CURSO BASICO

Jos Luis Gallegos Prez

I.

ANTECEDENTES

De manera inicial podemos decir que la cromatografa es un mtodo de separacin. As, una mezcla de solutos
puede ser separada en sus constituyentes basndose en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se
establece al ser arrastrados por una fase mvil lquida o gaseosa a travs de un lecho cromatogrfico que contiene una fase
denominada fase estacionaria, la cual puede ser lquida o slida.

A+B
A+B
A

GAS

Figura 1. La cromatografa como un proceso de separacin.

La cromatografa comenz a principios de siglo con los experimentos de separacin de mezcla de gases y vapores
en adsorbentes como carbn y la separacin de fracciones de hidrocarburos por D. T. Day en la floreciente industria
petrolera norteamericana y con la separacin de pigmentos de plantas realizada en 1903 por Tswett, un botnico ruso,
quien aisl varios pigmentos de plantas ensayando en unos 100 adsorbentes, se le acredita a l ser el padre de la
cromatografa ya que fue el primero en acuar dicho trmino adems de describirlo en forma cientfica. Si bien el inters
decay ya que se consider en un principio como una tcnica slo capaz de eliminar impurezas, as, hasta los aos 30
cuando Kuhn y Lederer y Reichstein y Max Euw se valieron de ella para efectuar la separacin de productos naturales. A
mediados de siglo Martin y Synge pensaron que empleando una fase mvil NO lquida, sino gaseosa se acortara el tiempo
de anlisis, pues se facilitaba la propagacin de la muestra, ahora gaseosa, a travs de la columna, en este momento haba
nacido la CROMATOGRAFIA DE GASES lo que le vali a Martin y Synge el premio Nobel. Pronto comenzaron a
describirse teoras que describan el proceso, pronto se tuvo una cromatografa simple, rpida y aplicable a la separacin
de muchos materiales voltiles especialmente en la petroqumica donde en ese momento se preferan los mtodos de
destilacin. Hoy, de acuerdo a H. McNair y J. M. Miller la venta de equipos para cromatografa de gases se estima en
1,000 millones de dlares americanos con una venta de alrededor de 30,000 equipos anualmente.

II.

PRINCIPIOS BASICOS Y DEFINICIONES

La cromatografa opera con el mismo principio que la extraccin lquido-lquido donde un soluto se transfiere de
una fase a otra; la razn de hacerlo es concentrar o aislar el analito deseado o separarlo de especies que podran interferir
en el anlisis. El caso ms comn es la extraccin de una solucin acuosa con un disolvente orgnico, por ejemplo,
tetracloruro de carbono o cloroformo (ms densos que el agua) o el ter etlico, tolueno o hexano, (menos densos que el
agua). Suponga que un soluto A se reparte entre la fase orgnica y la fase acuosa de acuerdo a la figura siguiente:

A
Agua A
K

K =

[A ]( org )
[A ]( ac )

A Disolvente orgnico

Figura 2. Extraccin lquido-lquido.

De lo anterior tenemos un equilibrio que se establece para el soluto A:

S(org)
(fase 2)

S(ac)
(fase 1)

Para el que existe una Constante de reparto K expresada por la ecuacin:

K=

as 2
aS1

donde aS1 se refiere a la actividad del soluto en la fase 1 y aS2 a la actividad del soluto enla fase 2; en soluciones de uso
comn en qumica analtica podemos escribir un coeficiente distribucin o particin en trminos de la concentracin:

K=

[S ]2 = [S ]org
[S ]1 [S ]ac

La cromatografa opera bajo el mismo principio de la extraccin pero una fase se encuentra inmvil mientras que
la otra se mueve estando en contacto con sta ltima. Se compara generalmente mejor con lo que se conoce como
extraccin a contracorriente. Esta tcnica, consiste en poner, despus de cada equilibracin, cada fase en contacto con
porciones nuevas de los dos disolventes. A lo largo del proceso, que en la prctica consta de numerosas etapas, una de las
fases queda estacionaria, mientras que la otra es mvil siendo en realidad un sistema en pseudocontracorriente. La eficacia
de la extraccin aumenta notablemente con sta tcnica, por lo que es adecuada para separar mezclas cuyos componentes

presentan valores bajos de la relacin de distribucin. Este proceso se aprecia en la siguiente figura donde se muestran
resultados calculando la distribucin en cada recipiente si la constante de distribucin K es igual a 1 (Figura 3).

Nmero de recipiente

Transferencia

n=0

50

0.5

50

K=1

0.5

n=1

25
25

25
25

12.5
12.5

25

n=2

25

12.5
12.5

18.75

18.75

n=3

6.25
6.25

18.75

18.75

6.25
6.25

n=4

3.12

12.5

18.75

12.5

3.12

3.12

12.5

18.75

12.5

3.12

Figura 3. Extraccin a contracorriente.

La siguiente figura nos muestra una solucin conteniendo solutos A y B colocados al inicio de una columna
empacada con partculas slidas la cual es llenada con el disolvente fresco de forma que comience a fluir al momento que
se abre la parte inferior de la columna.

Eluyente fresco
Banda inicial
A+B

A
Columna
Empacada
B

Disco poroso
Eluato
Eluye B
Eluye A

Figura 4. Representacin esquemtica de una separacin cromatogrfica.

4

As hemos visto que la muestra se ha separado en sus componentes por CROMATOGRAFIA y que existe una
FASE MOVIL, la cual puede ser una lquido o un gas, y una FASE ESTACIONARIA, que tambin puede ser un lquido o
un slido. El fluido que entra a la columna se le llama ELUYENTE y el que emerge ELUATO. El proceso descrito se le
conoce como elucin.
ELUYENTE
(Gas o lquido)

ELUATO

Figura 5. Diferencia entre eluyente y eluato.

Si comparamos el proceso visto anteriormente con un proceso de extraccin de Craig entonces, debemos
de suponer que tenemos que la fase que no se mueve ser la fase estacionaria, y la que se va cambiando entre los
recipientes es la fase mvil (Figura 6)

Fase mvil

3.12

12.5

18.75

12.5

3.12

12.5

18.75

12.5

3.12
3.12

Fase estacionaria

Figura 6. Comparacin de extraccin lquido-lquido con la cromatografa.

Ahora si de acuerdo a los datos obtenidos anteriormente, trazamos la grfica de la fraccin de soluto en
funcin del nmero de tubo despus de 15 transferencias, tomando en cuenta diferentes valores de la constante de
distribucin K, entonces obtenemos:

Figura 7. Grfica de la fraccin presente de soluto en cada recipiente mediante la extraccin de Craig.

IV.- CLASIFICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA

La cromatografa puede tener diferentes clasificaciones dependiendo de lo que se tome en cuenta para realizarla:
a) De acuerdo al tipo de MECANISMO DE INTERACCIN del soluto con la fase estacionaria:
Cromatografa de adsorcin: El slido adsorbe al componente que estaba en la fase mvil (lquida o
gaseosa) (fuerzas de van der Waals).
Cromatografa de particin: Una fase estacionaria forma una capa delgada sobre la superficie de un
soporte slido. El soluto se equilibra entre la fase mvil y la fase estacionaria.
Cromatografa de intercambio inico: El slido es un intercambiador de iones donde estos (como
pueden ser X- o A+) se encuentran covalentemente enlazados a la fases estacionaria slida, as
solutos de carga opuesta son atrados a la fase estacionaria por medio de fuerzas electrostticas. La
fase mvil es un lquido.
Cromatografa de exclusin (o de permeacin o filtracin en gel): El slido es un gel formado por
polmeros no inicos porosos que retienen a las molculas de soluto segn su tamao en el caso
ideal sin interacciones con la fase mvil, as los poros son suficientemente pequeos para excluir
grandes molculas, pero no pequeas las cuales se tardan ms tiempo en pasar a travs de la
columna, la fase mvil puede ser lquida o gaseosa.
Cromatografa de afinidad: Tipo especial de cromatografa, usado principalmente en bioqumica, en
la que un slido tiene enlazado un ligando de afinidad que puede ser por ejemplo, un inhibidor
enzimtico o un anticuerpo. Es la ms especfica clase de cromatografa ya que emplea
interacciones especficas entre solutos y fase estacionaria.

Soluto disuelto en la fase lquida que

recubre la superficie del soporte slido
Soluto adsorbido SOBRE la
superficie de la fase estacionaria

Cromatografa de adsorcin

Cromatografa de particin
+

+ -

Cationes que estn enlazados

covalentemente a la fase estacionaria

+
+
+

+ -

+ -

Aniones atrados por los cationes

+
+

+
+
+

Resina de intercambio aninico

Cromatografa de Intercambio Inico

Figura 8. Mecanismos de interaccin en cromatografa.

Molculas grandes son excluidas

Molculas pequeas penetran en los poros

Cromatografa de Exclusin molecular

Slo una clase especfica de molculas

se liga a la molculas que se encuentra
enlazada en la fase estacionaria

Las dems molculas pasan sin interaccionar

Cromatografa de Afinidad

Figura 8. Mecanismos de interaccin en cromatografa (continuacin).

Dado que los mecanismo de adsorcin y particin (absorcin), son a los que nos referiremos ms adelante,
observe la siguiente figura a fin de tener una comprensin mejor del proceso.

Absorcin

Adsorcin

Figura 9. Diferencia entre Absorcin y Adsorcin.

b) Segn la naturaleza de la FASE ESTACIONARIA:

Cromatografa
Fase estacionaria slida

Fase estacionaria lquida

Adsorcin

Particin

Fase mvil lquida

Fase mvil gaseosa

Fase mvil lquida

Fase mvil gaseosa

Cromatografa slido-lquido

Cromatografa gas-slido

Cromatografa lquido-lquido

Cromatografa lquido-gas

Figura 10. Clasificacin de la cromatografa en funcin de la naturaleza de la fase estacionaria.

a) Slido
Cromatografa de adsorcin
Cromatografa de intercambio inico
Cromatografa de exclusin
Cromatografa de afinidad
b) Lquido
Cromatografa de particin

c) Segn la naturaleza de la FASE MOVIL:

a) Lquida
Por lo tanto se puede tener: Cromatografa lquido-lquido: Ambas fases son lquidas (cromatografa
de particin).
Cromatografa lquido-slido: fase estacionaria slida, (adsorcin,
intercambio inico, exclusin, afinidad).

b) Gas
Por lo tanto se puede tener: Cromatografa gas-lquido: es una cromatografa de particin.
Cromatografa gas-slido: es una cromatografa de adsorcin.
c) Es un fluido supercrtico (fluido calentado a una temperatura superior a su temperatura crtica pero
simultneamente comprimido a una presin mayor que su temperatura crtica) se trata de la
Cromatografa de fluidos supercrticos, puede ser de adsorcin y de particin.
En la cromatografa con fase slida tenemos lo siguientes tipos de equilibrio:

Cromatografa
Cromatografa de gases

Cromatografa de lquidos

Adsorcin

Particin

Gas-slido

Gas-lquido

En columna

Planar

Lquido-slido

En papel

Lquido-lquido

En capa fina

De fase ligada
De intercambio inico
De exclusin molecular

Figura 11. Clasificacin de la cromatografa en de fase slida.

