PONTIFCIA UNIVERSIDADE CATLICA DE GOIS

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM FARMCIA E QUMICA

FORENSE

REAGENTES UTILIZADOS NA DETECO DE MANCHAS DE SANGUE

Wilson Martins De Oliveira

Paulo Roberto Martins Queiroz
1 Licenciado em Qumica pela Universidade Catlica de Braslia. Aluno de Especializao
em Farmcia e Qumica Forense pela Universidade Catlica de Gois/IFAR.
2 Bilogo. Doutor em Biologia Animal pela Universidade de Braslia. Professor do
IFAR/PUC-GO. Endereo: IFAR Instituto de Estudos Farmacuticos. SHCGN 716 Bl B Lj
05 Braslia-DF CEP: 70770-732. e-mail: pqsilva@uol.com.br

RESUMO
Uma das principais evidncias biolgicas encontradas em local de crime sem dvida, o
sangue. Para identificar as manchas de sangue deixadas pelos possveis suspeitos ou
vtimas, os peritos utilizam testes com reagentes especiais nestas amostras, chamados de
testes de presuno. O presente estudo teve como objetivo mostrar as alguns tipos de
reagentes usados na deteco de manchas de sangue no local de crime. A anlise de
evidncia encontrada pelo perito possibilita a materializao do acontecimento. Amostras
de manchas localizadas em um local de crime so de grande importncia para a resoluo
do mesmo. Para testar esta hiptese foi feito um levantamento bibliogrfico sobre mtodos
de deteco de manchas de sangue, empregado em anlises forenses. Testes de presuno
so feitos em algumas manchas atravs de reagentes qumicos para a verificao de sangue
genrico. Em caso positivo, a amostra encaminhada para o laboratrio para ser analisada
e comparada entre as diversas tcnicas de pesquisa de sangue humano para a confirmao
da sua origem.
Palavras-Chave: sangue, deteco de sangue, teste de presuno.

ABSTRACT
The major biological evidence found at crime scene is undoubtedly the blood. To identify
the bloodstains left by the possible suspects or victims, experts use tests with special
reagents in these samples, called tests presumption. This study aims to show some types of
reagents used in the detection of blood stains at the crime scene. The analysis of evidence
found by the expert allows the materialization of the event. Samples of spots located in a
crime scene are of great importance for solving it. To test this hypothesis we reviewed the
literature on methods for detection of blood stains, used in forensic analysis. Tests are
made assumption in some spots through chemical reagents for checking blood generic. If
so, the sample is sent to the lab to be analyzed and compared between the various research
techniques on human blood to confirm their origin.
Keywords: blood, blood detection test, the presumption

INTRODUO

Uma grande variedade de produtos qumicos pode ser utilizada em testes

presuntivos para detectar sinais de amostra de sangue. Mtodos de deteco de sangue ou
so baseados na deteco de hemoglobina e seus derivados (teste cataltico) ou na deteco
de protenas e aminocidos (no covalentemente ligada s protenas). No entanto, o uso de
algumas substncias qumicas pode ter efeitos adversos e, tambm, tem mostrado
potenciais riscos sade do perito. Por exemplo, a benzidina tem propriedades
cancergenas (ALMEIDA, 2009).
Em diversos artigos tem-se discutido aquilo que o perito espera dos testes de
presuno para o diagnstico de sangue em local de crime, e sem dvida, o sangue um
dos mais frequentes vestgios encontrados em locais de crime, especialmente crimes contra
a pessoa. Pode parecer fcil apontar para uma mancha vermelha e dizer se tratar de sangue.
Caso a mancha seja contgua a uma leso aberta e hemorrgica de um cadver, no h
porque que duvidar de sua composio. Mas nem sempre assim que so encontradas as
manchas de sangue (CRDIAS, 2011).
Crimes violentos, infelizmente, acontecem todos os dias e um dos objetivos bsicos
da anlise da cena do crime pelo perito achar evidncias de sangue. As tcnicas de
investigao com recursos cientficos remontam ao sculo I, quando o romano Quintiliano
descobriu que um homem assassinou a prpria me depois de analisar vestgios de sangue

