LIBRO DE RESMENES

Adhesiones otorgadas
Academia Nacional de Bioqumica y Farmacia
Academia Nacional de Medicina
Agencia Nacional de Promocin Cientfica y Tecnolgica
Asociacin Argentina de Alergia e Inmunologa Clnica
Asociacin Argentina de Bioqumica
Asociacin Argentina de Cancerologa
Asociacin Argentina de Hemoterapia e Inmunohematologa
Asociacin Argentina de Zoonosis
Asociacin Argentina de Qumicos Cosmticos
Asociacin de Bioqumicos de Crdoba
Asociacin Mdica Argentina
Asociacin Qumica Argentina
Cmara Argentina de Industria de Productos Veterinarios
Cmara Argentina de Laboratorios de Anlisis Bioqumicos
Cmara de Reactivos para Diagnstico (CAPRODI)
Centro Virologa Animal (CEVAN)
Colegio de Bioqumicos de Crdoba
Confederacin Unificada de Bioqumica de la Repblica Argentina (CUBRA)
Conicet
Consejo de Mdicos de la Provincia de Crdoba
Facultad de Agronoma y Veterinaria (UNRC)
Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales
Facultad de Ciencias Exactas, Fsico-Qumicas y Naturales (UNRC)
Facultad de Ciencias Mdicas (UNC)
Facultad de Ciencias Mdicas (UNLP)
Facultad de Ciencias Qumicas (UCC)
Facultad de Ciencias Qumicas (UNC)
Facultad de Ciencias Veterinarias (UBA)
Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de La Plata
Facultad de Farmacia y Bioqumica (UBA)
Facultad de Medicina (UCC)
Federacin Argentina de Enfermera
Federacin Bioqumica de la Provincia de Buenos Aires
Foro Argentino de Biotecnologa
Fundacin Husped
Legislatura-Comisin de Salud Declaracin de Inters Legislativo
Ministerio de Salud de la Provincia de Crdoba
Secretara de Salud-Municipalidad de Crdoba
Sociedad Argentina de Cardiologa
Sociedad de Infectologa
Sociedad Argentina de Pediatra (SAP)
Sociedad Argentina de Reumatologa
Sociedad Argentina de Transplantes
Sociedad Cientfica Argentina
Sociedad Iberoamericana de Informacin Cientfica
Sociedad de Obstetricia y Ginecologa de Buenos Aires
Universidad Catlica de Crdoba (UCC)
Universidad Mamnides
Universidad Nacional del Sur

MESAS REDONDAS JAM 2014

Taller de Microbiologa Veterinaria: Actualizacin sobre micotoxicosis en
medicina veterinaria
Jueves 14 de agosto de 08:30 a 12:30
Prevencin de micotoxicosis mediante el uso de agentes no biolgicos
Dra. Ana Dalcero
Las micotoxicosis son las enfermedades del ganado, animales domsticos y seres
humanos principalmente causadas por la ingestin de micotoxinas. La susceptibilidad del
individuo a las micotoxinas vara considerablemente dependiendo de la especie, edad, el
sexo y la nutricin. El diagnstico de las micotoxicosis es complejo, ya que son similares a
las enfermedades producidas por otras causas, siendo an ms difcil en los casos en que
ms de una micotoxina est involucrada ya que las toxinas pueden producir un efecto
aditivo y, a veces, sinrgico. Un enfoque ms cuantitativo es posible hoy en da, basado
en la determinacin qumica de las micotoxinas y en los estudios de sus efectos en
relacin con la dosis. A pesar de que los conocimientos sobre micotoxicosis en humanos
han aumentado, la mayora de los datos disponibles sobre las micotoxinas y micotoxicosis
se han obtenido de la medicina veterinaria. El consumo de alimentos contaminados con
micotoxinas puede dar lugar a la disminucin del consumo de alimento y de la conversin
alimenticia, el retraso en el crecimiento, prdida de condicin corporal y muerte. La
disminucin de la productividad va acompaada de daos al hgado, hemorragias en el
tracto gastrointestinal, msculos y cavidades corporales. Los signos clnicos varan segn
la micotoxina y la especie animal afectada. Los impactos sobre el desempeo
reproductivo causan grandes prdidas tanto en la industria de alimentos como en la
sanidad animal. La informacin de la contaminacin fngica del alimento es muy til para
determinar los riesgos por las mltiples micotoxinas que estn potencialmente presentes.
Se han realizado estudios para evaluar la eficacia de una bentonita natural proveniente de
la provincial de San Juan, Argentina, utilizada comercialmente como agente de unin para
la formacin de pellets en los alimentos balanceados, para prevenir la aflatoxicosis en
pollos alimentados con dietas que contenan niveles crnicos de aflatoxina B1. Adems se
determin el rol preventivo de esta bentonita en patologas hepticas. Dicha bentonita
(0,3%) fue incorporada a dietas que contenan niveles naturales de aflatoxina B1 en
niveles entre 30 y 185 g/kg. Pollos machos de 21 a 35 d de edad tuvieron acceso ad
libitum a las dietas correspondientes y agua. Cuando los tratamientos fueron comparados
con los controles, los parmetros productivos (ganancia de peso corporal e ingesta de
alimento) no mostraron ninguna diferencia. La misma tendencia fue observada en la
inspeccin macroscpica de los rganos, sin embargo, la histopatologa del hgado
(rgano blanco de la aflatoxina B1) demostr que las lesiones propias de la aflatoxicosis
fueron mejoradas por la adicin de bentonita. Aunque la bentonita utilizada en este
estudio no demostr ninguna influencia sobre los parmetros productivos, fue capaz de
proteger al hgado de los efectos de la aflatoxina B1, previniendo su hepatotoxicidad.
Investigaciones futuras deben evaluar la habilidad potencial de bentonitas para adsorber
otros componentes dietarios a bajas concentraciones de aflatoxina B1.
Bibliografa

CAST, 2003 (Council for Agricultural Sience and Technologly), Mycotoxins: risks in plants
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endemic nephropathy: Lessons from toxicity studies in rats. Food Chem Toxicol 22542260.
Streptococcus uberis: actualidad epidemiolgica y su impacto en mastitis bovina
Dra. Liliana Odierno
Streptococcus uberis es reconocido a nivel mundial como un patgeno ambiental
responsable de una elevada proporcin de las mastitis subclnicas en vacas lactantes y es
el agente predominante aislado durante el perodo seco y puede producir infecciones de
corta duracin o puede establecerse en la glndula, especialmente cuando hay una
disminucin de las defensas del hospedador, causando mastitis crnica de difcil
resolucin con terapia antibitica. En Argentina, la frecuencia de aislamiento de S. uberis
vara del 0,4% al 20% en rodeos lecheros localizados en las provincias de Crdoba,
Buenos Aires, Santa Fe y Entre Ros. La media geomtrica del recuento de clulas
somticas en cuartos infectados con S. uberis es de 1.024.000 cl/ml. El impacto de la
implementacin del plan de cinco puntos, basado principalmente en la higiene y terapia
antibitica, ha conducido a un progreso considerable en el control de los patgenos
contagiosos pero se ha mostrado menos efectivo contra los patgenos ambientales. En la
medida que en nuestro pas se avance en el control de la mastitis contagiosa, el rol de S.
uberis ser cada vez ms relevante dado el constante desafo desde el medio ambiente
con mltiples cepas. La identificacin de especies resulta de gran valor para la prediccin
del potencial patognico o de la susceptibilidad a antibiticos de cada aislado, y constituye
as un prerrequisito para realizar estudios epidemiolgicos y de patogenicidad. Los
estudios llevados a cabo en distintas cuencas de nuestro pas en dcadas pasadas han
realizado slo una caracterizacin presuntiva de S. uberis. Trabajos posteriores informan
sobre la prevalencia de S. uberis asociados a mastitis en las cuencas de Buenos Aires y
Santa Fe, identificados segn el National Mastitis Council. Nuestro equipo de
investigacin demostr la validez de un esquema convencional basado en 11 pruebas
bioqumicas. La investigacin mostr una amplia variabilidad en los perfiles bioqumicos
de S. uberis. La mayora de los estudios epidemiolgicos moleculares de cepas de S.
uberis aisladas de mastitis bovina han sido realizados en Europa y Estados Unidos. Entre
los mtodos moleculares, nuestro equipo de investigacin ha demostrado que el anlisis
de polimorfismos de longitud de fragmentos de restriccin del DNAr 16S es una
herramienta valiosa para estudios de monitoreo debido a su costo accesible para
laboratorios de rutina. La diversidad genmica entre cepas de S. uberis es investigada
con xito mediante electroforesis de campos pulsantes (PFGE), y permite as un
conocimiento ms profundo de las relaciones epidemiolgicas entre cepas del mismo o de
diferentes rodeos. En la actualidad, se discute el rol de la mayora de los potenciales
factores de virulencia de S. uberis. En una investigacin realizada en nuestro laboratorio,

32 cepas fueron caracterizadas fenotpicamente por la presencia de factores de virulencia

como factor activador del plasmingeno, hialuronidasa, cpsula y factor CAMP, y
genotpicamente mediante PFGE. Las cepas de S. uberis presentaron heterogeneidad en
sus caractersticas feno y genotpicas, y los patrones PFGE no se encontraron asociados
a los perfiles de virulencia. Recientemente, nuestro grupo de trabajo investig la presencia
de los genes cfu, gapC, hasA, hasB, hasC, lbp, oppF, pauA/B, skc y sua, asociados a la
expresin de los principales factores de virulencia, en 78 S. uberis. Cuarenta y siete
(60,3%) aislamientos eran portadores de siete a 10 genes asociados a virulencia. Los
genes estaban presentes en combinacin y su asociacin permiti detectar 58 patrones
de virulencia. Diferentes patrones se encontraron en el mismo rebao y entre rebaos, lo
que demuestra que las cepas con diferentes patrones de virulencia fueron capaces de
causar mastitis. Si bien el tratamiento antimicrobiano en vacas lactantes y al secado es
uno de los 5 puntos convencionales aplicados para el control de la mastitis, slo en
algunos pocos pases se recomienda la antibioticoterapia debido a que entraa un riesgo
potencial de incremento en la frecuencia de cepas resistentes a los antibiticos, con sus
implicancias para la industria y la salud humana por el riesgo del pasaje de cepas
resistentes al ser humano. Resulta de inters el estudio de la susceptibilidad a antibiticos
teniendo en cuenta los distintos perfiles de resistencia presentado por los patgenos en
las distintas regiones. En la mayora de las investigaciones realizadas en otros pases, el
porcentaje de cepas de S. uberis resistentes a los antibiticos de uso ms frecuente en
mastitis bovina son, en general, inferiores a los informados por nuestro equipo de
investigacin. En este contexto, los avances alcanzados contribuyen a avanzar en el
conocimiento de aspectos epidemiolgicos, fisiolgicos y moleculares de cepas S. uberis,
y servirn de base para el futuro desarrollo de estrategias de control de la mastitis contra
este patgeno ambiental.
Agentes bacterianos involucrados en brotes de neumonas en bovinos de engorde a corral
y sensibilidad de los aislados a diferentes antimicrobianos.
Dr. Carlos Margineda
Las neumonas en bovinos de engorde a corral causan elevadas prdidas econmicas
por morbilidad, mortalidad y costos por tratamientos de animales enfermos. En Argentina
una fraccin importante de la produccin de carne vacuna proviene del feedlot. Las
neumonas o Complejo Respiratorio Bovino (CRB) es una entidad en la que intervienen
conjuntamente: agentes infecciosos (virales y bacterianos), estado inmunolgico del
husped y las condiciones del medioambiente. Generalmente los brotes de neumona
bacteriana se controlan con antibioticoterapia, tratando individualmente con antibitico
(ATB) a animales con sntomas o tratando al grupo o tropa afectada (metafilaxia). El
objetivo de este estudio fue caracterizar la etiologa de las neumonas en bovinos de
engorde a corral y evaluar la sensibilidad a diferentes antibiticos en las cepas aisladas.
En el ao 2013 y parte del 2014 (01/07) se procesaron 52 muestras de pulmn,
provenientes de brotes de neumona ocurridos en diferentes establecimientos de
engordes a corral. Las muestras se sembraron en agar sangre (agar sangre base - 6%
sangre equina desfibrinada) y agar Mac Conkey incubndoselas en aerobiosis y
microaerofilia a 37C durante 24-36 hs. La identificacin bacteriana se realiz por tcnicas
bacteriolgicas convencionales. La determinacin de la susceptibilidad antimicrobiana se
realiz por el mtodo de Kirby-Bauer utilizando agar Muller-Hinton y discos individuales,
para el caso de Histophilus somni (Hs) se le agreg el 6% de suero equino en el MullerHinton. Se testearon los siguientes ATB: tilmicosina (TILM) 15 g, oxitetraciclina (OX) 30
g, enrrofloxacina (ENR) 5 g, ceftiofur (CEFT) 30 g, tulatromicina 30 g, ampicilina

(AMP) 10 g, florfenicol 30 g, danofloxacin 5 g, trimethoprim-sulfamethoxazole 25 g.

La lectura de las placas se realiz luego 24 horas de incubacin y la interpretacin se
efectu segn estndares del NCCLS. El 73,1 % (38/52 pulmones) fueron neumonas
donde se aisl solo un agente bacteriano, predominando Hs (17/38). En el 17,3 % (9/52)
de los pulmones fueron aislados 2 agentes bacterianos donde la co-infeccin ms comn
(5/9) fue Hs asociado a Pasteurella multocida (Pm). El 9,6% (5/52) fueron negativos al
aislamiento bacteriano. En total se aislaron 56 cepas: 23 de Hs, 16 de Pm, 12 de
Mannheimia haemolytica (Mh) y 5 cepas de Arcanobacterium pyogenes. Los
antibiogramas se realzaron a 10 cepas de Hs, 13 cepas de Pm, 10 cepas de Mh. Las
cepas de Hs fueron sensibles a todos los antibiticos testeados. Las cepas de Pm fueron:
el 47% resistentes a OX, el 15% sensibilidad intermedia y 38% sensibles. Para el resto
de los ATB Pm no se revel resistencia. Las cepas de Mh fueron: 3 (30%) resistentes a
TILM, 1 (10%) resistente a AM, 1 (10%) revelo sensibilidad intermedia a enrrofloxacina
(ENR) y 1 (10%) sensibilidad intermedia a CEFT (10%). Los microorganismos aislados en
este estudio y las infecciones mixtas, son similares a otros trabajos de CRB reportados en
USA y Canad. La resistencia a los diferentes ATB fue muy variable entre las especies
bacterianas testeadas. Los resultados obtenidos coinciden en parte con los hallados en
otros pases donde reportan una gran cantidad de cepas de Pm resistentes a las OX. En
USA y Canad entre el 50-60% de las cepas de Pm y Mh son resistentes a las OX. Estos
movimientos de resistencia podran estar directamente relacionados con la utilizacin del
antimicrobiano en los establecimientos de engorde a corral. En muchos establecimientos
de engorde a corral de Argentina, hoy en da, utilizaban clortetraciclinas en el alimento,
esto podra ser el desencadenante de los altos niveles de resistencia detectados. A pesar
de que tambin se utiliza con mucha frecuencia TILM inyectable con fines metafilxticos o
curativos, hasta el momento los niveles de resistencia son relativamente bajos. En nuestro
trabajo no detectamos cepas de Pm resistentes a TILM, AMP, FLOR, ENR y CEFT
contrariamente a lo observado en otros pases. La emergencia de uno o ms agentes
bacterianos resistentes a antibiticos y la diseminacin pueden ocasionar un alto impacto
econmico en los engordes a corral. Es necesario continuar con estos estudios a fin de
monitorear la sensibilidad bacteriana a los diferentes ATB utilizados.
Actualizacin en el diagnstico de brucelosis animal
MSc. Sebastin Elena
La brucelosis es una zoonosis causada por una bacteria Gram-negativa del genero
Brucella que afecta a la ganadera, animales silvestres y a los seres humanos. Los
sntomas clnicos de la brucelosis no son patognomnicos y es difcil su diagnstico. Las
circunstancias epidemiolgicas, manifestaciones clnicas como el aborto, orquitis,
epididimtis pueden hacernos sospechar de esta enfermedad, pero no confirmarlo, ya que
otros agentes patgenos y/o el mal manejo de los animales pueden producir un cuadro
semejante. Puede diagnosticarse presuntivamente mediante el examen microscpico de
frotis de hisopados vaginales, de placenta, de fetos abortados o de semen, coloreados por
los procedimientos de Gram, Kster o Stamp Debido a esto, por el momento, el
diagnstico directo basado en el aislamiento de Brucella en un medio de cultivo
determinado, es, caso de resultar positivo, la nica prueba incuestionable de la existencia
de la infeccin. Sin embargo, el diagnstico bacteriolgico es poco prctico para ser
llevado a cabo como prueba individual en las campaas de control o erradicacin por el
elevado nmero de animales a analizar, siendo adems esencial la utilizacin de
instalaciones con un Nivel de Bioseguridad 3. Para este propsito las tcnicas

serolgicas, basadas en la demostracin de una respuesta inmune frente a antgenos de

Brucella es el recurso diagnstico ms utilizado.
Las Brucellae son bacterias con una estructura antignica compleja, siendo el
lipopolisacrido (LPS) y las protenas citoplasmticas y de membrana externa los
antgenos mas significativos. Estos antgenos no estimulan por igual la respuesta inmune
y, adems, la evolucin de sta depende de si el proceso infeccioso cursa hacia la
curacin o hacia la cronicidad, de la existencia o no de reinfecciones y del uso o no de la
vacunacin. Por su localizacin estructural en la superficie de la clula y su elevada
inmunogenicidad, el LPS-S es el antgeno de superficie dominante en las especies de
Brucella de fase lisa (S) y por lo tanto, frente al que primero aparecen anticuerpos en el
suero de animales tras la infeccin o vacunacin, pudiendo ser detectados mediante las
pruebas serolgicas denominadas clsicas, que utilizan suspensiones bacterianas en
fase S como antgeno frente a infecciones producida por B. abortus, B. melitensis o B.
suis, mientras que para el diagnstico de infecciones producidas por LPS en fase rugosa
(R) de B. ovis y B. canis es preciso utilizar suspensiones celulares que contienen LPS-R.
Los test serolgicos comnmente utilizados para el diagnstico de brucelosis producidas
por Brucella en fase S son, aglutinacin con antgeno buferado en placa (BPA),
aglutinacin con antgeno Rosa de Bengala (RB), seroaglutinacin en tubo (SAT),
enzimoinmunoensayos (ELISA) y fijacin de complemento (FC), siendo el antgeno
principal involucrado una suspensin de clulas de B. abortus o LPS-S. Las pruebas de
BPA y el RB son de eleccin como tamiz o screening por su sencillez, sensibilidad y bajo
costo.
Otro test implicado en el diagnstico que utiliza la cadena O del LPS como antgeno, es el
ensayo de polarizacin de fluorescencia (FPA), la cual ofrece una valiosa alternativa a las
pruebas serolgicas convencionales.
La prueba de anillo en leche (PAL o Ring Test) y el ELISA indirecto (I-ELISA) para la
deteccin de anticuerpos anti-Brucella en leche, se utilizan como vigilancia epidemiolgica
para recertificar rodeos o tambos negativos como as tambin para la deteccin de rodeos
sospechosos. Cuando se obtiene un resultado positivo, debe realizarse anlisis serolgico
individual a todas las vacas.
Las nuevas herramientas de diagnstico se basan en inmunoensayos que utilizan cono
antgeno protenas recombinantes o polisacrido O conjugados a protenas, con el
objetivo diferenciar animales infectados de los vacunados y teniendo la ventaja de realizar
fermentaciones sin la necesidad de cultivos de bacterias patgenas o que requieran un
nivel de bioseguridad
No existe ninguna prueba serolgica apropiada en todas las situaciones epidemiolgicas;
todas tienen limitaciones; por lo tanto se debe tener en cuenta todos los factores que
influyen en la relevancia del mtodo analtico y en los resultados de la prueba para una
interpretacin o aplicacin diagnstica concreta.

Mesa Redonda: Nuevas estrategias para el control y diagnstico de

parasitosis y micosis regionales
Jueves 14 de agosto de 14:00 a 16:00
Hidatidosis: nuevas herramientas para su control. La incorporacin de la vacuna
recombinante EG95, como herramienta de control en los hospederos intermediarios
Oscar Jensen

Hidatidosis es una zoonosis controlable y en el futuro ser erradicable. El ciclo del

parsito se conoce desde el ao 1853 y fue en el transcurso del ao 1864 que se inician
campaas de educacin sanitaria y control de faena con el fin de poder prevenir esta
enfermedad. En el ao 1890, se iniciaron las desparasitaciones caninas programadas con
un tenfugo y a partir del ao 1975 se incorpor el tenicida praziquantel.
Con la educacin sanitaria de la poblacin expuesta, el control de faena y la
desparasitacin canina, teniendo al perro como actor principal, se logr erradicar la
hidatidosis en mbitos insulares, como Islandia, Groenlandia, Tasmania y Nueva Zelanda,
pero en reas continentales, no se repitieron los logros.
La incorporacin de acciones en la lnea ovina y caprina, que prevengan la infeccin y
disminuyan la oferta de quistes hidatdicos, abre nuevas perspectivas a los programas de
control, al posibilitar atacar al ciclo de la enfermedad hidatdica en un nuevo frente, lo que
va a permitir lograr un control sostenido de la enfermedad en el tiempo.
La vacuna contra Hidatidosis en rumiantes menores permitir a los Programas de
Hidatidosis disminuir el tiempo en controlar la enfermedad en su territorio, al poder atacar
el ciclo de la enfermedad en un nuevo frente, esto a su vez permitir reducir la oferta de
quistes hidatdicos disponibles para los hospederos definitivos y por ende disminuir la
biomasa parasitaria disponible para los hospederos intermediarios, ayudando as a reducir
el riesgo de enfermar de las personas.
En necesario implementar un Plan Nacional de Control de la Hidatidosis en la Repblica
Argentina, que deber manejar el concepto de un solo mundo, una sola enfermedad e
involucrar a todas las instituciones, con un enfoque holstico, integrado, multisectorial y
transdisciplinario.
Deber priorizar las medidas de control, como la desparasitacin peridica de los
hospederos definitivos, la vacunacin de los hospederos intermediarios, el control de
faena, el control de la huerta, la tenencia responsable de los perros,
la educacin
sanitaria de la poblacin expuesta y contemplar el uso de la totalidad de las herramientas
disponibles para la vigilancia, el diagnstico, la prevencin y el control;
Si a la desparasitacin de los perros, al control de faena, a la educacin sanitaria, al
control de la huerta, le sumamos la nueva herramienta de control que la ciencia y la
industria nos pone a disposicin y vacunamos ovejas, cabras, vacas y llamas
podemos comenzar a soar y planificar una Argentina sin nios con Hidatidosis.

Desarrollo de un nuevo test, tipo "point of care" (poc), para el diagnstico molecular del
chagas en neonatos
Dra. Carolina Carrillo
La enfermedad de Chagas es una endemia originalmente americana, con al menos 10
millones de personas infectadas. Las terapias para tratar el Chagas son relativamente
efectivas en la fase aguda de la enfermedad y en los casos infantiles; aumentando la
probabilidad de cura cuanto ms precoz sea el diagnstico.
Existen diversos mtodos de diagnstico serolgico para Chagas en adultos/as e infantes;
sin embargo no son aplicables en neonatos/as a causa de la presencia de anticuerpos
maternos circulantes. Por otro lado, la deteccin del parsito por la reaccin en cadena de
la polimerasa (PCR), y sus variantes, resulta muy sensible y especfica pero requiere de
una infraestructura, equipamiento y recursos humanos complejos por lo que se restringe a
pocos centros de salud o investigacin.

Para asegurar el diagnstico de Chagas congnito, el Ministerio de Salud argentino junto

a Unicef han diseado un algoritmo para neonatos/as en tres pasos: 1- al momento del
nacimiento, por observacin del parsito en sangre (sensibilidad ~50% muy dependiente
del/a operador/a); 2- a los ~6 meses, con el mismo procedimiento; 3- a partir de los 9
meses de edad, por mtodos serolgicos (89-94% de sensibilidad), donde los anticuerpos
circulantes maternos ya no interfieren con el resultado de la prueba. La aplicacin del
algoritmo implica que al menos la mitad de los casos de Chagas congnito no son
confirmados hasta pasados los 9 meses de edad, perdindose un valioso tiempo para el
tratamiento precoz. Un riesgo adicional, es la inconcurrencia de los/as pacientes al
control, perdindose la posibilidad de completar su diagnstico e iniciar el tratamiento.
Nuestro OBJETIVO consisti en disear un mtodo de diagnstico, sensible y especfico y
a la vez simple e inclusivo (para todo tipo de condicin) que permita el tratamiento precoz
de la enfermedad.
Para ello seleccionamos una plataforma tecnolgica de amplificacin molecular
isotrmica, aplicada con xito en diversos pases para detectar diferentes agentes
infecciosos. El desarrollo del test para Chagas incluy 3 etapas:
-ETAPA 1: Seleccin de secuencias blanco y diseo de primers, mediante anlisis
bioinformtico y aplicando un software especfico para esta tecnologa.
- ETAPA 2: Puesta a punto de la reaccin in vitro. Se efectuaron pruebas para ajustar: alas condiciones de reaccin; b- la sensibilidad en diversos tipos de muestra dispensadas
en distintos soportes; y c- la especificidad, utilizando distintas cepas de T. cruzi, otros
parsitos filogenticamente emparentados, clulas humanas y clulas no relacionadas al
parsito ni al hospedador. Adicionalmente se realizaron estudios en muestras de sangre
positivas y negativas para Chagas certificadas por el Instituto Nacional de Parasitologa
Dr. Mario Fatala Chaben.
- ETAPA 3: Adecuacin de la tcnica a condiciones POC, obteniendo un test apto para
todo tipo de condicin (de equipamiento, infraestructura, de recursos humanos). Para ello,
trabajamos en dos puntos clave: la obtencin del templado molecular a partir de una
muestra de sangre y el mtodo de lectura.
El resultado de este desarrollo consisti en un test que incluye los siguientes pasos:
Obtener la muestra: una gota de sangre obtenida mediante puncin, seca en un
disco de papel es suficiente (no se requiere extraccionista).

Sembrar la muestra en la mezcla de reaccin.

Incubar 40 minutos a 65C (en cualquier tipo de dispositivo o bao trmico).

Revelar el resultado, mediante el sistema de tiras reactivas lateral flow lipsticks

(LFD), similar a los tests de embarazo comerciales.
Esta experiencia nos anima a proponer prximos desarrollos para otras enfermedades
infecciosas.

Micetomas: experiencia en Argentina y en Sudan

Dr. Julin Serrano
Entendemos por Micetomas (del griego: micos: hongo; oidoma: tumor), a un proceso
granulomatoso, inflamatorio y supurativo, de naturaleza bacteriana o micotica y de
evolucin crnica, que se manifiesta como un sndrome clnico con la triada siguiente : Tumoracin de la zona afectada. Ndulos que se fistulizan , - la presencia de
"granos".
En general se observa: aumento de tamao y forma de la region
comprometida, edema, tumoracion de consistencia elstica o leosa, que se reblandece,
ulcera y fistiliza en mltiples puntos por los cuales drena material purulento, piohematico o

seroso, que lleva en su seno al agente etiologico : hongos o bacterias filamentosas,

apelotonadas en forma de microcolonias ( "granos" de color, tamao y consistencia
variable, segn el agente productor). Los Micetomas comprometen la piel, tejido celular
subcutaneo, tendones, articulaciones y hueso. La evolucin es lenta, presentandose un
aumento progresivo de volumen y deformacion de la region de tipo tumoral. En los
primeros meses no hay dolor, por lo que no se le concede importancia, hasta que este
aparece, momento en que el proceso ya es crnico o existe afectacion osea. Los
Micetomas avanzados y con gran destruccin de tejidos, pueden ser incapacitantes o
invalidantes. La localizacin mas frecuente es la podlica, en general, zonas expuestas,
como pies, mano, hombros, etc, siempre con el antecedente de traumatismo, en
particular : pinchazos con espinas, astillas, clavos, piedras, ua, en general en la zona
endmica, donde estan las bacterias filamentosos u hongos, todo elemento punzo
cortante, es un vector. Si a esto sumamos que nuestros trabajadores rurales andan
descalzos o mal calzados, el clima calido de estas regiones, la vegetacon espinosa
predominante (xerofila), las condiciones higinico-sociales de estos estractos
poblacionales (alimentacin inadecuada, hacinamiento, tabaquismo, alcoholismo,
condiciones de vida precaria), esto nos explica porque en nuestra provincia hay una alta
incidencia de esta patologia. Los agentes etiologicos de Micetomas actinomicoticos mas
frecuentemente aislados en nuestra provincia son : Actinomadura madurae en su gran
mayoria, Streptomyces somaliensis y tambien Nocardia brasiliensis. En Eumicetomas
tenemos: Madurella grisea, Madurella micetomatis y Acremonium spp. Los Eumicetomas
avanzan lentamente, la afectacion del hueso es tardia y producen menor deformidad o
discapacidad funcional y menor numero de fistulas que los Micetomas bacterianos. El
diagnostico depende del examen clinico( una buena anamnesis), el examen de laboratorio
de micologia : respecto al examen directo de los granos y su cultivo, al estudio Anatomopatologico de la biopsia de tejido y al estudio de las Imagenes de la zona afectada. La
biosia realizada debe ser una biopsia quirurgica, de al menos 2 cm de diametro y la
profundidad debe llegar hasta planos oseos. los cultivos se realizaran en distintos medios,
segun se trate de bacterias filamentosas u hongos. El tratamiento en los Micetomas
Actinomicoticos se realizo en base a distintos esquemas : 1 se administro
Trimetoprima(80mg) + Sulfametoxazol(400mg)4 comp/dia + Estrptomicia1gr IV, diapor
medio, esto en ciclos de tres meses, se descanzaba un mes de la Estreptomicina y se
seguia con la trimetoprima+sulfa, se repetia este ciclo unas 3 a 6 veces. A este
tratamiento se le reemplzo la Estreptomicina por la Amicacina, primero y luego por la
Ciprofloxacina en dosis de 750mg/12 hs, durante 12 meses. El tratamiento en los
Eumicetomas no tiene tantas alternativas y no tiene la eficiencia que tienen los
antibioticos en los Actinomicetomas. aqui las alternativas son Ketoconazol en dosis de
400 mg/dia o Itraconazol en dosis de 400 mg/dia tambien y ahora el Voriconazol. La idea
de esta charla es mostrar los casos autoctonos de Santiago del Estero y mi experiencia
en cuanto a un diagnostico rapido para poder administrar el tratamiento adecuado en
cada caso. Tambin mostrar los casos que vi en el Centro de Investigacin de Micetomas,
en Sudan, y como trabajan ellos, ya que tiene mas de 7.000 casos documentados,
tambin comento los casos observados en Mxico, ya que alli tienen una gran experiencia
en Micetomas por Nocardia.

Mesa Redonda: Situacin epidemiolgica de infecciones virales del siglo XXI

Jueves 14 de agosto de 16:30 a 18:00
Arbovirus responsables de sndromes neurolgicos
Dra. Lorena Spinsanti
Dentro de los virus transmitidos por artrpodos (Arbovirus), los virus Encefalitis Saint
Louis (SLEV) y West Nile (WNV), miembros del gnero Flavivirus, constituyen importantes
patgenos neurotrpicos de actual importancia en nuestra regin. Incluidos en este
genero, y tambin asociados a enfermedad neurolgica no se puede dejar de mencionar
al virus Ilheus y al virus Dengue (DENV), este ltimo eventualmente en cuadros de
dengue grave ya que no sera su presentacin clnica predominante.
El conocimiento de la epidemiologa de los mismos resulta de gran importancia al
momento de realizar el diagnstico etiolgico, principalmente por las caractersticas
antignicas, presentacin clnica y distribucin geogrfica que poseen los mismos y que
ofrecen ciertas dificultades. Una de ellas se presenta al momento de realizar el
diagnstico laboratorial. En general los mtodos que ms se utilizan son los serolgicos y
teniendo en cuenta que estos virus comparten determinantes antignicos, las reacciones
serolgicas cruzadas son muy frecuentes. Sumado a esto para la vigilancia
epidemiolgica se utiliza la prueba de MAC-ELISA (IgM), que si bien es muy sensible, no
siempre permite detectar anticuerpos especficos. Por otra parte, cabe destacar, para
estas virosis, la persistencia de los anticuerpos tipo IgM, que en algunos casos pueden
permanecer hasta ms de seis meses. Finalmente, la presencia de anticuerpos
heterologos debido a las infecciones secundarias o secuenciales con otro flavivirus,
complican an ms los resultados de un ensayo serolgico.
La mayora de los casos de infeccin por SLEV o WNV son asintomticos o se presentan
como una cefalea febril indiferenciada; aproximadamente un 1% resulta en enfermedad
neurolgica con distintos grados de severidad. En meningitis a lquido claro es importante
sospechar la enfermedad por estos agentes y segn la epidemiologa descartar DENV.
El SLEV se distribuye desde Canad hasta Argentina. En Crdoba, en el ao 2005 se
produce el primer brote de encefalitis en humanos (fuera de Estados Unidos donde es
epidmico). Este hecho, de gran importancia para la salud pblica, tuvo como
consecuencia que se intensificara la vigilancia de sndromes febriles y/o neurolgicos, lo
que condujo a una mayor deteccin de casos. Desde entonces, varias provincias han
notificado brotes (Crdoba y Buenos Aires (2010), San Juan (2011)) y casos aislados
(Entre Ros, Chaco, San Luis, Santa Fe) que ocurren a finales del verano y comienzos de
otoo.
Con respecto a WNV, luego de su introduccin en Estados Unidos (1999) con casos
humanos y epizootias de gran magnitud, comienza, a partir del ao 2001, a dispersarse
por Latinoamrica detectndose en aves de Argentina en los aos 2004-2005 y un brote
en equinos en el ao 2006. Actualmente se registran casos humanos espordicos y en

caballos provenientes de Crdoba, Buenos Aires, Santiago del Estero, Santa Fe y Entre
Ros.
Bien conocida es la presencia del DENV en Argentina y el problema sanitario que provoca
desde el ao 1998, reconocindose la circulacin de los cuatro serotipos. El nmero de
casos presenta una tendencia creciente a lo largo de los aos lo que ha determinado un
mayor riesgo de aparicin de formas graves como la encefalitis, aunque no hay datos al
respecto.
La co-circulacin de SLEV, WNV y DENV en varias regiones de nuestro pas constituye
un desafo para el diagnstico etiolgico a la vez que demuestra la necesidad de
implementar metodologas de mayor especificidad para identificar el agente viral.
Pasado, presente y futuro de la epidemiologa mundial y regional del HIV/SIDA
Dr. Manuel Gmez Carrillo
Entre octubre de 1980 y mayo de 1981 se denunciaron al Centro de Control de
Enfermedades de los Estados Unidos, Centers for Disease Control (CDC), cinco casos de
neumonas por Pneumocystis carinii (hoy Pneumocystis jirovecii) provenientes de distintos
hospitales de la ciudad de Los Angeles EE.UU. Los casos fueron descriptos en individuos
homosexuales jvenes y algunos de ellos presentaban adems candidiasis oral y/o
esofgica y manifestaciones clnicas de infeccin por citomegalovirus (CMV). Las
descripciones del inusual sndrome permitan especular acerca de una severa
inmunodeficiencia relacionada con las clulas T. Dadas las caractersticas clnicas y
epidemiolgicas de este sndrome se propuso denominar Sndrome de Inmunodeficiencia
Adquirida (SIDA) a esta enfermedad y su agente etiolgico, desconocido hasta entonces,
exhiba semejanzas epidemiolgicas con el virus de la hepatitis B por poseer vas de
transmisin similares. En este sentido, la descripcin de casos de SIDA en usuarios de
drogas inyectables (UDIs) indicaba la importancia de la transmisin parenteral. En 1983 el
descubrimiento del Virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) permiti un rpido avance
en el desarrollo de los primeros tests para detectar la infeccin, los cuales fueron
aprobados en 1985. Ese ao se descubre un foco de epidemia en frica, demostrndose
adems la importancia de su transmisin heterosexual en esa regin.
En 1986 la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) publica el primer informe sobre SIDA
que estima entre 5 y 10 millones de personas con HIV en el mundo.
En la Argentina, los primeros casos de SIDA fueron diagnosticados a fines de 1982 y
comienzos de 1983. Las caractersticas clnicas y epidemiolgicas de estos primeros
casos eran similares a las que se describan en EE.UU. y Europa, involucrando a usuarios
de drogas inyectables, homosexuales masculinos y hemoflicos. Con el tiempo este patrn
fue cambiando registrndose un incremento en la incidencia en usuarios de drogas
inyectables, mujeres y nios.
Un reciente informe elaborado por el Programa Conjunto de las Naciones Unidas sobre el
HIV/SIDA (ONUSIDA) destaca que las iniciativas dirigidas a aumentar el acceso al
tratamiento antirretroviral estn logrando buenos resultados. En 2013, el nmero de
personas con acceso a medicamentos se elev en otros 2,3 millones. Con este
incremento, el nmero total de personas que recibieron tratamiento en todo el mundo
ascendi a casi 13 millones a finales de 2013.Sin embargo el informe revela que 19 de los
35 millones de personas que viven con el HIV en todo el mundo lo desconocen. En la
Argentina se presenta hoy una epidemia estable y de tipo concentrada, con alrededor de

110 mil personas infectadas, de las cuales el 30% no conoce su situacin. Se continan
infectando aproximadamente 5.000 personas cada ao, dos tercios de las cuales son
varones y un tercio mujeres. El 96% de las mujeres y el 98% de los varones contraen el
virus durante una relacin sexual desprotegida. Asimismo, se producen 100 infecciones
por transmisin vertical y fallecen 1.400 personas por sida cada ao. Estudios realizados
en nuestro pas demuestran que ms del 30% de los nuevos diagnsticos se realizan en
etapas avanzadas de la infeccin planteando la necesidad de instrumentar estrategias
para incrementar el acceso al diagnstico y tratamiento temprano. Frente al avance
tecnolgico en el desarrollo de los distintos ensayos para el diagnstico de la infeccin por
HIV, y la necesidad de ampliar el acceso al diagnostico y tratamiento se presentan nuevas
estrategias para alcanzar la meta propuesta; poner fin a la epidemia en el ao 2030.
Actualizacin sobre la situacin del virus Influenza a nivel mundial y regional
Dra. Gabriela Barbs
El virus de Influenza, es un virus RNA, de la familia Orthomixoviridae que presenta tres
tipos virales: A, B y C. El tipo A posee dos caractersticas principales que le confieren un
elevado potencial pandmico: por un lado una alta variabilidad antignica y por otro lado
tiene un reservorio animal extenso, siendo las aves acuticas silvestres el reservorio
natural de todos los subtipos conocidos.
La vigilancia de Influenza es un objetivo de salud pblica a nivel mundial desde el ao
1947, cuando la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) estableci la red de vigilancia
internacional de Influenza. En Argentina, hace varias dcadas que se realiza la vigilancia
de Influenza, existiendo una Red de Nacional de Laboratorios. A partir de la ltima
pandemia de Influenza A (H1N1)pdm en el ao 2009, se fortalecieron los diferentes
laboratorios de la red lo que permiti no slo intensificar la vigilancia epidemiolgica de las
infecciones respiratorias agudas virales, sino tambin contar con informacin oportuna y
de
calidad
para
la
toma
de
decisiones.
Actualmente, segn lo publicado por OMS/OPS en el boletn de actualizacin regional SE
27 2014, en la sub-regin de Amrica del Sur- Cono Sur y Brasil, la mayora de
indicadores de infeccin respiratoria aguda continan incrementando, especialmente en
Chile donde se observa niveles de ETI (Enfermedad tipo Influenza) similares al ao 2013,
siendo la cepa de Influenza A (H3N2) la predominante en esta regin. En Argentina, de
acuerdo a lo publicado en el Boletn Integrado de Vigilancia de la semana 28 del
Ministerio de Salud de la Nacin, desde la SE 1 a 28 del 2014 se estudiaron y notificaron
para virus respiratorios, un total de 23073 pacientes, resultando 8093 positivos (tasa de
positividad promedio es 35,08%), siendo el Virus Respiratorio Sicincial el principal agente
etiolgico. En referencia especficamente a Influenza, durante este ao se notificaron 435
muestras, correspondiendo un 89,7% a influenza tipo A (n=390) y 10,34% de Influenza
tipo B (n=45), con circulacin tanto del linaje Yamagata como Victoria. El subtipo de
Influenza A principalmente detectado es el H3N2l, seguido de H1N1pdm. Si bien en
nuestra regin son estas las cepas circulantes, es fundamental tener presente que el 31
de marzo de 2013, la OMS recibi la notificacin de China sobre la confirmacin por
laboratorio de tres casos de infeccin humana por el virus de influenza aviar A (H7N9).
Los anlisis genticos realizados en aislamientos del virus, mostraron ciertos cambios, lo
que sugiere que H7N9 tendra mejor habilidad para infectar especies de mamferos,
incluidos los humanos, que otros virus Influenza aviares. Actualmente, ms de 300 casos

se detectaron en varias provincias de China y un caso en Malasia, de un viajero,

presentando una alta tasa de letalidad y severidad de la patologa.
Anlisis de la circulacin local de virus de hepatitis entricas: seroprevalencia y monitoreo
ambiental
Dra. Viviana R
El virus de la hepatitis A (HAV) y el de la hepatitis E (HEV) son los principales agentes
causantes de hepatitis viral aguda en el mundo. Se propagan por la va fecal-oral, por
contacto entre personas o por la ingestin de agua o alimentos contaminados. El hallazgo
reciente de HEV en reservorios animales, especialmente en cerdos, sealan a este virus
como un agente zoontico.
En Argentina, desde la introduccin, en 2005, de la vacuna contra la hepatitis A (dosis
nica en nios de un ao), HAV ha cambiado su epidemiologa, siendo en la actualidad
una virosis de endemicidad intermedia. Segn los datos obtenidos del Ministerio de Salud
de la Nacin, los casos de hepatitis A aguda y los transplantes de hgado asociados a
HAV, disminuyeron abruptamente. Sin embargo, se comenz a observar un
desplazamiento de la incidencia de casos por HAV respecto al grupo etario, siendo los
ms afectados en los ltimos aos los adolescentes y adultos jvenes, en quienes la
enfermedad es ms severa. La hepatitis E es considerada poco comn en nuestro medio
y sumado a la escasa disponibilidad de pruebas diagnsticas su circulacin ha sido poco
explorada.
En este contexto actualizar y profundizar el conocimiento de la circulacin de estos virus
resulta imprescindible para ajustar las polticas de vigilancia, diagnstico, control y
prevencin.
En Crdoba, usando tcnicas moleculares demostramos la presencia de HAV subtipo IA y
HEV genotipo 3 (sutipos a,b,c) en muestras de aguas residuales y aguas del Ro Suqua,
lo que indiciara que ambos virus circulan en la poblacin y podran constituir un riesgo
para la poblacin susceptible.
En el mismo periodo (2009-2010), estudiamos el estado inmunitario especfico para
ambos virus en individuos adultos sanos de la ciudad de Crdoba. Hallamos una
prevalencia global de anticuerpos anti-HAV de 73,5% (306/416). Dicha prevalencia se
increment con la edad y estuvo estrechamente asociada a poblacin de bajas
condiciones socio-sanitarias, siendo 24% ms alta que en poblacin socio-sanitaria
media-alta. A partir de los 45 aos, ms del 90% de la poblacin adulta estudiada
present inmunidad contra el virus HAV. Entre individuos de 18-25 aos dicha prevalencia
fue menor al 55%, mostrando un amplio rango de susceptibilidad a la infeccin,
independientemente de su condicin socio-sanitaria.
La prevalencia global de anti-HEV fue de 4,4% (19/433) y aument con la edad
hallndose una prevalencia de 8,1% en adultos mayores. No se pudo demostrar su
asociacin con las condiciones socio-sanitarias.
Los resultados muestran que ambos virus circulan en Crdoba pero sus tasas de
seroprevalencia son dismiles sugiriendo diferentes rutas de transmisin y mecanismos de
diseminacin.
Resulta esencial continuar con la poltica oficial de vacunacin anti-HAV, sin embargo,
debera considerarse recomendar la inmunizacin a adultos susceptibles, enfatizando en
aquellos viajeros a zonas de alta endemicidad.
El hallazgo de HEV en matrices hdricas locales y de una elevada proporcin de
individuos susceptibles a esta infeccin alerta a los sistemas de salud locales a incluir la
deteccin de HEV en el algoritmo diagnstico de hepatitis virales.

Mesa Redonda: Microbiologa bsica con proyecciones clnicas

Viernes 15 de agosto 08:30 a 10:30
Patognesis intracelular: protemica, bioqumica y biologa celular de Chlamydia
trachomatis
Dr. Hctor Alex Saka
Chlamydia trachomatis es la principal bacteria causante de infecciones de transmisin
sexual y de ceguera infecciosa a nivel mundial. Un 70-90% de las mujeres con infecciones
endocervicales por C. trachomatis son asintomticas, siendo un reservorio para la
transmisin. Debido a las infecciones asintomticas recurrentes y persistentes en el
tiempo, pueden ocurrir serias complicaciones, como enfermedad inflamatoria plvica,
embarazos ectpicos e infertilidad irreversible, principalmente en mujeres jvenes. C.
trachomatis es un patgeno intracelular obligado con un ciclo bifsico, alternando entre 2
formas: el cuerpo elemental o EB, infeccioso, y el cuerpo reticulado o RB, no
infeccioso y replicativo. Dentro de la clula husped, Chlamydia est confinada a una
vacuola llamada inclusin en la que ocurre la transicin EB>RB>EB. Al final del ciclo, se
liberan EB al ambiente extracelular, para comenzar nuevamente el proceso infeccioso.
Las bases moleculares de las diferentes propiedades patognicas y metablicas de los
EB y RB han permanecido poco conocidas debido al escaso desarrollo de mtodos de
manipulacin gentica en este tipo de bacterias. Mediante un abordaje protemico
cuantitativo, hemos caracterizado la mayor parte del proteoma de los EB y RB, lo que nos
permiti catalogar la distribucin relativa de >54% del proteoma de C. trachomatis LGVL2. El estudio realizado nos permiti determinar que los EB expresaban mayores niveles
de protenas con funciones en el metabolismo central y en el catabolismo de la glucosa,
mientras que los RB estaban enriquecidos en protenas con funciones en sntesis
proteica, generacin de ATP y transporte de nutrientes. Esto sugiere que los EB estn
equipados para satisfacer una alta demanda metablica en tiempos muy tempranos postinternalizacin mientras que los RB estn especializados en utilizacin de nutrientes para
un rpido aumento de la masa celular y para asegurar los recursos requeridos para su
inminente transicin a EB. Inesperadamente, encontramos en los RB una expresin
disminuida de factores citoplasmticos requeridos para una eficiente secrecin tipo III
aproximadamente a la mitad del ciclo, sugiriendo una menor frecuencia de aparatos de
secrecin tipo III activos ensamblados por clula en este estado. Por otro lado, los EB se
encuentran pre-empaquetados con un arsenal de efectores y chaperonas del sistema de
secrecin tipo III, requeridos para la invasin y el establecimiento inicial del nicho
intracelular. Los resultados de nuestro estudio muestran que el proteoma de los EB y RB
est diseado para satisfacer sus principales funciones biolgicas: alta capacidad
infectiva en los EB y gran capacidad replicativa en los RB.
Mecanismos de resistencia del husped durante la infeccin con Trypanosoma cruzi
Dra. Eva Acosta Rodriguez
La enfermedad de Chagas es causada por el parsito protozoario Trypanosoma cruzi.
Esta enfermedad es endmica en Latinoamrica donde se estima que existen
aproximadamente 10 millones de enfermos crnicos. De acuerdo a estadsticas del
Ministerio de Salud, en nuestro pas habra casi 2 millones de infectados y ms de 8
millones de personas se encuentran en riesgo de contagio.

