Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Espectrofotmetro UV-Vis
Espectrofotometra UV-Vis:
Fundamento
Se basa en que las molculas absorben las
radiaciones electromagnticas y a su vez que la
cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentracin. La espectroscopia de
absorcin UV-Vis involucra la absorcin de luz
UV/visible por parte de una molcula
promoviendo el paso de un electrn desde un
orbital molecular fundamental a un orbital
excitado. La separacin energtica entre estos
orbitales moleculares corresponde a las
longitudes de onda del visible.
Espectrofotmetro UV-Vis:
Instrumentacin
Fuente
Lmpara de deuterio e hidrogeno. (170-375 nm)
Lmpara de filamento de wolframio. (350-2500
nm)
Lmpara de arco de xenn. (200-1000 nm)
Espectrofotmetro UV-Vis:
Tipos de Instrumentos
Haz Sencillo
Espectrofotmetro UV-Vis:
Tipos de Instrumentos
Doble Haz en el Tiempo
DQ
Recalificacin
DQ
IQ
Evaluacin
Proveedor
Uso
Mantenimiento
Preventivo
OQ
OQ
PQ
Reparacin
PQ
Avera
Validacin
Traslado
Reubicacin
Uso
Consideraciones
Tipo de Fuente
Muestras
Tipo de detector
Consideraciones
Baja deriva
Resolucin
Precisin fotomtrica
Deriva fotomtrica
Luz parasita
Recoleccin de datos
Manipulacin de datos
Almacenamiento de datos
Salida de datos
E = medida- ref.
Aceptable: UV 1 nm ;Vis 3 nm
3 repeticiones scans de el mismo pico deberian estar entre +-0.5nm
Existen muchos estndares que se utilizan comnmente para verificar la
exactitud de longitud de onda de un espectrofotmetro La desviacin de la
longitud de onda puede causar errores en los resultados cuantitativos de la
lectura en el UV-Vis. En este control se verifica el grado de concordancia
entre
la longitud de onda seleccionada para la mxima absorbancia y la longitud
de onda de referencia. Con una misma cubeta, ajustar el cero (0) del
instrumento
con la solucin de cido perclrico al 10%. Se recomienda medir segn el
rango espectral una longitud de onda para el espectro UV y tres longitudes
de onda para el espectro Vis. Dependiendo del ancho de banda del equipo,
la mxima absorcin de la solucin de xido de holmio en cido perclrico
se detectar a las longitudes de onda indicadas en la tabla 2
Patrn
Patrn
Ventajas
Desventajas
Cristal de
xido de
holmio
Patrn
Picos a muchas
absorcin longitudes de onda de
slidos
280 a 2000 nm
Cristal de
xido de
didimio
Patrn
Picos a muchas
absorcin longitudes de onda de
slidos
400 a 1920 nm
Lneas de
emisin de la
lmpara de
deuterio
Patrn de
emisin
Afiladas lneas
espectrales presentes en
la fuente de luz U
Limitado a longitudes de
onda visibles (486,0 y
656,1 nm)
Lneas de
emisin de la
lmpara de
vapor de Hg
Patrones
de
emisin
Afiladas lneas
espectrales Cubre ambas
regiones ultravioleta y
visible
No comnmente
incorporado en el
instrumento
Oxido de
holmio en
cido
perclrico
Patron
Picos a muchas
absorcion longitudes de onda
liquido
de 240 a 650 nm
Escala fotomtrica
Exactitud
Precisin
= Am Aref
RSD =
Exactitud de 0,01 AU
6 mediciones de 0,006% w / v de
Dicromato de potasio en 235, 257,
313, y 350 nm debe ser inferior a
0,5% RSD.
EXACTITUD fotomtrica
Patrn
Ventajas
Desventajas
Cristal de
densidad
neutra
Perfil de absorbancia
muy llano en elrango
visible de longitud de
onda
Dicromato
potsico en
cido
perclrico o
sulfrico
Luz dispersa
Patrn
Ventajas
Desventajas
Ninguna
Disolucin de ioduro
potsico o
sdico (10 g/l)
Cortes a 260 nm
Usado para medir luz
dispersa a
200 nm o inferior
Tendencia a
descomponerse
Disolucin de cloruro
potsico
(12 g/l)
Cortes a 200 nm
Usado para medir luz
dispersa a
220 nm o inferior
Linealidad fotomtrica
Graficar Am Absorbancia medida vs Aref Absorbancia de referencia .