V.- TECNICAS CROMATOGRAFICAS

a) Cromatografa en columna: Se utiliza un tubo cilndrico, en cuyo interior se coloca la fase estacionaria,
hacindose pasar a travs de ella la fase mvil ya sea por medio de presin, gravedad o capilaridad.
b) Cromatografa plana: La fase estacionaria se coloca en una superficie plana que en realidad es tridimensional,
aunque una de sus dimensiones es muy reducida, por lo que puede considerarse bidimensional. Se divide en:
Cromatografa en papel.
Cromatografa en capa fina.
El flujo de la fase mvil se consigue por capilaridad y por capilaridad y gravedad.
9

VI.- METODOS GENERALES

Se denominan as a los diferentes tipos de desarrollos cromatogrficos utilizados para realizar la separacin de los
solutos de una mezcla, la cual est basada en los distintos valores de las relaciones de distribucin.
Para un soluto A, la relacin de distribucin se define como la relacin de concentraciones del mismo en la fase
estacionaria y en la fase mvil una vez alcanzado el equilibrio:
K=

[A]estacionria
[A]mvil

Ecuacin 1

Supongamos que tenemos tres solutos A, B, C cuyas relaciones de distribucin son KA < KB < Kc y que seguimos
una tcnica en columna para realizar la separacin. De acuerdo a lo anterior un soluto con mayor coeficiente de
distribucin tendr mayor afinidad por la fase estacionaria.
B

1) Desarrollo por Elucin

Se introduce la muestra al inicio de la columna, se adiciona la fase mvil en forma continua la cual arrastra los
componentes de la muestra, el soluto con mayor afinidad por la fase estacionaria (en este caso C), se desplazar
ms lentamente por lo que saldr al final de la columna. Los otros solutos tambin se debern separar, saliendo en
orden de elucin: A, B y C. Idealmente, todos los solutos se separan y pueden salir de forma individual.

Fase mvil

Respuesta

A+B+C
A

Tiempo o Volumen

Figura 12. Desarrollo por elucin,

2) Desarrollo frontal
En este caso la muestra se adiciona continuamente a la columna durante todo el proceso, es decir, la muestra
acta de fase mvil. Los solutos se irn desplazando a lo largo de la columna y la primer fraccin que salga slo
contendr al soluto menos retenido (A), la segunda fraccin la mezcla de A y B, y la tercera la mezcla de los tres
10

solutos. El cromatograma en lugar de bandas aparecer en forma de escalones. Con esta forma, slo se consigue
aislar una porcin del componente ms rpido.
Muestra
Respuesta

A+B+C

A+B+C
A+B
A
Tiempo o Volumen

A+B

A+B+C

Figura 13. Desarrollo frontal.

3) Desarrollo por desplazamiento

La muestra se introduce en la columna al igual que en el anlisis por elucin, pero en la fase mvil se tiene un
nuevo componente (D) que se retiene ms fuertemente que los solutos de la muestra (DC < DD) por lo tanto este
desplazante fuerza su salida de la columna, por lo que los solutos se mueven a lo largo de la columna
desplazando unos a otros y saliendo finalmente en orden creciente de sus relaciones de distribucin: primero sale
el componente menos retenido A, luego B y C y finalmente el desplazante D. El cromatograma muestra forma
escalonada como en el desarrollo frontal, pero cada escaln corresponde a un componente puro.

Muestra

A+B+C

D
C
C
+
B

D
D

Respuesta

Fase mvil ms desplazante

C
+
B
+
A

C
+
B

B
+
A

B
+
A

C
C

B
C
B

D
Tiempo o Volumen

Figura 14. Desarrollo por desplazamiento.

11

VII.- PRINCIPIOS BASICOS

Como ya se dijo anteriormente la cromatografa es una tcnica de separacin, el proceso cromatogrfico se

presenta de forma esquemtica en la Figura 15. La Unin internacional de la qumica pura y aplicada (IUPAC por sus
siglas en ingls) la define como:

Respuesta

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes a ser separados se encuentran distribuidos
entre dos fases, una de las cuales es estacionaria (fase estacionaria) mientras que la otra (la fase mvil) se mueve en una
direccin definida. La cromatografa de elucin es un procedimiento en el cul la fase mvil se encuentra continuamente
pasando a travs o a lo largo del lecho cromatogrfico siendo la muestra alimentada en el sistema como una porcin
finita.

Respuesta

Tiempo o Volumen

Respuesta

Tiempo o Volumen

Tiempo o Volumen

Figura 15. Representacin esquemtica del proceso cromatogrfico.

La velocidad de la fase mvil pasando a travs de la columna cromatogrfica puede ser expresada de dos formas:
a) Flujo o caudal, F, (mL/min): Nos dice cuntos mililitros de disolvente viajan por minuto a travs de la
columna. Se miden a condiciones especficas de presin y temperatura. Generalmente se utilizan
caudalmetros de burbuja y/o electrnicos en el caso de cromatografa de gases, y midiendo el voluemn al
final del sistema en cromatografa de lquidos.

12

Gas del
cromatgrafo

jabn

a)

b)

Figura 16. Caudalmetros: a) Electrnico b) De burbuja

b) Velocidad lineal promedio, u, (cm/seg): Nos dice cuntos centmetros de columna viaja el disolvente en un
minuto, no slo es funcin del caudal sino tambin de la seccin interna de la misma, la comparacin de
mtodos que emplean columnas de diferente dimetro interno hace preferible la expresin de la velocidad
lineal en lugar del caudal.
Por ejemplo, supongamos que tenemos una columna de cromatografa (especficamente de Cromatografa de
lquidos, HPLC) con dimetro interno de 7.8 mm (radio = 3.9 mm = 0. 39 cm) con 300 mm (30 cm) de largo
ocupando la fase mvil un 20% del volumen de la columna.
As, cada centmetro del largo de la columna tiene un volumen de [r2largo = (.39 cm)21 cm] 0.4778
mL del cual el 20%, o sea 0.0955 mL es fase mvil.
As un flujo de 0.60 mL/ min nos dice cuntos mililitros de disolvente viajan a travs de la columna en un
minuto, y la velocidad lineal nos dice cuntos centmetros del largo de la columna viaja en un minuto el
disolvente, as, 1 cm de columna contiene 0.0955 mL de fase mvil lo cual ocupara (0.60 mL)/(0.0955 mL/cm) =
6.28 cm del largo de la columna. Por lo que para un flujo de 0.60 ml/min el correspondiente es de 6.28 cm/min.
La IUPAC ha intentado codificar los trminos, smbolos y definiciones para todas las formas de
cromatografa por lo cual trataremos de seguir en lo posible sus recomendaciones si bien habr que tomar en
cuenta que en publicaciones anteriores a 1993 otros trminos comunes existirn. La tabla 1 resume los trminos y
smbolos de uso comn y los recomendados por la IUPAC.
Tabla 1. Trminos y smbolos en cromatografa.

Smbolo y Nombre recomendado

por la IUPAC
Kc Constante de distribucin (para CGL)
k factor de retencin
N Nmero del plato
H Altura del plato
R factor de retardo (en columnas)
factor de separacin
tR Tiempo de retencin
VR Volumen de retencin
VM Volumen vaco

Otros smbolos y nombres en uso

Kp Coeficiente de particin
Kd Coeficiente de distribucin
k factor de capacidad,
n Nmero de platos tericos, nmero de plato terico.
HETP Altura equivalente a un plato terico
RR Relacin de retencin
Selectividad, eficiencia del disolvente

Volumen de la fase mvil, VG volumen de la fase

gaseosa (en CG); VO Volumen vaco; volumen muerto
13

Como resultado del proceso cromatogrfico se obtienen dos productos:

a) Un grfico que es la respuesta del detector y que se llama cromatograma, el cual relaciona la concentracin del
soluto en funcin del tiempo de elucin. De acuerdo a la IUPAC es un grfico u otra representacin de la
respuesta del detector, concentracin del efluente u otra cantidad usada como medida de la concentracin del
efluente, versus el volumen de efluente o tiempo.
b) Un eludo o eluato, que es el fluido proveniente de la columna, que de recolectarse en forma secuencial o
escalonada (manualmente o con colector de fracciones), contiene la fase mvil y el o los componentes
separados.
La Figura 17 nos representa un cromatograma de la separacin de hidrocarburos:
Respuesta

tR o VR
tR o VR

tM o VM

Inyeccin
de la

CH4

Octano

Nonano

Decano

Tiempo o
Volumen

Figura 17. Representacin de un cromatograma.

A partir del cromatograma podemos obtener los siguientes parmetros:

a) Lnea base: Porcin del cromatograma donde slo se aprecia la elucin de la fase mvil, sin seal debida al
soluto.
b) Tiempo de retencin (tR): Es el tiempo necesario que cada componente necesita despus de la inyeccin de la
muestra para alcanzar el detector. Tiempo medido entre la inyeccin y la elucin de la concentracin mxima del
soluto.
c) Tiempo muerto (tM): Es el tiempo necesario que un componente que no interacciona con la fase estacionaria
necesita despus de ser inyectado para alcanzar el detector. A partir de este valor podemos calcular la velocidad
lineal, u, (cm/min):
u=

L (cm)
t M (min)

Ecuacin 2

donde L = longitud de la columna (cm)

tM = tiempo muerto (min)

14

d) Volumen muerto, VM o Vo, (en mL): Volumen total entre el punto de inyeccin y el de deteccin, exceptuando
el correspondiente al de las partculas de la fase estacionaria. Comprende al volumen que la fase mvil puede
ocupar entre las partculas, entre las partculas y la pared de la columna, en el interior de las tuberas, uniones,
fritados, etc. Este volumen de trabajar a caudal constante a un tiempo conocido como tiempo muerto (tM) y se
visualiza (No siempre) como el primer pico o disturbio de la lnea base. Ocasionalmente se inyecta un analito que
NO se retenga (tericamente) en la columna, de forma que al salir y producir una seal, ese volumen se tome
como VM y el tiempo como tM..

tM =

VM (mL)
F(mL/min)

Ecuacin 3

e) Volumen de retencin o de elucin, VR (en mL): Volumen de fase mvil eluida entre la inyeccin y la elucin
en la concentracin mxima del soluto. A volumen constante, el tiempo transcurrido entre dichos puntos
corresponde al tiempo de elucin o tiempo de retencin (tR).
VR (mL) = tR (min) F (ml/min)

Ecuacin 4

f) Tiempo de retencin corregido o ajustado, tR (en min): Es la diferencia entre el tiempo de retencin y el tiempo
muerto. Constituye el tiempo adicional al que necesita un soluto sin retenerse que requiere el soluto para viajar a
lo largo de la columna. Es decir es el tiempo que el compuesto pasa en la fase estacionaria.
tR = tR tM

Ecuacin 5

g) Altura del pico (h): Esta medida se efecta para cada uno de los picos desde la lnea base hasta el mximo del
pico. Si bien tambin se tienen valores a la mitad de l (h).
h) Area del pico (A): Se toma como rea del pico la que se encuentra debajo de la curva de ste. Actualmente el
integrador o sistema computarizado lo da automticamente.

0.607
0.5
AREA

h0.607
h

Fraccin de lla altura del pico

Figura 18. Area y altura de un pico cromatogrfico.

i) Ancho del pico (w): Dependiendo de los compuestos, condiciones y columna, los picos tienen diferentes anchos,
estos son indicadores importantes de la columna y el comportamiento del sistema. Como ya se ha dicho
anteriormente, se presupone en cromatografa tener picos gaussianos cuyas caractersticas son bien conocidas. La
Figura 19 muestra un pico cromatogrfico ideal. Los puntos de inflexin ocurren a 0.607 de la altura del pico, y
15

las tangentes a estos puntos producen un tringulo con una ancho igual a 4 desviaciones estndar, 4, con un
ancho a la mitad de la altura del pico, w, igual a 2.354. El ancho del pico es 2 en el punto de inflexin (60.5%
de la altura, w0.607). Estas definiciones se utilizan a fin de determinar ciertos parmetros de la eficiencia de un
sistema cromatogrfico. Los integradores y sistemas computarizados listan los anchos de pico como parte de los
reportes en unidades de tiempo (en minutos generalmente).

