DNA COMO MATERIAL GENTICO

Siglo 19: Nuclena

1944-1952: DNA portador de la informacin gentica
Chargaff A=T C=G
1953: Estructura helicoidal del DNA (Watson y Crick)
2000: Genoma Humano
A partir de esto comienzan nuevas reas de estudio: genmica funcional epigentica
(cmo influye medio ambiente en genoma)
Se estudia la protemica: estudio de protenas (Ej: de la orina).
DNA doble hebra complementaria permite tener un resguardo, por si se pierde el
material de alguna de las hebras.
El fenmeno de hibridacin est basado en ello.
Principio de transformacin: de inyecta neumococo (cepas smooth S y rough R)
(Experimento de neumo coco)

Meselson y Stahl, 1958 establecieron que la doble hebra acta como molde de
su propia duplicacin. Experimento: probaron que las cadena de origen paterno
siempre se conserva una, y se copia una nueva ( bajo ppio de complementariedad
de bases). Plantearon 3 hiptesis: Replicacin ocurre
- De manera concervativa: hebra parental se separa, se sintetiza hebra hija pero
despus las 2 hebras parentales se vuelven a unir.
- De manera semiconcervativa
- De manera dispersa: DNA se fragmenta y se replica por pedacitos.
Hicieron experimento: con nitrgeno
radioactivo.
Se confirma segunda hiptesis.

PROCESO DE REPLICACIN DEL ADN (primero se estudia en bacterias).

* Replicacin parte en lugar especfico: SECUENCIAS ORI (ORI C en E coli)
Secuencias ricas en pares A=T (requieren menos energa para separarse).
Los ORI son reconocidos por FACTORES DE REPLICACION (protenas de iniciacin);
que van a replicar la maquinaria necesaria para que ocurra el proceso.
E coli: requiere de varios factores de replicacin

BURBUJA DE REPLICACIN, tiene 2 horquillas.

Bidireccional.
Bacterias: solo 1 ORI: origen monofocal.
Eucariones: varios ORI: origen multifocal (por tamao
del genoma, stas tienen intrones tambin)

*(Intrn: ADN no codificante. Exn codifica)

LOS ORIS NO SE ABREN TODOS AL MISMO
TIEMPO.
REPLICACIN PROCESO ENZIMTICO (comprendiendo esto se realiz reaccin de
PCR).
Para la replicacin necesitamos:
1) DNA polimerasa, para poder comenzar a trabajar requiere de 3-OH libre; y esto lo
otorga un
2) Cebador de RNA, oligonucletido o primer.
3) Sustratos de la enzima desoxiribonuclotidos tri fosfato (DNTP)
4) Cofactoresreaccin de polimerizacin del DNA requiere Magnesio (en cloruro de
Mg).

5) Esta enzima polimerasa requiere de un MOLDE o plantilla

Primera enzima estudiada fue la de E coli (Kornberg extrajo la enzima) DNA

polimerasa 1
Se dio cuenta que sta tiene 3 actividades:
- actividad polimerasa: 53
- actividad exonucleasa: come de los extremos
capacidad de autocorreccin: 35
correccin de pruebas 53 : (no la tienen todas, poco conocida)
(Corrige que A=T y C=G)
Fragmento KLENOW o grande presenta actividad polimerasa y 3-exonucleasa (la tienen
todas las polimerasas).
Fragmento pequeo solo actividad 5-exonucleasa (no est en todas y es poco
conocido).
En laboratorio se usa Fragmento de KLENOW.
Las bacterias tienen 3 DNA- polimerasa (1,2 y 3) la 1 es la primera que se descubri, pero
la 3 es ms eficiente. La 3 se encarga de sintetizar y corregir, la 1 es capaz de sintetizar,
pero no es eficiente (ms lento), se usa sta para sacar el partidor de RNA que es
necesario para la replicacin de la hebra retrasada (FRAGMENTOS DE OKAZAKI).
La 2 no tiene implicaciones en la replicacin, quizs reparacin.

MADURACIN DE FRAGMENTOS DE OKAZAKI.

Enzima que sintetiza el partidor: PRIMASA (es una RNA-polimerasa), por lo tanto
el partidor es de RNA (o cebador) fragmento de entre 25 y 50 nucletidos de
RNA. Este va a dar el 3-OH inicial. Entonces despus de la replicacin este RNA
debe ser eliminado, hay que reemplazarlo por DNA, proceso llevado a cabo por
DNA polimerasa 1, con su actividad exonucleasa, se come el partidor y lo
reemplaza por DNA. Una vez acabado los fragmentos se unen por DNA ligasa.

TELOMERASAS
Complejo enzimtico que trabaja de manera exclusiva en la regin de los
telmeros. Su funcin es intentar contrarrestar el acortamiento que sufren los
cromosomas al replicarse, retardar el envejecimiento celular.
Es una ribonucleoprotena, componente de RNA (humanos HTR o HTER) y
proteico (humanos HTRT o TERT). Cooperan para la actividad de la enzima.
- Componente Ribonucleotdico (HTR o HTER): funciona como scaffold o
andamio, para que el componente proteico se monte sobre l.
- Componente proteico (HTRT o HTERT): se monta sobre el scaffold y es la
enzima.
La accin de la telomerasa tiene 2 fases
1) Extensin: el componente ribonucleico en su secuencia es complementaria
a la secuencia del TELOMERO. El RNA que sigue a esa secuencia
complemento de reconocimiento, es molde para nuevas repeticiones
telomricas. La telomerasa es una DNA polimerasa dependiente de RNA
(su molde es un RNA como en la transcriptasa inversa). El primer lo hace la
extensin telomrica. La enzima despus de posarse comienza a
agregar nucletidos al ADN en una de las hebras usando como molde
su secuencia de ARN.
2) Relleno: Una vez que una de las hebras queda alargada en la fase anterior
debe venir otra ADN polimerasa (psilon en humanos). Tambin necesita un
primer el que se elimina.