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DE
METALES
PESADOS
EN
AGUAS RESIDUALES
INDICE
I
INTRODUCCIN
La contaminacin es uno de los problemas ambientales ms importantes que afectan a nuestro mundo y surge
cuando se produce un desequilibrio, como resultado de la adicin de cualquier sustancia al medio ambiente, debido a
los diferentes procesos productivos del hombre (fuentes antropognicas) y actividades de la vida diaria, causando
efectos adversos en el hombre, animales y vegetales; problemtica a la que el Per no es ajeno.
En nuestro pas entre los principales agentes contaminantes identificados tenemos: el plomo, mercurio, aluminio,
arsnico, magnesio, manganeso, hierro, cobre, cianuro. Agregndose a estos metales pesados el dixido de azufre,
y el cido sulfrico (R.M. N R.M. N 525-2005/MINSA).
II
III
OBJETIVOS DE LA INVESTIGACION
2+
2.1 OBJETIVOS
2.2 OBJETIVO GENERAL:
Disminuir la concentracin por Plomo en aguas residuales del callao mediante la
Fitoremediacin acutica con Salvinia minima.
2.3 OBJETIVOS ESPECIFICOS.
Determinar la eficacia de la Salvinia minima como mtodo de Fitoremediacin acutica de
plomo en un medio controlado.
Lograr el crecimiento, estabilizacin y desarrollo de Salvinia minima en un medio con
condiciones controladas, rico en nutrientes y metales pesados.
Cuantificar la concentracin de Plomo absorbido por Salvinia minima.
IV
HIPTESIS Y VARIABLES
3.1. HIPTESIS
Reduccin de la concentracin plomo mediante la tcnica de fitorremediacin utilizando
Salvinia mnima.
3.2. VARIABLES DE LA INVESTIGACIN
3.1.1. Variables dependientes
X =Acumulacion de Plomo en la biomasa de S . minima
+2
Consiste en que los compuestos presentes en el agua son adsorbidos e incorporados dentro de la
estructura de las plantas, logrando eliminar la contaminacin del agua y favoreciendo la
restauracin de la calidad de la misma.
En la rizofiltracin, los metales son adsorbidos y/o absorbidos por las races de las plantas. Se
basa exclusivamente en hacer crecer, en cultivos hidropnicos, races de plantas terrestres con
alta tasa de crecimiento y rea superficial para absorber, concentrar y precipitar metales pesados
de aguas residuales contaminadas
b) CONCENTRACIN DE PLOMO
El plomo es el metal pesado ms abundante en la naturaleza. Disminuye la fotosntesis,
disminuye la actividad de las enzimas y disminuye el transporte mitocondrial de los electrones.
Se sabe adems, que el plomo no es esencial para el crecimiento de las plantas y es considerado
txico para ellas a la concentracin de 30-300 g/g en sus tejidos.
A lo largo de los experimentos S. minima se expuso a diferentes concentraciones de plomo (CPb),
en un rango de 0.58 a 27.58 mgPb/l.
c) MECANISMO DE ADSORCIN Y ACUMULACIN INTRACELULAR DE
PLOMO
Las plantas tienen diferentes mecanismos de respuesta ante la presencia de compuestos txicos
como los metales pesados. Los procesos de destoxificacin que usualmente se conocen son la
adsorcin y bioacumulacin.
Las estrategias para evitar que los metales pesados aumenten en las plantas son diversas.
Extracelularmente se incluyen las micorrizas, la pared celular y exudados extracelulares. La
tolerancia puede adems involucrar la membrana plasmtica y el citosol. Dentro del protoplasto
existe una variedad de mecanismos potenciales, por ejemplo, para la reparacin de los daos de
estrs se ha involucrado a proteinas de choque trmico o a las metalotionenas, as como la
quelacin de metales por cidos orgnicos, aminocidos o pptidos, o su compartamentalizacin
a procesos metablicos para el transporte dentro de la vacuola.
d) BIOMASA
Se refiere a la cantidad en peso necesario de S. mnima para lograr la remocin de Pb +
en los experimentos.
e) INTENSIDAD LUMINOSA
-2 -1
Se expuso a diferentes intensidades luminosas: en rangos de 109 a 810 molm s .
f) TEMPERATURA
Se expuso a diferentes temperaturas: 23.44 a 32.26C .