Tangentes a los
puntos de inflexin
h

0.607

0.5

h0.607
h

Fraccin de la altura del pico

Figura 19. Caractersticas de un pico gaussiano.

j) Factor de retencin (k) o factor de capacidad (k): Se define como la razn de la cantidad de soluto (NO
CONCENTRACION) en la fase estacionaria a la cantidad en la fase mvil, as, lo podemos expresar como:
k = k' =

nE
nM

Ecuacin 6

donde nE = nmero de moles del soluto en la fase estacionaria

nM = nmero de moles del soluto en la fase mvil
este cociente es equivalente al cociente del tiempo que el soluto est en la fase estacionaria con respecto al que
permanece en la fase mvil es decir:

tiempo del soluto en la fase estacionaria cantidad del soluto en la fase estacionaria
=
tiempo del soluto en la fase mvil
cantidad del soluto en la fase mvil
as, tambin definimos k de la siguiente forma:
k = k' =

k = k' =

tR tM tR '
=
tM
tM

Ecuacin 7

Si bien la cromatografa No es un sistema en equilibrio, si la transferencia de masa es rpida y el flujo a travs de

la columna es lo suficientemente lento, entonces el sistema operar CERCANO al equilibrio (pseudoequilibro) y

16

la constante de distribucin puede utilizarse al describir el sistema, por lo que el valor del factor de capacidad
puede escribirse, tomando en cuenta las ecuaciones 1 y 6 como:
k = k' =

C E VE
V
=K E
C M VM
VM

Ecuacin 8

Como se puede observar k es proporcional al tiempo que el compuesto pasa en la fase estacionaria (tr) relativo al
que pasa en la fase mvil (tM), ado que TODOS los analitos pasan el mismo tiempo en la fase mvil, k es una
medida adimensional de cunto un compuesto pasa en la fase estacionaria con respecto a otro.
As, conforme la retencin se incrementa, tambin k se incrementa. Un compuesto sin retener tiene un k
= 0.
Observemos en la siguiente tabla que el aumento de k al doble No significa que el tiempo de retencin
aumente al doble, para que esto suceda ser necesario que la relacin entre los dos valores de k sea del doble ms
una unidad con respecto al otro: kA = 2kB +1.
B

Tabla 2. Comparacin de valores de k' para dos analitos.

Compuesto A
tM = tM
tR = 2 tM
tM = tM
tR = 3 tM
tM = tM
tR = 5 tM
Compuesto B
tM = tM
tR = 9 tM
tM = tM
tR = 17tM

k
1
2
4
k
8
16

Compuesto A
tM = tM
tR = 5
Compuesto B
tM = tM
tR = 10

k
4
k
9

k) Relacin de fases (): Se define a la razn de volmenes de la fase estacionaria con respecto al de la
fase mvil.

VE
VM

Ecuacin 9

Para columnas capilares considerando que r >>> dp tenemos que es posible tambin definir como:

r
2 dp

Ecuacin 10

donde r = radio de la columna (m)

dp = espesor de la pelcula (m)
17

De esta expresin, podemos deducir que la ecuacin 7 tambin se puede escribir como:
k' =

C E VE
r
=K =K
C M VM
2 dp

Ecuacin 11

as, es posible apreciar que al aumentar el espesor de pelcula, tendremos una relacin de fases menor y
por lo tanto una mayor retencin.
Tabla 3. Efectos del cambio del dimetro de columna y
espesor de pelcula sobre la retencin.

Dimetro de columna
Incremento
Disminucin
-

Espesor de pelcula
Incremento
Disminucin

Relacin de fases
Incremento
Disminucin
Disminucin
Incremento

Retencin
Disminucin
Incremento
Incremento
Disminucin

l) Simetra del pico (tF, del ingls tailing factor): La mayora de los clculos asumen que los picos son
tringulos simtricos, es decir gaussianos. Sin embargo, esto no es exactamento lo que sucede en la
realidad en un proceso cromatogrfico. La Figura 20 nos muestra algunas de las formas que se presentan
en los picos cromatogrficos. Picos como en b) generalmente son ms comunes en columnas empacadas
indicando que la cintica de transferencia de masa es demasiado lenta.

a)

b)

c)

d)

e)

Figura 20. Forma de picos. a) ideal b) ancho c) cabeceado d) coleado e) dobleteado

La simetra del pico se determina realizando la biseccin del pico a partir de su pice (ver figura 14) obteniendo el
ancho del pico medido al 10% de su altura, y obteniendo el cociente de la seccin frontal con respecto a la seccin
posterior (b/a). Un pico simtrico perfecto tiene un factor de simetra de 1.00. Desviaciones de 0.05 a partir de
uno no es usual, y pueden indicar un pico sobrecargado o coeluido, o un problema en el inyector.

18

TF > 1 Pico coleado

TF < 1 Pico cabeceado
TF = 1 Pico simtrico

Figura 21. Simetra de un pico cromatogrfico.

ECUACION FUNDAMENTAL DE LA CROMATOGRAFIA

Como hemos visto, la cromatografa se tiene una constante de distribucin, K, que es la que controla el equilibrio
de reparto de un soluto (hasta aqu supondremos que K es independiente del tamao de la muestra por lo cual los picos
obtenidos en el cromatograma sern gaussianos, esto se abordar ms adelante). De acuerdo a lo expresado anteriormente,
sabemos que si un soluto A se encuentra ms fuertemente atrado que un soluto B sobre las partculas slidas de una fase
estacionaria, entonces el soluto A pasa ms tiempo en la fase estacionaria que en la fase mvil y por lo tanto se mover
ms lentamente a travs de la columna.
Un soluto migra por la columna SOLO cuando se encuentra en la fase mvil, por lo que en un momento dado,
podemos expresar un trmino R como funcin de la fraccin de moles de soluto
FASE ESTACIONARIA

FASE MOVIL

Figura 22. Movimiento de las molculas a travs de la columna.

en la fase mvil (nM), por lo que tendremos:

R=

nM
nM + nE

Ecuacin 12

19

siendo nE el nmero de moles en la fase estacionaria. Tomando en cuenta la definicin del factor de capacidad vemos que:
R=

1
1 + k'

Ecuacin 13

de la ecuacin 10 sabemos que existe una relacin de la constante de distribucin K, con el factor de capacidad k. Dado
que K es constante para el sistema que se discute (elucin lineal), vemos que R es constante, conforme R sea mayor (k
disminuye), entonces el soluto se mueve a travs de la columna ms rpidamente (se retiene menos, pasa ms tiempo en la
fase mvil). El promedio de la velocidad de migracin del soluto vs es igual a la u veces la velocidad de la fase mvil de la
fraccin de r en la fase mvil a un tiempo dado:
vS = u R

Ecuacin 14

As, cuando R es zero, el soluto no migra (vS = 0). Similarmente, cuando R = 1, el soluto se mueve con la misma
velocidad que la fase mvil (vS = u). Si sabemos que
vS = L/tR

donde L = largo de la columna y dado que tambin conocemos que de acuerdo a la ecuacin 2
ecuacin 16 queda como:
tR =

tM
R

Ecuacin 15

u= L/tM, entonces la

Ecuacin 16

lo cual es equivalente, tomando en cuenta las ecuaciones 3 y 4, a:

VR =

VM
R

Ecuacin 17

Combinando ecuaciones 15 con 19 tenemos:

VR = VM(1 + k)

Ecuacin 18

VR = VM + VEK

Ecuacin 19

La cual se considera la ecuacin bsica de la cromatografa.

EFICIENCIA DE LA SEPARACION
Dos factores contribuyen a la buena separacin de un proceso cromatogrfico:
a) La diferencia de los tiempos de retencin
b) El ancho de los picos
As, entre mayor sean sus tiempos de elucin, se tendr una mejor separacin, si bien entre ms anchos sean los
picos cromatogrficos, ms pobre ser sta. Una medida de la eficiencia de una columna es la resolucin, Rs, este
trmino se utiliza a fin de expresar el grado de separacin de picos adyacentes tomando en cuenta sus anchos.

20

La ecuacin siguiente se utiliza para calcular la cantidad de resolucin:

Rs =

t R
__

VR
__

2 (t R2 - t R1 ) 2 (VR2 - VR1 )
=
(w 1 + w 2 )
(w 1 + w 2 )

Ecuacin 20

donde tR o VR es la separacin entre picos en unidades de tiempo o de volumen y w es el promedio del ancho
de los dos picos en la base en unidades correspondientes al tiempo o el volumen. Dado que estamos considerando
que se tiene una curva gaussiana, entonces se puede definir que la relacin entre el ancho del pico en la base (W) y
a la mitad del pico (W1/2) est dada por:

W1/2 = 0.588 W

Ecuacin 21

de ah que la medida de la resolucin utilizando el ancho a la mitad del pico se tiene la ecuacin:
Rs =

1.177 (t R2 - t R1 ) 1.177 (VR2 - VR1 )

=
(w 1 / 2,1 + w 1/2,2 )
(w 1/2,1 + w 1/2 , 2 )

Ecuacin 22

La figura siguiente nos muestra varios valores de resolucin de dos picos adyacentes. Observemos que la
separacin completa a la lnea base requiere de un valor de resolucin de al menos 1.5. hablando estrictamente las
ecuaciones 23 y 24 son vlidas solamente cuando las alturas de los dos picos adyacentes son semejantes.
2

R e s o lu c i n = 0 .5 0

R e s o lu c i n = 0 .7 5

R e s o lu c i n = 1 .0 0

R e s o lu c i n = 1 .5 0

Figura 23. Resolucin en picos cromatogrficos.

SELECTIVIDAD O FACTOR DE SEPARACION O RETENCION RELATIVA (): Es una medida de la separacin relativa
entre picos, dicho de otro modo es la interaccin relativa de los solutos con respecto a la fase estacionaria, o sea cmo son las
fuerzas intermoleculares y la magnitud de su similitud o diferencia. En la prctica nos dice qu tan difcil es la separacin de
estos dos solutos, entre mayor sea , existe una MEJOR POSIBILIDAD de realizar la separacin de los analitos de inters.
Cuando = 1 NO hay interaccin diferencial entre los analitos y por lo tanto no existe la posibilidad de separacin. En
resumen y comparando con K y k, tenemos que stas con constantes que indican el grado de las fuerzas intermoleculares
entre un soluto y una fase estacionaria mientras que expresa la solubilidad diferencial para dos solutos en una fase
estacionaria dada. La retencin relativa de dos solutos es proporcional a la razn de sus coeficientes de particin, de

sus coeficientes de distribucin o de sus tiempos de retencin ajustados, esto porque tr k K.

tR
k'
K
= 2 = 2 = 2
t R1 k'1
K1
(siempre que k2 > k1 a fin de que siempre sea 1)

Ecuacin 23

21

TRENNZAHL (TZ).- Puede ser interpretado como el nmero de picos (de igual ancho) que pueden colocarse lado a lado
entre dos picos. A mayor Trennzahl, es mayor la resolucin de los dos picos, el TZ es dependiente de los compuestos
utilizados.