Al entrar en contacto con el parsito, los hospedadores humanos pueden desarrollar una
parasitemia patente (fase aguda), que en la mayora de los casos se resuelven despus
de unas pocas semanas. Dos terceras partes de los individuos sern serolgicamente
positivos para antgenos de T. cruzi, pero nunca desarrollarn sntomas (forma
indeterminada de la enfermedad). Sin embargo, un tercio de los pacientes desarrollarn
una dcada o ms tarde, las formas crnicas de la enfermedad, que pueden ser cardiaca
(la ms comn), digestiva (megaesfago y megacolon) o cardiodigestiva.
La patognesis de la enfermedad de Chagas crnica es todava un tema de intenso
debate. Algunos investigadores propusieron inicialmente que hay una respuesta autoinmune que sostiene un proceso inflamatorio crnico nocivo para el hospedador infectado.
Ms recientemente, la identificacin de ADN del parsito en las lesiones chagsicas ha
potenciado la hiptesis de que la persistencia del parsito induce una inflamacin crnica
que resulta en destruccin tisular. En este contexto, la respuesta inmune del hospedador
es esencial para el control de la parasitemia e impacta crticamente en el desarrollo de la
inmunopatologa. Por ello, nuestro grupo de investigacin est abocado al estudio de los
mecanismos inmunolgicos que median la resistencia a la infeccin por T. cruzi.
La resistencia a esta infeccin parasitaria depende de la respuesta mediada por clulas
de la inmunidad innata y adquirida y requiere de los efectos combinados de muchas
poblaciones de clulas, como las clulas NK, y las clulas T CD4+ y CD8+. Tambin los
anticuerpos son importantes para la supervivencia del hospedador y la eliminacin del
parsito. En cuanto a las citoquinas, actualmente se acepta que slo una produccin
equilibrada de factores inflamatorios (como IFN-g y TNF) y anti-inflamatorios (como IL-10
y TGF-b) permitir modular la respuesta inmune del hospedador infectado permitiendo el
control de la propagacin parasitaria sin dao tisular excesivo.
En este contexto nos propusimos evaluar el papel de una nueva familia de citoquinas, la
familia de IL-17, como moduladora de la respuesta inmune protectora frente a la infeccin
con T. cruzi. Determinamos que citoquinas de la familia de IL-17 cumplen un papel
protector durante esta infeccin parasitaria al regular una respuesta inflamatoria
exacerbada y al potenciar el desarrollo de una respuesta citotxica antiparasitaria.
Nuestros hallazgos tienen potencial inters para el desarrollo racional de vacunas contra
este parsito.
Toxinas fngicas en los alimentos: mecanismos de inmunotoxicidad y su impacto en la
generacin de cncer.
Dr. Martn Theumer
Las micotoxinas son compuestos producidos durante el metabolismo secundario
de algunos hongos filamentosos de los gneros Aspergillus, Fusarium, Penicillium y
Alternaria; contaminantes frecuentes de cereales y alimentos derivados. Las aflatoxinas,
ocratoxinas, fumonisinas, tricotecenos, y zearalenona tienen la mayor importancia,
ocasionando prdidas econmicas cuantiosas debido a sus impactos negativos en la
salud pblica, y a la desvalorizacin de los productos agrcolas, afectando el comercio
nacional e internacional.
Entre los riesgos que plantean estas toxinas para la salud humana se incluye la
produccin de carcinoma hepatocelular por la aflatoxina B1 (AFB1), que es
biotransformada a un intermediario mutagnico y carcinognico por miembros de la
familia del CYP450. Por otra parte, los datos epidemiolgicos sugieren fuertemente la
participacin de las micotoxinas ocratoxina A, fumonisina B1 (FB1) y zearalenona en la
formacin y progresin de tumores renales, esofgicos, y de mamas; respectivamente.
Aunque existen asociaciones claras entre la exposicin a algunas micotoxinas y la

induccin de ciertos tipos especficos de cncer, en la gran mayora de los casos no est
esclarecido cmo intervienen estos mebatolitos fngicos en la transformacin celular y en
la progresin del cncer.
La inmunotoxicidad de las micotoxinas podra contribuir en mayor o menor medida
al desarrollo y evolucin de los procesos neoplsicos. Hasta el presente se han
caracterizado algunos efectos inmunotxicos de la exposicin a micotoxinas individuales;
sin embargo en la actualidad el mayor desafo parece residir en la comprensin del
comportamiento de mezclas de toxinas cualitativa y cuantitativamente similares a las
encontradas naturalmente en los alimentos. Nuestro grupo ha realizado contribuciones en
esta ltima lnea. En una micotoxicosis subcrnica en ratas evaluamos la genotoxicidad
individual y conjunta de AFB1 y fumonisinas sobre las clulas mononuclares de bazo. Los
resultados de estos estudios sugieren un posible efecto protector de las mezclas de
AFB1-fumonisinas con respecto a la toxicidad individual de estas micotoxinas, y apoyan la
hiptesis de genotoxicidad de las fumonisinas, mediada por estrs oxidativo. Estudios de
exposicin in vitro sugieren que el estrs oxidativo causado por estas micotoxinas
alterara la funcionalidad de las clulas de bazo. Adems, el metabolismo del cido
araquidnico y las actividades del complejo I mitocondrial y del sistema CYP450 son las
principales fuentes bioqumicas de especies reactivas de oxgeno en clulas de bazo
expuestas a AFB1; y estos dos ltimos ms el sistema NADPH oxidasa seran los
responsables fundamentales del estrs oxidativo inducido por las fumonisinas.
La selectividad de Cidofovir (CDV) para las clulas positivas para el virus del papiloma
humano (VPH) se basa en la respuesta diferencial de las clulas normales y clulas
cancerosas
Dra. Graciela Andrei
El cidofovir (CDV) es conocido por su amplio espectro de actividad contra los virus a DNA
que codifican para su propia DNA polimerasa, incluyendo los herpesvirus, poxvirus y
adenovirus. Esta droga tambin presenta actividad contra el virus del papiloma que no
codifica para su propia DNA polimerasa. El CDV ha demostrado ser eficaz en el
tratamiento de hiperplasias ocasionadas por el VPH. El objetivo del presente estudio fue
caracterizar los mecanismos moleculares de la selectividad y la actividad antiproliferativa
del CDV contra clulas transformadas por el VPH usando el anlisis de microarrays del
genoma
humano.
Se evaluaron los cambios de expresin gnica despus del tratamiento de CDV de
diferentes tipos de clulas [incluyendo, dos lneas celulares de carcinoma cervical
positivas para el VPH (SiHa y HeLa), una lnea celular de queratinocitos inmortalizada
negativa para el VPH (HaCaT), y queratinocitos humanos primarios (PHKS)]. Se analiz
tambin el metabolismo y la incorporacin del CDV en el ADN genmico en los cuatro
tipos
de
clulas
utilizando
el
compuesto
radioactivo.
Se observ una mayor tasa de incorporacin del CDV en las clulas inmortalizadas en
comparacin con los queratinocitos normales. El efecto diferencial y especfico del CDV
en los diferentes tipos celulares se mostr mediante perfiles de expresin gnica. Aunque
un efecto sobre la respuesta inflamatoria se observ en todos los tipos celulares, se
identificaron diferentes vas en los queratinocitos normales en comparacin con las
clulas inmortalizadas. En particular, las vas Rho GTPasa, LXR / RXR y la respuesta de
la fase aguda fueron activadas exclusivamente en clulas inmortalizadas. Los
queratinocitos normales expuestos al CDV mostraron regulacin del ciclo celular y la
activacin de la reparacin del dao del ADN a travs de recombinacin homloga, dando
como resultado estabilidad genmica y supervivencia celular. En las clulas HaCaT, el

CDV induce la detencin del ciclo celular, pero la reparacin del ADN no es activada
mientras que la apoptosis de clulas tumorales se activa en las clulas VHP+ tratadas con
el
CDV.
Nuestro estudios sugieren que la selectividad del CDV se basa en el fracaso de las
clulas VPH + para responder al dao del ADN en lugar de un efecto anti-VPH directo.
Dado que el control del ciclo celular est desregulado por las oncoprotenas virales E6 y
E7 en las clulas que contienen el VPH, estas clulas son ms susceptibles al dao del
ADN que los queratinocitos normales. Nuestros resultados subrayan el potencial
teraputico de CDV en las neoplasias malignas asociadas al VPH, as como para otras
neoplasias.

Mesa Redonda: Nuevos desafos en microbiologa alimentaria

Viernes 15 de agosto 10:45 a 12:00
Toxinas fngicas presentes en leche: aflatoxina m1. Datos en argentina
Dra. Lilia Cavaglieri
Las micotoxinas son un grupo diverso de metabolitos secundarios de hongos perjudiciales
para los seres humanos y los animales. Entre ellas las aflatoxinas, producidas
principalmente por Aspergillus flavus y A. parasiticus, poseen efectos carcinognicos,
teratognicos y mutagnicos, causando grandes daos tanto para la salud como
econmicos a afectar alimentos destinados tanto a humanos como animales. La
exposicin crnica a las aflatoxinas puede tener consecuencias inmunolgicas,
nutricionales y un efecto acumulativo sobre el riesgo de cncer. La micotoxina de mayor
inters en la leche de vaca es la aflatoxina M1 (AFM1), uno de los metabolitos producidos
por la biotransformacin de la aflatoxina B1 (AFB1), detectada en la leche como
consecuencia directa de los alimentos contaminados. Aunque la AFM1 es menos
cancergena y mutagnica que la AFB1, exhibe un alto nivel de actividad genotxica y
representa, sin duda, un riesgo para la salud debido a su posible acumulacin y la
vinculacin con el ADN. Este hecho es muy importante, ya que la AFM1 es resistente a los
procesos de calentamiento como la pasteurizacin. Son escasas las investigaciones
acerca de la contaminacin de la leche con AFM1 en Amrica, especialmente en
Argentina. Por otro lado, el incremento de la demanda mundial para el uso ms eficiente
de recursos ha alentado cambios en la gestin agrcola de produccin lechera llevndola
de un pastoreo de ganado extensivo a los modernos sistemas semi-intensivos o
intensivos. Estos cambios han incrementado el riesgo de exposicin del ganado a dietas
contaminadas con AFB1 y la consecuente presencia de AFM1 en la leche. Estudios
recientes realizados en una cuenca lechera de la provincia de Crdoba en Argentina
sobre la presencia de AFB1 en materias primas y alimentos terminados destinados a
vacas lecheras mostraron niveles de AFB1 que iban de 0,43 a 50,5 mg.kg-1. Entre estas
muestras varias mostraron niveles de AFB1 por encima del lmite recomendado de la
Comisin Europea de 5 mg.kg-1 para AFB1, lmite considerado eficaz para mantener los
niveles de AFM1 en leche inferiores a 0,05 mg l-1. La leche es el alimento con mayor
potencial para introducir AFM1 en la dieta humana y la posible presencia de AFM1 en
leche representa un motivo de preocupacin en todo el mundo debido a que los productos
lcteos son ampliamente consumidos por los nios, la poblacin ms susceptible a los
efectos adversos de las micotoxinas. En base a lo planteado se considera prioritario
realizar un estricto programa de seguimiento de AFM1 en Argentina.

Salmonella spp y Cronobacter spp., dos microorganismos de bsqueda obligatoria en

frmulas lcteas infantiles
Dr. Sergio Epszteyn
Las Frmulas Lcteas Infantiles en polvo tienen una enorme importancia para el apoyo de
la nutricin infantil, y son irreemplazables en la alimentacin de lactantes con problemas
de rechazo o intolerancia a la alimentacin materna. Si bien fueron diseadas con esa
finalidad, al punto que se las consideraba un producto farmacolgico, su uso se ha
generalizado por razones culturales vinculadas a los cambios en la sociedad moderna, y
de hecho en la actualidad se pueden adquirir fcilmente en supermercados y tiendas.
Aunque sus envases suelen mantener la apariencia de productos farmacolgicos, es muy
importante tener en cuenta que, por razones relacionadas a su modo de produccin, estos
productos no son estriles, pueden contener microorganismos oportunistas resistentes a
las condiciones de sequedad, que llegan al producto durante su elaboracin, se
mantienen viables durante su vida til, y crecen sin competencia a partir de la
resuspensin del polvo en el momento de la preparacin del producto. Algunos, adems,
suelen tener la capacidad de producir molculas de adherencia a superficies y
biopelculas protectoras (biofilms) que les permiten colonizar utensilios y sondas, y resistir
la accin de los desinfectantes comnmente utilizados. Algunos microorganismos que
explotan este nicho ecolgico son potencialmente patgenos y pueden causar
enfermedad severa en lactantes (Meningitis, Enterocolitis Necrotizante (NEC)), que si bien
se producen con baja frecuencia, tienen una mortalidad que puede alcanzar el 80%, sobre
todo en las poblaciones ms expuestas inmunolgicamente, como son los prematuros o
los de bajo peso al nacer, que paradjicamente, son los que reciben este tipo de
alimentacin con mayor frecuencia. El aumento de los reportes de brotes de este tipo de
cuadros clnicos, sobre todo en Unidades de Cuidados Intensivos de Neonatologa, en
pases del primer mundo, en Europa como en Estados Unidos, ha llevado a la
identificacin y al estudio de los dos agentes responsables, que pertenecen a la familia de
las enterobacterias. En los ltimos aos por lo menos 6 brotes por infeccin por serotipos
poco frecuentes o raros de Salmonella en lactantes han sido vinculados al consumo de
frmulas lcteas. En todos estos casos, la identificacin del agente fue posible gracias a
que en esos lugares funcionaba una red de vigilancia de Salmonella bien establecida,
apoyada por laboratorios con la capacidad de serotipificar los aislamientos. Si bien el
nmero de brotes por Salmonella merece consideracin, a partir de la ltima dcada, la
identificacin de un segundo agente causante del mismo tipo de cuadro clnico la ha
desplazado en el foco de inters, que se ha colocado sobre este nuevo microorganismo.
La taxonoma del mismo ha ido cambiando en la medida que ha aumentado el inters
sobre su estudio. Lo que en un principio era considerado un subgrupo dentro de la
especie Enterobacter cloacae y se lo identificaba por su pigmentacin amarilla, ha sido
redefinido, desde el ao 2008, mediante estudios de biotipificacin y diferentes tcnicas
de anlisis molecular como un nuevo gnero Cronobacter spp, compuesto por 5
especies, 3 de las cuales son las asociadas ms frecuentemente a brotes. Esta frecuencia
diferencial en el comportamiento como patgeno podra estar relacionada con la portacin
de factores de virulencia que an no han sido definidos con claridad.
STEC desde adentro y desde afuera. Qu criterios vamos a adoptar en nuestros
alimentos?
Dr. Gerardo Leotta

Escherchia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patgeno asociado a

enfermedades transmitidas por alimentos. El principal serotipo vinculado a casos de
Sndrome Urmico Hemoltico (SUH) a nivel mundial es E. coli O157:H7. Este serotipo es
el prototipo de un grupo de ms de 300 serotipos de STEC, aunque no todos resultan
patgenos para el ser humano. Entre ellos, existen 6 serotipos (O26:H11, O103:H2,
O111:NM, O113:H21 y O145:NM) que fueron reconocidos por la OMS por su potencial
patognico. Sin embargo, se debe considerar que la prevalencia de serotipos asociados a
enfermedades severas difieren segn el pas y la regin. Los rumiantes en general, y el
ganado vacuno en particular, son los principales reservorios de STEC. La dosis infectiva
capaz de ocasionar enfermedad por parte de este grupo bacteriano es de 10 a 100
bacterias. La capacidad de producir toxina Shiga no es suficiente para causar enfermedad
en humanos. Para determinar cules son los serogrupos de importancia para la salud
pblica se debe demostrar la presencia de factores de virulencia y adherencia sumados a
la incidencia en la poblacin. EE.UU. (USDA/FSIS) introdujo en Junio de 2012 una nueva
normativa, en la cual se determinan los serogrupos O26, O45, O103, O111, O121, O145
(big six) como peligros biolgicos en productos destinados a molienda. En esta
metodologa se determina que para que una mercadera sea rechazada debe confirmarse
la presencia de STEC por aislamiento y confirmacin. En la Unin Europea (UE), en 2012,
se comenzaron a aplicar controles en frontera a cortes de carnes frescas rechazando
mercaderas sin la debida confirmacin del riesgo para los consumidores implementando
el criterio de tolerancia cero, inclusive ante la deteccin del gen stx. La situacin es
compleja, ya que la UE se est basando jurdicamente en el Reglamento (CE) n
178/2002 y en el Reglamento (CE) N 882/2004 para sostener la posicin de sus
rechazos. Ambos reglamentos determinan que es necesario adoptar medidas
encaminadas a garantizar que los productos que se comercializan no resultan
perjudiciales para la salud, sin establecer claramente cules son los criterios
microbiolgicos que deben considerarse. En este contexto, cada Estado Miembro se
encuentra libre para aplicar sus propios criterios. En 2012, entr en vigencia la Norma ISO
13136 para la deteccin, aislamiento y caracterizacin de STEC (O157, O111, O26, O103
y O145). En la introduccin de esta metodologa microbiolgica se define como
potencialmente patgenos a todos los serotipos de STEC. Este concepto no tiene
sustento cientfico y condiciona a las autoridades de los puertos de frontera a tomar una
decisin extrema (tolerancia cero) a cualquier alimento, sin contemplar el riesgo para el
consumidor. En Argentina, el SUH es endmico y constituye la primera causa peditrica
de insuficiencia renal aguda y la segunda de insuficiencia renal crnica. Se producen
alrededor de 500 casos nuevos por ao con un importante subregistro. Se encontraron
evidencias de infeccin por STEC en el 75% de los casos, siendo O157:H7 el serotipo
ms frecuente. Otros serotipos con prevalencia estimada superior al 1% y asociados con
casos de enfermedad son O145, O121 y O26. En mayo de 2004, se modific el Artculo
255 del Cdigo Alimentario Argentino, y en 2012 se modificaron o incluyeron los artculos
156tris, 286bis, 302 y 925quater. Estos refieren a las especificaciones microbiolgicas que
deben cumplir la carne picada fresca, comida preparada lista para consumo, salazones
cocidas, chacinados frescos, y las frutas y hortalizas, respectivamente. La deteccin de
STEC no-O157 se limita a determinados distritos con capacidad analtica. Al igual que
algunos EM de la UE, en estos distritos se aplic el criterio de tolerancia cero para STEC
en hamburguesas congeladas, de acuerdo a lo que estipula el artculo 6 inciso 6a del
CAA, como consecuencia de la ausencia de un marco regulatorio especfico. Es necesario
evaluar y establecer la inclusin al CAA de los principales serogrupos de STEC no-O157
en los alimentos de riesgo para la poblacin Argentina.

Mesa Redonda: El da a da en jardines maternales y escuelas: prevencin y

manejo de enfermedades infecciosas
Viernes 15 de agosto de 15:00 a 17:00
Modos de transmisin de microorganismos
Dra. Maria B. Isa
Los virus son agentes infecciosos que slo pueden multiplicarse dentro de las clulas.
Infectan todos los tipos de organismos, desde animales y plantas hasta bacterias, y se
hallan en casi todos los ecosistemas de la tierra constituyendo el tipo de entidad biolgica
ms abundante. Se los define como una organizacin biolgica, extremadamente
pequea, infecciosa y potencialmente patgena, que parasita clulas procariotas y
eucariotas. Los virus se caracterizan por ser parsitos obligados de las clulas, no son
capaces de dividirse y crecer por s mismos. La visin macroscpica de la relacin agente
husped, es que los virus para perpetuarse en la naturaleza infectan a un husped
susceptible, amplifican sus cidos nucledos y protenas en clulas y salen del husped
en bsqueda de un nuevo susceptible. La puerta de entrada es el inicio de una ruta
patognica que involucra la va de acceso del agente al husped y un mecanismo
determinado de transmisin. Los virus de acuerdo a sus caractersticas biolgicas utilizan
diferentes puertas de entrada y de salida del husped. Algunas de estas vas de acceso
son las siguientes:
La VIA RESPIRATORIA es una de las principales puertas de entrada de agentes virales,
tales como el Adenovirus, Influenza, Parainfluenza, Respiratorio Sincicial, Sarampin,
Rubeola, Rhinovirus, Parvovirus B 19, entre otros. La VIA DIGESTIVA requiere ciertas
particularidades en el virus que intente utilizarla. Ejemplo de esto lo constituyen los
Rotavirus, Adenovirus, Astrovirus, Norovirus, Enterovirus, EBV, CMV, Poliovirus, Hepatitia
A, etc. La puerta de entrada GENITO-URINARIA es un acceso utilizado por virus que
suelen infectar persistentemente. Son ejemplos el VIH, virus Herpes Simple, HPV, virus
Hepatitis B, virus polioma BK, Adenovirus, etc. Las MUCOSAS ORAL Y CONJUNTIVAL
ofrecen el contacto directo como mecanismo de transmisin. Algunos ejemplos son el
HPV, virus Herpes Simple, Virus Varicela-Zoster, Sarampin, Adenovirus, Enterovirus. La
puerta de entrada PARENTERAL le permite al agente un pronto acceso a sus clulas
blanco. Ejemplo de esto son el virus de la rabia, VIH, virus Hepatitis B, virus Hepatitis C,
EBV, CMV, etc
A su vez la secuencia de eventos para la mantencin de un virus determinado en la
naturaleza comprende la liberacin viral de la clula, la salida del husped, el transporte a
travs del medio ambiente en forma viable y la apropiada entrada en un nuevo husped
susceptible.
Modos de transmisin de microorganismos
Dr. Paulo Cortes
Los jardines maternales comenzaron a tener importancia a nivel mundial desde mediados
de la dcada del 60 del siglo XX. Esto sucedi, como una respuesta a los cambios de
factores sociales y econmicos que implicaron la salida de la mujer de la actividad
domestica, lo que cre la necesidad de que alguien cuidara o educara a los nios desde
una edad precoz. Con el tiempo, se observ que los nios que asistan a estas guarderas
presentaban no slo mayor riesgo de infecciones contagiosas (respiratorias y

gastrointestinales 1,5 a 3 veces mayor), sino que tambin corran ms riesgos de adquirir
organismos multirresistentes.
Existen diversas vas de transmisin de los patgenos dentro de los jardines maternales:
Transmisin por gotas o descargas infecciosas: las enfermedades con sntomas
respiratorios (descarga nasal, tos, dolor de garganta, estornudos) a menudo se propagan,
ya sea, a travs de gotas que contienen bacterias, como as tambin de superficies y
juguetes contaminados con dichas descargas de la nariz o de la garganta de personas
infectadas. Estas gotas grandes no viajan ms de un metro antes de caer al suelo, pero
tambin pueden caer sobre membranas mucosas de ojos, nariz o boca de otra persona,
dando lugar a la transmisin de la enfermedad. Esta es una de las principales vas de
contagio en jardines de infantes y escuelas (meningitis bacteriana, Mycoplasma
pneumoniae, Kingella kingae, tos convulsa, conjuntivitis y faringitis estreptoccica). Se
debe prestar especial atencin si el jardn cuenta con nios con enfermedad crnica de
las vas respiratorias (fibrosis qustica) o inmunodeprimidos, ya que a travs de esta ruta
pueden llegar patgenos que pueden causar graves complicaciones
Transmisin aerotransportada: este modo de contagio es raro y solo algunas patologas
se diseminan por esta ruta (TBC). Ocurre cuando una persona infectada tose, estornuda o
habla generando partculas muy pequeas que contienen al agente infeccioso y que
persisten en el aire por largos perodos y pueden ser ampliamente dispersadas por
corrientes de aire.
Transmisin fecal oral: el contacto personal cercano y la higiene sub-ptima de los nios
pequeos generan oportunidades inmediatas de propagacin, y las infecciones
intestinales se diseminan a travs de la ingestin de bacterias, virus o parsitos
encontrados en la materia fecal de una persona o animal infectado. Esto ocurre cuando
algunos objetos se contaminan con cantidades microscpicas de materia fecal de
animales o humanos y son llevados a la boca. Los sitios ms contaminados con heces
son: las manos, mesas donde se cambian paales, pisos, grifos, manijas, juguetes y
mesas. Tambin puede ocurrir cuando se contamina el agua o alimento. Esta va es
utilizada por Campylobacter, Escherichia coli productora de toxina de Shiga, Salmonella,
Shigella, Salmonella, Clostridium difficile, Norovirus, Rotavirus, Giardia, etc.
Transmisin por contacto: algunas infecciones se diseminan directamente por contacto
piel-piel o indirectamente por contacto con fomites contaminadas (ropa, cepillos, cabello,
gorros). Esta va adquiere importancia para la diseminacin de imptigo, ttanos,
Staphylococcus aureus y varicela entre otros.
Otras fuentes menos comunes pero no menos importantes son: contactos con sangre o
secreciones del cuerpo humano (mordeduras con encas sangrantes), infecciones de
transmisin sexual (Chlamydia, gonorrea y sfilis: deben considerarse la posibilidad de
abuso sexual en estos nios) y por ltimo la transmisin por animales (reptiles, aves de
corral, anfibios, serpientes, etc.) que pudieran estar en estos jardines o escuelas.

Prevencin y manejo de infecciones trasmitidas por va respiratoria, contacto directo, va

fecal-oral y sangre
Dr. Nicols Moya
Se realizar un repaso sobre los principales agentes etiolgico, sus caractersticas
clnicas y formas de prevencin.

I. Patgenos transmitidos por vas respiratorias

1. Infecciones bacterianas
2. Infecciones virales
II. Patgenos transmitidos por va fecal-oral
1. Infecciones bacterianas
2. Infecciones virales
3. Infecciones por parsitos
III. Patgenos transmitidos por va directa
1. Infecciones bacterianas
2. Infecciones virales
3. Infecciones por parsitos (ectoparasitosis)
IV. Patgenos transmisibles por medio de contacto con sangre y secreciones
1. Infecciones virales
Tabla de vas de contagio

Recomendaciones para la exclusin de nios

Dra. Miriam Calvari
Los nios que asisten a los jardines maternales y escuelas, tienen hbitos particulares
que facilitan la diseminacin de los microorganismos y aumentan la susceptibilidad a
determinadas enfermedades infecciosas.
Los programas de guarderas deben exigir que todos los nios inscritos y los miembros
del personal reciban la atencin de salud de rutina y la vacunacin completa.
Si bien la mayora de las enfermedades en los nios son leves y no constituyen un motivo
para excluir a un nio de la guardera, hay recomendaciones generales y especficas de
cada enfermedad para la exclusin de nios en entornos de cuidados fuera del hogar.
Recomendaciones generales:
-Enfermedad que impida participar de las actividades normales.
-Enfermedad que requiere ms cuidado que la que el personal puede
proporcionar.
-Erupcin con fiebre o cambio en el comportamiento.
-Dolor abdominal persistente (2 horas o ms).
-Vmitos: ms de 2 veces en 24 horas.
-Diarrea: si las deposiciones no quedan contenidas en el paal. Si la frecuencia de
las deposiciones supera 2 o ms por encima de lo normal o contienen sangre o
mucosidad.
-Enfermedad grave por fiebre con cambios en el comportamiento, irritabilidad,
llanto persistente, dificultad para respirar.
-Tos persistente.
-Lesiones orales si no puede evitar babearse.
Recomendaciones especficas para cada enfermedad
Infecciones transmitidas por via respiratoria
Infeccin
Exclusin
Rubeola
Hasta 6 das despus del inicio de la erupcin.
Sarampin
Hasta 4 das despus del inicio de la erupcin.
Paperas
Hasta 5 das despus del inicio de la inflamacin de la
glndula partida.
Varicela
Hasta que todas las lesiones hayan formado
costras(generalmente 6 das despus del inicio de la
erupcin)
TBC
Para una enfermedad activa puede regresar despus de
instituida la terapia y los sntomas hayan disminuido
Bordetella Pertussis
Hasta 5 das despus del tratamiento o hasta 3 semanas
despus del comienzo de la tos.
Faringitis estreptoccica Hasta 24 horas despus del tratamiento
Meningitis Bacteriana
Hasta 24 horas despus del tratamiento
S. pneumoniae,
H.influenzae,
N.meningitidis
Infecciones transmitidas por va fecal-oral
Infeccin
Exclusin
Shigella, escherichia coli Hasta que se resuelva la diarrea y 2 cultivos de
O157:H7
deposiciones negativos
Salmonella no serotipo
Hasta 24 horas despus que se resuelve la diarrea

Typhi, Campylobacter,
Rotavirus,
Cryptosporidium parvum,
Giardia lamblia
Salmonella serotipo Typhi

Se requieren 3 resultados negativos de cultivos de

deposiciones
Hepatitis A
Hasta 1 semana despus del inicio de la ictericia
Oxiuriasis
Hasta cumplir el tratamiento
Infecciones transmitidas por contacto
Infeccin
Exclusin
Imptigo
Hasta 24 horas despus del tratamiento
Escabiosis y pediculosis Hasta finalizar el primer tratamiento

La atencin adecuada de los problemas del control de infecciones en guarderas exige

una colaboracin de los funcionarios de salud pblica, mdicos, padres y personal a cargo
de los jardines.

Mesa Redonda: Presente y futuro de la evaluacin de calidad de productos

biolgicos para agricultura y medioambiente
Viernes 15 de agosto de 15:00 a 17:00
Productos biolgicos relacionados con la promocin del crecimiento vegetal
Dr. Claudio Ariel Penna
Para la definicin de Producto Biolgico en la actualidad se utiliza el trmino bioinsumo,
que incluye organismos y/o sus derivados metablicos, contenidos en una formulacin,
envasados, presentados y comercializados convenientemente. Cuando estn
involucrados microorganismos, la definicin debera incluir la composicin del soporte en
el que esta vehiculizado el microorganismo, que puede contener o no, molculas de su
metabolismo. Al intentar realizar una clasificacin clara de los distintos efectos benficos
que pueden tener los microorganismos sobre los cultivos, suelen mencionarse a los
microorganismos como pertenecientes a uno u otro grupo segn su funcionalidad, sin
embargo lo habitual es que los microorganismos posean varios mecanismos promotores,
entre ellos la fijacin biolgica de nitrgeno, la produccin de molculas fitorreguladoras,
la bio-disponibilizacin de nutrientes y hasta mecanismos de control biolgico. As, en el
sentido amplio, la mayora los bioinsumos conteniendo microorganismos que se aplican
hoy en agricultura, esencialmente son promotores del crecimiento. A nivel nacional, este
ao se constituy el Comit Asesor en Bioinsumos para Uso Agropecuario (CABUA) que
funcionar como un rgano asesor del Ministro de Agricultura de la Nacin, conformado
por representantes de distintos sectores, como una subcomisin dentro de la Comisin
Nacional Asesora de Biotecnologa Agropecuaria (CONABIA), seguramente adoptaremos
las definiciones que all se desarrollen como convencin, por lo que podemos esperar un
poco ms para adoptar nuevas definiciones en nuestro medio. Nos encontramos en un
momento histrico de expansin del uso de productos biolgicos marcado por
adquisiciones de compaas del sector por grandes empresas multinacionales lo que
seguramente, si es seguido por la comercializacin de productos que comprueben su
eficacia, ser la consolidacin de una nueva era para las prcticas agrcolas. En esta
nueva etapa, como investigadores y desarrolladores de nuevas tecnologas estamos

comprometidos a crear mtodos de evaluacin y validacin que contribuyan a generar la

confianza para el establecimiento definitivo del uso de bioinsumos en agricultura,
seguramente no ser necesario explicar los beneficios para la comunidad en este
resumen. Es fundamental comprender los mecanismos de accin de los microorganismos
como tambin los procesos de adaptacin a formulaciones comerciales, formas de
aplicacin, y desempeo en el medioambiente. Desde lo estrictamente metodolgico es
necesario el desarrollo de nuevas metodologas que comprueben tanto las garantas
declaradas de los productos como su capacidad de resistir condiciones habituales de
estrs, como el almacenamiento de semillas inoculadas o el desempeo en el suelo
previo a la colonizacin rizosfrica o cualquiera que sea el mecanismo propuesto para
expresar el efecto buscado.
Presente y futuro de los bioinsumos para el control biolgico en Argentina
Dra. Graciela Benintende
Frente a una demanda mundial de alimentos progresivamente creciente que genera la
expansin de las fronteras agropecuarias y una marcada tendencia hacia sistemas de
produccin intensiva, se presenta una exigencia enfatizada por calidad e inocuidad de los
alimentos, con menores niveles de residuos y obtenidos bajo sistemas que respeten al
ambiente. En este escenario se ven privilegiados los insumos de origen biolgico como
mtodos complementarios y/o sustitutos de los productos sanitarios de sntesis de amplio
espectro y alta toxicidad.
A travs de mltiples procesos, una gran cantidad de microorganismos intervienen en el
control de las plagas (insectos, caros), mientras que otros antagonizan con distintos tipos
de fitopatgenos controlando enfermedades. Los bioinsumos que utilizan a los primeros,
son referidos como Bioinsecticidas y los segundos como Biofungicidas; ambas
herramientas del Control Microbiano de plagas y enfermedades (CM).
En la Argentina existe una demanda creciente de estos bioinsumos microbiolgicos. Su
produccin y empleo es fundamentalmente fruto de los esfuerzos realizados en
transferencias desde organismos de CyT al sector pblico-privado y tambin por
emprendimientos de algunas empresas particulares. Para el CM de fitopatgenos, se
encuentran registrados en SENASA productos a base de Bacillus subtilis y desde este
ao, uno a base del hongo Trichoderma harzianum, siendo este ltimo el resultado de una
vinculacin entre el INTA-IMYZA y una empresa privada. Un nmero significativamente
mayor de bioinsecticidas, se encuentra registrado en SENASA para el control de plagas
de inters agropecuario y en ANMAT, para el control de vectores. Del mismo modo
productos desarrollados a base de virus (CpGV), bacterias (B. thuringiensis israelensis) y
hongos entomopatgenos (Beauveria bassiana y Metharizium anisopliae) fueron
registrados estn en proceso de registro, como resultado de vinculaciones INTA-IMYZA
y empresas.
Un sinnmero de ensayos de caracterizacin (morfolgica, bioqumica, gentica) estn
disponibles tanto para la identificacin del microorganismo en cuestin, como para el
seguimiento de los procesos de produccin de bioinsumos de alta calidad.

El ingrediente activo de estos bioinsumos suele ser el microorganismo en s mismo el

microorganismo sumado a algunos metabolitos, como es el caso de B. thuringiensis; por
lo que los mtodos necesarios para controlar la calidad de los bioinsumos, es diferente.
Los grandes desafos a futuro involucran entre otras acciones, la generacin de normativa
especfica y la implementacin de mtodos de estandarizacin precisos y prcticos, que
permitan agilizar los trmites de registro atendiendo siempre a la calidad, evitando la
comercializacin y utilizacin de bioplaguicidas de calidad dudosa que atenten contra la
salud ambiental o provoquen un descrdito del CM de plagas y enfermedades.
Productos biolgicos destinados a la intervencin del agroecosistema
Dra. Mara Julia Mazzarino
En las ltimas dcadas, la degradacin continua de los suelos y la acumulacin
exponencial de residuos orgnicos (RO) de origen urbano y agroindustrial han conducido
al uso intensivo de los mismos como fuentes de materia orgnica para reducir la erosin
de suelos agrcolas y acelerar la remediacin de suelos contaminados; como fuentes de
nutrientes para reemplazar fertilizantes sintticos (principalmente fosforados, de reservas
limitadas), y en la formulacin de sustratos para reducir el uso de turba y tierra negra. La
valorizacin agrcola de RO tambin contribuye a disminuir costos de rellenos sanitarios y
emisin de gases de efecto invernadero (metano). A nivel internacional se han diseado
polticas especficas que regulan la acumulacin o vertido incontrolado de RO, y fomentan
su uso en agricultura sensu lato y en rehabilitacin de suelos degradados. Los pases
desarrollados (y en base a ellos, otros como Chile, Brasil y Mxico) han elaborado
normativas para el manejo de RO de diferente origen dentro de las regulaciones de
fertilizantes y enmiendas. Uno de los tratamientos ms recomendado es el compostaje, ya
que asegura materia orgnica estable y reduccin de patgenos y atraccin de vectores.
Para certificar el compost se requieren controles de proceso y calidad, existiendo
indicadores ampliamente probados con este fin. El aprovechamiento de RO de cualquier
origen requiere un marco legal que facilite su valorizacin y desaliente su uso sin
controles. El marco legal en Argentina es inexistente o contradictorio. El SENASA aprob
en 2011 el Reglamento para el Registro de Fertilizantes y Enmiendas donde prohbe
expresamente la inscripcin de compost elaborados en base a RO urbanos; en el caso de
compost de bioslidos que hayan sido obtenidos a partir de procesos registrados (que
no especifica), establece que la inscripcin podr ser evaluada a travs de auditoras de
ese organismo. Esta resolucin del mximo organismo responsable de la calidad agroalimentaria del pas (dependiente del Ministerio de Agricultura, Ganadera y Pesca) se
contrapone con la Ley Nacional 25.916 (2004) de presupuestos mnimos de proteccin
ambiental para la gestin integral de residuos domiciliarios y con la Estrategia Nacional
de Gestin Integral de Residuos Slidos Urbanos (ENGIRSU, 2005) de la Secretara de
Ambiente y Desarrollo Sustentable (Ministerio de Salud y Ambiente), que promueven el
compostaje de la fraccin orgnica de los residuos. Por otro lado, el SENASA permite la
produccin de fertilizantes orgnicos y compost a partir de materiales de origen animal y
residuos verdes, que pueden contener patgenos y diversos contaminantes, para los que
las leyes internacionales aplican actualmente normas similares a las que regulan el uso
de bioslidos y RO urbano. La falta de una normativa clara sobre el manejo de RO impide
el desarrollo de un sector productivo evidentemente justificado en un pas donde el 75%
del territorio es rido-semirido con serios problemas de desertificacin, y donde se
importa la totalidad de los fertilizantes fosforados.

Mesa Redonda: Evolucin histrica de los mtodos de diagnstico: del Gram

al Malditof
Viernes 15 de agosto de18:30 a 20:00
Mtodos convencionales
Dr. Jorge Santoianni
Los esquemas tradicionales de identificacin fenotpica bacteriana se basan en las
caractersticas observables de las bacterias, como su morfologa, desarrollo, propiedades
bioqumicas y metablicas. El cultivo, cuando es factible, contina siendo el mtodo
diagnstico de eleccin; permite el aislamiento del microorganismo implicado, su
identificacin, el estudio de sensibilidad a los antimicrobianos y facilita la aplicacin de
marcadores epidemiolgicos.
En el proceso de identificacin bacteriana tradicional, la experiencia del microbilogo es
fundamental para la eleccin de una prueba o una batera de pruebas de forma
secuencial, en funcin de la fiabilidad de las mismas, del gnero o de la especie
bacteriana que se pretende identificar, del origen del aislado bacteriano, as como del
costo de las mismas. En ningn caso, los mtodos de identificacin fenotpica pueden
proporcionar una certeza absoluta, nicamente indicarn cul es el gnero y/o la especie
a la que la bacteria identificada tiene mayor probabilidad de pertenecer.
La identificacin fenotpica bacteriana se basa fundamentalmente en la
comparacin de las caractersticas fenotpicas de bacterias desconocidas con aquellas de
cultivos tipo. La fiabilidad de la identificacin est en proporcin directa al nmero de
caractersticas similares.
El estudio microscpico en fresco y la tincin revelan la forma, la manera de
agruparse, la estructura de las clulas y su tamao. Las tinciones son el primer paso, y
ocasionalmente el nico, para la identificacin bacteriana.
Los medios de cultivo slidos nos permiten el aislamiento de los diferentes
microorganismos para luego realizar la identificacin y posterior prueba de sensibilidad.
La destreza del bacterilogo lograda con una buena formacin en la especialidad,
permitir con la microscopa, una buena observacin y la utilizacin de pruebas mnimas
saber la forma, coloracin, metabolismo, etc, para aplicar bateras de pruebas
bioqumicas mnimas para llegar a la identificacin.
Muchos bacterilogos no pueden acceder a mtodos rpidos y automatizados, de
biologa molecular y protemica dado que trabajan en centros pequeos, de baja
complejidad o laboratorios privados, sin embargo la buena formacin del bacterilogo
clnico y la experiencia harn que puedan hacer correctos diagnsticos aun con mtodos
convencionales.
Aquellos que adems cuenten con las nuevas metodologas diagnsticas sabrn
aprovechar sus fortalezas y tener en cuenta sus limitaciones.
Mtodos rpidos y automatizados
Dra. Emilce Mndez
Durante los ltimos aos, mientras la automatizacin se diseminaba en las reas de
qumica y hematologa de los laboratorios clnicos, la microbiologa haba sido excluda.
Numerosos factores contribuyeron a este hecho: se consideraba que la microbiologa era
compleja para automatizar, que los costos resultaran elevados y que ningn aparato

sera capaz de reemplazar al hombre en dicha especialidad ya que las mquinas son
programables y los hombres flexibles. No obstante desde hace 30 aos, los cambios
tecnolgicos que han tenido lugar en microbiologa clnica exceden los ocurridos en los
ms de 100 aos de existencia de ella.
Un hecho importante surge cuando aparecen los equipos comerciales para detectar
antgenos en muestras clnicas (suero, lquido cefalorraqudeo, orina, fauces, exudados
genitales, etc) o para confirmar aislamientos de distintos microorganismos. Estas tcnicas
proveen resultados rpidos y permiten decisiones teraputicas inmediatas pero tienen
limitaciones; por esta razn, el microbilogo, al momento de elegir cualquiera de estos
mtodos, debe conocer la sensibilidad, especificidad y valor predictivo de cada uno de
ellos.
A mediados de la dcada del '80 se instala, en la microbiologa clnica, la automatizacin
comenzando con los sistemas de monitoreo continuo de los cultivos de sangre. Sin
embargo, las bases cientficas del procesamiento del hemocultivo continan vigentes:
volumen sangre vs. medio de cultivo, uso de 2 botellas (como mnimo), momento de la
toma de muestra, asepsia de la piel, presencia de cogulos y se debe tener en cuenta que
ningn medio o equipo comercial es capaz de detectar todos los patgenos. Lo que no es
menos importante es la interpretacin adecuada del microbilogo al observar el
crecimiento cuando se subcultivan los frascos positivos.
Posteriormente aparecen los sistemas para identificacin de bacterias y deteccin de
sensibilidad de ellas frente a los antimicrobianos. Estos aparatos tienen numerosas
ventajas sobre los mtodos tradicionales: identifican gran diversidad de bacterias en
menos tiempo usando menor cantidad de insumos (medios de cultivo, placas, tubos, etc,)
y si bien tienen un alto costo inicial, finalmente resultan menos onerosos que los mtodos
tradicionales cuando se dispone de un gran volumen de trabajo. Proporcionan adems, la
concentracin inhibitoria mnima de los antimicrobianos frente a las bacterias. Poseen
algunas limitaciones: incapacidad de detectar todos los microorganismos de importancia
clnica (por no estar en su base de datos), dificultad para diferenciar bacterias muy
relacionadas, problemas en descubrir algunos fenotipos de resistencia y, si el antibitico
seleccionado para un tratamiento no est en el programa del sistema, se debe recurrir al
mtodo de difusin con discos para su ensayo.
Se discutirn algunos casos clnicos de nuestra experiencia aplicando metodologa
manual y automatizada.
En conclusin, la tecnologa disponible actualmente en los laboratorios de microbiologa
clnica ha cambiado el ritmo y la organizacin del trabajo; pero, todos los investigadores,
an los ms reconocidos coinciden en que no existe sistema experto que reemplace la
observacin humana del crecimiento del microorganismo, la interpretacin de los
resultados segn la sintomatologa clnica de cada paciente y la buena comunicacin
entre el mdico tratante o infectlogo con el microbilogo clnico.
Biologa molecular y protemica
Mario Vilar
El advenimiento de las nuevas tcnicas de biologa molecular y protemica en
microbiologa clnica no solo ha incrementado la sensibilidad, especificidad y velocidad en
la deteccin de microorganismos patgenos. Su creciente simplificacin operativa, los
sistemas comerciales cerrados facilitan la implementacin sin requerimientos de
infraestructura demasiado exigentes, han permitido que se vuelvan accesibles a muchos
laboratorios, por lo que en los ltimos aos se ha ampliado de manera constante su
difusin y las prestaciones que brindan. Todo ello ha llevado a que sea necesario que el

microbilogo moderno deba replantear los paradigmas clsicos, ante el enorme espectro
de posibilidades que se abren. Y no solo se trata de modificar la modalidad de trabajo
dentro del laboratorio, sino comenzar a pensar la microbiologa y el rol de microbilogo de
una manera diferente. Existe cierta tendencia a pensar que lo nuevo debe reemplazar a
lo viejo, en una simplificacin ligera de una realidad mucho ms compleja. El desafo del
futuro se presenta esencialmente para el profesional que debe adaptarse a las nuevas
metodologas diagnsticas, que no necesariamente se contraponen o desdean las
tradicionales, pero que requieren, en ocasiones, de nuevos criterios de interpretacin de
los resultados obtenidos. Ante esta nueva perspectiva, es fundamental que se pueda
valorar con precisin cules son los verdaderos beneficios y cules las limitaciones de
cada una de las herramientas disponibles en un laboratorio moderno, desde un punto de
vista prctico y objetivo, para que el microbilogo determine qu lugar ocupa cada una de
ellas en su tarea diaria, las complemente y logre optimizar su rendimiento para lograr un
diagnstico de calidad en tiempo y forma.
Aplicacin de estas herramientas bajo la visin infectolgica
Dr. Dario Quinodoz
Cuando analizamos la evolucin histrica de los mtodos diagnsticos en microbiologa, y
nos introducimos en las nuevas metodologas: mtodos rpidos y automatizados, biologa
molecular, protemica y genmica, con todas las aplicaciones posibles de las mismas, lo
primero que podemos esbozar, es, que estamos frente cambio de paradigma, mediado,
en este caso, por la tecnologa. Esta situacin nos plantea un importante desafo.
Por qu un desafo? Porque en muchas oportunidades las decisiones mdicas, se toman
basadas en un nivel de incertidumbre inaceptablemente alto, puntualmente en la
prescripcin de drogas antimicrobianas existe una enorme variabilidad y arbitrariedad,
con los consecuentes efectos negativos a nivel de morbimortalidad, resistencia y costos.
Cul es el desafo? Que la informacin generada por estas nuevas tecnologas,
disminuyan el nivel de incertidumbre en el diagnstico etiolgico , y permitan conocer
rpidamente perfiles de sensibilidad y mecanismos de resistencia de los agentes
causantes de infecciones prevalentes y no prevalentes, sobre todo infecciones graves,
o difciles de tratar, como sepsis, endocarditis, infecciones del sistema nervioso central,
neumona asociada a ventilacin mecnica, o en huspedes especiales, pacientes
crticos, transplantados , neutropnicos , VIH/SIDA, y , que a partir de all , se produzcan
cambios en las prcticas de uso de antibiticos, adecuando: indicaciones, dosis, y
duracin de los tratamientos.
Frente a esta situacin ser necesario mantener una estrecha comunicacin con el
microbilogo, para que los resultados puedan ser adecuadamente interpretados, y
jerarquizados en la toma de decisiones teraputicas , o , en el contexto de la aplicacin
de medidas de prevencin de infecciones hospitalarias.
En el futuro, con la mayor utilizacin de estas tecnologas disminuirn sus costos,
permitiendo la incorporacin de las mismas en forma ms extensa. Esto generar nuevos
datos: epidemiolgicos, etiolgicos, y de resistencia, que van a impactar en la elaboracin
de guas clnicas y protocolos de tratamiento. Ese, an, es un camino a transitar.
Aproximadamente 50-60%, de infecciones
graves sin diagnstico etiolgico
Amplia variabilidad en los criterios teraputicos

Diagnstico etiolgico en la mayora de los

casos
Mejora del uso de antibiticos utilizando
parmetros de PK/PD

Uso excesivo de antibiticos de amplio

espectro.
Resultados tardos de cultivos y sensibilidad: no
modificacin de tratamientos iniciales
Tratamiento prolongados innecesariamente
Problemas crecientes de resistencia
Costos en expansin

Resultados rpidos: tratamientos dirigidos

desde el inicio de los mismos

Adecuacin duracin de los tratamientos

Minimizacin del impacto sobre la resistencia
bacteriana
Redireccionamiento de recursos y contencin
de costos

Del Gram al
Malditof

Mesa Redonda: Infertilidad y esterilidad de origen infeccioso en la pareja.