Y F (Y
,Y 2 ,Y 3)
MARCO TERICO
3.1Antecedentes tericos vinculados a la investigacin
Los metales pesados tienen una densidad superior a 4,5 g/cm , y aunque algunos son
esenciales en el metabolismo de los seres vivos, como el cobalto, cobre, hierro, manganeso,
molibdeno, vanadio, estroncio, y zinc, en concentraciones muy elevadas stos son demasiado
txicos y pueden ocasionar daos irreversibles. Algunos otros como el cadmio y el mercurio son
muy txicos inclusive a concentraciones muy bajas. Los metales pesados adems tienden a
persistir en el ambiente, dada su resistencia a la degradacin qumica o biolgica (Salomons,
1995).
En cuerpos receptores de agua, los metales pueden originarse de fuentes naturales y/o
antropognicas. De los 59 elementos metlicos, 13 han sido incluidos en la lista de contaminantes
prioritarios por la Environmental Protection Agency (EPA).
Actualmente en Mxico, el agua se ha convertido en elemento central de la poltica
ambiental; su disponibilidad y distribucin condiciona la posibilidad de desarrollo de algunas
regiones del pas y su calidad es el factor determinante para la salud y bienestar de la humanidad.
Debido a ello, el aumento de la contaminacin en las aguas superficiales y marinas se est
convirtiendo en una amenaza de altas proporciones por la presencia de elevadas concentraciones
de metales pesados como el plomo, cadmio, cromo y nquel (Moreno-Snchez & Devars, 1999).
Esta problemtica se ha acrecentado debido al mal manejo de las descargas industriales y al
ineficiente tratamiento que se les da a las mismas.
Las enfermedades relacionadas con el agua contaminada son una tragedia humana que
cada ao cobra la vida de ms de 5 millones de personas, de acuerdo a la Organizacin Mundial
de la Salud (OMS: Organizacin Mundial de la Salud). Como resultado de esta problemtica, los
costos del cuidado de la salud causados por aguas contaminadas representan tres mil millones de
dlares anualmente a nivel mundial (Frenk, 1993). Adems La Organizacin de las Naciones
Unidas (ONU, 2006), ha reportado que el agua contaminada causa el 80% de las enfermedades
del mundo, la mayor parte de los que sufren estas enfermedades son nios menores a 5 aos de
acuerdo a la Organizacin de las Naciones Unidas para la Educacin, la Ciencia y la Cultura
(UNESCO, por sus siglas en ingls).
Fuente: NOM-001-ECOL-1996
(*) Medidos de manera total.
P.D. = Promedio Diario
P.M. = Promedio Mensual
N.A. = No es aplicable
(A), (B) y (C): Tipo de Cuerpo Receptor segn la Ley Federal de Derechos.
Selenio
Plata
Talio
Zinc
Otras fuentes importantes de contaminacin por metales en las zonas urbanas son: los
tejados metlicos, canalones y bajantes, tuberas metlicas oxidadas, tuberas de plomo viejas,
Electricidad, sigue siendo una forma de empleo. La ductilidad nica del plomo lo hace
particularmente apropiado para esta aplicacin, porque puede estirarse para formar un forro
continuo alrededor de los conductores internos.
Las fuentes de exposicin al plomo han cambiado en los aos recientes, con la
declinacin de la gasolina plomada y de la soldadura del plomo en latas de alimentos (Jacobs,
1996). Sin embargo, an existen otras fuentes que causan efectos negativos e impactos al
ambiente.