TZ =

t R,B t R,A
wA wB

Ecuacin 24

EFICIENCIA DE LA COLUMNA

Se desean tener siempre picos con los anchos ms pequeos, dos picos muy estrechos pueden estar ms juntos que
dos picos ms anchos sin traslaparse. Todos los picos en un cromatograma no tienen el mismo ancho, de hecho a mayor
tiempo de retencin el ancho se incrementa. LA Eficiencia de la Columna es la relacin entre el ancho de un pico y su
tiempo de retencin.

NUMERO DE PLATOS TEORICOS (N).- Es la medida ms comn de la eficiencia de un sistema

cromatogrfico, se realiza el clculo de acuerdo a la ecuacin siguiente:

t
t
t
N = R = 16 R = 5.54 R
w

w1/ 2
2

Ecuacin 25

siendo tR = tiempo de retencin de un compuesto

w = ancho en la base del pico
w = ancho del pico a la mitad de la altura
ALTURA EQUIVALENTE DEL PLATO TEORICO (H).- Se calcula utilizando la ecuacin que involucra el
largo de la columna (L) y el nmero de platos tericos:

H=

L
N

Ecuacin 26

entre ms pequeo sea el plato terico ms platos tendr la columna y siendo ms eficiente. Podemos ver esto como la
cantidad de equilibrios que se llevan a cabo durante el recorrido de la muestra por la columna.

Se debe de tener cuidado al comparar el nmero de platos tericos ya que este est influenciado directamente por
el pico que se utilice al momento de realizar el clculo. En teora, el nmero de platos tericos debera de ser el mismo so
importando de la retencin del pico utilizado. Sin embargo, en la realidad el nmero de platos tericos es dependiente de
la retencin del pico utilizado para calcular N. Cuando se calculan valores de N, un pico con k > 5 debe ser utilizado a fin
de asegurar la validez y consistencia de los nmeros. Utilizando picos con k < 5 infla el nmero de platos toricos. Otra
importante consideracin es que el nmero de platos tericos son medida del funcionamiento global del sistema
cromatogrfico y NO solamente de la columna. As, al momento de comparar columnas de diferentes fabricantes debe
hacerse bajo las mismas condiciones con el mismo analito.
22

ECUACION GLOBAL O MAESTRA DE LA RESOLUCION

Rs =

N - 1 k '

4 1 + k'

A partir de esta ecuacin, podemos obtener las siguientes conclusiones:

1) A mayor retencin (k) mejor resolucin, de acuerdo a la curva de la Figura 24 Para tener buenas separaciones
se necesita un k > 2. En mezclas sencillas un k > 6 slo aumenta el tiempo de anlisis sin mejorar
apreciablemente la separacin.

Figura 24. Variacin de la resolucin (Rs) con el factor de capacidad (k')

2) A mayor selectividad (), mayor resolucin, pero la grfica de la Figura 25 es asinttica, por lo que no se
necesitan selectividades muy grandes. Generalmente se trabaja en la zona cercana a = 1, por lo que cualquier aumento
en mejora sustancialmente la separacin.

Figura 25. Variacin de la resolucin (Rs) con el factor de capacidad ()

23

3) Entre mayor se el nmero de platos tericos, mejor la separacin, la grfica de la indica que se deben de hacer
cambios sustanciales (varios rdenes de magnitud) para que esta mejora sea importante. Si duplicamos N aumenta slo el
41% de la resolucin, lo mismo en el caso de doblar la longitud de la columna esto dado que N es proporcional ste valor.

Figura 26. Variacin de la resolucin (Rs) con el nmero de platos tericos (N).

Tambin es posible con la ecuacin anterior calcular el nmero de platos tericos requeridos para realizar una
separacin a partir de datos de la selectividad y el factor de capacidad, la siguiente figura (Figura 27) muestra la grfica
del nmero de platos tericos requeridos para lograr una resolucin de 1.00 en funcin de la selectividad y el factor de
capacidad.
Nrequerido

Figura 27. Variacin del nmero de platos tericos requeridos (Nreq)

como funcin de la selectividad y del factor de separacin.

La cromatografa en la separacin involucra dos fundamentos principales:

a) El termodinmico
b) El cintico

24

a) Principio Termodinmico
Los que rigen el equilibrio de distribucin o reparto de los analitos entre las dos fases, son responsables de
factores como la retencin y la selectividad.
b) Principio Cintico
Los aspectos importante son el tiempo que alcanza el equilibrio de distribucin en cada plato terico y, por
otra parte, la velocidad del desplazamiento diferencial de la mezcla de solutos en el lecho cromatogrfico,
adems influyen sobre ella aspectos cinticos como son la dispersin axial, flujo a travs del medio poros, etc.

Proceso de ensanchamiento de banda:

El ensanchamiento de las bandas de soluto conforme viajan a travs del lecho cromatogrfico es importante ya que
este en s constituye un factor para una separacin adecuada, el grado de ensanchamiento de banda es una medida
importante de la eficiencia del sistema cromatogrfico.
Bajo condiciones ideales el soluto ser aplicado en la columna en una banda estrecha, es decir que su ancho inicial
ser pequeo comparado con su ancho final. La migracin comienza a una velocidad vs la cual es igual al producto de la
velocidad de la fase mvil, v, y la fraccin R en esta fase. Sin embargo, vs,no es constante en todas las regiones del lecho,
lo que nos lleva a valores de velocidad finales diferentes para las molculas individuales. Estas diferencias constituyen el
origen del ensanchamiento de banda.

Las mayores contribuciones a la variacin en la velocidad global de las molculas son debido a los siguientes
factores:
a) Difusin en remolino
b) Difusin longitudinal
c) Resistencia a la transferencia de masa
Antes de abordar cada uno de los factores anteriores, recordemos que la meta principal de la teora de la
cromatografa es la de establecer una relacin cuantitativa entre parmetros de la columna, propiedades del soluto y
condiciones de operacin. As, podemos establecer que dado que las varianzas son aditivas, la varianza de una banda
cromatogrfica es es la suma de las variaznas de las contribuciones de cada uno de los procesos independientes que causan
el ensanchjamiento de bandas, es decir, la dispersin de un pico cromatogrfico est representado por:
2TOTAL = 2COLUMNA + 2EXTRACOLUMNA

Ecuacin 27

donde: 2EXTRACOLUMNA = 2INYECTOR + 2TUBERIA + 2DETECTOR + 2UNIONES

2COLUMNA = 2 de los factores de ensanchamiento en la columna)
De esta manera, tambin es posible decir que la altura del plato terico puede ser expresado como la suma del

25

incremento de los platos tericos en los procesos de ensanchamiento de banda:

H 2TOTAL
H 2TOTAL = 2COLUMNA + 2EXTRACOLUMNA

Ecuacin 28
Ecuacin 29

Para el proceso en la columna tenemos que las contribuciones se pueden expresar con la ecuacin de van Deemter,
la cual nos dice cmo la columna y la velocidad lineal afectan la altura del plato:
H A + B/u + C u

Ecuacin 30

Siendo A, B y C constantes para la columna y la fase estacionaria, y u, la velocidad lineal. A se e encuentra

relacionada con lo que se llama mltiples caminos, B con la difusin longitudinal y C con los tiempos de equilibrio,
llamado como el proceso de transferencia de masa.
Esta ecuacin nos dice que hay mecanismos de ensanchamiento de banda proporcionales e inversamente
proporcionales a la velocidad de flujo e independiente de sta.
Analicemos estos mecanismos:
a) Difusin en remolino:
El siguiente dibujo nos ayudar a entender mejor el proceso.

Tiempo

Figura 28. Ensanchamiento de banda debido a la difusin en remolino.

Como se observa, si bien todas las molculas entran al mismo tiempo, no todas siguen el mismo camino, siendo su
velocidad global diferente para cada una de ellas. Este es el trmino A de la ecuacin de van Deemter, es posible inferir
que a dimetro de partculas menores, los caminos sern ms similares.
b) Difusin longitudinal:
Si aplicamos una banda de soluto al centro de la columna, la banda lentamente difundir desde el centro, de mayor
concentracin) hacia los lados (menor concentracin). Esto se llama difusin longitudinal porque el proceso se lleva a
cabo a lo largo del eje de la columna; esto ocurre mientras la banda es transportada a lo largo de la columna por la fase
mvil.

26

FASE ESTACIONARIA

FASE MOVIL

Perfil de la concentracin

Figura 29. Ensanchamiento de banda debido a la difusin longitudinal.

De acuerdo a la ecuacin de van Deemter, esto se representa por B/u, lo que nos dice que si es ms rpido el flujo,
menos difusin longitudinal habr.

c) Transferencia de masa:
El trmino Cu, proviene del tiempo finito requerido por el soluto para equilibrarse entre las fases mvil y
estacionaria. Es decir tiene que ver con la velocidad a la cual las molculas se transferirn hacia y desde la fase
estacionaria. Esta velocidad es controlada por la difusin en fases estacionarias lquidas y por la cintica
adsorcin-desorcin en el caso de los adsorbentes.
Este factor se reduce si el espesor de la fase estacionaria se reduce o por el incremento de la temperatura en la
columna. Es decir C es proporcional al espesor de la pelcula (df) y al inverso del coeficiente de difusin del soluto
en la fase estacionaria (De).

FASE MOVIL

FASE ESTACIONARIA

FASE MOVIL

FASE ESTACIONARIA

Figura 30. Ensanchamiento de banda

debido a la transferencia de masa.

Por analoga, podemos pensar en una persona que entra y sale de una piscina, si sta es un chapoteadero, entonces
entra y sale rpido, pero si es una piscina olmpica, se tardar ms tiempo en salir.

27

Las columnas pueden ser EMPACADAS o TUBULARES ABIERTAS, en la primera de ellas la columna se llena
completamente con las partculas que contienen la fase estacionaria, en la segunda de ellas es un capilar con fase
estacionaria recubriendo sus paredes.
Por lo tanto, en la cromatografa de gases capilar, el trmino A es igual a cero. Esta conclusin fue sealada por
Golay, quien propuso un nuevo factor en el ensanchamiento de bandas en columnas tubulares abiertas, la resistencia a la
transferencia de masa en la fase mvil (CM), por lo que el trmino C de la ecuacin de van Deemter quedara expresado
por:
a) Resistencia a la transferencia de masa en la fase estacionaria, CE, la cual es similar a la C en la ecuacin de
van Deemter.
b) Resistencia a la transferencia de masa en la fase mvil, CM.

De este modo, la ecuacin de Golay expresada en forma simple ser:

H = B/u + (CE + CM) u

Ecuacin 31

El trmino CM, se puede visualizar con respecto a la siguiente figura:

FASE ESTACIONARIA

FASE MOVIL

Figura 31. Transferencia de masa en la fase mvil.

Se observa un perfil del soluto como consecuencia del flujo no turbulento a travs del tubo capilar. Un mezclado
inadecuado (cintica lenta) en la fase gaseosa, resulta en el ensanchamiento de la banda ya que las molculas de soluto
que se encuentran al centro se mueven adelantadas de las que se encuentran en las paredes. Dimetros pequeos de
columnas minimizan este ensanchamiento ya que las distancias de las transferencias son relativamente pequeas:
CM r2

Ecuacin 32

siendo r = radio de la columna.

En resumen, los trminos C dependen principalmente del radio de la columna y del espesor de la pelcula de la fase
estacionaria
De acuerdo a la Tabla 4 es posible concluir que para espesores delgados (< 0.2 m) el trmino C est controlado por la
transferencia de masa en la fase mvil, y para espesores gruesos (2-5 m) por la transferencia de masa en la fase
estacionaria, para espesores intermedios (0.2-2 m) ambos factores se necesitan considerar.

