO

Fumarato

Malato

8. Oxidao do malato a oxaloacetato. A reao final do ciclo


catalisada pela malato-desidrogenase com a formao de oxaloacetato
e NADH. A posio de equilbrio dessa reao est deslocada quase
totalmente para a sntese do L malato ( G = +29,7 kJmol 1 ).
Entretanto, a rpida remoo do oxaloacetato pela citrato sintase para
a formao de citrato, possibilita a oxidao do malato.
COO
H

OH

CH2

NAD+ NAD + H +
Malato-desidrogenase

COO
Malato

COO
C

CH2
COO
Oxaloacetato

Alm da condensao com a acetil CoA para formar citrato, o


oxaloacetado pode ser transformado em piruvato, glicose
(neoglicognese) e aspartato (ver Metabolismo dos aminocidos).
A. Energia no ciclo do cido ctrico
O ciclo do cido ctrico a via oxidativa terminal para a maioria
dos combustveis metablicos (piruvato, aminocidos e cidos
graxos). Os dois carbonos do grupo acetila que participam do ciclo
so oxidados completamente a CO 2 e H 2 O. A energia liberada por
essas oxidaes conservada na forma de trs NADH, um FADH 2 e
uma molcula de GTP (ou ATP). Para cada NADH que transfere seus
eltrons para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons (ver
Captulo 8: Fosforilao oxidativa), aproximadamente 2,5 ATP so
produzidos a partir de ADP + P i . Para cada FADH 2 , cerca de 1,5 ATP
so produzidos. Assim, a completa oxidao do grupo acetila da
acetil CoA no ciclo do cido ctrico produz 10 ATP.

203

204

MOTTA

Bioqumica

B. Regulao do ciclo do cido ctrico


O ciclo do cido ctrico possui vrios nveis de controle para que
as necessidades energticas e biossintticas das clulas sejam
constantemente atingidas. A disponibilidade de substratos (acetilCoA, NAD + , FAD e ADP), a demanda por precursores biossintticos
provenientes do ciclo do cido ctrico e a necessidade de ATP
determinam a velocidade de operao do ciclo.
O suprimento de grupos acetil derivados do piruvato
(carboidratos) ou de cidos graxos (lipdios) fundamental na para a
velocidade do ciclo. A velocidade influenciada por controles
exercidos sobre o complexo da piruvato desidrogenase (inibido por
acetil CoA, ATP e NADH e ativado por CoA, ADP e NAD + ) e pela
regulao dos processos de transporte e
oxidao dos cidos
graxos.
Relao [NADH]/[NAD + ]. Elevadas concentraes de NADH
inibem alostericamente as trs enzimas controladoras do ciclo: a
citrato sintase,
a
isocitrato desidrogenase
e
a
cetoglutarato desidrogenase. A isocitrato desidrogenase pode
tambm ser inibida pelo ATP.
Os intermedirios do ciclo podem afetar a atividade de algumas
enzimas.
A
succinil CoA
inibe
o
complexo
cetoglutarato desidrogenase e a citrato sintase. O oxaloacetato
inibe a succinato desidrogenase. Teores de Ca 2+ intramitocondrial
tambm so importantes na regulao do ciclo do cido ctrico. A
piruvato desidrogenase ativada pelo clcio atravs da ao do
ction sobre a fosfatase regulatria. A isocitrato desidrogenase e a
cetoglutarato desidrogenase so estimuladas mais diretamente
pelos ons Ca 2+ .
Alguns intermedirios do ciclo do cido ctrico podem influenciar
o fluxo em outras vias, por exemplo, as enzimas glicolticas
fosfofrutocinase e piruvato cinase, so inibidas pelo citrato e
succinil CoA, respectivamente.
A Figura 7.5 mostra a regulao do fluxo metablico no ciclo do
cido ctrico.

7 Ciclo do cido ctrico

Acetil-CoA
H2O
CoA-SH

Citrato
sintase

NADH, ATP, Citrato

Oxaloacetato

Citrato

Malato
desidrogenase

Malato

Aconitase

Cis-aconitato

Fumarase

Fumarato

Aconitase

Succinato
desidrogenase

Isocitrato
Isocitrato
desidrogenase

Succinato
Succinil-CoA
sintetase

Complexo da
-cetoglutarato
desidrogenase

Succinil-CoA

-Cetoglutarato
Ca2+
NADH

NAD+,ADP, Ca2+
NADH, ATP
CO2

CO2
Figura 7.5
Regulao do fluxo metablico do ciclo do cido ctrico

7.3 Entrada e sada de intermedirios do ciclo do


cido ctrico
O ciclo do cido ctrico tem papel central no catabolismo de
carboidratos, cidos graxos e aminocidos, com liberao e
conservao de energia. Entretanto, o ciclo tambm est envolvido no
fornecimento de precursores para muitas vias biossintticas. O ciclo
do cido ctrico , portanto, anfiblico (anablico e catablico). Os
intermedirios do ciclo (exceto o isocitrato e o succinato) so
precursores ou produtos de vrias molculas biolgicas. Por exemplo,
a succinil CoA precursora da maioria dos tomos de carbono das
porfirinas. Os aminocidos aspartato e glutamato podem ser
provenientes do oxaloacetato e
cetoglutarato, respectivamente, via
reaes de transaminao. A sntese de cidos graxos e colesterol no
citosol necessita de acetil CoA gerada a partir do citrato que

205

206

MOTTA

Bioqumica

atravessa a membrana mitocondrial (ver Captulo 10: Metabolismo


dos lipdeos).
Quadro 7.2 Ciclo do glioxilato

Nos vegetais, em certos microrganismos e em


levedura possvel sintetizar carboidratos a partir de
substratos de dois carbonos como o acetato e etanol,
por meio de uma via alternativa chamada ciclo do
glioxilato. A via emprega as enzimas do ciclo do
cido ctrico, alm de duas enzimas ausentes nos
tecidos

animais:

isocitrato iase

malato sintase. Pela ao da isocitrato liase, o


isocitrato clivado em succinato e glioxilato. O
glioxilato condensa com uma segunda molcula de
acetil-CoA sob a ao da malato-sintase (em reao
anloga quela catalisada pela citrato-sintase no
ciclo do cido ctrico) para formar malato.

O malato passa para o citosol, onde oxidado a


oxaloacetato, que pode ser transformado em glicose
pelas reaes da gliconeognese ou se condensar
com outra molcula de acetil CoA e iniciar outra
volta do ciclo.
Nas plantas, o ciclo do glioxalato est localizado
em organelas chamadas glioxissomos.
Os animais vertebrados no apresentam o ciclo
do glioxilato e no podem sintetizar glicose a partir
de acetil CoA. Nas sementes em germinao, as
enzimas do ciclo do glioxilato degradam os cidos
graxos que so convertidos em glicose, precursor da
celulose.

Os intermedirios do ciclo do cido ctrico desviados para a


biossntese de novos compostos devem ser repostos por reaes que
permitam restabelecer seus nveis apropriados. Alm disso, as
flutuaes nas condies celulares podem necessitar de aumento na
atividade do ciclo, o que requer a suplementao de intermedirios. O
processo de reposio de intermedirios do ciclo chamado
anaplerose (do grego, preencher completamente). A produo de
oxaloacetato permite a entrada do grupo acetila no ciclo do cido
ctrico (oxaloacetato + acetil CoA
citrato) e a mais importante
reao anaplertica.
Em deficincias de qualquer dos intermedirios do ciclo, o
oxaloacetato formado pela carboxilao reversvel do piruvato por
CO 2 , em reao catalisada pela piruvato carboxilase que contm
biotina como coenzima. O excesso de acetil-CoA ativa
alostericamente a enzima.
Piruvato + CO 2 + ATP + H 2 O

oxaloacetato + ADP + P i

As reaes do ciclo convertem o oxaloacetato nos intermedirios


deficientes para que se restabelea sua concentrao apropriada.
A sntese do oxaloacetato ocorre tambm a partir do
fosfoenolpiruvato
e

catalisada
pela
fosfoenolpiruvato carboxicinase presente tanto no citosol como na
matriz mitocondrial. A enzima ativada pelo intermedirio glicoltico
frutose 1,6 bifosfato, cuja concentrao aumenta quando o ciclo do
cido ctrico atua lentamente.
Fosfoenolpiruvato + CO 2 + GDP

oxaloacetato + GTP

Pela ao conjunta das duas enzimas malato desidrogenase


(enzima mlica), o malato (e o oxaloacetato) pode ser produzido a
partir do piruvato:
Piruvato + CO 2 + NAD(P)H

malato + NAD(P) +

Outras reaes que abastecem o ciclo do cido ctrico incluem a


succinil-CoA, um produto do catabolismo de cidos graxos de cadeia
mpar, e os
cetocidos a partir do
cetoglutarato e oxaloacetato

7 Ciclo do cido ctrico

provenientes dos aminocidos glutamato e aspartato, respectivamente,


via reaes de transaminao.
Por reverso de reaes anaplerticas, os intermedirios do ciclo
do cido ctrico servem como precursores de glicose. Essa funo
demonstrada em certas espcies de microrganismos e plantas que
utilizam o ciclo do glioxilato na sntese de carboidratos a partir da
acetil CoA.

Piruvato

Outros
aminocidos,
purinas,
pirimidinas

Acetil-CoA

Citrato

Oxaloacetato

Asparato

cidos graxos,
esteris

Ciclo do
cido ctrico

Succinil-CoA
Porfirinas,
heme, clorofila

-Cetoglutarato
Glutamato

Purinas
Pirimidinas
Glutamina
Argina
Prolina

Figura 7.6
Papel biossinttico do ciclo do cido ctrico. Os intermedirios do ciclo do
cido ctrico so precursores biossintticos de vrios compostos.

Resumo
1. Os organismos aerbicos empregam o oxignio para gerar energia a
partir de combustveis metablicos por vias bioqumicas: ciclo do cido
ctrico, cadeia mitocondrial transportadora de eltrons e fosforilao
oxidativa.
2. O ciclo do cido ctrico uma srie de oito reaes sucessivas que
oxidam completamente substratos orgnicos, como carboidratos, cidos
graxos e aminocidos para formar CO 2 , H 2 O e coenzimas reduzidas
NADH e FADH 2 . O piruvato, o produto da via glicoltica, convertido a
acetil CoA, o substrato para o ciclo do cido ctrico.
3. Os grupos acetila entram no ciclo do cido ctrico como acetil CoA
produzidos a partir do piruvato por meio do complexo multienzimtico
da piruvato desidrogenase que contm trs enzimas e cinco coenzimas.
4. Alm do papel gerador de energia, o ciclo do cido ctrico tambm
exerce importantes papis, biossntese de glicose (gliconeognese), de
aminocidos, de bases nucleotdicas e de grupos heme.
5. O ciclo do glioxilato, encontrado em alguns vegetais e em alguns fungos,
uma verso modificada do cido ctrico no qual as molculas de dois
carbonos, como o acetato, so convertidos em precursores da glicose.

207

208

MOTTA

Bioqumica

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 47-75.
CAMPBELL, M. K. Bioqumica. 3 ed. Porto Alegre: ArtMed, 2000. p. 492-519.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So
Paulo: Sarvier, 2002. p. 441-64.
MOTTA, V. T. Bioqumica clnica para o laboratrio: princpios e
interpretaes. 4 ed. Porto Alegre: Editora Mdica Missau, 2003. p. 75-103.

Captulo

8
VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Fosforilao
Oxidativa

8
Fosforilao Oxidativa

Objetivos
1.

Ordenar os componentes da cadeia mitocondrial transportadora de eltrons,


de acordo com seus potenciais redox.

2.

Calcular a energia livre padro da oxidao de um composto, dado o potencial


redox padro.

3.

Comparar a energia livre padro de oxidao de um mol de FADH 2 e de 1 mol


de NADH na cadeia respiratria, at a formao de H 2 O.

4.

Explicar como a energia da oxidao de substncias pode ser utilizada para a


sntese de ATP.

5.

Explicar a sntese de ATP pela fosforilao oxidativa atravs da hiptese


quimiosmtica.

6.

Comparar os efeitos de um inibidor da oxidao, de um inibidor da fosforilao


e de um desacoplador, sobre o consumo de oxignio e sobre a produo de
ATP.

7.

Explicar os mecanismos do estresse oxidativo

A degradao de molculas nutrientes gera um nmero reduzido


de molculas de ATP diretamente pela fosforilao ao nvel do
substrato. No entanto, as etapas oxidativas da gliclise, ciclo cido
ctrico, -oxidao dos cidos graxos e da degradao de alguns
aminocidos produzem ATP indiretamente. Isso ocorre pela
reoxidao das coenzimas NADH e FADH 2 formadas pela oxidao
de macromolculas e que transferem seus eltrons para o O 2 por meio
da cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A cadeia
formada por complexos proticos (centros redox) localizados na
membrana mitocondrial interna e ligados firmemente a grupos
prostticos capazes de aceitar e doar eltrons (reaes de oxidaoreduo). Grande parte da energia liberada no sistema bombeia
prtons para fora da matriz mitocondrial, gerando um gradiente
eletroqumico de H + . O retorno dos prtons para a matriz
mitocondrial libera energia livre que canalizada para a sntese de
ATP a partir de ADP e P i , por meio da fosforilao oxidativa. Essa a
maior fonte de ATP nas clulas eucariticas. Existe um estreito
acoplamento entre a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons e
a sntese de ATP pela fosforilao oxidativa nas mitocndrias. O ATP
um transdutor energtico universal dos sistemas vivos que
utilizado na conduo da maioria das reaes dependentes de energia.
209

210

MOTTA

Bioqumica

As necessidades energticas dirias de um homem de 70 kg em


ocupao sedentria , aproximadamente, 10.000 kJ. A energia livre
padro de hidrlise do ATP 30,5 kJmol 1 . Esse indivduo deve,
portanto, hidrolizar o equivalente a 328 molculas ou 165 kg de ATP
por dia, no entanto, o corpo contm somente cerca de 50 g de ATP. O
clculo sugere que cada molcula de ATP sintetizada e
desfosforilada mais de 3.000 vezes a cada 24 horas para suprir de
energia as atividades do organismo. O atendimento da maior parte
dessas necessidades tem lugar na membrana mitocondrial interna e
realizada por dois sistemas acoplados: a cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons e a fosforilao oxidativa.

8.1 Estrutura mitocondrial


Os processos de liberao e conservao da maior parte de
energia livre nas clulas aerbicas so realizados nas mitocndrias. O
nmero de mitocndrias em diferentes tecidos reflete a funo
fisiolgica do mesmo e determina a capacidade de realizar funes
metablicas aerbicas. O eritrcito, por exemplo, no possui
mitocndrias e, portanto, no apresenta a capacidade de liberar
energia usando o oxignio como aceptor terminal de eltrons. Por
outro lado, a clula cardaca apresenta metade de seu volume
citoslico composto de mitocndrias e altamente dependente dos
processos aerbicos.
A mitocndria formada por duas membranas com diferentes
propriedades e funes biolgicas. A membrana externa lisa
composta de lipdeos (fosfolipdeos e colesterol) e protenas, com
poucas funes enzimticas e de transporte. Contm unidades da
protena porina, que formam canais transmembrana onde ocorre a
livre difuso de vrios ons e de molculas pequenas.

Matriz

Cristas

Membran
a interna

Membran
a externa

8 Fosforilao oxidativa

Figura 8.1
Mitocndria. (a) Acima: diagrama de um corte de uma mitocndria. (b)
Abaixo: microfotografia eletrnica

A membrana mitocondrial interna composta de 75% de


protenas e contm as enzimas envolvidas no transporte de eltrons e
na fosforilao oxidativa. Contm tambm, enzimas e sistemas de
transporte que controlam a transferncia de metablitos entre o
citosol e a matriz mitocondrial. Ao contrrio da membrana externa, a
interna virtualmente impermevel para a maioria das molculas
polares pequenas e ons. A impermeabilidade da membrana
mitocondrial interna promove a compartimentalizao das funes
metablicas entre o citosol e a mitocndria. Os compostos se movem
atravs da membrana mitocndrial mediados por protenas especficas
denominadas carreadores ou translocases. A membrana mitocondrial
interna apresenta pregas voltadas para o interior (circunvolues),
chamadas cristas que aumentam a superfcie da membrana e cujo
nmero reflete a atividade respiratria da clula.
O espao entre a membrana externa e a membrana interna
conhecido como espao intermembranas e equivalente ao citosol
quanto as suas concentraes em metablitos e ons. A regio
delimitada pela membrana interna denominada matriz mitocondrial.
Os principais caractersticas bioqumicas das mitocondriais so:
Membrana externa. Livremente permevel a molculas pequenas
e ons.
Membrana interna. Impermevel maioria das molculas
pequenas e ons, incluindo o H + , Na + , K + , ATP, ADP, Ca 2+ , P, o
piruvato, etc. A membrana contm: cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons, ADP-ATP translocases, ATP sintase
(Fo F 1 ) e outros transportadores de membrana.
Matriz
mitocondrial.
Contm:
complexo da
piruvatodesidrogenase, enzimas do ciclo do cido ctrico, enzimas da
oxidao dos cidos graxos, enzimas da oxidao dos
aminocidos, vrias outras enzimas, ribossomos, DNA, ATP, ADP,
P i , Mg 2+ , Ca 2+ , K + e outros substratos solveis.