Metodologas actuales para su investigacin
Sbado 16 de agosto 08:30 a 10:00

Enfoque infectolgico de la mujer con problemas de infertilidad

Alicia Farinati
La infertilidad es una enfermedad? Est causada por mltiples causas que derivan en
una funcin anormal del sistema reproductivo como el bloqueo de las trompas o conteos
bajos de espermatozoides.
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) define a la infertilidad como la inhabilidad
para concebir a un nio. Una pareja puede ser considerada infrtil si, despus de dos
aos de mantener regularmente relaciones sexuales sin contracepcin, la mujer no
deviene embarazada. La Primaria es cuando la pareja no tuvo nunca un nio; la
secundaria es la falta de concepcin despus de haber tenido previamente un embarazo.
Tambin deberamos considerar dentro de estos problemas las secuelas severas que
pueden aparecer en un neonato con compromiso de por vida o bien la muerte perinatal.
La infertilidad puede ser causada por infeccin en el hombre o en la mujer pero a menudo
no existe una causa obvia subyacente
La infertilidad femenina puede ser causada por procesos infecciosos relacionados
Factores vaginales y cervicales
Infeccin plvica o enfermedad inflamatoria plvica (EIP).
Cicatrizacin a raz de infeccin de transmisin sexual,
Trastornos de autoinmunidad ,
La denominada infertilidad inexplicada que es del 10% podra deberse a causas
infecciosas por mimetismos moleculares pero aun no se han dilucidado. Desde el punto
de vista infectolgico podemos ubicar a la mayora de las causas dentro del grupo de la
patologa tubrica y plvica que representa aproximadamente el 40% de las causas.
a-Factores vaginales y cervicales
Cambios en el pH vaginal que pueden reducir la movilidad espermtica

 Alteraciones en el mucus que pueden bloquear el ingreso espermtico

Aglutinacin espermtica por presencias de factores alrgicos
b-Infeccin plvica o enfermedad inflamatoria plvica (EIP).
Esta patologa debe ser considerada polimicrobiana pero los principales microorganismos
quie la producen son Neisseria gonorrhoeae y Chlamydia trachomatis, acompaados o no
con otros integrantes ya sea de la microbiota vaginal o exgenos
Chlamydia trachomatis causa aproximadamente el 75% de infertilidad relacionada con las
trompas y el resto Neisseria gonorrhoeae. Recordemos que hasta el 60-70% de las
infecciones por Chlamydia son asintomticas, de manera que el diagnstico precoz puede
prevenir efectos posteriores . Por lo tanto se pueden establecer niveles de prevencin: 1prevencin de las infecciones antes de que ocurran (educacin) 2-diagnosticar y tratar
sinto y asintomticas antes del desarrollo de las complicaciones en la adolescencia y
mujeres jvenes, principalmente en los grupos de mayor riesgo, mediante tcnicas de
tamizaje con mtodos moleculares. El estudio de C.trachomatis debe hacerse con la
investigacin de la bacteria en el endocervix o bien en materiales provenientes del tracto
genital superior y mediante la deteccin de anticuerpos (Ac). Los Ac sricos contra
determinados antgenos (Ag) han sido correlacionados con la severidad de la infeccin
pero no con el carcter protectivo .Los Ac contra el Ag 60-kDa (heat shock protein o
Hsp60) son muy elevados en pacientes con infecciones complicadas comparados con los
de las mujeres sin complicaciones. En contraste el nivel de Ac anti IgA ha sido
correlacionado con inmunidad protectiva frente a Ct y sus secuelas.
Otra de las causas infecciosas que se deben mencionar es la tuberculosis, abortos no
estriles y rotura apendicular
c-Infecciones de transmisin sexual diferentes de C.trachomatis y N.gonorrhoeae
Como C.trachomatis y N.gonorrhoeae hay otras ITS que son silentes y pueden provocar
problemas para lograr el embarazo o si se produce, ocasionar su prdida: VIH, sfilis,
hepatitis B y C, HPV, herpes virus.
d-Infecciones del tracto genital inferior endgenas
La vaginosis bacteriana puede provocar abortos , particularmente en el primer trimestre,
Muchas de las patologas mencionadas no son causa estricta de esterilidad pero pueden
contribuir a la infertilidad o provocar severas consecuencias neonatales
En cuanto a Mycoplasma spp hay muchas dudas pero se le puede atribuir algn rol a
M.genitalium que deberamos considerar una ITS emergente.

Enfermedad

Recomendaciones del CDC

Clamidiasis (Ct)

Tamizaje en todas las mujeres en la primera visita prenatal,

retamizaje en el tercer trimestre si es menor de 25 aos y en
todas las mujeres con factores de riesgo importantes (FR).
Esterilidad e infertilidad

Gonorrea (Ng)

Tamizaje a todas las mujeres con FR en la primera visita

prenatal, en el tercer trimestre si continan los FR. Estos
incluyen: <de 25 aos, vivir en zonas de gran morbilidad,
infeccin previa con Ng,u otras ITS, pareja nueva, mltiples
parejas o uso inconsistente de preservativo, trabajadora sexual,
drogadiccin ). Esterilidad

Sfilis (T.pallidum)

Tamizaje a todas las mujeres en la primera visita prenatal, en el

tercer trimestre y todas aquellas que no fueron estudiadas
previamente o fueron positivas en el primer trimestre. Infertilidad

Vaginosis bacteriana

Tamizaje prenatal , al finalizar el primer trimestre y cuando haya

signos y/o sntomas durante el embarazo. Esterilidad e
infertilidad

Tricomoniasis
(Trichomonas
vaginalis )

Investigar si hay sntomas o FR . Se describe en esterilidad e

infertilidad

Herpes (HSV)

Investigar si hay sntomas

HIV

Tamizaje a todas las mujeres previamente al embarazo y durante

el mismo si hay FR. No suele ser causa de aborto.

Hepatitis B

Tamizaje en todas las mujeres en la primera visita prenatal.

Retamizaje a todas las que no hayan sido estudiadas
previamente en el perodo prenatal. Los FR incluyen: haber
tenido ms de una pareja en los 6 meses previos, tener o haber
tenido una ITS, adicta intravenosa y pareja HBsAg-positiva . No
suele ser causa de abortos

Papiloma virus
humano (HPV)

No hay evidencias para emitir una recomendacin

Hepatitis C

Tamizaje a todas las mujeres con FR en la primera visita

prenatal. No suele ser causa de abortos.

Infecciones seminales en el varn infrtil. Diagnstico y tratamiento

Dr. Jorge Santoianni
No ha sido fehacientemente demostrado que la infeccin sea causa directa de infertilidad,
sin embargo es un factor de morbilidad que puede alterar las caractersticas fisiolgicas
del semen ya sea actuando sobre el soporte seminal y/o los espermatozoides dando
como resultado un semen de pobre calidad. Dado que los pacientes no manifiestan
ninguna sintomatologa, se determin que ante un espermograma alterado, con o sin
leucocitospermia, cabe interrogarse si existe una etiologa infecciosa subyacente, o si
estamos frente a los efectos persistentes de una infeccin silenciosa previa.
Determinadas infecciones bacterianas tales como las producidas por Neisseria
gonorrhoeae, Mycobacterium tuberculosis y Chlamydia trachomatis, estn relacionadas
con infertilidad masculina. Este fenmeno es menos claro con otros microorganismos que
colonizan la uretra anterior y pueden llegar a ser agentes etiolgicos de infecciones
seminales.
La muestra ideal debera ser estril, y esto podra lograrse slo a travs de
tcnicas invasivas tales como biopsias y puncin aspiracin, donde la muestra del tejido
es cultivada. Dado que la mayora de los pacientes rechazan estos procedimientos la
nica forma de hacer el diagnstico es por medio de mtodos indirectos como el cultivo
de semen o la tcnica de las cuatro muestras descripta por Stamey y Meares con el
agregado de semen (SM+semen), ambas recomendadas por la OMS.
Espermocultivo: se considera una muestra positiva aquella cuyo conteo de
colonias es 103 UFC/ml de bacterias de patogenicidad reconocida o 104 UFC/ml de
bacterias potencialmente patgenas y solamente una especie aislada. SM+semen: Se
consideran positivos el lquido prosttico o semen cuando: 1- sus conteos de colonias son
1 log10 con respecto a los conteos de la orina de la primera porcin, 2- cuando la

secrecin prosttica no es obtenida, los conteos de colonias de la orina post masaje

prosttico son 1 log10 con respecto a los conteos de la orina de la primera porcin.
Nosotros hemos evaluado los resultados de ambas metodologas en 218
pacientes y no encontramos diferencias significativas, pero si riesgos estimados de no
diagnosticar una prostatitis o sobrediagnosticar una infeccin seminal. El cultivo de semen
correlacionado con la orina uretral es el mejor que el espermocultivo para diagnosticar
estas infecciones (mtodo de screening), pero cuando una prostatitis crnica es altamente
sospechada es necesario realizar el cultivo del lquido prosttico u orina post masaje
prosttico.
Nuestro primer agente etiolgico es Ureplasma urealyticum seguido por Enteroccus
faecalis, pero cualquier microorganismo puede llegar a ser agente etiolgico de estas
infecciones.
El tratamiento antibitico es tan o ms complicado que un buen diagnstico. El problema
son las barreras hemato-prosttica y hemato-epididimal que solo permiten el paso de
determinados antibiticos que no siempre son los ideales frente a los agentes etiolgicos
hallados.
Los antibiticos que atraviesan estas barreras son: fluoroquinilonas,
tetraciclinas, macrlidos y trimetoprima-sulfametoxazol. El otro factor importante es el
tiempo de duracin del tratamiento que en nuestra institucin est establecido en 12
semanas. Nosotros hemos demostrado que utilizando los antibiticos adecuados durante
ese tiempo el 83% de los pacientes de grupo de 70, alcanzaron la cura bacteriolgica y
mejoraron sus parmetros seminales.

Genotipos de Chlamydia trachomatis asociados a la infertilidad

Dra. Cecilia Cuffini
La infertilidad se define como la incapacidad de completar exitosamente un
embarazo despus de un tiempo razonable (1 ao) de relaciones sexuales sin medidas
anticonceptivas. La infertilidad es una condicin que afecta al 15- 20% de las parejas en
edad reproductiva. Las infecciones de transmisin sexual pueden causar infertilidad
secundaria; la bacteria Chlamydia trachomatis se encuentra dentro de los patgenos de
transmisin sexual ms frecuentes. En mujeres puede producir: uretritis, cervicitis,
endometritis, salpingitis y en varones: uretritis no gonocccica y prostatitis, entre otras.
Durante el parto, si la infeccin se transmite al neonato; l puede presentar conjuntivitis y
neumona. El 50% de los varones y el 70% de las mujeres infectados son asintomticos,
esto perpeta la transmisin y favorece la persistencia de la infeccin; lo cual puede
afectar la fertilidad de la pareja, ya que produce obstruccin tubrica y alteraciones de los
parmetros espermticos.
A partir del estudio del gen ompA que codifica para la protena mayor de
membrana externa, especfica de cada especie clamidial, se identificaron los genotipos de
C.trachomatis; A, B, Ba y C asociados al tracoma; D, Da, E, F, G, H, I, Ia, J y K a las
infecciones del tracto genital y del neonato, mientras que L1, L2, L2a y L3 al
linfogranuloma venreo (LGV). Los genotipos D, E y F son los ms prevalentes a nivel
mundial; en este sentido nuestras investigaciones tambin lo confirmaron en jvenes
adultos asintomticos de nuestra regin. Asimismo varios estudios han evaluado si
diferentes genotipos estn asociados al curso de las infecciones por C. trachomatis; de lo
cual surgi que los genotipos F y K se asociaron con un curso sintomtico, mientras que
el genotipo Ia se detect slo en mujeres asintomticas. Las infecciones persistentes por
C. trachomatis se observaron con ms frecuencia con los genotipos D y E. Curiosamente,
a pesar del tratamiento antimicrobiano especfico, los genotipos H, I y J pudieron persistir

durante 2 o 3 aos en el tracto genital inferior de las mujeres.

En un modelo animal, la
mayor duracin de la infeccin del tracto genital inferior fue con los genotipos D y E, y la
infeccin del tracto genital superior ocurri ms fcilmente en los animales infectados con
el genotipo D.
Aunque son escasos, existen reportes de la deteccin de los genotipos F, E, G, K,
L1 y L2 de C.trachomatis en pacientes que consultaron por infertilidad; cabe destacar que
ninguno de los individuos presentaba un cuadro clnico compatible con LGV.
Estudios sobre la asociacin entre diferentes genotipos de C.trachomatis, curso
clnico y el resultado de la enfermedad, son relevantes no slo en el campo de la fertilidad
sino tambin en el campo de la oncologa. Se ha reportado que la exposicin a ciertos
genotipos de C.trachomatis (G, I y D) est asociada con el desarrollo de carcinoma de
clulas escamosas del cuello del tero.
La identificacin de C.trachomatis a partir de muestras clnicas es necesaria a fin
de tratar y erradicar la infeccin con el tratamiento antimicrobiano especfico. Los estudios
epidemiolgicos moleculares indicaron que los genotipos D, E y F de C. trachomatis son
los ms frecuentes a nivel mundial y seran los considerados en el futuro desarrollo de
una vacuna basada en la protena mayor de membrana externa.

Mesa Redonda: Cmo transformar las prcticas de microbiologa clnica

para enfrentar los bacilos gram negativos con resistencias extremas?
Sbado 16 de agosto de 10:15 a 12:00
Pseudomonas putida, la precuela: como se convirti en un reservorio de genes de multiresistencia transferibles.
Dra. Patricia Marchiaro
Pseudomonas es un gnero que exhibe una elevada diversidad, y es as que su
taxonoma est en permanente cambio. Los miembros de este gnero poseen una
notable versatilidad metablica lo que les permite la colonizacin de diversos hbitats
terrestres y acuticos. La caracterizacin taxonmica del gnero es relevante dada su
asociacin a enfermedades en plantas y en el hombre, as como a la aplicacin en
diversos procesos biotecnolgicos. El genoma accesorio de Pseudomonas incluye
numerosos elementos genticos como plsmidos, fagos, transposones e islas genmicas,
y presenta un rol significativo en los procesos de patognesis y de resistencia antibitica.
Particularmente, el grupo P. putida est integrado por diversas especies ambientales que
raramente provocan infecciones en el hombre y ha sido hipotetizado que constituiran un
reservorio de genes de resistencia. Recientemente hemos identificado un entorno
gentico novedoso para el gen codificante de la metalo--lactamasa blaVIM-2 en un
aislamiento clnico local correspondiente al grupo P. putida. Este gen se halla inserto en
un integrn/transposn portador de blaVIM-2 que presenta la maquinaria completa de
transposicin inserto a su vez en un plsmido conjugativo (pHP209). El anlisis de la
secuencia completa de este plsmido mostr una organizacin gentica modular,
caracterstica de plsmidos conjugativos. Cada mdulo se halla integrado por genes
agrupados para cumplir funciones de replicacin, particin y transferencia conjugativa, as
como de adaptacin a la presin de seleccin antimicrobiana; todos ellos derivados en su
mayora de plsmidos de bacterias ambientes. As, el anlisis de las secuencias de los
mdulos de propagacin y particin sugirieron de que plsmidos recuperados de bacterias
fitopatgenas (i.e. Xanthomonas albilineans) constituiran el origen evolutivo ms probable
de ambos mdulos. Por su parte, el mdulo de replicacin se hallara relacionado

evolutivamente a mdulos correspondientes a plsmidos de bacterias recuperadas de

aguas residuales. El conjunto de los resultados sugiere el ensamble del pHP209 como
estructura mosaico, proceso mediado por el pasaje del mismo por diferentes bacterias
hospedadoras, con las cuales puede compartir temporariamente diferentes nichos
ambientales y que aportan as diferentes huellas genticas. Ensayos de conjugacin
demostraron la capacidad de este plsmido de replicar en patgenos del hombre, como
Escherichia coli y P. aeruginosa siendo una evidencia de la capacidad de adaptabilidad de
la plataforma gentica hallada. Los resultados de este trabajo han mostrado la
potencialidad de este microorganismo ambiental para establecer una interesante
interrelacin entre bacterias ambientales y bacterias patgenas para el hombre,
constituyendo as una bacteria capaz de intercambiar elementos genticos de bacterias
de suelo, agua o plantas, y ensamblar asimismo genes de resistencia (provenientes de
otras bacterias ambientales u oportunistas para el hombre). Estudios ms recientes de
nuestro laboratorio identificaron en cepas de diferentes regiones de nuestro pas
plsmidos estrechamente relacionados con pHP209, todos portadores de blaVIM-2.
Estudios moleculares sealan que estas cepas corresponden a diferentes especies del
grupo P. putida, as como a diferentes clones de las especies halladas. Los resultados
sealan la capacidad de ensamblar plataformas genticas mviles que se diseminan entre
especies del grupo, y potencialmente a otros patgenos del hombre; aportando evidencias
de que el grupo P. putida constituira un reservorio de genes de resistencia en la
naturaleza.
Fenotipos inusuales de mecanismos de resistencia crticos no incluidos en las
recomendaciones actuales: cundo creer en ellos?
Dra. Celeste Lucero
La resistencia a carbapenemes en enterobacterias ha ido en aumento a nivel mundial en
los ltimos aos, representando un gran problema para los sistemas de salud debido a la
falta de opciones teraputicas para tratar infecciones producidas por estos grmenes
multirresistentes. Argentina, no escapa a esta realidad, la resistencia de los aislamientos
de Klebsiella pneumoniae a los carbapenemes ha aumentado de un 0% en el ao 2000 a
11% en 2012. Estos datos surgen de los resultados de las pruebas de sensibilidad
cargados en el software Whonet por ms de 90 hospitales que forman parte de la Red
Nacional de Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos, Red Whonet-Argentina.
En 2006, se detect en nuestro pas, la primer serincarbapenemasa tipo KPC en
enterobacterias (una coinfeccin con K. pneumoniae y Citrobacter freundii), en 2008 las
primeras metalocarbapenemasas en Providencia retgerii y Enterobacter cloacae (del tipo
VIM e IMP respectivamente) y en es mismo ao ocurri el primer hallazgo de
carbapenemasa de clase D ( OXA-163) en K. pneumoniae y Enterobacter cloacae. Estos
hallazgos desencadenaron que desde el Laboratorio Nacional de Referencia en
Antimicrobianos (Servicio Antimicrobianos, INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn), se
emitieran alertas advirtiendo de la presencia de aislamientos con estas caractersticas
circulando en nuestro pas y se disearan y publicaran algoritmos para que los
laboratorios clnicos pudieran detectar este tipo de aislamientos. Dichos algoritmos se
basan principalmente en un tamizaje inicial con la sensibilidad a los carbapenemes
(sospecha de carbapenemasa en enterobacterias: imipenem 22mm, y en Pseudomonas
aeruginosa: resistencia a ceftazidima y halo de meropenem 23mm ). Estos puntos de
corte de sospecha de carbapenemasas se complementan con la particularidad de las
distintas clases de carbapenemasas de ser inhibidas por dervidados del c. bornico
(KPC) , EDTA u otros quelantes de zinc (MBL) o ninguno de ellos (OXAs).

La gran mayora de las carbapenemasas son captadas por estos algoritmos, pero en los
ltimos tiempos han surgido enzimas con nuevas caractersticas. Un ejemplo de esto son
las carbapenemasas del tipo OXA-48, principalmente su variante OXA-163, que
generalmente presenta sensibilidad a imipenem ( 65 % de los casos); otro ejemplo son
Enterobacterias con KPC que excepcionalmente pueden presentarse con sensibilidad a
este carbapenem e incluso se han encontrado Enterobacterias con KPC sensibles a
ertapenem (0,1% de los casos). En estos casos se debe tener mucha pericia en la
interpretacin de los resultados y buscar nuevos abordajes del algoritmo que permitan su
reconocimiento. Del mismo modo, la emergencia de MBL en huspedes insospechados y
de difcil tipificacin por los mtodos fenotpicos habituales, como por ejemplo la
produccin de MBLs en Pseudomonas chlororaphis o Pseudomonas oleovorans, etc,
presenta nuevos desafos no contemplados en los algoritmos diseados para otra especie
del gnero (Pseudomonas aeruginosa).
La epidemiologa dinmica y la rpida evolucin de los determinantes de resistencia as
como la emergencia de nuevas especies con capacidad patgena extendida al ser
humano y la diseminacin de clones exitosos resultan un desafo para las
recomendaciones actuales y exigen la revisin y actualizacin peridica de los
estndares para la bsqueda de estos grmenes con resistencia extrema.
Pruebas de diagnstico rpido para la deteccin fenotpica de carbapenemasas en el
mismo da laboral: para todos los gustos (y costos)
Dr. Fernando Pasteran
El manejo teraputico de las bacterias productoras de carbapenemasas resulta complejo
y desafiante. Entre los factores que han sido independientemente asociados con mayor
sobrevida de los pacientes con estos procesos infecciosos, se encuentran el uso de
ccteles de antimicrobianos y la rapidez para instalar el tratamiento definitivo. La ventana
teraputica ptima resulta cada vez ms estrecha, con reportes bibliogrficos sugiriendo
mayores beneficios teraputicos cuando el tratamiento definitivo (basado en la
documentacin microbiolgica) se instala dentro de las primeras 24 horas de inicio de los
sntomas. El uso de mtodos que son capaces de detectar rpidamente la resistencia a
antibiticos tendrn el potencial de reducir la duracin de la terapia emprica y facilitar el
inicio temprano de tratamiento dirigido con actividad antibitica demostrada contra el
agente causante de la infeccin. Adems, las pruebas de resistencia antimicrobiana
rpida puede contribuir a la reduccin de los costos sanitarios, dado estudios que
muestran que la pronta disponibilidad de informacin de susceptibilidad a los antibiticos
puede reducir el nmero de pruebas de laboratorio, la cantidad de procedimientos
invasivos realizados, reducir la permanencia hospitalaria y limitar tempranamente la
diseminacin de grmenes multi-resistentes. Los mtodos tradicionales para las pruebas
de sensibilidad a los antimicrobianos de los microorganismos de importancia mdica
(difusin por discos, dilucin en agar, micro-dilucin) no sobrevivirn a la microbiologa
diagnstica que requiere esta maduracin rpida de la teraputica clnica. Una nueva
generacin de mtodos ser necesaria para este desafiante escenario. Los progresos
tecnolgicos en este campo han dado luz a una nueva progenie de mtodos (no
moleculares), que se los puede clasificar en dos grandes grupos: 1) Aquellos capaces de
detectar en el mismo da laboral mecanismos de resistencias crticos, como por ejemplo,
la produccin de carbapenemasas. Entre estas tcnicas se destacan los progresos de los
mtodos colorimtricos basados en la hidrlisis del anillo beta lactmico (Carba-NP, Bluecarba; tiempo de deteccin: 5 a 2 hs), inmuno-cromatogrficos (IMP-chaser: 5-15),
mtodos basados en el metabolismo celular (placas colorimtricas con colorantes vitales:

4 hs-6 hs), deteccin de productos de degradacin de antibiticos beta lactmicos

(MALDI-TOF: 30-2 hs), microscopia HD de alta resolucin (15-30). Estas tcnicas
predicen la presencia o ausencia de mecanismos de resistencia, sin embargo, no
proporcionan valores de CIM a los agentes antimicrobianos que puede ser til para guiar
las decisiones clnicas en relacin con la terapia. 2) Nueva generacin de mtodos de
CIM, capaces de producir valores de CIM en breves tiempos: microscopia en tiempo real
(tiempo para el resultado: 5-30), monitoreo continuo del recuento bacteriano (citometra
de flujo: 30-90), sensores de pH en micro-fluidos (< 1 minuto), monitoreo cuantitativo del
crecimiento bacteriano (MALDI-TOF con- MSR- o sin-MS_ASTRA- el uso de istopos
marcados: 2 hs-3 hs) y otros en progresin (micro-calorimtria isotrmica, medidas de
impedancia, crecimiento o conversin de sustratos en micro-gotas, deteccin de cambios
en spines magnticos, deteccin de marcadores de apoptosis, de respiracin celular
activa, de compuestos voltiles por narices electrnicas, medicin del micro-sonido, etc).
Toda esta nueva tecnologa contribuir significativamente en el diagnstico de las
enfermedades infecciosas. Y varias de ellas podran estar funcionando en nuestros
laboratorios en un futuro, cada vez mas cercano.

TRABAJOS CIENTFICOS POSTERS

P - 001
rea: Antimicrobianos en clnica
Autores: Semeshchenko D, Marques M, Santaluca M
Institucin: Ctedra de Microbiologa y Parasitologa , Facultad de Medicina , Universidad del
Salvador

INFLUENCIA DE LA CLINDAMICINA SOBRE EL EXOPOLMERO DE BIOPELCULAS

DE Candida spp EN LA COMBINACIN DE CLINDAMICINA-KETOCONAZOL
La vagina ha sido usada como una mucosa para la administracin de diversos tipos de
drogas entre ellas los antimicrobianos (AM) para el tratamiento de las infecciones del
tracto vaginal (ITV) en mujeres gestantes y no gestantes. Candida albicans (CA) y
especies no albicans de Candida (CNA) figuran entre los patgenos relevantes de las
mismas y forman biopelculas (BP) recalcitrantes. Su formacin es un proceso complejo
que requiere que las clulas fngicas establezcan mltiples interacciones con el medio.
Los exopolmeros (EPM) que rodean a las BP pueden restringir la actividad de
anticuerpos, la difusin de sustancias y unirse a los AM solos o combinados limitando su
accin. Muchas formulaciones de uso comn usan antibacterianos y antimicticos no
siempre acertados para el tratamiento emprico de las ITV. Objetivo: demostrar el impacto
de clindamicina sobre las BP de CA y de CNA cuando se usa simultneamente con
ketoconazol en preparaciones de uso local para ITV.
Materiales y mtodos: estudiamos la actividad de clindamicina-ketoconazol (CK) sobre la
adherencia y dispersin de BP de 8 aislamientos vaginales de CA y 7 de CNA. Se
inocularon en 3 tubos con caldo Sabouraud y un dispositivo de vidrio para la formacin de
la BP segn tcnica ya descrita. Adherencia: Se incubaron 6 horas y se agreg una
combinacin de CK proveniente del material de vulos, diluido convenientemente
(62.5/260.4 ug/ml), a uno de los tubos de cada aislamiento tomndose como hora 0.
Dispersin: esa misma dilucin se agreg a otro tubo a las 16 horas. El tercer tubo qued
como testigo sin antimicrobianos. La lectura se efectu con microscopio ptico a las 24
horas de agregada la combinacin CK previa tincin con cristal violeta, se fotografiaron
con cmara digital y se evaluaron mediante un software adecuado. Se efectu la
comparacin con el uso por separado de clindamicina y de ketoconazol con las mismas
concentraciones y el mismo sistema . Resultados. Adherencia se demostr poca
influencia de CK en la adherencia con respecto a cada testigo. Dispersin: la influencia de
CK se demostr en la mayora de los aislamientos particularmente en los de CNA que
mostraron una mayor presencia de EPM. Las hifas slo se observaron en 1/15 de los
aislamientos de Candida spp cuando se agreg CK a las 16 horas, pero en 8/15 cuando
se us ketoconazol solo. La clindamicina agregada como nico AM provoc notablemente
la modificacin de la estructura microscpica del EPM en 6/8 de CA y en 5/7 de CNA.
Conclusiones: segn estos resultados el uso de una combinacin de CK en BP de
Candida spp, sera ms til que el uso del ketoconazol solo debido a que la clindamicina,
aunque lgicamente no ejerza actividad antimicrobiana en este tipo de BP, facilitara la
penetracin del ketoconazol mediante la alteracin de EPM. In vivo promueve la actividad
inmunomoduladora que no se puede demostrar con este modelo in vitro.

P - 002
rea: Antimicrobianos en clnica
Autores: Gianecini R1, Oviedo C1, Vacchino M1, Littvik A2, Montibello S2, Galarza P1
Institucin: 1- Centro Nacional de Referencia en Enfermedades de Transmisin Sexual. INEIANLIS Dr. Carlos G. Malbrn 2- Programa Nacional de Vigilancia de la Sensibilidad
Antimicrobiana de Gonococo (PROVSAG).

Reporte de los primeros aislamientos de Neisseria gonorhoeae portadores de TEM-135

en plsmidos Toronto y Africano en la Repblica Argentina
En 1976 se describi la presencia de cepas N. gonorrhoeae (Ng) con elevada resistencia
a penicilina mediada por plsmidos. Estas fueron denominadas Ng Productoras de
Penicilinasa (PPNG) y posteriormente detectadas mundialmente. El anlisis molecular de
estos plsmidos revelo la presencia de una -lactamasa (BL) tipo TEM-1 codificada por el
transposon TnA (Tn2), responsable de la transferencia y diseminacin de la resistencia.
La diferencia en el tamao molecular permiti diferenciarlos y fueron nombrados de
acuerdo a su origen epidemiolgico como Africano, Toronto, Asitico y Johannerburgo. En
2009 se report una cepa Ng portando la BL TEM-135. Esta enzima se diferencia de
TEM-1 por la presencia de una mutacin en posicin 539, resultando en la sustitucin de
un aminocido (M182T). Si bien esta sustitucin no incrementa la actividad de la enzima,
es encontrada en BL tipo TEM de espectro extendido como sustitucin secundaria
estabilizando sustituciones cercanas al sitio activo. En este contexto la presencia de TEM135 en aislamientos de NG puede ser un prerrequisito a permitir sustituciones
subsecuentes la cual podra extender el espectro de resistencia de la enzima.
Evaluar la presencia y distribucin de aislamientos portadores de TEM-135 en los aos
2008 y 2012.
Se estudiaron 49 PPNG del ao 2008 y 92 del 2012, derivadas por el PROVSAG para
estudios de susceptibilidad. Se determin la CIM a penicilina por CLSI y la presencia de
BL con discos de Nitrocefin. El tipo de alelo TEM se realiz mediante PCR para TEM-1 y
MAMA-PCR para TEM-135 Siete de las Ng identificadas como portadoras de TEM-135
fueron confirmadas por secuenciacin gentica. El mtodo de hervido permiti determinar
el perfil plasmdico.
Todos los aislamientos fueron BL +, el tipo de alelo TEM mostr la presencia en 2008 de
31 aislamientos TEM-1 y 18 TEM-135 y en 2012, 68 TEM-1 y 26 TEM-135. La
secuenciacin del alelo TEM-135 en 7 Ng con MAMA- PCR +, revelo la presencia de una
mutacin en posicin 539 TC. Se detect plsmido Toronto [2008: 19/49 (38,7%); 2012:
25/94 (26,6%)] y Africano [2008: 30/49 (61,2%); 2012: 69/94 (73,4%)] El tipo de BL TEM y
su asociacin con perfil plasmdico, indico plsmido Toronto con TEM-135 en 18/19 (95%)
en 2008 y 24/25 (96%) en 2012 mientras que plsmido Africano con TEM-1, 30/30 (100%)
en 2008 y 67/69 (97%) en 2012 y solo 2/69 con TEM-135.
Este estudio revela la primera evidencia de aislamientos de Ng con TEM-135 en la
Argentina. La presencia de esta enzima en aislamientos PPNG con perfil plasmdico
Africano no ha sido reportada en otras partes del mundo. La presencia de TEM-135 en los
dos tipos de plsmidos circulantes en nuestro pas y la asociacin de esta enzima como
potencial precursora de -lactamasa de espectro extendido, plantea la necesidad de
monitorear mediante estudios de vigilancia la presencia de aislamientos PPNG, tipo de lactamasa TEM y datos epidemiolgicos que permitan evaluar la distribucin de estos
aislamientos
en
la
poblacin.

P - 003
rea: Antimicrobianos en clnica
Autores: J. Antonio Grndez-Urbina; Rafael Pichardo-Rodriguez
Institucin: Instituto de Investigacin en Ciencias Biomdicas, Universidad Ricardo Palma, Lima,
Per.

Perfil Clnico del Tratamiento de Infeccin del Tracto Urinario con antibiticos de amplio
espectro en un hospital de Lima 2012.
Objetivos: Determinar el perfil Clnico del Tratamiento de ITU con antibiticos amplio
espectro en el Hospital Central de la Fuerza Area del Per, entre los meses de Agosto y
Noviembre del 2012.
Materiales y mtodos: Estudio Observacional, descriptivo, transversal realizado en el
Hospital Central de la Fuerza Area del Per, entre los meses de Agosto y Noviembre del
2012. Se tomo 71 historias clnicas de pacientes con diagnstico de Infeccin de Tracto
urinario que recibieron antibiticos de amplio espectro. Se analiz las variables con
frecuencias (cualitativas), medidas de tendencia central y dispersin (cuantitativas). Los
datos fueron procesados en el paquete estadstico STATA 11.0.
Resultados: La edad promedio fue 67.08 19.21 aos, el 61,43% (n=43) fueron varones y
el 38,57% (n=27) mujeres. El servicio con mayor prescripcin fue el servicio de
emergencia 44,29% (n=31). La comorbilidad ms frecuente fue Diabetes Mellitus (DM)
24,29% (n =17). La clnica ms frecuente fue Disuria 35,71% (n=25). El hallazgo de
laboratorio ms frecuente fue Leucocitosis 65,71% (n=46). Y se prescribi con mayor
frecuencia, Ceftriaxona 34,29% (n=24)
Conclusin: El perfil clnico del tratamiento de ITU con antibiticos de amplio espectro es
diverso, asocindose con mayor frecuencia a la presencia de antecedente de DM y
presencia clnica de disuria.
Palabras clave: Palabras clave: Infeccin del tracto urinario; tratamiento, sensibilidad
antibitica,
antimicrobiano,
Per
(fuente:
DeCS
BIREME)

P - 004
rea: Antimicrobianos en clnica
Autores: J. Antonio Grndez-Urbina; Rafael, Pichardo-Rodriguez; Sebastian, Bedoya-Vidal;
Jhonatan, Gonzalo-Rodriguez; A, Santillan-Romero; Maria, Sotelo-Alva; Gustavo, Grandez-Castillo
Institucin: Instituto de Investigacin en Ciencias Biomdicas, Universidad Ricardo Palma, Lima,
Per.

Perfil de farmacorresistencia del Mycobacterium tuberculosis en pacientes que ingresaron

a retratamiento. Madre de Dios, Per, 2007-2013
Introduccion: La tuberculosis en el Per es un problema de salud pblica. A nivel de
Sudamrica somos el segundo pas en cuanto a prevalencia despus de Bolivia y en el
continente americano somos el tercero despus de Hait y Bolivia. En el ao 2013, la
OMS informa que en el Per la Tuberculosis Multidrogoresistente (TBC-MDR) supera los
casos reportados ese mismo ao por Colombia, Ecuador, Argentina, Chile o Estados
Unidos en todo su territorio, y que ocupa el primer lugar en el reporte para TBC-MDR y
Tuberculosis extremadamente resistente (TBC-XDR). En Peru las regiones con mayor
prevalencia de tuberculosis son Lima, Callao y Madre de Dios, sin embargo no se conoce
el perfil de farmacorresistencia del Mycobacterium tuberculosis en la Regin de Madre de
Dios.
Objetivo. Determinar el Perfil de farmacorresistencia del Mycobacterium tuberculosis en
pacientes que ingresaron a retratamiento. Madre de Dios, Per, 2007-2013
Materiales y mtodos. Estudio observacional, transversal y retrospectivo. Del libro de
registro y seguimiento de pacientes con tuberculosis en retratamiento del MINSADIRESA-Madre de Dios del 2007-2013, se incluy a 111 los pacientes con diagnstico de
tuberculosis frotis (+), se les realiz pruebas de sensibilidad en el Instituto Nacional de
Salud (INS). Se utilizaron frecuencias de las variables establecidas, medidas de tendencia
central y de dispersin en las variables cualitativas.
Resultados. La frecuencia de monorresistencia fue de 33,63% (n=37), poliresistencia
9,09% (n=10), TBC-MDR 45,45% (n=50) y casos sensibles 12,72% (n=14). La frecuencia
en general de resistencias fue isoniacida 90,18% (n=92), rifampicina 79,09% (n=87),
Estreptomicina 18,18% (n=20) Etambutol 11,81% (n=13) y Pirazinamida 7,27% (n=8). Las
basciloscopias y cultivos iniciales fueron negativas en 44,6% (n=50) y 32,1% (n=36)
respectivamente. Solo 1,8% (n=2), presentaron reaccion positiva VIH.
Conclusin. En el presente estudio se encontr que existe una elevada prevalencia de
TBC resistente en los pacientes que ingresaron a retratamiento en la Region de Madre de
Dios, donde la reaccion positiva para VIH no esta relacionada con la presentacion. La
TBC-MDR es la de mayor frecuencia y la Isoniacida. El frmaco que con mayor frecuencia
gener resistencia en los pacientes con monoresistencia.
Palabras clave: Tratamiento, Tuberculosis frmacorresistente, Per (fuente: DeCS
BIREME).

P - 005
rea: Antimicrobianos en clnica
Autores: Ballerini V1,3, Marchiaro P2,3; Badano A4, Nogueras M4, Belmonte A4, Viale A3,
Limansky A2,3.
Institucin: 1Htal Carrasco, Dto Bioq Munic, Sec Salud Pblica, Munic Rosario; 2Bacteriologa,
FCByF, UNR; 3IBR (CONICET), FCByF, UNR; 4PAMI I y II, Rosario.

ENTEROBACTERIAS PORTADORAS DE CABAPENEMASAS TIPO KPC EN UN

POLICLNICO DE ROSARIO: UN ANLISIS RETROSPECTIVO
La diseminacin de cepas de enterobacterias (EB) productoras de carbapenemasas
adquiridas, como KPC, reviste elevada importancia clnica dado que estas enzimas
inactivan carbapenemes, generndose serias limitaciones teraputicas. Analizar y
controlar la diseminacin de clones especficos constituye una herramienta esencial para
prevenir, y/o erradicar dicha propagacin. Nuestro objetivo fue caracterizar
genotpicamente aislamientos de EB multirresistentes, incluyendo Klebsiella pneumoniae
(Kpn), Enterobacter cloacae (Ecl), Escherichia coli (Eco), Serratia marcescens (Sm),
Citrobacter freundii (Cfr), sospechosos de producir carbapenemasa. Se estudiaron 81
aislamientos clnicos derivados de pacientes internados en el Policlnico PAMI de Rosario
entre mayo 2011 y mayo 2014 sospechosos de producir KPC por presentar resistencia
(R) a todos los -lactmicos, incluidos carbapenemes. As, se incluyeron 72 aislamientos
de Kpn, 4 de Ecl, 2 de Eco, 2 de Sm y 1 de Cfr; los que mostraron ensayos de sinergia
positivos empleando carbapenemes y cido bornico. La identificacin bacteriana y
sensibilidad (S) se efectu mediante pruebas bioqumicas convencionales y antibiograma
por difusin, confirmados luego por Vitek. El mecanismo de R se confirm mediante PCR
especfica y secuenciacin (en algunos casos), y la caracterizacin gentica mediante
PCR con oligonucletidos degenerados (OD-PCR), y MLST (secuencio-tipo de mltiples
locus) para clones diferentes de Kpn. Por su parte, OD-PCR revel la existencia de 2
clones de Kpn: 71 pertenecientes a clon A y slo 1 a clon C, 2 clones distintos para Ecl, y
1 nico clon para Eco y Sm. Las pruebas de S mostraron que Kpn clon A present R
acompaante a amikacina, gentamicina y ciprofloxacina, mientras que clon C fue sensible
a dichos antimicrobianos. La caracterizacin gentica mostr que el clon A corresponde al
tipo de secuencia (ST) 258 y clon C a ST 1, coincidiendo con bionmeros diferentes
obtenidos por VITEK. La distribucin de los clones mostr que el clon A present un
comportamiento epidmico, mientras que el C fue espordico. Determinamos asimismo
que el gen blaKPC tiene codificacin plasmdica en Eco, segn ensayos de
transformacin.
Los
resultados
totales
muestran:
i)
el
comportamiento
epidmico/endmico del clon ST 258 en el nosocomio durante el perodo de tiempo del
estudio; y ii) la emergencia de numerosas especies de EB portadoras de KPC. La
emergencia de 2 ST de Kpn no relacionados genticamente (segn anlisis de
estructuras poblacionales publicados, Brisse et al., PLoS ONE, 2009), as como la
aparicin de 5 especies de EB portadoras de KPC en el nosocomio sugieren la
diseminacin de elementos genticos portadores del gen codificante de KPC entre la
misma o diferentes especies. Este estudio muestra la necesidad de incrementar medidas
de seguimiento, erradicacin y prevencin de la diseminacin de clones especficos de
enterobacterias
portadoras
de
KPC.

P - 006
rea: Antimicrobianos en clnica
Autores: Marchiaro ,P; Daz, S,; Ballerini, V.; Morn-Barrio, J.; Pasteran F.; Corso, A.; Vila, A.;
Viale, A.; Limansky, A.
Institucin: IBR (CONICET), FCByF, UNR, Rosario; Area Bacteriologa, FCByF, Instituto Dr.
Carlos G. Malbrn,Buenos Aires.

TRANSFERENCIA DE GENES DE RESISTENCIA A CARBAPENEMES DENTRO DE

GENOTIPOS CLINICOS DIFERENCIADOS DEL GRUPO Pseudomonas putida: UN
EJEMPLO DE VERSATIL INTERCAMBIO GENICO EN EL AMBITO NOSOCOMIAL
El grupo Pseudomonas putida (Ppu) est integrado por especies ambientales, que suelen
ser patgenos oportunistas para el hombre. As, se han descripto cepas clnicas del grupo
Ppu resistentes a mltiples antimicrobianos, incluidos carbapenemes, productoras de
metalo--lactamasas. Estas enzimas constituyen un mecanismo de resistencia de
implicancia epidemiolgica por la asociacin de sus genes a plataformas genticas
diseminadas por transferencia horizontal de genes (THG). Aqu analizamos las
plataformas responsables de la diseminacin de blaVIM-2 en cepas clnicas del grupo
Ppu. Se incluyeron 4 aislamientos del grupo Ppu y 2 Ppu, y como control se emple P.
monteilii HP209, previamente caracterizada en nuestro grupo. La identificacin bacteriana
incluy Vitek 2 (bioMrieux) y secuenciacin de ARNr 16S. Asimismo, se adicionaron en
algunos casos la secuenciacin de genes housekeeping como gyrB, y MALDI-TOF
(Bruker Co). La relacin clonal entre los aislamientos de cada especie se efectu
mediante PCR con oligonucletidos degenerados (OD-PCR). La asociacin de blaVIM-2 a
integrones clase 1, clsicos o integrones/transposones tipo-Tn402 (In/T), fue efectuada
mediante cartografa por PCR y secuenciacin. El entorno de los integrones se evalu por
secuenciacin mediante caminata con cebadores, y la transferencia de blaVIM-2 mediante
transformacin y conjugacin. Los plsmidos se analizaron mediante restriccin y
secuenciacin. OD-PCR revel la presencia de 4 clones diferentes entre los aislamientos
del grupo Ppu, as como 2 clones entre los aislamientos de Ppu. Los ensayos genticos
revelaron que blaVIM-2 se asocia a In/T en todas las cepas estudiadas: InT7633
conteniendo blaVIM-2 y aacA4, o InT7133 con blaVIM-2 como nico gen de resistencia.
Dos cepas del grupo Ppu, 1 Ppu y la cepa control fueron portadoras del InT7633, mientras
que 1 cepa del grupo Ppu y 1 Ppu resultaron portadoras del InT7133, sugiriendo
transferencia del mismo InT entre cepas del grupo Ppu. Los ensayos de transferencia
mostraron plsmidos conjugativos en 3 cepas del grupo Ppu (2 portadoras del InT7633 y
1 del InT7133). Sin embargo, no evidenciaron plsmidos en las restantes cepas,
sugiriendo localizacin cromosomal de los In/T. La restriccin de los plsmidos mostr 2
perfiles diferentes: I, correspondiente a los portadores del InT7633; y II, al portador de
InT7133. Las secuencias completas de los plsmidos perfil I y II mostraron elevada
homologa (99% de identidad) entre s y con pHP209, sugiriendo la estrecha relacin
gentica entre plsmidos de cepas del grupo Ppu y un origen comn. Los resultados
totales evidencian que plsmidos relacionados se asocian a: i) THG entre diferentes
especies del grupo Ppu; iii) THG entre cepas de la misma especie; y iii) diseminacin
intragenmica de los In/T descriptos (de plsmido a cromosoma y viceversa)
probablemente por transposicin. Estos resultados sugieren un dinmico intercambio de
blaVIM-2
en
diferentes
especies
del
grupo
P.
putida.

P - 007
rea: Antimicrobianos en clnica
Autores: MENA, J.; MINOLI M.
Institucin: HOSPITAL CORDOBA. CORDOBA, ARGENTINA

BSQUEDA DE KPC Y METALOLACTAMASAS EN PSEUDOMONAS AERUGINOSA

AISLADAS EN HOSPITAL DE CRDOBA: LA EMERGENCIA MUNDIAL EN CASA?
Pseudomonas aeruginosa (Pae) constituye un importante patgeno nosocomial ya que es
causante de infecciones graves, sobre todo en pacientes hospitalizados. El mecanismo de
resistencia adquirida ms importante es el que afecta a carbapenemes, donde se
destacan dos tipos de enzimas, Klebsiella pneumoniae carbapenemasa (KPC) y
metalolactamasa (ML).
Se investig la presencia de estos mecanismos de resistencia a carbapenemes en cepas
de Pae aisladas de muestras de pacientes atendidos en el Hospital Crdoba, y se analiz
el perfil de sensibilidad de dichas cepas.
Se analizaron 185 cepas de Pae aisladas de muestras remitidas al laboratorio de
Bacteriologa del Hospital Crdoba durante el ao 2012, se consider solo una muestra
por cada paciente. La identificacin de las cepas as como la susceptibilidad
correspondiente a cada antibitico se realiz mediante el uso de sistema automatizado y
mediante el mtodo manual de Kirby-Bauer. Para la deteccin de carbapenemasas se
realiz un ensayo fenotpico empleando agentes quelantes y el mtodo de Hodge
modificado.
No se detect la presencia de Pae productora de carbapenemasa. En cuanto al perfil de
sensibilidad observado, puede resultar til la terapia emprica con imipenem, meropenem
y colistn.
Como hemos visto la aparicin de KPC y ML es inminente, por lo que debemos continuar
realizando todos los esfuerzos posibles para la optimizacin de mtodos orientados a la
bsqueda
y
deteccin
de
estos
mecanismos.