4.2.5. Fitorremediacin
La fitorremediacin puede definirse como una tecnologa sustentable que se basa en el
uso de plantas para reducir in situ la concentracin o peligrosidad de contaminantes orgnicos e
inorgnicos en agua, suelo y aire; a partir de procesos bioqumicos realizados por las plantas y
microorganismos asociados a su sistema de raz que conducen a la reduccin, mineralizacin,
degradacin, volatilizacin y estabilizacin de los diversos tipos de contaminantes (Flathman &
Lanza, 1998; EPA, 2000)
Adems, con base en los estudios de remocin de compuestos txicos por plantas
acuticas, se pueden considerar a los sistemas de fitorremediacin acutica como una alternativa
ecolgica y econmicamente viable, no slo para el tratamiento de los efluentes municipales sino
tambin para efluentes industriales (Olgu, 1994).
En la rizofiltracin, los metales son adsorbidos y/o absorbidos por las races de las
plantas. Se basa exclusivamente en hacer crecer, en cultivos hidropnicos, races de plantas
terrestres con alta tasa de crecimiento y rea superficial para absorber, concentrar y precipitar
metales pesados de aguas residuales contaminadas (Cunningham & Ow, 1996b; nez & Meas,
2004; Raskin & Salt, 1997).
4.2.7. Salvinia minima
4.2.7.1. Aspectos Generales
S. minima es un helecho acutico de libre flotacin. Pertenece a la familia Salviniaceae,
crece en aguas estancadas con aporte de materia orgnica, habitando en regiones tropicales y
subtropicales. Sus hojas flotantes son orbiculares de forma oval y su longitud oscila entre 0.4 a 2
cm (Figura 2). La superficie axial de las hojas flotantes est provista de vellosidades (tricomas).
Su crecimiento es rpido y la fragmentacin ocurre fcilmente, favoreciendo su amplia extensin
(Cook, 1974; Palacios & Rico, 1992)
Salvinia ha colonizado diversas partes del mundo, notablemente frica e India (Cook,
1974) y ha tenido una buena tasa de crecimiento bajo condiciones ambientales favorables.
S. minima resulta un modelo muy adecuado para su uso en fitorremediacin, dadas las
siguientes consideraciones: es de amplia distribucin geogrfica, soportando temperaturas de 3C
y 43C (Whiteman, 1991) su crecimiento es rpido (Cook, 1974) su velocidad especfica de
crecimiento es mayor que la de las lemnceas (Olgun & Snchez-Galvn, 2007).
Adems, se ha reportado que S. minima es hiperacumuladora de plomo y cadmio en
comparacin a otras macrofitas acuticas. En una investigacin para determinar las caractersticas
fsico-qumicas de S. minima, Snchez-Galvn y colaboradores (2008) demostraron que tiene un
2
rea superficial muy alta (264 m /g DW), la cual es similar a las reportadas para otras macrofitas
acuticas, como Salvinia herzogii (270 m/g) y Eichhornia crassipies (250 m/g) (Scheneider &
Rubio, 1999).
+
ETODOLOGIA
4.1 Condiciones de cultivo de la biomasa de S. minima
La biomasa de S. minima que sirvi de inculo para los experimentos fue cosechada
despus de 7 das de cultivo.
mg/lt
20
40
50
2.5
1.5
6.5
1.5
2.5
0.4
50
0.1
16.2
a) Sin lavar: La biomasa se sac de los contenedores donde creci y no se pas bajo la corriente
de agua de la llave.
b) Lavada: La biomasa se sac del medio anterior donde creci, se coloc en una coladera y
estuvo una vez bajo la corriente de agua de la llave durante 5 minutos.
de una microalga rizosfrica identificada como Lyngbya sp., la cual se adhiere a las pseudo-races
de la planta y a la parte posterior de la fronda.
Se determin clorofila de acuerdo a Lorenzen (1967), Golterman (1970) y Holm-Hansen
(1978), utilizando metanol como agente extractante. Las muestras fueron ledas en un
Espectrofotmetro marca Hach modelo DR-4000.
4.5 Unidades y condiciones experimentales:
Para el experimento en sistema por lote con plomo, las unidades experimentales fueron
lagunas de plstico (0.15 m ancho x 0.19 m largo x 0.09 m alto) conteniendo 1.5 litros de medio.
