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Ana Mara MESA VANEGAS1, Jhon Fredy TORO SUAZA1, Felipe CARDONA NARANJO1 & Silvia BLAIR TRUJILLO1*
1
Grupo de Investigacin Malaria. Sede de Investigacin Universitaria (SIU). Carrera 62 52-59. Torre 1. Lab. 610 SIU.
Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia. A.A 1226. Medelln, Colombia
Contactos | Contacts: Silvia BLAIR TRUJILO - E-mail address: malaria@arhuaco.udea.edu.co
Abstract
Plasmodium resistance to antimalarial drugs has expanded and intensified, making urgent new and effective antimalarials. The aim of this study was to
evaluate the antiplasmodial and cytotoxic activity of Piper aduncum L, Piper auritum Kunth, Piper jericoense Trel. & Yunck, Piper obrutum Trel. & Yunck,
Piper marginatum Jacq collected in Antioquia, Colombia. The results of antiplasmodial activity (IC50) ranged between 26.5 and 50 g/mL and cytotoxicity
(CC50) between 8.67 and 100 g /mL. We conclude that moderate activity antiplasmodial and was low cytotoxic activity for extracts of the genus Piper
species evaluated.
Keywords: Piper, antiplasmodial activity, Plasmodium falciparum, cytotoxicity
Resumen
La resistencia de Plasmodium a los medicamentos antimalricos se ha expandido e intensificado, lo que hace urgente nuevos y efectivos antimalricos. El
objetivo de este trabajo fue la evaluacin de la actividad antiplasmodial y citotxica de Piper aduncum L., Piper auritum Kunth, Piper jericoense Trel. &
Yunck., Piper obrutum Trel. & Yunck., Piper marginatum Jacq. Colectadas en Antioquia, Colombia. Los resultados de actividad antiplasmodial (IC50)
oscilaron entre 26,5 y 50 g/mL y de citotoxicidad (CC 50) entre 8,67 y 100 g/mL. Se concluye que se obtuvo moderada actividad antiplasmodial y baja
actividad citotxica para los extractos de las especies evaluadas de gnero Piper.
Palabras Claves: Piper, actividad antiplasmodial, Plasmodium falciparum, citotoxicidad.
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Mesa et al.
INTRODUCCIN
La malaria en el mundo es un grave problema de salud
pblica por la elevada carga de enfermedad que genera
en el 40% de la poblacin. Anualmente se presentan
entre 300 a 500 millones de casos de malaria por ao y
mueren ms de un milln de nios menores de 5 aos
(WHO, 2010a). La resistencia de Plasmodium a los
medicamentos antimalricos se ha expandido e
intensificado en los ltimos 15 aos y la disminucin
de la eficacia de estos medicamentos ha sido
documentada en muchos pases donde la enfermedad
es endmica, especialmente en Asia y frica (WHO,
2010b). En estos pases, muchas plantas constituyen la
alternativa inmediata y principal de la atencin bsica
en salud para tratar enfermedades endmicas, entre
estas la malaria (Willcox, 2004). Gran parte de los
medicamentos antimalricos ms utilizados para tratar
la malaria tienen sus orgenes en plantas y han sido
usadas a travs de los tiempos por la medicina
tradicional; primero fue Chinchona sp. (Rubiaceae) y
luego Artemisia annua (Asteraceae); plantas de las
cuales se extrajeron sus componentes activos y a partir
de stos se sintetizaron anlogos, los cuales son
utilizados actualmente para el tratamiento de la
malaria (Vipan et al., 2009). En la actualidad muchas
investigaciones han sido orientadas hacia la
exploracin de las potencialidades de las plantas en los
pases en va de desarrollo.
El gnero Piper pertenece a la familia
Piperaceae, se distribuye en todo el mundo con
aproximadamente 2300 especies. Este gnero tiene
una gran importancia comercial y econmica, para la
industria de condimentos, farmacutica, insecticida y
se ha reportado un amplio uso tradicional en la
alimentacin y en el tratamiento de diversas
enfermedades (Albiero et al., 2005). Entre las especies
ms conocidas est, Piper nigrum, de la cual se
obtiene la pimienta, Piper methysticum, tambin
conocida como Kava-Kava cuya bebida es usada en
ceremonias en las culturas nativas del Ocano Pacfico
como Polinesia, Vanuatu, Melanesia y algunas partes
de Micronesia y Australia (Lentz, 1993). En la
medicina tradicional el gnero Piper tiene un gran uso
para tratar enfermedades como la malaria, anemia,
clera, diabetes, asma, bronquitis, neumona, gripe,
reumatismo y artritis (DAngelo et al., 1997).