nas mos do culpado. A partir de ento muitos foram os avanos no conhecimento

cientfico que deram suporte s investigaes dos mais diversos vestgios (CHEMELLO,
2007).
Manchas de sangue esto presentes em quase todo local de crime contra a pessoa
como homicdio, infanticdio, aborto, leso corporal, maus-tratos e acidentes de um modo
geral. Diante de tais vestgios, possvel extrair muitas informaes que sero decisivas
para a investigao policial, como a compatibilidade entre volume sanguneo e o
ferimento, a dinmica do fato, a dosagem de algumas drogas, a identificao da vtima e/ou
suspeito, dentre outras possibilidades. Entretanto, para que tudo isso ocorra, necessrio
confirmar se uma determinada mancha, hematide, mesmo sangue (DIAS FILHO, 2010).
O sangue detectado em locais de crime, nas roupas usadas pela vtima ou pelo
suspeito, em veculos, ou em objetos apreendidos, uma das evidncias fsicas mais
importantes em investigaes criminais sendo, muitas vezes, decisivo para a resoluo do
inqurito policial. Se adequadamente coletado e preservado, o sangue encontrado pode
estabelecer uma forte relao entre o assassino, a vtima e a cena do crime. Na tentativa de
ocultar vestgios, os criminosos podem lavar as manchas, tornando-as invisveis a olho nu.
Contudo, o sangue latente pode ser detectado por meio de alguns reveladores qumicos,
tais como, a fenolftalena, benzidina e luminol, dentre outros reagentes. Com o
aperfeioamento das tcnicas forenses, gradativamente mais centradas na anlise
molecular, deve-se ter a preocupao de que os reveladores usados para deteco de
sangue no alterem a estrutura das molculas biolgicas, especialmente, o cido
desoxirribonuclico (ALMEIDA, 2009).
Essas possveis alteraes comprometem a evidncia fsica e, conseqentemente,
tm impacto negativo na investigao forense, especialmente, a longo prazo, pois muitas
amostras so armazenadas para testes de confirmao e genotipagem que sero executados
semanas ou meses aps sua coleta na cena do crime. Dessa forma, uma anlise detalhada
do impacto dos agentes reveladores sobre a integridade molecular do sangue em manchas
fundamental para uma boa prtica forense (ALMEIDA, 2009).
Alm disso, segundo Dias Filho (2010) vale ressaltar que o resultado positivo para
o teste colorimtrico, ainda que seja sangue, no necessariamente se trata de sangue
humano. Todos os vertebrados e alguns poucos invertebrados possuem hemoglobina como
metaloprotena responsvel pelo transporte dos gases respiratrios e, portanto, o sangue de
qualquer um daqueles organismos resultaria em cor avermelhada no teste. Da a presuno

do teste: o resultado positivo no descarta a possibilidade de ser sangue (humano ou no).

Dessa forma, tais recursos favorecem o questionamento de quais reagentes devem ser
usados no local de crime por despertar grande interesse na rea forense, favorecendo assim
o processo de deteco e anlises futuras dos vestgios. Alm disso, o perito deve avaliar
quais so os melhores reagentes para o diagnstico da mancha de sangue, para no
comprometer a amostra que ir seguir para o laboratrio.
A partir dessas informaes o objetivo desse trabalho foi descrever alguns dos
reagentes que so utilizados na prtica forense para a deteco e anlise de vestgios de
sangue encontrados em cenas de crime.

METODOLOGIA

Trata-se de uma reviso de literatura baseada em trabalhos cientficos que trataram

do tema em questo. Parte do material utilizado foi obtido em bases de dados, tais como,
Scielo, Bireme, Google Acadmico e artigos disponveis em sites de Universidades. Outra
parte do material utilizado foi obtido por meio de teses e monografias de mestrado e
doutorado disponveis na biblioteca da Universidade Catlica de Braslia. As palavraschaves utilizadas foram sangue, deteco de sangue e teste de presuno.

DESENVOLVIMENTO

O Sangue

O sangue o meio lquido que flui pelo sistema circulatrio entre os diversos
rgos transportando nutrientes, hormnios, eletrlitos, gua, resduos do metabolismo
celular e diversas outras substncias (SOUZA; ELIAS, 2006).
O sangue um tecido composto por plasma e componentes celulares como, por
exemplo, leuccitos, eritrcitos e plaquetas. Sua principal funo transportar oxignio
para os tecidos e remover o dixido de carbono (ALMEIDA, 2009).

Segundo Almeida (2009) a hemoglobina adulta contm quatro cadeias

polipeptdicas, cada uma com um grupo prosttico heme, responsvel pela colorao
vermelha dos eritrcitos (Figura 1).

