UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
MICROBIOLOGIA II
Integrantes:
Snchez Wladimir
Hernndez Jos
Villacrs Sebastin
David Valencia
Fecha: 26 de Enero de 2015
1. TEMA: Empleo de placas Petrifilm para el anlisis
microbiolgico de muestras de agua recolectada en la laguna
artificial de la Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE.
2. INTRODUCCIN
2.1 JUSTIFICACIN
El agua es esencial tanto para la vida de animales como de
seres humanos, frecuentemente acta como un vehculo para
la transmicin de microorganismo entricos, esto acurre cuando
la materia fecal alcanza fuentes de abastecimiento (Apella y
Araujo, 2004). La Organizacin mundial de la Salud (Ayres y
Mara, 1996) en sus guas para la calidad del agua establecen
que el agua es apta bacteriolgicamente para el consumo si no
posee
microorganismos patgenos de origen parasitario
intestinal. La presencia de microorganismos patgenos en el
agua es un riesgo que aumenta en las reas marginales de
mayor densidad poblacional o en zonas sin disponibilidad de
agua potable.
Los controles de la totalidad de los microorganismos hdricos
resgosos para la salud, son difciles de llevar a cabo debido a la
gran variedad de bacterias patgenas, a la complejidad de los
ensayos y a la presencia en baja concentracin de varias
especies agresivas (Apella y Araujo, 2004). Por esta razn, los
anlisis
bacteriolgicos
apuntan
a
la
bsqueda
de
microorganismos indicadores de contaminacin fecal y se
centralizan en la cuantificacin de coliformes. Este grupo est
integrado por enterobacterias, siendo Escherichia coli el
indicador universal de contaminacin fecal (Martnez, 2011).

2.2 OBJETIVOS
2.2.1 GENERAL
Emplear placas petrifil para el recuento de UFC de una
muestra de agua recolectada en la laguna artificial de la
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE.

2.2.2 ESPECFICOS
Determinar mediante la prueba de petrifilm la
presencia de E.coli y coliformes en una muestra de agua

2.3

recolectada en la laguna artificial de la Universidad de las

Fuerzas Armadas ESPE.

Realizar el conteo de UFC en cajas petrifilm

Interpretar los resultados obtenidos de la incubacin de
la caja petrilm
HIPTESIS

La muestra de agua recolectada en la laguna artificial de la

Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE posee indicadores de
contaminacin fecal, detectables en placa petrifilm.

.
2.4 MARCO TERICO
Existe una gran dificultad para determinar la presencia de
todos los organismos patgenos implicados en los procesos
de contaminacin ambiental. Dicha determinacin conlleva
varios das de anlisis, costos elevados y laboratorios
especializados. Frente a estas dificultades y a la necesidad
de hacer una evaluacin rpida y fiable de la presencia de
patgenos en el agua, se ha planteado la necesidad de
trabajar con organismos indicadores (Martnez,2011).
Los microorganismos indicadores son aquellos que tienen un
comportamiento similar a los patgenos (concentracin y
reaccin frente a factores ambientales y barreras
artificiales), pero son ms rpidos, econmicos y fciles de
identificar.
Las placas comerciales Petrifilm, estn diseadas para el
recuente de UFC, en muestras de aguas y alimentos, estn
conformadas por lminas delgadas con un medio de cultivo y
un agente solidificante soluble en agua. Pueden tambin
estar recubiertas por una pelcula de polipropileno para
atrapar el gas producido por algunas bacterias. Algunas
poseen indicadores de pH que colorean colonias para facilitar
su identificacin, as como una cuadrcula para hacer el
recuento de las UFC (Caballini, 2005).
Entre las ventajas que presentan sobre las placas Petri
tradicionales, estn que ocupan menos espacio, se
almacenan por ms tiempo y son fciles de manipularen el
laboratorio; las placas petrifilm para el recuento de bacterias
coliformes, poseen agar bilis rojo violeta, un agente
gelificante soluble en agua fra, un indicador de actividad de
la glucuronidasa y un indicador que facilita la enumeracin
de las colonias. Cerca del 97% de E. coli produce betaglucuronidasa, la que a su vez produce una precipitacin
azul asociada con la colonia. La pelcula superior atrapa el
gas producido por E. coli y coliformes fermentadores de
lactosa. Cerca del 95% de las E. coli producen gas,
representado por colonias entre azules y rojo-azules
asociadas con el gas atrapado en la Placa Petrifilm EC (3M,
2006).