28

Tabla 4. Importancia relativa de los tipos de transferencia de masa.

Columna

Df(m)

A
B
C
D

0.25
0.50
1.00
5.00

320
160
80
16

0.56
1.12
2.24
11.20

Importancia relativa (%)

CM
CE
95.2
87.2
73.4
31.5

4.8
12.8
26.6
68.5

Total de C
Magnitud relativa
11
18
30
102

GRAFICA DE VAN DEEMTER

Cuando se traza la grfica de la altura del plato terico en funcin de la velocidad lineal [H = f(u)]. Se obtiene una
grfica como la que se muestra en la Figura 32que es una hiprbola no simtrica, mostrando un mnimo en la curva que
indica una velocidad ptima que provee la mayor eficiencia y la menor altura de plato. Es lgico asumir que la
cromatografa debera llevarse a cabo a la velocidad ptima representada ya que por lo tanto tendramos al menor
ensanchamiento del pico. Si bien, si se incrementa la velocidad de la fase mvil el tiempo de anlisis disminuir; as como
se aprecia, existe un compromiso entre el tiempo y eficiencia que se debe de considerar en cada anlisis en particular.

Figura 32. Grfica de la Ecuacin de van Deemter.

Las implicaciones prcticas de todo lo expresado anteriormente se reflejan en:

-

Seleccin del gas acarreador

Seleccin del dimetro de columna y espesor de pelcula. Con respecto a esto, como ya se coment antes a
menor radio y espesor de pelcula, el factor de ensanchamiento de banda debido a la transferencia de masa
disminuye, sin embargo en caso de disminucin de radio o de espesor de pelcula se tendra que utilizar
pequeas cantidades de muestra.

29

VIII.- INSTRUMENTACION

En cromatografa de gases, como ya hemos visto, el analito en forma gaseosa se transporta a travs de la columna
por medio de la fase mvil al cual se le conoce como GASE ACARREADOR. En cromatografa de particin lquido-gas,
la fase estacionaria es un lquido no voltil recubriendo o las paredes de la columna o sobre un soporte muy fino slido.

En general el sistema cromatogrfico de un cromatgrafo de gases consiste en:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

Sistema del Gas acarreador

Inyector
Columna
Horno
Detector
Sistema de registro de resultados

El esquema simplificado lo podemos observar en la siguiente figura (Figura 33):

Inyector

Gas acarreador
Columna cromatogrfica
y horno

Detector

Sistema de adquisicin
y manejo de datos

Figura 33. Diagrama esquemtico de un cromatgrafo de gases.

La forma general de trabajar del cromatgrafo consiste en que una muestra voltil, lquida gaseosa o disuelta en un
disolucin sea inyectada a travs de un disco de goma a un inyector, en el cul rpidamente se evapora. Este vapor es
arrastrado a travs de la columna por el gas acarreador, el cual puede ser He, N2 u O2, donde los analitos son separados
llegando a un detector donde se observan su elucin de sta, dando una respuesta proporcional a la cantidad de muestra
que se inyect de cada uno de los analitos.

COLUMNAS
Actualmente la mayora de los anlisis se realizan utilizando largas y estrechas columnas denominadas como
tubulares abiertas, y ms conocidas como columnas capilares.

30

Las columnas capilares, en general estn constituidas de tres partes:

a) Tubera
b) Recubrimiento de la tubera
c) Fase estacionaria

Tubera de slica
Fase estacionaria

Dimetro interno
Recubrimiento de poliimida
Espesor de la fase estacionaria

Figura 34. Secciones y dimensiones de una columna capilar para cromatografa de gases.

Algunas denominaciones comunes para las columnas se refieren a la forma en que se encuentra colocada la fase mvil en
la ella (Figura 35):
a) Columna WCOT (del ingls Wall-coated open tubular): La fase estacionaria lquida se encuentra recubriendo
la pared de la columna.
b) Columna SCOT (del ingls Support-coated open tubular): La fase estacionaria lquida se encuentra soportada
sobre un slido que est adherido a la columna. No est disponible para las que estn hechas de slica fundida.
c) Columna PLOT (del ingls Porous-layer open tubular): La fase estacionaria es slida y se encuentra
recubriendo la pared interior de la columna.

Fase estacionaria lquida

Soporte slido recubierto

por la fase estacionaria

Partculas de fase
estacionaria slida

Figura 35. Denominaciones de columnas capilares.

31

a) Tubera y recubrimientos de la tubera

La tubera ms popular es de silica fundida (SiO2), la cual fue introducida en 1979 siendo aproximadamente el 95 %
de las que se utilizan hoy en da. La silica fundida es flexible y fcil de manejar, est hecha por la reaccin del SiCl4 y
vapor de agua en la flama. El producto, SiO2 puro, contiene aproximadamente 0.1 % de grupos hidroxilo o silanoles en
la superficie y menos de 1 ppm en impurezas (Na, K, Ca, etc) la cual constituye que sea qumicamente muy inerte. Si bien
los grupos silanoles remanentes pueden interaccionar con compuestos capaces de formar puentes de hidrgeno tales como
los que contienen grupos tioles (-SH), hidroxilo (-OH), amina (-NH) o cidos carbxilicos (-COOH). Est interaccin
resulta en el coleo o disminucin del tamao de los picos.
La tubera de silica fundida es desactivada utilizando agentes silanizantes. El proceso elimina los grupos silanoles
convirtindolos en grupos relativamente no polares y no reactivos. Aun despus del mas riguroso proceso de
desactivacin, algunos silanoles aun se encuentran presentes y contribuyen a la actividad residual de las columnas.
La minimizacin del nmero de grupos silanoles es la meta de la desactivacin. Conforme la columna envejece la fase
estacionaria tambin, los grupos silanoles (Si-OH) quedan expuestos y el coleo de los picos se incrementa, este proceso
no es fcilmente reversible. En las columnas capilares la pared delgada esta sujeta a rpida corrosin y ruptura a un en
atmsfera de laboratorio por lo que se aplica por fuera una cubierta de poliimida (plstico capaz de resistir 350C); esta
proteccin se va oscureciendo con el tiempo, pero protege a la silica de la humedad atmosfrica. Los dimetros de estas
columnas son generalmente de entre 0.10 a 0.53 mm con largos de 15 hasta 100 metros.

b) Fase estacionaria
Existen dos decisiones importantes al llevar a cabo un anlisis en cromatografa de gases: la seleccin de la mejor
columna (la mejor fase estacionaria) y la seleccin de la temperatura de la columna, siendo la ms importante la primera
de ellas.
Si bien es cierto que se debe de tener un criterio cientfico en la seleccin de la mejor fase estacionaria, se debe de
admitir (de acuerdo con McNair y Miller) que hay otras formas de realizar esta seleccin. La primera y ms fcil es el
preguntarle a alguien que sabe y/o que tiene experiencia con las metodologas de cromatografa de gases, esta persona
puede estar mucho ms cerca de lo pensamos.
En el mercado se disponen de varias fases estacionarias. Para escoger una fase lquida para un problema
determinado se debe de tomar en cuenta la regla de que lo semejante disuelve a lo semejante. As, columnas no polares
son mejores para solutos no polares, columnas de polaridad intermedia son mejores para solutos con polaridad intermedia,
y finalmente, columnas con fases fuertemente polares son mejores para solutos fuertemente polares.

32

Tabla 5: Polaridad de solutos.

No polar
Hidrocarburos saturados
Hidrocarburos olefnicos
Hidrocarburos aromticos
Halocarburos
Mercaptanos
Sulfuros
CS2

Polaridad intermedia dbil

Eteres
Cetonas
Aldehidos
Esteres
Aminas terciarias
Nitrocompuestos ( sin tomos -H)
Nitrilos (sin tomos - )

Polaridad intermedia fuerte

Alcoholes
cidos carboxlicos
Fenoles
Aminas primarias y secundarias
Oximas
Microcompuestos (con tomos -H )
Nitrilos (con tomos -H)

Fuertemente polares
Polihidroxialcoholes
Aminoalcoholes
Hidroxicidos
cidos poliprticos
Polifenoles

Cientos de lquidos se han utilizado como fase estacionaria, los nicos requerimientos son baja presin de vapor,
estabilidad trmica, y si es posible una baja viscosidad (rpida transferencia de masa).
Veamos como ejemplo que nos ilustran el efecto de polaridad en la selectividad. Para que una fase estacionaria sea
efectiva, el lquido seleccionado debe interaccionar con los componentes de la muestra a ser analizada. Para escoger una
fase lquida, se debe tomar en cuenta la regla de que lo semejante disuelve a lo semejante. As, columnas no polares
son mejores para solutos no polares, columnas de polaridad intermedia son mejores para solutos con apolaridad intermedia
y finalmente, columnas con fase fuertemente polares son muy mejores para solutos fuertemente polares.

Al comparar fases estacionarias con polaridades extremas, el orden de elucin puede cambiar, vea el ejemplo de la
figura siguiente, donde la mezcla de compuesto cambia su orden de elucin si se utiliza una columna polar Carbowax
20M, y una no polar SE-30.
El problema del qumico es predecir el comportamiento de retencin para solutos, careciendo de un buen sistema
para especificar la polaridad.
A fin de establecer una escala de polaridad se puede utilizar lo que se conoce como el indice de retencin de
Kovats (I) el cual es una medida de la retencin relativa de un compuesto relativo a hidrocarburos (n-alcanos) a una
temperatura dada en una fase estacionaria en particular. Estos ndices normalizan las variables de los instrumentos de
forma que los datos de retencin pueden ser efectivamente comparados para diferentes sistemas cromatogrficos. El ndice

33

de retencin para un compuesto es calculado para condiciones isotrmicas utilizando la ecuacin siguiente:
log tr' (x) - log tr' (y)
I = 100y + 100(z - y)

log tr' (z) - log tr' (y)

Ecuacin 33

siendo tr = tiempo de retencin ajustado

x = compuesto de inters
y = n-alcano con y tomos de carbono eluyendo antes del compuesto x
z = n-alcano con z tomos de carbono eluyendo despus del compuesto x
Los n-alcanos tienen ndices de retencin que corresponden a sus tomos de carbono multiplicados por 100. Por
ejemplo:
n-C12H26 tiene I = 1200
n-C13H28 tiene I = 1300
as, un compuesto con I = 1225 eluye entre n-C12H26 y n-C13H26 pero ms cerca de n-C12H26 bajos las mismas
condiciones de prueba y columna.
Este ndice es til para comparar el comportamiento de dos columnas con la misma descripcin utilizada bajo las
mismas condiciones, y comparar el orden de elucin relativa de varios compuestos para una columna y
condiciones dadas.
Para compuestos que eluyen a tiempos de retencin prolongados, el uso de la ecuacin 9 puede llevar errores,
igual que en cuando se utilizan programas de temperatura, as en este ltimo caso se utiliza la ecuacin:
log tr(x) - log tr(y)
I = 100

log tr(z) - log tr(y)

Ecuacin 34

siendo tr = tiempo de retencin

x = compuesto de inters
y = n-alcano con y tomos de carbono eluyendo antes del compuesto x
z = n-alcano con z tomos de carbono eluyendo despus del compuesto x
en este caso se requiere especificar dimensiones de la columna, tipo de gas acarreador, flujo y programa de
temperatura.
Cuando una serie homloga de hidrocarburos es separada por cromatografa las fuerzas intermoleculares son
relativamente constantes, siendo la separacin controlada principalmente por la diferencia en la presin de vapor (como
reflejo de los puntos de ebullicin).
Las parafinas representan los estndares universales para establecer un ndice, pero otras series homlogas han
sido utilizadas en lugares donde se utilizan ciertos compuestos en particular.