Figura 1. Representao da estrutura protica da molcula de hemoglobina. Fonte:

CHEMELLO (2007).

O grupo heme sintetizado a partir da glicina. formado por um complexo anel

porfirnico IX e um tomo ferroso (Fe+2) conjugado. Est unido a cada uma das cadeias
polipeptdicas da hemoglobina por meio de uma ligao ao grupo R de um resduo de
histidina. A sexta ligao de coordenao do tomo de ferro em cada grupo heme
empregada para ligar o O2 (Figura 2) (ALMEIDA, 2009).

Figura 2 Complexo heme contendo um tomo de ferro ligado em sua poro

central. Fonte: CHEMELLO (2007).

De acordo com Almeida (2009) grupos heme em uma soluo oxigenada so

rapidamente oxidados da forma ferrosa (Fe2+), que liga reversivelmente ao O2, para a
forma frrica (Fe3+), que no se liga ao O2. A liberao do grupo heme da globina leva
oxidao do ferro e gerao da hematina (Figura 3). O grupo heme, sobretudo no estado
frrico, pode exercer uma falsa atividade enzimtica, participando de reaes de xidoreduo, tais como, na oxidao de molculas lipdicas (ALMEIDA, 2009).

Figura 3. Liberao do grupo heme da globina formando a estrutura molecular da

hematina. Fonte: ALMEIDA (2009).

Fora do organismo, o sangue est sujeito a uma srie de processos de degradao.

Com o passar do tempo e a conseqente oxidao da hemoglobina, o tomo de ferro muda
de heme para hemina ou hematina. Essa converso ocasiona a alterao da cor da mancha
de sangue de vermelha para marrom. No estado frrico, o grupo heme possui atividades
catalticas e capacidade de participar em reaes de oxidao e reduo como um grupo de
enzimas chamadas peroxidases. Essa atividade empregada como base dos testes
presuntivos para identificao de sangue (ALMEIDA, 2009).

TESTES PRESUNTIVOS

Aps averiguao da evidncia para identificar possveis manchas de substncia

hematide, so realizados exames para pesquisa de sangue genrico. Nestes testes so
aplicadas reaes de oxidao, altamente sensveis, que podem detectar traos de sangue
por meio de reaes de cor ou luminescncia (SAWAYA; ROLIM, 2003).
Conforme Almeida (2009) os testes presuntivos para deteco de sangue, tambm
chamados testes de orientao, tm como princpio uma reao de oxidao de uma
substncia (indicador) por um agente oxidante, catalisada na presena de sangue.
Segundo Mesquita (2010) exames presuntivos de sangue so geralmente catalticos,
envolvem o uso de agente oxidante como o perxido de hidrognio e um indicador que
muda de cor (ou luminescente), o qual sinaliza a oxidao catalisada pela hemoglobina
como se fosse uma enzima peroxidase. Este comportamento de peroxidase da hemoglobina
foi descoberto em 1863 pelo cientista alemo Schnbein. Desde ento, inmeros testes de
presuno foram elaborados.
Do total de reagentes que existem, apenas um pequeno nmero tem interesse
prtico no campo da cincia forense. Os reagentes aqui apresentados so: Reagente de
Kastle-Meyer, reagente de benzidina e luminol.

FENOLFTALENA (reagente de Kastle-Meyer)

A fenolftalena mantm-se incolor em solues cidas e torna-se cor-de-rosa em

solues bsicas. A sua cor muda a valores entre pH 8,2 e pH 9,8 (RODRIGUES, 2011).
De acordo com Delecave (2011) a fenolftalena um indicador de pH e reage
quando em contato com substncias de carter bsico como o sangue, que ligeiramente
bsico e fica com uma cor rosa. Mas se a substncia for cida ou neutra, nada acontece.
Portanto, a fenolftalena no reage apenas com sangue, mas com qualquer substncia de
pH bsico, como sabo em p, por exemplo. Para aumentar a preciso, o teste de