Se montaron 3 unidades experimentales por cada tratamiento, y una tina adicional de cada
tratamiento para cuantificar la clorofila al final del experimento. Como controles se utilizaron 2
unidades experimentales conteniendo solamente medio con plomo y sin planta, para poder
cuantificar el posible plomo adherido a las paredes de la laguna y/o precipitacin del metal.
Las lagunas se ubicaron en la cmara de crecimiento de 25C con una intensidad luminosa
2 -1
S. minima, que corresponde a 42.85 gbs/m de biomasa para el inculo, lavado y sin lavar, y la
cantidad de microalga que se desprendi de 20 gbh de planta en 1.5 l de medio.
4.5.2 Experimentos en sistema continuo:
Para realizar los experimentos en sistema continuo, se utilizaron lagunas de acrlico con
dimensiones de 1 x 0.1 x 0.5 m conteniendo un volumen til de 20 l. Las unidades
experimentales se expusieron a las condiciones de intensidad luminosa y temperatura de la planta
piloto de fitorremediacin (PPF) de la Unidad de Biotecnologa Ambiental del Instituto de
Ecologa. Se montaron 2 unidades experimentales por cada tratamiento. Cabe sealar que los
experimentos se realizaron a lo largo de varios meses, por lo que se monitorearon las dos
variables que afectaron los experimentos de manera ms importante, al estar expuestas las
lagunas a condiciones exteriores: la intensidad luminosa y temperaturas. Las lagunas fueron
alimentadas continuamente a travs de bombas peristlticas marca Cole-Parmer. Todos los
Al inicio del experimento, es decir antes de adicionar la planta al medio con plomo, se
tomaron las muestras correspondientes al tiempo cero (triplicados de 20 ml de medio), para
determinar la concentracin promedio de cada unidad experimental.
Nota: Todas las muestras de medio fueron tomadas con una pipeta automtica de 5 ml y
preservadas en frascos de plstico de 30 ml de capacidad.
4.6.2 Experimentos en sistema continuo:
Al final de cada experimento la biomasa se recolect de cada laguna con una coladera de plstico
y dejndola escurrir durante 5 minutos, posteriormente se coloc la biomasa en papel filtro de
poro medio doblado por la mitad durante 15 minutos para absorber el exceso de medio. Se pes
toda la biomasa para obtener el peso fresco total. Una vez obtenido el peso fresco, se tomaron 20
gbh para ser lavada con EDTA y agua desionizada al igual que en el experimento en sistema por
lote, y de igual manera se tomaron 20 ml de muestra por triplicados de cada lavado.
Posteriormente, la biomasa se sec en una estufa a 45C hasta obtener su peso constante y se
digiri de acuerdo a Olgun et al. (2005).
5. RESULTADOS Y DISCUSIN
En investigaciones previas (Olgun et al., 2005), se demostr que S. minima present una
microalga adherida a sus pseudo-races, la cual fue identificada como Lyngbya sp. Adems, se
realizaron experimentos en sistema por lote, comparando la capacidad de remocin de plomo por
dos tipos de biomasa de S. minima (lavada y sin lavar) y Lyngbya sola cultivadas en medio
Hutner. Los resultados mostraron que la presencia de Lyngbya sp., no contribuy de manera
significativa a la remocin de plomo.
En relacin a la cintica de remocin de plomo en los tres tipos de biomasas (Figura 3), se
observ que Lyngbya sp. tiene una capacidad de remocin muy alta durante la primera hora de
exposicin al plomo. Despus de la primera hora se observ un incremento en la concentracin
de plomo en la columna de agua, la cual se debi a una posible desorcin del metal.
Posteriormente el sistema se estabiliz alrededor del 60% de remocin durante el resto del
perodo experimental. Por el contrario, el porcentaje de remocin en el caso de los dos tipos de
biomasa de S. minima, aument gradualmente y alcanz su mximo a las 8 horas (72.56%
biomasa sin lavar y 76.93% biomasa lavada). Posteriormente, se estabiliz aproximadamente en
un 80% de remocin. No se encontraron diferencias significativas entre los dos tipos de biomasa
Por otro lado, el control que contena slo metal preparado con agua desionizada mostr
una ligera remocin; la posible causa es que el plomo se haya precipitado o porque se qued
adherido a las paredes del contenedor.
