ARTIGO ORIGINAL

ACTA MDICA PORTUGUESA 2003; 16: 65-69

ESFEROCITOSE HEREDITRIA PREVALNCIA DOS DFICES PROTEICOS

DA MEMBRANA DO ERITRCITO
ELISA GRANJO, PEDRO MANATA, NOMIA TORRES, LURDES RODRIGUES, FTIMA FERREIRA,
ROSWITHA BAUERLE, ALEXANDRE QUINTANILHA
Servio de Hematologia Clnica. Hospital de S. Joo. Porto. Instituto de Cincias Biomdicas Abel Salazar. Porto.
Servio de Hematologia. Centro Hospitalar de Coimbra. Coimbra. Servio de Hematologia. Hospital de Matosinhos. Matosinhos.
Servio de Medicina Interna. Hospital de Viana do Castelo. Viana do Castelo
RESUMO/SUMMARY

A Esferocitose Hereditria (EH) uma anemia

hemoltica congnita que resulta de alteraes
quantitativas e/ou qualitativas das protenas da
membrana do eritrcito. A fim de identificar as
alteraes proteicas e procurar relacion-las com o
fentipo clnico estudaram-se 25 famlias com
Esferocitose Hereditria (EH), da regio Norte de
Portugal, pela tcnica de electroforese em gel de
poliacrilamida (SDS-PAGE). Nas 25 famlias
estudadas detectaram-se 18 com uma reduo
primria de anquirina, sendo que 16 apresentavam
um modo de transmisso dominante, uma era
recessiva e numa no foi possvel demonstrar o
modo de transmisso. Em cinco famlias foi
encontrada uma reduo primria de banda 3, todas
com um padro dominante. Encontrou-se ainda
uma famlia com reduo de protena 4.2
(esferocitose leve) com transmisso recessiva e
uma outra com reduo primria de espectrinas
(esferocitose leve) em que no foi possvel
demonstrar o modo transmisso. De 15 doentes
com dfice de anquirina, estudados numa situao
de pr-esplenectomia, dez tinham uma esferocitose
leve (um dos quais com hemlise compensada) e
cinco tinham um fentipo de esferocitose
moderada. Nas famlias com dfice de banda 3, dez
indivduos foram tambm estudados numa situao
pr-esplenectomia, sendo que sete apresentavam
uma esferocitose leve (dois dos quais tinham uma
hemlise compensada) e trs uma esferocitose
Recebido para publicao: 07 de Janeiro de 2002

HEREDITARY SPHEROCYTOSIS
PREVALENCE OF ERYTHROID
CYTOSKELETAL PROTEIN DEFECTS
The authors studied the relative prevalence of
erythroid cytoskeletal protein defects and their
relationship with the clinical course of Hereditary
Spherocytosis (HS) in 39 Portuguese patients of
North of Portugal (25 families). This study showed
that, in the North of Portugal, HS is primarily due to
anquirin deficiency (72%), followed by band 3
(20%). These findings are similar to the published
data in other Caucasian populations. Anquirin
primary defects have been difficult to diagnose
before splenectomy, due to high reticulocytes
counts.
Key Words: Hereditary Spherocytosis, haemolytic anaemia, red-cell
membrane protein, SDS-PAGE, protein deficiency.

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ELISA GRANJO et al

moderada. Nas 25 famlias estudadas verificou-se

uma predominncia do dfice de anquirina (72%)
seguido pelo dfice de banda 3 (20%), protena 4.2
(4%) e de espectrinas (4%). Estes resultados esto
assim de acordo com estudos previamente
realizados.
Palavras-chave: Esferocitose Hereditria, anemia hemoltica, protenas da
membrana do eritrcito, SDS-PAGE, dfice proteico.

INTRODUO
A Esferocitose Hereditria (EH) a anemia hemoltica
congnita mais comum dos Caucasianos. Resulta de
alteraes quantitativas e/ou qualitativas das protenas da
membrana do eritrcito. Caracteriza-se por uma anemia de
gravidade varivel, com ictercia intermitente, presena de
esfercitos no esfregao de sangue perifrico, fragilidade
osmtica aumentada, esplenomegalia e com uma resposta
favorvel esplenectomia-SPL1.
As protenas do esqueleto proteico interagem com a
bicamada lipdica e com as protenas transmembranares
fornecendo assim membrana do eritrcito rigidez e
integridade (Figura 1). Alteraes de determinadas
protenas da membrana como a anquirina, espectrinas,
banda 3 e protena 4.2 esto na origem da diminuio da
resistncia osmtica dos esfercitos. A microvesiculao
destas clulas resulta na perda de rea de superfcie sem
qualquer reduo substancial de volume celular. Os
esfercitos perdem resistncia, elasticidade e capacidade
de deformao, reduzindo a sua capacidade de atravessar
os orifcios entre as clulas endoteliais, assim como as
clulas que formam a parede dos cordes esplnicos e da