34

FASES ESTACIONARIAS LIQUIDAS

A) Escualeno.- Se considera la fase con menor polaridad, es un hidrocarburo saturado de frmula, C30H62 si bien
su temperatura lmite superior es solo de 125C.
B) Apolano 87.- Con la frmula C87H176 ha sido sustituto del escualeno, si bien es ligeramente ms polar.
C) Polisiloxanos o silicones.- Los polisiloxanos sustituidos tienen buena estabilidad trmica. Se considera que
tienen la mayor resistencia al abuso, y por lo tanto, un mayor tiempo de vida.
Este tipo de fases estacionarias se distinguen por tener un esqueleto lineal que alterna silicio y oxgeno con dos
grupos funcionales enlazados a cada silicio (Figura 36).

[ Si
R

R
O

Si O
R

]n

Figura 36. Esqueleto de polisiloxanos.

......Los grupos funcionales que generalmente se utilizan son: metil (CH3-), fenil (C6H5-), cianopropil (CH2CH2CH2CN) y trifluoropropil (-CH2CH2CF3).
Estos grupos se utilizan en varias cantidades y combinaciones a fin de impartir una separacin especfica
caracterstica a cada fase estacionaria. Los grupos funcionales NO se adicionan al esqueleto en forma irregular, sino en
una forma semiordenada.
La mayora de las sustituciones estn hechas por bloques que se van repitiendo con cierta frecuencia. El nmero
total de cada bloque est regulado precisamente a fin de mantener las propiedades del polmero.
La fase con metil substituido al 100% es la ms elemental sustitucin del polisiloxano. Las dems fases son
mezclas que contienen una parte sustancial sustituida con metilos.
Las mezclas comunes son:
a) fenil-metil
b) Cianopropil-fenil-metil
c) Cianopropil-metil
d) Trifluoropropil-metil

Las descripciones de la fase estacionaria proveen informacin acerca del tipo y cantidad de sustitucin del
esqueleto de polisiloxano.
Los nombres para los fabricantes con frecuencia no tienen un significado real.
Las fases de polisiloxanos usan el porcentaje de substitucin para designar la estructura de la fase
-

5% fenil-metil-polisiloxano.- Un 5% de los grupos substituidos son fenilos, el 95% restante son metilos. Una
forma abreviada de nombrarla sera una fase de fenil al 5% (5% fenilos). Si no se dan otras indicaciones se
supone que los otros grupos son metilos con el porcentaje que complete el 100%.
35

]x [

Si

CH
O

Si
CH

] 1 -x

x = 0 .0 5
Figura 37. 5% fenil-metil-polisiloxano.

Polisiloxano-cianopropil-fenil.- Cianopropilos y fenilos van separados, pero enlazados al mismo tomo de

silicio; el cianopropil NO va enlazado al fenilo. Por una fase 6% cianopropil-fenilmetil polisiloxano, tiene un
cianopropil enlazado al 3% de los sitios de silicio y 3% de fenilo, con un 94% con metilos.
CN

Si

0 .0 6

CH
O

Si
CH

0 .9 4

Figura 38. Polisiloxano con cianopropilfenil.

Aproximadamente 1% de los tomos de silicio del esqueleto tiene un grupo vinilo utilizado para enlazado y
entrecruzamiento, pero este no se toma en cuenta.

a)

b)

[
[

CH 3
Si

] [
m

Si

CH 3

CH 3

CH 3

CH 2 CH 2 CF3

Si

CH 3

] [
m

CN

c)

CH 2 CH 2 CH 2 CN

Si

Si

CH 3

0.1

CN

] [

0.9

Si

CN

Figura 39. Otras fases estacionarias. a) cianporpil,b) trifluoropropil, c) (biscianopropil)0.9 (cianopropilfenil)0.1

36

Fases estacionarias de bajo sangrado son tpicamente polisiloxanos modificados adicionando un fenilo en el
esqueleto del polisiloxano estndar ( Figura 39).

Si

Si

Figura 40. Fase estacionaria de bajo sangrado o aryleno.

Estas columnas se disean a fin de que sean equivalentes a las comnmente utilizadas por ejemplo DB-5 a DB5MS; ambas con separaciones muy similares, pero no exactamente iguales, si bien generalmente las diferencias en
separacin son insignificantes.
D) Polietilenglicoles .
Otra fase estacionaria comn es el polietilnglicol (PEG) (Figura 41)
HO

[CH

O CH 2 O H
n

Figura 41. Fase de polietilnglicol.

Las fases PEG tienen caractersticas nicas no mostradas por los polisiloxanos, la mayor desventaja de las fases
estacionarias PEG es su extremada sensibilidad hacia el oxgeno, especialmente a elevadas temperaturas, la presencia de
oxgeno en el gas acarreador causa rpida destruccin de la mayora de las fases estacionarias de columnas capilares,
siendo ms susceptibles con las fases de PEG.
El peso molecular promedio del polmero generalmente esta dado como nmero en el nombre. Por ejemplo:
Carbowax 20M tiene un peso molecular promedio de 20,000.

E) PLOT
Son polmeros porosos que generalmente son sostenidos por algn tipo de enlace con la tubera de slice.
Fases como xido de aluminio (almina), mallas moleculares y una serie de polmeros porosos (poraplot, por ejemplo)
estn disponibles.
Para este tipo de columnas el mecanismo de separacin involucrados es el mecanismo primario de
separacin, ( en PEG y polisiloxanos el mecanismo principal es la particin). Trabajan bien para hidrocarburos ligeros,
gases sulfurados, compuestos voltiles, dado que son muy retentivas.

37

Tabla 6.Polaridad de las fases estacionarias

Orden creciente de polaridad
100 % Metil
5% Fenil
6% Cianopropilfenil
20% Fenil
35% Fenil
14% Cianopropilfenil
50% Fenil
65% Fenil
40-50% Trifluoropropil
50% Cianopropilfenil
Polietilenglicol (PEG)
50% Cianopropil
80% Cianopropil
100% Cianopropil

EQUIVALENCIAS DE FASES ESTACIONARIAS

Aunque la mayora de los fabricantes tienen un amplio control de las sntesis de sus fases estacionarias
desde el inicio hasta el final y en la desactivacin de la tubera de slica fundida.
Una columna de una fase y tamao puede ser diferente de un fabricante a otro, si bien en general son
insignificantes, debe tenerse cuidado en comparar columnas, ya que algunas con nombres similares son muy diferentes.

38

Tabla 7.COLUMNAS DE USO GENERAL (En funcin del incremento en la polaridad)

n

ALLTECH

CHROMPACK

HP

J&W

SPB- Octyl
SPB-1

---AT-1

SPB-5

QUADREX

RESTEK

SGE

---CP-sil 5CB

---HP-1,
Ultra-1

---DB-1,
DB-1ht

---007-1

---RTx-1

---BP-1

AT-5

CP-sil 8CB

SPB-1301
SPB-20
SPB-35
SPB-1701
SPB-50

------AT-35
AT-1701
AT-50

---------CP-sil 19CB
----

HP-5
Ultra-2
HP-1301
------HP-1701
HP-50, HP-17

DB-5

007-2

RTx-5

BP-5

DB-1301
---DB-35
DB-1701
DB-17

007-1301
007-7
007-11
007-1701
007-17

RTx-1301
RTx-20
RTx-35
RTx-1701
RTx-50

---------BP-10
----

PAG
Nukol

---AT-1000

---CP-wax 58CB

---HP-FFAP

---DB-FFAP

---007-FFAP

---Stabilwax-DA

---BP-21

SUPELCOWAX
10

AT-wax

CP-wax 52CB

HP-INNO wax
HP-wax
----------

DB-WAX

007-CW

Stabilwax

BP-20

SP-2330
SP-2380
SP-2340

AT-silar
-------

CP-sil 84
---CP-sil 88

DB-23
-------

007-23
-------

RTx-2330
RTx-2330
RTx-2330

BPX-70
-------

NONBONDED
/ PACKED
COLUMN
PHASES
Escualeno
SE-30,
SP-2100,OV-1,
OV-101
SE-54, SE-52,
OV-73
---OV-7
OV-11
OV-1701
OV-17,
SP-2250
Pluronics F68
SP-1000,
OV-351
Carbowax 20M
SP-2330
---SP-2340.
OV-275

39

COLUMNAS DE USO ESPECIAL

SUPELCO

ALLTECH

CHROMPACK

HP

J&W

QUADREX

RESTEK

SGE

Pretocol 50.2
Pretocol DH

---AT-100

PONA
----

---DB-Petro100

Pretocol
DH150
Petrocol CH
Octyl
SPB-1 Thin
Film
SPB-1 TG
SPB-1
SULFUR

----

Escualeno
CP-sil PONA
CB
----

-------

PONA
----

----

007-1-50-0.5F
007-01-1000.5F
----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

---AT-sulfur

-------

-------

DB-1HT
----

400.1HT
----

-------

HT-5
----

Enviroment
---al

----

HP-5 MS

----

XTI-5

BPX625

PTE-5
VOCOL

DB-5-625
DB-5MS

CP-Sil 13CB

HP-624

DB-5-624
DB-502.2
DB-VRX

007-624

RT-624

BPX624

007-502
---007-624
007-502
007-608

RTx-502.2
RTx-Volatiles
RTx-Amine
RTx-624
RTx-502.2
RTx-volatiles
----

Pretoleum

AT-624

HP-VOC
PTA-5
SPB-624

---AT-624

---CP-Sil 13CB

---HP-624
HP-VOC

SPB-608

AT-pesticide

HP-608

Sup-Herb

----

CP-Sil 8CB
para pesticidas
----

---DB-624
DB-502.2
DB-VRX
DB-608

----

----

----

----

-------

Chiraldex-A
Chiraldex-B
---AT-624
GLOT
----

-------------------

---------HP-624
-------

---Cyclodex-B
---DB-624
-------

---------007-624
-------

---Rt-DEX m
---Rtx-624
-------

Cyndex-B
---BPX 624
----------

-------

---CP-wax 51

-------

---CAM

-------

---Stabilwax DB

-------

----------

---CP-sil 88

----------

---DB-Dioxin
----

---007-dioxin
----

----------

----------

Food &
Pharmaceutical

-DEX
-DEX
-DEX
OVI-G43
CLOT
Bentone 34/Dn
DP
SPB-PUFA
Carbowax
Amine
Omegawax
SP-2331
SP-2560

---BPX624

BP608

40

TCEP
SAC-5

-------

TCEP
----

-------

-------

-------

Rt-TCEP
----

-------

41

LMITES DE TEMPERATURA
El fabricante proporciona la informacin en el lmite superior como 325/350C
La primera es la temperatura llamada lmite isotrmico, esto es la temperatura en
que la columna puede ser expuesta por periodos indefinidos de tiempo; la segunda es la temperatura
lmite programada, la columna puede dejarse a esta temperatura constante de 10 a 15 minutos, si se
excede este lmite se daar la fase estacionaria. Generalmente abajo del lmite inferior no producen
dao permanente.
Tabla 8. Lmites de temperatura para algunas fases estacionarias comunes.