3. MATERIALES Y MTODOS
3.1 MATERIALES
Micropipeta de 1000ul
Muestra de agua
1 Placa de Petrifilm para E.coli, Coliformes
Incubadora
3.2 METODOS
Para el muestreo se requiri tomar una pequea cantidad de
agua del estanque de los patos en un recipiente estril,
usando guantes para evitar contaminacin cruzada, posterior
a esto se debi encender el mechero y preparar el rea de
trabajo esterilizando y desinfectando, se tom 1 ml de
muestras con la micro pipeta de 1000L procediendo a
inocular la placa de Petrifilm en un rea plana, en la que se
hace que la cantidad de muestra colocada se cubra todo el
Petrifilm despus del cual se cubrir la muestra con el film
que es provisto en la misma prueba y se procedi a colocar
en incubacin por un periodo de 24 horas a 35 oC.
4. RESULTADOS Y DISCUSIN
En la muestra utilizada de agua de estanque (agua de patos de la
Universidad de las fuerzas Armadas ESPE) se obtuvo los siguientes
resultados en la placa petrifilm 3M para recuento de E. coli y coliformes
(petrifilm EC): ocho colonias azules con gas, que representan a E.coli
debido a que es capaz de crecer en medios conteniendo los nutrientes del
Violeta Rojo Bilis (VRB) y producir la beta-glucuronidasa, que reacciona con
un indicador (colorante) BCIG presente en la placa Petrifilm EC y que hace
que la colonia sea de color azul o prpura, 28 colonias rojas con gas que
segn la AOAC INTERNATIONAL y el U.S. FDA Bacteriological Analytical
Manual (BAM) los Coliformes son bacilos Gram negativos que producen
cido y gas a partir de la lactosa durante la fermentacin metablica y en
las placas Petrifilm EC producen cido que oscurece el color del gel de
rosado a rojo (Figura 1). El gas atrapado alrededor de las colonias de
Coliformes indica Coliformes confirmados y la ausencia de gas puede indicar
la presencia de Coliformes pero segn el mtodo 998.08 de la AOAC
internacional no es confirmado, por lo que no se le debe tomar en
consideracin. Debido a que E.coli es un coliforme el resultado final para
Coliformes confirmados es de 36 colonias.

Figura 1: Placa Petrifilm conteo E.coli, Coliformes

UFC
coloniasfactordedilucin
=
mL
mLplato
A simple vista la muestra de agua parece contaminada por la turbidez de la
misma, y calculando las UFC/mL se obtuvo 8 UFC/mL para E.coli y 36
UFC/mL de Coliformes y segn la norma INEN 1108 emitida en el 2011 para
el agua potable indica que el requisito microbiolgico para coliformes debe
ser < 1 UFC/100mL que significa que no se debe observar colonias de
coliformes por lo que se concluye que la muestra de agua esta contaminada
por coliformes confirmando lo observado a simple vista (Tabla 1).
Tabla 1: Conteo y resultados en Petrifilm E.coli y Coliformes
Caracterstic
a

Produccin
de gas

Numero
colonias

Color rojo

No

27

Si

Si

28

Si

36

Color azul
Color rojo
Color
azul

rojo

5. CONCLUSIONES

Microorganis
mo
Posibles
Coliformes
E.coli
Coliformes
confirmados
Coliformes
totales

UFC/mL
27
8
28
36

Mediante la prueba de Petrifilm se determin la presencia de E.coli,

Coliformes en muestra de agua.
Por medio del conteo en placa de Petrifilm se encontr en la muestra
de agua un total de 8 UFC/mL de E.coli, 28 UFC/mL de Coliformes
productoras de gas y 27 UFC/mL de Coliformes no productoras de
gas.

6. BIBLIOGRAFA
AOAC INTERNATIONAL method 991.14, emitido el 17 de marzo de 2014,
coliform and escherichia coli cunts in food. Resuperado el 24 de enero de
2015 de : http://www.longrunbio.com/uploads/soft/130814/1130Q4144244.pdf
Apella M., y Araujo P., (2004), Microbiologa del agua: Concentos bsicos,
Plataforma Solar de Almera, Recuperado de:
https://www.psa.es/webesp/projects/solarsafewater/documents/libro/02_Capi
tulo_02.pdf Consultado el: 24 de enero de 2015
Ayres R. y Mara D., (1996), Analysis of Wastewater for Use in Agriculture - A
Laboratory Manual of Parasitological and Bacteriological Techniques, OMS,
recuperado de:
http://www.who.int/water_sanitation_health/wastewater/labmanual.pdf?
ua=1 , Consultado el: 24 de enero de 2015
Cavallini, E. R. (2005). Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de
Laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica. Retrieved from
https://books.google.com/books?id=vwB0fgirgN0C&pgis=1
Departamento de Microbiologa 3M Espana, S.A., gua de interpretacin de
Placas para Recuento de E. coli y Coliformes recopilado el 22 de enero de
2015 de : http://multimedia.3m.com/mws/media/374964O/pec-interp-guidespa.pdf
Martnez J., (2011), Indicadores de contaminacin fecal en agua, REDIS,
Recuperado de:
http://tierra.rediris.es/hidrored/ebooks/ripda/pdfs/Capitulo_20.pdf,
Consultado el: 24 de enero de 2015
Norma Inen 1108, Junio de 2011 Requisitos para Agua potable recopilada el
23 de enero de 2015 de: http://isa.ec/pdf/NORMA%20INEN%201108%202011%20AGUA%20POTABLE.pdf
3M, (2006), Placas Petrifilm para el Recuento de E. coli/Coliformes,
Recuperado de:
http://jornades.uab.cat/workshopmrama/sites/jornades.uab.cat.workshopmr
ama/files/Petrifilm_guias.pdf Consultado el 24 de enero de 2015.