polpa vermelha dos seios esplnicos, verificando-se uma

congesto acentuada desta ltima. A descida do pH,
glicose e ATP, bem como a elevada concentrao de
radicais livres produzidas pelos macrfagos adjacentes
agravam a leso da membrana dos eritrcitos.
As alteraes moleculares subjacentes doena so
muito heterogneas.
A anquirina a protena que promove a ligao do
esqueleto proteico bicamada lipdica atravs de
interaces com a protena transmembranar banda 3. O
defeito mais comum nos indivduos com EH deve-se a
alteraes nesta protena. Nos dfices de anquirina podem
existir redues secundrias de espectrinas e protena 4.2,
sendo o padro de hereditariedade autossmico dominante
o mais frequente2.
A banda 3 medeia interaces dentro do esqueleto
membranar via ligao com as protenas 4.2 e 4.1 e com a
anquirina pelo terminal amino do domnio citoplasmtico.
Indivduos com dfice de banda 3 tm redues proteicas
na ordem de 20 a 40%, com dfices secundrios de protena
4.2. O padro de transmisso dominante e o quadro clnico
de uma anemia ligeira ou moderada. Nos portadores de
deficincia de banda 3, observam-se no esfregao de
sangue perifrico, alguns eritrcitos com a forma de
cogumelo. Estes eritrcitos so muito especficos neste
subgrupo da esferocitose hereditria e desaparecem psesplenectomia.
Deficincias de protena 4.2 e espectrinas so mais raras,
sendo o padro de hereditariedade autossmico recessivo
e dominante, respectivamente2,4.
Do ponto de vista fenotpico, a expresso da EH
tambm muito heterognea, podendo variar de formas
assintomticas at situaes clnicas de anemia grave,

Fig. 1 - Protenas da membrana do eritrcito.

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ESFEROCITOSE HEREDITRIA - PREVALNCIA DOS DFICES PROTEICOS DA MEMBRANA DO ERITRCITO

dependentes de transfuses. Na forma tpica, os doentes

apresentam uma anemia moderada desde o perodo neonatal, esplenomegalia e referem uma histria familiar de EH.
A anemia muito bem tolerada, sendo contudo perceptvel
nos propsitos a ictercia conjuntival e a esplenomegalia.
Na EH de expresso ligeira, o grau de anemia leve, podendo
a hemlise ser totalmente compensada. Do ponto de vista
laboratorial, de referir que a bilirrubina srica e percentagem
de reticulcitos normal ou ligeiramente aumentada.
Geralmente, os portadores deste tipo de EH detectam-se
durante os perodos de infeco por mononucleose
infecciosa, geralmente com aumento marcado da
esplenomegalia e em situaes de infeco por parvovrus
19, que leva a uma supresso da eritropoiese medular5.
Os portadores assintomticos so diagnosticados no
decorrer de estudos familiares de doentes com a forma tpica
de esferocitose. Do ponto de vista laboratorial, a
concentrao de hemoglobina, bilirrubina total, e
percentagem de reticulcitos, normal. Apenas a
fragilidade osmtica eritrocitria est aumentada, por vezes
apenas aps incubao a 37C.
Os pacientes com a forma grave de EH so dependentes
de transfuses e a esplenectomia s corrige a anemia
parcialmente. Est associada a dfices muito acentuados
de espectrinas, com padro de hereditariedade recessiva, e
nas deficincias combinadas de anquirina e espectrinas.
No presente estudo os autores analisaram a prevalncia
do dfice proteico em 39 indivduos, estabelecendo uma
correlao com o fentipo clnico e determinao do padro
de hereditariedade.

poliacrilamida (SDS-PAGE), em gradiente linear 5-15%,

Laemmli8, e em gradiente exponencial 3.517%, Fairbanks
et al.9. O perfil electrofortico das membranas corado
com Coomassie Blue, procedendo-se de seguida anlise
proteica por densitometria (Image Master Elite 1D, version
2.01 da Pharmacia Biotech). A anlise quantitativa das
protenas da membrana expressa pela razo de cada
protena relativamente banda 3.
RESULTADOS
O diagnstico de EH realizado com base nos dados
clnicos e nos parmetros laboratoriais: parmetros
hematolgicos, percentagem de reticulcitos, esfregao de
sangue perifrico, fragilidade osmtica, doseamento de
bilirrubinas (Quadro I) .