2+
Los resultados de este trabajo son similares a los reportados por Olgun y colaboradores
(2005a), quienes observaron una remocin de 89.7% de Pb
2+
de S. minima fue expuesta a una concentracin relativamente alta de 11.77 mgPb/l en sistemas
por lote.
Al final del experimento (24 horas), en ninguna de las biomasas se encontr presencia de
clorofila, debido a que al estar en presencia del metal y removerlo, la biomasa de Lyngbya sp.
pudo haberse lisado. Se ha reportado que la acumulacin de metales pesados es responsable del
decremento parcial o total de la concentracin de clorofila (Abdel-Basset et al., 1995; Manios et
al., 2003).
Tabla 4. Concentracin de clorofila presente en biomasa de S. minima y Lyngbya sp. en medio
Hutner modificado 1/10 con CPb de 12.59 + 0.04 mg Pb/l
Tipo de biomasa
24 horas
505.2 + 280.64
S. minima lavada
284.1 + 265.50
Lyngbya sp.
473.6 + 48.22
FAI
812.5 + 13
775.18 + 28
6621.27 + 1418.16
FAD
1485 + 64
1633 + 166
4689.25 + 1647.73
FBC
2297.56 + 52.05
2408.21 + 188.23
11,491.22 + 1517.05
El promedio de FBC para los dos tipos de biomasa de S. minima alcanz un valor de
2,352.88; estos resultados son similares a los reportados por Olgun y colaboradores (2005a) en
donde observaron valores de FBC similares, en el orden de 2000 en sistemas por lote.
Adems, con los resultados anteriores se confirma que en sistemas por lote la adsorcin es
el mecanismo predominante para S. minima (Olgun et al., 2005), debido posiblemente a las
caractersticas que presenta este helecho acutico, las cuales favorecen el mecanismo de
adsorcin, tales como tener un rea superficial muy alta as como una elevada concentracin de
grupos carboxilo (Snchez-Galvn et al., 2008).
Por otro lado, el mecanismo predominante para Lyngbya sp. fue la acumulacin
intracelular, debido posiblemente a que al estar la microalga sola tiene ms superficie disponible
para la acumulacin as como para la adsorcin del metal. Se sabe adems, que los iones
metlicos son adsorbidos a la superficie de las clulas por las interacciones entre los iones
metlicos y algunos grupos funcionales metlicos tales carboxilos, fosfatos, hidroxilos, amino,
tioles, etc., los cuales se encuentran presentes en las paredes celulares. Se ha demostrado que la
acumulacin de metales pesados en las algas, induce la sntesis de fitoquelatinas (Gekeler et al.
1988), las cuales se unen a los metales pesados con gran afinidad y favorecen los incrementos en
la acumulacin de los metales. En otros estudios, Howe y Merchant (1992) reportaron un
incremento en el contenido de glutatin de la microalga Chlamydomonas al estar expuesta a
mercurio. Asimismo, Tsuji et al. (2003) mostraron que Dunaliella tertioleca tiene un alto
contenido de fitoquelatinas, a lo cual se le atribuye la capacidad para hiperacumular Zn y Cd.
2+
por S. minima
2+
Al final de los experimentos (52 horas), se calcularon los porcentajes de remocin de Pb por S.
minima para todos los experimentos a las diferentes condiciones ambientales probadas (Figura 4).
140/23.88
422/24.5 650/25.33
810/32.26
del rango de I.L. y temperaturas bajas (109-160 molm s ), cuando se prob una CPb de plomo
tambin baja (1.24 + 0.38 mg Pb/l), alcanzando un punto mximo de remocin de 77.68%. Por otro
-2 -1
lado, dentro de este mismo grupo (140 molm s ), se observ el mnimo valor de porcentaje de
remocin (19.62%) cuando la biomasa de S. minima se encontraba expuesta a la mxima
concentracin probada (24.29 + 6.86 mgPb/l) dentro de este grupo de experimentos.