P - 008
rea: Antimicrobianos en clnica
Autores: SALOMONI, R.1,2*; LO, P 2; ANACLETO, C.A.M. 1,2; RODRIGUES, M.F.A.2
Institucin: 1 University of Sao Paulo USP Biotechnology Interunits Post Graduation Program
USP, Butantan Institute, IPT Sao Paulo, SP, Brazil.
2 Industrial Biotechnology Laboratory, NanoBiomanufacture Nucleus, Institute for Technological
Research IPT, Sao Paulo, SP, Brazil.

Antimicrobial Activity of Silver Nanoparticles (AgNPs) on Pseudomonas aeruginosa

Introduction: Pseudomonas aeruginosa has great intrinsic antimicrobial resistance limiting
the number of effective antibiotics. Thus, other antimicrobial agents such as silver ion, are
considered ideal agents to help manage and prevent infections. Due to its potential
antibacterial activity, silver nanoparticles can be used in various other applications against
bacteria resistant to common antibiotics or even multiresistant.bacteria as P. aeruginosa.
Objectives: The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of silver
nanoparticles on a strain of Pseudomonas aeruginosa, resistant to a large number of
antibiotics.
Materials and Methods
Materials:
Strains of P. aeruginosa INCQS 0230 (ATCC 27853 ) and two strains of P. aeruginosa
obtained from hospital-acquired infections and called P.a1 P.a2 .
Silver nanoparticles: NanoAG 25 m/mL solution ( SIGMA ) , tested at dilutions : 5 ; 2.5;
1.25; 0,625 and 0,325 m/ mL .
Antibiotics: ceftazidime, meropenem, amikacin, ampicillin + sulbactam, levofloxacin,
chloramphenicol, vancomycin , penicillin, oxacillin and cefoxitin .
Methods: The susceptibility tests were performed by the agar diffusion method. From the
bacterial suspension at exponential growth phase (24h), cells suspension in saline solution
was adjusted for turbidity of 0.5 McFarland (~ 108UFC/mL). It was inoculated in Muller
Hinton agar (Sigma). After 15 minutes, discs recommended by the Clinical Laboratory
Standard Institute of - CLSI were placed on the plate. After incubation at 35 C (2) for 16
to 18 hours, the susceptibility was verified by measuring the diameter of inhibition zone
formed and interpreted in accordance with values established by CLSI (2006, 2007 ) .
Results and Discussion
It was observed that P. aeruginosa is a strong producer of biofilm. As for antimicrobial
susceptibility testing, the reference strain and strain hospital P.a1 showed sensitivity to
50% of the antibiotics tested, while Pa 2 strain showed 100% resistance.
In trials with different concentrations of silver nanoparticles, the reference strains, and Pa 1
showed similar results with all tested concentrations, with concentrations greater sensitivity
to 5; and 2.5 and greater growth when the concentrations 1.25 0.625 and 0.325 m/ml.
The Pa2 strain showed a resistance profile with slight growth in four of the dilutions tested
nanosilver, and lack of growth in the concentration of 5 m/ml.
Conclusion
Silver has a major antimicrobial effect. This effect is dependent on the contact surface,
wherein the silver can inhibit the respiratory chain enzyme systems and alter DNA
synthesis.
The solution of silver nanoparticles showed antimicrobial activity on the reference strain
and on one of the hospital strains.

Further studies should be directed to verify the in vitro toxicity of nanoparticles in order to
use
them
as
new
materials
and
substances
in
medical
clinic.

P - 009
rea: Bacteriologa bsica
Autores: Egea, A.(1); Gagetti, P.(2); Barcudi, D.(1); Lamberghini, R.(3); Lucero, C.(2); Faccone,
D.(2); Galas, M.(2); Grupo CA-MRSA Argentina.(4); Bocco, J.(1); Corso, A.(2) y Sola, C.(1)
Institucin: (1)CIBICI CONICET. Fac. de Cs. Qumicas, UNC, (3)Hospital Rawson de Crdoba;
(4)Hospitales Grupo CA-MRSA Argentina, (2) Servicio Antimicrobianos, INEI-ANLIS Dr. C
Malbrn.

DIVERSIDAD GENTICA DE Staphylococcus aureus SENSIBLES A METICILINA Y SU

RELACIN GENTICA CON LOS CLONES DE S. aureus RESISTENTES A METICILINA
ASOCIADO A LA COMUNIDAD (CA-MRSA), ARGENTINA
Desde los 90 la epidemiologa de la infecciones por Staphylococcus aureus ha cambiado
globalmente debido a la emergencia de S. aureus Resistente a Meticilina (MRSA)
Asociado a la Comunidad (CA-MRSA). Estos nuevos clones surgieron a partir de linajes
genticos de S. aureus Sensibles a Meticilina (MSSA) diferentes de aquellos relacionados
a los MRSA Asociados al Hospital (HA-MRSA), con una distribucin geogrfica especfica.
En Argentina se han detectado dos clones CA-MRSA principales: CC5-ST5-I-IV-t019 y
CC30-ST30-N-IV-t019, ambos asociados a la toxina Panton Valentin Leukocidin (PVL),
con significativas diferencias regionales y segn el grupo etario (nios/adultos).
Nos propusimos identificar los principales linajes genticos de MSSA en Argentina, para
determinar en forma comparativa con los linajes de CA-MRSA su estructura poblacional y
los posibles orgenes evolutivos de estos clones CA-MRSA.
Se analiz una muestra (n: 132) de aislamientos clnicos de MSSA, representativa de todo
el pas (norte, centro y sur) y de la poblacin peditrica y adulta. La misma fue obtenida
en un estudio prospectivo y multicntrico (66 hospitales distribudos en 20 provincias y
CABA) de vigilancia de las infecciones por S. aureus durante Nov 2009. La
caracterizacin molecular se realiz por PFGE y Tipo spa (t). El tipo secuencial
(ST)/Complejo Clonal(CC) se infiri de acuerdo al t, en aquellos que no tuvieron un ST
relacionado se realiz Multilocus Sequence Typing (MLST). Se evalu la presencia de los
genes pvl por PCR.
Del total de aislamientos de MSSA, 39% (n: 52) fueron de nios y 60% (n: 80) de adultos.
El anlisis molecular por spa typing; revel 65 diferentes t que fueron agrupados dentro de
12 CC segn MLST(%): CC5(21), CC30(16), CC1(15), CC121(10), CC8(8), CC45(8)
CC12(1), CC97(8), CC25(4), CC15(1), CC88(1), distribuidos en todo el pas. Se
demostraron significativas diferencias en las proporciones de los principales CC entre el
norte (N) y el sur (S) del pas: CC5 (t311 y t002): 36% N vs 12% S, p=0.004) y CC30
(t012, t021 y t018) (6% N vs. 32% S p=0.01), mientras que en el centro coexisten ambos
(16%, 11% respectivamente). Por pulsed field gel electrophoresis los principales
pulsotipos fueron: Is y Cs (CC5-Norte), Ns (CC30-Sur) relacionados a pulsotipos de
clones mayores de MRSA: I, C, N circulantes en Argentina pero con una distribucin
geogrfica inversa a la descripta para MRSA. Dentro de los t relacionados al CC30-Ns no
se detect el t019 correspondiente al CA-MRSA CC30-N-IV-t019. En cambio el t012, fue t
predominante en CC30-Ns-MSSA y ya haba sido descripto en la poblacin MSSA desde
el 2007 en Argentina. El 100% de los CC5-Is -t311 fueron PVL(+)
Estos resultados sugieren que el clon CA-MRSA CC5-I-IV-t311-PVL(+) epidmico habra
surgido en nuestro pas a partir del ancestro MSSA- CC5-Is-t311PVL(+), establecido en

nuestra geografa y que el clon CA-MRSA CC30 -ST30- N-IV-t019-PVL(+) probablemente

es
el
resultado
de
la
diseminacin
desde
pases
limtrofes.

P - 010
rea: Bacteriologa bsica
Autores: Garca, MJ.; Asurmendi, P.; Pascual, L.; Barberis, L.
Institucin: Universidad Nacional de Ro Cuarto, CONICET

Cuantificacin de la actividad inhibitoria de las bacteriocinas producidas por Lactobacillus

fermentum L23 y Lactobacillus rhamnosus L60 sobre Listeria spp.
Listeria monocytogenes es el agente causal de la listeriosis en humanos y animales, y es
transmitida principalmente a travs del consumo de alimentos contaminados. A pesar de
que la morbilidad es relativamente baja, su gravedad y alta tasa de mortalidad la sitan
entre las enfermedades transmitidas por alimentos de mayor relevancia. En los ltimos
aos se han comenzado a investigar nuevas estrategias de prevencin y de control de
enfermedades infecciosas, siendo la listeriosis una de ellas. Estas estrategias estn
dirigidas hacia la utilizacin de bacterias probiticas como son los lactobacilos. Los
lactobacilos son de inters para el control de microorganismos patgenos por su
capacidad de producir diversas sustancias antimicrobianas como cidos orgnicos,
perxido de hidrgeno y bacteriocinas. El objetivo de este trabajo fue determinar la
concentracin inhibitoria mnima (CIM) de las bacteriocinas producidas por Lactobacillus
fermentum L23 y Lactobacillus rhamnosus L60 sobre Listeria spp. Se realiz una
adaptacin de la tcnica de difusin en pozos mediante la cual se determin la CIM de las
bacteriocinas L23 y L60 sobre 27 cepas de L. monocytogenes, una cepa de L. innocua y
otra de L. welshimeri. A partir de una suspensin de cada cepa de listeria con una
densidad ptica correspondiente al tubo 0,5 de la escala de McFarland, se sembr una
placa con agar tripticasa soya (ATS) a una concentracin de agar de 1,2% p/v.
Posteriormente se realizaron pozos en el agar, en donde se inocularon 100 l de
diluciones seriadas al medio de los sobrenadantes libres de clulas neutralizados (SLCN),
para eliminar los cidos orgnicos, conteniendo la bacteriocina de cada uno de los
lactobacilos y se incubaron a 37C durante 18 h. Se realizaron los controles
correspondientes. Se defini la CIM como la inversa de la mxima dilucin que mostr
inhibicin del crecimiento de la cepa sensible y fue expresado en unidades de actividad
por mililitro (UA ml-1). Los resultados obtenidos mostraron que la CIM de las bacteriocinas
L23 y L60 estuvo comprendida entre 40 y 160 UA ml-1 para el 100% de las cepas de
Listeria spp. ensayadas. Se observ que la CIM de L23 fue de 40 UA ml-1 para el 70,37%
de las cepas de L. monocytogenes analizadas, mientras que los valores de CIM de L60
fueron de 40 y 80 UA ml-1 para el 44,44% y 40,74% de las cepas, respectivamente. Por
otra parte, ambas bacteriocinas presentaron una CIM de 160 UA ml-1sobre L. innocua y
L. welshimeri. Considerando que el SLCN sin diluir contiene 640 UA ml-1, los resultados
de este trabajo demostraron que, an en bajas concentraciones, las bacteriocinas
producidas por L. fermentum L23 y L. rhamnosus L60 mantuvieron su actividad
antimicrobiana sobre L. monocytogenes, L. innocua y L. welshimeri, indicando que los
lactobacilos
presentan
una
significativa
actividad
antilisteria.

P - 011
rea: Bacteriologa bsica
Autores: GUALTIERI, A. F; HECHT, J. P.
Institucin: Ctedra de Biofsica, Facultad de Odontologa, Universidad de Buenos Aires

PROPAGACIN DE INFECCIN LEPTOSPIRAL EN ROEDORES, PERROS Y

HUMANOS EN UN MODELO MATEMTICO DETERMINISTA BASADO EN
ECUACIONES DIFERENCIALES
Introduccin: La leptospirosis es una enfermedad de distribucin mundial causada por
espiroquetas de bacterias del gnero Leptospira. La enfermedad afecta al hombre y a
varios animales, incluyendo roedores, perros y ganado. Los animales infectados eliminan
las espiroquetas por la orina. Humanos o animales susceptibles expuestos a este medio
pueden infectarse. Los roedores son importantes reservorios para perros y humanos. A su
vez, los perros constituyen uno de los factores de riesgo ms importantes en la
transmisin de leptospiras a humanos en zonas urbanas. Pese a la importancia de la
enfermedad, los modelos matemticos para leptospirosis son escasos. Objetivo: Disear y
explorar un modelo matemtico dinmico de propagacin de leptospirosis en
comunidades de roedores, perros y humanos. Materiales y Mtodos: Se desarroll un
modelo determinista basado en ecuaciones diferenciales. El modelo se basa en diseos
previos e incluye parmetros provenientes de escenarios reales. El modelo presenta tres
mdulos. Un primer mdulo representa la dinmica de propagacin de infeccin
leptospiral en una poblacin de reservorios roedores. El segundo mdulo representa la
propagacin en perros. El tercer mdulo desarrolla la infeccin en humanos. Las
dinmicas de propagacin en el segundo y en el tercer mdulo dependen formalmente de
la dinmica en el primero. Adems, la infeccin en humanos tambin depende de la
infeccin en caninos. El modelo es explorado por medio de simulaciones numricas
computacionales. Resultados: El modelo muestra coherencia interna y captura el
comportamiento general de la evolucin de la prevalencia de leptospirosis en roedores,
perros y humanos. En particular, permite observar como la dinmica de la propagacin en
roedores influye sobre la prevalencia en perros y humanos. El modelo muestra como un
incremento de la prevalencia en perros produce un incremento de la prevalencia en
humanos. Conclusiones: De acuerdo a la literatura consultada, este es el primer modelo
dinmico de leptospirosis que contempla la dinmica combinada de la infeccin en
roedores, perros y humanos. Ser la base para futuros estudios en donde se pretender
investigar el efecto de factores de riesgo para perros sobre la prevalencia en estos
animales
y
en
humanos.

P - 012
rea: Bacteriologa bsica
Autores: LACZESKI, M.(1,2); NOVOSAK, M.(1,2); PEGELS, E.(1); OVIEDO, P.(1); QUIROGA,
M.(1,2); VERGARA, M.(1)
Institucin: (1) Facultad de Ciencias Exactas, Qumicas y Naturales. (2) Instituto de Biotecnologa
Misiones "Dra Ebe Reca" (InBioMis). Universidad Nacional de Misiones.

PRIMERA INVESTIGACION DE GENES ermB, ermTR y mefA EN CEPAS

RESISTENTES A MACROLIDOS DEStreptococcus agalactiae EN LA PROVINCIA DE
MISIONES
Streptococcus agalactiae (SGB), constituye parte de la flora normal del tracto
gastrointestinal y urogenital humano, colonizando embarazadas a trmino, existiendo la
posibilidad de transmisin vertical al recin nacido, siendo la primera causa de infecciones
neonatales invasivas severas. Si bien la profilaxis intraparto (PIP) con Penicilina o
Ampicilina previene la enfermedad neonatal, la Eritromicina (ERI) y Clindamicina (CLI) son
las drogas recomendadas en pacientes alrgicas a los -lactmicos. En los ltimos aos,
se ha informado un incremento de la resistencia a macrlidos. Nuestros datos publicados
indican 9,6% y 7,1% de resistencia a ERI y CLI respectivamente. Los mecanismos
incluyen modificaciones en el sitio blanco mediadas por los genes erm conduciendo a
resistencia a macrlidos-lincosamidas-estretograminas B, (fenotipo MLSB- expresadas en
forma inducible o constitutiva) o mecanismos por eflujo codificado por genes mef
conduciendo a resistencia a macrlidos de 14-15 miembros (fenotipo M). El conocimiento
de estos fenotipos permite adecuar el tratamiento. El objetivo de este estudio, dada la
carencia de datos en la regin, fue analizar cepas colonizantes con resistencia a
macrlidos por mtodos fenotpicos (D-test y CIM) y genotpicos en la provincia de
Misiones. Se estudiaron 12 cepas viables de SGB recuperadas de hisopados vaginorectales de embarazadas a trmino de su edad gestacional, que presentaron algn
fenotipo de resistencia de un total de 316 aislados. La determinacin de los fenotipos de
resistencia MLSB se realiz con el test doble disco (D-Test) en agar Mueller-Hinton y
discos de ERI (15 g) y CLI (2 g) (Britania), con sangre ovina al 5%. La confirmacin de
la susceptibilidad a ERI y CLI se realiz por E-test con tiras provistas por Oxoid y
Biomerieux respectivamente, siguiendo las recomendaciones del CLSI 2013. La presencia
de los genes ermB, ermTR y mefA, se investig por tcnica de PCR convencional. Se
detectaron los fenotipos cMLSB (8 cepas) y iMLSB (4 cepas). Todos los fenotipos
constitutivos fueron confirmados por CIM, en todos se detect el gen ermB y en dos de
ellas el gen ermTR. En los fenotipos inducibles, slo dos fueron confirmados por E-test y
los tres genes estudiados fueron detectados en al menos un aislamiento. Estos hallazgos
sugieren dada la disparidad de los mismos, asociada probablemente a la poltica de
circulacin de antimicrobianos en la regin, la necesidad de continuar la vigilancia de las
tcnicas de D-test por CIM e incluir en el estudio, nuevos genes asociados a la resistencia
a fin de disponer de resultados factibles y confiables de ser transmitidos a la comunidad
mdica, colaborando en la prevencin de estas embarazadas alrgicas a penicilina al
conocer la circulacin de cepas de SGB resistentes a macrlidos en la regin. Esto es de
importancia mientras se espera la produccin de la vacuna, ya en ensayo.

P - 013
rea: Bacteriologa bsica
Autores: Martina P1, Montanaro P2, Valeiras B1, Jacome J2, Yantorno O1 y Bosch A1.
Institucin: 1 Centro de Investigacin y Desarrollo en Fermentaciones Industriales (CINDEFI
CONICET), Facultad de Ciencias Exactas, Universidad de La Plata. Calle 50 N 227, La Plata,
Buenos Aires. 2 Hospital de Nios de Santsima Trinidad, Bajada Pucara N1900, Crdoba,
ARGENTINA.

Nuevo miembro perteneciente al Complejo Burkholderia cepacia?

Durante el curso de una investigacin de identificacin y caracterizacin de aislamientos
de origen clnico y ambiental recuperados en el Hospital Santsima Trinidad de Crdoba,
un grupo de bacterias identificadas como pertenecientes al complejo Burkholderia cepacia
(cBc) mediante la tcnica de PCR-recA, presentaron en una segunda etapa de
caracterizacin molecular un linaje nico por PCR-recA-RFLP no descrito hasta el
presente en la bibliografa. Adems estos organismos mostraron una elevada similitud en
la secuencia de sus genes recA (alelo 334). Teniendo en cuenta estos resultados, el
objetivo del presente estudio fue examinar la posicin taxonmica de estos aislados
mediante el uso de un enfoque polifsico (1).
Cuatro aislamientos recuperados de 3 pacientes (hemocultivo) y 3 aislamientos presentes
como contaminantes de agua de hemodilisis fueron cultivados en el medio selectivo para
el cBc (BCSA), identificados como pertenecientes al cBc mediante PCR-recA con los
primers BCR1y BCr2 (2) y posteriormente examinados siguiendo un enfoque polifsico
que incluy: PCR-recA-RFLP empleando la enzima de restriccin HaeIII, secuenciacin
del gen recA (Macrogen, Korea), anlisis de secuencias de 16S rRNA (primers
universales Fw27 y Rv1541), anlisis de secuencias multilocus (2) (MLST- recA, gyrB,
lepA, atpD, gltB, phaC, trpB), anlisis de fingerprinting de DNA por BOX-PCR y ERICPCR (3), y pruebas bioqumicas y enzimticos que incluyeron tarjetas de identificacin de
Vitex2, crecimiento a 42C, actividad DNasa, oxidasa, lisina descarboxilasa, hidrlisis de
esculina y antibiograma. Los resultados obtenidos de este conjunto de anlisis sugieren
que estos aislamientos podran representar un nuevo taxn o especie dentro del cBc.
Actualmente se estn realizando estudios complementarios que incluyen hibridacin DNADNA, composicin de ADN (%GC) y composicin de cidos grasos para confirmar la
asignacin de estos organismos a un nuevo taxn del cBc.
(1) Vandamme P, Peeters C. (2014) Time to revisit polyphasic taxonomy. Antonie van
Leeuwenhoek. DOI 10.1007/s10482-014-0148-x
(2) Baldwin A, et al. (2005) Multilocus sequence typing scheme that provides both species
and strain differentiation for the Burkholderia cepacia complex. J Clin Microbiol.
43(9):4665-73.
(3) Martina P, et al. (2013) Genetic diversity of Burkholderia contaminans isolates from
cystic
fibrosis
patients
in
Argentina.
J
Clin
Microbiol.
51(1):339-44.

P - 014
rea: Bacteriologa bsica
Autores: Mucci, S.; Nardelli, M.; Quiroga, C.; Centron, D.
Institucin: Instituto de Investigaciones en Microbiologia y Parasitologia Medica (IMPaM-UBACONICET), Facultad de Medicina, UBA.

Adquisicin y mantenimiento de plsmidos en una cepa competente natural de

Escherichia coli aislada de suelo
Diversas especies bacterianas son capaces de adquirir material exgeno mediante
diferentes mecanismos de transformacin natural. Poco se sabe sobre las condiciones
necesarias para la activacin de los genes involucrados en la competencia natural en
Escherichia coli. La cepa E .coli 4IgSN1 fue aislada de suelo de un sitio de bajo impacto
antrpico del Parque Nacional Iguaz. Resultados previos de nuestro laboratorio
evidenciaron que esta bacteria crece a temperaturas entre 37C y 40C y es capaz de
transformar naturalmente ADN del ambiente.
Con el fin de caracterizar la capacidad de esta bacteria de captar y mantener material
exgeno, se realizaron ensayos de transformacin utilizando plsmidos con diversos
orgenes de replicacin. Nuestros resultados mostraron que mediante transformacin
qumica los plsmidos pCR-aadB (oriR ColE1, KanR) y pACYC184 (oriR 15A, CamR) son
captados por E. coli 4IgSN1. Adems, se realizaron ensayos para determinar la
estabilidad de los plsmidos en la bacteria mediante el crecimiento de colonias
transformantes por cultivos seriados y posterior digestin con enzimas de restriccin.
Estos ensayos reflejaron que ambos plsmidos se mantienen intactos luego de 3 das de
crecimiento. Por ltimo, se evalu la capacidad de esta cepa de adquirir el plsmido pCRaadB mediante transformacin natural luego de la exposicin de la bacteria frente a
distintas temperaturas (30C y 37C) y concentraciones de ADN plsmidico (0.01, 0.1 1
ug/ul). Estos ensayos mostraron que E. coli 4IgSN1 puede captar material exgeno y que
este proceso es independiente de las condiciones ensayadas.
Nuestros resultados mostraron que E. coli 4IgSN1 es capaz no slo de captar y mantener
plsmidos de diversos grupos de incompatibilidad, si no que puede hacerlo de forma
natural, sugiriendo que posee la maquinaria para la captacin de ADN exgeno.

P - 015
rea: Bacteriologa bsica
Autores: Novicov Fanciotti, M.1; Audisio, M.C.1,2,3
Institucin: 1 INIQUI-CONICET, 2 Facultad de Ingeniera, 3 Facultad de Cs.Exactas. Universidad
Nacional de Salta

Anlisis de la envoltura celular de Lactobacillus johnsonii CRL1647, cepa con propiedades

probiticas para la abeja melfera
En el grupo de trabajo se ha estudiado los ltimos aos el impacto del tratamiento de
colmenas de Apis melifera L. con Lactobacillus johnsonii CRL1647 y se ha observado un
importante efecto probitico: aumento en el rea de postura, mayor poblacin de abejas y
de almacenamiento y rendimiento en miel y menor prevalencia de enfermedades como
varroasis y nosemosis. En este trabajo, se decidi analizar las estructuras superficiales
involucradas en el fenmeno de adhesin observada in vitro para esta cepa ya que
posiblemente participan en la interaccin hospedador-microorganismo.
Se cultiv L. johnsonii CRL1647 en caldo MRS al 5% p/v a 37C durante 18 h en
condiciones de microaerofilia. Rhodotorula mucilaginosa se utiliz como control positivo
de hemaglutinacin y creci en agar extracto de malta 5% p/v a 30C por 48 h. Luego se
lavaron dos veces con SF antes y despus de los siguientes tratamientos con: I)
metaperiodato de sodio 100mM pH 4,6; II) tripsina 1mg/mL; III) proteinasa K 1mg/mL y IV)
pepsina 1mg/mL, a 37C por 1 h. Por ltimo se ajust la concentracin celular a 8108
ufc/mL. Posteriormente, la capacidad de adherencia fue evaluada por la afinidad de las
clulas de lactobacilo a eritrocitos humanos grupo A y O, y de carnero enfrentando
volmenes iguales de la suspensin bacteriana con una suspensin al 2% de hemates en
microplaca con fondo en U, que fue incubada por 30min a 37C y luego a 4C durante 4 h.
Se observ que L. johnsonii CRL1647 fue capaz de aglutinar los eritrocitos de carnero
pero no los glbulos rojos de origen humano. Esta propiedad no se vio modificada por
accin de pepsina y tripsina mientras que s se vio afectada por los tratamientos con
metaperiodato de sodio y proteinasa K. Cabe destacar que cuando se analizaron
polisacridos capsulares mediante tincin negativa, se encontr que esta cepa no posee
cpsula.
De los resultados obtenidos, se concluye que L. johnsonii CRL1647 posee en su
superficie molculas de naturaleza glucoproteicas que adhieren eritrocitos de carnero
aglutinndolos, pudiendo ser stas un importante determinante de promocin del efecto
benfico
de
este
microorganismo
con
propiedades
probiticas.

P - 016
rea: Bacteriologa bsica
Autores: ORIANI, A.; GENTILI, A.; ZIGA, A.; TORTONE, C.; ORIANI, D.; BALDINI, M.
Institucin: UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SUR Y UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PAMPA

ESTUDIO POR MALDI-TOF DE LAS CADENAS LIPDICAS CARBONADAS DE LA

PARED DE MICOBACTERIAS AMBIENTALES. POTENCIAL IMPLICANCIA EN
ALGUNAS CAPACIDADES BIOLGICAS
Las micobacterias ambientales (MA) continan siendo una causa muy importante de
morbi-mortalidad, especialmente en pases con recursos sanitarios limitados. Una de sus
principales caractersticas es la complejidad de sus estructuras de cubierta. Anlisis
qumicos han demostrado que estn rodeadas por una capa externa que contiene cidos
miclicos covalentemente unidos a un complejo de lipo-arabinogalactano-peptidoglicano,
al que se anclan lpidos, glicolpidos y glicopeptidolpidos. Numerosos estudios sugieren
que la arquitectura de la pared jugara un rol importante en procesos como la movilidad
por sliding y la formacin de biofilm. El objetivo del trabajo fue analizar los componentes
lipdicos de la pared de tres MA por MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption
Ionization Time-of-Flight) y relacionarlos con la capacidad de formar biofilm y movilidad
por sliding. Se estudiaron cepas obtenidas de crecimiento planctnico de Mycobacterium
gordonae y M. porcinum aisladas de agua de red y de M. smegmatis cepa de referencia.
Se extrajeron los micolatos totales de cada cepa y se analizaron steres metlicos del
cido miclico (MAME) por MALDI-TOF. Para el ensayo de movilidad por sliding se
sembr una colonia de cada cepa en una caja de Petri con medio Middlebrook 7H9 (MB)
con glicerol y 0,3% de agar. Las cajas se sellaron e incubaron 15 das a 30C. Para
evaluar la capacidad de formar biofilm in vitro se sembraron inculos estandarizados de
las MA en policubetas de PVC. Se adicion el medio MB. Luego de 20 das de incubacin
a 30C, los pocillos se lavaron con agua estril, se tieron con cristal violeta (30 minutos a
25C), se enjuagaron con agua y se secaron sobre papel. El colorante incorporado al
biofilm se resuspendi en etanol-acetona (70:30). La cuantificacin se realiz con un
lector de microplacas a 595 nm. Los perfiles de los espectros MALDI TOF de las cepas
M.smegmatis y M.porcinum permitieron observar una seal destacada a m/z 869,
compatible con MAMEs de cadena corta de hasta C58. Sin embargo, M. gordonae
present adems de algunas seales compatibles con cadenas de hasta C53, seales
entre m/z 1046 y 1515 atribubles a MAMEs de cadenas largas (C72 a C105).
M.smegmatis y M.porcinum formaron un consistente biofilm (2,57 y 1,48 DO
respectivamente) y mostraron capacidad para moverse por sliding. M. gordonae form un
biofilm dbil (0,3 DO) y no se desliz. Los resultados de las especies estudiadas sugieren
que las diferencias de longitud de los cidos grasos de la pared, estaran relacionadas
con la capacidad para formar biofilm y deslizarse por sliding. La bibliografa asocia la
formacin de biofilm por M. smegmatis con una elevada sntesis de cidos grasos de
cadena corta (C56 -C68). La ausencia de MAMEs de C56 a C68 en M.gordonae podra
contribuir a su pobre formacin de biofilm. Los resultados obtenidos para M. smegmatis y
M. porcinum permitiran extrapolar lo descripto por la bibliografa a otras MA presentes en
el
agua
de
bebida.

P - 017
rea: Bacteriologa bsica
Autores: RUIZ, FO; PASCUAL LM; BARBERIS IL
Institucin: rea Bacteriologa, Departamento de Microbiologa e Inmunologa, FCEFQyN, UNRC.
Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET).

BACTERIOCINAS Y OTRAS SUSTANCIAS BIOACTIVAS PRODUCIDAS POR

LACTOBACILOS PROBIOTICOS COMO ALTERNATIVA BIOLOGICA CONTRA
NEISSERIA GONORRHOEAE
En la bsqueda de estrategias de control contra Neisseria gonorrhoeae (Ng), los
lactobacilos probiticos productores de bacteriocinas y otras sustancias antimicrobianas
merecen especial consideracin. Objetivos. Evaluar la actividad antimicrobiana de todas
las sustancias bioactivas de los lactobacilos probiticos, estudiar las interacciones entre
bacteriocinas y la concentracin inhibitoria mnima (CIM) de las mismas sobre el
desarrollo de Ng. Metodologa. A partir de pacientes sospechosos de infeccin
gonoccica se aislaron cepas de Ng en agar Thayer Martin (TM), se identificaron y se
investig la produccin de -lactamasas. El sobrenadante libre de clulas (SLC) puro de
Lactobacillus fermentum L23 (Genbank GQ455406) contiene cidos orgnicos y una
bacteriocina L23. En el SLC de L. rhamnosus L60 (Genbank EF495247) se hayan cidos
orgnicos, bacteriocina L60 y H2O2. Estos se trataron convenientemente con NaOH
(SLCN) y enzima peroxidasa (SLCNP) para obtener: SLCN L23 (bacteriocina L23), SLCN
L60 (H2O2 y bacteriocina L60), SLCNP (bacteriocina L60). Se realizaron tcnicas de
difusin en pozos en placas con medio TM con 100 l de cada biosustancia y se incub
en microaerobiosis a 37C por 18-24 h. Los halos producidos se midieron en mm y se
estim el valor porcentual de inhibicin de cada metabolito. Las interacciones entre
bacteriocinas se consideraron: sinrgica, antagnica o indiferente. Para la CIM de cada
bacteriocina, se realizaron 6 diluciones seriadas al medio partiendo de la mxima
concentracin (640 UA/ml) hasta 10 UA/ml. La CIM (UA/ml) se defini como el valor
absoluto e inverso de la mxima dilucin que mostr inhibicin del crecimiento de la cepa
sensible. Resultados. Se aislaron 31 cepas de Ng, de las cuales el 38% produjo lactamasas. En la actividad antimicrobiana del conjunto de metabolitos bioactivos
presentes en los SLCs puros se hall que el 100% de las cepas de Ng fueron sensibles,
con halos de inhibicin de 18,33mm 2,48 y 19,01mm 2,69 para la cepa L23 y L60. Los
SLCN L23 (bacteriocina L23) y L60 (H2O2 y bacteriocina L60) inhibieron a Ng con halos
de 16,93mm 2,44. Todas las cepas de Ng fueron sensibles a cada una de las
bacteriocinas L23 (SLCN L23) y L60 (SLCNP L60), con halos de 15,8 y 15mm. En las
cepas L23 y L60 el 87,28% y 80,66% del efecto inhibitorio se debi a las bacteriocinas
L23 y L60, seguidos por los cidos orgnicos (12,77% y 10,20%) respectivamente. Un
9,14% de inhibicin se debi al H2O2 de la cepa L60. En la interaccin entre las
bacteriocinas se observ un 100% de actividad sinrgica sobre las cepas de Ng. Las
bacteriocinas L23 y L60 en un rango de CIM entre 10-80 UA/ml, inhibieron al 93,55% y
77% de los gonococos, respectivamente. Conclusin. El uso combinado de las
bacteriocinas L23 y L60 o directamente de los lactobacilos probiticos productores de
stas y otras sustancias antimicrobianas, representara una valiosa alternativa biolgica
potencialmente
til
para
el
desarrollo
de
bioproductos
contra
Ng.

P - 018
rea: Bacteriologa bsica
Autores: Torres, M.J.1; Audisio, M.C.2,3
Institucin: 1 INIQUI-CONICET, 2 Facultad de Ingeniera, 3 Facultad de Cs.Exactas. Universidad
Nacional de Salta.

Lipopptidos sintetizados por bacterias del gnero Bacillus. Estudio de su potencial

antimicrobiano
El gnero Bacillus presenta aplicaciones biocontroladoras potenciales por la versatilidad
de sus metabolitos bioactivos. Diversas cepas de Bacillus se cree la ejercen
principalmente por la produccin de lipopptidos cclicos entre los que se destacan:
surfactina, iturina y fengicina. El objetivo de este trabajo fue estudiar cepas de Bacillus
que sintetizan lipopptidos para evaluar su potencial como controladores naturales de
patgenos como bacterias y hongos.
Se aislaron y caracterizaron filogenticamente 11 de cepas del gnero Bacillus. Se evalu
la suspensin celular (SC), el sobrenadante libre de clulas (SLC) y la sntesis de
lipopptidos con una fraccin concentrada de dichos compuestos (FL: precipitacin
cida del SLC y posterior extraccin con metanol) y se estudi la actividad antimicrobiana
frente a bacterias causantes de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) y a
hongos fitopatgenos segn la tcnica de difusin en agar. Las bacterias indicadoras
estudiadas fueron varias cepas de: Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus,
Bacillus cereus y Salmonella Typhimurium y S. Enteritidis. Los hongos fitopatgenos
estudiados fueron: Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium solani, Macrophomina phaseolina,
Sclerotium rolfsii , Penicillium spp. y Rhizoctonia solani.
Se observ que las cepas de Bacillus pertenecientes a la especie subtilis subsp. subtilis
presentaron mayor actividad biolgica frente a los patgenos de alimentos Gram-positivos
como Listeria, Bacillus cereus y Staphylococus aureus. Solo la especie B.
amyloliquefaciens fue capaz de inhibir significativamente el desarrollo de las cepas de
Salmonella. El mtodo de extraccin de los lipopptidos del SLC influy en su
recuperacin, ya que se determin elevada variabilidad en la actividad antibacteriana de
las diferentes muestras procedentes de los Bacillus frente a los patgenos evaluados.
Las SC de las 11 cepas del gnero Bacillus presentaron en general elevada actividad
antifngica frente a 6 gneros de hongos fitopatgenos aislados de races de soja y
poroto. Los gneros Sclerotinia, Fusarium y Macrophominas fueron las ms sensibles y
Sclerotium, Penicillim y Rhizoctonia los ms resistentes a la accin inhibitoria de las cepas
bacterianas. Bacillus amyloliquefaciens PGPBacCA1 y B. subtilis subsp. subtilis
PGPMori7 fueron las cepas que presentaron la mayor actividad antifngica frente a un
amplio espectro de hongos. Con la tcnica utilizada, se observ en general baja actividad
con los SLC y las FL de PGPMori7 y PGPBacCA1 frente a los hongos seleccionados.
Los resultados obtenidos son promisorios porque existe poca informacin acerca del
potencial de cepas de B. subtilis subsp. subtilis y de B. amyloliquefaciens frente a
patgenos causantes de ETA y que en forma simultnea tengan actividad antifngica
frente
a
importantes
hongos
fitopatgenos.

P - 019
rea: Bacteriologa bsica
Autores: Vita, F.; Rodriguez Cceres, E.; Sillon, C.; Carletti, S.
Institucin: Universidad Nacional de Lujn

AJUSTE DE LA TCNICA DE LA MICROGOTA PARA EL RECUENTO EN PLACA DE

Azospirillum sp
En el mundo existe una creciente demanda de inoculantes microbianos para uso
agropecuario. En Argentina, esta tecnologa ha tenido una gran aceptacin por parte los
productores, debido a su bajo costo y resultados positivos, especialmente en el cultivo de
soja. Esto impuls la aplicacin de estos productos de origen microbiano en diferentes
cultivos. Resulta necesario que se realicen controles de calidad sobre estos bioinsumos. A
tal fin, la INTERLAB de la Asociacin Argentina de Microbiologa (AAM) valid un
protocolo de recuento para distintos microorganismos, inclusive para Azospirillum sp, muy
utilizado en cultivos extensivos de cereales. El anlisis de una muestra implica la
realizacin de un homogenato en 90 ml de solucin fisiolgica (SF), 5 diluciones con
tubos de 9 ml de SF, insumos descartables, plaqueos de 2 placas por dilucin y 3
diluciones (6 en total) lo que insume entre 90 y 110 ml de medio de cultivo. En el caso de
muestreos por controles de calidad rutinarios implica grandes volmenes y costos de
materiales, insumos, equipos y mano de obra. Es conocida la tcnica de la microgota de
Miles y Misra (2006) para el recuento en placa de microorganismos. En el laboratorio de
investigacin en biofertilizantes de la Universidad Nacional de Lujn hemos observado
que esta tcnica utiliza menos insumos, y nos permite realizar ms repeticiones, lo cual le
confiere menor desvo estndar a los resultados. Se han realizado validaciones de esta
tcnica con la protocolizada, para otros microorganismos. Se compar y ajust la tcnica
de la microgota con la protocolizada por la AAM para Azospirillum sp. Se utiliz para
comparar los recuentos que se realizan habitualmente en base al protocolo de la AAM en
el laboratorio con cepas de la coleccin del laboratorio, en recuentos para evaluacin de
inoculantes comerciales y recuentos de inoculantes preparados en el laboratorio. Los
resultados obtenidos han presentado siempre el mismo orden de magnitud y con
diferencias menores al . Proponemos realizar la validacin de esta tcnica a travs de la
INTERLAB y proponerla como una altenativa para el procesamiento de gran cantidad de
muestras diarias, en el caso de contar con el equipamiento necesario.

P - 020
rea: Bacteriologa clnica
Autores: ALFARO, C.; RECUPERO, G.; LOPEZ AVELLANEDA, M.;ALBORNOZ, E.; FARFAN, V.;
ESTRELLA, C.
Institucin: HOSPITAL CENTRO DE SALUD ZENON J. SANTILLAN, SAN MIGUEL DE
TUCUMAN.

SALMONELOSIS Y ABSCESO PRIMARIO DE PSOAS

Introduccin: El absceso de psoas es una patologa infrecuente y de etiologa variable.
Puede ocurrir como una infeccin primaria del msculo, posiblemente adquirida por
diseminacin hematgena desde un foco oculto, no evidente clnicamente; en tanto los
secundarios son provocados por extensin de una infeccin en una estructura vecina,
constituyendo una complicacin de otra enfermedad, sea digestiva, urinaria u
osteoarticular. En los primarios es Staphylococcus aureus el microorganismos prevalente,
mientras que en los secundarios son los entricos. Objetivo: Dar a conocer un caso de
etiologa inusual. Caso clnico: Paciente de 61 aos, sexo masculino, diabtico, que cursa
con varios das de internacin en nuestro hospital por absceso de msculo psoas
izquierdo, que fue tratado mediante drenaje percutneo y terapia antibitica. El cultivo del
material drenado del absceso fue positivo para Salmonella spp.y los hemocultivos
negativos. Como antecedentes refera deposiciones diarreicas que haban cedido en su
domicilio con dieta, sin haber realizado consulta mdica. Durante su hospitalizacin tiene
una evolucin desfavorable y pasa a Unidades de Cuidados Crticos, se toman nuevas
muestras para hemocultivos y se inicia tratamiento antibitico con vancomicina e
imipenen. Se solicita TAC (tomografa axial computada) de Abdomen que muestra
aumento de volumen de psoas izquierdo con cambios en su densidad compatible con
absceso. Se procede nuevamente al drenaje percutneo guiado por ecografa, evacuando
400 CC. de material purulento, del cual se enva muestra a Microbiologa. El hemocultivo
y el material purulento fue positivo para Salmonella tiphymurium. La bacteria se aisl a
partir de medios selectivos y diferenciales como agar MacConkey (MC), agar Eosina Azul
de Metileno (EMB), agar Salmonella Shigella (SS). En el SS las colonias se presentaban
traslucidas con centro negro, en el EMB y MC incoloras. Se realiz identificacin
bioqumica y serolgica. La sensibilidad antibitica fue amplia, a betalactamicos,
aminoglicosidos y fluorquinolonas y estudiada por mtodo de difusin. Acorde a esto se
cambi esquema a piperacilina+ tazobactam. Con tratamiento antibitico y drenaje del
absceso el paciente tuvo una evolucin favorable, el dbito fue progresivamente menor y
se realiz nuevo estudio con TAC, evidencindose disminucin del absceso. Se realizaron
estudios adicionales para descartar otras patologas. Conclusin: Por los estudios
realizados se presume que la bacteriemia en este paciente fue secundaria al absceso de
psoas, formado semanas o meses atrs, tras una bacteriemia primaria, como
consecuencia de una gastroenteritis no consultada. El anlisis de este caso puede ser
utilizado para estimular la conducta de cultivar los pacientes y pensar en certificar
etiologas, lo que en algunos casos, a pesar de ser pacientes internados, son posibles
tratamientos
antibacterianos
ms
simples.

P - 021
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Avils N, Hernndez D, Caliva S, Cmito L, Vilaro M
Institucin: Hospital Privado Centro Mdico de Crdoba

ARTRITIS SPTICA POR Campylobacter coli

La artritis sptica es la reaccin inflamatoria de la superficie articular provocada por la
presencia de diferentes microorganismos. Debido a la gran vascularizacin de la
membrana sinovial, la mayora de los episodios se producen como consecuencia de una
bacteriemia o fungemia, transitoria o persistente, a partir de un foco a distancia. Sin
embargo, tambin es posible la inoculacin directa, por traumas penetrantes, durante un
acto quirrgico o por diseminacin a partir de un foco contiguo. Se considera una
emergencia reumatolgica debida a su rpida capacidad de destruccin articular junto a la
prdida funcional irreversible.
Caso clnico: Paciente de 82 aos, sexo femenino, con antecedente previo de remplazo
total de rodilla derecha y problemas cardacos con deterioro de la funcin ventricular. Se
presenta en la guardia del hospital con hiperemia de 39C, escalofros, dolor intenso,
edema, aumento de la temperatura en rodilla derecha e impotencia funcional. En la
consulta refiere, adems, diarrea acuosa, con cinco deposiciones diarias. Se decide
internacin para definir diagnstico.
Se realiz artrocentesis de rodilla derecha con extraccin de lquido articular purulento. El
recuento celular fue mayor a 60.000 clulas/mm3, sin grmenes al examen directo. Se
tomaron muestras para coprocultivo y hemocultivos, y se inici tratamiento emprico con
vancomicina 20 mg/kg cada 8 hs.
El material articular se sembr en Agar Sangre Columbia con 5% de sangre de carnero,
Agar Chocolate y caldo BHI y se incub a 37 C. A las 72 horas no se observ desarrollo
en medios de cultivos slidos mientras que en caldo BHI se evidenci una leve turbidez.
Se realiz examen en fresco y coloracin de Gram presentando movilidad y morfologa
compatible con el gnero Campylobacter. Para favorecer su recuperacin, se inocul el
caldo en un frasco de hemocultivo y se sembr en Agar Sangre Columbia con 5% de
sangre de carnero, incubado en microaerofilia (5-10% de O2, 3-10% CO2, 85% N2) a 37
C. A las 48 horas se obtuvo desarrollo de Campylobacter coli identificado por pruebas
bioqumicas convencionales y por espectrometra de masas con matriz asistida por lser
MALDITOF con un score 2,148.
Se decide rotar tratamiento a imipenem 500 mg cada 6 hs. El paciente evoluciona
favorablemente. El coprocultivo y los hemocultivos fueron negativos.
Conclusin: A partir de este caso se destaca la necesidad de considerar a Campylobacter
coli como probable patgeno en infecciones articulares. La utilizacin de frascos de
hemocultivos
en
el
procesamiento
favorecera
su
recuperacin.

P - 022
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Barcudi, D. (1), Gonzlez, L.(3), Montanaro, P.(4), Aguirre, A.(5), Ocaa, V.(6),
Tamborini, A.(7), Sauer, H.(8), Borda, N.(9), Turco, M.(10), Bocco, JL (1), Cortes, P.(2), Sola, C(1).
Institucin: (1) CIBICICONICET. Facultad de Ciencias Qumicas, UNC, (2) Hospital Peditrico
del Nio Jess, (3) Hospital Infantil Municipal, (4) Hospital de Nios de la Santsima Trinidad, (5)
Hospital San Roque, (6) Hospital Nacional de Clnicas, (7) Hospital Lucio Molas, (8) Hospital Heller,
(9) Laboratorio CIBIC, (10) Hospital de Nios Dr Ricardo Gutirrez.

ANLISIS FENOTPICO Y GENOTPICO DE Yersinia enterocolitica AISLADA DE

MUESTRAS CLNICAS, ESTUDIO MULTICENTRICO EN ARGENTINA.
Yersinia enterocolitica (Ye), es un patgeno responsable de un amplio rango de
enfermedades, principalmente manifestaciones gastrointestinales como diarrea y
enterocolitis, as como complicaciones ms severas en las que se pueden destacar
linfadenitis mesentrica, artritis reactiva y sepsis. La va de infeccin ms frecuente es el
consumo de alimentos contaminados, principalmente productos derivados del cerdo. Ye
se divide en seis biotipos bioqumicamente diferentes, de los cuales el biotipo 1B, 2, 3, 4 y
5 son considerados patgenos para el humano por presentar genes de virulencia
codificados a nivel cromosmico y en un plsmido de 70 kb (pYV), mientras que el biotipo
1A es considerado no virulento. Ye est ampliamente distribuida en el mundo conforme a
variaciones geogrficas y climticas, localizndose mayormente en pases de climas fros.
En nuestro pas la epidemiologa es incierta y existen escasos estudios que involucran a
Ye en alimentos y muestras clnicas. El objetivo de este trabajo es el de brindar datos
epidemiolgicos obtenidos tras un anlisis fenotpico y genotpico de 43 casos
espordicos de Ye recuperadas en muestras clnicas provenientes de 9 hospitales
distribuidos en 5 provincias de Argentina. Se analiz la sensibilidad antimicrobiana por
difusin en agar Mueller-Hinton segn las guas de Clinical and laboratory standards
institute (CLSI), se determin el biotipo de cada cepa siguiendo el esquema de Wauters y
colaboradores basado en pruebas bioqumicas, as tambin se realiz la bsqueda por
PCR de genes de virulencia tanto cromosmicos (ystA, ystB y ail) como plasmdicos (virF
y yadA), finalmente se analiz por electroforesis de campo pulsado (PFGE) la relacin
clonal de las cepas en estudio, utilizando dos endonucleasas de restriccin (XbaI y NotI).
Todas las cepas presentaron resistencia a cefalotina y ampicilina, con sensibilidad a
cefalosporinas de 3 generacin, fosfomicina y trimetoprima-sulfametoxazol, solo en un
20% de los aislamientos se observ sensibilidad disminuida a quinolonas fluoradas. El
100% de las cepas fueron tipificadas como biotipo 4. Se observ un genotipo principal
dado por la presencia de los genes ail+, ystA+, virF+, yadA+ en 39 cepas, mientras que
en 4 cepas no fueron amplificados los genes codificados en el pVY. El anlisis por PFGE,
con ambas endonucleasas de restriccin, demostr la presencia de un pulsotipo
predominante A1 en 37 cepas. Estos datos sugieren que en muestras clnicas en
Argentina el biotipo de Ye ms frecuente es el 4 y que las cepas que circulan en nuestro
pas estn estrechamente relacionadas a nivel gentico, presentando una relacin clonal.
Estos resultados aportan nuevos conocimientos a la epidemiologa de este patgeno en el
pas,
la
cual
se
mantiene
incierta.