8.2 Reaes de oxidao-reduo


As reaes de oxidao-reduo (reaes redox) envolvem a
transferncia de eltrons que passam de um doador de eltrons
(redutor) para um aceptor de eltrons (oxidante). Portanto, a

211

212

MOTTA

Bioqumica

oxidao a perda de eltrons, enquanto, a reduo o ganho de


eltrons. Nenhuma substncia pode doar eltrons sem que outra os
receba. Assim, uma reao de oxidao-reduo total composta de
duas meias reaes acopladas (uma reao de oxidao e uma reao
de reduo) e constituem um par redox:
Fe 2+
Fe3+ + e (oxidao)
2+
Cu + e
Cu + (reduo)
Em algumas reaes de oxidao-reduo so transferidos tanto
eltrons como prtons (tomos de hidrognio):
Substrato H 2

Substrato + 2H

2H + + 2e

A tendncia com a qual um doador de eltrons (redutor) perde


seus eltrons para um aceptor eletrnico (oxidante) expressa
quantitativamente pelo potencial de reduo do sistema. O
potencial padro de reduo (E ) definido como a fora
eletromotiva (fem), em volts (V), gerado por uma meia-clula onde os
dois membros do par redox conjugado so comparados a uma meiaclula referncia padro de hidrognio (2H + + 2e
H 2 ) a 25 C e 1
atm sob condies padro. O potencial padro da meia reao do
hidrognio em pH 7,0 E = 0,42 V (volts). A Tabela 8.1 apresenta
os valores de potenciais-padro de reduo de alguns pares redox.
Tabela 8.1 Potenciais padro de reduo (E
parciais bioqumicas.
Par redox

) de algumas reaes

(V)

Succinato + CO 2 + 2e
-cetoglutarato
+
2H + 2e
H2
-Cetoglutarato + CO 2 + H + + 2e
isocitrato
+
Acetoacetato + 2H 2e
-hidroxibutirato
NAD + + 2H + + 2e
NADH + H +

0,67

Lipoato + 2H + + 2e
diidrolipoato
+
Acetaldedo + 2H + 2e
etanol
Piruvato + 2H + + 2e
lactato
Oxaloacetato + 2H + + 2e
malato

0,29

Coenzima Q (oxid) + 2H + + 2e
coenzima Q (red)
Citocromo b (Fe 3+ ) + e
citocromo b (Fe 2+ )
Citocromo c (Fe 3+ ) + e
citocromo c (Fe 2+ )
Citocromo a (Fe 3+ ) + e
citocromo a (Fe 2+ )
Citocromo a 3 (Fe 3+ ) + e
citocromo a 3 (Fe 2+ )
+
H2O
O 2 + 2H + 2e

0,42
0,38
0,35
0,32
0,20
0,19
0,17
0,10
0,12
0,22
0,29
0,39
0,82

Quanto maior o potencial padro de reduo, maior a afinidade


da forma oxidada do par redox em aceitar eltrons e, assim, tornar-se
reduzida.
O potencial de reduo depende das concentraes das espcies
oxidadas e reduzidas. O potencial de reduo (E) est relacionado
com o potencial padro de reduo (E ) pela equao de Nernst
(proposta em 1881):

8 Fosforilao oxidativa

E'

E o'

213

receptor de eltrons
RT
ln
nF
doador de eltrons

onde E= potencial de reduo para as concentraes encontradas na


clula em pH 7,0, E = potencial padro de reduo, R = constante
dos gases (8,31 J K 1 mol 1 , T = temperatura absoluta em graus K
(Kelvin)(298K a 25 C), n = nmero de eltrons transferidos, F =
constante de Faraday (96.485 J V 1 mol 1 , a carga eltrica de 1 mol
de eletrons) e ln = logaritmo natural. A 25 C, esta equao se reduz a:
E'

E o'

59
receptor de eltrons
log
n
doador de eltrons

Onde E e E so expressos em V (volts).


A energia disponvel para a realizao de trabalho proporcional
a E (diferena nos potenciais de reduo). Quando o valor de E for
positivo, G ser negativa e indica um processo espontneo e pode
produzir trabalho.

8.3 Cadeia mitocondrial transportadora de


eltrons
Nas clulas eucariticas o estgio final da oxidao de nutrientes
ocorre na mitocndria. A organela promove a rpida oxidao do
NADH e FADH 2 produzidos nas reaes de gliclise, ciclo do cido
ctrico,
oxidao dos cidos graxos e oxidao de alguns
aminocidos. A transferncia de eltrons do NADH e FADH 2 para O 2
se realiza em uma sequncia de reaes de oxidorreduo em
processo denominado cadeia mitocondrial transportadora de eltrons
(CMTE) tambm conhecido como cadeia respiratria. A cadeia
consiste de uma srie de transportadores de eltrons que operam
seqencialmente, formados por protenas integrais de membranas
associadas a grupos prostticos capazes de aceitar ou doar eltrons.
Os eltrons passam atravs dessa cadeia do menor para o maior
potencial-padro de reduo. Na medida que os eltrons so
transferidos ao longo da cadeia, ocorre a liberao de energia livre
suficiente para sintetizar ATP a partir do ADP e P i por meio da
fosforilao oxidativa.
Os componentes da cadeia mitocondrial transportadora de
eltrons esto localizados na superfcie interna da membrana
mitocondrial interna por onde os eltrons provenientes do NADH e
FADH 2 fluem para o oxignio molecular. Os transportadores de
eltrons funcionam em complexos multienzimticos conhecidos como
NADH coenzima
Q
oxidorredutase
(complexo
I),
succinato coenzima Q oxidorredutase (complexo II), coenzima Qcitocromo c oxidorredutase (complexo III) e citocromo c oxidase
(complexo IV). Os grupos prostticos transportadores de eltrons
associados aos complexos proticos so: nucleotdeos da
nicotinamida (NAD + ou NADP + ), nucleotdeos da flavina (FMN ou
FAD), ubiquinona (coenzima Q), citocromos e protenas
ferro enxfre.

NAD + , NADP + e FAD


Apesar das estruturas do
NADH e NADPH serem
semelhantes, suas funes
diferem consideravelmente. O
NADH reconvertido a NAD +
na cadeia respiratria
mitocondrial transportadora de
eltrons, fundamentalmente
para a gerao de ATP. O
NADPH fornece ons hidretos
para a maioria dos processos
sintticos. Neste contexto
examinado somente a
reoxidao do NADH na cadeia
respiratria mitocondrial.

214

MOTTA

Bioqumica

Tabela 8.2 Caractersticas dos componentes proticos da cadeia


mitocondrial transportadora de eltrons
Complexo enzimtico

Grupo prosttico

I ( NADH

FMN, FeS*

coenzima Q oxidorredutase)

II ( Succinato

coenzima Q oxidorredutase)

III ( Coenzima Q
IV ( Citocromo

citocromo c oxidorredutase)

c oxidase)

FAD, FeS
Citocromo b
Citocromo c 1
1 FeS R **
Citocromo a
Citocromo a 3
Cu A , Cu B

*FeS = grupo ferro enxofre.


**FeS R = centro de Rieske

A. Complexo I transfere eltrons do NADH para a


ubiquinona
A transferncia de eltrons atravs da cadeia respiratria inicia
com o complexo I (tambm chamado NADH coenzima Q
oxidorredutase ou NADH desidrogenase) catalisa a transferncia de
dois eltrons do NADH (nicotinamida adenina dinucleotdio) para a
coenzima Q (ubiquinona). As principais fontes de NADH incluem
reaes do ciclo do cido ctrico e da oxidao dos cidos graxos.
Composto por 43 cadeias polipeptdicas diferentes, o complexo I a
maior protena transportadora de eltrons. Alm de uma molcula de
FMN (flavina mononucleotdeo), o complexo contm sete centros
ferro enxfre (FeS). Os centros ferro enxfre podem consistir de
dois ou quatro tomos de ferro complexado com igual nmero de ons
sulfeto, mediam a transferncia de um eltron. As protenas que
contm centros ferro enxofre so tambm conhecidas como
ferro protenas sem heme.

8 Fosforilao oxidativa

Nicotinamida

NH2

+
N

CH2

O
Ribose

OH

OH

NH2
O

O
O

O
CH2

Adenosina

OH

OX

X = H Nicotinamida-adenina-dinucleotdeo (NAD+ )
X = PO32 Nicotinamida-adenina-dinucleotdeo-fosfato (NADP+ )

As reaes catalisadas pelas desidrogenases so exemplificadas


esquematicamente pelas equaes:
Substrato oxidado + 2H + + 2e

Substrato reduzido

NAD + + 2H + + 2e

NADH + H +

Esta reao envolve a transferncia reversvel de dois prtons +


dois eltrons do substrato para o NAD + . Um prton (H + ) liberado
para o meio e o on hidreto, :H (um prton + dois eltrons),
incorporado na posio 4 do anel de nicotimanida do NAD + :
H

O
C

+
N
R
NAD(P)+
(oxidado)

H
NH2

O
C

H:

NH2

N
R
NAD(P)H
(reduzido)

O NADH oxidado a NAD + pela ao do Complexo I com a


transferncia de + 2H + + 2e para a coenzima Q (CoQ ou ubiquinona)
na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons:

215

216

MOTTA

Bioqumica

NADH + H + + CoQ (oxidada)

NAD + + CoQH 2 (reduzida)

A transferncia envolve vrias etapas intermedirias que ainda


no foram completamente esclarecidas. Os eltrons so transferidos
inicialmente do NADH para a FMN, um dos grupos prostticos da
enzima, para produzir a forma reduzida FMNH 2.
NADH + H + + FMN

FMNH 2 + NAD +
NH2

Riboflavina

O
CH2
Ribitol

P
O

OH

OH

OH

O
H

H3 C

OCH2

CH2
H3 C

OH

OH

Adenosina

O
NH

O
Flavina-adenina-dinucleotdeo (FAD)

O
N

H3 C

H
NH

+2H

H3 C

H3 C

NH

-2H

H3 C

A seguir os eltrons so transferidos da FMNH 2 para uma srie de


protenas ferro enxfre (FeS) cujos grupos mais comuns so 2Fe 2S
e 4Fe 4S. O estado oxidado frrico (Fe 3+ ) dos grupos capta os
eltrons da FMNH 2 com a liberao de prtons conforme a equao:
FMNH 2 + 2 Protena-Fe 3+ S
FMN + 2H+ + 2 Protena-Fe2+ S
As protenas ferro-enxfre reduzidas so reoxidadas pela
coenzima Q (CoQ), um pequeno composto lipossolvel presente em
virtualmente todos os sistemas vivos. A CoQ aceita eltrons das
flavoprotenas e reduzida a CoQH 2 em reao reversvel de
transferncia de eltrons:
O
H3C

H3C

OH
CH3

+2H+

CH3
H23C
CH
O

C
H

CH2 H

H3C

CH3

H3C

H23 C
CH

CH3

-2H+

OH

C
H

CH2 H

8 Fosforilao oxidativa

A reao seguinte mostra a reoxidao das protenas


ferro enxfre na cadeia respiratria mitocondrial pela coenzima Q:
O

2 Protena

2+

Fe

2H

R1

OH
R3
3+

2 Protena
R2

Fe

R1

R3

R2

R4

R4
O

OH

Durante a transferncia de dois eltrons atravs dos centros


redox do Complexo I, quatro prtons so translocados da matriz
mitocondrial para o espao intermembrana.
Espao
intermembrana

Complexo I
2e-

FMNH2

Fe-S

FMN

2e -

QH2
Q
Matriz

NADH

NAD

4H +

H+
Figura 8.2
Fluxo de eltrons e prtons por meio do Complexo I. Os eltrons passam do
NADH para a coenzima Q por vrios centros ferro-enxfre. A reduo do Q a
QH 2 tambm necessita de dois prtons. Quatro prtons so transferidos da
matriz para o espao intermembrana. O fluxo de prtons gera um potencial
eletroqumico atravs da membrana mitocondrial interna que conserva parte
da energia liberada pelas reaes de transferncia de prtons para a sntese
de ATP.

B. Succinato-coenzima Q oxidorredutase (Complexo II)


Uma via independente do Complexo I, permite a entrada de
eltrons de potencial relativamente alto na cadeia mitocondrial
transportadora
de
eltrons,
utilizando
o
complexo
succinato coenzima Q oxidorredutase (complexo II) que tambm
catalisa a reduo da CoQ a CoQH 2 . Os grupos redox incluem o FAD
(flavina adenina dinucleotdeo), protenas Fe-S e o citocromo b 560 . O
FADH 2 formado no ciclo do cido ctrico pela oxidao do
succinato
a
fumarato
em
presena
da
enzima
succinato desidrogenase, pertencente ao complexo II. Desse modo, o
FADH 2 produzido no deixa o complexo, mas seus eltrons so
transferidos para as protenas ferro-enxfre e a seguir para a CoQ
para entrar na cadeia. Do mesmo modo, o FADH 2 da
glicerol fosfato desidrogenase
e
acil CoA desidrogenase
transferem seus eltrons de alto potencial para a CoQ formando
CoQH 2 . O complexo II no bombeia prtons atravs da membrana
mitocondrial, pois a variao de energia livre insuficiente. Em
conseqncia, forma-se menos ATP pela oxidao do FADH 2 que pela
do NADH (ver adiante).
Apesar dos nomes, os complexos I e II no operam em srie, mas
ambos atingem o mesmo resultado.

217

218

MOTTA

Bioqumica

Espao
intermembrana

Complexo II
2eFAD
2eSuccinato

Fe-S

QH2

2e-

Q
Matriz

Fumarato + 2H

2H

Figura 8.3
Fluxo de eltrons por meio do Complexo II. Os eltrons do succinato passam
por uma flavoprotena e vrias centros FeS para atingir o Q. O complexo II
no contribui diretamente para gradiente de concentrao mas serve para
suprir de eltrons a cadeia mitocondrial de trnasporte.

C. Complexo III transfere eltrons da CoQH 2 para o


citocromo c
O complexo III (coenzima Q-citocromo c oxidorredutase ou
citocromo bc 1 ) catalisa a transferncia de eltrons da CoQH 2 para o
citocromo c com o transporte de prtons da matriz para o espao
intermembranas.
CoQH + citocromo c (Fe 3+ )
CoQ + citocromo c (Fe 2+ ) + H +
2

O complexo enzimtico formado no mnimo por oito protenas


diferentes, incluindo dois citocromos b (tipos b 562 e b 566 ) que
apresentam potenciais de oxidorreduo diferentes, um citocromo c 1
e uma protena ferro-enxfre. Devido a essa composio, o complexo
III as vezes denominado complexo citocromo bc 1 .
Nos organismos aerbicos as funes geradoras de energia
possuem vrios citocromos, localizados na membrana mitocondrial
interna. Os citocromos so protenas transportadoras de eltrons
caracterizadas pela presena de um grupo heme (ferro-protoporfirina)
como grupo prosttico. As porfirinas so compostos tetrapirrlicos
que permitem numerosas variaes em sua estrutura, dependendo dos
substituintes no ncleo pirrlico e de suas disposies especficas.
No decorrer dos ciclos catalticos, os tomos de ferro dos citocromos
oscilam entre o estado oxidado frrico (Fe 3+ ), e o estado reduzido
ferroso (Fe 2+ . Os citocromos so classificados pela natureza das
cadeias laterais do grupo heme em trs classes principais,
denominadas a, b e c.
A CoQ reduzida reoxidada pelo citocromo b. O centro reagente
deste intermedirio redox o tomo de ferro do complexo
porfirnico:

8 Fosforilao oxidativa
H2C

CH

H2C

CH3

CH

CH3

H
H3C

HN
3+

HC

Fe
N

H3C

H
H3C

CH2

CH

HN

N
HC

Fe
N

H3C

CH3

HN
2+

CH

HN
CH3

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

COOH

COOH

COOH

COOH

Quando o citocromo b atua como agente oxidante, o tomo de


ferro convertido de Fe 3+ (frrico) para Fe 2+ (ferroso). Ou seja, cada
molcula de citocromo b aceita um eltron. Como a oxidao da
CoQH 2 envolve a remoo de dois eltrons (e dois prtons), a
completa oxidao de uma molcula deste intermedirio necessita
duas molculas de citocromo b. Os prtons so liberados para o meio:
CoQH 2 + 2 citocromo b (Fe 3+ )

CoQ + 2 citocromo b (Fe 2+ ) + 2H +

O citocromo b , subsequentemente, oxidado pelo citocromo c 1 .