En la Figura 15 se muestran los resultados de los FBC promedio para S. minima cuando
estuvo expuesta a diferentes concentraciones promedio de metal y a diferentes condiciones de
C FB
intensidad luminosa/temperatura.
el rango denominado medio (650 molm s /25.33C). Cuando la I.L/temp. aument al rango
-2 -1
denimonado alto (810 molm s y 32.26C), ya no aument el valor del FBC, a pesar de que
las concentraciones de Pb fueron menores a las probadas anteriormente (3.22 + 0.27 y
10.56 + 1.37mg Pb/l).
5.2.6. Bioadsorcin de plomo en mg/kg de biomasa a la superficie de S. minima.
Para tener un dato ms especfico del metal que se adsorbi en relacin al peso de la
biomasa de S. minima, se decidi realizar un nuevo anlisis con los mismos datos, pero ahora
calculando los mg de plomo por cada Kg de biomasa de la planta.
-2 -1
En la Figura 16 se puede observar que para el grupo 1 (140 molm s ), el mnimo valor
obtenido en mg Pb adsorbidos/kg biomasa, fue para la menor concentracin probada dentro de
este grupo de experimentos (1.24 mg Pb/l). Al incrementar la concentracin del metal a 4.9 mg
Pb/l, se obtuvo un valor aproximado de 20,000 mg Pb adsorbidos/kg biomasa.
molm s ) y a la concentracin de metal ms alta probada (27.58 mg Pb/l) dentro de este grupo,
se obtuvo el valor ms alto de adsorcin, alcanzando un valor aproximado de casi 70,000 mg
Pb/kg de biomasa de S. minima.
minima tiene una gran superficie especfica (264 m /g peso seco), lo cual favorece al mecanismo
de adsorcin ya que al tener mayor rea superficial la planta posee una mayor cantidad de sitios
activos disponibles para la bioadsorcin (Tien, 2002).
Para el caso de la otra concentracin probada a esta intensidad luminosa (0.58 mg Pb/l),
se logr adsorber muy poco metal a la superficie de la planta, debido posiblemente a que al ser
una concentracin muy pequea de metal, el plomo se pudo haber adherido en las paredes de las
lagunas o incluso en las mangueras que alimentaban a las mismas y por lo tanto no se logr
observar un efecto real de esta concentracin mnima probada. En contraste a lo anterior, para el
-2 -1
segundo caso del Grupo 2 (intensidades y temperaturas medias de 650 molm s y 25.33C),
cuando la biomasa de S. minima estuvo expuesta a dos diferentes concentraciones promedio de
plomo (4.9 y 12.87 mg Pb/l) se obtuvieron valores similares entre ellos (aprox. 35,000 y 40,000
mg Pb adsorbidos/kg biomasa, respectivamente).
Cabe sealar que los valores del plomo adsorbido a la superficie de S. minima para las dos
concentraciones probadas no son diferentes significativamente entre ellos, lo que puede indicar
que a estas condiciones de luz y temperatura, la concentracin del metal no tenga una relacin
directa con la bioacumulacin de plomo a la planta.
2+
2+
probadas, (12.87 + 1.31 mg Pb/l), expuesta a una IL= 650 molm s , la cantidad de plomo en la
biomasa es mucho mayor que a las otras concentraciones de plomo e I.L. probadas, alcanzando
un valor aproximado de 45,000 mg Pb/kg biomasa de S. minima.
2+
2+
Determinar Pb
2+
Al tiempo 52 retirar la biomasa de las lagunas, poner a escurrir en coladeras durante 5 min.
Transcurrido este tiempo colocar la biomasa en papel filtro doblado por la mitad durante 15
min.; posteriormente pesar 20gbh de cada laguna.
Lavar la biomasa con 150 ml de EDTA (en una relacin de 12 respecto a la concentracin de
plomo (CPb); agitar una hora.
Anlisis de Datos
2+
4.13 Diagrama de flujo de lagunas con S. minima expuestas a medio con Pb , operando en
siste
Biomasa de S. minima + Pb
2+
Biomasa de S. minima + Pb
2+
Biomasa de S. minima + Pb
2+
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APENDICE
ANEXOS