P - 023
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Bartoli, C.; Tacchini, M.; Figueroa, M.; Nbile, C.
Institucin: Seccin de Microbiologa. Laboratorio. Hospital Misericordia.

RODOCOCOSIS DISEMINADA EN PACIENTE HIV+

Rhodococcus equi (R. equi), microorganismo bien caracterizado en medicina veterinaria,
se ha convertido en un patgeno cada vez ms frecuente en humanos
inmunocomprometidos. Afecta principalmente a los pulmones, desde donde se disemina a
otros sitios. Es un cocobacilo intracelular facultativo gram positivo, pleomrfico,
parcialmente cido alcohol resistente. Localiza dentro de los macrfagos y persiste en
ellos debido a su capacidad de inhibir la fusin fago-lisosoma. Caso clnico: paciente de
36 aos, HIV +, en estadio C3, con recuento de CD4+: 71 clulas/l (7 % de LT totales),
en tratamiento antirretroviral y terapia emprica para mltiples patologas; ingresa al
hospital febril, con astenia generalizada, disnea y tos hmeda. Examen fsico: notable
estado consuntivo. Laboratorio: hematocrito 16,5 %, hemoglobina 5,2 g/dl, otros
parmetros normales. Cultivos de sangre, esputo y lavado broncoalveolar para grmenes
comunes, micobacterias y hongos: negativos. TAC de trax: imagen cavitada con
contenido hidroareo en comunicacin con rbol bronquial derecho. Se realiza ciruga
para reseccin de la caverna. Biopsia pulmonar: Coloracin de Zhiel Nielsen negativa y
Kinyoun positiva. El cultivo desarroll colonias color rosa salmn, mucosas, con
caractersticas bioqumicas de R. equi. Se agrega claritromicina, logrndose mejora
clnica. Alta hospitalaria. A los tres meses reingresa por sndrome convulsivo, hemiparesia
y abandono de tratamiento antirretroviral. TAC de cerebro: lesin hipodensa frontoparietal
e imagen nodular en sustancia blanca, sugestivo de lesin por toxoplasmosis; se agrega
tratamiento emprico para esta patologa. Cultivos de LCR para grmenes comunes,
micobacterias y hongos negativos. Hemocultivos por lisis negativos. Por la pancitopenia,
falta de respuesta clnica y persistencia febril se toman muestras de mdula sea; el
cultivo fue positivo para R. equi. Alta hospitalaria al mes de internacin. A 8 meses del
aislamiento inicial, reingresa con convulsiones, mal estado general por escasa adherencia
al tratamiento. Presenta lesiones en tronco y miembros superiores, adenopatas
inguinales y submaxilares no dolorosas y muguet. A pesar de la terapia antibitica para R.
equi, contina sintomtica, con episodios convulsivos y en franco deterioro. La
rodococosis es poco frecuente. Se presenta como una neumona crnica cavitada con
tendencia a la diseminacin hematgena. Pese a que se busc el agente en esputo,
lavado broncoalveolar, hemocultivos y LCR, no se aisl en estas muestras. Las de mayor
rdito fueron tejido pulmonar y medula sea. Al no haber pruebas de sensibilidad
estandarizadas, el tratamiento se realiza bajo esquemas basados en su patogenia y
actividad in vitro. Se sugiere utilizar al inicio una combinacin de agentes que resulten
bactericidas, lipoflicos y con buena actividad intracelular. El tratamiento es prolongado y
debe considerarse la cronicidad y falta de respuesta teraputica en estos pacientes.

P - 024
rea: Bacteriologa clnica
Autores: E. Biondi; A. Rodrigo; A. Fahey; M. Gmez; N. Altube; F. Pasteran; S. Gomez, A. Corso;
M. Vazquez
Institucin: Hospital de Nios Dr. Ricardo Gutierrez- INEI-ANLIS Malbran

COLONIZACIN POR KLEBSIELLA PNEUMONIAE Y ACINETOBACTER BAUMANNII

PRODUCTORES DE METALOCARBAPENEMASA TIPO NEW DELHI (NDM) EN
HISOPADOS RECTALES EN EL HOSPITAL DE NIOS DR. RICARDO GUTIERREZ
Introduccin: Los primeros microorganismos productores de NDM se aislaron en India y
Suecia en el ao 2008, en Amrica en 2010 (EEUU y Canad), extendindose en el 2011
a Amrica Latina. En Argentina, el primer aislamiento fue en el 2013 en una cepa de
Providencia rettgeri, en un hospital de adultos de CABA. La deteccin temprana de
portadores de estas cepas productoras de NDM es esencial para prevenir su
diseminacin. Objetivo: Comunicar los dos primeros aislamientos de cepas productoras
de NDM, Klebsiella pneumoniae (Kpn) y Acinetobacter baumannii (Aba) en hisopados
rectales. Materiales y Mtodos: Desde febrero de 2011 se realiza la bsqueda peridica
de pacientes colonizados con bacilos gramnegativos productores de carbapenemasas
mediante hisopados rectales (HR) utilizando el medio ChromAgarTMKPC (CAKPC) en
unidades de pacientes crticos: inmunosuprimidos, UTI y UTI neonatal. A las colonias de
bacilos gramnegativos que desarrollaron en el medio CAKPC se les realiz tipificacin y
sensibilidad por difusin y VITEK2, segn normas CLSI y Protocolos de bsqueda de
carbapenemasas del Laboratorio Nacional de Referencia INEI-ANLIS Malbrn (LNR). Se
determin la actividad de carbapenemasa mediante un ensayo bioqumico-colorimtrico
(BLUE-CARBA). Ambas cepas fueron enviadas al LNR para su tipificacin por
MALDI_TOF y confirmacin molecular de los genes de resistencia adquiridos. Resultados:
La cepa de Aba se aisl de un paciente de 19 aos con enfermedad neurolgica y la Kpn
de un nio de 4 aos con psoriasis eritrodrmica. En el medio CAKPC las colonias de Aba
fueron color crema y la Kpn de color azul. Ambas cepas resultaron resistentes (R) a
cefalosporinas de tercera y cuarta generacin, piperacilina- tazobactam,
carbapenemes,TMS, ciprofloxacina, amino-glucsidos y sensibles (S) a colistn Kpn
adems fue S a fosfomicina (endovenosa) y present R a minociclina y tigeciclina, a
diferencia de Aba. Las sinergias entre Im y EDTA fueron positivas en las dos cepas.
Ambos aislamientos fueron detectados como productores de carbapenemasas mediante
el mtodo de BLUE-CARBA. Se obtuvo amplificacin especfica de blaNDM por PCR en
ambos aislados. Conclusiones: Se reportan los dos primeros casos de Kpn y Aba
productores de NDM en nuestro hospital, siendo en Aba el primer aislamiento del pas. En
el pas predominan las enterobacterias productoras de carbapenemasa tipo KPC, pero es
importante buscar metalocarbapenemasas en todos los bacilos gramnegativos que
desarrollen en el medio CAKPC. La emergencia de NDM en la poblacin peditrica de
Argentina constituye un factor de alto riesgo para este grupo vulnerable de pacientes y un
riesgo
potencial
para
todo
el
sistema
de
salud
del
pas.

P - 025
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Bongiovanni, M.; Vzquez, S.; Comito, L.; Caliva, S.; Abiega, C.; Vilar, M.
Institucin: Hospital Privado centro mdico de Crdoba

GASTROENTERITIS AGUDA A Salmonella spp Y Shigella spp EN UN CENTRO

MDICO PRIVADO DE CRDOBA, ARGENTINA.
Introduccin: La gastroenteritis aguda (GEA) es una de las principales causas de
mortalidad en nios en todo el mundo; puede ser ocasionada por virus, bacterias y
parsitos. La severidad de su presentacin depende de factores relacionados al paciente
y al agente etiolgico. Salmonella spp y Shigella spp son las bacterias ms
frecuentemente aisladas en pacientes con GEA.
Objetivos: analizar la frecuencia de Salmonella spp y Shigella spp aisladas de materia
fecal en el Hospital Privado de Crdoba y su perfil de susceptibilidad a los antimicrobianos
desde el 1 de Enero del 2013 al 31 de Marzo del 2014. Materiales y Mtodos: las
muestras fueron cultivadas en medios selectivos como agar Salmonella-Shigella, agar
Levine (con eosina azul de metileno) y agar Mac Conkey con Sorbitol. La identificacin y
pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos se realizaron por el sistema
automatizado Phoenix Becton Dickinson.
Resultados: En 650 muestras de pacientes con GEA se aislaron 81 (12.46 %) Salmonella
spp, 10 (1.54 %) Shigella spp, 14 (2.15 %) Shigella sonnei, 19 (2.92 %) Shigella flexneri.
En cuanto a la susceptibilidad a los antimicrobianos en Shigella: 53.03 % fue resistente a
ampicilina (AMP), 59.8 % a trimetroprima-sulfametozaxol (TMS), y 3.5 % a ceftriaxona
(CRO). En Salmonella: 13.0 % fue resistente a AMP, 5.2 % a TMS, 1.3 % a ciprofloxacina
(CIP), 2.3 % a CRO y 1.06 % a ceftazidima (CAZ). No se obtuvieron cepas de Shigella
spp resistentes a CIP ni a ceftazidima. La mayora de los casos de GEA por Shigella spp y
Salmonella spp se dieron en pacientes mayores de 10 aos, 60.5 % y 43.2 %
respectivamente.
Conclusiones: se incluyeron en el anlisis a estos dos enteropatgenos que son los que
con mayor frecuencia se aslan en los pacientes asistidos en nuestra institucin
prevaleciendo los aislamientos de Salmonella spp por sobre los de Shigella spp, los
mayores porcentajes de resistencia a los antimicrobianos ensayados se encontraron en
cepas de Shigella spp con una marcada resistencia a AMP y TMS y en menor medida a
CRO. A pesar que la mayora de las GEA son autolimitadas hay determinadas
circunstancias (inmunodepresin, lactantes, edad avanzada,comorbilidades, etc) en
donde es necesario optar por una conducta teraputica adecuada en funcin a los
resultados obtenidos en el cultivo de materia fecal no solamente para disminuir la
duracin de los sntomas sino tambin para disminuir la excrecin microbiana fecal, en
otros casos como Salmonella spp el tratamiento podra alargar el estado de portador.

P - 026
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Prieto C.1, Massillo C.1,2, Valeiras B.1, Martina P.1, Yantorno O.1, Gatti B.3, Bettiol M.3,
Montanaro P.4, Cazzola M.5, Perez S.5, Rentera F.6, Diez G.6, Achiary C.7, Achiary A.7 y Bosch
A.1*
Institucin: 1CINDEFI, CONICET-CCT La Plata, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad
Nacional de La Plata; 2Secretara de Extensin Universitaria, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP;
3Hospital "Sor Maria Ludovica", La Plata, Sala Microbiologa; 4Hospital Santsima Trinidad de
Crdoba, Crdoba; 5Hospital HIGA R. Rossi, Sala Bacteriologia, La Plata; 6Hospital "Sor Maria
Ludovica", La Plata, Servicio de Neumonologa; 7Infocom S.A, Av. Santa Fe 3694, CP 1425 Ciudad
Autnoma de Buenos Aires.

DISEO DE UNA BASE DE DATOS VIRTUAL INTERACTIVA PARA EL

ALMACENAMIENTO Y MANEJO DE DATOS ASOCIADOS A ORGANISMOS
PATGENOS EN LABORATORIOS DE MICROBIOLOGA
El estudio de la interaccin patgeno-hospedador plantea en salud humana, una serie de
desafos tanto desde la perspectiva epidemiolgica como evolutiva, que se asocian
necesariamente al manejo racional y ordenado de un gran nmero de datos. El
ordenamiento y utilizacin sistemtica de distinto tipo de informacin adquirida en
diferentes centros de salud o laboratorios especializados resulta una tarea muy compleja,
pero fundamental para realizar distintos tipos de estudio. Tradicionalmente este conjunto
de datos es manejado a travs de ficheros o tablas tipo Excel, sin embargo estos
sistemas muestran limitaciones importantes en la capacidad de almacenamiento y
recuperacin de la informacin. Particularmente en nuestro Pas, y de acuerdo a nuestros
conocimientos, no hay disponibles bases de datos que permitan incorporar informacin
clnica de los pacientes junto con datos bioqumicos y moleculares de los patgenos, de
manera sistemtica.
El objetivo del presente trabajo ha sido desarrollar un instrumento informtico que permita
incorporar reseas referidas al paciente, su patologa y sintomatologa; as como la
informacin asociada al agente patgeno. Se busc obtener un sistema que permitiera
acceder a dicha informacin de manera prctica, ordenada y sistemtica.
A tales fines hemos diseado y desarrollado una base de datos virtual de actualizacin
permanente, compuesta por una base de datos principal y una interfase basada en la
web, empleando la arquitectura de la lnea de productos Servoy (www.servoy.com)
basada en tecnologa Java. En particular el sistema desarrollado contiene informacin
clnica de pacientes fibroqusticos y no fibroqusticos que padecen infecciones
respiratorias o septicemias; caractersticas fenotpicas y moleculares de los patgenos
respiratorios Gram-negativos responsables de las mismas as como de organismos
ambientales o aislados del ambiente hospitalario. El sistema permite el acceso a los datos
almacenados a travs de diferentes filtros: I) seleccionando pacientes que concurren a
determinado hospital, II) pacientes que cursan determinadas infecciones, III) infecciones
causadas por distintos organismos, IV) tipo de anlisis, y V) resultados de los anlisis, etc.
La base de datos virtual interactiva permite a partir de la informacin almacenada, realizar
distintas grficas y anlisis estadsticos.
La base de datos creada permite realizar trabajos en red coordinados y constituye una
herramienta esencial para: a) conocer evolucin de procesos infecciosos en pacientes
fibroqusticos; b) analizar la epidemiologa local; c) estudiar modificaciones genticas y

fenotpicas de patgenos, d) registrar la variacin en la resistencia a antibiticos a lo largo

del tiempo; y e) organizar y sistematizar toda la informacin disponible en relacin a la
interaccin patgeno-hospedador.
Esta base de datos virtual podra extender su aplicacin al almacenamiento y manejo de
datos
asociados
a
otros
organismos
patgenos.

P - 027
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Garca ME, Pereyra L, Alesso N, Berruezo F, Ferreyra Y, Amieva C, Vilaro M, Bottiglieri
M.
Institucin: Clnica Universitaria Reina Fabiola

Aborto sptico asociado a infeccin por Campylobacter fetus spp fetus

Campylobacter fetus spp fetus es un patgeno oportunista que rara vez causa diarrea. La
infeccin cursa con una bacteriemia o septicemia con afectacin de distintos rganos:
endocarditis, tromboflebitis, meningitis, artritis, abortos, parto prematuro y ocasionalmente
infeccin perinatal. Las especies de Campylobacter spp estn ampliamente distribuidas
en aves de corral encontrndose en el epitelio gastrointestinal y urogenitalde vacunos,
porcinos, ovinos, caprinos y en los animales domsticos. Caso clnico: Mujer, 43 aos,
consulta por fiebre 40,2 C, astenia, cefalea, mialgias, FC: 119/min, FR: 20/min, hipotensa
70/50 mmHg, sangrado vaginal activo con flujo vaginal oscuro das anteriores; abdomen
distendido y doloroso, 9600 glbulos blancos, VSG: 30, PCR: 106, gonadotrofina
corinica: 14200 mUL/ml ( embarazo de 5-6 semanas, desconocido por la paciente). La
ecografa revel endometrio engrosado, lmina de lquido en su interior y reas
ecognicas. Se realiz legrado uterino aspirativo, obtenindose restos ovulares sin
fetidez, que se enviaron a anatoma patolgica y microbiologa junto con hemocultivos. Se
comenz con Ampicilina-Sulbactam: 3grs/6hrs y Gentamicina: 240mg/24hrs. Con
evolucin favorable y afebril hasta el alta, se rot a Amoxicilina-Clavulnico 1grs/12 horas
por 10 das. Al examen directo de los restos ovulares se observ 3 PMN/campo y
ausencia de microorganismos con cultivo positivo, al igual que los hemocultivos para
Campylobacter fetus spp fetus identificado por sus caractersticas microscpicas de bacilo
gram negativo curvo, microaerfilo a 37 C, oxidasa y catalasa positivas; urea, produccin
de sulfuro y crecimiento a 42 C negativos; resistencia a cido nalidixico y sensibilidad a
cefalotina y confirmado por MALDI TOF. Las muestras de vagina y materia fecal fueron
negativas para dicho microorganismo. Existen escasos reportes sobre esta bacteria
asociada
a
aborto
sptico
en
humanos.

P - 028
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Garca M, Pereyra L, Comisso S, Comisso R, Berruezo F, Amieva C, Suarez M.E,
Bottiglieri M.
Institucin: Clnica Universitaria Reina Fabiola

Sinusitis maxilar crnica por Salmonella Thyphimurium

La sinusitis o rinosinusitis es una respuesta inflamatoria de la mucosa de la nariz y de los
senos paranasales debido a alergia o a una infeccin viral, que puede progresar a una
bacteriana, siendo esta ltima ms persistente, llevando a una patologa crnica si dura
por ms de tres meses. Si la infeccin es de origen bacteriano, los tres agentes causales
ms comunes son el Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae y Moraxella
catarrhalis. En la sinusitis crnica, se observa una combinacin de bacterias anaerobias y
aerbicas, incluyendo Fusobacterium, Prevotella spp, Porphyromonas spp y
Peptostreptococcus spp, Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativos,
bacilos gram negativos aerobios, especialmente en pacientes con enfermedades de base
e inmunocomprometido. La sinusitis maxilar crnica por Salmonella Thyphimurium es
sumamente rara y slo se describe un caso en la literatura consultada. Paciente
masculino de 55 aos diabtico, hipertenso e hipercolesterolemico que consult por
rinorrea purulenta con fetidez y cefalea intensa, de un ao y medio de evolucin, con
imagen por TAC de velos maxilar, etmoidal y frontal izquierdo. Al examen se observ
secrecin purulenta en techo de fosa nasal izquierda y meato medio izquierdo, se
diagnostic sinusitis crnica maxilar izquierda y posible etmoiditis concomitante. Se
plante como diagnstico diferencial la etiologa odontgena por lo cual se interconsult
con odontologa. Se indic sinusotoma maxilar izquierda, con abundante secrecin
purulenta ftida sin estudio microbiolgico. Se medic con amoxicilina-cido clavulanico y
clindamicina, interrumpindose por cuadro de gastroenteritis complicado con colitis severa
por Clostridium difficile diagnosticada por PCR en heces. Por persistencia de la
sintomatologa se indic Rifampicina-trimetoprima y luego ciprofloxacina. Durante todo el
tiempo present cuadros de diarrea en forma intermitente e independientes de la ingesta
de antibiticos. Ante la mala evolucin se realiz una nueva sinusotoma maxilar
izquierda. Se extrajo abundante material ftido, se realiz lavado del seno y se envi
muestra a Microbiologa. Al examen directo: 20 leucocitos PMN/c, cocos gram positivos
en cadenas y bacilos gram negativos pleomrficos , aislndose posteriormente
Streptococcus anginosus, Prevotella sp. y Salmonella Typhimurium. Se solicit
coprocultivo de donde se aisl Salmonella Typhimirium, con el mismo perfil de
sensibilidad que la encontrada en seno y se indic trimetropina sulfametoxazol. A los 7
das hubo mejora clnica y buena tolerancia al antibitico. El estado de portador crnico,
con la persistencia de la bacteria en heces u orina por 1 ao o ms es raro en humanos
observndose en un bajo porcentaje de los que padecieron gastroenteritis salmonelsica,
siendo el principal reservorio la va biliar. El presente caso representa una coinfeccin
gastrointestinal
y
sinusal
por
Salmonella
Typhimurium.

P - 029
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Caliva S, Abiega C, Avils N, Bongiovanni M, Hernandez D, Vilar M
Institucin: Hospital Privado Centro Mdico de Crdoba

BACTERIEMIAS POR Stenotrophomonas maltophilia, UNA REVISIN DE TRES AOS.

Introduccin: Stenotrophomonas maltophilia es un bacilo Gram negativo no fermentador,
aerbico, naturalmente resistente a cefalosporinas y carbapenemes que ha cobrado gran
relevancia como patgeno emergente en pacientes crticos, inmunocomprometidos y bajo
tratamiento con antibiticos de amplio espectro.
Objetivo: Describir las caractersticas clnicas, epidemiolgicas de pacientes con
bacteriemias por Stenotrophomonas maltophilia (BaSM) internados en el Hospital Privado
Centro Mdico de Crdoba, durante el perodo enero 2011-abril 2014.
Materiales y mtodos: Se realiz un anlisis de las historias clnicas de pacientes con
BaSM. La identificacin y sensibilidad fue llevada a cabo por mtodos automatizados .Se
obtuvieron valores de sensibilidad a trimetroprim-sulfametoxazol (TMS), ceftazidima (CAZ)
y levofloxacina (Levo). La determinacin de sensibilidad a minociclina (Mino) se efectu
por el mtodo de difusin en placas de Mueller Hinton siguiendo las normas de CLSI.
Resultados: Se registraron 25 episodios. 23 (92%) internados y 2 (8%) asociadas a
cuidados de la salud. La media de edad fue 39 aos y la distribucin por sexo: 13 (52%)
masculino y 12 (48%) femenino. La enfermedad de base ms frecuente fue de origen
oncolgico 8 (32%). Los diagnsticos ms usuales: sndrome febril 13 (52%) y sepsis 8
(32%). 25 (100%) tuvieron como primer sntoma fiebre. Se analizaron las siguientes
comorbilidades: terapia con antibiticos de amplio espectro 21 (84%), corticoides 17
(68%) y antifngicos 14 (56%), ciruga previa 19 (76%), presencia de catter venoso
central (CVC) 19 (76%), transfundidos 17 (68%), asistencia respiratoria mecnica (ARM)
11 (44%), trasplantados 7 (28%) y neutropenia post quimioterapia 7 (28%) . 14 (56%)
fueron de origen desconocido, 5 (20%) asociados a catter y 4 (16 %) infecciones
respiratorias. En cuanto a la sensibilidad: 23 (92%), 23/24 (96%), 4/10 (40%) y 10/10
(100%) fueron sensibles a TMS, Mino, CAZ y Levo respectivamente. 17 (68%) recibieron
TMS como tratamiento, 22 (88%) rotaron de antibitico y 10 (40%) recibieron
carbapenemes de manera emprica. La tasa total de mortalidad cruda fue 24%.
Conclusiones: Stenotrophomonas maltophilia es un patgeno emergente en nuestro
hospital y debe ser tenido en cuenta en el tratamiento emprico de bacteriemias en
pacientes en estado crtico, oncolgicos, inmunodeprimidos y con factores predisponentes
tales como la presencia de CVC y ARM, tratamiento previo con corticoides y antibiticos
de
amplio
espectro.

P - 030
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Cannistraci Giolito R*^, Fernandez C^*, Sienko G*^, Fuente M*, Pavan^, J, Littvik A^
Institucin: *Hospital Materno Provincial, Crdoba;^Ctedra de Bacteriologa y Virologa Mdicas,
FCM, UNC.

Streptococcus agalactiae PRODUCTOR DE INFECCIN INVASIVA NEONATAL EN LA

ERA DEL SCREENING UNIVERSAL Y LA PROFILAXIS INTRAPARTO
Streptococcus agalactiae (Sag) es uno de los agentes infecciosos de mayor impacto en el
neonato y en los lactantes menores. En la dcada del 70 la infeccin por este agente se
reconoci como un grave problema de salud pblica materno neonatal. Con la
implementacin de los estudios de portacin materna, se detect un descenso de la
incidencia de las infecciones neonatales de aparicin temprana, pero se plante otra
problemtica: dificultad en el cumplimiento en tiempo y forma del estudio de portacin,
administracin inadecuada de la profilaxis y falta de control de las infecciones tardas. La
inmunizacin de la madre es una posible estrategia de prevencin a implementar por lo
cual es importante el conocimiento de los serotipos. Nuestros objetivos fueron 1-describir
los fenotipos y serotipos de Sag neonatales de los ltimos 5 aos en una maternidad
publica 2-detallar las formas clnicas asociadas y 3- investigar si hubo estudios de
portacin materna. Materiales y mtodos:se realiz un estudio retrospectivo de Sag
aislados de infecciones invasivas en neonatos desde 01/01/2009 al 31/04/2014 del
Hospital Materno Provincial, Crdoba. Las cepas fueron estudiadas con: Gram, catalasa,
CAMP, hidrlisis del hipurato, bilis esculina y PYR; y confirmadas como Grupo B mediante
aglutinacin con latex (SlidexStrepID, Biomerieux). La sensibilidad se realiz por difusin
con discos de acuerdo a las normas CLSI. La serotipificacin se llev a cabo mediante
sueros Strip B. Latex, del Statens Serum Institut, Dinamarca. Se investig la portacin
materna y se describi la forma de presentacin clnica asociada (precoz o tarda)
Resultados: Se aislaron 9 Sag invasivos, de los cuales 6 correspondieron a infecciones de
aparicin precoz (IAP):4 sepsis, una meningitis y una neumona; 2 a infecciones tardas
(IAT): una meningitis y una sepsis a punto de partida de celulitis. La cepa restante se aisl
del mismo paciente en forma precoz y tarda (IAPT) ambas meningitis. Las muestras
correspondieron a 8 muestras de sangre, 3 LCR y un exudado de celulitis. Las IAP lo
hicieron dentro de los 3 primeros das de vida, las IAT entre los 21 y 30 das. Solo se
realiz estudio de portacin en una madre y el resultado no llego a tiempo. Todas las
cepas fueron sensibles a ampicilina, penicilina, y vancomicina, 7 fueron sensibles a
eritromicina y clindamicina, una R a eritromicina y clindamicina con fenotipo cMLSb y una
resistente a eritro y sensible a clindamicina con fenotipo M. A 6 cepas se le detectaron sus
serotipos: 3 cepas Ia (50%), 2 cepas serotipo III (33%) y una Ib(17%).Se concluye la
importancia 1- del cumplimiento del tamizaje universal, cuyos resultados deben llegar a
tiempo 2- del monitoreo de la resistencia a eritro y clinda:( 22% de R a eritro y 11% de R a
clinda ) y 3- de investigar los serotipos locales para evaluar el real impacto de futuras
vacunas,
siendo el Ia y el III
nuestros serotipos ms frecuentes

P - 031
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Cech, N.1; Fontan,C.1, Guillen, A1.; Andreis, C2.
Institucin: 1- Servicio de Microbiologa, Hospital 4 de Junio, Pcia. R. Senz Pea, Chaco - 2Centro de Salud Victoria Walk, Zona Sanitaria VII, Pcia. R. Senz Pea, Chaco

BACTERIEMIA POR BRUCELLA MELITENSIS

La brucelosis tambin conocida como fiebre de Malta, fiebre ondulante o del
Mediterrneo, es una enfermedad zoontica de distribucin universal, causada por una
bacteria llamada Brucella. Afecta a la mayora de las especies animales de sangre
caliente, el hombre es slo un husped accidental. El contagio es por consumo de
alimentos, contacto directo o indirecto con animales infectados o por accidentes de
laboratorio.
Estn descriptas seis especies de Brucella, cuatro de las cuales producen enfermedad en
el ser humano: B. abortus, B. melitensis, B. suis, B. canis.
En la provincia del Chaco desde 1994 al 2013 se registran 2 aislamientos de este germen.
Caso Clnico: Paciente sexo masculino, 49 aos de edad, oriundo del interior del Chaco
de zona rural, de profesin ganadero bovino, porcino y caprino.
Refiere que tres meses antes present sndrome febril prolongado, quebrantamiento
generalizado, cefalea intensa, sudoracin profusa, sntomas disppticos, anorexia y dolor
lumbosacro; consult y fue medicado con Penicilina Benzatnica y antitrmicos, sin
mejora plena.
Actualmente repite el cuadro clnico agregando dolor abdominal, distensin y
hepatomegalia dolorosa, acentuando ms el dolor lumbosacro con impotencia funcional y
artralgia de grandes articulaciones. Se solicita estudios.
Ecografa abdominal: hepatomegalia, resto s/p. RX lumbosacra: leve escoliosis. TAC
Abdomen y pelvis: hgado aumentado de tamao, homogneo, resto s/p.
TAC de columna lumbosacra: signos de espondiloartrosis con osteofitos marginales en los
platillos articulares de los cuerpos vertebrales anterior y superior (Signo de Pedro Pons).
Hipertrofia de las pequeas articulaciones posteriores interapofisarias.
Laboratorio: HTO:37%, Hb: 12 mg/dl, GB: 5140/mm3 (N 61 % - L 31 %); VSG: 24; GOT:
94UI/L, GPT: 73UI/L, FAL: 154UI/L, BT: 0,80mg/dl, BD: 0,41mg/dl, BI: 0,39mg/dl, PCR:
2,4mg/dl, FR: 10U/L. Orina completa: normal. Reaccin de Huddleson: Positiva.
Se solicita Hemocultivo al Servicio de Microbiologa, donde se toma muestras de sangre y
se siembran en frascos de Hemocultivo Britania. A los 7 das se informa negativo para
germenes comunes, pero al dcimo dia se repica en Agar Sangre y desarrolla cocobacilos
Gram (-), Oxidasa (+), Catalasa (+) Urea (+). Se deriva al CNR Dr. C. Malbrn el que
informa Brucella melitensis biovar 1
Se lo trata con Rifampicina 900 mg/da y Doxiciclina 200 mg / da por 6 semanas, con
buena evolucin clnica.
Conclusin: los mtodos serolgicos son prueba indirecta de la infeccin pero deben
estudiarse en conjunto con los datos clnicos y epidemiolgicos mientras el aislamiento
bacteriolgico es confirmatorio, si bien la bacteriologa no siempre es posible y cuando se
la realiza no siempre es positiva, pero contar con los antecedentes clnicos del paciente
alerta al laboratorio para un perodo de incubacin ms prolongado de los cultivos, que
fue lo que permiti el rescate bacteriano en este caso, permitiendo el diagnstico
temprano
y
tratamiento
oportuno.

P - 032
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Chajud A, Brtoli M, Almar A, Boleas M, Mobilia L, Salamone, F
Institucin: Hospital "San Martn"-Paran- Entre Ros

TUBERCULOSIS:IMPOTANCIA DEL CULTIVO COMO APORTE AL DIAGNOSTICO

Introduccin: La tuberculosis (TB) es una de las enfermedades ms antiguas que afectan
a la especie humana, quizs es la que ms dao ha causado tanto en nmero de
enfermos como de muertes. Es una enfermedad reemergente en aumento. La pobreza,
las desigualdades sociales, las condiciones de trabajo, de vivienda, cambios
demogrficos, el impacto de la pandemia VIH/SIDA, el no cumplimiento del esquema
teraputico y la aparicin de resistencia a los frmacos para su tratamiento, han
contribuido a la transmisin de la infeccin y determina una mayor proporcin de personas
que pasan de infectados a enfermos, lo que ha llevado a la reemergencia de esta
enfermedad.
Objetivo: Analizar retrospectivamente los resultados obtenidos de baciloscopas y cultivos
para Micobacterias de muestras pulmonares y extrapulmonares en el perodo de 2009 al
2013.
Materiales y Mtodos: Se tomaron los datos de las muestras pulmonares y
extrapulmonares procesadas para baciloscopa y/o cultivo en el perodo de 2009-2013. La
baciloscopia se realiz por coloracin de Ziehl-Neelsen y cultivo, desde 2009 al 2011, en
Lowenstein Jensen acidificado para muestras pulmonares, utilizando el mtodo de Borda
Bossana y para las muestras extrapulmonares Lowenstein Jensen neutro. En el 2012 se
comenz a realizar cultivo a todas las muestras pulmonares independientemente de la
solicitud mdica, a mediados de ese ao se comenz con el mtodo de Kudoh Owaga.
Resultados: Los casos pulmonares positivos fueron: En el ao 2009,17/397(4,3%); en el
2010,19/291(6,5%); en el 2011,27/405(6,7%); en el 2012, 28/324(8,6%); en el 2013,
38/358(10,6%).Las TB diagnosticadas por cultivo positivo, con baciloscopas negativas:
en 2009, 6%; 2010, 5%; 2011, 7%; 2012,14%; 2013,21%. Los casos extrapulmonares
fueron: en el 2009, 4; en el 2010,2; en el 2011,1; en el 2012,4 y en el 2013,1.
Conclusiones: En nuestro hospital es notorio el aumento de deteccin de casos de TB
pulmonar en los ltimos 5 aos, suponemos que esto es debido a varios factores, tales
como el cambio en la metodologa de trabajo, realizando cultivos a todas las muestras a
partir del 2012, aumentando el aporte del cultivo al diagnstico y el aumento de la
bsqueda de TB en el sintomtico respiratorio. Con respecto a los casos
extrapulmonares, un 42 % estuvo asociado al HIV y fueron las formas ms severas que
llevaron
a
la
muerte
del
paciente.

P - 033
rea: Bacteriologa clnica
Autores: CHEGUIRIN, L.; MARTINEZ, D.; BIA, V.; LAZARA, X.
Institucin: SANATORIO CRUZ AZUL

MENINGITIS POR LISTERIA MONOCYTOGENES: A PROPSITO DE UN CASO

Listeria monocytogenes est ampliamente distribuida en la naturaleza. Se ha aislado
prcticamente en todos los animales, en el 1- 5 % de muestras fecales humanas y hasta
en el 20% de las aguas superficiales. Muchos alimentos estn contaminados con esta
bacteria, representando la principal fuente de transmisin.
Es una causa infrecuente de enfermedad en la poblacin general. Sin embargo, en ciertos
grupos de riesgo como neonatos, embarazadas, ancianos, receptores de trasplante y
personas con deterioro de la inmunidad celular, representa una causa importante de
bacteriemia e infeccin del sistema nervioso central. Se considera que la listeriosis es una
de las principales causas de meningitis bacteriana en inmunodeprimidos, produciendo una
alta tasa de mortalidad en esta poblacin. La presentacin clnica puede ser aguda o
subaguda y no es frecuente la rigidez de nuca.
Reporte de un caso de meningitis por L. monocytogenes en un paciente adulto
inmunodeprimido.
Paciente masculino de 50 aos con antecedentes de mieloma mltiple (2009) con
trasplante autlogo de mdula sea en 2010 (TAMO). En Octubre de 2012 presenta
recada de la enfermedad. Comienza con quimioterapia (Lenalidomida ms corticoides).
El 20 de Marzo de 2013 consulta por fiebre de 38C, mialgias y cefalea frontal (sin
vmitos, fotofobia ni alteracin del sensorio) por lo que se decide su internacin. Examen
fsico. Laboratorio: 3900 glbulos blancos (PMN 79%), radiografa de torax normal. A las
24h comienza con excitacin psicomotriz. Se realiza puncin lumbar y la toma de
hemocultivos. Examen fsico-qumico del LCR: Lmpido; protenas 230 mg/dl, glucosa 49
mg/dl (glucemia srica 145mg/dl), clulas: 200 mm predominio de linfocitos. Examen
directo: Coloracin de gram: no se observan microorganismos y tinta china: negativo
A las 24h de realizada la puncin, el servicio de bacteriologa inform desarrollo de
bacilos gram positivos. Se comenz tratamiento con Ampicilina ms Gentamicina.
El microrganismo fue identificado como Listeria monocytogenes tanto por pruebas
convencionales como por Vitek 2 (Bio merieux). Los hemocultivos fueron negativos.
Luego de 21 das de tratamiento antibitico, el paciente evolucion favorablemente y es
dado de alta.
Las formas clnicas de la listeriosis son variadas y depende de los rganos afectados y del
estado inmunolgico del paciente, siendo la ms habitual, tanto en el adulto como en el
nio, la meningitis. Por ser un microorganismo de hallazgo poco frecuente en el
laboratorio, debe tenerse muy presente cuando se trata de pacientes de riesgo y
fundamentalmente con algn grado de inmunocompromiso. Debe tenerse tambin en
cuenta que la sensibilidad del gram en el directo de LCR es baja.
Tras la introduccin de diversas vacunas contra otras bacterias causantes de meningitis,
Listeria monocytogenes se encuentra entre la tercera y primera causa de meningitis
bacteriana
en
diferentes
poblaciones
de
riesgo.

P - 034
rea: Bacteriologa clnica
Autores: CHIAFITELLA,B; ROJO;S;JURI,L;COSIANSI,C
Institucin: HOSPITAL TRANSITO CACERES DE ALLENDE

PRESENTACION DE UN CASO: CONSULTA TRAUMATOLOGICA Y TUBERCULOSIS

MULTISISTEMICA
Mycobacterium tuberculosis puede diseminarse e infectar a todos los rganos. La
localizacin sea puede llevar a la destruccin del tejido, pasar la infeccin a los tejidos
blandos o drenar al exterior por fisuras y canales. El microorganismo llega por va
hematgena, y es comn que lesione pulmn y rin simultneamente. El riesgo de lesin
sea, aumenta, en personas ancianas con traumatismo reciente, que usan drogas, se
dializan o con cuerpo extrao en el organismo ej (.prtesis). Se manifiesta la importancia
de realizar estudios por imgenes, anlisis de sangre y en especial, cultivos
bacteriolgicos diversos, para dar rpido diagnstico y adecuada terapia antibitica.
CASO: Hombre, 39 aos, trabajador rural, ex etilista y tabaquista, antecedentes de
tatuajes y prcticas de acupuntura. Consulta por guardia hospitalaria, lcido, vigil, con
dificultad al caminar, dolor, edema, eritema y orificio fistuloso en tobillo derecho. Refiere
operacin en peron con osteosntesis, hace 8 aos y tratamiento por presencia de
Sthaphylococcus aureus multisensible en secrecin fistulosa, 15 das atrs. Presenta
hipoxia, disnea, fiebre, tos productiva hace 6 meses, prdida de peso 10kg, disuria y
polaquiuria. Laboratorio: GB:10000/mm3, neutrofilia, VSG:120mm, Hto:31%, HB:9g/dl,
PLT:359/mm3, orina: marcada hematuria y moderada piuria. Se decide internacin con
diagnostico de osteomielitis crnica y tratamiento (Tto) con clindamicina y ciprofloxacina.
TAC: se observa en pulmn, procesos de infeccin crnicos compatibles con
bronquiectasia qustica; riones normoformes, el izquierdo con tamao aumentado; vejiga:
paredes engrosadas. Ecocardiograma: vlvula aortica engrosada, proceso degenerativo
de aspecto fibroclcico. Se sospecha de infeccin urinaria, bronquiectasia sobre infectada
y endocarditis. Cultivos: secrecin de fstula, sangre y orina: sin desarrollo; esputo: sin
valor bacteriolgico. Bsqueda de micobacterias: secrecin de fstula y esputo:
baciloscopa y cultivos (+); sangre (3): (-); orina(3): slo una con baciloscopa y cultivo (+).
Identificacin: Mycobacterium tuberculosis sensible a estreptomicina(S), isoniacida(H)
etambutol(E), rifampicina(R), pirazinamida, PAS. Se confirma tuberculosis multisistmica.
Tratamientos:1)ciprofloxacina+ceftriaxona (22das) continuando con AMC (38das);2)
Rifater+(E) (4 meses). Alta hospitalaria a los 60 das. Tto supervisado domiciliario. Control
a los 2 meses: lesiones en vlvula aortica en procesos de calcificacin; rin izquierdo:
contina con aspecto qustico, atrofia del parnquima (tuberculomas?); estudio
micobacteriano de esputo: baciloscopa y cultivo (-), orina: baciloscopa(+) y cultivo(-).Se
adiciona (S) al Tto (3 meses). Controles micobacterianos de esputo y orina: (-). Contina
con (H)+(R) durante 5 meses ms. Contina el control de osteosntesis del tobillo y rin
izquierdo. Es importante pensar en micobacterias en procesos infecciosos mltiples y
acceder
a
estudios
bacteriolgicos
adecuados.

P - 035
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Clementi R, Sturm G, Piersigilli A, Marianelli L, Arrietto A.
Institucin: Policlinico Policial Cordoba Capital

PRIMER AISLAMIENTO DE Klebsiella pneumoniae PRODUCTORA DE KPC

COLONIZANTE DE UNA HERIDA DE PARTES BLANDAS EN UN HOSPITAL DE
ADULTOS.
Introduccin: Las enzimas tipo KPC fueron detectadas originalmente en K. pneumoniae
en el ao 2001 en Estados Unidos, poseen actividad hidroltica extrema sobre penicilinas,
cefalosporinas (espectro reducido y extendido), monobactames y carbapenemes.
El gen de KPC se encuentra en elementos mviles con alta capacidad de diseminarse a
otras bacterias gram negativas, por lo que la presencia y permanencia en la Institucin de
cepas productoras de KPC debe ser considerado de alto riesgo.
Objetivo: Describir el primer aislamiento de K. pneumoniae productora de KPC del
Policlnico Policial.
Caso clnico: paciente sexo masculino, de 45 aos, sin internacin previa, ingresa con
traumatismos mltiples por accidente automovilstico. A nivel del muslo derecho presenta
una gran herida contusa que compromete msculo. Se realiza toilette de la herida, pasa a
la Unidad de Terapia Intensiva y se inicia tratamiento emprico con penicilina, gentamicina
y clindamicina. Presenta buena evolucin y pasa a sala comn. Durante su internacin se
realizaron numerosos toilettes y se utilizaron otros antimicrobianos (ciprofloxacina,
vancomicina). El paciente tuvo buena evolucin y fue dado de alta.
Durante la prctica de los toilettes remiten material al servicio de Microbiologa; se
recupera K. pneumoniae (identificada con pruebas bioqumicas convencionales); se
realiza antibiograma por difusin y se interpreta segn normas del Clinical and Laboratory
Standards Institute (CLSI) vigentes. En base al Protocolo de Trabajo de la Red WHONETArgentina (INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn) se sigui el flujograma para deteccin de
carbapenemasas en enterobacterias. La cepa result sensible solo a Fosfomicina (50 g)
con un halo inhibicin de 17 mm. Se observ sinergia entre Imipenem (10 g) - cido
Bornico (300 g) Meropenem (10 g) y no se observ entre Imipenem (10 g) EDTA/SMA - Cefalosporina de tercera generacin. Resultaron positivas las pruebas de
Hodge, Hodsuda y Masuda a Imipenem. La cepa no present beta-lactamasa de espectro
extendido. Se confirm la presencia de KPC por reaccin en cadena de la polimerasa
para el gen bla KPC, en el Servicio de Antimicrobianos del INEI-ANLIS Dr. Carlos G.
Malbrn.
Conclusin: Se aisl del material remitido de la herida una bacteria resistente a los
tratamientos empricos implementados, la misma fue considerada un colonizante ya que
el paciente tuvo buena evolucin. La rpida deteccin de los mecanismos de resistencia
permite orientar hacia una terapia antimicrobiana adecuada, alertar y controlar la
diseminacin de estas cepas en el mbito hospitalario. Se sugiere la identificacin de
portadores de KPC en areas crticas de la institucin; como as tambin los pacientes
derivados de otras instituciones. La vigilancia activa y la adhesin a las normas bsicas
de control de infecciones, contribuye significativamente al cuidado de la diseminacin de
cepas
productoras
de
KPC.

P - 036
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Cortes P., Gonzlez P., Contreras Funes V., Giusto Y.
Institucin: Hospital Peditrico del Nio Jess Crdoba - Argentina

STREPTOCOCCUS PYOGENES Y STREPTOCOCCUS DYSGALACTIAE SS.

EQUISIMILIS EN FARINGITIS AGUDA EN NIOS DE UN HOSPITAL PEDITRICO DE
LA CIUDAD DE CRDOBA
Al igual que S. pyogenes (SPY), los estreptococos beta hemolticos grupo C y G de
colonia grande, agrupados recientemente como Streptococcus dysgalactiae subesp.
equisimilis (SDSE), han sido implicados como agentes causales de faringitis aguda en
nios y adultos ya que han causado faringitis epidmica en ambas poblaciones, sin
embargo la importancia de este microorganismo como agente causal de faringitis aguda
espordica es incierta. Si bien la prevalencia de SPY sobre SDSE o viceversa ha sido
reportada en diversos estudios y es variable a nivel mundial dependiendo del pas donde
se realiz el anlisis, en Argentina es escasa la informacin de la epidemiologa de estas
dos especies en la poblacin peditrica.
Objetivo: conocer la relacin entre SPY y SDSE aislados de pacientes atendidos en este
hospital con sospecha clnica de faringitis bacteriana aguda durante el perodo de tiempo
comprendido entre el 1 de noviembre de 2009 y el 31 de diciembre de 2013 y cuyas
edades oscilen entre 1 mes y 18 aos, como as tambin estudiar algunas caractersticas
epidemiolgicas diferenciales entre ambos patgenos de manera retrospectiva.
Materiales y mtodos: a los pacientes con sospecha clnica de faringitis bacteriana aguda
se les obtuvo una muestra de hisopado farngeo, el cual fue inmediatamente sembrado en
agar sangre de carnero al 5% (v/v) e incubado en aerobiosis a 37 C durante 48 hs. Las
colonias sospechosas fueron tipificadas mediante mtodos de tipificacin fenotpica
convencionales (PYR, LAP, beta glucuronidasa, bacitracina, etc).
Resultados: en el perodo de tiempo consignado se procesaron 698 hisopados farngeos,
de los cuales en 18 desarroll SDSE (2,6%) y en 182 SPY (26,1%). Con respecto a los
pacientes en los que se recuper SDSE, presentaron un rango etario entre 1 y 18 aos,
con una media de edad de 6,8 aos y una mediana de 8 aos, siendo el 67% pacientes
de sexo femenino. En cambio en los pacientes en cuyas fauces se aisl SPY el rango
etario fue entre 8 meses y 13 aos, con una media de edad de 5,4 aos y la mediana de 6
aos y el 52% fueron de sexo femenino. Ambos patgenos presentaron la misma
estacionalidad.
Conclusiones: en la poblacin que concurri a este nosocomio el 28,7% de las muestras
de hisopados farngeos fueron positivos. SPY prevaleci sobre SDSE de manera marcada
(26,1 vs 2,6%). SDSE fue ms comn en mujeres que en hombres (67 vs 33%) aunque el
nmero de pacientes fue escaso. SPY se recuper en porcentajes similares en mujeres y
en hombres (52 vs 48%). La mediana de edad para SPY fue de 6 aos mientras que para
SDSE fue de 8 aos. Es necesario continuar con la vigilancia de estos importantes
patgenos para profundizar el conocimiento de su relacin epidemiolgica a nivel local.