O carreador, como todos os citocromos, um complexo ferroporfirina protena. Os citocromos diferem entre si com respeito tanto
a poro protica como porfirnica. Entretanto, as reaes redox de
todos os citocromos envolvem a oxidao e reduo do ferro:
2 Citocromo b (Fe 2+ ) + 2 Citocromo c 1 (Fe 3+ )
2 Citocromo b (Fe 3+ ) + 2 Citocromo c 1 (Fe 2+ )
O citocromo c 1 reduzido transfere os eltrons para o citocromo c,
uma protena heme (protoporfirina IX) frouxamente ligada cistena
da protena na superfcie interna da membrana.
Quando o citocromo c reage com o citocromo c 1 ocorre a
transferncia de eltrons entre os tomos de ferro:
2 Citocromo c (Fe 2+ ) + 2 Citocromo c (Fe 3+ )
1

2 Citocromo c 1 (Fe 3 + ) + 2 Citocromo c (Fe 2 + )

A oxidao de uma molcula de QH 2 acompanhada pela


translocao de quatro prtons atravs da membrana mitocondrial
interna para o espao intermembrana (dois prtons da matriz e outros
dois da QH 2 ).
2H +
c
Q

Espao
intermembrana

2e-

QH2
Matriz

Complexo III
2H +

Figura 8.4
Fluxo de transporte de eltrons e prtons por meio do Complexo III. Os

CH2

219

220

MOTTA

Bioqumica
eltrons passam do QH 2 para o citocromo c. Quatro prtons so translocados
atravs da membrana: dois da matriz e dois do QH 2 .

D. Complexo IV oxida o citocromo c e reduz o O 2


O complexo IV (citocromo c oxidase) um complexo protico
que catalisa a transferncia de quatro eltrons do citocromo c at o
oxignio molecular para formar gua:
4 Citocromo c 2+ + O 2 + 4 H+

4 Citocromo c 3+ + 2 H 2 O

Os centros redox do complexo IV nos mamferos incluem grupos


heme e ons cobre situados entre as 13 subunidades em cada metade
do complexo dimrico.
Cada eltron transferido do citocromo c para o centro redox
Cu A , que contm dois ons cobre, e ento para o grupo heme a. A
seguir, o eltron viaja para para um centro binuclear que consiste do
tomo de ferro do heme a 3 e um on cobre (Cu B ). A reduo do O 2
pelos quatro eltrons ocorre no centro binuclear FeCu. A reduo do
O 2 a H 2 O consome quatro prtons da matriz mitocondrial.
A citocromo c oxidase tambm transloca dois prtons da matriz
para o espao intermembrana.
O mecanismo preciso desta fase no est totalmente esclarecido.
A presena de ons de cobre crtica para a transferncia final dos
eltrons para o oxignio.
Espao
Complexo IV intermembrana

c
2e -

CuA

a3 -CuB

2e-

Matriz
2H +

1/2 O

H2O

2H +

Figura 8.5
Fluxo de eltrons e prtons por meio do Complexo IV. Os tomos de ferro
dos grupos heme no citocromo e os tomos de cobre so oxidados e
reduzidos no fluxo de eltrons. O Complexo IV contribui para a concentrao
de prtons de dois modos: a translocao de prtons da matriz para o
espao intermembrana ocorre em associao com a transferncia de
eltrons e a formao de gua remove prtons da matriz.

E. Energia livre da transferncia dos eltrons do NADH para


o O2
A medida de variao de energia livre das reaes de oxidoreduo dependente da diferena de voltagem entre potenciaispadro de reduo, E , do par redox:
E

=E

(aceptor de eltrons) E

(doador de eltrons)

A variao de energia livre padro para a reao dada pela


equao:
G

= nF E

onde G a variao de energia livre padro, n o nmero de


eltrons transferidos por mol de reagente convertido, F a constante

8 Fosforilao oxidativa

de proporcionalidade faraday (1 F = 96.485 J V 1 mol 1 ), (um fator


que converte volt/equivalente a joule/equivalente) e
E
a
diferena entre os potenciais-padro de reduo do par redox.
Na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons dois eltrons
so transferidos do NADH (doador de eltrons) atravs de uma srie
de aceptores de eltrons com potenciais de reduo crescentes at o
O 2 (aceptor de eltrons). As reaes parciais para a oxidao do
NADH pelo O 2 so expressas:
NAD + + 2H + + 2e

NADH + H +

O 2 + 2H + + 2e

H2 O

= 0,32 V

= +0,82 V

E = +0,820 (0,320) mV = +1,14 mV


A variao de energia livre padro ento dada por
G

= 2 x 96.485 x 1,14 V
G

= 218 kJ mol

A energia livre global liberada ( 218 kJ mol 1 ) suficiente para


sintetizar ATP a partir de ADP e P i por meio da fosforilao
oxidativa.
NADH
Stio I
E 0 = + 0,42 V
.
G0
0
+0,2

UQH2

-1

Complexo Cit bc 1
Stio II
I
E 0 = + 0,18 V
.
G0
Cit c

Cit a
Cit a3

+0,4
+0,6
+0,8

-1

Stio III
I
E 0 = + 0,52 V
0
.
G

-1

O2
Fluxo de eltrons

Figura 8.6
Relaes energticas na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A
reduo na energia livre ocorre em trs etapas. Em cada etapa (stios I, II e
III) a energia liberada suficiente para a sntese de ATP.

8.4 Fosforilao oxidativa


A fosforilao oxidativa o processo no qual a energia gerada
pela cadeia mitocondrial transportadora de eltrons (CMTE)
conservada na forma de ATP. O processo responsvel pela maioria
do ATP sintetizado em organismos aerbicos. O fluxo de eltrons pela
CMTE, desde o par NADH/NAD + at o par O 2 /H 2 O, libera energia
livre que acoplada ao transporte de prtons por meio de uma

221

222

MOTTA

Bioqumica

membrana impermevel ao prton, e conservada como um potencial


eletroqumico de membrana. O fluxo transembrana de prtons fornece
energia livre para a sntese de ATP por meio da ATP-sintase a partir
de ADP e P i .
ADP + P i + H +
ATP + H 2 O
Apesar dos esforos realizados, ainda no foram identificados
alguns intermedirios da cadeia como tambm certas molculas
chamadas desacoladoras, que impedem a sntese de ATP durante o
CMTE. Alm disso, a hiptese no explica porque toda a membrana
mitocondrial deve estar intacta durante a sntese de ATP.
Alm da sntese de ATP, os gradientes de prtons gerados na
CMTE so dissipados na produo de calor empregando outra via
para os prtons retornarem para a matriz mitocondrial por meio de
uma protena existente nas membranas internas e chamada protena
desacopladora (termogenina), principalmente, no tecido adiposo
marrom.
A. Teoria quimiosmtica
Nas ltimas dcadas foram realizados significativos esforos para
delinear o mecanismo da fosforilao oxidativa. Muitas hipteses
foram propostas, mas somente uma foi amplamente aceita e tem sido
confirmada experimentalmente, a teoria quimiosmtica ou propulsora
de prtons (proposta por Peter Mitchell em 1961) incorporada de
elementos de outra proposta, a do acoplamento conformacional
(1974).
A teoria postula que o transporte de eltrons e a sntese de ATP
esto acoplados pelo gradiente eletroqumico atravs da membrana
mitocondrial interna. Neste modelo, a energia livre do transporte de
eltrons pela cadeia mitocondrial leva ao bombeamento de H +
(prtons) da matriz para o espao intermembrana, estabelecendo um
gradiente eletroqumico de H + (fora prton-motiva, pmf) atravs da
membrana mitocondrial interna. Os H + retornam para a matriz
mitocondrial por meio de canais proticos especficos formados pela
enzima ATP-sintase (ver adiante) que composta de duas unidades
funcionais, Fo e F 1 . A energia livre liberada pelo potencial
eletroqumico desse gradiente utilizada para a sntese de ATP a
partir de ADP e P i . Para cada NADH oxidado na matriz mitocondrial
~2,5 ATP so sintetizados, enquanto ~1,5 ATP so formados por
FADH 2 oxidado, j que seus eltrons entram na cadeia em CoQH 2 ,
depois do primeiro stio de bombeamento de prtons.

8 Fosforilao oxidativa

H+

+
I

2e-

H+

III

H+

IV

H+

1/2 O

Espao
intermembrana
Membrana
interna
Matriz

H2O

ATP
sintase

+
2H +
ADP
+
Pi

ATP
+
H2O

Figura 8.7
Acoplamento do transporte mitocondrial de eltrons e a sntese de ATP
(teoria quimiosmtica). O transporte de eltrons movimenta os prtons da
matriz mitocondrial para o espao intermembranas estabelecendo um
gradiente eletroqumico de prtons atravs da membrana mitocondrial
interna. O retorno dos prtons para a matriz via F o F 1 (ATP-sintase) e a
gerao de ATP mostrada esquerda da figura. A energia tambm
utilizada na translocao do Ca 2+ .

B. Sntese de ATP
O acoplamento entre o transporte de eltrons e a sntese de ATP
obtido pelo gradiente eletroqumico. A sntese do ATP na mitocndria
catalisada pelo complexo ATP sintase (ATP sintase bombeadora
de prtons, F o F 1 ATP sintase, complexo V) encontrada na membrana
mitocondrial interna. uma enzima multiprotica composta por duas
subunidades distintas: o F 1 e o F o . O componente F 1 (fator de
acoplamento I) uma protena perifrica de membrana solvel em
gua e formada por cinco diferentes subunidades polipeptdicas na
proporo ( 3 , 3 , , e ). O componente F o um complexo proteco
integral de membrana com oito diferentes tipos de subunidades e
insolvel em gua. O F o o canal transmembrana que transfere
prtons para o stio ativo da ATP sintase. A unidade F 1 catalisa a
sntese de ATP em trs stios ativos. A poro F o da ATP sintase uma
protena integral de membrana formada por trs ou quatro
subunidades.
Quando o componente F 1 est conectado ao componente F o , a
ATP sintase (F o F 1 ATPase) catalisa a sntese de ATP. No entanto,
quando o componente F 1 liberado para a matriz mitocondrial ocorre
uma ao contrria sua funo normal; ele catalisa a hidrlise do
ATP (o reverso da sntese).

223

224

MOTTA

Bioqumica

ADP + Pi

H+

ATP

F1
Matriz
F0
Espao
intermembrana

Figura 8.8
Funo da ATP sintase. Os prtons fluem atravs do canal transmembrana
F o do espao intermembrana para a matriz; o componente F 1 catalisa a
sntese do ATP a partir do ADP + P i .

O mecanismo da sntese de ATP a partir de ADP e P i catalisada


pela ATP-sintase foi proposto por Paul Boyer (1979) e consiste de
mecanismo de mudana da ligao no qual os trs stios de F 1 giram
para catalisar a sntese. O mecanismo sugere que a energia no
empregada para formar a ligao fosfoanidro, mas para liberar o ATP
do stio ativo. No stio ativo, o K eq para a reao ADP + P i
ATP +
H 2 O perto de 1,0. Assim, a formao de ATP no stio ativo
rapidamente
completada.
Contudo,
........
Uma
mudana
conformacional dirigida pelo influxo de prtons enfraquece a ligao
do ATP com a enzima e, assim, o ATP recm-sintetizado deixa a
superfcie da enzima.
A formao e a liberao de ATP ocorre em trs etapas:
1. Uma molcula de ADP e uma molcula de P i ligam-se ao stio O
(aberto).
2. A passagem de prtons para o interior atravs da membrana
mitocondrial interna causa mudanas na conformao dos stios
catalticos. A conformao aberta (O) contendo ADP e P i
recentemente ligado torna-se um stio frouxo (L). O stio
frouxo, j preenchido com ADP e P i , torna-se um stio firme (T).
O stio T contendo ATP converte-se em stio O (aberto).
3. O ATP liberado do stio aberto; o ADP e P i , condensan-se para
formar ATP no stio firme (T).

8 Fosforilao oxidativa

ADP + Pi
O
T

ADP+Pi

ATP

Figura 8.3
Mecanismo de mudana de ligao
para ATP-sintase. As diferentes
conformaes dos trs stios so
indicados por diferentes formatos. O
ADP e o P i ligam-se ao stio O. Uma
alterao
conformacional
dependente de energia liberada na
translocao
de
prtons
interconverte os trs stios. O stio O
para L, T para O e O para L. O ATP
sintetizado no stio T e liberado no
stio O.

T
O

ATP

ATP
O
T

C. Transporte ativo do ATP, ADP e P i atravs da membrana


mitocondrial
necessrio que o ATP recm-sintetizado saia da mitocndria
para a sua utilizao no citosol, bem como o retorno do ADP para a
produo de ATP na matriz mitocondrial. No entanto, a membrana
mitocondrial interna impermevel a entrada de ADP e a sada de
ATP. Para que essas molculas atravessem a membrana necessria a

225

226

MOTTA

Bioqumica

presena da ATP-ADP translocase (translocador de ADP ATP)


uma protena mitocondrial transportadora de ons e metablitos
carregados que impelida pelo potencial de membrana. A difuso
dessas molculas carregadas realizada por um mecanismo de
transporte acoplado, ou seja, a entrada de ADP na matriz est
vinculada a sada de ATP, e vice-versa (sistema de antiporte). O
segundo sistema de transporte de membrana a fosfato translocase,
que promove a entrada de um P i e um H + (prton) para o interior da
matriz (sistema de simporte P i H + ), que atua em conjunto com a
ATP ADP-translocase. A ao combinada desses dois transportadores
promove a troca do ADP e P i citoslicos pelo ATP da matriz
mitocondrial com o ganho lquido de um H + no espao
intermembrana.
Membrana
mitocondrial
interna

Exterior

Interior

F1
ATP-Sintase

3H +

ATP 4+

Pi

ADP

H+

Figura 8.11
Transporte de ATP, ADP e P i atravs da membrana mitocondrial interna.
A ATP ADP translocase (translocador de ADP ATP) transporta o ATP
recm-sintetizado para o cotosol e ADP e P i para dentro da matriz
(antiporte). Notar que a troca de P i e H + simporte. (1) Fosfato-translocase e
(2) ATP-ADP-translocase.

A troca ATP-ADP gasta 25% do rendimento energtico da


transferncia de eltrons na cadeia mitocondrial para regenerar o
potencial de membrana.
D. Nmero de ATP gerados via cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons
A relao precisa entre o nmero de prtons que retornam para a
matriz mitocondrial atravs da F 1 F o ATP sintase e o nmero de ATP
gerados permance incerto. Existe o consenso de que trs prtons

8 Fosforilao oxidativa

voltam para a matriz para cada ATP gerado. Tambm acredita-se que
o par de eltrons que entra na cadeia transportadora a partir do:
NADH atravs dos Complexos I, III e IV resulta na translocao
de 10 prtons (as estimativas variam entre 9 e 12 prtons) para o
espao intermembrana. O retorno desses 10 prtons por meio da
ATP-sintase promove a sntese de ~2,5 ATP.
FADH 2 que se oxida no complexo II sem passar pelo Complexo I,
transloca seis eltrons para o espao intermembrana. O retorno
desses 6 prtons por meio da ATP-sintase sintetiza ~1,5 ATP.
A razo P/O uma medida do nmero de ATP sintetizados por
tomo de oxignio utilizado, ou por mol de gua produzida. Estudos
recentes confirmaram os valores (2,5 e 1,5) para a razo P/O e,
portanto, no correspondem aos valores anteriormente usados (3 e 2,
respectivamente). O transporte do fosfato para a matriz resulta em um
ganho lquido de um prton. Desse modo, assumindo que 10 prtons
so bombeados para fora da matriz mitocondrial e quatro prtons
retornam para cada ATP sintetizado, 10/4 molculas de ATP so
produzidas para cada dois eltrons liberados do NADH para O 2 na
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. Clculo similar
mostra que 6/4 molculas de ATP so produzidas por eltrons
emanados do FADH 2 .
E. Regulao da fosforilao oxidativa
A velocidade do transporte de eltrons e da fosforilao oxidativa
so controlados estritamente pelas necessidades energticas da clula.
O controle pelo ADP ilustrado pelo fato que a mitocndria s oxida
o NADH e o FADH 2 quando houver disponibilidade de ADP e P i
como substratos para a fosforilao Os eltrons no fluem pela
CMTE at o oxignio, a menos que o ADP seja simultaneamente
fosforilado a ATP. A velocidade da fosforilao oxidativa limitada
pelo quociente de ao das massas [ATP]/[ADP][P i ]. Ou seja, a ATPsintase inibida em altas concentraes de ATP e ativada quando as
concentraes de ADP e P i esto elevadas. A ATP sintase inibida
por altas concentraes de ATP e ativada por teores de ADP e P i
elevados. As quantidades relativas de ATP e ADP intramitocondrial
so controladas por duas protenas transportadoras presentes na
membrana interna: o translocador de ADP ATP e o carreador de
fosfato (ver acima).
O translocador de ADP ATP uma protena dimrica
responsvel pela troca 1:1 do ATP intramitocondrial pelo ADP
citoplasmtico. Como o ATP possui uma carga negativa a mais que o
ADP, o transporte do ATP para o exterior e do ADP para o interior da
mitocndria so favorecidas. O transporte de H 2 PO 4 junto com um
prton mediada pela fosfato-translocase, tambm conhecida como
H 2 PO 4 /H + simporte (movem solutos atravs da membrana na mesma
direo). O transporte de 4 prtons para o interior necessrio para a
sntese de cada molula de ATP; 3 para dirigir o rotor ATP-sintase e 1
para dirigir o transporte do fosfato para o interior.
F. Desacopladores da fosforilao oxidativa
Os desacopladores da fosforilao oxidativa so substncias
presentes na membrana mitocondrial interna que dissipam o gradiente

227

228

MOTTA

Bioqumica

de prtons ao trazerem novamente os prtons do espao


intermembrana para a matriz mitocondrial, contornando a
ATP sintase. Aumentam a permeabilidade dos H + e so capazes de
dissociar a fosforilao oxidativa do transporte de eltrons.
Quadro 8.1 Alguns inibidores que interferem com a fosforilao oxidativa.
Stio de inibio

Agente

Transporte de eltrons

Rotenona
Amital
Antimicina A
Monxido de carbono (CO)
Cianeto
Azida sdica
Piercidina A

Membrana interna

2,4-dinitrofenol (DNP)

ATP-sintase

Oligomicina

Valinomicina
Venturicidina
Protena desacopladora (termogenina)

G. Desacoplamento do transporte de eltrons e


termognese
Recm-nascidos, animais que hibernam e animais adaptados ao
frio necessitam maior produo de energia que a normalmente
produzida pelo metabolismo. Os animais de sangue quente usam o
calor para manter a temperatura do corpo. Sob condies normais, o
transporte de eltrons e a sntese de ATP esto intimamente acoplados
de tal forma que o calor produzido mantido ao mnimo. No tecido
adiposo marrom, a maior parte da energia produzida pela CMTE no
empregada para formar ATP. Em lugar disso, ela dissipada como
calor. (Esse tecido tem cor marrom devido ao grande nmero de
mitocndrias que contm). Ao redor de 10% da protena na membrana
mitocondrial interna constituda de termogenina ou protena
desacopladora que permite que os prtons retornem matriz sem
passar pelo complexo F o F1 . Desse modo, quando a termogenina est
ativa, a energia de oxidao no conservada na forma de ATP mas
dissipada como calor. A protena desacopladora ativada quando ela
se liga a cidos graxos.
O processo de gerao de calor na gordura marrom, chamado
termognese sem tremor, regulado pela noradrenalina (na
termognese com tremor, o calor produzido pela contrao muscular
involuntria). A noradrenalina, um neurotransmissor liberado por
neurnios especializados que terminam no tecido adiposo marrom,
inicia um mecanismo de cascata que hidroliza molculas de gordura.
Os cidos graxos produzidos por hidrlise das gorduras ativam a
protena desacopladora. A oxidao de cidos graxos continua at
cessar o sinal de noradrenalina ou at que as reservas de gorduram
acabem.

