TIPEO SANGUNEO

PRUEBA DIRECTA EN TUBO

PROPSITO:
Investigar en la sangre la presencia o ausencia de los antgenos A, B y Rh que se
localizan en la superficie de los glbulos rojos, utilizando anticuerpos especficos
para cada uno de ellos.
MUESTRA REQUERIDA:
1 mL de Sangre completa con o sin anticoagulante.
MATERIALES Y REACTIVOS:

Tubos de ensayo 12 x 75 mm.

Gradilla para tubos.
Puntas plsticas.
Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta transfer.
Aplicadores de madera.
Frasco lavador.
Marcador de vidrio.
Guantes descartables.
Papel toalla.
Solucin salina 0.85%.
Antisuero A.
AntisueroB.
Antisuero RH (anti-D).

EQUIPO:

Macrocentrfuga.
Reloj marcador.
Pipetas automticas.
Lmpara para lectura de aglutinacin.

PROCEDIMIENTO:

a)
b)
c)
d)

Identificar previamente los tubos.

Depositar 2-3 gotas de sangre en un tubo.
Realizar 3 veces el lavado de clulas de la siguiente manera:
Agregar 1 mL de solucin salina 0.85%.
Mezclar y llenar con solucin salina 0.85% el tubo hasta 3/4 partes.
Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm .
Descartar toda la solucin salina quedando en el fondo un paquete de
glbulos rojos.

Preparar una suspensin al 5%, colocando una gota de los glbulos rojos
lavados y 19 gotas de solucin salina y mezclar.
Rotular 3 tubos con las letras A, B, Rh por cada muestra a analizar, a cada
uno agregar una gota de glbulos rojos al 5%.
Depositar los antisueros respectivos:
a) Tubo A antisuero A.
b) Tubo B antisuero B.
c) Tubo Rh antisuero D.
Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm .
Leer la presencia o ausencia de aglutinacin agitando suavemente los
tubos.
FUENTES DE ERROR:

Reactivos vencidos o deteriorados.

No llevar a temperatura ambiente los reactivos.
Hemlisis de los glbulos rojos por mezcla inadecuada.
Presencia de enfermedades autoinmunes.
Iluminacin inadecuada en el momento de la lectura.
Dilucin inadecuada de los glbulos rojos.

FORMA DE REPORTE:
Se reporta:
Grupo A: si aglutina el tubo marcado A.
Grupo B: si aglutina el tubo marcado B.
Grupo O: si no aglutinan los tubos marcados A y B.
Grupo AB: si aglutinan los tubos marcados A y B.
Combs
Procedimiento
Coombs directo

Lave tres veces los hemates del paciente con solucin salina fisiolgica.
Haga una suspensin de hemates lavados al 2-5 %.
Aada en un tubo debidamente rotulado dos gotas de la suspensin.
Aada dos gotas de Suero de Coombs poliespecfico.
Centrifugue un minuto a 1000 rpm.
Lea desprendiendo suavemente el botn sobre la lmpara aglutino copio.

Coombs indirecto y cruzado

 Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el suero

y decntelo en un tubo debidamente identificado.
Prepare una suspensin al 2-5 % con la mezcla de hemates O y en el caso
del Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para
preparar la suspensin.
En un tubo debidamente rotulado aada dos gotas del suero y dos gotas de
la suspensin y mezcle bien.
Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y aada en l dos
gotas de la suspensin de hemates O y dos de suero hemoclasificador
anti-D y mezcle bien
Incube ambos tubos en un Bao de Mara a 37C por 30 minutos
Lave tres veces con solucin salina escurriendo totalmente el sobrenadante
del ltimo lavado.
Aada dos gotas de suero de Coombs poliespecfico a cada tubo.
Centrifugue 1minuto a 1000 rpm.
Lea desprendiendo suavemente el botn en la lmpara aglutinoscopio.