P - 037
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Cristobal, S(1); Baroni, M(1,3); Mendosa M(1,2); Segovia G(1); Nagel, A(1,2); Mollerach
A(1,2); Zurbriggen, L(1,3) y Mendez, E(1,2).
Institucin: 1-Facultad de Bioqumica y Cs Biolgicas Universidad Nacional del Litoral 2-Hospital
Dr Jos Mara Cullen Santa Fe 3-Hospital de Nios Dr Orlando Alassia Santa Fe

Staphylococcus aureus METICILINO RESISTENTE AISLADOS DE PACIENTES SIN

FACTORES DE RIESGO: INVESTIGACIN DE SCCmec Y SU RELACIN CON LA
LEUCOCIDINA Y LA RESISTENCIA ANTIMICROBIANA
INTRODUCCIN: Staphylococcus aureus meticilino resistente (SAMR) es una bacteria de
importancia clnica que posee un elemento gentico mvil (SCCmec) que porta el gen
mecA responsable de la meticilino-resistencia. Existen diferentes tipos de SCCmec que se
relacionan a determinadas cepas de SAMR; los pequeos, principalmente IV o V a
SAMR-adquiridas en la comunidad (AC) y los tipos de mayor tamao I, II y III
generalmente a los SAMR-asociados al hospital (AH). Los AC en su mayora, no exhiben
resistencia conjunta a otros antimicrobianos (AM) y presentan factores de virulencia entre
los cuales se destaca la leucocidina de Panton-Valentine (LPV). Por el contrario, los AH
con frecuencia presentan resistencia a otros AM no beta-lactmicos y rara vez poseen
LPV. OBJETIVOS: Identificar el tipo de SCCmec presente en aislamientos SAMR
provenientes de pacientes sin factores de riesgo (FR) atendidos en hospitales de la
ciudad de Santa Fe y determinar la prevalencia de los diferentes tipos de SCCmec.
Correlacionar el tipo de SCCmec con el patrn de sensibilidad a AM y con la presencia de
LPV. MATERIALES Y MTODOS: Se estudiaron 99 aislamientos de SAMR provenientes
de pacientes sin FR; 52 del Hospital de Nios Dr. Orlando Alassia, y 47 del Hospital Dr.
Jos Mara Cullen, los cuales contaban previamente con datos de sensibilidad
antimicrobiana y estudio de portacin de LPV. Las cepas fueron analizadas para la
deteccin de SCCmec I a V incluyendo los subtipos IA, IIIA y IIIB. Los datos fueron
analizados estadsticamente con el programa SPSS 17.0. RESULTADOS y
CONCLUSIONES: De los 52 SAMR peditricos, 48 portaban el SCCmec tipo IV y el resto
el tipo I. De los 47 adultos, en 35 se detect el SCCmec tipo IV y en 12 el tipo I. No se
encontraron los otros tipos/subtipos estudiados. De los aislamientos con SCCmec IV, 43
de 48 en peditricos y 34 de 35 en adultos portaban LPV. En cuanto a SAMR con
SCCmec I, se encontr LPV en un nico aislamiento, proveniente de adultos. En relacin
a la resistencia a AM, en la poblacin peditrica las 43 muestras SCCmec IV LPV (+)
presentaron resistencia nula o asociada slo a un AM no beta-lactmico, ocurriendo este
hallazgo en 32/34 de la poblacin adulta. Se concluye que en ambas poblaciones hay una
elevada prevalencia de SCCmec IV, 92% (IC 95%: 85,1% - 99,5%) para peditricos y
75,4% (IC 95%: 62.0% - 87,0%) para adultos. Se encontr una asociacin
estadsticamente significativa (prueba exacta de Fisher, p<0.001) entre LPV y SCCmec IV
en los dos grupos etarios. Las caractersticas halladas en la mayora de estos
aislamientos concuerdan con las definidas para cepas SAMR-AC, las cuales se asocian
frecuentemente a infecciones de pacientes peditricos y adultos sin factores de riesgo.

P - 038
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Monetti M., Estofan P., Tissera A., Molina R., Mosmann J., Frutos C., Kiguen X.,
Venezuela F., Paglini G., Cuffini C.
Institucin: Instituto de Virologa Dr.J.M.Vanella-FCM-UNC. Laboratorio de Androloga y
Reproduccin.

ESTUDIO DE LAS INFECCIONES POR MYCOPLASMA HOMINIS,

UREOPLASMA UREAIYTICUM Y CHLAMYDIA TRACHOMATIS EN UNA POBLACION
DE PACIENTES INFERTILES ASINTOMATICOS
Micoplasma hominis (Mh), Ureaplasma urealyticum (Uu) y Chlamydia trachomatis (Ct)
constituyen las principales especies bacterianas; asociadas a infecciones del tracto reproductor
masculino y femenino, fuertemente implicados con trastornos de la fertilidad. Objetivo: determinar
la presencia de Mh, Uu y Ct en muestras de pacientes infrtiles asintomticos de la ciudad de
Crdoba, Argentina.
Se evaluaron 236 pacientes con infertilidad de 36,7 aos de edad promedio (r= 21 a 55
aos), 158 varones y 78 mujeres que asistieron al Laboratorio de Androloga y Reproduccin (LAR)
durante el ao 2012. Se analizaron 13 muestras de semen (S), 3 hisopados uretrales (Hu), 143
muestras unificadas de hisopado uretral+semen (Hu+S), y 77 hisopados cervicales (Hc). La
presencia de Mh se detect con el equipo comercial Mycofast Evolution II y con el mismo mtodo
se observ el desarrollo de Uu. El diagnstico de Ct se realiz a partir de la extraccin de ADN de
cada muestra. Posteriormente se amplific una regin de 201 pares de bases correspondiente al
plsmido crptico de Ct utilizando los primers CTP1 y CTP2. Para el anlisis estadstico, se realiz
una prueba de hiptesis para la diferencia de proporciones de distribuciones binomiales
independientes (Epidat 3.1).
Mh y Uu fueron detectados en 25,85% (61/236) y 30,93% (73/236) respectivamente, sin
diferencias significativas (p=0,261), mientras que la presencia de Ct fue menor, constituyendo un
5,08 % (12/236) (p<0,05). En mujeres el porcentaje de infeccin con Mh, Uu y Ct fue de 39,74%
(31/78), 47,44% (37/78) y 5,13% (4/78), mientras que en varones de 18,98% (30/158), 22,78%
(36/158) y 5,06% (8/158) respectivamente. La deteccin de Mh y Uu fue significativamente ms
alta en mujeres que en varones (p<0,05). Ct no present diferencias significativas entre ambos
sexos (p=0,769). Mh se detect principalmente en muestras de Hc e Hu en un 38,96% (30/77) y
33,33% (1/3) respectivamente; Uu se encontr con ms frecuencia en S y en Hc; 53,85% (7/13) y
46,75% (36/77). Mientras que Ct fue encontrada predominantemente en Hu+S y en Hc en 5,59%
(8/143) y 5,19% (4/77) respectivamente. El mayor porcentaje de co-infecciones se present con Mh
y Uu (16,11%), mientras que las coinfecciones con Ct slo fueron detectadas en 1 paciente (Uu y
Ct).
En el presente trabajo concluimos que la frecuencia de las infecciones por Mh y Uu fue
ms alta en mujeres. Sin embargo, la frecuencia de Ct fue similar en ambos integrantes de la
pareja. Considerando que las infecciones genitales causadas por estos microorganismos estn
implicados en infertilidad y embarazo ectpico en mujeres y que adems se los ha asociado con
alteraciones de los parmetros seminales en hombres con infecciones genito-urinarias, los
resultados obtenidos confirman la necesidad del diagnstico de estos agentes en pacientes
infrtiles asintomticos.
Apoyo econmico de Fundacin A. Roemmers (2012-2014).

P - 039
rea: Bacteriologa clnica
Autores: OCHOTECO, C.; DEGIOVANNI, G.; ZURBRIGGEN, M.; ARO, C.; BLESA, M.; BARONI,
M.
Institucin: HOSPITAL DE NIOS DOCTOR ORLANDO ALASSIA. CIUDAD DE SANTA FE

PRIMER AISLAMIENTO DE KINGELLA KINGAE

Introduccin Kingella kingae es un cocobacilo gram negativo fastidioso (grupo HACEK),
que coloniza el tracto respiratorio superior a nivel amigdalino, condicin que favorece su
transmisin persona-persona, especialmente entre nios de corta edad con estrecho
contacto en guarderas. Objetivo Describir un caso clnico de artritis por K. kingae en un
nio de 2 aos atendido en nuestro hospital. Caso Clnico: Paciente previamente sano,
que concurre a guardera, consulta por dificultad para el apoyo del miembro inferior
derecho y leve tumefaccin en rodilla del mismo, de 5 das de evolucin. Sin
antecedentes de traumatismo ni lesiones de piel; slo refiere un cuadro de bronco
espasmo 10 das previos y fiebre de 38,4C el da anterior. Se solicita estudios por
imgenes de cadera y ambas rodillas, observndose hidrartrosis en rodilla derecha, se
realiza interconsulta con servicio de traumatologa. Se decide internar y obtener lquido
articular de rodilla derecha, se enva material en frasco de hemocultivo al laboratorio de
bacteriologa y simultneamente se toman dos hemocultivos y muestra de sangre para
anlisis de rutina. Se medica con clindamicina (CLI) cada 6 hs y diclofenac cada 8 hs. La
muestra de lquido articular y los hemocultivos se incubaron en el equipo automatizado
Bact/Alert 3D, positivizndose el frasco de lquido articular a las 36 hs. Se realiz
coloracin de Gram, subcultivo en agar sangre y agar chocolate (5-10% de CO2) y CLDE
(aerobiosis), obtenindose a las 48hs. desarrollo, en los dos primeros medios, de colonias
pequeas, hemolticas en agar sangre. No se obtuvo desarrollo en CLDE. En la
coloracin de Gram se observaron cocobacilos gram (-) en pares. Se realizaron pruebas
bioqumicas manuales: catalasa (-), oxidasa (+), TSI sin cambio, ureasa (-), produccin de
cido a partir de glucosa (+) y maltosa (+). Debido a la alta sospecha de K. kingae, se
enva la cepa al Servicio Bacteriologa Especial INEI ANLIS, se confirma dicho
microorganismo por espectrometra de masa. Si bien, CLSI no tiene normatizadas las
pruebas de sensibilidad para K. Kingae por difusin, se ensayaron en M-Hinton con
sangre de carnero al 5% los siguientes antimicrobianos: CLI, trimetroprima +
sulfametoxazol (TMS), ampicilina, cefalotina, penicilina, eritromicina y cloranfenicol.
nicamente CLI mostr ausencia de halo de inhibicin. A las 48 hs de internado se
somete nuevamente, a drenaje quirrgico y el paciente contina con igual esquema. Tras
7 das de internacin, se da el alta, con indicacin de TMS cada 12 hs durante 7 das.
Discusin: La resistencia a CLI coincide con reportes internacionales que informan
alrededor de un 40%. La mejora clnica del paciente tratado con CLI inicialmente se debi
probablemente al drenaje quirrgico, y la posterior terapia con TMS. Es conocido que la
recuperacin microbiolgica de K kingae mejora cuando se inocula la muestra de lquido
sinovial
en
sistemas
automatizados
de
hemocultivos.

P - 040
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Di Bella H, Rocchi M, Navarro M, Romero V, Novillo F, Manassero C, Ocaa V,
Gasparotto A, Monterisi A.
Institucin: Dpto Bacteriologa, Hosp. Nac. de Clnicas, UNC

BACTERIEMIAS POR Streptococcus dysgalactiae subspespecie equisimilis: ANLISIS

DE 13 AOS EN UN HOSPITAL UNIVERSITARIO
Streptococcus dysgalactiae subsp equisimilis (SDSE) pertenece al grupo C-G de
Lancefield, forma parte de la flora transitoria normal de faringe, piel, tracto gastrointestinal
y genitourinario, pudiendo causar una variedad de infecciones invasivas y no invasivas.
Nuestro objetivo es brindar informacin epidemiolgica sobre las bacteriemias producidas
por SDSE haciendo hincapi en sexo, edad, comorbilidades (CO) asociadas, presentacin
clnica, foco de la infeccin y sensibilidad antimicrobiana (ATM) de las cepas aisladas.
Se analizaron las series de hemocultivos positivos por SDSE de 27 pacientes (1 episodio
(EP) por paciente) en el perodo comprendido entre Enero de 2000 y Julio de 2013. Se
tomaron dos muestras de sangre por paciente que se inocularon en frascos de
hemocultivos (Lab. Brizuela y desde marzo 2011 BactAlert, BioMrieux). Luego de 18-24
hs de incubacin se realiz tincin de Gram y repique en agar sangre ovina al 5%.
La identificacin bioqumica a nivel de especie se realiz con las siguientes pruebas:
hemlisis (+), catalasa (-); bacitracina resistente, CAMP (-), pirrolidonilarilamidasa (PYR -),
Leucinoaminopeptidasa (LAP+), Voges-Proskawer (-),-glucuronidasa (+); acidez de
trehalosa (+) y sorbitol (-).
El perfil de susceptibilidad a los ATM se realiz por mtodo de difusin por discos segn
normas CLSI/NCCLS frente a ampicilina (AMP), eritromicina (ERI), clindamicina (CLI) y
vancomicina (VAN). Los discos de ERI y CLI se enfrentaron a una distancia de 20 mm
para detectar el mecanismo de resistencia (R) a macrlidos-lincosaminas.
Los EP n=27 correspondieron a 62 mujeres (67%) y 9 varones (33%) con edades
comprendidas entre 37 y 95 aos (media=67 a). Veinticinco EP (93%) fueron de origen
ambulatorio y 2 (7%) hospitalizados. El 77,5% de los pacientes posean CO: diabetes
mellitus (DBT) 18%; insuficiencia renal crnica = infeccin por VIH-SIDA 11%; hepatopata
crnica = colagenopata = enfermedad pulmonar crnica = cardiopata = neoplasia 7,5%.
La presentacin clnica fue: sindrome febril + infeccin partes blandas 38%; sindrome
febril 33%; sepsis 15%; artritis sptica 4%.
En el 63% de los pacientes se encontr foco asociado (piel y partes blandas 48%;
articular 15%). La bacteriemia fue monomicrobiana en 25 casos y en 2 se present
acompaada por Staphylococcus aureus.
Los porcentajes de R a los ATM fueron AMP = VAN 0%; ERI 8,6%; CLI 4,5%.
Conclusiones: 1) la mayora de los EP ocurri en pacientes ambulatorios de sexo
femenino, y con una media de edad relativamente avanzada. 2) Ms de la mitad de los
pacientes presentaron CO asociadas siendo la DBT la ms frecuente, y la presentacin
clnica ms comn fue el sindrome febril acompaado de infeccin de tejidos blandos. 3)
Con slo dos excepciones, los EP fueron monomicrobianos y los aislamientos fueron
particularmente
sensibles
a
los
ATM.

P - 041
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Farfan,V; Estrella,C; Brestovitzky, l;Raya, Mario; Raya,Luis; Dugachhes,M; Alfaro, C;
Albornoz, E
Institucin: Hospital Centro de Salud "Zenn Santilln" Hospital de Clinicas "Nicolas Avellaneda"y
PRIS Division Tuberculosis

MASTITIS POR Mycobacterium fortuitum EN PACIENTE CON CA DE MAMA

INTRODUCCION: Las micobacterias ambientales (MA) constituyen una importante
cantidad de especies bacterianas, dentro de las cuales el Grupo de las no pigmentadas
de crecimiento rpido (segn clasificacin de Runyon) son las asociadas a infeccin en
humanos. Las presentacines clnicas son pulmonar, linfadenitis, osteomielitis, abscesos
de piel y tejido subcutneo. En pacientes inmunodeprimidos, sometidos a ciruga cardaca
o de mama el principal agente etiolgico es Mycobacterium fortuitum. El perodo de
incubacin vara entre 1semana y 2aos, siendo unos 30 das lo habitual. CASO
CLINICO: Paciente sexo femenino de 67 aos de edad HIV (-) acudi a la consulta
manifestando que senta bultos en una mama. A la palpacin presento ndulos en la
mama izquierda. Se solicito una mamografa, cuyo resultado corroboro la existencia de
dos ndulos con microcalcifecaciones (15x12 y 19x15) ubicados en el cuadrante superior
interno. Con diagnostico de CA de mama fue intervenida quirrgicamente practicndosele
mastectoma simple con limpieza ganglionar axilar quedando internada, con un posoperatorio controlado. Al cabo de 5 das es dada de alta para su recuperacin en el hogar
y control por consultorio externo y tratamiento oncolgico con Tamoxifeno. Pasados
6meses la paciente regresa presentando en la mama izquierda una ulcera indolora
hemorrgica, asociada a eritema nudoso. Se toma muestra de la secrecin la cual fue
sembrada en medios enriquecidos y se realizo coloracin. Los cultivos fueron negativos
para grmenes comunes y tampoco se observaron grmenes en la coloracin de Gram.
Mientras que la observacin microscpica de los extendidos coloreados con tcnica de
Ziehl Neelsen revelaron la presencia de BAAR (+++). Con este informe se deriva la
muestra para cultivo y se instaura la 1 Fase de tratamiento antituberculoso durante los
dos primeros meses con asociacin de rifampicina, pirazinamida, etambutol e isoniacida.
Debido a manifestacin alrgica el Etambutol es reemplazado por Levofloxacina. El cultivo
para BAAR arrojo resultado positivo (++), identificndose la cepa como Mycobacterium
fortuitum y la sensibilidad por microdilucion en caldo fue Amikacina<1 (S),
Ciprofloxacina<0,1 (S), Claritromicina=1 (S) Sulfometoxasol=2 (S), Cefoxitina=32 (MS),
Dixiciclina=2 (MS), Tobramicina=4 (S). Por lo tanto la segunda Fase del tratamiento se
realizo con Ciprofloxacina y Claritromicina en los sucesivos controles se registro buena
evolucin. CONCLUSION: Se debe ponderar la investigacin de MA de crecimiento rpido
como agentes causales de infecciones en pacientes inminocomprometidos. Valorando la
coloracin de Ziehl Neelsen como tcnica de diagnostico rpido en toda secrecin de
mama con su correspondiente cultivo e identificacin ya que las MA son resistentes a los
frmacos antituberculosos, se recomienda realizar siempre pruebas de sensibilidad para
poder
elegir
el
tratamiento
ms
eficaz.

P - 042
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Furiasse Daniela1, Gasparotto A1, Monterisi A1, Castellano G2, Rocchi M1.
Institucin: 1Dpto Bacteriologa, 2Serv. Nefrologa, Hospital Nacional de Clnicas, UNC

Corynebacterium pseudodiphteriticum EN MUESTRA RESPIRATORIA, PRESENTACIN

DE UN CASO CLNICO
Corynebacterium pseudodiphtheriticum (CP) forma parte de la flora normal orofarngea
pero puede constituirse en un patgeno emergente sobre todo en pacientes
inmunocomprometidos. Presentamos el hallazgo de CP en una muestra respiratoria.
Caso clnico: Paciente de sexo femenino de 76 aos con antecedentes de hipertensin,
diabetes mellitus tipo II insulina-requirente, insuficiencia renal crnica (IRC) e
hipotiroidismo que ingresa por guardia con diagnstico de IRC reagudizada secundaria a
deshidratacin. Se interna en sala comn y pasa a UTI por presentar infarto agudo de
miocardio. Comienza con hemodilisis (HD) por progresin de su IRC. A los 18 das de su
estancia en UTI, sin asistencia respiratoria mecnica, debuta con un cuadro respiratorio.
Se toma muestra de esputo inducido para bacteriologa y se inicia tratamiento emprico
con cefalosporina de 3 generacin.
La muestra receptada fue apta, con intensa respuesta inflamatoria y abundante flora
monomicrobiana constituda por bacilos gram positivos pleomrficos corineformes, tincin
de Ziehl Neelsen (-). Desarroll un cultivo puro y abundante de colonias blancas, lisas, no
hemolticas en agar sangre ovina al 5%. La identificacin se realiz por pruebas
bioqumicas (Manual Clinical Microbiology, ASM, 10thEd, 2011): catalasa (+), no lipoflico,
metabolismo no fermentativo, vibriosttico 0129 sensible, test de CAMP (-), reduccin de
nitritos, pyrazinamidasa, fosfatasa alcalina (+), hidrlisis de urea (+), de esculina y tirosina
(-), acidez a partir de hidratos de carbono (-). No se realiz sensibilidad antimicrobiana ya
que el CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) no presenta puntos de cortes por
difusin.
A los 12 das de tratamiento la paciente presenta buena evolucin, se le da el alta
hospitalaria y contina con HD en tratamiento ambulatorio.
Conclusin: Se jerarquiz el aislamiento de CP debido a lo observado al examen directo y
al cultivo, que se correlacion con la clnica de la paciente.
CP es un hallazgo infrecuente en infecciones respiratorias, pero potencialmente patgeno
principalmente en pacientes inmunodeprimidos o con enfermedad de base trascendente.
Se han documentado casos de infecciones respiratorias asociadas con CP que incluyen
faringitis exudativa, bronquitis, bronquiolitis, traquetis necrosante, traqueobronquitis,
neumona y absceso pulmonar.
Destacamos que las corinebacterias a menudo suelen ser consideradas colonizantes o
comensales, pero debe tenerse especial cuidado cuando cumplen con criterios clnicos y
microbiolgicos para poder ser interpretados como agente etiolgico del cuadro
infeccioso.

P - 043
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Gariboglio Vzquez, M.; Carol Rey, M.; Tracogna, M.; Piccoli, L.; Matzkin, R.; Marques, I.
Institucin: Hospital Dr. J. C. Perrando

REPORTE DE CARBAPENEMASAS TIPO MBL AISLADAS DEL HOSPITAL DR.

J.C.PERRANDO
Las Metalobetalactamasas (MBL) son enzimas que poseen capacidad hidroltica sobre
penicilinas, cefalosporinas, carbapenemes y cefamicinas. Slo el aztreonam (AZT) evade
la accin de estas carbapenemasas. Las MBL en presencia de EDTA, presentan una
inhibicin caracterstica. La Pseudomonas aeruginosa (Pae), es el husped bacteriano
ms frecuentemente asociado a MBL a nivel mundial, slo amenazado en los ltimos
aos por la dispersin de Nueva Delhi Metalobetalactamasa (NDM) en mltiples especies
de enterobacterias. La MBL ms frecuente en Amrica es la tipo Verona Imipenemasa
(VIM), la VIM-2 es la variante ms diseminada alrededor del mundo. En Argentina, los
primeros hallazgos de MBL fueron publicados en el ao 2005 (Pastern y cols). A partir de
este momento y debido a su gran capacidad de transferirse a otras bacterias, se la busca
tambin en enterobacterias. (Gomez et al ICAAC 2013). En la actualidad, se ha podido
identificar la dispersin en Argentina de Pae productoras de diversas MBL con un patrn
regional caracterstico y nico en el pas. La primera MBL reportada en el Hospital
Perrando fue del tipo VIM en una Pae en el ao 2006. (Irigoyen y cols. Congreso
Argentino de Microbiologa, SADEBAC 2006), sin detectarse nuevas cepas hasta el 2011.
El objetivo de este trabajo es reportar las MBL en nuestro hospital y discutir su
importancia diagnstica y epidemiolgica.
Se estudiaron los bacilos Gram negativos aislados en el Servicio de Microbiologa en el
perodo de enero 2010 a marzo de 2014. Aquellos que presentaron sensibilidad reducida
a los carbapenemes, se estudiaron mediante sinergismo entre imipenem-EDTAmeropenem para deteccin de MBL y el Mtodo de Hodge modificado siguiendo el
algoritmo del Centro Nacional de Referencia ANLIS-Malbran.
Se aislaron 9 cepas productoras de MBL, 6 correspondieron a Pae y 3 a enterobacterias
(2 Enterobacter cloacae y 1 Serratia marcescens). Las cepas provenan de herida
quirrgica (1), urocultivos (2), prtesis (1), piel y partes blandas (2), esputo por Tubo
orotraqueal (1), hemocultivo (1) e hisopado anal (1) y pertenecan a salas de clnica
mdica, traumatologa, terapia intensiva y nefrologa. Todas fueron enviadas para su
confirmacin molecular al ANLIS Malbran. Los resultados reportados por biologa
molecular correspondieron a enzimas tipo VIM (8/9) y Sao Paulo Metalobetalactamasa
(SPM) (1/9).
La oportuna deteccin de la presencia de este mecanismo de resistencia enzimtico
impacta en la morbimortalidad de los pacientes con infecciones producidas por estos
grmenes. Debido a las escasas opciones teraputicas que pueden utilizarse es
fundamental el control de la diseminacin mediante medidas de control de infecciones. El
principal desafo del equipo de salud es la deteccin temprana de los pacientes
portadores, realizando estudios de vigilancia. Resaltamos el hallazgo en nuestro hospital
de
una
SPM,
enzima
de
baja
prevalencia
en
nuestro
pas.

P - 044
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Gasparotto A1, Monterisi A1, Trucchia R2, Ocaa Carrizo V1, Navarro M1, Rocchi M1
Institucin: 1Dpto Bacteriologa, 2II Ctedra Infectologa. Hosp. Nac. de Clnicas, UNC

AISLAMIENTO DE Bacteroides fragilis EN INFECCIN PROTESICA DE CADERA

Las infecciones protsicas osteoarticulares son procesos poco frecuentes pero con un
aumento reconocido en los ltimos aos. Se asocian a un difcil manejo diagnsticoterapetico as como a numerosas complicaciones que incrementan la morbilidad.
Presentamos un caso de osteomielitis post quirrgica por bacterias aerobias y anaerobias.
Paciente de sexo femenino de 71 aos, inmunocompetente. En junio de 2010 es sometida
a reemplazo total de cadera izquierda en otra institucin a raz de un traumatismo
(rodamiento por escalera). A los dos meses consulta en nuestro hospital por fiebre y
malestar general. Se le practica una toilette extrayndose material purulento que se enva
a cultivo y es sembrado en medios apropiados para aerobios y anaerobios. A las 24 hs,
en aerobiosis, se observa desarrollo de bacilos gram negativos y cocos gram positivos,
identificados como Escherichia coli, Enterococcus faecalis y Staphylococcus aureus,
respectivamente. El cultivo anaerobio revela el aislamiento de un cocobacilo gram
negativo pleomrfico identificado como Bacteroides fragilis (resistente a kanamicina 1000
g, vancomicina 5 g, colistina 30 g, crecimiento en presencia de bilis, indol negativo,
esculina positiva, fermentacin de arabinosa y trehalosa negativas y -fucosidasa
positiva).
La paciente es tratada con antibiticos endovenosos y luego controlada por consultorio
externo bajo tratamiento VO.
En mayo del ao siguiente se obtiene material seo y lquido purulento de su cadera
izquierda que se envan para cultivo desarrollando Proteus mirabilis, E. faecalis y por
segunda vez B. fragilis.
La paciente es tratada con sultamicilina 375mg/6hs VO + minociclina 100mg/12hs VO
durante 6 meses. En diciembre de 2011 se controla la herida quirrgica, completamente
cerrada, sin signos de flogosis y se suspende el tratamiento antibitico.
Conclumos que si bien las osteomielitis por bacterias anaerobias son poco frecuentes,
deben ser tomadas en cuenta en el contexto de las infecciones osteoarticulares.
Los laboratorios de microbiologa deben estar alertas e implementar la metodologa
adecuada
de
cultivo
para
el
aislamiento
de
bacterias
anaerobias.

P - 045
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Bongiovanni, M.; Gmez, J.; Baronetti, J.; Gallina, F.; Salomn, C.; D'Angelo, E.; Buffa,
G.; Bekerman, L.; Pascualini, C.
Institucin: Hospital Municipal Prncipe de Asturias de la ciudad de Crdoba

ESTUDIO RETROSPECTIVO DESDE JUNIO 2012 HASTA MARZO 2014 DE

GASTROENTERITIS AGUDA EN UN HOSPITAL MUNICIPAL DE CRDOBA,
ARGENTINA
La gastroenteritis aguda (GEA) es la segunda mayor causa de muerte de nios menores
de cinco aos, puede durar varios das y privar al organismo del agua y sales necesarias
para la supervivencia. Puede estar ocasionada por organismos bacterianos, vricos y
parsitos. La infeccin se transmite por alimentos o agua de consumo contaminados, o
bien de una persona a otra como resultado de una higiene deficiente.
El objetivo de este trabajo fue determinar la frecuencia de Shigella spp, Salmonella spp y
de Campylobacter spp, ste ltimo a travs del examen directo, conocer su distribucin
segn grupo etario y evaluar la sensibilidad a los antimicrobianos.
Se analizaron 177 muestras de materia fecal de pacientes asistidos en el Hospital
Municipal Prncipe de Asturias de la ciudad de Crdoba desde el 28 de Junio de 2012 al 5
de Marzo de 2014; 50 fueron heces slidas sin reaccin inflamatoria por lo que no se le
realiz cultivo, a las 127 restantes se las cultiv en medios selectivos, la identificacin de
colonias sospechosas se realiz a travs de pruebas bioqumicas y la prueba se
sensibilidad a los antimicrobianos a travs del mtodo difusin con discos, segn Kirby y
Bauer.
Se aislaron 33 (25.9 %) cepas de Shigella spp, 5 (3.9 %) cepas de Salmonella spp y se
diagnosticaron a travs del examen directo 20 (15.7 %) GEA asociadas a Campylobacter
spp, 2 (1.6 %) asociadas a Giardia lamblia y 1 (0.8%) asociada a Giardia lamblia y
Shigella spp. En cuanto a la edad el 5,8 % de Shigella spp correspondieron a menores de
1 ao, 38,2 % al grupo de 1 a 4 aos, el 17,7 % al grupo de 5 a 9 aos y el 23,5 % a
mayores de 10 aos, en el 14,8 % no se contaron con datos de edad. En Salmonella spp
40 % correspondieron a menores de 1 ao, 20 % al grupo de 1 a 4 aos, el 40 % a
mayores de 10 aos. En Campylobacter spp 30 % correspondieron a menores de 1 ao,
30 % al grupo de 1 a 4 aos, el 10 % al grupo de 5 a 9 aos y el 25 % a mayores de 10
aos en el 5 % no se contaron con datos de edad.
El 76.5 % de las cepas de Shigella spp fue resistente a ampicilina (AMP) y el 35.3 % a
Trimetroprima sulfametoxazol (TMS) no se observ resistencia en Salmonella spp.
En conclusin: la distribucin de los casos segn grupo etario evidencia una mayor
prevalencia de GEA por Shigella spp en el grupo de 1 a 4 aos de edad, en Salmonella
spp en menores de 1 aos y mayores de 10 aos, en Campylobacter spp es ms
homognea la distribucin en todos los grupos etarios. Fueron ms frecuentes los
aislamientos de Shigella spp y presentaron alto nivel de resistencia a AMP y en menor
medida a TMS las cuales son consideradas de eleccin para el tratamiento en los casos
que fuera necesario; debido al alto porcentaje de GEA por Campylobacter spp se hace
necesario, en aquellos laboratorios donde no se realiza cultivo, su pesquisa en forma
rutinaria a travs del examen directo, siendo de gran utilidad para el diagnstico rpido
aunque
se
requiere
de
personal
altamente
entrenado.

P - 046
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Gonzlez, L.1; Snchez, M.L.1; Seculini, A.1; Tosolino, M.E.1; Suarez, M.E.2; Altamira,
S1.
Institucin: 1-Hospital Infantil Municipal- Crdoba. 2-Laboratorio central de la Provincia de
Crdoba

Prevalencia y distribucin de serotipos de Salmonella spp. en coprocultivos en un Hospital

Peditrico de la Ciudad de Crdoba durante 2010 2013
Introduccin: La salmonelosis es una zoonosis de distribucin mundial. Constituye una de
las causas ms comunes de gastroenteritis generalmente en los meses de verano y en
ciertas oportunidades puede presentar brotes epidmicos. Los humanos se infectan con
mayor frecuencia a travs del agua o alimentos contaminados o por el contacto con
personas o animales infectados.
Objetivos: El objetivo del presente trabajo es determinar la prevalencia de Salmonella spp.
y la distribucin de serotipos en muestras de coprocultivos de pacientes peditricos
atendidos en el Hospital Infantil Municipal de Crdoba en el perodo comprendido entre
enero de 2010 y diciembre de 2013.
Materiales y Mtodos Todas las muestras de materia fecal se obtuvieron por evacuacin
espontnea y correspondieron a pacientes ambulatorios e internados. Las mismas se
sembraron en agar Levine EMB y agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD) y se incubaron a
37C durante 18 a 24 hs. Por otra parte se efecto un enriquecimiento en caldo selenito y
se subcultivaron en XLD. Las colonias sospechosas tanto lactosa negativa e incoloras en
EMB o colonias tpicas rojas con un centro negro debido a la produccin de SH2, fueron
identificadas con pruebas bioqumicas convencionales como Salmonella spp. La
identificacin a nivel de serotipo se realiz por el Laboratorio Central de la Provincia de
Crdoba y por el Servicio de Enterobacterias del Instituto Nacional de Enfermedades
Infecciosas (INEI) Dr. Carlos Malbrn.
Resultados: De un total de 2067 coprocultivos realizados entre los aos 2010 y 2013 se
aislaron 97 Salmonellas spp. (4,7%), siendo los nios de 1 a 3 aos los ms afectados sin
distincin de sexo.
Se identificaron como Salmonella Tiphymurium 47 aislamientos (48,5%); Salmonella
Newport 20 aislamientos (20,6%); Salmonella Agona 4 aislamientos (4,1%); Salmonella
Corvallis, Derby, Enteritidis y Oranienburg 3 aislamientos (3,1%); Salmonella
Brandenburg, Chester, Panam, Schwarzengrund y Sandiego 2 aislamientos (2,1%) y
finalmente como de Salmonella spp, Dubln, Infantis y Montevideo solo un aislamiento
(1%).
Conclusiones:
La salmonelosis es un problema de salud pblica con alto impacto socioeconmico. El
control estricto de la calidad de los alimentos en todas las etapas de elaboracin es
fundamental para su prevencin como as tambin la educacin de la poblacin a fin de
evitar
su
contaminacin
al
manipularlos
y
conservarlos.

P - 047
rea: Bacteriologa clnica
Autores: GONZALEZ P., CORTES P., CONTRERAS FUNES V., GIUSTO Y.
Institucin: Hospital Peditrico del Nio Jess Crdoba Argentina.

EVOLUCION DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS METICILINORESISTENTE DE LA

COMUNIDAD Y SU SUSCEPTIBILIDAD A CLINDAMICINA DURANTE EL PERIODO
2009-2013 EN UN HOSPITAL PEDIATRICO DE CORDOBA
Staphylococcus aureus meticilinoresistente de la comunidad (CA-MRSA) ha emergido
desde los 90 como un importante patgeno que ocasiona infecciones de piel y partes
blandas en nios y adultos jvenes (abscesos cutneos, celulitis, forunculosis) sin
factores de riesgo de adquisicin nosocomial. Tambin provoca neumonas necrotizantes,
osteomielitis y sepsis.Su perfil de resistencia a antimicrobianos se diferencia del S. aureus
(SAU) de origen nosocomial ya que habitualmente son sensibles a la mayora de los
antibiticos ensayados. La clindamicina (CLI) se ha constituido en una de las opciones
teraputicas mas empleadas a la hora del tratamiento emprico y luego basado en el
antibiograma. Nuestro objetivo fue evaluar la prevalencia general de CA-MRSA y analizar
la tendencia de la meticilinoresistencia y de la resistencia a clindamicina.
Fueron incluidas todas las muestras peditricas y tambin de adultos provenientes del
Servicio de Dermatologa. Se analizaron segn tcnicas microbiolgicas estndares y se
evalu la susceptibilidad antimicrobiana segn CLSI. Se considero CA-MRSA aquellos
SAU que fenotpicamente presentaron resistencia a betalactamicos sola o acompaada
de otra resistencia a otro antimicrobiano.
Se obtuvieron un total de 200 cepas de las cuales 17 pertenecieron a pacientes
internados y 183 a pacientes ambulatorios, siendo el 64,5 % de los pacientes del sexo
masculino. La mediana de edad fue de 4 aos con un rango 1 mes a 84 aos.
Los sitios de infeccin en orden de frecuencia fueron: piel y partes blandas (84%),
bacteriemias (9%), orina (3%), infecciones oculares (2,5 %), liquido pleural (1%) y liquido
articular (0,5%).
De los 183 aislamientos provenientes del mbito extrahospitalario la prevalencia de CAMRSA global fue de 54 % con una prevalencia por ao de estudio de: 2009: 47% (n=9);
2010: 44% (n=12); 2011: 57% (n=20); 2012: 57% (n=35) y 2013: 61% (n=25).
La resistencia global a CLI en los aislamientos extrahospitalarios fue de 20%. Con una
prevalencia por ao de estudio de: 2009: 31,6% (n=6); 2010: 11,1% (n=3); 2011: 20%
(n=7); 2012:18% (n=11) y 2013: 24% (n=10)
Estos resultados indican que existe una alta prevalencia (54%) de CA-MRSA en nuestra
institucin y que la misma se encuentra en franco aumento. Dichos resultados avalan el
anlisis del tratamiento emprico inicial y rotacin orientado segn antibiograma;
principalmente en pacientes con infecciones de piel y partes blandas.
La resistencia actual a CLI es importante (2013: 24%) y est en aumento en nuestra
poblacin y debido a su uso ms frecuente como tratamiento en la actualidad ser de vital
importancia monitorear la tendencia de dicha resistencia en los prximos aos.

P - 048
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Gonzalvez I.; Herrero I.; Lpez A.; Consiansi M.; Ocampo I.; Gmez C.
Institucin: Hospital Municipal de Urgencias

ABSCESO CEREBRAL POR NOCARDIA CIRYACIGEORGICA EN PACIENTE HIV+

El gnero Nocardia corresponde a bacilos ramificados gram positivos, estrictamente
aerobios, parcialmente cido-resistentes, catalasa positiva; de amplia distribucin en
suelo, agua, materia orgnica. Agente etiolgico slo en 2% de los abscesos cerebrales.
Se asocia a significativa morbimortalidad y requiere un diagnstico precoz y adecuado
tratamiento. Es oportunista, puede producir infeccin asociada, principalmente, a defectos
de la inmunidad celular. La incidencia de nocardiosis en pacientes VIH/SIDA es baja,
podra ocurrir por el uso extendido de cotrimoxazol como profilaxis para la neumona por
Pneumocystis, afectando a aquellos con recuento de linfocitos CD4 + 100cel/l. Origina
lesiones cerebrales nicas o mltiples. CASO: Paciente de sexo femenino, 52 aos,
indigente, hallada inconsciente en la va pblica y llevada por ambulancia a la guardia
hospitalaria. Ingresa con Glasgow 10/15, febril (38,8C), apertura ocular espontnea,
respuesta verbal incomprensible. Laboratorio: hematocrito 26%, hemoglobina 8,5g/dl,
leucocitos 9.900/ml, PCR 37 mg/l. Tomografa computarizada axial (TAC) cerebral: se
observan dos lesiones hipodensas que refuerzan en forma anular tras aplicacin
endovenosa del contraste, localizadas en el lbulo temporal derecho asociado a edema
vasognico, colapsando parcialmente al ventrculo homolateral y desplazando
discretamente la lnea media hacia la izquierda. No se realiza puncin lumbar por signos
de herniacin. Se inicia tratamiento con Ceftazidima + Vancomicina + Metronidazol, para
absceso cerebral. Hemocultivo y urocultivo sin desarrollo; serologa (+) para HIV y
Toxoplasmosis, linfocitos CD4 10 cel/l. Se agrega pirimetamina + sulfadiazina +
leucovorina. El da 10 depresin brusca del sensorio, necesidad de ventilacin mecnica.
TAC cerebral: hidrocefalia. Neurociruga coloca drenaje ventricular externo y puncin
lumbar. Lquido cefalorraqudeo (LCR): aspecto turbio, protenas 449mg/dl, glucorraquia
10ug/dl, glucemia 111mg/dl, recuento celular 133 leucocitos/mm3. Tinta china positiva
compatible con Cryptococcus neoformans. Se cultiva en agar chocolate, a las 72 horas
desarrollan colonias blanco-rosadas, secas, elevadas, que se tornan de color amarillo.
Coloracin de Kinyoun modificada, en el material y suspensin de colonias, bacilos
ramificados compatibles con Nocardia. Se deriva al Instituto Malbran-ANLIS para su
tipificacin. Se rota el tratamiento a Anfotericina B + Ceftriaxona +
Trimetoprima/Sulfametoxazol, suspendiendo el tratamiento para Toxoplasmosis cerebral.
Da 14 se recibe el informe de la identificacin mediante perfil bioqumico y espectrometra
de masa, de: Nocardia cyriacigeorgica. En tres muestras sucesivas se continu aislando
Nocardia y Cryptococcus. Da 28 la paciente fallece. Conclusin: El absceso cerebral por
Nocardia es infrecuente. Se debera sospechar su presencia y rol patgeno en pacientes
con
VIH/SIDA,
para
rpido
diagnstico
y
adecuado
tratamiento.

P - 049
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Guendulain,C.; Tamiozzo, P.; Gonzalez, G.; Bessone, A.
Institucin: Universidad Nacional de Ro Cuarto

DETECCIN DE ESPECIES DE Helicobacter EN SALIVA DE HUMANOS Y PERROS

MEDIANTE LA REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA
Introduccin: Helicobacter (H) spp. es una bacteria Gram negativa, de entre 5 y 12 micras,
con forma curvada o espiralada, microaerfila y productora de ureasa, que coloniza la
mucosa gstrica de diferentes mamferos, incluidos humanos y perros. La especie ms
frecuentemente hallada en el hombre es H. pylori, la cual no infecta en forma natural al
perro, sin embargo existen otras especies en el hombre que se encuentran comnmente
en el perro. Se postula la transmisin oral-oral o fecal-oral debido a que se han
encontrado estas bacterias en materia fecal, saliva y placa dental.
Objetivo: Detectar la presencia de H. en la saliva de humanos y de sus perros y
determinar las especies mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
Materiales y mtodos: Se seleccionaron 15 personas, propietarias de perros, que
acudieron al Nuevo Hospital de Ro Cuarto con signos de gastritis crnica. Todas ellas y
sus perros fueron positivos a formas compatibles con H. spp. en la histopatologa de las
biopsias gstricas. A estas personas y a sus perros se les tomaron muestras de saliva con
hisopo estril. La extraccin del ADN de las muestras se realiz con el kit comercial
DNAzol (Invitrogen). Como prueba tamiz se realiz una PCR para la deteccin especfica
de gnero de H., amplificando un fragmento del gen 16S ADNr. Todas las muestras que
fueron positivas a la PCR tamiz fueron procesadas por PCR en formato simple para la
deteccin especie-especfica de H. pylori (gen ureasa C) y en formato mltiple para la
deteccin especie-especfica de H. felis y H. bizzozeronii (gen ureasa), utilizando como
controles positivos ADN de cepas de referencia cedidas por las Universidades de Ghent
(Blgica) y UBA.
Resultados: De las 15 muestras de saliva de humanos, 11 resultaron positivas a H. spp., 7
a H. pylori y ninguna a H. bizzozeronii y H. felis.
De las muestras de perros, 4 fueron positivas a H. spp, y ninguna a H. pylori. De los 4
perros positivos, 3 eran de personas positivas a H. spp. (1 positivo a H. pylori y 2
negativos a H. pylori). Slo 1 perro positivo era de un propietario negativo.
Conclusiones: Un alto porcentaje de personas estudiadas present H. en su saliva. Las
muestras negativas podran deberse a que la PCR utilizada no sea altamente sensible
para la deteccin de H. spp. en este tipo de muestra, a que la presencia de H. en la boca
sea intermitente o que sean verdaderamente negativas. La especie ms encontrada fue
H. pylori coincidente con lo que sucede en el estmago de los humanos. Menos perros,
en relacin al humano, presentaron H. en saliva y ninguno fue positivo a H. pylori, lo cual
acuerda con la bibliografa en que el H. pylori no se encontrara en el perro. Debido a que
algunas muestras fueron positivas a H. spp. y negativas a H. pylori, se infiere que otras
especies de H. diferentes a las estudiadas colonizaran la saliva de humanos y perros.
Otras especies descriptas, tales como H. salomonis y H. cynogastricus, sern
investigadas
en
estas
muestras.

P - 050
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Hernndez, D.; Avils, N.; Garzn, M.; Sartori, L.; Caliva, S.; Caeiro, J.; Vilaro, M.
Institucin: Hospital Privado Centro Mdico de Crdoba

ARTRITIS SEPTICA CAUSADA POR Kingella kingae EN PEDIATRIA

La artritis bacteriana (AB) es ms frecuente en la infancia que en otros perodos de la
vida. Generalmente son monoarticulares, siendo la cadera, el tobillo y la rodilla las
articulaciones ms afectadas, requiriendo reconocimiento y tratamiento inmediato.
Las bacterias aisladas con ms frecuencia en nios con AB son S. aureus, estreptococos
del grupo A, Streptococcus pneumoniae. En menor medida, otros agentes bacterianos
son Kingella kingae, Haemophilus influenzae tipo b y Neisseria gonorrhoeae.
CASO CLINICO: Varn de 10 meses sin antecedentes perineonatolgicos y patolgicos
de importancia, que acude a la guardia con un cuadro febril de 48 hs. de evolucin, con
edema, rubor y limitacin funcional de rodilla derecha en las ltimas horas. Cinco das
previos a la consulta present sntomas compatibles con infeccin de la va area
superior. Los anlisis de sangre mostraron: 18.600 glbulos blancos con frmula desviada
a la izquierda, hemoglobina 9.5g/dl, hematocrito 27.8%, plaquetas 462.000, y PCR 4.61.
Se tomaron 2 muestras de hemocultivos. La ecografa evidenci moderada cantidad de
lquido a nivel de la articulacin sinovial de la rodilla derecha. Se realiz artrocentesis, y
se extrajo 10 ml de lquido purulento. A la coloracin Gram no se observ grmenes. Se
inicia tratamiento emprico con cefazolina 100 mg/kg por da.
La muestra se sembr en Agar Columbia con 5% de sangre de carnero, Agar Chocolate,
Caldo BHI y en frasco de hemocultivo. A las 36 hs. se obtuvo desarrollo de cocobacilos
Gram negativos en el frasco de hemocultivo. Se identifico como Kingella kingae por
espectrometra de masas con matriz asistida por lser MALDITOF con score 2,142. En los
medios de cultivos convencionales no se obtuvo desarrollo bacteriano. Los hemocultivos
fueron negativos. Se indic ampicilina sulbactam 400 mg/kg por da. Se complet 10 das
de tratamiento antibitico, se decidi alta hospitalaria con amoxicilina va oral a 100 mg/kg
por da hasta completar catorce das de tratamiento. A los 45 das del diagnstico se
realiz radiografa de rodilla derecha donde no se evidenciaron lesiones osteoarticulares y
una restauracin total de la actividad articular.
Discusin: La artritis sptica infantil es un proceso frecuente. Su relevancia radica en la
asociacin de un manejo difcil, desde el punto de vista mdico-quirrgico, con numerosas
complicaciones. Se ha sugerido que la siembra directa del lquido sinovial en frascos de
hemocultivo incrementa la recuperacin de tanto microorganismos frecuentes como de los
fastidiosos.
Conclusin: Se destaca la necesidad de tener en cuenta este patgeno, especialmente en
nios mayores de 6 meses y menores de 4 aos de edad, y la utilizacin rutinaria de
frascos de hemocultivo para el procesamiento de las muestras de lquido sinovial.