FASE
Polisiloxanos:
100% Dimetil
100% Dimetil (alta temperatura)
5% Difenil- 95% Dimetil
5% Difenil- 95% Dimetil (alta temperatura)
20% Difenil- 80% Dimetil
35% Difenil- 65% Dimetil
50% Difenil- 50% Dimetil
50% Difenil- 50% Dimetil (alta temperatura)
6% Cianopropilfenil- 94% Dimetil
14% Cianopropilfenil- 86% Dimetil
50% Cianopropilfenil- 50% Dimetil
50% Cianopropil- 50% Dimetil
35% Trifluoropropil- 50% Dimetil
50% Trifluoropropil- 50% Dimetil

*TEMPERATURA LMITE
-60 a 325/350C
-60 a 400C
-60 a 325/350C
-60 a 400C
40 a 290/310C
40 a 280/300C
40 a 280/300C
40 a 340/365C
-20 a 280/300C
-20 a 280/300C
45 a 220/240C
40 a 250/260C
45 a 300/320C
45 a 240/260C

Polietilnglicol:
PEG (WAX)
PEG tratado con cido (FFAP)
PEG tratado con base (CAM)

40 a 250/260C
40 a 250/260C
40 a 250/260C

* Por arriba del lmite son usualmente cerca de20C menos para df > 1m.

Fases enlazadas y entrecruzadas:

Conforme la columna envejece la fase estacionaria tambin, los grupos silanoles (Si-O-H)
quedan expuestos y el coleo de los picos se incrementa. A fin de reducir la tendencia de la fase
estacionario a un sangrado sta puede ser enlazada, es decir ligada covalentemente a la superficie
de slica de la columna y covalentemente entrecruzada a s misma.
Polmeros de cadena larga se utilizan en las fases estacionarias. A fin de mejorar la
estabilidad y la duracin de estas, las cadenas individuales se interconectan utilizando dos carbonos
como unidad de enlace. As, se obtiene una fase estacionaria muy grande de molculas polimricas
ramificadas (Figura 42). Esta cadena polimrica es tambin ligada a la superficie del tubo de slica

42

utilizando el mismo tipo de enlace de los carbonos. Esto ancla la fase estacionaria al tubo capilar y
previene que sta deje la columna. Este proceso es llamado enlazado.

CADENAS POLIMERICAS

ENTRECRUZAMIENTO

ENLACE

SUPERFICIE DE LA TUBERIA DE SILICA FUNDIDA

Figura 42. Enlace y entrecruzamiento de una fase estacionaria.

Despus del enlazado y entrecruzamiento de la fase estacionaria se requieren de ciertos

cuidados a fin de que estos enlaces que se formaron no sufran daos, generalmente el agua y los
disolventes orgnicos no daan ni el enlace ni el entrecruzamiento. Siempre que sea posible una
fase enlazada y entrecruzada debe de utilizarse. Su estabilidad y reproducibilidad a largo plazo
sern mejores. En casos de fases estacionarias no enlazadas se debe de tener un mayor cuidado a fin
de mantener su reproducibilidad y maximizar su vida til.

Tabla 9. Ventajas y desventajas de las columnas

capilares frente a columnas empacadas.

1.- Mayor resolucin

2.- Menor tiempo de anlisis
3.- Mayor sensibilidad
4.- Menor capacidad de muestra

SANGRADO DE LA COLUMNA
Toda columna muestra una capa base que es causada por la elucin de los productos de degradacin
de la fase estacionaria; estos productos estn siempre presentes y no son necesariamente, un signo
de una columna daada; ni de la calidad de sta.
Utilizando un detector de espectrometra de masas, se observa para cada columna un tipo de
espectro caracterstico.
La apariencia del sangrado de la columna es mejor ilustrado por un perfil de ste, el cual se
obtiene haciendo una corrida cromatogrfica con programa de temperatura sin realizar una
inyeccin (ver Figura 43).

43

325C

280C
100C

Figura 43. Perfil de sangrado de una columna cromatogrfica.

DIMENSIONES
DIAMETRO INTERNO.- el dimetro de las columnas de slica fundida varan entre 100 530 m
(0.10 0.53 mm). Si bien el nmero de platos tericos es inversamente proporcional al dimetro de
la columna (mayor N, menor r).
Las columnas de 100 m limitan la capacidad de la muestra por lo que no son muy apropiadas para
anlisis de trazas, sin embargo se obtiene eficiencias buenas y rpidos anlisis.
Las columnas ms comunes tienen dimetros de 250 m o 320 m, representan el mejor
compromiso entre resolucin, velocidad, capacidad de muestra y facilidad de operacin son las de
uso comn con detectores de espectrometra de masas.
Las columnas con dimetro mayores a 320m muestran baja resolucin pero tienen mayor
capacidad y facilidad de operacin, se pueden utilizar con inyectores on column y con inyectores
para estas columnas. Las columnas de 0.53 mm se les conoce como widebore o megaboro
Tabla 10. Efectos del dimetro de columna.

Dimetro interno
100 m
250-320 m
530 m

Resolucin Velocidad Capacidad Facilidad

Muy buena Muy buena Regular
Regular
Buena
Buena
Buena
Buena
Regular
Buena
Muy buena
Muy
buena

LARGO DE LA COLUMNA .- El nmero de platos, N, es directamente proporcional al largo de la

columna, L, a mayor largo, ms platos tericos, mejor separacin, pero la resolucin es solo
proporcional a la raz cuadrada del largo de la columna. Columnas de 25 30 metros son las
recomendadas para la mayora de las aplicaciones, son un buen compromiso entre resolucin y
velocidad del anlisis.

44

Tabla 11. Recomendaciones de largo de columna.

Largo de columna
Largas (60-100 m)
Corta (5-10 m)
Mediana (25-30 m)

Resolucin Velocidad
Alta
Lenta
Moderada
Rpida
Buen compromiso, buen
punto de partida

Los espectrmetros de masas se encuentran al vaco en la parte final de la columna dentro de estos
al vaco. El vaco ayuda a jalar el gas acarreador a travs de la columna. Presiones bajas son
requeridas para mantener un flujo de gas estable en el sistema CG/EM. Con columnas de 15 * 0.25
mm ID. Columnas que utilizan helio como gas acarreador operan alrededor de 1 psig. Si se desean
utilizar columnas de dimetros mayores en CG/EM se necesitar mayor largo de la columna.
ESPESOR DE LA COLUMNA.- Un espesor de 25 m es un buen punto de comienzo. Representa
un compromiso entre alta resolucin lograda con pelculas delgadas, y elevada capacidad con
espesores mayores. Para condiciones isotrmicas, la retencin (k) es directamente proporcional al
espesor de la pelcula. Los tiempos de retencin son afectados de forma similar, pero no en una
forma lineal como k.
En cuanto a la eficiencia y resolucin cuando se calculan apropiadamente el nmero de platos
tericos (con un pico k > 5) conforme se incrementa el espesor de la fase estacionaria (ver Tabla
11), si se
Tabla 12. Cambio en la eficiencia con el espesor de pelcula.

Espesor de pelcula
(m)
0.25
1.0
3.0
5.0

51 700
48 400
30 600
20 000

utilizan picos con k < 5, incorrectamente se calcula un incremento de la eficiencia del sistema.
Este comportamiento tiene un impacto directo en el uso de el espesor de la fase para mejorar la
resolucin de un pico.
Un mtodo para mejorar la resolucin es incrementar la retencin de los picos . Esto se puede lograr
disminuyendo la temperatura de la columna o incrementando el espesor de la fase estacionaria. Si se
utilizan el cambio en el incremento de tiempo de retencin ser necesario tomar en cuenta la
siguiente gua. Si los picos tienen valores de k menores que 5, el incremento en el espesor de la
pelcula incrementa la resolucin de los picos con tal que esto an tenga valores menores a 5 en la
pelcula de mayor espesor. Si los picos tienen valores de k mayores a 5, al incrementar el espesor
de la pelcula no se mejora o se decrece en la resolucin de los picos.
La mejora de resolucin de picos con ks menores que 5 incrementando el espesor de la pelcula es
mas una gua que una regla.

45

As, el mayor problema al utilizar esta va con picos con valores de k en un amplio rango, es que
mientras se mejora la resolucin de picos con valores bajos de k con frecuencia se reduce la de los
picos con valores elevados de k. Cuando esto sucede ser necesario ajustar las rampas de
temperatura a fin de reducir la prdida de resolucin de picos con elevados k.

GAS ACARREADOR
Las grficas de Van Deemter mostradas a continuacin (Figura 44) ilustran el efecto de la
velocidad de flujo en la altura del plato terico. Hay una velocidad lineal ptima (Uopt en cm/seg.).
Para un ensanchamiento de banda.

H
Nitrgeno

Helio

Hidrgeno

u
Figura 44. Curvas de van Deemter para gases acarreadores.

En columnas capilares en particular con pelculas de poco espesor el hidrgeno es el mejor

gas acarreador dado que se tiene un buen rango donde se logran anlisis rpido con una prdida
mnima en eficiencia.
En general se recomienda utilizar una velocidad lineal mayor que la ptima, este valor es
llamado la velocidad ptima del gas prctica ( OPGV, del ingls optimal practical gas velocity).
El valor de OPGV es donde se obtiene el mximo de eficiencia por unidad de tiempo, si
bien el valor de Uopt se obtiene la mayor eficiencia , en el rango de OPGV se sacrifica una pequea
cantidad de eficiencia con sustancial reduccin en el tiempo de retencin.
Se recomienda el uso de gases denominados de ultra alta pureza (UHP) y libres de oxgeno,
estos gases contienen menos de 1 ppm de oxgeno y 1 ppm de hidrocarburos, el criterio de seleccin
ms importante es la baja concentracin de oxgeno.
En general se recomienda no utilizarse cilindros que estn por debajo de 100 200 psi (700
1400 KPa) de presin, ya que los contaminantes en el cilindro comienzan a vaporizarse a
contaminar el gas.

46

INYECTORES
La meta principal de la inyeccin de muestra es introducir la muestra en la columna; sin
embargo se tienen que cumplir dos cosas:
El perfil de la muestra inyectada debe ser tan pequeo como sea posible, la cantidad
de muestra debe ser muy pequea, generalmente de 1g a fin de no sobrecargar la columna.
Existen dos tipos bsicos de inyectores; inyectores por vaporizacin e inyectores on
column.
Inyectores por vaporizacin
Bsicamente trabajan de la misma forma si bien cada fabricante tiene su propio diseo regulando la
presin de diferentes formas.
Un inyector de este tipo consiste en las partes mostradas en la Figura 45. Secciones de un inyector
de vaporizacin., donde se observa un cuerpo de metal que se calienta y donde se coloca por dentro
una tubera corta de vidrio llamado liner o inserto.
Controlador de flujo
o vlvula de aguja
Septa
Gas acarreador
(100 ml/min)
O-ring
Controlador de flujo
o regulador de presin

Solenoide abierto

Venteo del split

Liner o inserto

Regulador de presin
o vlvula de aguja
Columna

Figura 45. Secciones de un inyector de vaporizacin.

Generalmente el gas acarreador entra por la parte superior del inyector. Una jeringa se
utiliza para perforar la septa (o septum) e introducir la muestra en el inyector la elevada
temperatura del inyector causa que los componentes voltiles de la muestra rpidamente se
vaporicen, y sea arrastrada por el gas acarreador hacia la columna, donde el proceso de separacin
comienza .
La mayora de los inyectores tienen una purga la cual est localizada en la parte superior
del inyector inmediatamente por debajo de la septa, por donde sale el gas con un flujo entre 0.5 5
mL/min. (generalmente 13 mL/min.). Esta purga ayuda a minimizar la condensacin de no
voltiles o materiales de elevado punto de ebullicin provenientes de la parte expuesta de la septa.