8 Fosforilao oxidativa

H. Transporte de eltrons do citosol para a mitocndria


O NADH produzido na gliclise (na oxidao do
gliceraldedo 3 fosfato), no pode ser utilizado diretamente pela
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons para a formao de
ATP. Como a gerao de NADH (equivalente reduzido) ocorre no
citosol e a membrana mitocondrial interna impermevel a essa
substncia, possvel transportar somente os eltrons do NADH para
a mitocndria por um dos sistemas de circuitos, tais como, circuito do
glicerol fosfato e o circuito do malato aspartato.
1. Lanadeira do glicerol-fosfato. Est presente nos msculos e
crebro
dos
mamferos,
e
emprega
a
enzima
3 fosfoglicerol desidrogenase
que
catalisa
a
reduo
da
diidroxiacetona fosfato pelo NADH para originar 3 fosfoglicerol. O
3 fosfoglicerol difunde-se at a face externa da membrana
mitocondrial
interna
onde
localiza-se
uma
outra
3 fosfoglicerol desidrogenase que contm FAD. A diidroxiacetona
fosfato regenerada a partir da 3 fosfoglicerol formando FADH 2 . O
FADH 2 entrega seus eltrons coenzima Q para seguir a seqncia da
cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. Para cada NADH
citoslico oxidado resulta apenas 1,5 ATP. A diidroxiacetona fosfato
, ento, transferida de volta para o citosol.

NADH + H +

Diidroxiacetona
fosfato

Glicerol-3-fosfato
desidrogenase
citoslica

Glicerol
3-fosfato

NAD +

Complexo
glicerol-3-fosfato
desidrogenase

FADH2
FAD

2e
Q

Espao
intermembrana
Figura 8.12
Circuito (lanadeira)

glicerol-fosfato.

diidroxiacetona-fosfato

Matriz

glicerol 3 fosfato

NADH
em

citoslico

reao

reduz

catalisada

pela

glicerol 3 fosfato-desidrogenase citoslica. A reao reversa emprega uma


flavoprotena ligada superfcie externa da membrana interna que transfere
os eltrons para a coenzima Q (ubiquinona).

2. Lanadeira do malato-aspartato. Est disponvel nas clulas


hepticas, cardacas e renais e de outros tecidos. Nesse sistema, o
NADH citoslico reduz o oxaloacetato a malato pela
malato desidrogenase extramitocondrial. O malato transpe a
membrana mitocondrial interna onde reoxidado a oxaloacetato pela
malato desidrogenase mitocondrial que utiliza o NAD + como
coenzima. Pela reoxidao do malato na matriz, ocorre a transferncia
dos equivalentes reduzidos provenientes do citosol. O oxalacetato
formado transformado em aspartato que pode atravessar a
membrana. Este sai da mitocndria e, no citosol, regenera o

229

230

MOTTA

Bioqumica

oxaloacetato. O NADH regenerado na mitocndria transfere os


eltrons para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons, onde
forma ATP.

NAD+
Malato

NADH,H +

Aspartato
transaminase
citoslica

Oxaloacetato

Malato
desidrogenase
citoslica

Aspartato

-Cetoglutarato
Dicarboxilase
translocase

Glutamato

Glutamato
asparato
translocase

Glutamato
-Cetoglutarato

Malato

Malato
desidrogenase
mitocondrial

NAD

Oxaloacetato

NADH,H +
2e

Aspartato
transaminase
mitocondrial

Aspartato

Cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons
(na membrana interna)

Figura 8.13
Circuito do malato-aspartato. O NADH citoslico reduz o oxaloacetato a
malato., que transportado atravs da membrana interna para a matriz
mitocondrial. A reoxidao do malato gera NADH que transfere os eltrons
para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons.

A operao contnua do circuito necessita o retorno do


oxaloacetato para o citosol. O oxaloacetato citoslico regenerado
por meio de reaes de transaminao tanto mitocondriais como
citoslicas.
Todos os tecidos que possuem mitocndria, parecem ter a
carreadores que atravessam a membrana. A proporo de cada
lanadeira varia para cada tecido. O fgado utiliza, principalmente, a
malato-aspartato, enquanto certas clulas musculares so mais
dependentes do circuito do glicerol-fosfato.

8.5 Rendimento da oxidao completa da glicose


Cada molcula de glicose completamente oxidada a CO 2 e H 2 O
pelas vias da gliclise, ciclo do cido ctrico e cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons, utilizando o circuto malato/aspartato (ver
Captulo 6: Metabolismo dos carboidratos) gera 32 molculas de ATP
(Tabela 8.3) aceitando os novos valores para a relao P/O (ver

8 Fosforilao oxidativa

acima). Os valores anteriormente usados para o rendimento de ATP


pela oxidao completa da glicose 38 ATP.
Tabela 8.3 Balano de ATP formados pela completa oxidao da glicose
a CO 2 na gliclise e no ciclo do cido ctrico
Reaes

ATP/mol

Fosforilao da glicose

Fosforilao da glicose 6 fosfato

2 (desfosforilao do 1,3 bifosfoglicerato)

+2

2 (desfosforilao do fosfoenolpiruvato)

+2

2 x 1 NADH (oxidao do gliceraldeido 3 fosfato)

+5

2 x 1 NADH (descarboxilao oxidativa do piruvato)

+5

2 x 3 NADH (ciclo do cido ctrico)

+15

2 x 1 FADH 2 (ciclo do cido ctrico)


2 x 1 GTP (ciclo do cido ctrico)

+2

Total

+3
+31

A utilizao do circuto glicerol-fosfato encontrada no msculo


esqueltico e no crebro, apenas 30ATP so formados.
A oxidao da glicose a CO 2 e H 2 O, libera 2870 kJ mol 1 . A
energia livre padro necessria para sintetizar 1 mol de ATP a partir
de ADP e P i 30,5 kJ mol 1 A energia livre para a sntese de 32 ATP
corresponde a 32 x 30,5 = 976 kJ mol 1 . A eficincia termodinmica
de formao de ATP a partir da glicose 976 x 100/2870 = 34%.
Assim, aproximadamente 34% da energia liberada na completa
oxidao da glicose conservada como ATP.

8.6 Estresse oxidativo


Algumas vezes, o oxignio pode aceitar eltrons para formar
derivados instveis, conhecidos como espcies reativas de oxignio
(ROS) que incluem o radical superxido, perxido de hidrognio,
radical hidroxila e singlet oxigen. Como os ROS reagem facilmente
com vrios componentes celulares, a sua ao pode lesar clulas de
modo significante. Nos organismos vivos, a formao de ROS
geralmente mantida em quantidades mnimas por mecanismos
antioxidantes. (Antioxidantes so substncias que inibem a reao de
molculas com radicais oxignio).
Em certas ocasies, denominadas coletivamente como estresse
oxidativo, os mecanismos antioxidantes so contornados com a
ocorrncia de leso oxidativa. A leso ocorre principalmente por
inativao enzimtica, despolimerizao polissacardica, leses
oxidativas no DNA e rompimento das membranas biolgicas.
Exemplos de circunstncias que podem causar srias leses
oxidativas incluem certas anormalidades metablicas, o consumo
exagerado de certos frmacos, a exposio a radiao intensa e
contato repetitivo com certos contaminates ambientais (exemplo,
fumaa de cigarro).
Alm da contribuio aos processos de envelhecimento, a leso
oxidativa foi relacionada a um grande nmero de doenas, entre as

231

232

MOTTA

Bioqumica

quais esto cncer, desordens cardiovasculares (aterosclerose, infarto


do miocrdio, hipertenso), desordens neurolgicas como a esclerose
amiotrfica lateral (ALS; doena de Lou Gehring), doena de
Parkinson, doena de Alzheimer. Vrios tipos de clulas
deliberadamente produzem grandes quantidades de ROS. Por
exemplo, os macrfagos e neutrfilos continuamente atuam buscando
microrganismos e clulas lesionadas.
A. Espcies reativas de oxignio
As propriedades do oxignio esto diretamente relacionadas com
sua estrutura molecular. A molcula de oxignio diatmica um
diradical. Um radical um tomo ou grupo de tomos que contm um
ou mais eltrons no-emparelhados. Dioxignio um diradical porque
possui dois eltrons no-emparelhados. Por essa e outras razes,
quando reage, o dioxignio pode aceitar somente um eltron por vez.
Relembrando que na sequncia da cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons, a H 2 O formada como resultado da
transferncia seqencial de 4 eltrons para o O 2 . Durante o processo,
vrios ROS so formados. A citocromo oxidase captura os
intermedirios reativos em seu stio ativo at que todos os 4 eltrons
tenham sido transferidos para o oxignio. Entretanto, os eltrons
podem escapar da via de transporte de eltrons e reagir com o O 2 para
formar ROS.
Sob circunstncias normais, os mecanismos antioxidantes de
defesa celular miniminizam as leses. ROS tambm so formados
durante processos no enzimticos. Por exemplo, a exposio luz
ultravioleta e a radiao ionizante causam a formao de ROS.
O primeiro ROS formado durante a oxidao do oxignio o
radical superxido ( O 2 e
O 2 ). A maioria dos radicais
superxidos so produzidos na cadeia mitocondrial transportadora de
eltrons pelos eltrons derivados do ciclo Q no complexo III e pela
flavina NADH desidrogenase (complexo I). O radical superxido
atua como nuclefilo e (sob condies especficas) tanto como agente
oxidante como agente redutor. Devido as suas propriedades de
solubilidade, o O 2
causa considervel leses oxidativas aos
componentes fosfolipdicos da membrana. Quando gerado em meio
aquoso, o O 2 reage consigo mesmo para formar O 2 e perxido de
hidrognio (H 2 O 2 ):
2 H+ + 2 O 2

O2 + H 2 O2

O H 2 O 2 no um radical pois no possui nenhum eltron


desemparelhado. A limitada reatividade do H 2 O 2 permite a sua
passagem atravs de membranas e torna-se grandemente disperso. A
reao subseqente do H 2 O 2 com o o Fe 2+ (ou outro metal de
transio) resulta na produo do radical hidroxila, uma espcie
altamente reativa.
Fe 2+ + H 2 O 2

Fe 3+ + OH + OH

Radicais como o radical hidroxila so especialmente perigosos


porque podem iniciar reaes autocatalticas.

8 Fosforilao oxidativa

B. Mecanismos enzimticos antioxidantes


As principais defesas enzimticas contra o estresse oxidativo so:
a superxido dismutase, o glutationa peroxidase e a catalase. A
ampla distribio celular dessas enzimas previne a ao de espcies
de oxignio reativas.
1. Superxido-dismutase (SOD). uma classe de enzimas que
cataliza a formao de H 2 O 2 e O 2 a partir do radical superxido:
2 O2

2H

H 2O 2

O2

Existem duas formas principais de SOD. Em humanos ocorre no


citoplasma a isoenzima Cu Zn. Uma isoenzima contendo Mn
encontrada na matriz mitocondrial. A doena de Lou Gehring
(esclerose amiotrfica lateral), uma condio degenerativa fatal na
qual ocorre a degenerao neuromotora, causada por mutao no
gene que codifica a isoenzima Cu Zn citoslica da SOD.
2. Glutationa peroxidase. uma enzima chave no sistema
responsvel pelo controle dos nveis de peroxidase celular. A enzima
contm selnio e A enzima catalisa a reduo de vrias substncias
pelo agente redutor glutationa (GSH). Alm da reduo do H 2 O 2 pera
formar gua, a glutationa-peroxidase transforma perxidos orgnicos
em lcoois:
2 GSH + R-O O H

G S S G + R-OH + H 2 O

Vrias enzimas auxiliares mantm a funo da glutationaperoxidase. A GSH regenerada a partir do GSSG (glutationadissulfeto) pela glutationa-redutase:
G S S G + NADPH + H +

2 GSH + NADP +

O NADPH necessrio para a reao fornecido principalmente


pela via das pentoses-fosfato (ver Captulo 6: Metabolismo dos
carboidratos). O NADPH tambm produzido por reaes catalisadas
pela isocitrato-desidrogenase e pela enzima mlica.
3. Catalase. uma enzima contendo heme que emprega o H 2 O 2
para oxidar outros substratos:
RH 2 + H 2 O 2

R + 2 H 2O

Quantidades abundantes de catalase so encontradas


peroxissomos, ricos em H 2 O 2 gerados em vrias reaes:
RH 2 + O 2

nos

R + H 2 O 2

O excesso de H 2 O 2 convertido em gua pela catalase:


2 H2 O2

2 H2 O + O2

C. Molculas antioxidantes
Os organismos vivos usam molculas antioxidantes para se
autoproteger dos radicais. Alguns dos mais proeminentes incluem a
glutationa (GSH), o
tocoferol (vitamina E), cido ascrbico
(vitamina C) e o
caroteno.

233

234

MOTTA

Bioqumica

Resumo
1. A maioria das reaes que captam ou liberam energia so reaes de
oxidao-reduo. Nessas reaes, os eltrons so transferidos entre o
doador de eltrons (agente redutor) e o aceptor de eltrons (agente
oxidante). Em algumas reaes, somente os eltrons so transferidos; em
outras, tanto os eltrons como os prtons so transferidos. A tendncia
de um par redox conjungado em perder um eltron chamado potencial
redox. Os eltrons fluem espontaneamente do par redox eletronegativo
para o mais positivo. Nas reaes redox favorveis o E positivo e
G negativo.
2. O oxignio empregado pelos organismos aerbicos como aceptor
terminal de eltrons na gerao de energia. Vrias propriedades fsicas e
qumicas o tornam capaz desse papel. Alm de sua disponibilidade, o
oxignio difunde facilmente atravs das membranas celulares e
facilmente aceita eltrons.
3. As molculas de NADH e FADH 2 produzidas na gliclise, -oxidao
dos cidos graxos, oxidao de alguns aminocidos e ciclo do cido
ctrico geram energia na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons.
A via consiste de uma srie de carreadores redox que recebem eltrons
do NADH e FADH 2 . No final do caminho os eltrons, juntamente com os
prtons so doados para o oxignio para formar H 2 O.
4. Durante a oxidao de NADH, existem trs etapas na quais a energia
liberada suficiente para sintetizar ATP. So elas: as etapas I, III e IV.
5. A fosforilao oxidativa o mecanismo no qual o transporte de eltrons
est acoplado para a sntese de ATP. De acordo com a teoria
quimiosmtica, a criao de um gradiente de prtons que acompanha o
transporte de eltrons est acoplado a sntese de ATP.
6. A completa oxidao de uma molcula de glicose resulta na sntese de
29,5 a 31 ATP, dependendo do circuito (lanadeira) de eltrons utilizado,
o circuito glicerol-fosfato ou o circuito malato-aspartato, para transferir
os eltrons do NADH citoplasmtico para a cadeia mitocondrial
transportadora de eltrons.
7. O uso de oxignio pelos organismos aerbicos relaciona-se com a
produo de ROS (espcies reativas de oxignio). O ROS formado
porque as molculas de diradical de oxignio aceita um eltron por vez.
Exemplos de ROS incluem o radical superxido, perxido de hidrognio,
radical hidroxila e singlet oxigen. O risco da presena de elevado
contedo de ROS mantido ao mnimo por mecanismos celulares de
defesa antioxidante.