Qumicamente los constituyentes ms comunes de este
gnero
son
cidos
benzoicos
prenilados,
propenilfenoles, lignanos, neolignanos, terpenos,
flavonoides, kawalactonas, epxidos y alcaloides
Mesa et al.
Figura 1
MATERIALES Y METODOS
Coleccin del material vegetal
Cinco plantas de gnero Piper (Piperaceae) fueron
colectadas en San Luis - Puerto Triunfo, Antioquia,
Colombia. La identificacin de estas especies fue
realizada por el botnico Felipe Cardona de la
Universidad de Antioquia, especmenes de herbario
fueron procesados y depositados en el herbario
Universidad de Antioquia (HUA), y determinados
como: P. aduncum, P. auritum Kunth, P. marginatum
Mesa et al.
Ecuacin 1
Ensayos de citotoxicidad
Para evaluar la actividad citotxica de los extractos se
utiliz el mtodo del bromuro 3-(4,5dimetiltiazol-2il)2,5-difenil tetrazolio (MTT) segn Mosmann, 1983;
(Mosmann et al., 1983; Bautista et al., 2002), el cual
revela daos celulares a nivel mitocondrial. Las
clulas U-937 son promonocitos de linfoma
histioctico de humano y fueron mantenidas en
cultivos continuos en el Laboratorio del Grupo
Malaria. Estas clulas se cultivaron a 37 C y 5% de
CO2 en medio RPMI suplementado con 10% de Suero
Bovino Fetal (SBF) inactivado. Los cambios de medio
se realizaron cada 48 horas o de acuerdo a cambios de
pH del medio, con centrifugacin por 10 minutos a
1000 rpm, reemplazando con medio nuevo (Moore et
al., 1967).
En cmara de Neubauer se contaron las clulas
U-937 y se sembraron en una placa de 96 pozos de
fondo plano 200,000 clulas/mL en medio RPMI 1640
con 10% SBF. Se incubaron a 37 C con 5% CO2
durante 72 horas en presencia de cada una de las siete
concentraciones de cada extracto evaluadas en un
rango entre 100 - 1,56 g/mL, cada concentracin se
evalu por duplicado en el plato y se realizaron tres
ensayos independientes. Posteriormente, se midi la
actividad de la deshidrogenasa mitocondrial,
L/pozo de MTT a una concentracin
de 5 mg/mL e incubando durante 3 horas a 37 C y 5%
Mesa et al.
Tabla 1
Marcha fitoqumica para los extractos etanlicos de las hojas de especies del gnero Piper.
Prueba
cualitativa
Flavonoides
Compuestos
fenolicos
Terpenos y/o
esteroides
Alcaloides
Prueba
especifica
Shinoda
Zn/HCl
FeCl3 al 10%
acuoso
LiebermannBurchard
Dragendorff
Piper
auritum
Kunth
Piper
marginatum
Jacq.
+
+
Piper
jericoense
Trel. &
Yunck
+
+
+
+
Piper
obrutum
Trel. &
Yunck
+
+
+
+
++
++
++
++
++
++
++
++
++
+: Poco ++ : Moderado
+++ : Abundante
: Ausente
Mesa et al.
Tabla 2
Citotoxicidad y actividad antiplasmodial de los extractos etanlicos de Piper
Voucher
Especie
IC 50 (g/mL)
X + SD*
CC 50(g/mL)
X + SD
Lnea Celular
U-937
41,31 + 0,53
25,99 + 2,69
ND
1,19
% rendimiento
IS***
Cardona 1884
Cardona 1884
Cardona 1880
2,692
2,389
Cepa de
P. falciparum
NF-54**
>50
31,75 + 3,04
3,840
32,1 + 1,06
95,19 + 5,13
0,34
Cardona 1880
0,897
36,25 + 4,31
43,12 + 6,76
0,84
Cardona 1879
1,610
27,94 + 3,91
28,89 + 5,26
0,97
Cardona 1879
1,047
38,70 + 6,36
22,53 + 1,61
1,71
Cardona 1882
1,102
>50
30,05 + 0,89
ND
Cardona 1882
ND
>50
8,67 + 0,23
ND
Hojas P. aduncum
Cardona 1881
3,845
26,5 + 3,46
40,60 + 1,05
0,65
Tallos P. aduncum
Cardona 1881
1,460
>50
57,88 + 6,43
ND
Mesa et al.
Mesa et al.
Mesa et al.