MATERIAL E MTODOS
Foram estudados 39 doentes (de idade compreendida 6
meses 77 anos; 24 pacientes do sexo masculino e 15 do
sexo feminino) com E.H., pertencentes a 25 famlias do Norte
de Portugal.
Na rotina hematolgica, os hemogramas foram
realizados num contador automtico para determinao dos
diversos parmetros hematolgicos e os esfregaos de
sangue perifrico, corados pelo mtodo de May-Grunwald
Giemsa.
O estudo da resistncia osmtica foi realizado por dois
mtodos: teste da fragilidade osmtica dos eritrcitos em
gradiente de solues salinas (FO) e o teste de lise pelo
glicerol acidificado (AGLT).
As protenas da membrana do eritrcito foram extradas
por lise hipotnica segundo o mtodo de Dodge et al.6,
posteriormente quantificadas pelo mtodo de Lowry et al.7.
Depois de solubilizadas as protenas da membrana foram
estudadas pela tcnica de electroforese em gel de

Portadores

Esferocitose
Leve

Esferocitose
moderada

Esferocitose
moderadamente
severa

Esferocitose
severa

Hemoglubina
(g/dL)

Normal

11 - 15

08 - 12

06 - 08

<6

Reticulcitos (%)

1-3

3-8

>10

>10

Bilirrubina
(mg/L)

0 - 10

10 - 20

20

20 - 30

30

Esfregao de
sangue
Perifrico

Normal

Esfercitos
em nmero
reduzido

Esfercitos

Esfercitos

Esfercitos
abundantes e
poiquilocitose

Normal

Normal ou
ligeiramente
aumentada

Distintamente
aumentada

Distintamente
aumentada

Distintamente
aumentada

Ligeiramente Distintamente Distintamente

aumentada
aumentada
aumentada

Distintamente
aumentada

Marcadamente
aumentada

Fragilidade osmtica

Parmetros Laboratoriais

Quadro I - Classificao da Esferocitose Hereditria

Pr
incubao

Ps
incubao
a 37C

Fonte: Adaptado de Patrick G. Gallagher, Bernard G. Forget (15).

Porm muitas vezes o diagnstico tem-se revelado

bastante difcil, mesmo com a ajuda dos parmetros
laboratoriais, sendo necessrio recorrer tcnica de
electroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) para
determinar as alteraes moleculares subjacentes doena.
Nas 25 famlias estudadas 18 possuam uma reduo
primria de anquirina, sendo que 16 tinham um padro de
transmisso autossmico dominante, uma um padro
autossmico recessivo e ainda uma outra em que no foi
possvel identificar o tipo de transmisso. Em 5 famlias foi
encontrada uma reduo primria de banda 3, todas com
um padro dominante. Encontrou-se ainda uma famlia com
reduo de protena 4.2, com transmisso recessiva, e uma
famlia com reduo primria de espectrinas em que no foi
possvel demonstrar o modo transmisso (Quadro II).
O fentipo clnico da EH muito heterogneo, podendo
variar de formas assintomticas at situaes clnicas de
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ELISA GRANJO et al

Quadro IV - Prevalncia do dfice da protena da membrana do eritrcito nos doentes estudados psesplenectomia.

Quadro II - Padro de hereditariedade na Esferocitose

Hereditria
Dfice
Banda 3

Anquirina

proteico

-espectrina

Protena 4.2

Tempo ps-esplenectomia
Dfice proteico

Modo de
Dominante

Dominante

Recessivo

No provado

No provado

Recessivo

Famlias

16

Indivduos

10

25

transmisso

anemia grave. As alteraes moleculares subjacentes

doena so tambm muito heterogneas. A correlao das
alteraes proteicas, que ocorrem na membrana do
eritrcito, com o fentipo clnico em pacientes estudados
pr-esplenectomia referenciado no Quadro III. Nos

Esferocitose leve
(hemlise no
compensada)

Esferocitose leve
(hemlise
compensada)

Esferocitose moderada

Anquirina

Banda 3

Protena 4.2

>10 anos

Anquirina

- Espectrina

pacientes com dfice de banda 3, verificou-se que

apresentavam redues primrias de 11 a 25% (Figura 2).
Apenas foi analisado um nico paciente com dfice de
protena 4.2 com uma reduo primria de 12% (Fig.3). Um
paciente com dfice de anquirina foi estudado numa
situao de pr-esplenectomia e ps-esplenectomia (com
uma reduo primria de anquirina-28% e com redues
secundrias de espectrinas-24% e protena 4.2- 5%).
Doze doentes foram analisados na situao psesplenectomia (Quadro IV). Nos que apresentavam dfice
de anquirina, a reduo desta protena variou de 16 a 50 %,
com redues secundria de espectrina de 11-19% e
protena 4.2 de 4-31% (Fig.4) .
No nico paciente analisado ps esplenectomia com
dfice de -espectrina o dfice encontrado foi de 11%.