Referncias
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of life. 3 ed.
Boston: McGraw-Hill, 2003. p. 298-330.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So
Paulo : Sarvier, 2002. p. 515-62.
STRYER, L. Bioqumica. 4 ed. Rio de Janeiro : Guanabara-Koogan, 1996. p.
502-28.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto
Alegre : Artmed, 2000. p. 492-528.

Captulo

9
VALTER T. MOTTA

BIOQUMICA BSICA

Lipdeos e
Membranas

9
Lipdeos e Membranas

Objetivos
1

Compreender as estruturas dos principais lipdeos.

Descrever os fatores que influenciam os pontos de fuso dos cidos graxos.

Descrever os diferentes lipdeos presentes nas membranas.

Descrever as diferentes protenas de membrana.

Compreender o modelo do mosaico fludo e seus refinamentos.

Compreender que a distribuio de ons em cada lado da membrana gera um potencial de


membrana.

Compreender os mecanismos de transporte atravs das membranas.

Compreender as modificaes na bicamada que ocorrem durante a endocitose e da


exocitose.

Os lipdeos so biomolculas que exibem uma grande variedade


estrutural. Molculas como as gorduras e leos, fosfolipdeos,
esterides e carotenides, que diferem grandemente tanto em suas
estruturas como em suas funes so considerados lipdeos. So
compostos orgnicos heterogneos pouco solveis em gua, mas
solveis em solventes no-polares. Alguns lipdeos esto combinados
com outras classes de compostos, tais como protenas (lipoprotenas)
e carboidratos (glicolipdeos).
Os lipdeos participam como componentes no-proticos das
membranas biolgicas, precursores de compostos essenciais, agentes
emulsificantes, isolantes, vitaminas (A, D, E, K), fonte e transporte
de combustvel metablico, alm de componentes de biossinalizao
intra e intercelulares.

9.1 Classificao dos lipdeos


Os lipdeos so freqentemente classificados nos seguintes
grupos:
cidos graxos e seus derivados
Triacilgliceris.
Ceras
235

236

Motta

Bioqumica

Fosfolipdeos (glicerofosfolipdeos e esfingosinas)


Esfingolipdeos (contm molculas do aminolcool esfingosina)
Isoprenides (molculas formadas por unidades repetidas de
isopreno, um hidrocarboneto ramificado de cinco carbonos)
constituem os esterides, vitaminas lipdicas e terpenos.
A. cidos graxos e seus derivados
Os cidos graxos so cidos monocarboxlicos de longas cadeias
de hidrocarbonetos acclicas, no-polares, sem ramificaes e, em
geral, nmero par de tomos de carbono. Podem ser saturados,
monoinsaturados (contm uma ligao dupla) ou poliinsaturados
(contm duas ou mais ligaes duplas). Os mais abundantes contm
C 16 e C 18 tomos. Em geral, as duplas ligaes nos cidos graxos
poliinsaturados esto separadas por um grupo metileno,
CH=CH CH 2 CH=CH , para evitar a oxidao quando expostos em
meio contendo oxignio. Como as ligaes duplas so estruturas
rgidas, as molculas que as contm podem ocorrer sob duas formas
isomricas: cis e trans. Os ismeros cis ocorrem na maioria dos
cidos graxos naturais. Os cidos graxos so componentes
importantes de vrios tipos de molculas lipdicas. As estruturas e
nomes de alguns cidos graxos esto ilustrados na Tabela 9.1. Em
geral, so representados por um smbolo numrico que designa o
comprimento da cadeia. Os tomos so numerados a partir do carbono
da carboxila. A numerao 16:0 designa um cido graxo com C 16 sem
ligaes duplas, enquanto 16:1 9 representa um cido graxo com C 16 e
ligao dupla em C9. Os tomos C2 e C3 dos cidos graxos so
designados e , respectivamente.
O
O

CH 2
2

CH 2
3

cido
graxo

CH2
4

CH 2
5

Grupo
acil
graxo

CH 2
6

CH 2
7

CH2
8

CH 2
9

CH 2

Cadeia
hidrocarbonada

10

CH 2

11

CH 3
12

Figura 9.1
Estrutura e nomenclatura dos cidos graxos. Os cidos graxos consistem
de uma longa cauda hidrocarbonada e um terminal com um grupo
carboxlico. Na nomenclatura IUPAC, os carbonos so numerados a partir do
carbono carboxlico. Na nomenclatura comum, o tomo de carbono
adjacente ao carbono carboxlico designado , e os carbonos seguintes
so nomeados , , , etc. O tomo de carbono mais distante do carbono
carboxlico chamado carbono , independente do tamanho da cadeia. O
cido graxo mostrado, laureato (ou dodecanoato), tem 12 carbonos e no

9 Lipdeos e membranas
contm duplas ligaes.

Outro sistema de numerao tambm utilizado na nomenclatura


dos cidos graxos onde o C1 o mais distante do grupo carboxila
(sistema de numerao mega):
Tabela 9.1 Alguns cidos graxos de ocorrncia natural
Smbolo
numrico

Estrutura

Nome comum

cidos graxos saturados


12:0

CH 3 (CH 2 ) 10 COOH

cido lurico

14:0

CH 3 (CH 2 ) 12 COOH

cido mirstico

16:0

CH 3 (CH 2 ) 14 COOH

cido palmtico

18:0

CH 3 (CH 2 ) 16 COOH

cido esterico

20:0

CH 3 (CH 2 ) 18 COOH

cido araqudico

22:0

CH 3 (CH 2 ) 20 COOH

cido benico

24:0

CH 3 (CH 2 ) 22 COOH

cido lignocrico

cidos graxos insaturados


16:1

CH 3 (CH 2 ) 5 CH=CH(CH 2 ) 7 COOH

cido palmitolico

18:1

CH 3 (CH 2 ) 7 CH=CH(CH 2 ) 7 COOH

cido olico

18:2

9, 12

CH 3 (CH 2 ) 4 CH=CHCH 2 CH=CH(CH 2 ) 7 COOH

cido linolico

18:3

9, 1 2, 15

CH 3 -(CH 2 -CH=CH) 3 (CH 2 ) 7 COOH

cido

20:4

5, 8, 11, 1 4

CH 3 -(CH 2 ) 3 -(CH 2 -CH=CH) 4 -(CH 2 ) 3 COOH

cido araquidnico

-linolico

Alm das gorduras provenientes da dieta, o homem pode


sintetizar a maioria dos cidos graxos, mas incapaz de produzir o
cido linolico e o cido linolnico. Esses dois ltimos so
denominados cidos graxos essenciais e so obtidos da dieta. Os
cidos graxos essenciais so precursores para a biossntese de vrios
metablitos importantes. A dermatite um sintoma precoce em
indivduos com dietas pobres em cidos graxos essenciais. Outros
sinais da deficincia incluem demora na cura de ferimentos, reduzida
resistncia a infeces, alopecia (perda de cabelo) e trombocitopenia
(reduo do nmero de plaquetas, um componente essencial nos
processos de coagulao sangnea).
Os pontos de fuso dos cidos graxos elevam com o aumento do
comprimento da cadeia hidrocarbonada. Os cidos graxos saturados
com dez ou mais tomos de carbono so slidos em temperatura
ambiente. Todos os insaturados so lquidos nesta temperatura.
Uma das mais importantes reaes dos cidos graxos a
formao de steres:
R COOH + R OH

R COO R + H 2 O

Essa reao reversvel; ou seja, sob condies favorveis um


ster de cido graxo pode reagir com a gua para formar um cido
graxo e um lcool.

237

238

Motta

Bioqumica

B. Triacilgliceris
Os triacilgliceris (triglicerdeos) so steres de cidos graxos
com o glicerol. A poro cido graxo presente nos steres lipdicos
designada grupo acila. Dependendo do nmero de grupos hidroxila
do glicerol esterificados com cidos graxos, os acilgliceris so
denominados monoacilgliceris, diacilgliceris e triacilgliceris.
Estes compostos so tambm conhecidos como mono , di e
triglicerdeos. So os lipdeos mais abundantes no transporte e
armazenamento de cidos graxos. Os cidos graxos presentes nos
triacilgliceris naturais podem ser iguais (triacilgliceris simples) ou
diferentes (triacilgliceris mistos).
CH 2

CH

CH 2

O C

O C

CH 2

CH2

CH 2

CH 3

CH3

CH 3

Glicerol
O
3 cidos graxos

Triacilglicerol

A maioria dos cidos graxos presentes nos triacilgliceris so


mono ou poliinsaturados em configurao cis. O ponto de fuso
desses compostos determinado, fundamentalmente, pela natureza
dos cidos graxos presentes na molcula.
Em animais, os triacilgliceris (geralmente chamados de
gorduras) tm vrios papis. Primeiro, so as principais formas de
armazenamento e transporte de cidos graxos. As molculas de
triacilgliceris armazenam energia mais eficientemente que o
glicognio por vrias razes:
Os triacilgliceris hidrofbicos so armazenados na forma de
gotculas de gordura no hidratadas em clulas do tecido adiposo.
O glicognio (outra molcula de armazenamento de energia) ligase com substancial quantidade de gua de hidratao (2 gramas
de gua por grama de glicognio). Assim, os triacilgliceris
armazenam uma quantidade muito maior de energia que o
glicognio hidratado.
As molculas de triacilgliceris so mais reduzidas que as dos
carboidratos e, desse modo, sua oxidao libera o dobro em
energia que a oxidao dos acares, ou seja, 38,9 kJg 1
(gordura) e 17,2 kJg 1 (acares).
Segunda importante funo da gordura o isolamento trmico
contra baixas temperaturas, pois uma pobre condutora de calor.
Como o tecido adiposo, com seu elevado contedo de triacilgliceris,
encontrado na camada subcutnea previne a perda de calor.
Nas plantas, os triacilgliceris constituem uma importante
reserva de energia em frutas e sementes. Como essas molculas
contm considerveis quantidades de cidos graxos insaturados
(exemplos, olico e linolico) so chamados leos vegetais. Sementes
ricas em leos incluem amendoim, milho, aafro e feijo de soja.
Abacate e azeitonas so frutas com alto contedo em gorduras.

9 Lipdeos e membranas

C. Ceras
As ceras so misturas complexas de lipdeos no-polares.
Funcionam como um revestimento de proteo em folhas, caules,
frutos e na pele de animais. Os steres so compostos de cidos
graxos de cadeia longa e lcoois de cadeia longa como constituintes
proeminentes da maioria das ceras. Exemplos bem conhecidos de
ceras incluem a cera de carnaba e a cera de abelha. O constituinte
principal da cera de carnaba o ster de melissil ceronato. O
triacontanoil palmitato o principal componente da cera de abelha.
As ceras tambm contm hidrocarbonetos, lcoois, cidos graxos,
aldedos e esteris (lcoois esterides).
D. Fosfolipdeos
Os fosfolipdeos so os principais componentes lipdicos
estruturais das membranas. Alm disso, vrios fosfolipdeos so
agentes emulsificantes (composto que promove a disperso coloidal
de um lquido em outro) e agentes surfactantes (composto que reduz a
tenso superficial de uma soluo, como detergentes). Os
fosfolipdeos exercem essas funes por serem molculas anfiflicas.
Apesar das diferenas estruturais, todos os fosfolipdeos so
constitudos de caudas apolares alifticas de cidos graxos e
cabeas polares que contm fosfato e outros grupos carregados ou
polares.
Quando em concentraes apropriadas, os fosfolopdeos
suspensos em gua se organizam em estruturas ordenadas na forma de
micelas ou bicamadas lipdicas (ver seo 9.3.A).
Existem dois tipos de fosfolipdeos: os glicerofosfolipdeos e as
esfingomielinas.
1. Glicerofosfolipdeos ou fosfoglicerdeos. So molculas que
contm um glicerol, dois cidos graxos de cadeia longa, um fosfato e
um lcool (exemplo, colina). So os principais componentes lipdicos
das
membranas
celulares.
O
cido
fosfatdico
(1,2 diacilglicerol 3 fosfato) o composto, o precursor de outras
molculas de glicerofosfolipdeos, consiste de glicerol 3 fosfato,
cujas posies C1 e C2 so esterificadas com cidos graxos.

239

240

Motta

Bioqumica

(a)
O

(b)
O

O
1

H2 C

CH

HO

OH

O
1

CH2

Glicerol-3-fosfato

H2 C

CH

Cabea polar
(hidrfila)

CH2

Caudas apolares
(hidrofbicas)

(R1 ) (R2 )
Fosfatidato
Figura 9.2
Glicerofosfolipdeos. (a) Glicerol 3 fosfato e (b) fosfatidato. O fosfatidato
consiste de glicerol 3 fosfato com dois grupos acil graxo (R 1 e R 2 ) esterificado
nos grupos hidroxila em C1 e C2.

Os glicerofosfolipdeos so classificados de acordo com o lcool


esterificado ao grupo fosfato. Alguns dos mais importantes so:
fosfatidilcolina
(lecitina),
fosfatidiletanolamina
(cefalina),
fosfatidilglicerol e fosfatidilserina.
Os
cidos
graxos
frequentemente
encontrados
nos
glicerofosfolipdeos tem entre 16 e 20 tomos de carbono. Os cidos
graxos saturados ocorrem geralmente no C1 do glicerol. A posio C2
do glicerol freqentemente ocupada por cidos graxos insaturados.
Um derivado do fosfoinositol denominado fosfatidil 4,5 bifosfato
(PIP 2 ), encontrado em pequenas quantidades nas membranas e um
importante componente na transduo de sinal. O sistema do
fosfoinositdeo iniciado quando certos hormnios ligam-se aos
receptores especficos na superfcie externa das membranas
plasmticas, descrito no Captulo 12: Regulao do metabolismo
energtico.

9 Lipdeos e membranas

CH3

CH2

CH2

CH

OC

CH3

CH3

O
CH2

CH 2

CH

O C

OC

NH3

CH2

CH2

CH2

Fosfatidiletanolamina

CH

CH2

Fosfatidilcolina

CH2

CH2

CH

CH2OH

OH

CH2

CH 2

CH

O C

COO

NH 3+

CH2

CH

CH2

Fosfatidilglicerol

Fosfatidilserina

Figura 9.3
Glicerofosfolipdeos comuns. Estruturas de quatro glicerofosfolipdeos mais comuns:
Fosfatidilcolina (lecitina), fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol e fosfatidilserina.

2.
Esfingomielinas.
As
esfingomielinas
diferem
dos
fosfoglicerdeos por conterem esfingosina (aminolcool) em lugar de
glicerol. Como as esfingomielinas tambm so classifcadas como
esfingolipdeos, suas estruturas e propriedades so descritas mais
adiante.
(a)

(b)

Fosfocolina
O

OH
HO

CH
CH

Resduo de
palmitato

CH
+

CH 2

Resduo
de serina

NH3

CH
(CH2 )12
CH3
Esfingosina

CH3
O

CH2

CH

CH

CH

NH

CH

(H2 C)12

CH3

CH3

O
HO

CH2

CH2
O

Grupo acila

CH3
Esfingomielina
Figura 9.4
Estrutura da esfingosina e da esfigomielina. (a) A estrutura da esfingosina derivada da serina e
palmitato. (b) A ligao de um segundo grupo acila e uma fosfatidilcolina (ou fosfoetanolamina) prod uz
uma esfingomielina.

241

242

Motta

Bioqumica

E. Esfingolipdeos
Os esfingolipdeos so o segundo maior componente lipdico das
membranas animais e vegetais. As molculas de esfingolipdeos
contm um aminolcool de cadeia longa. Em animais, o aminolcool
a esfingosina e nas plantas a fitoesfingosina. As molculas mais
simples desse grupo so as ceramidas, derivadas de cidos graxos
ligados ao grupo amino ( NH 2 ) no C2 da esfingosina. As ceramidas
so precursoras das esfingomielinas e glicoesfingolipdeos.
1. Esfingomielina. O grupo lcool primrio da ceramida
esterificado ao grupo fosfrico da
fosfocolina
ou da
fosfoetanolamina. A esfingomielina encontrada na maioria das
membranas plasmticas das clulas animais. Como o nome sugere, a
esfingomielina est presente em grande quantidade na bainha de
mielina que reveste e isola os axnios em neurnios. As suas
propriedades isolantes facilitam a rpida transmisso dos impulsos
nervosos.
2. Glicoesfingolipdeos. As ceramidas so tambm precursoras
dos glicoesfingolipdeos (ou glicolipdeos). Nesses compostos, os
monossacardeos, dissacardeos ou oligossacardeos esto ligados por
ligao O glicosdica. Os glicoesfingolipdeos no contm grupos
fosfato e so eletricamente neutros. As classes mais importantes dos
gliceroesfingolipdeos so os cerebrosdeos, os sulfatdeos e os
gangliosdeos.
Cerebrosdeos. So esfingolipdeos cujas cabeas polares
consistem
de
um
resduo
de
monossacardeo.
Os
galactocerebrosdeos, o exemplo mais comum dessa classe, so
encontrados predominantemente nas clulas das membranas do
crebro.
HOCH2
HO
H

O
H
H

OH
H

CH2

OH
CH

CH

CH

NH

CH

(H2C)12

OH

CH3
Um cerebrosdeo

Sulfatdeos. So galactocerebrosdeos que contm um grupo


sulfato esterificado na posio 3 do acar. Os sulfatdeos esto
negativamente carregados em pH fisiolgico.
Gangliosdeos. So os glicoesfingolipdeos que possuem
oligossacardeos com um ou mais resduos de cido silico (cido

9 Lipdeos e membranas

N acetilneuramnico). Os nomes dos gangliosdeos incluem letras


e nmeros subscritos. As letras M, D e T indicam que a molcula
contm um, dois ou trs resduos de cido silico,
respectivamente. Os nmeros designam a seqncia de acares
ligados a ceramida. Os gangliosdeos G M1, G M2 e G M3 so os mais
conhecidos. Os gangliosdeos so componentes das membranas da
superfcie celular.
CH2 OH
H

O
H3 C

NH
H

CHOH
O

CHOH
H

HO

HOCH2

COO

CH2 OH

H HO H
H

O
H

O
H
HO

O
H

O
H
OH
H

CH 2

HO
OH CH

CH

CH

NH

CH

(H2 C)12

CH3
Um gangliosdeo

Os glicoesfingolipdeos podem atuar como receptores de certas


toxinas proticas bacterianas, como as que causam clera, ttano e
botulismo. Algumas bactrias tambm ligam-se aos receptores
glicolipdicos, exemplo E. coli, Streptococcus pneumoniae e
Neisseria gonorrhoeae, agentes causadores de infeces urinrias,
pneumonia e gonorria, respectivamente.