47

La temperatura del inyector debe ser lo suficientemente elevada a fin de asegurar la

vaporizacin instantnea de la muestra , siempre que no se degrade la muestra.

Inyector en split
La ms antigua, simple y fcil inyeccin. El proceso involucra inyectar 1 L de la muestra
la cual es evaporada rpidamente pero slo una fraccin de ella (1 2%) en fase de vapor entra a la
columna (figura XXX) . El resto de la columna vaporizada junto con gran cantidad de gas
acarreador deja el inyector a travs de una salida del split. La cantidad de la divisin del flujo es
medida por la proporcin del split. (split ratio) el cual es el volumen de gas acarreado que entra en
la columna contra el volumen que abandona el sistema va la salida del split (split vent). Se
determina midiendo o calculando los flujos del gas que salen por la salida del split (split vent) y la
columna. Los splits son reportados como el flujo normalizado a la unidad.
Gas acarreador
(100 ml/min)

2 mL/min
98 mL/min
Solenoide abierto

Venteo del split

97 mL/min
Liner o inserto

Relacin de Split : 97:1

1 mL/min

Figura 46. Inyector de vaporizacin en modo de split.

La forma ms comn de hacer la medicin es mediante la frmula:

Relacin de split =

Flujo en el split (en mL/min)

Flujo en la columna (en mL/min)

Para esto:
Mida el flujo en el split (Fsplit mL/min.).
Inyecte CH4 o butano y registre el tiempo que tarda en dar la seal, este ser el tiempo
muerto (tM en segundos comnmente ).
Calcule la velocidad lineal promedio el gas acarreador .
u=

L
tM

u = velocidad lineal promedio (cm/seg.; cm/min.).

L = Largo de la columna en centmetros
tM = tiempo muerto (del metano o butano) en minutos o en segundos.

48

Convierta la velocidad lineal a velocidad de flujo (Fc) utilice el dimetro interior de la columna en
centmetros.
Fc (mL/min.) = U (cm/seg.) r2 (cm2) * 60 seg./min.
Fc (mL/min.) = u (cm/seg.) (di/2)2 (cm2) 60 seg./min.
Calcule el la relacin de split:

Relacin de split =

Fsplit (mL/min.)
Fc (mL/min.)

Una desventaja es en el anlisis de trazas, donde solo una fraccin de la muestra

entra a la columna, otra desventaja es la determinacin de molculas de alto peso molecular, de
forma que la muestra que entra a la columna no representa exactamente a la muestra inyectada.
BACKFLASH

Al expandirse la muestra en el inyector, ocupa varias veces su volumen original. La fuerza

de esta expansin puede ser muy largo generando con frecuencia una alta presin momentnea
mayor que la presin del gas acarreador en el inyector. Si el volumen final de la muestra vaporizada
excede el volumen del liner del inyector, algunos vapores fluyen fuera del liner, esto se conoce
como backflash, siendo los compuestos ms voltiles los ms susceptibles a este fenmeno. Dado
que el disolvente est en mayor cantidad en la muestra y que es generalmente el ms voltil, esto
hace que sea el ms susceptible de padecer el backflash llevndose a otros componentes voltiles de
la muestra.

DISCRIMINACION
El inyectores de vaporizacin es comn que no todos los analito estn vaporizados al
tiempo de ser introducidos en la columna, siendo ms completa para compuestos ms voltiles.
Dado que solo una porcin de la muestra entra a la columna en cantidades significantes, un
porcentaje diferente de cada uno de los compuestos entra a la columna; en mayor porcentaje los ms
voltiles que los menos voltiles. A esto se le conoce como discriminacin del inyector.

Inyeccin Splitess
Se utiliza el mismo inyector, pero la vlvula de split se cierra de inicio. La muestra se
diluye en un disolvente voltil (como hexano o metano) y se inyectan de 1 a 5 L (de hecho se
recomienda inyectar lentamente). La muestra se mezcla con el gas acarreador y se transporta a la
columna con un flujo de aproximadamente 1mL/min. La columna debe estar unos 40C (al menos
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10C) abajo del punto de ebullicin del disolvente, el cual se condensa al comienzo de la columna.
Los analitos son atrapados en el solvente en una banda estrecha lo que evita el problema de una
pobre inyeccin, este proceso se conoce como efecto del disolvente o atrapado del solvente.
PURGA CERRADA

Gas acarreador

Solenoide cerrado

Venteo del split

0 mL/min
Liner o inserto

1 mL/min

a)

PURGA ABIERTA

Gas acarreador
(30 ml/min)

2 mL/min
28 mL/min
Solenoide abierto

Venteo del split

27 mL/min
Liner o inserto

1 mL/min

Figura 47. Inyector Splitess. Modo del split a) cerrado, b) abierto.

Como gua el tiempo para abrir la vlvula del split, se recomienda cuando de 1 a 1.5
volmenes de gas acarreador ha barrido el inyector. Esto se calcula dividiendo el flujo de la
columna (Fc) y el volumen del liner del inyector (Vliner).

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Tiempo de barrido =

(Vliner mL)
Fc (mL/min.)

En general para aplicaciones comunes se ha encontrado que abrir la vlvula de la purga

entre 40 a 90 segundos es buen tiempo considerando que la meta en este tipo de inyeccin es
maximizar el tamao del pico del analito minimizando el frente del disolvente.
Otro mtodo alternativo para condensar solutos en una banda angosta al comienzo de la
columna es la llamada atrapamiento en fro (cold trapping).
La temperatura inicial de la columna es 150 C menor a la temperatura de ebullicin de los
compuestos de inters.
El disolvente y los solutos de menores puntos de ebullicin son eluidos rpidamente, pero las de
alto punto de ebullicin permanecen en una banda angosta, despus la columna se calienta
rpidamente a fin de eluir los compuestos de inters.

P e lc u la d e l d is o lv e n te

D is o lv e n t e

Figura 48. Efecto del disolvente en inyeccin splitess.

INYECTOR EN COLUMNA
En este mtodo la aguja de la jeringa se inserta de forma perfectamente alineada con la
columna (usualmente megaboro de 0.53 mm de dimetro) realizando la inyeccin dentro de la
columna.
Este inyector elimina problemas de backflash y discriminacin. La ventaja estriva en que
es mejor para anlisis de trazas y para buenas cuantificaciones.

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IX.- DETECTORES
Con pocas excepciones (de acuerdo a H. Mc Nair y J:M: Miller) la mayora de los
detectores utilizados en cromatografa de gases se inventan especficamente para esta tcnica. Las
mayores excepciones son el detector de conductividad trmica y el espectrmetro de masas.
Existen alrededor de 60 detectores que se han utilizado en cromatografa de gases.
Los detectores ms comunes se enlistan en la tabla siguiente :
Nombre
Detector de ionizacin de flama (FID)
Detector de conductividad trmica (TCD)
Detector de captura de electrones (ECD)
Detector de otro tipo de ionizacin
Detector de Fsforo/nitrgeno (NPD)
Detector de ionizacin de flama alcalina(AFID)
Detector de ionizacin termoinica
(TID)
Detector de fotoionizacin (PID);
Detector de ionizacin de Descarga (DID)
Detector de ionizacin de helio (HID)
Detector de otro tipo de emisin
Detector fotomtrico de flama (FPD)
Emisin atmica de plasma (AED)
Detectores electroqumicos
9. Conductividad electroltica Hall (HECD)
Otros tipos de detectores
10. Quimiolumiscencia
Detector de densidad de gases (GADE)
Detector de radioactividad
Espectrometro de masas (MS o MSD)
Infrarrojo de transformada de Fourier (FTIR)

Selectivo *
No
No
X
N, P, X

Aromticos
No
S, P
Metales, X, C, O
S, N, X
S
No
3
H, 14C
Yes
Yes

Cada tipo de detector tiene sus caractersticas particulares y lo que ms importante su lmite de
deteccin.

Figura 49. Lmites de deteccin para detectores de cromatografa de gases.

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VIII.- TOPICOS
1.- INSTALACION DE COLUMNAS DE CROMATOGRAFIA DE GASES
Pasos a seguir:
Enfre todas las zonas del equipo,
Verifique trampas de O2 y humedad,
Limpie inyector y detector si es necesario y arme de nuevo,
Reemplace sellos (o-rings, etc..)
Reemplace la septa,
Inspeccione la columna para probar que no haya dao o este rota.
Corte aproximadamente 10 cm en cada extremo de la columna,
Instale tuercas y frulas a cada lado de la columna.
Coloque la columna en los soportes dentro del cromatgrafo,
Moda las distancias exactas a que debe colocarse la columna hacia el inyector.
Establezca los flujos de columna, purga vlvulas de split,
Verifique el flujo en la columna haciendo inmersin de sta en un vial col solvente (acetona,
metano, alcohol isoproplico),
Ajuste la columna en el detector, con las medidas adecuadas.
Verifique fugas en detector e inyector, utilice un equipo de deteccin de fugas
Caliente las zonas del cromatgrafo.
Acondicione la columna a su mxima temperatura para estabilizar la lnea base,
Ajuste a la velocidad lineal adecuada,
Haga una inyeccin de la mmmmmmmm
2.- LIMPIEZA DE INSERTOS O LINERS
Si no estn muy sucios se pueden lavar con disolventes orgnicos
Utilice series de polaridad crecientes
Metanol cloruro de metilieno- penteno
Alcohol isoproplico-metileno tolueno
Agua - metanol- acetona hexano
Si estan muy sucias

Calentar a 550C en una mufla si son de cuarzo o borosilicato.

Lavar con mezcla 1:1:1 de cido flourhidrco: cido sulfrico : agua desionizada.
Remover.
-Coloque el liner en un recipiente con HCl 1N o HNO3 y djelo al menos 8 horas.
-Repita el procedimiento cambiando la solucin cida si sta se oscurece mucho
-Lave el liner con agua desionizada y despus con metanol,
- Seque el liner a 100 C
-En un frasco con tapn de tefln coloque el liner en una solucin al 10% de trimetilclorosilano o
dimetilclorosilano en tolueno,

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-Deje al lmenos 8 horas en el frasco bien sellado. Rote varias veces el frasco a fin de asegurar que
todas las partes del liner son expuestas a la solucin del silanizante.
-Lave con tolueno
-Lave con metanol
-Seque a 75-100 C

IX.- BIBLIOGRAFIA
Rood Dean; A Practical Guide to the Care, Maintenance and Troubleshooting of Capillary Gas
Chromatographic Systems; 3. Edit., 1999, Edit. Wiley-VCH Verlag GmbH., U.S.A.
McNair H. M.; Miller J. M.; Basic gas Chromatography; 1. Edic.; 1997; JohnWiley & Sons.;
U.S.A.
Harris D. C.; Quantitative Chemical Analysis; 5. Edic., 1999; Edit. W.H. Freeman and Company;
U.S.A.
Karger L.B.; Snyder R.L.; Horvath C.; An introduction to separation science; 1. Edic.; 1973; John
Wiley & Sons; USA.
Valcrcel C, M.; Gmez H. A.; Tcnicas Analticas de Separacin; 1. Edic.; 1988; Edit. Revert;
Barcelona, Espaa.

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