P - 051
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Izasa ,S; Suarez, M E; Toledo, D; , Ocaa, V;, Casero, R
Institucin: Lab. de Microbiologia DEM Dr. Benito Soria, Municipalidad de Crdoba Lab de
Bacteriologia, Laboratorio Central de la Prov de Crdoba, Lab. de Bacteriologia, Hospital Nacional
de Clinicas, Ctro de Salud N 63 DAPS, Municipalidad de Cordoba.

Yersinia enterocolitica: Reporte de un caso con Enfermedad Diarreica Aguda

INTRODUCCION Y OBJETIVOS: Yersinia es un gnero de bacilos gram (-) zoonticos de
la flia Enterobacteriaceae, anaerobios facultativos que comprende especies patgenas
para el hombre tales como Y. enterocolitica(YE) Y.pseudotuberculosis (YPS) y Y.pestis.
YE y YPS estn descriptas como causantes de Enfermedad Diarreica Aguda (EDA) en
nios y adultos respectivamente. Presentamos un caso de EDA en un nio asistido en
nuestro centro de salud.
CASO CLNICO: Paciente masculino de 3 aos, proveniente de un barrio de la zona
Oeste de Crdoba capital, quien ante consultas anteriores por sndrome diarreico, vmitos
y clicos abdominales se le indic hidratacin y dieta, sin remisin del cuadro clnico.
Desde el centro de atencin primaria en marzo del 2014 es derivado a nuestro Laboratorio
con diagnstico de EDA de 10 das de evolucin, fiebre, vmitos, dolor abdominal y sin
tratamiento antibitico previo. Se le solicit estudio microbiolgico de materia fecal y se
instaur tratamiento emprico con fosfomicina. El estudio microbiolgico de la diarrea
(lquido/pastosa, sin moco ni sangre macroscpica) incluy recuento de PMN,
investigacin de sangre oculta y enteropatgenos bacterianos y parasitarios. La muestra
se proces mediante coloraciones (Gram, Giemsa, Gram modificado, Kinyoun), exmenes
en fresco, mtodos parasitolgicos de enriquecimiento por sedimentacin (formol-acetato
de etilo) para protozoos y helmintos y cultivos bacterianos convencionales. No se realiz
la investigacin de virus entricos.
RESULTADOS: El examen microscpico revel ausencia de hemates con recuento de
PMN de 15/c (400x), no identificndose enteroparsitos por los mtodos de
enriquecimiento ni coloraciones diferenciales. No se detectaron formas compatibles con
Campylobacter (Fuccina diluida.). En medio de Mac Conkey-sorbitol desarrollaron
colonias pequeas transparentes no fermentadoras de lactosa tipificadas por pruebas
bioqumicas convencionales demostrando compatibilidad con gnero Yersinia sp, Dada la
infrecuencia de estos aislamientos la cepa se deriv al laboratorio de referencia, donde se
confirma Y. enterocolitica (99,1 % de certeza Test de Api 20 E). La sensibilidad
antimicrobiana fue (S): Ams, Tms, Fos y (R): Amp.
CONCLUSIONES: Nuestro hallazgo concuerda con lo reportado sobre aislamientos de Y.
enterocolitica en pacientes peditricos, no obstante su deteccin difiere con otros autores
ya que esta cepa no fue aislada en meses invernales. Los mtodos de cultivos
convencionales continan siendo una opcin accesible para la deteccin de
enteropatgenos bacterianos inusuales en los laboratorios de nuestro medio. Este
hallazgo refleja la necesidad de alertar a microbilogos en la bsqueda de este patgeno
infrecuente.

P - 052
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Jacome, J.; Robles L.; Ribaya N.
Institucin: Hospital de Nios de la Santsima Trinidad. Cordoba.

RESISTENCIA ANTIMICROBIANA DE HAEMOPHILUS INFLUENZAE EN MUESTRAS

RESPIRATORIAS PEDITRICAS.
Haemophilus influenzae es colonizante de la va area superior. Es aislado
frecuentemente de muestras respiratorias de pacientes con enfermedad respiratoria
crnica.
Las cepas capsuladas del tipo b estn asociadas con enfermedades invasivas como
meningitis, sepsis, neumona y cepas que han perdido su capsula, referidas como cepas
no tipables se asocian a enfermedades en la mucosa respiratoria como otitis, sinusitis y
bronquitis.
La resistencia a los -lactmicos se debe principalmente a la produccin de -lactamasa
TEM-1 y raramente a la alteracin de protenas fijadoras de penicilina (PBP):
encontrandose dos fenotipos: uno -lactamasa negativo ampicilina resistente (BLNAR) y
otro -lactamasa positivo amoxicilina/c.clavulnico resistente (BLPACR). La resistencia a
trimetoprima/sulfametoxazol y cloranfenicol no es infrecuente y la falta de sensibilidad a
ciprofloxacina y azitromicina es un fenmeno emergente.
Objetivos: establecer perfil de resistencia antibitica de Haemophilus influenzae
recuperados de muestras respiratorias de pacientes con neumopatas crnicas como:
fibrosis qustica, bronquiectasia, etc.
Materiales y mtodos: en el periodo de un ao (agosto 2012 - agosto 2013), se
recuperaron 59 cepas de Haemophilus influenzae de muestras respiratorias de pacientes
peditricos. Los antimicrobianos ensayados fueron: ampicilina, amoxicilina/c. clavulnico,
cefuroxima, ciprofloxacina, trimetoprima-sulfametoxazol, cloranfenicol y azitromicina. La
produccin de -lactamasa se confirmo por mtodo microbiolgico y acidmetro.
Resultados: se obtuvieron los siguientes porcentajes de resistencia: ampicilina 10,2%
(n=6); trimetoprima sulfametoxazol 18,6% (n=11), azitromicina; 1,7% (n=1) y no se
observo resistencia a amoxicilina/c. clavulnico, cefuroxima, ciprofloxacina y
cloranfenicol.
Conclusiones:
La resistencia a trimetoprima-sulfametoxazol y ampicilina no muestra diferencia
significativas con datos nacionales.
La resistencia a azitromicina se present solo en un aislamiento. Un mayor nmero de
cepas podra definir otro porcentaje.
La implementacin de test de susceptibilidad antibitica en Haemophilus influenzae en los
laboratorios de microbiologa clnica permitir realizar vigilancia de cepas con resistencia
emergente en quinolonas y azitromicina, adems de redefinir estrategias teraputicas.

P - 053
rea: Bacteriologa clnica
Autores: LAZARA, X.; BORSERO, A.; CHEGUIRIN, L.
Institucin: SANATORIO CRUZ AZUL

ENFERMEDAD DE HANSEN: REPORTE DE UN CASO CLINICO EN ADULTO MAYOR

La lepra es una enfermedad infectocontagiosa crnica causada por Mycobacterium leprae
o bacilo de Hansen que afecta fundamentalmente a la piel y los nervios perifricos, si bien
puede comprometer tambin rganos internos. La presentacin clnica dermatolgica
depende del estado inmunolgico del husped.
La lepra se adquiere solo por contagio a partir del hombre; si bien no est claro cul es la
va de transmisin, se admite que la fundamental es la va area. Se considera una
enfermedad poco contagiosa que requiere un contacto ntimo y prolongado para su
transmisin. Puede presentarse a cualquier edad, pero con mayor incidencia en la niez y
primera etapa de la vida adulta.
Se distinguen 2 formas clnica polares estables (lepra tuberculoide y lepra lepromatosa) y
una forma intermedia e inestable ( lepra dimorfa o borderline).
Debido a que M. leprae no puede cultivarse in vitro, el diagnstico se basa en los
hallazgos clnicos e histopatolgicos, que tambin son esenciales para determinar el tipo
de enfermedad y el examen bacteriolgico directo mediante la tincin de Ziehl - Neelsen.
Reporte de un caso de enfermedad de Hansen en un paciente adulto mayor.
Paciente masculino de 83 aos de edad que consulta en diciembre 2013 por presentar
lesiones de piel maculopapulosas, eritematosas, no dolorosas ni pruriginosas, de ms de
tres meses de evolucin que se localizan en ambas manos, rodillas, codos, pie izquierdo y
regin dorsolumbar . Se acompaan de hipoestesia distal en miembros superiores.
La biopsia informa epidermis conservada, dermis con infiltrado mononuclear, algunos
histiocitos, los cuales se disponen en nidos y se extienden comprometiendo anexos ,
incluido los filetes nerviosos.
La baciloscopia de piel de dorso de dedos, lbulo de orejas y antebrazos fueron positivos
(+++) y del puente de nariz negativo.
Comienza tratamiento antibacteriano con ofloxacina 400 mg + rifampicina 600 mg +
doxiciclina 100mg cada 15 dias por un perodo de un ao.
En nuestro pas la lepra continua siendo una enfermedad prevalente con manifestaciones
clnicas muy variadas dependiendo del estado inmunolgico del paciente, por lo que es
necesario tenerla presente para el diagnostico diferencial con otras enfermedades
dermatolgicas y sistmicas. Se requiere siempre la confirmacin a travs de estudios
anatomopatolgicos y bacteriolgicos (baciloscopa) debido a la imposibilidad de cultivar
el agente etiolgico.
El diagnstico temprano permite el tratamiento adecuado y la curacin de la enfermedad,
cortar la cadena de contagios y evitar las discapacidades que la enfermedad puede
provocar.

P - 054
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Suarez, M.; Amaro,M.; Gobet, L.; Vigkiarolo, L.; Viegas Caetano, J.; Lopardo, H.
Institucin: Microbiologa Clnica, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata

ESTUDIO DE PORTACIN VAGINAL DE STREPTOCOCCUS AGALACTIAE EN

EMBARAZADAS DEL PARTIDO DE LA PLATA (2010-2013)
Introduccin. El uso de penicilina intraparto en embarazadas portadoras de Streptococcus
agalactiae (GBS) es un mtodo que ha disminuido sensiblemente la frecuencia de sepsis
neonatal precoz por este microorganismo. Su deteccin en estudios de portacin es
mandatoria y ha sido una prctica rutinaria en las salas de atencin primaria del partido de
La Plata. Objetivo. Este trabajo tuvo como objetivo conocer la frecuencia de portacin
vaginal/anal en esta poblacin y comparar la eficiencia de los distintos cultivos realizados.
Materiales y mtodos. Se estudiaron todas las mujeres que concurrieron por control de su
embarazo a cinco de dichas salas. Se tom un hisopado vaginal y otro anal para cada
paciente y se sembraron por separado en caldo Todd Hewitt suplementado con colistina y
cido nalidxico (Laboratorios Britania, Buenos Aires). El hisopado vaginal, adems,
previamente se sembr en una placa de agar sangre ovina. Los caldos fueron
subcultivados a las 24h en agar sangre. Los estreptococos aislados fueron identificados
por serologa, CAMP y bilis esculina. Resultados. Se estudiaron 511 muestras de igual
nmero de pacientes. Se obtuvieron 49 aislamientos de GBS (9,6%): 18 solo del hisopado
vaginal posenriquecimiento (36,7%), 11 solo del hisopado anal (22,5%), 19 del hisopado
vaginal + otro material (38,8%) y solamente uno (2,0%) del hisopado vaginal sembrado
directamente en agar sangre. Este ltimo mtodo implic un costo adicional de
aproximadamente $6.132 por cada muestra positiva agregada. Adicionalmente se detect
la presencia de GBS en 14 muestras de urocultivo sembradas en agar sangre y CLDE
para realizar el screening de infeccin urinaria asintomtica en las 511 pacientes. En
conclusin, la tasa de portacin de GBS en esta poblacin fue de 9,6%. El cultivo directo
del hisopado vaginal no result significativo por lo que se consider que su inclusin no
tiene
una
relacin
costo/beneficio
positiva.

P - 055
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Manassero, N. C.; Navarro,M.; Rocchi, M.; Di Bella, H.; Gasparotto, A.; Ocaa Carrizo, A.
V.; Novillo, F.; Monterisi, A.
Institucin: Dpto. Bacteriologa, Hospital Nacional de Clnicas, UNC.

BACTERIEMIA POR ENTEROCOCOS EN ADULTOS. ANLISIS DE 104 EPISODIOS.

La bacteriemia por Enterococcus ha adquirido un papel relevante en los ltimos aos
principalmente por el aumento de casos intrahospitalarios. Estas bacterias son
intrnsecamente resistentes (R) a varios antimicrobianos (ATM) y en las infecciones
severas (IS) debe realizarse tratamiento combinado (un ATM inhibidor de la sntesis de la
pared celular ms un aminoglucsido).
Nuestro objetivo es brindar informacin epidemiolgica y microbiolgica de las
bacteriemias y reportar la sensibilidad (S) a los ATM de las principales especies.
Entre enero de 2000 y diciembre de 2012 se registraron 104 episodios (EP). Las
muestras, 2 por paciente, se inocularon en frascos de hemocultivo de 100 ml para
aerobios y anaerobios (Lab. Brizuela). La identificacin bioqumica se realiz mediante
pruebas convencionales. Se efectu antibiograma por difusin y agar screening de
vancomicina, y los ATM ensayados fueron: ampicilina (AMP), vancomicina (VAN),
teicoplanina (TEI), gentamicina 120g (GEN) y estreptomicina 300 g (STR). A las cepas
R a VAN se les prob linezolid (LZD) y cloranfenicol (CMP).
Los EP ocurrieron en 64 varones (62%) y 40 mujeres (38%) con edad promedio de 68
aos (rango: 25-97). El 69% de los mismos fue de adquisicin nosocomial (57% en UCI).
Los focos de infeccin fueron: abdominal (Abd) 20%; urinario (Uri) 15%; piel y partes
blandas 13%; vascular 8%; menngeo 1% y desconocido/sin foco 43%. El 87% de los
pacientes present comorbilidades (CO): diabetes mellitus (18%), cardiopata (15%),
accidente cerebrovascular (15%), neoplasia (12%), y otros (22%). La presentacin clnica
fue: sndrome febril (40%), infeccin urinaria (12%), fiebre post quirrgica (14%),
endocarditis (4%) y otras (6%).
La especies aisladas fueron: Enterococcus faecalis (Efa) 63%, E. faecium (Efc) 29%, E.
raffinosus 2%, E. casseliflavus 2%, y otros 4%. El 34% de las bacteriemias fue
polimicrobiana (PO) predominando la asociacin con bacilos gramnegativos (30 casos),
estafilococos (6 casos) y anaerobios (3 casos).
No se hallaron cepas de Efa R a AMP o VAN, pero el 62% present R de alto nivel a GEN
y el 48% a STR. Efc present un 88% de R a AMP, 43% a GEN, 80% a STR y 54% a
VAN=TEI, estos ltimos S todos a CMP y LZD.
Conclusiones: 1) La mayora de los EP fueron de adquisicin nosocomial, ms frecuentes
en varones y en pacientes de edad avanzada. 2) Ms de la mitad de los pacientes
padeca CO con presentaciones clnicas diversas. 3) Un nmero importante de EP fue
PO, siendo los principales focos el Abd y el Uri. 4) Efa, la especie ms frecuente, no
present R a VAN ni a AMP. 5) Es preocupante la elevada proporcin de Efc con R a
AMP-VAN-TEI-GEN, ya que las alternativas teraputicas para las IS son escasas e
involucran
ATM
principalmente
bacteriostticos.

P - 056
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Manias, V.; Mendosa, M.A.; Mollerach, A.; Morano S.; Ramos, C.; Nardn, M.E.; Nagel,
A.; Insaurralde, S.; Morera, G.; Ahumada, C.; Mndez, E.
Institucin: Hospital J. M. Cullen -Laboratorio Central. Seccin microbiologa y seccin infectologa

INFECCIONES POST QUIRRGICAS DE PRTESIS DE CADERA EN PACIENTES

ADULTOS: PREVALENCIA Y FACTORES ASOCIADOS (2007 2013)
Los pacientes con fracturas graves afecciones de la articulacin coxofemoral
frecuentemente requieren colocacin de prtesis de cadera, logrando una recuperacin
rpida.
La infeccin asociada a esta intervencin quirrgica, tiene una incidencia relativamente
baja, que flucta entre 2 y 5%, pero conlleva a consecuencias clnicas devastadoras por
sus implicancias, tales como el uso de terapias antimicrobianas prolongadas, retiro del
material protsico infectado y secuelas temporales definitivas en los pacientes.
Nuestro objetivo fue investigar la prevalencia de infecciones postquirrgicas de colocacin
de prtesis de cadera en pacientes adultos de un hospital general durante un perodo de
siete aos y evaluar los posibles factores de riesgo asociados.
Se revisaron retrospectivamente las historias clnicas de 149 pacientes intervenidos por
reemplazo total de cadera durante el perodo 20072013, donde se haban registrado,
segn los procedimientos habituales de vigilancia epidemiolgica, las infecciones post
quirrgicas durante la hospitalizacin o reingreso del paciente al hospital. Se utiliz para el
anlisis de datos SPSS 10.0 para Windows.
Se detectaron 10 casos de infecciones postquirrgicas en 149 cirugas realizadas.
Durante el perodo de estudio, la tasa anual de infeccin de prtesis de cadera fue, 9,09%
en el ao 2007 (3/33); 4,00% en 2008 (1/25); 4,76% en 2009 y 2011 (1/21 en cada ao);
21,42% en 2012 (3/14) y 8,33% en 2013 (1/12). En el ao 2010, no hubo infecciones
registradas en 23 operaciones efectuadas. La edad media de los pacientes fue 62 aos
(IC 95%: 52-70). Los agentes etiolgicos ms frecuentemente encontrados fueron
Enterobacter cloacae y Staphylococcus aureus, seguido de Pseudomonas aeruginosa y
en menor nmero otros bacilos gram negativos y cocos gram positivos. En algunos de los
pacientes se aisl ms de un microorganismo. Seis pacientes recibieron terapia
antimicrobiana previa.
La prevalencia de las infecciones post quirrgicas en este hospital durante el perodo
estudiado fue de 6,75%, mayor a la establecida en las normas internacionales pero
coincidentes con algunos reportes de otros investigadores que informan ms del 10%.
Comparando el nmero de pacientes infectados por ao durante este perodo, no se
observ diferencia estadsticamente significativa (x2=1.37; p: 0.2416). Aquellos pacientes
que recibieron tratamiento previo tuvieron evolucin favorable. No hubo relacin de la
infeccin con la edad ni con la enfermedad de base.
La infeccin postoperatoria contina siendo un reto para el cirujano ortopdico. Aunque
existe en la actualidad una reduccin significativa en la incidencia de estas debido a
mejores tcnicas quirrgicas, implementacin de normas de control de infeccin en las
salas de operaciones y adecuado uso de profilaxis; la realidad es que esta infeccin
genera un aumento de la morbi-mortalidad y un incremento tanto en el costo emocional
del
paciente
como
en
los
gastos
del
sistema
de
salud.

P - 057
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Andriani,M.;Carol Rey,M.;Cimbaro,N.; Colef,M.; Gariboglio Vzquez,M.; Matzkin,R.;
Piccoli,L.; Presti,S.; Tracogna,M.; Marqus,I
Institucin: Hospital Dr. J. C. Perrando

Primer aislamiento de Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasa tipo OXA en

el Hospital Perrando-Resistencia-Chaco-Argentina
La enzima OXA-48 es una carbapenemasa perteneciente a la clase D de Ambler y 2df
de Bush y Jacoby. Fue descripta en enterobacterias en pases del entorno mediterrneo.
La deteccin fenotpica de OXA-48 es compleja debido a la dbil hidrlisis de los
carbapenemes y cefalosporinas de tercera y cuarta generacin.
Recientemente, han sido detectadas en Argentina dos nuevas carbapenemasas, OXA163 y OXA-247, relacionadas con OXA-48 (Pastern y col. 2013)
El objetivo de este trabajo es comunicar el primer aislamiento de carbapenemasa tipo
OXA en Klebsiella pneumoniae (Kpn) en nuestro hospital.
Paciente de sexo femenino, 76 aos, diabtica tipo II, que consult el 14/01/14 por dolor y
calor en codo izquierdo y fue medicada con levofloxacina 500mg por 5 das, sin mejora.
El 21/01 concurri a la guardia donde se diagnostic celulitis de codo izquierdo. La
paciente estaba sptica e hiperglucmica. Se intern en Clnica Mdica. Se realiz la
toilette quirrgica de la herida y se tomaron muestras para Microbiologa donde se aisl
Streptococcus agalactiae.
Se trat con aminopenicilina sulbactam 6 g/da y vancomicina 2 g/da.
La paciente no mejor, evolucionando la herida a celulitis crepitante con gas, escaso
dolor, escasa coloracin, abundante pus y olor desagradable. El 27/01 se tomaron nuevas
muestras de tejido, de las cuales se aisl Kpn productora de carbapenemasa. El 03/02 se
rot a imipenem 2 g/da, la paciente evolucion favorablemente, completando el
tratamiento por 15 das, luego de lo cual fue dada de alta.
El aislamiento fue identificado por pruebas bioqumicas convencionales, como Kpn. La
susceptibilidad a los antibiticos se estudi por mtodo automatizado Phoenix (panel
NMIC/ID-92, BD) y difusin con discos (CLSI 2013). La cepa result resistente a
aztreonam, cefalosporinas de 3 y 4 generacin, quinolonas, aminoglucsidos,
betalactmicos con inhibidores, sensible a cefoxitina, trimetroprima-sulfametoxazol,
colistn, fosfomicina y tigeciclina. Las Concentraciones Inhibitorias Mnimas fueron:
ertapenem(ERT) (>1ug/ml), imipenem(IMP) (<=1 ug/ml) y meropenem(MER) (<=1 ug/ml).
Se aplic algoritmo de bsqueda de carbapenemasas y BLEE recomendados por el
Laboratorio Nacional de Referencia ANLIS-Malbrn. No se observ BLEE ni sinergismo
entre carbapenemes y cido bornico/ EDTA. El mtodo de Hodge result positivo con
ambos carbapenemes. Se deriv al Servicio de Antimicrobianos ANLIS-Malbrn para
estudios moleculares donde posteriormente se confirm la enzima OXA 48 like.
Como ya fue descripto, la sensibilidad intermedia a ERT, sensibilidad a IMP y MER,
ausencia de BLEE (delta CAZ/CAC <=3), piperacilina+tazobactama(TZP) <=15mm fueron
los marcadores fenotpicos para sospechar esta enzima.
Las recomendaciones para el tratamiento de cepas con OXA-48 sugieren evitar la
monoterapia con carbapenemes. En este caso se destaca el xito terapetico de la
monoterapia
con
imipenem
asociado
al
drenaje
de
la
herida.

P - 058
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Marrama M., Monetti M., Venezuela F.,Chavero G., Frutos C., Mosmann J., Kiguen X.,
Cuffini C.
Institucin: Laboratorio de la Direccin de Especialidades Mdicas. Municipalidad de Crdoba
Instituto de Virologa Dr J.M.Vanella. FCM. UNC.

Prevalencia de Chlamydia trachomatis en mujeres que cursan el tercer trimestre de

embarazo, asistidas en Centros de Salud Municipales.
Chlamydia trachomatis (C.trachomatis) produce una de las infecciones de transmisin
sexual (ITS) ms frecuentes en el mundo. Esta bacteria se asocia a abortos, endometritis
post parto y rotura prematura de membranas. La infeccin del recin nacido puede
ocasionar bronquitis, neumona, conjuntivitis y bajo peso.
Las vulvovaginitis (VV) son una de las principales consultas ginecolgicas de pacientes en
edad frtil. Aproximadamente el 90% de las VV son de naturaleza infecciosa siendo
Vaginosis bacteriana (VB), Candidiasis vulvovaginal (CVV) y Tricomoniasis vaginal (TV)
las ms frecuentes.
Objetivo: Determinar la prevalencia de C. trachomatis en mujeres que cursan el tercer
trimestre de embarazo y comparar la frecuencia de infeccin de C.trachomatis en relacin
con la edad y la presencia de vulvovaginitis.
Se procesaron 279 muestras clnicas cervico-vaginales de mujeres (16 a 42 aos)
embarazadas (de 35-37 semanas de gestacin), que concurran al Laboratorio de la
Direccin de Especialidades Medicas a realizarse el estudio de portacin de
Streptococcus agalactiae, entre septiembre y diciembre de 2013.
Se tomaron dos hisopados, el primero en medio de transporte Stuart que se utiliz para
realizar el diagnstico de VV, mediante examen en fresco, cultivo en Sabouraud, y tincin
de Gram con la aplicacin de los criterios de Amsel y score de Nugent. El segundo se
utiliz para la deteccin de C. trachomatis por biologa molecular.
Se detect C trachomatis en 29 (10,4%) muestras. La distribucin por grupo etario fue: 24
(85%) pacientes menores de 25 aos; 4 (13,8%) entre 26-35 aos y 1 (3,4%) mayor de 35
aos. Se determin la presencia de VV en 106 pacientes; el 18,6% de CVV (n=52), el
15,1% de VB (n=42), el 3,6% de TV (n=10) y 2 coinfecciones VB+CVV y TV + CVV,
representando cada una 0.36% (n=1)
Se evidenci asociacin significativa entre la deteccin de C. trachomatis en menores de
25 aos (p=0,018, X2=4,2262:OR=2,7472 1,0133-7,4480 ).
No hubo diferencias significativas entre la infeccin por C trachomatis con CVV, VB o TV.
Este es el primer reporte de prevalencia de la infeccin por C trachomatis en mujeres
embarazadas (10,4%) en nuestra regin. La misma result ser superior a la informada en
USA y Australia (3,5% y 6,4% respectivamente); esto puede deberse a que estos pases
han implementado rigurosos programas de control de esta Infeccin.
La deteccin temprana; principalmente en mujeres menores de 25 aos, y el tratamiento
especfico de esta infeccin bacteriana en el embarazo reducira los riesgos de morbilidad
tanto
del
recin
nacido
como
de
la
madre.

P - 059
rea: Bacteriologa clnica
Autores: MATTOS, M.
Institucin: HOSPITAL AERONUTICO CRDOBA

INFECCIONES URINARIAS EN PACIENTES MAYORES DE 60 AOS: AGENTES

PATGENOS Y RESISTENCIA ANTIBITICA (2009-2013). HOSPITAL AERONUTICO
CRDOBA.
Las infecciones del tracto urinario (ITU) constituyen uno de los principales motivos de
consulta en el mbito de atencin primaria. En los ltimos aos se han producido cambios
sustanciales en los patrones de sensibilidad de los principales patgenos urinarios, lo que
ha condicionado cambios en el tratamiento emprico de stas.
El objetivo principal de este trabajo fue determinar los microorganismos ms frecuentes
causantes de ITU en pacientes mayores de 60 aos y su perfil de resistencia antibitica.
Materiales y Mtodos: El estudio fue retrospectivo, observacional y descriptivo, realizado
en el servicio de Microbiologa del Laboratorio del Hospital Aeronutico Crdoba.
Se incluyeron los urocultivos positivos de pacientes ambulatorios de ambos sexos,
mayores de 60 aos, con un recuento en cultivo, mayor o igual a 104 UFC/mL, y un
examen de orina con sedimento patolgico. Se excluyeron las muestras de pacientes
internados y aquellas de pacientes menores de 60 aos.
Resultados: se revisaron 1120 urocultivos positivos de pacientes que cumplieron con los
criterios de inclusin y exclusin, en el periodo 2009-2013.
Se obtuvieron 825 aislamientos de Escherichia coli, que ocup el primer lugar con 73 %
promedio por ao; seguido por Enterobacter sp. con 10%, y en tercer lugar el
Enterococcus sp. con un 6 % promedio por ao. El promedio de edad de los pacientes fue
de 78 aos (rango 60 95). Con un 72 % pacientes de sexo femenino y 28 % de sexo
masculino.
La resistencia hallada para los antimicrobianos habitualmente utilizados en ITU para
Escherichia coli fueron: Ciprofloxacina (35%); Trimetoprima-Sulfametoxazol (TMS 31%),
Cefalotina (23%), Ampicilina/Sulbactama (AMS 20%).
Conclusiones: El microorganismo ms frecuente fue la Escherichia coli, con predominio
en el sexo femenino, lo cual coincide con la literatura, las tasas de resistencias detectadas
obliga a reevaluar el tratamiento emprico de las infecciones urinarias y se refleja en el
alto porcentaje de resistencia encontrado principalmente a Ciprofloxacina y TrimetoprimaSulfametoxazol.

P - 060
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Millara, M. (1); Bravo, G. (2);Lucero, N. (3); Perrone, M. (1); Alves, R. (1); Romeo, A. (1);
Montoto, M. (1); Scorzato L. (1)
Institucin: (1) Servicio de Microbiologa del Hospital Dr. J. M. Penna, C.A.B.A. (2) Servicio de
Infectologa del Hospital Dr. J. M. Penna. (3) Servicio de Brucelosis Instituto Nacional de
Enfermedades Infecciosas-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn

Brucella canis en hemocultivos de paciente peditrico

La brucelosis es una enfermedad zoonotica transmitida a humanos por contacto con
fluidos de animales infectados. La Brucella canis tiene la capacidad de infectar casi
nicamente a perros, no obstante se han descripto casos en humanos. El objetivo es
presentar el caso de un paciente de 5 aos de edad previamente sano, que consult por
cuadro de fiebre (39-40 C) de 48hs de evolucin, acompandose de cefalea, astenia y
vmitos. El examen fsico mostr adems hemodinamia estable, buena entrada de aire
bilateral, sin ruidos agregados; abdomen blando, depresible, ruidos hidroareos positivos,
normodistribuido; no se palparon viceromegalias, diuresis y catarsis positivas. El
diagnstico microbiolgico se realiz por la obtencin de dos hemocultivos (sistema
BACT-ALERT) que resultaron positivos. Los mismos correspondan a dos botellas FAN
peditricas con tiempo de positivizacin de 96 hs. El microorganismo fue identificado
como Brucella canis en forma presuntiva por pruebas bioqumicas (catalasa+, oxidasa+,
urea rpida y cocobacilo negativo en la coloracin de Gram) y luego fue confirmado en el
Instituto Malbrn. El paciente recibi tratamiento con antibitico por cinco das
(Ceftriaxona) y se otorg el alta por buena evolucin clnica. Al tener documentacin
bacteriolgica de B. canis se complet tratamiento antibitico con TrimetoprimaSulfometoxasol + Rifampicina, siendo hasta la fecha la evolucin del paciente favorable, el
cual contina bajo controles clnicos ambulatorios y serolgicos peridicos postfinalizacin del tratamiento. Se tomaron nuevas muestras de sangre y se recibieron
resultados de serologa cELISA: 20 y iELISA: 59. Adems se cit al grupo familiar para
estudio serolgico y el personal de microbiologa expuesto fue estudiado por serologa
siendo los resultados negativos hasta la fecha. Es importante resaltar que ante la
presencia de un aislamiento de cocobacilos gram negativos, oxidasa positiva, ureasa
positiva rpida, catalasa positiva se debe pensar en la posibilidad de Brucella spp y
trabajar esta cepa siguiendo las normas de seguridad biolgica adecuadas, debido al
potencial riesgo de infeccin del personal de microbiologa expuesto a aerosoles
generados en los procedimientos microbiolgicos que llevan a sus identificacin.

P - 061
rea: Bacteriologa clnica
Autores: MUOZ, M.; MENA, J.; MINOLI, M.; GARUTTI, A.; FERNNDEZ, A.; AIASSA, M.
Institucin: Hospital Crdoba

Mycobacterium fortuitum: AGENTE CAUSAL DE INFECCIN ESTERNAL SECUNDARIA

A CIRUGA CARDACA
Mycobacterium fortuitum es una micobacteria de crecimiento rpido que se encuentra en
el medio ambiente, suelo, animales, piel sucia, cuerpos extraos, agujas o jeringas
contaminadas, aguas de ros, canales, lagos y mares. En el ser humano puede ser causa
de infecciones postraumticas, de heridas quirrgicas, de la piel, tejido celular
subcutneo, pulmonares y asociadas a catteres, generalmente por inoculacin indirecta
y con evolucin crnica.
Objetivo: incrementar el ndice de sospecha de M. fortuitum como agente causal de
infecciones de herida quirrgica ante la falta de respuesta al tratamiento antimicrobiano.
Caso clnico: paciente de 53 aos con infeccin de herida quirrgica a nivel esternal
secundaria a ciruga cardaca por insuficiencia mitral. Ante control post quirrgico, a los 18
das, se evidencia herida con signos de flogosis. Las caractersticas clnicas: eritema
local, induracin, dolor, crepitaciones y drenaje de secrecin seropurulenta e inodora. Se
inici tratamiento emprico con ceftazidima y vancomicina, sin respuesta.
Se cultiv material proveniente de: secrecin esternal, retroesternal, preesternal, alambre
esternal y hemocultivos automatizados.
Las muestras que se recibieron fueron procesadas, realizndose coloracin de Gram y
Ziehl Neelsen; sembradas en agar sangre, agar chocolate, caldo tioglicolato y en
Lowenstein Jensen. En el examen directo, se observaron bacilos cido alcohol resistentes
en la secrecin de herida quirrgica y en hemocultivo. La velocidad de desarrollo en los
medios habituales fue a los 4 das en las muestras quirrgicas y los frascos de
hemocultivos resultaron positivos 1 de 2 a los 4.8 das, desarrollando colonias con
pigmentacin, no cromgena. Bajo la sospecha de micobacteria no tuberculosa de
crecimiento rpido, se remiti la cepa al Hospital Trnsito Cceres de Allende para su
identificacin informndose M. fortuitum.
Este agente etiolgico debe sospecharse en aquellos pacientes con presentacin clnica
que no responden a un tratamiento antimicrobiano emprico estndar. Para las infecciones
de piel y tejido celular subcutneo, es importante el antecedente de traumatismo o ciruga
previa. Otros factores de riesgo incluyen los defectos graves de la inmunidad mediada por
clulas, corticoterapia prolongada, leucemias y linfomas. El reconocimiento de estas
infecciones inusuales es fundamental, debido a que el diagnstico generalmente se
retrasa, exponindose al paciente a un tratamiento antimicrobiano inadecuado, con mayor
morbilidad y toxicidad. La combinacin de al menos dos agentes antimicrobianos y el
desbridamiento quirrgico es fundamental para una favorable evolucin.

P - 062
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Belmonte A.1, 2, Ochoa P.1, Badano A.1, Nogueras M.1, 2
Institucin: Policlnico Dr. Marcelino Freyre. Olive 11 59 (1)- Facultad Ciencias Medicas UNR
Santa Fe 3100 (2).Rosario. Santa Fe

PORTACION DE CARBAPENEMASAS TIPO KPC y ENTEROCOCOS VANCOMICINA

RESISTENTES EN UNA POBLACION DE ADULTOS MAYORES
La infeccin por enterobacterias (EB) productoras de carbapenemasas clase A tipo KPC
(KPC) y de Enterococcus spp resistentes a vancomicina (EVR) son un problema creciente
en la practica medica diaria. Aumentan la morbi-mortalidad en pacientes hospitalizados
con gran capacidad de diseminacin y multiresistencia acompaante lo que complica aun
ms su tratamiento. La bsqueda de portacin de KPC y EVR se realiz en forma
sistemtica y uniforme desde 01/01/2012, efectundose una intervencin integral y
estricta a partir de 01/01/2013 en todo el personal de salud y en el control de las prcticas
en el aislamiento de contacto de los pacientes portadores. Nos propusimos realizar un
trabajo retrospectivo a fin de observar el impacto producido. Para ello se estudiaron 356
heces espontneas, provenientes de pacientes internados en distintas salas, que se
remitan para realizar otros exmenes microbiolgicos (no de portacin) en el perodo
comprendido entre 01/01/2012 al 31/12/2013.Una vez procesadas las muestras, se
adicionaron otros medios a fin de efectuar una tcnica de tamizaje mediante uso de
medios selectivos. Ellos fueron: medio cromognico para deteccin de KPC y Agar bilis
esculina con azida (agar BEAz+ 50ul/40 ml de Vancomicina).
KPC: se estudiaron las colonias compatibles con el grupo Klebsiella-CitrobacterEnterobacter (KES), fueron identificadas como colonias sospechosas aquellas de color
azul en el medio selectivo utilizado.Se realiz la identificacin mediante pruebas
metablicas convencionales y el estudio fenotpico de resistencia mediante el uso de 4
monodiscos: Meropenem (Mer)(10g), Mer con cido3-aminofenilbornico (Mer-APB),
Mer con cloxacilina (Mer-Cx) y Mer con cido dipicolnico (Mer-D). Los primeros
aislamientos de KPC en este tamizaje fueron corroborados por biologa molecular con
tcnicas de ampliacin (PCR).
EVR: se estudiaron aquellas colonias negras que sugeran hidrlisis de la Bilis esculina en
el medio selectivo, corroborando la resistencia a vancomicina segn normas de CLSI
(2012/13). La identificacin del aislamiento se realiz mediante el estudio de crecimiento
en ClNa 6,5 %, agar telurito de Potasio al 1%, caldo arabinosa 1%.
De 356 muestras de heces provenientes de pacientes internados en distintas salas, 298
fueron negativas (83,7%) y 58 (16,3%) fueron positivas para K pneumoniae (Kp KPC) y
EVR, 5 en unidad de cuidados intensivos y 53 en salas. Estos aislamientos se
recuperaron en 42 pacientes durante el ao 2012 (42 KPC y 18 EVR) y 16 pacientes (16
KPC y 5 EVR) en el 2013.Hubo un total de 23 (39,65%) pacientes en los 2 aos que
portaron KPC+EVR.Se nota una franca disminucin en la portacin de KPCy EVR en los
perodos estudiados (42/16). Se concluye que la pronta deteccin de ellos debe ser
propsito imprescindible en la prctica diaria del laboratorio bacteriolgico a fin de evitar
sus dispersiones y el equipo de salud debe estar capacitado para implementar y controlar
la
diseminacin
de
ellos.

P - 063
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Novillo F, Rocchi M, Ocaa Carrizo V, Gasparotto A, Navarro M, Manassero N, Furiasse
D, Monterisi A.
Institucin: Dpto. de Bacteriologa, Hospital Nacional de Clnicas, UNC.

BACTERIEMIAS EN PACIENTES MUY ANCIANOS. ANLISIS DE 141 EPISODIOS.

Diferentes estudios han demostrado que la poblacin de ms de 65 aos presenta mayor
susceptibilidad para desarrollar infecciones graves, incluyendo las bacteriemias. Las
caractersticas especficas en individuos muy ancianos (80 aos o ms) son menos
conocidas aunque este subgrupo sea cada vez ms prevalente en pases desarrollados.
Nuestro objetivo es describir las caractersticas epidemiolgicas de las bacteriemias
adquiridas en la comunidad de pacientes muy ancianos (BCMA) y reportar la sensibilidad
(S) a los antimicrobianos (ATM) de los microorganismos (MO) ms frecuentes.
Entre enero de 2005 y diciembre de 2013 se registraron 141 episodios (EP) de BCMA.
Por cada paciente se tomaron 2 muestras de sangre que se inocularon en frascos de
hemocultivo para aerobios y anaerobios (Lab. Brizuela). La identificacin bioqumica de
los MO se realiz mediante pruebas bioqumicas convencionales. Se realizaron pruebas
de S a los ATM por difusin y dilucin (CLSI).
El 52% de los pacientes fueron mujeres y el 48% varones con un rango etario entre 80 a
95 aos. El 61% de los pacientes posean comorbilidades (CO) siendo las ms
frecuentes: cardiopata (CAR) 39%, diabetes mellitus (DIB) 17%, neoplasia (NEO) 8% y
otras 15%. Las presentaciones clnicas fueron: sndrome febril (FIE) 56%, sepsis (SEP)
18%, neumona (NEM) 17% e infeccin urinaria (IU) 9%. En el 45% de los EP se encontr
foco asociado: urinario (URI) 21%, abdominal (ABD) 8%, piel y partes blandas (PPB) 7% y
otros 2%. De los 141 EP se aislaron 154 MO, ya que el 9% fueron polimicrobianos.
Predominaron los bacilos gramnegativos (BGN), 59%; seguido de los cocos gram
positivos (CGP), 40% y anaerobios 1%. Los MO ms frecuentes fueron: Escherichia coli
(Ecl), 39%; Streptococcus pneumoniae (Spn), 11%; Staphylococcus aureus (Sau), 11% y
Klebsiella pneumoniae (Kpn), 8%.
El 43% de Ecl fue resistente (R) a ciprofloxacina y el 10% a ceftazidima. El 17% de Sau
fue R a oxacilina y el 12 % de Spn present S disminuida a penicilina (rango de
concentracin inhibitoria mnima: 0,5 1 g/ml).
Conclusiones: 1) Las BCMA se presentaron en pacientes de ambos sexos en
proporciones similares. 2) Las CO ms frecuentes fueron CAR y DIB, y un porcentaje
importante de pacientes, present sepsis. 3) La etiologa microbiana fue diversa con
predominio de BGN y los focos ms frecuentes fueron URI y ABD. 4) Los niveles de R a
los ATM hacen indispensable el informe rpido de las pruebas de sensibilidad
antimicrobiana.

P - 064
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Oviedo C, Gianecini A, Regiane S, Galarza P
Institucin: Laboratorio Nacional de Referencia en Enfermedades de Transmision Sexual, INEI ANLIS "Dr C G Malbran"

EVALUACIN DEL DESEMPEO DE MALDI-TOF MS EN LA IDENTIFICACIN DE

Neisseria gonorrhoeae
En la prctica diaria, la identificacin de N. gonorrhoeae (Ng) se torna dificultosa por ser
un microorganismo nutricionalmente fastidioso. La espectrometra de masa asistida por
lser sobre matriz (MALDITOF MS) ha surgido como una nueva herramienta para la
identificacin rpida y fiable de microorganismos. El resultado se basa en la correlacin
con los espectros de masa incluidos en la base de datos del equipo
Evaluar el desempeo del sistema MALDI-TOF MS para el estudio de N. gonorrhoeae
comparado con mtodos fenotpicos convencionales.
Ampliar la base de datos provista por el fabricante mediante la incorporacin de un mayor
nmero de perfiles proteicos (PP) de la especie Ng a fin de mejorar la identificacin.
Se analizaron 109 aislamientos provenientes de exudados uretrales y cervicales,
derivados por los laboratorios de la Red de ITS durante el 2013. El diagnostico se efectu
mediante fermentacin de hidratos de carbono y serologa (Phadebac Monoclonal GC
Test, MKL). La EM se realiz con un equipo MALDI-TOF, Bruker, Daltonics (Biotyper
versin 3.0). La placa se inocul con la muestra por depsito directo en un primer spot y
luego directamente en un segundo spot (duplicado), utilizando el mismo palillo
procediendo, segn instrucciones del fabricante. Se evalu adems el desempeo del
equipo mediante la incorporacin de PP correspondientes a 6 cepas de Referencia (WHO
K, N, L, M, O y P) y 7 cepas autctonas caracterizadas genticamente, para ampliar la
base de datos (BD) del sistema. Se compararon los perfiles obtenidos con la BD del
equipo segn los siguientes criterios: score 2.0= identificacin a nivel especie, score 1.71.99= identificacin a nivel gnero y score <1.7= no identificacin.
Sobre un total de 109 Ng, MALDI-TOF identifico correctamente a nivel de Genero
(Neisseria spp) al total de los aislamientos estudiados y a nivel de especie a 90/109
(82.6%). Del total de Ng, 13 (12%) fueron identificadas como N. gonorrhoeae y N.
meningitidis, con un score 2.0 y, 6 (5,5%) presentaron un score entre 1.7 y 1.99.
Utilizando el criterio establecido por el fabricante no es posible realizar la identificacin a
nivel de especie en estos aislamientos. Luego de la incorporacin a la base de datos de
los nuevos PP, resulto en todos los casos como nica opcin N. gonorrhoeae con un
score 2.0.
La falta de identificacin a nivel de especie de algunos aislamientos, pudo deberse a la
escasa cantidad de PP para Ng incluidos en la base de datos o, a la similitud de los
mismos con los PP de N. meningitidis. La inclusin de nuevos PP en especial los
autctonos, incremento la agudeza del diagnstico.
Nuestros resultados muestran que con la inclusin del nuevo PP, MALDI - TOF MS es
una tcnica confiable que tiene el potencial para reemplazar la identificacin fenotpica
convencional para la mayora de las cepas de Ng aisladas de forma rutinaria en los
laboratorios
de
microbiologa.

P - 065
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Paredes, M.; Orecchini, A.; Carandino, M.; Garnero, A.; Montanaro, P.
Institucin: Hospital de Nios de la Santsima Trinidad. Cordoba.

EPIDEMIOLOGA DE LA NEUMONA NOSOCOMIAL ASOCIADA A VENTILACIN

MECNICA EN UNA UNIDAD DE CUIDADOS INTENSIVOS PEDITRICOS.
Introduccin: La neumona nosocomial (NN) en las Unidades de Cuidados Intensivos
(UCI) es una de las causas ms frecuentes de infeccin intrahospitalaria y se asocia con
una elevada morbimortalidad. Aproximadamente el 80% de los episodios de NN ocurre en
pacientes con asistencia respiratoria mecnica (ARM). El conocimiento de la
epidemiologa en cada hospital permite iniciar un tratamiento emprico adecuado,
mejorando el pronstico.
Objetivo: Conocer la etiologa de las NN asociadas a ARM en la UCI del Hospital de Nios
de la Santsima Trinidad de Crdoba (UCI-HN).
Materiales y Mtodos: Estudio retrospectivo de 73 lavados broncoalveolares no
broncoscopicos (MBAL) recibidos en el Laboratorio de Microbiologa entre julio de 2011 y
diciembre de 2013. Estos correspondieron a 67 pacientes internados en la UCI-HN, con
diagnstico de neumona asociada a ventilacin mecnica. El diagnstico de esta
patologa se bas en criterios clnicos, radiolgicos y microbiolgicos. Las muestras
fueron procesadas por tcnica cuantitativa.
Resultados: La mediana de edad fue: 4 aos (2 meses-15 aos). De los 73 MBAL
recibidos, 45 (62%) fueron muestras aptas y 28 (38%) no aptas. De los 45 MBAL
analizados en 17 (38%) no hubo desarrollo, en 28 (62%) el cultivo fue positivo: 20 (71%)
tuvieron desarrollo de un solo microorganismo (MO) y 8 (29%) fueron cultivos mixtos. El
total de aislamientos obtenidos fue 37, lo que represent una relacin de 1,3
aislamiento/paciente.
De las muestras con cultivo positivo el 25% (n:7) fueron tomadas antes de los 5 das de
ARM y el 75% (n:21) despus de los 5 das.
Los MO aislados fueron: H. influenzae (n:9; 24,3%), S. aureus (n:9; 24,3%), S.
pneumoniae (n:6; 16,2%), M. catarrhalis (n:5; 13,5%), P. aeruginosa (n:3; 8,2%) y otros
bacilos Gram negativos (n:5; 13,5%).
Los MO aislados de las muestras obtenidas antes de los 5 das de ARM y despus de los
5 das de ARM fueron respectivamente: H. influenzae (2 vs.7), S. aureus (2 vs.7), S.
pneumoniae (2 vs.4), M. catarrhalis (1 vs.4), P. aeruginosa (1 vs.2). Solo en los pacientes
con ms de 5 das de ARM se recuper: K. pneumoniae (2), A. baumannii (1), S.
maltophilia (1), Serratia sp (1).
Conclusin: Durante el perodo evaluado los MO prevalentes fueron H. influenzae, S.
aureus y S. pneumoniae, tanto en los pacientes que desarrollaron neumona asociada a
respirador de aparicin temprana (< 5 das de ARM) como en aquellos con neumona de
aparicin tarda. Los das de respirador no modificaron la frecuencia relativa de los MO. El
aislamiento de bacilos gram negativos (Enterobacterias, A. baumannii , S. maltophilia) fue
bajo y se observ solo en los pacientes con ms de 5 das de ARM. Probablemente la
similitud en la recuperacin de MO estara relacionada con el alto porcentaje de
colonizacin con patgenos respiratorios habituales en los nios.
Nuestra epidemiologa difiere a lo reportado en otras publicaciones donde los bacilos
Gram
negativos
fueron
los
MO
prevalentes.