243

244

Motta

Bioqumica

Triglicerdeos

Glicerofosfolipdeos

Esfingolipdeos
Esfingomielinas

cido Graxo

cido Graxo

cido Graxo

cido Graxo

cido Graxo

Glicoesfingolipdeos

cido Graxo

lcool

cido Graxo
Acar

lcool

Fosfolipdeos
Figura 9.5
Representao das principais classes de lipdeos. Acar = mono ou oligossacardeo, P =
grupo fosfato.

F. Doenas do armazenamento de esfingolipdeos


(esfingolipidoses)
So causadas por defeitos hereditrios de enzimas necessrias
para a degradao dos esfingolipdeos nos lisossomas e provocam o
acmulo desses compostos nas clulas. A mais comum a doena de
Tay Sachs, causada pela deficincia da
hexoaminidase A, a enzima
que degrada o gangliosdeo G M2 . Como a clula acumula essa
molcula, ocorre uma deteriorao neurolgica. Os sintomas da
doena (cegueira, fraqueza muscular e retardo mental) geralmente
aparecem alguns meses aps o nascimento. No existe terapia para as
doenas de armazenamento dos esfingolipdeos e, portanto, so
fatais.
Quadro 9.1. Doenas do armazenamento de esfingolipdeos
Esfingolipdeo
acumulad o

Doena

Sintoma

Enzima deficiente

Doena de Tay Sachs

Cegueira, fraqueza
muscular, retardo mental

Gangliosdeo G M 2

Hexoaminidase A

Doena de Gaucher

Retardo mental,
esplenomegalia,
hepatomegalia, eroso de
ossos longos

Glicocerebrosdeo

Glicosdeo

Doena de Krabbe

Desmielinizao, retardo
metal

Galactocerebrosdeo

Galactosidase

Doena de Niemann Pick

Retardo mental

Esfingomielina

Esfingomielinase

G. Isoprenides
Os isoprenides so um vasto grupo de biomolculas que contm
unidades estruturais repetidas de cinco carbonos conhecidas como
unidades de isoprenos. Os isoprenides so sintetizados a partir do
isopentenil pirofosfato formado do acetil CoA.
Os isoprenides consistem de terpenos e esterides. Os terpenos
so um enorme grupo de substncias encontradas em leos essenciais

9 Lipdeos e membranas

das plantas. Os esterides so derivados do anel hidrocarbonado do


colesterol.
1. Terpenos. Os terpenos so classificados de acordo com o
nmero de resduos de isopreno que contm. Os monoterpenos so
compostos de duas unidades de isopreno (10 tomos de carbono). O
geraniol um monoterpeno encontrado no leo de gernio. Terpenos
que contm trs isoprenides (15 carbonos) so denominados
sesquiterpenos. Farnesene, um importante constituinte do leo de
citronela (uma substncia usada em sabes e perfumes), um
sesquiterpeno. Fitol, um lcool vegetal, um exemplo de diterpenos,
molculas compostas de quatro unidades de isoprenos. O esqualeno,
encontrado em grande quantidade no leo de fgado de tubares,
azeite de oliva e levedura, um exemplo de triterpenos. (Esqualeno
um intermedirio da sntese do esterides). Os carotenides, o
pigmento laranja encontrado em muitas plantas, so tetraterpenos
(molculas compostas de oito unidades de isopreno). Os carotenos
so membros hidrocarbonados desse grupo. Os politerpenos so
molculas de elevado peso molecular composto de centenas ou
milhares de unidades de isopreno. A borracha natural um
politerpeno composto de 3.000-6.000 unidades de isopreno.
CH3
H3 C

H
C

CH3

H2 C

CH2

CH3

Unidade isopreno

Isopreno

CH3
H2C

O
CH2

CH2

Isopentenil pirofosfato

Vrias biomolculas importantes so formadas por componentes


no-terpenos ligados a grupos isoprenides. Exemplos incluem
vitamina E ( -tocoferol), ubiquinona, vitamina K e algumas
citocinas.
O
H3 CO

CH3

H3 CO

(CH2

CH3
O

CH

CH2 )10 H

Unidades isoprenides
Ubiquinona

2. Esterides. So complexos derivados dos triterpenos


encontrados em clulas eucariticas e em algumas bactrias. Cada
esteride composto de quatro anis no-planares fusionados, trs
com seis carbonos e um com cinco. Distinguem-se os esterides pela
localizao de ligaes duplas carbono-carbono e vrios substituintes
(exemplo, grupos hidroxil, carbonil e alquila).
O colesterol, uma importante molcula dos tecidos animais, um
exemplo de um esteride. Alm de ser um componente essencial das
membranas biolgicas, o colesterol um precursor na biossntese de
todos os hormnios esterides, vitamina D e sais biliares. O

245

246

Motta

Bioqumica

colesterol geralmente armazenado nas clulas como ster de cido


graxo. A reao de esterificao catalisada pela enzima acilCoA:colesterol aciltransferase (ACAT), localizada na face
citoplasmtica do retculo endoplasmtico.
CH3
H3 C

CH

CH2

CH2

CH2

CH3
CH
CH3

H3 C

HO
Colesterol

Os glicosdeos cardacos, molculas que aumentam a intensidade


da contrao do msculo cardaco, esto entre os mais interessantes
derivados dos esterides. Os glicosdeos so acetais contendo
carboidrato. Apesar de vrios glicosdeos cardacos serem
extremamente txicos (exemplo, ouabana, obtida de sementes da
planta Strophantus gratus), outros apresentam propriedades
medicinais. Por exemplo, digitalis, um extrato de folhas secas da
Digitalis purprea (planta ornamental dedaleira), um estimulador
da contrao do msculo cardaco. A digitoxina, o principal
glicosdeo cardiotnico no digitalis, usado no tratamento da
insuficincia cardaca por obstruo dos vasos. Em concentraes
acima das teraputicas, a digitoxina extremamente txica. Tanto a
ouabana como a digitoxina inibem a (Na + K + ) ATPase.

9.2 Lipoprotenas
Os triacilgliceris, o colesterol e os steres de colesteril so
insolveis em gua e no podem ser transportados na circulao
como molculas livres. Em lugar disso, essas molculas se agregam
com os fosfolipdeos e protenas anfipticas para formar partculas
esfricas macromoleculares conhecidas como lipoprotenas. As
lipoprotenas tm ncleo hidrofbico contendo triacilgliceris e
steres de colesteril, e camada superficial externa hidroflica que
consiste de uma camada de molculas anfipticas: colesterol,
fosfolipdeos e protenas (apoprotenas ou apolipoprotenas). As
lipoprotenas tambm contm vrias molculas antioxidantes solveis
em lipdeos (exemplo,
-tocoferol e vrios carotenides). (Os
antioxidantes destroem os radicais livres, como o radical superxido
e radical hidroxila). As lipoprotenas so classificadas de acordo com
sua densidade:
1. Quilomcrons. Transportam os lipdeos da dieta por meio da
linfa e sangue do intestino para o tecido muscular (para obteno de
energia por oxidao) e adiposo (para armazenamento). Os
quilomcrons esto presentes no sangue somente aps a refeio. Os
quilomcrons remanescentes ricos em colesterol que j perderam a
maioria de seu triacilgliceris pela ao da lipoprotena lipase
capilar so captados pelo fgado por endocitose.

9 Lipdeos e membranas

2. Lipoprotenas de densidade muito baixa (VLDL). So


sintetizadas no fgado. Transportam triacilgliceris e colesterol
endgenos para os tecidos extrahepticos. No transporte das VLDL
atravs do organismo, os triacilgliceris so hidrolizados
progressivamente pela lipoprotena lipase at cidos graxos livres e
glicerol. Alguns cidos graxos livres retornam a circulao, ligados
albumina, porm a maior parte transportada para o interior das
clulas.
Eventualmente,
as
VLDL
remanescentes
triacilglicerol depletados so captadas pelo fgado ou convertidas em
lipoprotenas de densidade baixa (LDL). A VLDL precursora da
IDL (lipoprotena de densidade intermediria), que por sua vez
precursora da LDL.
3. Lipoprotenas de densidade baixa (LDL). As partculas de
LDL so formadas a partir das VLDL. As LDL enriquecidas de
colesterol e steres de colesteril transportam esses lipdeos para os
tecidos perifricos. A remoo de LDL da circulao mediada por
receptores de LDL (stios especficos de ligao) encontrados tanto
no fgado como em tecidos extrahepticos. Um complexo formado
entre a LDL e o receptor celular entra na clula por endocitose
(engolfamento). As lpases dos lisossomos e proteases degradam as
LDL. O colesterol liberado incorporado nas membranas celulares
ou armazenado como steres de colesteril. A deficincia de receptores
celulares para as LDL desenvolve hipercolesterolemia familiar, na
qual o colesterol acumula no sangue e depositado na pele e artrias.
LDL

Colesterol

Receptor
LDL

Clula

4. Lipoprotenas de densidade alta (HDL). As HDL removem o


colesterol do plasma e dos tecidos extrahepticos, transportando-o
para o fgado. Na superfcie heptica, a HDL se liga ao receptor SRB1 e transfere o colesterol e os steres de colesteril para o interior do
hepatcito. A partcula de HDL com menor contedo de lipdeos
retorna ao plasma. No fgado o colesterol pode ser convertido em sais
biliares, que so excretados na vescula. O risco de aterosclerose
(depsito de colesterol nas artrias) diminui com a elevao dos
nveis de HDL e aumenta com a elevao da concentrao das LDL.

247

248

Motta

Bioqumica

HDL
Transportador/
flipase

Clula

Tabela 9.2 Classificao, propriedades e composio das lipoprotenas humanas.


Parmetro
Densidade (g/mL)
Dimetro (nm)
Mobilidade eletrofortica
Composio (% do peso)
Colesterol livre

Quilomcrons

VLDL

LDL

HDL

<0,95

0,95 1,006

1,019 1,063

1,063 1,21

>70

30 80

18 28

5 12

Origem

Pr

5 8

13

Colesterol esterificado

11 14

39

13

Fosfolipdeos

20 23

17

28

Triglicerdeos

84

44 60

11

Protenas

20

50

Local de sntese

Intestino

4 11
Intestino, fgado

Intravascular

Intestino, fgado

9 Lipdeos e membranas

Intestino

Fgado

Lipdios da dieta

Triacilglicerol
Colesterol
ster de colesteril

Quilomcrons

VLDL

Quilomcrons
remanescentes

IDL

LDL

HDL

Colesterol
Triacilglicerol

ster de
colesteril

Tecidos perifricos
Figura 9.6
Viso geral do metabolismo das lipoprotenas. Os quilomcrons formados nas clulas
intestinais transportam os triacilgliceris para os tecidos perifricos, incluindo o msculo
e o tecido adiposo. Os quilomcrons remanescentes entregam os steres de colesteril
para o fgado. As VLDL so formadas no fgado e transportam os lipdeos endgenos
para os tecidos perifricos. Quando as VLDL so degradas (via IDL) o colesterol
esterificado com cidos graxos provenientes do HDL para tornar-se LDL, que transporta
o colesterol para os tecidos extra-hepticos. A HDL envia o colesterol dos tecidos
perifricos para o fgado.

A. Lipoprotenas e aterosclerose
Aterosclerose

caracterizada
por
depsitos
lipdicos
irregularmente distribudos na camada ntima de artrias de grosso e
mdio calibres, provocando o estreitamento das luzes arteriais e
evoluindo, por fim, para fibrose e calcificao. A limitao do fluxo
sangneo responsvel pela maioria dos sintomas clnicos.
Os fatores de risco para a doena arterial coronria so capazes
de lesar o endotlio vascular causando disfuno endotelial. A partir
do dano vascular, ocorre a expresso de molculas de adeso das
clulas vasculares (VCAM 1) e protena quimiottica de moncitos
(MCP 1) que atraem a entrada de moncitos em direo ao espao
intimal. Os moncitos que se transformam em macrfagos sob a
influncia do fator estimulador de colnias de macrfagos/moncitos
(M CSF) no espao intimal englobaro lipoprotenas modificadas
(predominantemente LDL oxidadas), originando as clulas
espumosas.

249

250

Motta

Bioqumica

Quadro 9.1 Fatores de risco para a doena arterial coronria

So parmetros que parecem guardar relao de


causa e efeito, com a doena arterial coronria.
Fatores de risco so atributos associados a um
aumento substancial da suscetibilidade individual
para a doena coronria, e em especial, para o seu
aparecimento precoce. Os principais so:
Tabagismo
Hipertenso arterial sistmica ( 140/90 mmHg)
Hipercolesterolemia >200 mg/dL (LDL-C >160 mg/dL)

Obesidade (IMC >25 kg/m )


Sedentarismo
Idade ( 45 anos homens e

55 anos mulheres)

Histria familiar precoce de ateroscleorose (parentes


de primeiro grau <55 anos homens e <65 anos
mulheres)
Fatores

de

homocistena,

risco

emergentes:

fatores

lipoprotena

hemostticos

(antgeno

(a),
do

HDL-C baixo (<40 mg/dL)

PA 1 e t PA), fatores proinflamatrios (protena C

Diabetes melito

reativa), glicemia de jejum alterada e aterosclerose

Hipertrigliceridemia (>200 mg/dL)

subclnica.

Danos posteriores ocorrem quando as clulas endoteliais e da


musculatura lisa iniciam a secreo de alguns peptdios pequenos,
como o fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF),
interleucina 1 (IL 1) e fator de necrose tumoral (TNF), que
estimulam, perpetuam e ampliam o processo, levando formao da
placa aterosclertica. Esta constituda por elementos celulares,
componentes da matriz extracelular e ncleo lipdico. As placas
podem ser divididas em estveis ou instveis.

9.3 Membranas biolgicas


Muitas das propriedades dos organismos vivos (exemplo,
movimento, crescimento, reproduo e metabolismo) dependem,
direta ou indiretamente, das membranas celulares. As membranas
biolgicas envolvem todas as clulas como tambm separam as
organelas no seu interior. No entanto, as membranas biolgicas no
so meramente barreiras passivas; elas executam uma grande
variedade de funes complexas. Algumas protenas presentes nas
membranas atuam como bombas seletivas que controlam o transporte
de ons e pequenas molculas para dentro e para fora da clula e
tambm geram gradientes de prtons essenciais para a produo de
ATP pela fosforilao oxidativa. Por meio do controle dos sistemas
de transporte seletivo, as concentraes de substncias em
compartimentos celulares so moduladas, excercendo, assim,
influncia sobre as vias metablicas. Receptores proticos especficos
nas membranas reconhecem sinais extracelulares (hormnios,
reguladores de crescimento e de metabolismo) e comunica-os para o
interior das clulas.
As membranas biolgicas tpicas possuem cerca de 25-50% de
lipdeos e 50-75% de protenas. No conceito atualmente aceito,
denominado modelo do mosaico fluido proposto por Singer e
Nicolson em 1972, a membrana uma bicamada lipdica constituda
por uma mistura complexa de fosfolipdeos (glicerofosfolipdeos),
esteris e esfingolipdeos cujas regies no-polares so orientadas
para o centro da bicamada, e os grupos polares para o exterior. As
protenas esto embebidas na bicamada lipdica e determinam as
funes biolgicas da membrana.