Quadro III - Correlao do dfice da protena da membrana do eritrcito e o fentipo clnico.

Dfice
proteico

> 1 ano e < 10 anos

DISCUSSO
De forma a aprofundar mais o conhecimento sobre as
doenas de membrana do eritrcito e a sua prevalncia na
regio Norte de Portugal, estudaram-se 39 indivduos
pertencentes a 25 famlias, com EH. Foi utilizada a tcnica
de electroforese em gel de poliacrilamida para identificar as
alteraes quantitativas e/ou qualitativas das protenas da
membrana do eritrcito. A amostragem estudada

Fig. 2 - Dfice de banda 3. Gel linear - Laemmli (A), Gel-exponencial Fairbanks (B). Ctr - Controlo; 1 - Propsito (dfice de 22% de banda 3); 2,3 filhas do propsito (dfice de 22 a 19% respectivamente); 4 - esposa do
propsito (sem alteraes das protenas da membrana).

Fig. 3 - Dfice de protena

4.2 (12%). Gel linear Laemmli (A). Prop.Propsito; Ctr - Controlo.

Fig. 4 - Dfice de anquirina. Gel linear - Laemmli (A), Gel exponencial Fairbanks (B). Prop. - Propsito; Ctr - Controlo. Deficincia primria de
anquirina (21%), secundrias de espectrinas (18%) e protena 4.2 (11%).

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ESFEROCITOSE HEREDITRIA - PREVALNCIA DOS DFICES PROTEICOS DA MEMBRANA DO ERITRCITO

excelente colaborao tcnica, e s Sras. D. Susana Catou

e D. Ana David a preparao do manuscrito.
O estudo das protenas da membrana do eritrcito foram realizados no laboratrio da Unidade de Hematologia
Molecular do Centro Hospitalar de Coimbra.

essencialmente de adultos com fentipo clnico de

Esferocitose leve que foram observados na consulta por
complicaes da doena: crises hemolticas associadas a
infeces, clculos vesiculares e/ou renais, ou por estudo
familiar do propsito.
Neste grupo de indivduos estudados verificou-se que
o dfice proteico mais comum foi de anquirina. O dfice de
anquirina no entanto difcil de identificar, pela tcnica de
SDS-PAGE, nos indivduos que no foram
esplenectomizados, j que nesta situao normal
encontrar-se uma ligeira reticulocitose que o bastante
para mascarar o dfice primrio. Nestes casos, em que o
dfice primrio est mascarado existem porm redues
secundrias das protenas de ligao: protena 4.2 e
espectrinas, que so indcios de uma reduo primria de
anquirina. A confirmao do dfice de anquirina possvel,
pela mesma tcnica, nos indivduos que foram
esplenectomizados. Nos doentes com dfice de anquirina
e redues secundrias de protenas 4.2 e espectrinas, estas
revelaram-se mais acentuadas nos pacientes com quadro
clnico de esferocitose moderada.
Foram ainda encontradas, para alm de redues de
anquirina, redues de banda 3, protena 4.2 e espectrinas.
A prevalncia dos dfices, assim como o modo de
transmisso hereditria encontrado, esto de acordo com
estudos previamente publicados.
Devido amostragem ser muito pequena em cada grupo
de dfice proteico, no foi possvel estabelecer uma
correlao entre a percentagem do dfice proteico e o
fentipo clnico. Porm a tcnica utilizada neste estudo
mostrou-se muito til, como ferramenta de auxlio, em alguns
casos de difcil diagnstico10.

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CONCLUSO
Os autores salientam que este estudo evidenciou que a
deficincia proteica mais comum nos doentes com EH no
Norte de Portugal de anquirina, seguida de banda 3,
protena 4.2 e -espectrina., o que est de acordo com a
bibliografia11-14.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem a Letcia Ribeiro e a Jos Barbot
a valiosa contribuio clnica e cientfica, a Helena Almeida,
Sra. D. Umbelina Rebelo, Sr. Lus Relvas e Sr. Elsio Costa a

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