identificao de sangue conhecido como teste de Kastle-Meyer tambm tem gua

oxigenada em sua composio (DELECAVE, 2011).
O perxido de hidrognio H2O2(aq)(gua oxigenada) usado como catalisador para
acelerar a reao que muda de cor sinalizando que houve a oxidao (DOREA;
STUMVOLL; QUINTELA, 2005).
Apesar deste exame apresentar resultados falso positivos, isso no tem ocorrido
com outros fluidos corpreos. Esse teste no to sensvel quanto o luminol, contudo,
detecta o sangue mesmo que tenha sido diludo de 1:10.000 e no carcinognico
(VIRKLER; LEDNEV, 2009).
O reagente de Kastle-Meyer constitudo por uma mistura de substncias. Um
exemplo de proporo seria 0,1 g de fenolftalena, 2,0 g de hidrxido de sdio (sob a forma
de pastilhas ou lentilhas), 2,0 g de p de zinco metlico e 10 mL de gua destilada. Na
Figura 4 tem-se as reaes que ocorrem tanto no processo de produo do reagente como
nas que ocorrem quando ele aplicado na suposta mancha de sangue (CHEMELLO,
2007).

Figura 4: Representao das reaes relacionadas ao preparo do reagente de

Kastle-Meyer (A) e utilizao desse reagente em ensaios de orientao para a presena de
sangue (B). Fonte: DIAS FILHO (2010).

Dias Filho (2010) descreve quais so os fundamentos envolvidos nesse teste

presuntivo explicando que o resultado observado deve-se ao fato de ao se adicionar gua
oxigenada (perxido de hidrognio) a atividade cataltica das molculas de hemoglobina
entra em ao e decompe o perxido em gua e oxignio nascente. Esse ltimo reage com
a fenolftalena, transformando-a em sua forma oxidada (vermelha).
O produto de interesse o hidrognio nascente, que garantir a forma incolor da
fenolfatelna. Se a amostra for de sangue, esta ter, necessariamente, hemoglobina, a qual
possui a caracterstica de decompor o perxido de hidrognio (comportamento de
peroxidase) em gua e oxignio nascente. Ento, este oxignio promover a forma colorida
da fenolftalena, evidenciando ao perito que a amostra pode conter sangue (CHEMELLO,
2007).
LUMINOL (5-amino-2,3-dihidroftalazina-1,4-diona)

Outro produto qumico usado em procedimentos periciais o 5-amino-2,3-di-hidro1,4-ftalazinadiona, mais conhecido por luminol (Figura 5) um composto que, sob
determinadas condies, pode fazer parte de uma reao quimioluminescente. Uma das
formas de obt-lo a partir do cido 3-nitroftlico, conforme mostra a figura 6
(CHEMELLO, 2007).

Figura 5. Estrutura molecular da 5-amino-2,3-dihidroftolazina-1,4-diona, reagente

conhecido como luminol (Fonte: ASSUNO, 2009).

O luminol foi desenvolvido em 1929 por O. H. Albrecht e capaz de reagir com o

ferro presente no sangue. Quando entra em contato com essa substncia qumica, o sangue
brilha com uma cor azul-fluorescente. Com o uso de luz-negra o brilho pode ser visto mais
claramente (DELECAVE, 2011).

Figura 6. Processo de sntese qumica do reagente qumico luminol. Fonte:

CHEMELLO (2007).

Na cena do crime nem sempre h evidncias visveis de sangue. Algum poderia,

por exemplo, limpar o local a fim de encobrir o acontecido. Porm, como uma soluo a
esse fator limitante da atividade forense, o luminol reage com quantidades muito diminutas
de sangue. Sua sensibilidade pode chegar escala de nanogramas de vestgio, mesmo este
estando depositado em superfcies, tais como, azulejos, pisos cermicos ou de madeira, os
quais tenham sido lavados. Com a utilizao desse produto possvel a deteco de sangue
mesmo que j tenham se passado seis anos da ocorrncia do crime. A reao qumica
produzida no afeta a cadeia de DNA, permitindo o reconhecimento dos criminosos ou das
vtimas a partir do DNA recuperado da cena de crime. Por isso, ele recomendado para
locais nos quais h suspeita de homicdio e superfcies que, aparentemente, no exibem
traos de sangue (Figura 7) (CHEMELLO, 2007).

Figura 7. Exemplo de aplicao do luminol em um ambiente sem (A) e com a

aplicao do reagente (B). Fonte: HARRIS (2011).