9 Lipdeos e membranas

Como cada espcie de clula e organela possui suas prprias


funes, os componentes lipdicos e proticos das membranas
tambm so nicos para cada uma delas. Assim, as membranas so
constitudas por diferentes tipos de lipdeos e de protenas em
combinaes que variam consideravelmente. Por exemplo, a bainha
de mielina que envolve certos nervos, contm relativamente pouca
protena. Em contraste, a membrana mitocondrial interna rica em
protenas, refletindo seu elevado grau de atividade metablica. A
membrana plasmtica dos eritrcitos tambm excepcionalmente rica
em protenas.
Apesar da diversidade da composio e de funes das
membranas, elas compartilham certos atributos fundamentais:
1. As membranas so estruturas em forma de lmina com duas
molculas de espessura que circundam diferentes compartimentos. A
espessura da maioria das membranas 6nm a 10nm.
2. As membranas consistem principalmente de lipdeos e
protenas, mas tambm contm carboidratos tais como, glicoprotenas
e glicolipdeos.
3. Os lipdeos das membranas so molculas relativamente
pequenas com pores hidroflicas e hidrofbicas. Quando
misturados em gua esses lipdeos espontaneamente formam trs
tipos de agregados: micelas, bicamadas e lipossomos.
4. Protenas especficas mediam distintas funes das
membranas. Atuam como bombas, canais, receptores, enzimas e
transdutores de energia. As protenas das membranas esto embebidas
nas bicamadas lipdicas, que criam um meio apropriado para a sua
ao.
5. As membranas so associaes no covalentes. As molculas
de protenas e as de lipdeos esto unidas por interaes nocovalentes.
6. A maioria das membranas so eletricamente polarizadas, cujo
interior negativa [tipicamente 60 milivolts (mV)]. O potencial de
membrana exerce papel fundamental no transporte, na converso de
energia e na excitabilidade.
A. Lipdeos da membrana
Os principais lipdeos de membranas so: gliceroesfingolipdeos,
esfingolipdeos, glicoesfingolipdeos e colesterol. As vrias
membranas celulares de diferentes tcidos tm distintas composies
lipdicas. Os gliceroesfingolipdeos e esfingolipdeos so molculas
anfipticas (caudas hidrofbicas e cabeas hidroflicas) que
constituem os lipdeos mais comuns das membranas celulares. Os
cidos graxos presentes nos gliceroesfingolipdeos e esfingolipdeos
das biomembranas so alifticos de cadeia longa e, em geral, com
C16 e C18. Cerca de 50% dos cidos graxos presentes nas membranas
so insaturados, com uma ou mais duplas ligaes carbono-carbono
na configurao cis.
Os glicoesfingolipdeos tm um acar ligado e no contm
fosfato e so no-inicos. As classes mais importantes so: os
cerebrosdeos, os sulfatdeos e os gangliosdeos.

251

252

Motta

Bioqumica

O colesterol no forma bicamadas por si mesmo mas compe


cerca de 30% do contedo lipdico das membranas biolgicas. O
colesterol modifica a fluidez da membrana e participa do controle da
microestrutura das membranas plasmticas.
Grupamento cabea polar

Caudas apolares
hidrocarbonadas

S
Figura 9.7
Representao
membrana. O
hidrocarbonadas
saturados (S) ou

S S

esquemtica de fosfolip deos ou outros lipdeos de


grupamento cabea polar hidroflico, e as caudas
so hidrofbicas. Os cidos graxos nas caudas so
insaturados (I).

Quando em concentraes adequadas, as molculas anfipticas


so suspensas em gua e espontaneamente so agregadas em
estruturas esfricas chamadas micelas. As caudas hidrofbicas
hidrocarbonadas ficam voltadas para o interior excluindo a gua,
enquanto os grupos das cabeas polares (grupos hidroflicos) ficam
no lado de fora da esfera para interagir com a gua permitindo a
solvatao.

Figura 9.8
Micela constituda por agregado de lipdeos de cauda dupla. Os
grupamentos cabea polares esto em contato com a gua, enquanto as
caudas hidrofbicas hidrocarbonadas esto protegidas da gua.

Quando em concentraes apropriadas, os lipdeos anfipticos


organizam-se espontaneamente na gua para formar bicamadas
lipdicas, nas quais duas camadas de lipdeos formam uma lmina

9 Lipdeos e membranas

bimolecular. As pores hidrofbicas em cada lmina, excludas de


gua, interagem entre si. Essa propriedade dos fosfolipdeos (e de
outras molculas lipdicas anfipticas) estabelece a estrutura bsica
de todas as membranas biolgicas.
Aquoso
Hidroflico

Hidrofbico

Hidroflico
Aquoso
Figura 9.9
Representao esquemtica de bicamadas lipdicas. As estruturas
anfiflicas contm cabeas polares ligadas a caudas sinuosas hidrofbicas. As
caudas de cidos graxos insaturados esto dobradas, resultando em maior
espaamento entre os grupamentos cabea polares e, portanto, maior espao
para movimento.

Os lipdeos das membranas so responsveis por vrias outras


caractersticas importantes das membranas biolgicas:
1. Fluidez da membrana. Por no estarem ligadas
covalentemente, existe liberdade para as molculas individuais dos
lipdeos e das protenas se movimentarem lateralmente no plano da
membrana. A rpida difuso lateral de molculas de lipdeos nas
bicamadas , aparentemente, responsvel pelo funcionamento
apropriado de muitas molculas proticas. (O movimento de
transverso no catalisado de um lado para outro flip flop
dos
glicerofosfolipdeos e esfingolipdeos nas bicamadas extremamente
raro). A fluidez da membrana principalmente determinada pela
percentagem de cidos graxos insaturados presentes nas molculas de
fosfolipdeos. Altas concentraes de cadeias insaturadas resultam
em membranas mais fluidas. O colesterol modula a estabilidade da
membrana sem comprometer grandemente a fluidez por conter
elementos estruturais rgidos (sistema de anis esterides) e flexveis
(caudas de hidrocarbonetos) que interferem na movimentao das
cadeias laterais de cidos graxos.
2. Permeabilidade seletiva. Devido a sua natureza hidrofbica,
as cadeias hidrocarbonadas nas bicamadas lipdicas organizam uma
barreira virtualmente impenetrvel para o transporte de substncias
inicas e polares. Protenas membranas especficas regulam o
movimento dessas substncias para dentro e para fora das clulas.
Cada membrana exibe sua prpria capacidade de transporte ou
seletividade baseado em seus componentes proticos.
3. Capacidade de auto-selar. Quando as bicamadas lipdicas so
rompidas, elas imediata e espontaneamente so reconstitudas porque
uma quebra na camada lipdica expem as cadeias de hidrocarbonetos
hidrofbicas gua. Como a brecha nas membranas celulares podem
ser letais, a propriedade de reconstituio crtica.

253

254

Motta

Bioqumica

4. Assimetria. As membranas biolgicas so assimtricas; ou


seja, os componentes lipdicos das duas lminas da bicamada so
diferentes. Por exemplo, a membrana dos eritrcitos humanos
possuem substancialmente mais fosfatidilcolina e esfingomielina na
superfcie externa. A maior parte da fosfatidilserina e
fosfatidiletanolamina da membrana est na superfcie interna. A
assimetria da membrana fundamental pois cada lado da membrana
est exposta a diferentes compartimentos (intracelular e extracelular,
respectivamente). A assimetria tem lugar durante a sntese de
membrana, j que a biossntese dos fosfolipdeos ocorre somente em
um lado da membrana. Os componentes proticos das membranas
tambm exibem considervel assimetria com distintos domnios
funcionais diferentes dentro da membrana e as faces citoplasmticas
e extracelulares da membrana.
B. Protenas de membrana
A maioria das funes associadas com as membranas biolgicas
necessita de molculas de protenas. As protenas de membrana so
classificadas de acordo com seus modos de associao com a
bicamada lipdica em protenas integrais, protenas perifricas e
protenas ligadas a lipdeos. Grande parte dessas molculas so
componentes estruturais, enzimas, receptores de hormnios ou
protenas transportadoras.
Protena
integral

Protena
perifrica

Protena
ligada a lipdeos

Figura 9.10
Protenas de membrana. Representao esquemtica de protena integral
firmemente associada membrana por interaes hidrofbicas, protena
perifrica ligada por interaes hidrofbicas e pontes de hidrognio e
protena ligada a lipdeos por meio de cauda hidrofbina incorporada
bicamada.

1. Protenas integrais (intrnsicas). So protenas firmemente


associadas s membranas por meio de ligaes hidrofbicas. Essas
molculas s podem ser separadas pelo rompimento da membrana por
agentes que interferem nas interaes hidrofbicas, como solventes
orgnicos, desnaturantes ou detergentes.
As duas mais importantes protenas integrais de membranas dos
eritrcitos so a glicoforina e a protena de canais de nions. A
glicoforina uma glicoprotena com 131 aminocidos. Cerca de 60%
de seu peso so carboidratos. Certos grupos oligossacardeos da
glicoforina constituem os antgenos dos grupos sangneos ABO e
MN. Entretanto, apesar de todas as pesquisas, as funes da
glicoforina ainda so desconhecidas. A protena de canais de nions

9 Lipdeos e membranas

composta de duas subunidades idnticas, cada uma consistindo de


929 aminocidos. Essa protena exerce um importante papel no
transporte de CO 2 no sangue. O on HCO 3 formado a partir do CO2
pela ao da anidrase carbnica, difunde atravs da membrana do
eritrcito por meio dos canais de nions em troca do on Cl . A troca
de Cl por HCO 3 , chamada desvio do cloreto, preserva o potencial
eltrico da membrana dos eritrcitos.
2. Protenas perifricas (extrnsicas). So protenas ligadas s
membranas por meio de interaes eletrostticas e pontes de
hidrognio. Algumas protenas perifricas interagem diretamente com
a camada bilipdica. Normalmente, as protenas perifricas podem ser
liberadas das membranas por procedimentos relativamente simples,
tais como, uso de solues salinas concentradas ou mudanas de pH
que alteram as interaes no-covalentes entre as cadeias laterais de
aminocidos.
As protenas perifricas de membranas dos eritrcitos, composta
principalmente de espectrina, anquirina e banda 4.1, esto envolvidas
na preservao da forma de disco bicncavo do eritrcito normal.
Essa forma permite a rpida difuso de O 2 para as molculas de
hemoglobina, posicionando-as a uma distncia menor do que 1 m da
superfcie celular. A espectrina, uma protena filamentosa longa,
um tetrmero, composto de dois dmeros
, que ligam a anquirina e
a banda 4.1. A anquirina um peptdeo globular de grande tamanho
que liga a espectrina protena de canal inico. Essa uma conexo
entre o citoesqueleto dos eritrcitos e sua membrana plasmtica. A
banda 4.1 liga-se tanto a espectrina como a filamentos actina (um
componente citoesqueltico encontrado em muitos tipos de clulas).
Como a banda 4.1 tambm se liga a glicoforina, essa tambm est
associada ao citoesqueleto e a membrana.
3. Protenas ligadas a lipdeos. So protenas de membranas que
contm lipdeos ligados covalentemente. Os lipdeos ligados so
responsveis por uma ncora hidrofbica, a qual se insere no interior
da bicamada lipdica e conserva a protena na superfcie da
membrana. A ligao das protenas lipdeos ocorrem de trs modos:
(a) miristoilao: o cido mirstico est unido a protena de
membrana por ligao amida com o grupo -amino da glicina
amino terminal; (b) palmitolilao: o cido palmtico est unido por
ligao tioster a um resduo de cistena e (c) prenilao: os lipdeos
esto ligados s protenas por unidades de isopreno.

255

256

Motta

Bioqumica

(a)

O
HN
C

CH2
O

(b)

(c)

O
NH

CH

O
NH

CH2

CH2

CH

CH3

O
Figura 9.11
Ancoramento de protenas membrana. (a) Miristoilao. (b) Palmitoilao. (c)
Prenilao. O lipdeo ncora um grupo farnesil com 15 carbonos.

Muitos eucariotos, particularmente os protozorios parasitas,


contm protenas ligadas pelo C-terminal a um grupo
lipdeo carboidratos, conhecido como glicosilfosfatidilinositol (GPI).
A estrutura do grupo GPI consiste de um fosfatidilinositol, um
tetrassacardeo e uma fosfoetanolamina.

9 Lipdeos e membranas

O
O
O
NH

CH

O
NH

CH2

CH2

HO
H

OH

HO

H
O

OH
O

O
CH2

CH2

CH2
O

Figura 9.12
Protenas ligadas a glicosilfosfatidilinositol. Os hexgonos representam diferentes monossacardeos
que variam com a identidade da protena. Os resduos de cidos graxos do grupo fosfatidilinositol
tambm variam consideravelmente.

C. Glicoprotenas de membrana
Como os lipdeos de membrana, as protenas de membrana esto
distribudas assimetricamente entre as bicamadas. Por exemplo,
algumas protenas ligadas membrana voltadas para o interior (as
protenas ligadas ao glicosilfosfatidilinositol so excees). A face
exterior da membrana nas clulas de vertebrados rica em
glicoesfingolipdeos (cerebrosdeos e gangliosdeos) e glicoprotenas.
As cadeias de oligossacardeos (polmeros de resduos de
monossacardeos) presentes nas glicoprotenas e que esto
covalentemente ancoradas aos lipdeos e as protenas de membrana
envolvem as clulas como uma cobertura em plumagem.
Vrias cadeias de carboidratos esto ancoradas s protenas como
oligossacardeos N-ligados ou O-ligados. Em muitas protenas

257

258

Motta

Bioqumica

solveis, particularmente as extracelulares, os oligossacardeos


ajudam a estabilizar a protena sob condies extracelulares hostis.
Os resduos de monossacardeo podem ligar-se uns aos outros de
diferentes modos e em seqncias potencialmente ilimitadas. Essa
diversidade, presente em glicolipdeos e glicoprotenas, uma forma
de informao biolgica. Por exemplo, o sistema ABO de grupos
sanguneos baseado na diferena na composio de carboidratos dos
glicolipdeos e das glicoprotenas nos eritrcitos. Muitas outras
clulas parecem reconhecer uma a outra baseado nos carboidratos
existentes em suas superfcies.
(a)

CH 2OH
H
HO

O
H
OH

NH

O
NH

NH
CH2

CH
C

Asn
O

C
CH3

(b)

CH2 OH
HO
H

O
H

NH

OH

NH

CH2

CH
C

Ser
O

CH3
Figura 9.13
Ligao oligossacardica em glicoprotenas. (a) Nos oligossacardeos
N ligados, o resduo N acetilglicosamina est ligado por ligao glicosdica
protena via o N da amida de resduos especficos de Asn. Os oligossacardeos
tipicamente contm vrios resduos monossacardicos adicionais ligados em
seqncia a um dos grupos OH da glicosamina. (b) Nos oligossacardeos
O ligados, a N acetilgalactosamina est covalentemente ligada a tomos de O
de cadeias laterais de resduos especficos de Ser ou Thr.

9.4 Transporte atravs de membranas


As membranas esto envolvidas em um grande nmero de
funes nas clulas vivas. Entre as mais importantes esto o (a)
transporte de molculas e ons para o interior e exterior das clulas e
de organelas e (b) ligao de hormnios e outras biomolculas.
O fluxo de ons e molculas altamente regulado para atingir as
necessidades metablicas de cada clula. Por exemplo, a membrana
plasmtica regula a entrada de molculas nutrientes e a sada de
produtos de excreo, alm das concentraes intracelulares de ons.
Como as bicamadas lipdicas so geralmente impermeveis a ons e a
molculas polares, o trnsito mediado por protenas integrais que
reconhecem e transportam esses compostos: canais de membranas,
transportadores passivos (movem substratos a favor do seu gradiente
de concentrao) e transportadores ativos (movem o substrato contra
seu gradiente de concentrao). Vrios exemplos dessas estruturas,

9 Lipdeos e membranas

chamadas transportadores, carreadores, transladadores ou permeases,


sero descritas.
Os mecanismos biolgicos de transporte so classificados de
acordo com suas propriedades cinticas e com a necessidade ou no
de energia. Os diferentes sistemas de transporte so realizados por
protenas integrais de membrana (porinas, canais inicos,
transportadores passivos e transportadores ativos), tambm como por
exocitose e endocitose.
A. Sistemas de transporte
O transporte de substratos atravs das membranas executada
por protenas integrais de membrana que se ligam a um substrato de
um lado da membrana, conduzem-no atravs da bicamada e liberamno no outro lado. Os transportadores diferem quanto ao nmero de
solutos (substratos) transportados e na direo em cada um
transportado. O transporte pode ser classificado como:
Uniporte (transporte nico) envolve o movimento de uma nica
molcula de soluto de cada vez. A famlia de transportadores de
glicose constituda de cinco membros, denominados GLUT-1 a
GLUT-5 exemplifica o uniporte.
Simporte (co transporte) transporta simultaneamente duas
molculas diferentes de soluto na mesma direo. A glicose,
aminocidos, muitos ons e outros nutrientes presentes no filtrado
dos tbulos proximais dos rins so quase completamente
reabsorvidos por processos de simporte.
Antiporte (contratransporte) transporta simultaneamente duas
molculas diferentes de soluto em direes opostas.

Uniporte

Simporte

Antiporte

Figura 9.14 Sistemas de transporte uniporte, simporte e antiporte.

A classificao no descreve se os processos necessitam energia


(transporte ativo) ou independentes de energia (transporte passivo).

259

260

Motta

Bioqumica

Difuso
simples

Difuso
facilitada

Transporte
ativo
ATP

ADP + Pi

Figura 9.15
Transporte de soluto atravs de membranas.