A de la serie de soluciones de dicromato de
potasio (0,02; 0,04; 0,06; 0,08 y 0,1 g L-1), en Sl de cido sulfrico 0,005 mol L-1 235, 257,
313, y 350 nm
r 0,999 Aceptable
El estudio de la linealidad fotomtrica permite establecer el rango de absorbancia en el que
el instrumento tiene respuesta proporcional a los cambios de concentracin. Para ello se
determina la respuesta del espectrofotmetro a diferentes concentraciones de una
sustancia que cumpla con la ley de Lambert-Beer. Se evala la linealidad fotomtrica
realizando lecturas de absorbancia de la serie de soluciones de dicromato de potasio (0,02;
0,04; 0,06; 0,08 y 0,1 g L-1), utilizando la solucin de cido sulfrico 0,005 mol L-1 para
realizar el ajuste a 0 de absorbancia del equipo. Las longitudes de onda a que se realizan las
lecturas sern: 235, 257, 313 y 350 nm. Calcular con una regresin lineal el coeficiente de
regresin (r). Linealidad El rango lineal dinmico de la medicin est limitada por la luz
parsita en alta absorbancia y por el ruido en absorbancia baja. Para mediciones de rutina
con muestras y los estndares de referencia qumicas relacionadas, la exactitud de la
cuantificacin de la muestra depende de la precisin y linealidad de las mediciones.
Tests. Una serie de soluciones de dicromato de potasio de concentracin 20, 40, 60, 80, y
100 mg / L en 0,005 M de cido sulfrico se puede utilizar para comprobar la linealidad del
sistema. En primer lugar, 0,005 M de cido sulfrico como referencia se escanea y despus
las soluciones de dicromato de potasio en 235, 257, 313, y 350 nm. Los valores de
absorbancia a la longitud de onda diferentes se representan frente a la concentracin de las
soluciones y los coeficientes de correlacin se calculan. Aceptacin. Coeficiente de
correlacin r 0,999.
Ruido
Se origina principalmente a partir de la fuente de luz y componentes
electrnicos. El ruido en la medicin afecta a la precisin en ambos
extremos de la escala de absorbancia
Un espectrofotmetro, tpicamente, tiene dos factores de ruido. El primero (ruido fotnico o Schott)
resulta de la distribucin estadstica de los fotones emitidos por una fuente de luz. Es proporcional a la
raiz cuadrada de la intensidad de luz. Cuando se miden muestras de baja concentracin con bajas
absorbancias, este factor puede evitar una medida exacta de la pequea diferencia entre dos niveles de
luz. El segundo factor es inherente a la
electrnica del instrumento (amplificador del detector, convertidor analgico-digital, etc.) y es
independiente de la intensidad medida. Este factor se convierte en significativo a altos niveles de
absorbancia, donde la seal de muestra es muy pequea. Puede minimizarse mediante un buen diseo.
El ruido afecta negativamente a la precisin de las medidas y, para una medida sola, puede introducir
tambin errores en la exactitud. Sin embargo, el ruido puede reducirse aumentando el tiempo de medida
(vea Promedio de tiempo en la pgina 67). uido
El ruido en la medicin de UV-Vis se origina principalmente a partir de la fuente de luz y componentes
electrnicos. El ruido en la medicin afecta a la precisin en ambos extremos de la escala de absorbancia.
Photon ruido de la fuente de luz afecta a la precisin de las mediciones de absorbancia baja. El ruido
electrnico de los componentes electrnicos afecta a la precisin de las mediciones de absorbancia alta
[8]. Un alto nivel de ruido afecta a la precisin de las mediciones y reduce el lmite de deteccin, haciendo
as que el instrumento menos sensible ruido
El ruido en la medicin de UV-Vis se origina principalmente a partir de la fuente de luz y componentes
electrnicos. El ruido en la medicin afecta a la precisin en ambos extremos de la escala de absorbancia.
Photon ruido de la fuente de luz afecta a la precisin de las mediciones de absorbancia baja. El ruido
electrnico de los componentes electrnicos afecta a la precisin de las mediciones de absorbancia alta
[8]. Un alto nivel de ruido afecta a la precisin de las mediciones y reduce el lmite de deteccin, haciendo
as que el instrumento menos sensible.
Tests. El aire es escaneado en el modo de absorbancia para 10 min. pico a pico el ruido se registra a 500
nm. La raz cuadrada media (RMS) de ruido se calcula. La medicin del ruido RMS es una medida de la
desviacin estndar de las seales de fondo. Espectrofotmetros modernos suelen estar equipados con la
funcin de estimacin de ruido. Para espectrofotmetros viejos , el ruido RMS puede estimarse
multiplicando el ms alto pico a pico de nivel de ruido en un factor de 0,7 (Figura 10,8). Aceptacin. El
ruido RMS normalmente debe ser inferior a 0,001 UA
Resolucin
Bibliografa
Principios de anlisis instrumental 5 edicin. Pg.
348
D.G. Holcombre, M.C. Boardman. Guidance on
equipment qualification of analytical instruments:
UV-visible spectro (photo)meters (UV-Vis),
September 2000
Chow C. Analitical method validation and
instrumental performance verification.Jhon Willey
& son. New Jersey. 2004
Clare J.L. (2005) Calibration of UV-vis
spectrophotometers for chemical analysis.
Accreditation and Quality Assurance 10: 283-288