De acordo com Albertin et al. (1998) alm do luminol, so necessrias para a

ocorrncia de quimioluminescncia um reagente oxidante como, por exemplo, perxido
(H2O2), oxignio (O2) e hipoclorito (HClO) e, normalmente, um catalisador (metais de
transio, por exemplo, o on do elemento ferro que est presente nos grupos heme da
hemoglobina).
Como desvantagem, o reagente apresenta baixa especificidade, gerando resultados
falso-positivos com peroxidases de plantas, ons metlicos como cobalto, cobre e ferro,
hipoclorito, algumas tintas esmaltadas e outros reagentes oxidantes (ALMEIDA, 2009).
A reao mostra-se mais eficiente em meio bsico, podendo ser feita em solventes
prticos (normalmente gua) ou dipolares aprticos (como o dimetilsulfxido - DMSO).
Fora do organismo, o centro metlico dos grupos heme presente na hemoglobina do sangue

oxida-se de ferro (II) a ferro (III) e este ltimo catalisa a oxidao do luminol pelo
perxido de hidrognio e, tambm, o mecanismo de decomposio do prprio perxido
(ALBERTIN et al., 1998).
De acordo com Chemello (2007) possvel, por meio da anlise do espectro
eletromagntico, identificar o comprimento de onda emitido pelo processo de
quimioluminescncia do luminol (aproximadamente 431 nm) quando da reao de
oxidao com o perxido de hidrognio.

Benzidina (Teste de Adler-Ascarelli)

A benzidina (4,4-diaminobifenil) o reagente que apresenta maior sensibilidade,

caracterstica fundamental para um teste de triagem. A reao de oxidao da benzidina em
meio cido resulta na formao de um intermedirio de colorao azul e, aps alguns
minutos, de um produto final de colorao marrom (Figura 8). A estabilidade do
intermedirio azul maximizada em pH 4,5, assim, a reao conduzida na presena de
cido actico. O teste realizado em dois estgios para reduzir a ocorrncia de resultados
falso-positivos (ALMEIDA, 2009).

Figura 8. Reao de oxidao da benzidina em presena do perxido de hidrognio

(ALMEIDA, 2009).

O uso da benzidina tem sido evitado em muitos laboratrios forenses devido ao seu
potencial carcinognico (BLUM; ESPERANA; ROCQUEFELTE, 2006). Em estudo
realizado por Pascual; Grifo (1999), resultados falso-negativos para o teste da benzidina
foram observados quando suco de limo foi adicionado a amostras de sangue. Isso pode ter

ocorrido devido presena de cido ascrbico presente no limo, o qual um forte agente
redutor.
Os testes de orientao so largamente utilizados para detectar sangue diludo ou
que no pode ser visto a olho nu. Embora sua utilidade seja inquestionvel, para decidir o
melhor reagente a ser utilizado aconselhado observar seus benefcios e limitaes,
considerando-se que podem ser obtidos: reaes com resultados falsos positivos,
sensibilidade em traos extremamente diludos, mas tambm muito importante observar
as limitaes para a tipagem de DNA (GAROFANO et al., 2006).
As tcnicas de investigao de presuno de sangue so de uso simples, apesar de
todas exigirem a utilizao de produtos qumicos na sua preparao estes processos so
elementares e os testes podem ser comprados em forma de kits (WEBB; CREAMER;
QUICKENDEN, 2006).

CONSIDERAES FINAIS

Pode-se comprovar que o xito da abordagem pericial depende, em grande parte,

das tcnicas que permitem a deteco da mancha de sangue para que a amostra siga para
um estudo mais detalhado nos laboratrios forenses.
Dos reagentes estudados neste trabalho, observa-se que o reagente de Kastle-Meyer,
reagente de benzidina e luminol apresentam os resultados mais confiveis de presuno
quando utilizados em campo pelos peritos. Entretanto, h que se atentar para as
desvantagens de cada reagente. Sabe-se que alm de serem txicos os reagentes usados nos
testes de presuno no so capazes de determinar a origem do sangue em questo, ou seja,
se humano ou no.
Mesmo sabendo-se que esses reagentes no sejam totalmente eficientes, so de
grande importncia nas investigaes policiais, em especial para a percia, tendo em vista,
que a correta utilizao destes testes que ir, com confirmaes laboratoriais mais
avanadas, constatar a natureza do sangue em um vestgio.
Alm disso, o emprego desses reagentes na prtica forense a possibilidade de uso
do sangue para outras anlises, tais como, a obteno de DNA para estudos de vnculo
gentico.

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