B. Porinas
As porinas so as mais simples transportadoras de membrana.
Esto localizadas nas membranas externas das bactrias,
mitocndrias e cloroplastos. So protenas intrnsicas de membrana
que permitem a livre difuso de molculas de at 1000 D a favor do
seu gradiente de concentrao. Todas as porinas conhecidas so
trmeros proticos nos quais cada subunidade forma um domnio de
16 ou 18 fitas de barril .
As membranas externas de algumas bactrias so ricas em
porinas que permitem a passagem de ons ou pequenas molculas de
um lado da membrana para o outro. As porinas so seletivas a
solutos; atuam como peneira permanentemente aberta.
As aquaporinas so protenas integrais que formam canais para a
passagem de molculas de gua atravs das membranas plasmticas.
Atuam na reabsoro, reteno, secreo e captao de gua em
vrios tecidos. Existem no mnimo dez aquaporinas nos mamferos
com seis segmentos helicoidais que esto envolvidas em diferentes
funes.
C. Canais inicos
As membranas plasmticas das clulas animais contm muitos
canais proticos altamente especficos para determinados ons.
Alguns desses canais esto sempre abertos enquanto outros, abrem e
fecham em resposta a sinais especficos. As membranas de clulas
nervosas possuem canais de potssio que permitem a passagem rpida
do on. Os canais permitem aos ons K + passar at 10.000 vezes mais
facilmente que os ons Na + . Os canais de K + so constitudos de
quatro subunidades idnticas que atravessam a membrana e formam
um cone que circunda o canal inico. As entradas internas e externas
dos canais possuem aminocidos carregados negativamente que
atraem ctions e repelem nions. Os ctions hidratados promovem
uma contrao eletricamente neutra do canal chamada seletividade
inica do filtro. Os ons potssio perdem rapidamente parte de sua
gua de hidratao e atravessam o filtro seletivo. Os ons sdio
aparentemente retm mais gua de hidratao e assim transitam pelo
filtro mais lentamente. O restante do canal tem revestimento
hidrofbico. Baseado na comparao das seqncias de aminocidos,

9 Lipdeos e membranas

as propriedades estruturais dos canais de potssio so tambm


aplicadas a outros tipos de canais.
D. Transporte passivo
O transporte passivo o movimento de molculas ou ons
solveis de um compartimento de maior concentrao, atravs de uma
membrana permevel, para um compartimento de menor
concentrao. O processo no necessita de energia. Os mais simples
transportadores de membrana podem ser classificados de acordo com
o nmero de molculas transportadas.
O transporte passivo inclui dois sistemas: difuso simples e
difuso facilitada.
1. Difuso simples. Cada soluto, impulsionado por movimento
molecular aleatrio, difunde-se atravs da membrana de acordo com
seus respectivos gradientes de concentrao de um compartimento
de maior concentrao para um compartimento de menor
concentrao. O carter hidrofbico das molculas um fator
importante para seu transporte atravs da membrana, uma vez que a
bicamada lipdica hidrofbica. Em geral, quanto maior o gradiente
de concentrao, mais rpida a velocidade de difuso do soluto. A
difuso de molculas pequenas apolares (como O 2 , N 2 e CO 2 ) atravs
da membrana proporcional aos seus gradientes de concentrao.
Molculas polares no-carregadas (como uria, etanol e pequenos
cidos orgnicos) deslocam-se atravs das membranas sem o auxlio
de protenas.
2. Difuso facilitada. Transporte de certas molculas grandes ou
polares (como aminocidos e acares) ocorre atravs de canais
especiais ou molculas transportadoras. Os canais so protenas
transmembrana semelhantes a um tnel. Cada tipo designado pelo
transporte de um soluto especfico. Muitos canais so controlados
quimicamente ou por voltagem. Os canais quimicamente regulados
abrem ou fecham em resposta a sinais qumicos especficos. Por
exemplo, o canal inico por onde se movimenta o Na + no receptor
nicotnico da acetilcolina (encontrada nas membranas das clulas
plasmticas dos msculos) se abre quando a acetilcolina se liga. O
Na + arremetido para o interior da clula com reduo do potencial
eltrico transmembrana que causa despolarizao. A despolarizao
promovida pela acetilcolina abre o canal vizinho de sdio (chamado
de canal de Na+ dependente de voltagem). A repolarizao, o
restabelecimento do potencial de membrana, inicia com a difuso de
ons K + para fora da clula atravs de canais de K + dependentes de
voltagem. A difuso de ons K + para o exterior da clula torna o
interior menos positivo, ou seja, mais negativo.
Outra forma de difuso facilitada envolve protenas chamadas
transportadoras ou permeases. No transporte mediado por
transportadores, um soluto especfico liga-se ao transportador em um
lado da membrana e promove uma alterao conformacional no
transportador. O soluto ento translocado atravs da membrana e
liberado. Nos eritrcitos o transportador de glicose um exemplo
bem caracterizado de transportador passivo. Ele permite que a D glicose difunda atravs da membrana da clula para ser utilizada na
gliclise e pela via das pentoses fosfato. A difuso facilitada
aumenta a velocidade que certos solutos se movem em direo do seu

261

262

Motta

Bioqumica

gradiente de concentrao. Esse processo no pode causar o aumento


lquido na concentrao do soluto em um lado da membrana.
E. Transporte ativo
o movimento de substncias contra gradiente de concentrao
ou eletroqumico. O processo de transporte necessita de aporte de
energia. Os sistemas mais importantes de transporte ativo so a
(Na + K + ) ATPase (tambm chamada ATPase transportadora de ons
ou bomba de Na + K + ), e a Ca 2+ ATPase (bomba de Ca + ), criam e
mantm gradientes eletroqumicos atravs da membrana plasmtica e
atravs das membranas das organelas. A (Na + K + ) ATPase e a
Ca 2+ ATPase usam a energia da hidrlise do ATP na sua translocao
ativa de substncias. As duas formas de transporte ativo so:
transporte ativo primrio e transporte ativo secundrio.
1. Transporte ativo primrio. Os transportadores ativos
primrios utilizam o ATP diretamente como fonte de energia para
impulsionar o transporte de ons e molculas. As diferentes
concentraes de Na + e K + no interior e exterior das clulas
eucariticas so mantidas por mecanismos antiporte pela enzima
(Na + K + ) ATPase, encontrada em todas as membranas celulares. Em
cada ciclo, a (Na + K + ) ATPase hidrolisa 1 ATP e bombeia 3 ons Na +
para o exterior e 2 ons K + para o interior das clulas.
Uma protena transportadora ativa, a P glicoprotena, parece
exercer papel fundamental na resistncia de clulas tumorais a
quimioterpicos. A resistncia multifrmaco a causa dominante do
malogro no tratamento clnico do cncer humano. A P-glicoprotena
uma glicoprotena integral de membrana abundante em membranas
plasmticas de clulas resistentes a frmacos. Usando o ATP como
fonte de energia, a P-glicoprotena bombeia uma grande variedade de
compostos tais como frmacos, para fora das clulas, contra gradiente
de concentrao. Desse modo, a concentrao de frmacos no citosol
mantida em nveis baixos para evitar a morte da clula. A funo
fisiolgica normal da P-glicoprotena parece ser a remoo de
compostos hidrofbicos txicos da dieta.
2. Transporte ativo secundrio. dirigido por um gradiente
eletroqumico transmembrnico de Na + ou H + utilizado para o
deslocamento. O transporte ativo ascendente de um soluto acoplado
ao transporte descendente de um segundo soluto que foi concentrado
pelo transporte primrio ativo. Por exemplo, o gradiente de Na +
criado pela (Na + K + ) ATPase usado no tbulo renal e clulas
intestinais para transportar a D -glicose por um simporte Na + -glicose;
o transporte ativo de glicose, assim, desfaz o gradiente de
concentrao do Na + , que restabelecido pela (Na + K + ) ATPase.
(Figura 9.7). Portanto, a hidrlise do ATP indiretamente fornece a
energia necessria captao de glicose, sendo associada pelo
gradiente inico do Na + .

9 Lipdeos e membranas
Glicose-permease
+

Na

Na

Glicose

(Na+-K+ )-ATPase

Exterior

Interior
+

Na

Na

Glicose

Figura 9.16
+

Transporte ativo secundrio. A (Na K ) ATPase gera um gradiente de on


sdio (estabelecido por um transporte ativo primrio) que direciona o
transporte ativo secundrio da glicose nas clulas epiteliais do intestino. A
+
glicose transportada juntamente com o Na atravs da membrana
plasmtica para dentro da clula epitelial.

Existem outras protenas transprtadoras que necessitam ATP para


bombear substncias como prtons e ons Ca 2+ contra gradientes de
concentrao. Por exemplo, a Ca 2+ ATPase um sistema de
transporte ativo que bombeia ons clcio para dentro do retculo
endoplasmtico especializado (retculo sarcoplasmtico) das clulas
musculares. O clcio mantido em baixas concentraes no citosol
pela hidrlise do ATP em ADP e P i que direciona o on clcio para o
retculo sarcoplasmtico atravs da membrana e contra um gradiente
eletroqumico.
Defeitos no mecanismo de transporte da membrana podem
provocar srias conseqncias. Um exemplo da disfuno do
transporte ocorre na fibrose cstica. A fibrose cstica, doena
autossmica recessiva, provocada pela falta ou defeito em uma
glicoprotena de membrana, denominada regulador da condutividade
transmembrnica da fibrose cstica (CFTR), que atua como um canal
para ons cloreto nas clulas epiteliais e um membro da famlia de
protenas chamadas transportadores da caixa ATP ligante, ABC (ATP
binding cassete). O canal para ons cloreto vital para a absoro de
sal (NaCl) e gua atravs das membranas plasmticas das clulas
epiteliais em tecidos como pulmes, fgado, intestino delgado e
glndulas sudorparas. O transporte de cloretos ocorre quando
molculas sinalizadoras abrem os canais CFTRCl na superfcie das
membranas das clulas epiteliais. Na fibrose cstica, o defeito dos
canais CFTR resulta na reteno de Cl no interior das clulas. Um
muco espesso ou outras formas de secreo causa a excessiva
captao de gua devido presso osmtica. As caractersticas
encontradas na fibrose cstica so: doena pulmonar (obstruo do
fluxo de ar e infeces bacterianas crnicas) e insuficincia
pancretica (impedimento da produo de enzimas digestivas que
pode resultar em deficincia nutricional severa). A mutao mais
comum que causa a fibrose cstica a deleo do resduo Phe 508 da
CFTR, o que causa um enovelamento defeituoso e a insero de uma
protena mutante na membrana plasmtica.

263

264

Motta

Bioqumica

Cl

Lquido
extracelular
Membrana
celular
Citosol
CFTR
Figura 9.17
Regulador da condutividade transmembrnica da fibrose cstica (CFTR).
A protena CFTR est posicionada na membrana celular para formar um
canal para o Cl sair da clula.

H. Endocitose e exocitose
Os mecanismos de transporte descritos acima ocorrem em um
fluxo de molculas ou ons atravs de membranas intactas. As clulas
tambm necessitam importar e exportar molculas muito grandes para
serem transportadas via poros, canais ou protenas transportadoras.
Os procariontes possuem sistemas especializados multicomponentes
em suas membranas que permitem secretar certas protenas (muitas
vezes toxinas ou enzimas) para o meio extracelular. Na maioria das
clulas eucariticas, certos componentes de grande tamanho
transitam para dentro e para fora da clula por endocitose e exocitose,
respectivamente. Nos dois casos, o transporte envolve a formao de
um tipo especializado de vescula lipdica.
1. Endocitose. A endocitose um mecanismo para o transporte
de componentes do meio circundante para o interior do citoplasma. A
endocitose mediada por receptores, inicia com o seqestro de
macromolculas por protenas receptoras especficas presentes nas
membranas plasmticas das clulas. A membrana ento se invagina,
formando uma vescula que contm as molculas ligadas. Uma vez
dentro da clula, a vescula, sem o seu revestimento, funde-se com
endossomos (outro tipo de vescula) e a seguir com um lisossomo. No
interior do lisossomo, o material endocitado e o receptor so
degradados. Alternativamente, o ligante, o receptor, ou ambos podem
ser reciclados entre a membrana plasmtica e o compartimento
endossmico. A fagocitose um caso especial de endocitose.

9 Lipdeos e membranas

Citoplasma

Figura 9.18
A. A endocitose inicia com o seqestro de macromolculas ela membrana
plasmtica da clula. A membrana invagina, formando uma vescula que
contm as molculas ligadas (figura superior). B. Microfotografia eletrnica
da endocitose.

2. Exocitose. A exocitose o inverso da endocitose. Durante a


exocitose, os materiais destinados secreo so encapsulados em
vesculas no aparelho de Golgi. As vesculas podem fundir com a
membrana plasmtica, liberando o seu contedo para o meio
circundante. Os zimognios das enzimas digestivas so exportados
pelas clulas pancreticas desse modo.
Membrana plasmtica

Figura 9.19
Mecanismo da exocitose

265

266

Motta

Bioqumica

9.5 Fuso de membranas


Uma importante caracterstica das membranas biolgicas a sua
capacidade de se fundir com uma outra membrana sem perder a sua
integridade. As protenas integrais necessrias para as fuses de
membranas
so
chamadas
SNAREs
(soluble
N ethylmaleimide sensitive-factor attachment protein receptor) que
exercem funes no direcionamento, ancoragem e fuso de vescula.
A fuso um processo multi-etapas que inicia com a formao de
bastes em forma de grampo que aproximam as protenas ligadas s
membrana-alvo (por exemplo, a membrana da vescula) a outra (por
exemplo, a membrana plasmtica). Vrias protenas parecem
participar na juno das duas membranas preparando-as para a fuso.
Resumo
1. Os lipdeos so biomolculas com grande variedade estrutural. So
solveis em solventes no-polares. So: cidos graxos e seus derivados,
triacilgliceris,
steres
graxos,
fosfolipdeos,
lipoprotenas,
esfingolipdeos e isoprenides.
2. Os cidos graxos so cidos monocarboxlicos que ocorrem
principalmente como triacilgliceris, fosfolipdeos e esfingolipdeos. Os
eicosanides so um grupo de molculas hormnio like derivados de
cidos graxos de cadeias longas. Os eicosanides incluem as
prostaglandinas, tromboxanos e leocotrienos.
3. Os triacilgliceris so steres de glicerol com trs molculas de cidos
graxos. Os triacilgliceris (chamadas gorduras) so slidos a temperatura
ambiente (possuem principalmente cidos graxos saturados). Os lquidos
a temperatura ambiente (ricos em cidos graxos insaturados) so
denominados leos. Os triacilgliceris, a principal forma de transporte e
armazenamento de cidos graxos, so uma importante forma de
armazenamento de energia em animais. Nas plantas so armazenados nas
frutas e sementes.
4. Os fosfolipdeos so componentes estruturais das membranas. Existem
dois tipos de fosfolipdeos: glicerofosfolipdeos e esfingomielinas.
5. Os esfingolipdeos so tambm componentes importantes das membranas
celulares de animais e vegetais. Contm um aminolcool de cadeia
longa. Nos animais esse lcool a esfingosina. A fitoesfingosina
encontrada nos esfingolipdeos vegetais. Os glicolipdeos so
esfingolipdeos que possuem grupos carboidratos e nenhum fosfato.
6. Os isoprenides so molculas que contm unidades isoprnicas de cinco
carbonos repetidas. Os isoprenides consistem de terpenos e esterides.
7. As lipoprotenas plasmticas transportam molculas de lipdeos atravs
da corrente sangnea de um rgo para outro. Elas so classificadas de
acordo com a densidade. Os quilomcrons so lipoprotenas volumosas
de densidade extremamente baixa que transportam os triacilgliceris e
steres de colesteril da dieta, do intestino para o tecido adiposo e
msculo esqueltico. As VLDL so sintetizadas no fgado e transportam
lipdeos para os tecidos. No transporte pela corrente sangnea, elas so
convertidas em LDL. As LDL so captadas pelas clulas por endocitose
aps ligao a receptores especficos localizados na membrana
plasmtica. As HDL, tambm produzidas pelo fgado, captam o
colesterol das membranas celulares e outras partculas lipoproticas. As
LDL tem importante papel no desenvolvimento da aterosclerose.
8. De acordo com o modelo do mosaico fludo, a estrutura bsica das
membranas biolgicas uma bicamada lipdica na qual as protenas

9 Lipdeos e membranas

flutuam. Os lipdeos da membra na (a maioria dos quais so


fosfolipdeos)
so
os
principais
responsveis
pela
fluidez,
permeabilidade seletiva e a capacidade de auto-selar das membranas. As
protenas das membranas geralmente definem as funes biolgicas
especficas. Dependendo de sua localizao, as protenas de membranas
podem ser classificadas como integrais, perifricas ou ligadas a lipdeos.
Exemplos de funes nas quais as protenas de membranas esto
envolvidas incluem o transporte de molculas e ons e a ligao de
hormnios e outros sinais metablicos extracelulares.
9. Algumas molculas pequenas ou hidrofbicas podem difundir atravs da
bicamada lipdica. Poros, canais inicos transportadores passivos e
ativos mediam o movimento de ons e molculas polares atravs das
membranas. As macromolculas deslocam-se para dentro e para fora das
clulas por endocitose ou exocitose, respectivamente.

Referncias
HORTON, H. R., M ORAN, L. A., OCHS, R. S., RAW N, J. D., SCRIMGEOUR,
K. G. Principles of biochemistry. 3 ed. Upper Saddle River: Prentice Hall,
2002. p. 264-303.
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New York: McGraw-Hill, 2003. p. 200-33.
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