P - 066
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Paredes, M.; Carandino, M.; Montanaro, P.
Institucin: Hospital de Nios de la Santsima Trinidad. Cordoba.

OSTEOMIELITIS POR Enterococcus hirae. PRESENTACION DE UN CASO.

Los Enterococcus spp (Esp) son miembros de la microbiota normal del tracto
gastrointestinal de humanos y animales. Han sido identificados como patgenos
oportunistas pudiendo causar diferentes tipos de infecciones. A pesar de su baja
virulencia, en los ltimos aos han adquirido cada vez ms importancia por su elevada
incidencia en infecciones nosocomiales y por la adquisicin de resistencia a distintos
antimicrobianos.
Se presenta el caso de una paciente de 11 aos de edad que ingresa al hospital por
fractura expuesta de tibia grado III, debido a un accidente en la va pblica. Al ingreso se
indica tratamiento con cefalotina, clindamicina y gentamicina. En su tercer da de
internacin se le realiza toilette quirrgico (tqx) observndose gran cantidad de tejido
necrtico; se retira tejido seo y de partes blandas envindose tres muestras para cultivo;
en todas se asla Esp. Frente a este aislamiento se rota el tratamiento a ampicilinagentamicina. Al sexto da los resultados de laboratorio muestran: Hto: 32%, Hb: 10,9 g/dl,
GB: 14.760/mm3 (Ns: 80%), VSG: 92mm, PCR: 3,34mg/l. Se le realiza un nuevo tqx
mostrando la herida bordes necrticos los cuales se debridan. Se enva una muestra para
cultivo aislndose Esp y otra muestra a anatoma patolgica la que refiere inflamacin
aguda a crnica inespecfica. Se hace diagnstico de osteomielitis aguda por Esp,
continuando con tratamiento endovenoso por 10 das. Se da el alta clnica con amoxicilina
va oral por 30 das con evolucin favorable.
La cepa aislada fue identificada como Enterococcus hirae.
Para su identificacin se utilizaron mtodos fenotpicos y espectrometra de masa
(MALDI-TOFF). Los resultados de las pruebas convencionales manuales coincidieron con
E. hirae al igual que la identificacin por espectrometra de masa. La identificacin
mediante sistema Vitek 2 (tarjeta GP, bioMrieux) mostr baja discriminacin (50% E.
hirae y 50% E. durans).
La cepa fue sensible a: penicilina (CIM: 1ug/ml medida por E test, bioMrieux),
vancomicina y no present resistencia de alto nivel a gentamicina y estreptomicina.
Dentro del gnero, E. faecalis y E. faecium son las especies clnicamente ms
importantes (60- 90% de los aislamientos clnicos). Otras especies son raramente
aisladas.
Es difcil diferenciar E.hirae de E. durans debido a la similitud fenotpica y bioqumica,
difieren solamente en la fermentacin de dos azcares: produccin de cido a partir de
rafinosa y sacarosa, siendo estos test positivos con E. hirae y negativos con E. durans.
Rescatamos la importancia de la identificacin a nivel de especie, tanto como herramienta
epidemiolgica como para decidir la terapia antibitica ya que la sensibilidad entre
especies puede variar.
E. hirae causa infecciones en diferentes especies animales (gallinas, ratas, pjaros y
gatos)
pero
es
muy
raro
su
aislamiento
en
humanos.

P - 067
rea: Bacteriologa clnica
Autores: GOYECHEA R., MARTEMUCCI C., PATO A.; ACCHINELLI F
Institucin: HOSPITAL ANGELA I. LLANO (CORRIENTES)

BACTERIURIA Y EMBARAZO
Introduccin: Las embarazadas son una poblacin susceptible de sufrir colonizacin e
infeccin del tracto urinario, que conlleva a riesgo de partos prematuros y bajo peso al
nacer. Objetivos: Determinar la frecuencia de Urocultivos positivos (UP), bacteriuria
asintomtica (BA) y grmen ms frecuente resistencia antibitica en muestras de
embarazadas que concurrieron del Hospital ngela I. de Llano, desde 2007 hasta
2013.Materiales y Mtodos: Estudio retrospectivo, transversal, de registros del Servicio de
Microbiologa. Se incluyeron las embarazadas, de todas las edades gestacionales de
carcter ambulatorio. Las siembras se realizaron en agar sangre y CLDE, sedimento
urinario, tipificaciones y mtodos de sensibilidad manuales por Kirby Bauer. Se consider
bacteriuria significativa al desarrollo monobacteriano de >10 5 UFC/ml. Resultados: Se
analizaron 2.916 muestras, de las cuales 246 fueron positivas (8,4%), con una frecuencia
para Escherichia coli (79,7 %) de de Klebsiella pneumoniae (6,1 %) Staphylococcus
saprophyticus (4,1%). Corresponden a BA 67 muestras (2,3%). El grmen aislado con
ms frecuencia fu Escherichia coli (74,6%), seguido por Klebsiella pneumoniae (7,5%)
encontrndose un 4.5 % de Streptococcus agalactiae. Los porcentajes de resistencia que
present la Escherichia coli para los discos antibiticos probados fueron: Ampicilina
50,8%, trimetroprima/sulfametoxazol 26,5 %, cefalotina 13,8%, Aminopenicilina/sulbactam
(AMS) 13,5%, Nitrofurantona 1,5%. Produccin de BLEE 1,5 %. Las cepas de Esherichia
coli aisladas de BA presentaron un patrn de sensibilidad similar pero ausencia de BLEE.
Conclusin: La frecuencia de UP y de BA en la poblacin estudiada fu similar a la
bibliografa consultada y los grmenes ms frecuentes en ambos casos fueron los mismos
y las resistencias bacterianas mantuvieron un patrn similar. Nitrofurantona,
cefalosporinas de primera generacin y AMS siguen siendo la opcin para tratamiento
emprico
en
nuestra
poblacin.

P - 068
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Elas G, Papini R, Getzrow P, Ramirez D, Ferreyra G, Achinelli F, Pato A, Martemucci C,
Gimnez L
Institucin: hospital Angela I. Llano

PERITONITIS BACTERIANA ESPONTANEA POR AEROMONA HYDROPHILA EN

PACIENTE CIRROTICO
Introduccin:
Aeromonas spp. son bacterias relacionadas a ambientes acuticos y que puede ser causa
de diferentes cuadros clnicos. Estos van desde episodios de gastroenteritis e infecciones
de piel y partes blandas hasta sepsis en pacientes inmunocomprometidos como cirrticos
y oncohematolgicos.
Se present un paciente de sexo femenino de 45 aos de edad, etilenolista crnica
(oriunda de Paso de la Patria-rea rural-consumo de aguas de napas) con diagnstico
probable de cirrosis heptica que consulta por distensin abdominal de una semana de
evolucin que se acompaa de disnea funcional clase II y fiebre. Se realiz evaluacin
clnica, con estudios de sangre y lquido asctico. El citoqumico y bacteriolgico del ltimo
implicaron una PBE, la celularidad fue de 14.500 con predominio de PMN. En cuanto al
cultivo se observ numerosas clulas y leucocitos con desarrollo de Aeromonas
hydrophila sensible a: cefalotina, cefotaxima y trimetroprima sulfametoxasol. Sensibilidad
disminuida a ciprofloxacina y resistencia a ampicilina y amoxicilina-cido clavulnico. Los
miembros del gnero Aeromonas son bacilos Gram negativos, oxidasa positivo, catalasa
positivo, reducen nitratos a nitritos, son fermentadores de glucosa y anaerobios
facultativos, crecen en medios de cultivo comunes con agar McConkey y agar sangre
donde producen colonias hemolticas y sobre todo Aeromonas hydrophila produce una
importante cantidad de exoenzimas tales como: amilasa, ADNasa, estearasas,
peptidasas, arilamidasas.
El hbitat de esta bacteria es el medio ambiente, sobre todo el agua corriente o estancada
y el suelo. Aeromonas spp. es un agente patgeno en el hombre y los animales,
especialmente en peces, anfibios y reptiles. Las especies ms importantes que producen
infeccin en el hombre son: A. hydrophila, A. caviae y A. veronii biotipo sobria.
En pacientes cirrticos la PBE generalmente es producida por enterobacterias del tracto
gastrointestinal por translocacin bacteriana. No obstante es fundamental el interrogatorio
sobre el rea epidemiolgica para la bsqueda de otros posibles agentes etiolgicos
como ser Aeromonas. Personas que consumen agua de perforacin presentan riesgo de
infeccin por este germen. Ante la sospecha clnica debera orientarse al servicio de
microbiologa hacia la bsqueda de estos microorganismos.
Conclusin: En pacientes cirrticos que viven en rea rural se debe investigar grmenes
poco
habituales
como
el
gnero
Aeromonas.

P - 069
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Piersigilli, A.; Ciarlantini, M.; Francisetti, V.; Lamberghini, R.; Bilbao, L.; Ledesma, E.
Institucin: Sanatorio Privado Aconcagua, Crdoba.

ENDOCARDITIS INFECCIOSA POR Cardiobacterium hominis: reporte de un caso.

Introduccin: C. hominis es un bacilo Gram negativo, pleomrfico, fastidioso, miembro del
grupo HACEK [Haemophilus spp, Aggregatibacter spp, Cardiobacterium spp, E.
corrodens, y Kingella spp], forma parte de la flora normal de oro faringe. La endocarditis
infecciosa (EI) causada por C hominis es poco comn, y por lo general de curso subagudo
(hay aproximadamente 100 casos reportados).
Objetivo: reportar un caso de EI por C. hominis.
Caso clnico: varn de 56 aos, ex tabaquista, hipertenso. Ingresa a UTI con insuficiencia
respiratoria. Refera disnea progresiva, de 3 meses de evolucin, acompaada de prdida
de peso, niega fiebre. Se solicita Ecocardiograma Trans-Torcico (ETT) donde se objetiva
doble lesin valvular artica. Se toman 5 sets de hemocultivos que se procesan por
sistema BACTEC 9120 (Becton & Dickinson). Tras 116 horas de incubacin, se observan
en los caldos de cultivo, formas bacilares Gram variables, aisladas y agrupadas (en
rosetas o racimos). Se instaur terapia emprica inicial (considerando el informe
microbiolgico preliminar) con vancomicina, gentamicina y ceftriaxona. El Ecocardiograma
Trans-Esofgico (ETE) se observaron iguales hallazgos que el ETT, sin evidencia de
vegetaciones.
En agar sangre y chocolate, en atmsfera microaeroflica, desarrollan lentamente colonias
pequeas, circulares, planas; que no crecen en agar MacConkey. Sumando a esto, la
morfologa tpica al Gram (bacilos Gram-negativos pleomrficos con extremos
protuberantes en forma de racimos, de rosetas, con un patrn de tincin irregular) y el
perfil bioqumico: catalasa negativo, oxidasa e indol positivos, se emite informe preliminar:
Bacilo Gram Negativo, probable grupo HACEK. Se suspende vancomicina y
gentamicina, continuando con ceftriaxona.
Se deriva la cepa, informe definitivo por sistema VITEK 2 (bioMrieux): C. hominis. La
identificacin fue confirmada por el Servicio de Bacteriologa Especial del Instituto Malbrn
por secuenciacin parcial del gen 16SrARN. Se obtuvo similitud del 100%, con C. hominis
ATCC 15826 (cepa tipo).
El paciente fue intervenido quirrgicamente, con reemplazo de vlvula artica mecnica.
Hemocultivos de control: negativos. Complet 28 das de antibitico evolucionando
favorablemente.
Discusin: C. hominis es una causa poco frecuente de EI. El retraso en el diagnstico, se
explica en parte por los sntomas leves y la dificultad de aislar el microorganismo a partir
de sangre. En nuestro caso las muestras se positivizaron al quinto da de incubacin; la
morfologa tpica al Gram y las pruebas bioqumicas, resultaron fundamentales para
orientar hacia una terapia emprica adecuada.
Teniendo en cuenta que se han identificado cepas de C. hominis productoras de lactamasas y puesto que las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos pueden ser
difciles de realizar, se decidi interdisciplinariamente implementar como tratamiento
cefalosporinas tercera generacin, terapia recomendada por la bibliografa consultada.

P - 070
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Presti, S.; Piccoli, L.; Marques, I.; Sosa, L.
Institucin: Servicio de Microbiologa Clnica Hospital Julio C Perrando-Resistencia ChacoResidencia de Bioqumica Clnica

AISLAMIENTO DE CORYNEBACTERIUM GLUCURONOLYTICUM EN UNA MUESTRA

DE SEMEN DE UN PACIENTE ESTRIL
El Corynebacterium glucuronolyticum, antes Corynebacterium seminale, se encuentra
como parte de la flora habitual del tracto genitourinario masculino y es incierta su
presencia en la mujer. Produce infecciones genitourinarias en hombres: prostatitis y
uretritis.
El objetivo de nuestro trabajo es comunicar un aislamiento significativo de
Corynebacterium glucuronolyticum en una muestra de semen de un paciente estril.
Caso Clnico: Paciente de sexo masculino de 42 aos, que presenta esterilidad de
probable etiologa infecciosa sin otra causa aparente, que concurre al laboratorio para
realizar estudios.
Se realizaron coloraciones de Gram, Giemsa y examen directo en fresco. La muestras se
sembraron en medios selectivos: agar Saboureaud, agar Thayer Martin, agar Levine, y no
selectivos: agar sangre.
Los cultivos de orina primera miccin en medios selectivos y no selectivos fueron
negativos. Desarrollaron en la placa de agar sangre de la muestra de semen colonias
blanco amarillentas, lisas y convexas, con un recuento de ms de 10 5 UFC/ml, segn
mtodo semicuantitativo. No se obtuvo desarrollo en otros medios. En la coloracin de
Gram se observaron bacilos cortos, pleomrficos, Gram positivos, catalasa positiva. Las
colonias se identificaron mediante las siguientes pruebas bioqumicas: desarrollo en agar
sangre con y sin Tween 80, con recuperacin de colonias no lipoflicas, metabolismo
fermentativo, sin pigmento, movilidad negativa, esculina positiva, ureasa positiva (rpida,
5 minutos), beta-glucuronidasa positiva, manitol en agar cistena triptena (CTA) negativa,
pirrolidonilaril amidasa (PYR) negativo y CAMP positiva.
Se realizaron pruebas de sensibilidad antibitica en agar Meller Hinton sangre,
incubando 48 horas a 35 C.
De acuerdo a lo observado en el examen microscpico, de la coloracin de Gram, las
pruebas bioqumicas tradicionales, se identific al microorganismo como Corynebacterium
glucuronolyticum.
Resultado de las pruebas de sensibilidad: ampicilina (10 g): 6 mm, eritromicina (15 g):
16 mm, cefotaxima (30 g): 22 mm, ciprofloxacina (5 g): 40 mm, amicacina (30 g):
40mm. trimetroprima + sulfametoxazol (1,25 g + 23,75g): 6 mm, rifampicina (5 g): 40
mm, vancomicina (30 g): 40 mm, gentamicina (10g): 6 mm.
No existen criterios del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, M45-A2 2010),
para la interpretacin de los halos de inhibicin por el mtodo de difusin con discos. El
mtodo recomendado por la CLSI, es la microdilucin en caldo.
El aislamiento de este microorganismo de difcil identificacin y de hallazgo poco
frecuente en esperma permiti el tratamiento con antibiticos adecuados del paciente, que
evolucion
favorablemente
logrando
recuperar
la
calidad
del
semen.

P - 071
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Prestifilippo, A; Chajud, A; Salamone, F; Mobilia, L; Almar, A; Boleas, M
Institucin: Hospital San Marn-Paran-Entre Ros.

ARTRITIS SEPTICA POR AGGREGATIBACTER APHROPHILUS: DESCRIPCION DE

UN CASO
Introduccin: Aggregatibacter aphrophilus, anteriormente Haemophilus paraphrofilus
forma parte de la flora farngea normal. Es un cocobacilo gram negativo que crece mejor
en agar sangre y agar chocolate en atmosfera de dixido de carbono al 5%. Es oxidasa y
catalasa negativo, puede ser independiente o no del factor V. Fue aislado por primera vez
de un paciente con endocarditis infecciosa, y otras infecciones reportadas en la literatura
incluyen absceso cerebral, endoftalmitis, infecciones seas y articulares. Los grmenes
pueden llegar a la articulacin por va hematgena, inoculacin directa o por contigidad.
Determinados factores, tales como diabetes, inmunosupresin, tratamiento con
corticoides, desaseo, drogadiccin, alcoholismo, deficiencias nutricionales predisponen a
la infeccin articular.
Descripcin del caso: Paciente de 15 aos de edad, drogadicto endovenoso, tabaquista,
sin antecedentes patolgicos. Al ingresar al nosocomio presenta cuadro de 1 mes de
evolucin caracterizado por gonalgia izquierda, sumndose posteriormente aumento de la
temperatura local, eritema e impotencia funcional. Tambin presenta registros febriles
intermitentes. El resto del examen fsico sin particularidad, excepto el mal estado dentario.
Se realiza una resonancia magntica (RMN) observndose una lesin expansiva en la
regin diafilometafisiaria femoral distal, sugestiva de un proceso infeccioso. Se le realizan
anlisis de sangre obtenindose un recuento de glbulos blancos de 23.700/mm3 con
neutrofilia, una velocidad de sedimentacin globular (VSG) de 84 mm/h. Las serologas
para HIV, Hepatitis B y VDRL fueron negativos. El diagnstico fue artritis sptica. Se
comienza tratamiento emprico con cefalotina y clindamicina. Se solicita hemocultivo y
cultivo de lquido de rodilla izquierda, siendo ambos negativos. Posteriormente se enva
para su estudio secrecin endomedular, tejido seo y endomedular. En estos
desarrollaron en agar chocolate cocos bacilos gram negativos, identificados por mtodo
manual y confirmado por sistema automatizado Vitek 2 como Aggregatibacter aphrophilus,
no productor de betalactamas. Se cambia tratamiento antimicrobiano a ceftriaxona 1 gr/
24 hs. El paciente evoluciona favorablemente, afebril y es dado de alta con tratamiento
domiciliario con control semanal.
Conclusin: Jerarquizamos la identificacin de estos grmenes poco frecuentes,
indispensable
para
instaurar
correcto
tratamiento
antimicrobiano

P - 072
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Furiasse Daniela, Navarro M, Monterisi A, Ocaa Carrizo V, Gasparotto A, Rocchi M.
Institucin: Dpto de Bacteriologa, Hospital Nacional de Clnicas, UNC.

Corynebacterium spp EN MUESTRAS CLNICAS

Las corinebacterias (CB) forman parte de la flora habitual de piel y mucosas, pero toman
relevancia clnica y deben ser identificadas a nivel de especie cuando: a) se aslan de
sitios normalmente estriles del cuerpo, b) han sido observadas en la tincin de Gram con
marcada respuesta inflamatoria, c) se presentan en urocultivos con recuento de colonias
104 UFC/ml como flora nica o con recuento de colonias 105 UFC/ml como flora
predominante.
Analizamos la presencia de CB en muestras clnicas durante el perodo 2009-2013.
Se recuperaron 82 aislamientos que correspondieron a: 24 urocultivos, 55 puntas de
catter, 3 heridas quirrgicas (Hqx). El 62% de las CB se obtuvieron en el ao 2013, el
21% en 2012, el 6% en 2011, el 4% en 2010 y el 7% en 2009.
La identificacin se realiz por pruebas bioqumicas (Manual Clinical Microbiology, ASM,
9th Ed, 2007): tincin de Ziehl Neelsen (-), catalasa (+), hemlisis en agar sangre ovina al
5%, lipofilismo, metabolismo fermentativo/oxidativo, vibriosttico 0129, test de CAMP,
reduccin de nitritos, hidrlisis de urea, esculina, tirosina, pyrazinamidasa, fosfatasa
alcalina y acidez a partir de hidratos de carbono.
Urocultivos: la respuesta inflamatoria estuvo presente (recuento de leucocitos 10/mm3)
en el 100% (n=24) de las orinas, con cultivo puro y recuento de colonias 104 UFC/ml.
Las CB aisladas fueron: C. urealyticum (CU) 75% (n=18), C. glucuronolyticum 4% (n=1),
Corynebacterium sp 21% (n=5). Se destaca que las orinas de las que se aisl CU
presentaron pH alcalino (>7,5), marcada hematuria y se recuperaron de pacientes
mayores (mediana: 70 aos), algunos de los cuales (25%) estaban sondados.
Heridas quirrgicas: absceso mamario (AM) 1, lquido articular 1 y tejido seo 1. En las
dos primeras muestras se observ reaccin inflamatoria al examen directo, y en los tres
casos se obtuvo cultivo puro recuperndose C. jeikeium en AM y Corynebacterium sp en
las dos muestras restantes.
Puntas de catter: en el 29% de los cultivos se aisl CB como flora nica y en el 71%
restante como flora predominante no realizndose la identificacin a nivel de especie.
Conclusiones: 1) hubo un incremento de aislamientos de CB en el ao 2013 en
comparacin con los aos anteriores. 2) CU represent el 75 % de las CB aisladas en
orina y con mayor frecuencia en pacientes de edad avanzada. 3) la presencia de CB en
catteres se interpret como colonizante, debido a que no hubo correlacin con hemos y
retrocultivos. 4) se recomienda identificar las CB a nivel de especie cuando estn
presentes en muestras con respuesta inflamatoria y significancia clnica.

P - 073
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Rodrguez, C.; Cceres, M.; Brengi, S.; Mochi, S.; Vias, M.; Grupo de Estudio de
Serratia
Institucin: Instituto de Microbiologa "Dr. Luis C. Verna", Facultad de Bioqumica-Universidad
Nacional de Tucumn; Laboratorio de Bacteriologa, Hospital "ngel C. Padilla"-Tucumn; Servicio
de Enterobacterias, Dpto. Bacteriologa-INEI-ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrn"; Laboratorio de
Microbiologa, Hospital de Nio Jess-Tucumn; CERELA-CONICET; IMPAM-

CASO DE CO-INFECCIN POR MLTIPLES CLONES DE Serratia marcescens

MULTIRRESISTENTES EN UN PACIENTE HOSPITALIZADO
Serratia marcescens es un reconocido agente causante de infeccin y brotes
nosocomiales asociado a alta morbilidad y mortalidad. Trabajos previos de nuestro
laboratorio evidenciaron que en los ltimos aos se ha registrado en nuestro pas un
aumento significativo en la frecuencia de aislamientos de S. marcescens, resistente
natural a colistn, como consecuencia del empleo de dicho antibitico para el tratamiento
de infecciones causadas por microorganismos carbapenemes-resistentes. En un hospital
de la provincia de Tucumn (H1), se registr el aislamiento de 9 cepas de S. marcescens
durante 4 meses en un paciente hospitalizado que present infeccin en partes blandas
con cambios en el perfil de resistencia antibitica. El objetivo de nuestro estudio fue a)
determinar las relaciones clonales de los 9 aislamientos provenientes del paciente de H1 y
compararlos con aislamientos provenientes de otros hospitales del pas que fueron
caracterizados previamente; y b) evaluar la presencia de integrones de clase 1, Blactamasas y carbapenemasas asociadas a la transferencia horizontal de genes.
Materiales y mtodos: los aislamientos fueron identificados por las pruebas bioqumicas
convencionales. Las pruebas de sensibilidad fueron realizadas por el mtodo de difusin
en agar segn las recomendaciones del CLSI. Los mtodos de screening que se utilizaron
para la deteccin de BLEEs y carbapenemasas fueron acorde a los lineamientos
establecidos en las normas del CLSI y las recomendaciones del comit de expertos de la
subcomisin de Antimicrobianos (SADEBAC-AAM, 2014). Se analiz la clonalidad de los
9 aislamientos de H1 y 34 aislamientos de origen hospitalario pertenecientes a 11 centros
de nuestro pas por la tcnica de PFGE. La deteccin de genes codificantes para lactamasas, as como la caracterizacin de los integrones de clase 1 fueron realizadas por
la tcnica de PCR y posterior secuenciacin de los productos obtenidos. Resultados: El
anlisis de los perfiles obtenidos por PFGE de los 9 aislamientos revel la existencia de 3
sub-tipos clonales muy relacionados entre s, sin mostrar relacin clonal con los clones
epidmicos y no epidmicos previamente descriptos en el resto del pas. Los 9
aislamientos fueron positivos para la BLEE blaCTX-M2, ubicada corriente arriba del gen
ISCR1 en un integrn complejo. Adems, 8 aislamientos presentaron el gen blaKPC y 5
de ellos fueron positivos para el gen qnrB. Nuestros resultados evidencian una coinfeccin por mltiples sub-clones de S. marcescens, con gran plasticidad gentica, lo que
constituye una situacin infectolgica novedosa para este patgeno nosocomial.

P - 074
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Sainz, P. (1); Ledesma, E. (1); Martinez, G. (2); Colotto, C. (1) ; Bilbao, L. (1); Piersigilli, A
.(1)
Institucin: Servicio de Bacteriologa Sanatorio Privado Aconcagua (1), Servicio de Infectologa
Sanatorio Privado Jardn (2).

Reporte del primer aislamiento de K. pneumoniae resistente a colistina en un Sanatorio

Privado de la Ciudad de Crdoba.
Introduccin: La emergencia de bacilos gram negativos multirresistentes ha estimulado el
uso de los antibiticos polipeptdicos, debido a que frecuentemente son los nicos que
mantienen actividad frente a estos microorganismos.
La resistencia (R) a colisitina (COL) ha sido comunicada en diferentes regiones del mundo
en Acinetobacter spp, Klebsiella pneumoniae (Kpn) y Pseudomonas aeruginosa. En los
ltimos 5 aos los aislamientos de Kpn R-COL han sido reportados con mayor frecuencia,
asociados al consumo de polimixinas.
Objetivo: Reportar el primer aislamiento de Kpn R-COL en el Sanatorio Privado Jardn de
la Ciudad de Crdoba.
Caso clnico: Paciente de 62 aos de edad, de sexo masculino, que ingresa con
depresin del sensorio y fiebre. Se le realiza tomografa axial computada de cerebro y se
diagnostica absceso cerebral; no responde al tratamiento con ceftriaxona y metronidazol.
Se realiza biopsia y se confirma diagnstico de cncer de cerebro (astrocitoma),
posiblemente sobre infectado, con cultivo de material negativo.
Recibe luego vancomicina y piperacilina/tazobactama por cuadro febril persistente,
leucocitosis, infiltrados radiolgicos, mayor requerimiento de oxgeno. Se interpret como
sepsis clnica con cultivos negativos, luego de cinco das se suspende el tratamiento.
Se le realiza ciruga de extirpacin del tumor. Remiten material al laboratorio de
microbiologa, se recupera Kpn (identificada por mtodo manual convencional), que
resulta sensible a carbapenemes, amicacina y fosfomicina. Se observa resistencia a
fluorquinolonas. El aislamiento presenta -lactamasa de espectro extendido y resistencia
a polipptidos, esto ltimo confirmado por el Servicio de Antimicrobianos del INEI-ANLIS
Dr Carlos G. Malbran.
El paciente fue tratado con Meropenem 1 gr cada 8 hs.
Conclusin: Los datos de vigilancia de la Red WHONET-Argentina, indican que la
resistencia a polipptidos en Kpn contina siendo un evento poco frecuente (<10%).
Algunos autores observaron que el uso previo de COL es uno de los principales factores
relacionados con la adquisicin de esta resistencia. En este caso el paciente no tuvo
tratamiento previo con COL.
Segn reporte de otra institucin del pas, observaron un incremento en el consumo de
COL y como consecuencia de ese fenmeno un aumento de la incidencia de infecciones
intrahospitalarias por enterobacterias con resistencia intrnseca a polimixinas y la
aparicin de aislamientos de Kpn R-COL. En nuestro caso, en el Sanatorio no se observ
ninguna de estas situaciones previo a la aparicin de esta cepa de Kpn R-COL.
La deteccin de este tipo de resistencia poco frecuente en Kpn, result en un alerta a
nivel institucional. Por un lado remarc la importancia del uso racional de COL y los
dems antimicrobianos; y por otra parte inst a continuar controlando la adhesin del
personal a las normas bsicas de control de infecciones, para evitar la diseminacin de
esta
bacteria
en
el
mbito
hospitalario.

P - 075
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Seculini, G; Tosolino, M.; Snchez, M.; Gonzlez, L.
Institucin: HOSPITAL INFANTIL MUNICIPAL

Shigella spp.: RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS Y PREVALENCIA DE

SEROTIPOS EN UN HOSPITAL PEDITRICO DE LA CIUDAD DE CRDOBA EN EL
PERODO 2009-2013.
Introduccin: Las especies de Shigella constituyen la causa ms importante de diarrea en
los pases en desarrollo observndose una mayor incidencia en los meses clidos. El
riesgo de infeccin se asocia a las deficiencias de saneamiento ambiental y de higiene
personal. El gnero pertenece a la familia Enterobacteriaceae y est formado por: Shigella
dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii y Shigella sonnei.
Objetivos: Determinar resistencia a los antimicrobianos y prevalencia de serotipos de
Shigella spp. en el Hospital Infantil Municipal de Crdoba (HIM) desde enero de 2009 a
diciembre 2013.
Materiales y Mtodos: Las muestras de materia fecal se cultivaron en agar Levine EMB y
agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD) y fueron identificadas con pruebas bioqumicas
convencionales. La serotipificacin se realiz con antisueros provistos por Servicio
Antgenos y Antisueros del Instituto Nacional de produccin de Biolgicos, ANLIS Dr.
Carlos G. Malbrn. La susceptibilidad a los antimicrobianos se determin mediante el
mtodo de difusin con discos segn normas CLSI. Se ensayaron los siguientes
antimicrobianos segn protocolo de trabajo de la Red WHONET: ampicilina (AMP),
trimetoprima/sulfametoxazol (TMS), ciprofloxacina (CIP), cefpodoxima (POD), fosfomicina
(FOS), cido nalidxico (NAL) y nitrofurantona (NIT). Los resultados fueron ingresados y
analizados mediante el programa WHONET.
Resultados: Los casos de shigelosis en el perodo estudiado fueron 494, con picos
importantes en perodo estival. La mayora de los pacientes afectados fueron nios de 1 a
3 aos. Shigella flexneri fue la especie predominante con 370 casos (74,9%), seguida de
Shigella sonnei con 118 casos (23,9%), que fluctu con importantes incrementos,
llegando a ser la primera especie en el ao 2010. Mostraron muy baja prevalencia
Shigella boydii (1%) y Shigella dysenteriae (0,2%) La resistencia de S. flexneri fue de 92%
a AMP y 25% a TMS, contrario a S. sonnei, con resistencias de 35% a AMP y 97% a
TMS. No se observ resistencia a los otros agentes antimicrobianos ensayados.
Conclusiones: En el HIM existe una alta resistencia de Shigella flexneri a AMP y de
Shigella sonnei a TMS. El conocimiento de la resistencia a los antimicrobianos de Shigella
spp. y la prevalencia de serotipos es de gran importancia para poder instaurar un
tratamiento emprico adecuado a partir de la identificacin de la especie. El incremento en
los casos de shigelosis afecta principalmente a sectores vulnerables y es un problema de
salud pblica. Es necesario poner nfasis en campaas preventivas, estimulando las
buenas prcticas de higiene, lactancia materna y facilitando la accesibilidad al agua
potable.

P - 076
rea: Bacteriologa clnica
Autores: SUREZ, M.; CASTRO, G.; GIAMMARILI, M.; RODRGUEZ, E.; SOSA, M.; ESQUIVEL,
P.; FRAS, M.; BARBS, G.; CUDOL, A
Institucin: LABORATORIO CENTRAL DE LA PROVINCIA- DIRECCIN DE EPIDEMIOLOGA.
MINISTERIO DE SALUD DE LA PROVINCIA

DETECCIN DE Escherichia coli PRODUCTORA DE TOXINA SHIGA EN CONTACTOS

DE PACIENTES CON SNDROME URMICO HEMOLTICO
Escherichia coli productora de Toxina Shiga (STEC) se asocia a diarrea, colitis
hemorrgica y Sndrome Urmico Hemoltico (SUH). Se transmite por alimentos y agua
contaminados, contacto directo del hombre con animales y persona a persona va fecaloral. Ante un caso confirmado de SUH debe estudiarse este y sus contactos. Se define
como contacto a convivientes del caso (personas que habitan en la misma casa) y a no
convivientes (compaeros, docentes y vecinos).
Los objetivos de este trabajo son detectar la presencia de STEC por biologa molecular y
cultivo en muestras de materia fecal (MF) de contactos de casos de SUH y relacionar los
resultados con la informacin epidemiolgica consignada en la planilla de denuncia de
caso.
De enero de 2012 a diciembre de 2013 se estudiaron en el laboratorio 212 MF de
contactos asintomticos de 55 casos remitidas por la Direccin de Epidemiologa
acompaadas de la ficha clnico-epidemiolgica. Se sembraron en agar Mac Conkey
Sorbitol y de la zona de confluencia se realiz la extraccin de cidos nucleicos por
mtodos comerciales. A partir del extracto se realiz una Multiplex-PCR, siguiendo el
protocolo recomendado por el Centro Nacional de Referencia ANLIS-Malbrn (CNRANLIS), que detecta los genes: rfb (LPS O157), stx1 y stx2 (subunidad B y A de las
toxinas respectivamente). En los barridos positivos por PCR, se buscaron colonias
sospechosas y aquellas bioqumicamente compatibles con E.coli se sometieron
nuevamente a la PCR. Sobre estas colonias se realizaron otras dos PCR para los genes
eae (intimina) y hlyA (enterohemolisina). En las cepas con resultado positivo por PCR se
determin el serogrupo con antisueros poli y monovalentes provistos por el CNR-ANLIS.
El serotipo fue determinado por el CNR.
De los 212 contactos estudiados, 32 resultaron positivos pudiendo aislar E.coli en 13: 61%
O157 H7 (stx2, eae, hlyA), 8% O55 (stx2, eae, hlyA), 8% STEC H2 (stx1, eae, hlyA), 8%
O145 (stx2, eae, hlyA) y 15% O103H2 (stx1, eae, hlyA).
En relacin al vnculo, 63% de los contactos positivos por PCR eran convivientes y 37%
no convivientes. El 53% eran mayores de 15 aos y de stos, el 71% cuidaban al caso y
preparaban mamaderas. El 66% de los contactos positivos eran de Crdoba capital, 19%
del interior de la provincia, 3% de Santiago del Estero y en el 12% no se consign el dato.
El serotipo predominante fue E.coli O157 H7 pero hay otros serogrupos y serotipos en
nuestra zona, demostrando la importancia de implementar tcnicas moleculares para
detectar STEC an en personas asintomticas. Se encontr relacin entre la edad del
contacto y las tareas que desempea en relacin al caso, lo cual demuestra la
importancia de estudiar a los contactos del caso de SUH.
La extensa distribucin de STEC en diferentes barrios de Crdoba capital, representa un
gran impacto epidemiolgico-sanitario. Se deben intensificar y optimizar estrategias de
vigilancia y difundir informacin sobre buenas prcticas de higiene y manipulacin de
alimentos.

P - 077
rea: Bacteriologa clnica
Autores: PEREZ, J.F.; EBNER, G.; SUTICH, E.
Institucin: Ctedra de Bacteriologa Clnica. Facultad de Cs. Bioqumicas y Farmacuticas. UNR

INFECCIONES URINARIAS POR STREPTOCOCCUS AGALACTIAE. EXPERIENCIA DE

CINCO AOS EN UN HOSPITAL GENERAL.
Introduccin: Streptococcus agalactiae es un patgeno conocido en la poblacin
obsttrica y neonatal; pero como agente de infecciones del tracto urinario en la poblacin
adulta no gestante ha sido subestimado. Objetivo: Investigar el significado clnico de los
aislamientos de S. agalactiae de muestras de orina procedentes de pacientes adultos
segn factores de riesgo o patologas concomitantes. Materiales y mtodos: Se investig
durante cinco aos el significado clnico de los aislamientos de S. agalactiae de muestras
de orina procedentes de pacientes asistidos en un Hospital General. Se dise un
protocolo donde se incluyeron datos personales, epidemiolgicos y clnicos. Se estudiaron
130 pacientes con urocultivos positivos para S. agalactiae, 120 de pacientes femeninos
(54 embarazadas) y 10 de masculinos. Resultados: El 42% de los urocultivos fueron de
embarazadas (Grupo A) y el 58% de pacientes no obsttricos (Grupo B). En las pacientes
del Grupo A se observ reaccin inflamatoria en el 41% de las muestras; los recuentos en
los cultivos fueron: mayor a 105 UFC/ml (42%), rango 104 - 105 UFC/ml (32%), rango 103
y <104 UFC/ml (13%); rango 102 y <103UFC/ml (13%). Con respecto al Grupo B, el 87%
de los aislamientos de S. agalactiae procedieron de muestras femeninas y el 13% de
masculinas, los recuentos mayoritariamente fueron de 104-105 UFC/ml y el 75% present
piuria. El Grupo B puede dividirse en tres categoras en funcin de datos clnicos:
1.Pacientes diabticos (16%), 2. Pacientes con compromiso renal (58%), 3. Paciente con
enfermedades inmunosupresoras y origen desconocido (26%). Con respecto a los
pacientes con algn factor de riesgo asociado al tracto urinario se observ: insuficiencia
renal en tratamiento con hemodilisis (24%), litiasis (24%), trasplante renales (19%),
anomalas del tracto urinario (16%), patologas prostticas (12%), cateterismo vesical
(5%). El grupo de pacientes con enfermedades inmunosupresoras incluye personas con
patologas cardiovasculares (25%), cncer (20%), hepatopatas (20%) y factores de riesgo
desconocido (35%). Conclusiones: S. agalactiae debe ser considerado como uropatgeno
tanto en embarazadas como en pacientes adultos no gestantes particularmente si tienen
algn factor de riesgo. La deteccin de este agente etiolgico en orina (optimizando la
sensibilidad al agregar como medio de rutina AS); podra relacionarse con la presencia de
alguna anormalidad en las vas urinarias y otros factores de riesgo, hecho que debe
tenerse
en
cuenta
con
fines
diagnsticos.

P - 078
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Tacchini, M.; Bartoli, C.; Figueroa, M.; Nobile, C.
Institucin: Laboratorio de Microbiologa, Hospital Misericordia, Crdoba, Argentina.

MICROBIOLOGA DE LAS BARTOLINITIS

La Bartolinitis es la inflamacin infecciosa o no de las glndulas vestibulares mayores o
glndulas de Bartolino (GB). Es comn en mujeres sexualmente activas. Se postula que
aproximadamente un 2% desarrollar una bartolinitis a lo largo de su vida. Su etiologa,
frecuentemente polimicrobiana, incluye microorganismos aerobios y anaerobios. En
dcadas pasadas se consideraba importante el rol etiolgico de los grmenes de
transmisin sexual, gonococos y Chlamydia trachomatis. El tratamiento con analgsicos y
antibiticos es la primera eleccin, seguida de drenaje y marsupializacin quirrgica si es
necesario. Objetivo: estudiar la prevalencia de los agentes etiolgicos en infecciones de
GB en pacientes atendidas en el hospital, su distribucin por edades y su caracterizacin
como mono o polimicrobianas. Se realiz un estudio retrospectivo comprendido entre julio
de 2008 y marzo de 2014. Se analizaron 34 muestras de drenaje/puncin de GB de
mujeres entre 13 y 51 aos. A las muestras se les realiz un frotis para examen directo
mediante coloracin de Gram y se las cultiv en medios slidos agar chocolate, agar
selectivo para gonococos y agar cromognico (Biomeriux). Tambin se inocul una
alcuota de material en frascos de hemocultivos Bact-Alert aerobios y anaerobios para
aumentar la recuperacin. Los caldos que resultaron positivos se resembraron en sus
respectivas atmsferas. De las 34 muestras, 22 fueron positivas (65%) y 12 negativas
(35%). La mayor cantidad de aislamientos correspondieron a cocos grampositivos
aerobios, S. viridans (29%), S. epidermidis (18%), S. pneumoniae (7%). Entre los bacilos
gramnegativos E. coli se aisl con ms frecuencia (11%), H. influenzae (4%). No hubo
desarrollo de N. gonorrhoeae. Entre los grmenes anaerobios el prevalente fue Prevotella
sp (67%). Los aislamientos polimicrobianos correspondieron al 50% del total de cultivos
positivos, siendo esta microbiota aerobia-aerobia o aerobia-anaerobia. Es importante
resaltar la correcta toma de muestra. Muchos de los agentes etiolgicos que podran ser
considerados patgenos oportunistas forman parte de la microbiota habitual de vagina,
por lo que si la muestra no se toma correctamente, se dificulta la jerarquizacin de su rol
en la patologa. Es interesante el aumento en los aislamientos de microorganismos
asociados a infecciones del tracto respiratorio superior. Esto podra deberse a los hbitos
sexuales. La incidencia de infeccin polimicrobiana es alta (50%). En concordancia con la
bibliografa, el uso de antibiticos con cobertura para anaerobios resultara ventajoso en el
tratamiento de la bartolinitis aguda. Es importante destacar y valorar el examen directo
donde se puede observar microorganismos con morfologa compatible con anaerobios,
herramienta til, principalmente en los casos donde no se puede acceder a la siembra
anaerobia. Y es un dato importante en los casos de recurrencias y para la eleccin de una
terapia
adecuada.

P - 079
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Tosolino, ME; Seculini, A; Snchez, ML; Gonzlez, L.
Institucin: Hospital Infantil Municipal Cordoba

COLONIZACIN POR Pandoraea pnomenusa EN PACIENTE CON FIBROSIS QUSTICA

Introduccin: El gnero Pandoraea, compuesto por bacilos gramnegativos no
fermentadores de glucosa, surge como resultado de un re estudio de las especies
comprendidas en el complejo Burkholderia cepacia, Ralstonia picketii y Ralstonia paucula
y est compuesto por nueve especies, de las cuales solo cinco poseen nombre: P. apista,
P. pulmonicola, P.pnomenusa, P. sputorum, y P. norimbergensis. La mayora de los
aislamientos han sido recuperados principalmente de muestras respiratorias de pacientes
con Fibrosis Qustica.
Presentacin del caso: Paciente de sexo masculino, de 9 aos, diagnosticado con
Fibrosis Qustica en el ao 2005 por el Servicio de Neumonologa del Hospital Infantil
Municipal. Luego de varias exacerbaciones, en el ao 2010 se aisl de una muestra de
esputo junto a Staphylococcus aureus, un bacilo gram negativo no fermentador, que
desarroll en agar selectivo para Burkholderia cepacia (BCSA). Se tipific por medio de
pruebas bioqumicas convencionales y utilizando galeras API 20NE (Biomerieux) sin
arrojar resultados concluyentes, por lo que su identificacin final se realiz en el centro de
Referencia Dr. Carlos Malbran, mediante secuenciacin del gen 16S rARN y por
espectrometra de masa (MALDITOF-MS) en oportunidades distintas como Pandoraea
pnomenusa. Se ha descripto en la bibliografa que existe un limitado nmero de
antibiticos adecuados para el tratamiento de las infecciones por este patgeno, siendo
tetraciclinas, imipenem y trimetoprimasulfametoxasol las nicas opciones disponibles.
Algunos autores proponen el uso de imipenem como principal opcin teraputica por lo
que el paciente recibi tratamiento emprico con el mismo, aunque continu
recuperndose Pandoraea pnomenusa de manera intermitente en cultivos de control
posteriores al tratamiento. En el ao 2013, ante un nuevo cuadro de exacerbacin clnica,
se aisl nuevamente el mismo germen, por lo que se opt dadas las caractersticas
particulares del paciente, un cambio en la antibioticoterapia a trimetoprimasulfametoxasol
sin arrojar resultados satisfactorios, decidindose actualmente tratarlo con minociclina.
Conclusiones: Se desconoce si este microorganismo es un colonizador crnico, produce
infeccin transitoria o constituye un problema importante en pacientes con Fibrosis
Qustica, pero dada su multiresistencia a los antimicrobianos, es fundamental la correcta
identificacin de este gnero teniendo en cuenta, que con pruebas bioqumicas
convencionales
y
sistemas
automatizados
no
es
posible
realizarla.

P - 080
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Vacchino, G1. Mendez, E2. Morano, S2. Piccoli, L2. Chech, N2. Silveira, I2. Gonzalez,
M1. Galarza, P1.
Institucin: 1Laboratorio Nacional de Enfermedades de Transmision Sexual. INEI -ANLIS "Dr. C.
G. Malbran". 2Red Nacional de ITS

ESTUDIO RETROSPECTIVO PRELIMINAR DE DISTRIBUCIN DE GENOTIPOS DE C.

trachomatis EN DIFERENTES REGIONES DE NUESTRO PAS.
Chlamydia trachomatis (Ct) es uno de los ms frecuentes agentes bacterianos causantes
de infecciones de transmisin sexual en el mundo, con un estimado de 105,7 millones de
nuevos casos por ao
Ct puede clasificarse en 18 serotipos/genotipos en base a la variabilidad nucleotidica
presente en la protena mayor de membrana externa (MOMP). Estos serotipos estn
asociados a diferentes patologas. Los serotipos A al C estn asociados a tracoma, del D
al K a infecciones genitales y perinatales y los serotipos L1 al L3 a linfogranuloma
venreo. La genotipificacin de aislamientos de Ct puede ser utilizada como herramienta
de vigilancia epidemiolgica, tanto a nivel local como internacional, para evaluar la
distribucin de genotipos y patrones de transmisin en la poblacin
El objetivo de este trabajo es presentar los resultados preliminares de un estudio
retrospectivo de distribucin de genotipos de Ct circulantes en diferentes regiones de
nuestro pas entre 2008 y 2012
Se evaluaron 27 muestras positivas para Ct por amplificacin gnica (PCR) del plsmido
crptico, provenientes de 5 hospitales de la Red de ITS: Htal. Perrando (Chaco), Htal.
Gobernador Centeno (La Pampa), Htal. Municipal Trenque Lauquen (Buenos Aires), Htal
4 de junio (Chaco) y Htal. Cullen (Santa Fe). La genotipificacion de Ct se realiz por
secuenciacin del gen ompA. Se consideraron sexo y presencia/ausencia de sntomas
como variables epidemiolgicas.
La genotipificacion evidencio la presencia de los genotipos B, D, E, F e Ia, siendo el ms
frecuente el genotipo E con un 33.3% (9/27), seguido del D y F con 29.6% (8/27) y 22.2%
(6/27) respectivamente, los genotipos menos frecuentes fueron Ia con 11.1% (3/27) y B,
con un solo aislamiento, representando el 3.7%. En muestras provenientes de mujeres, el
genotipo ms frecuente fue el E alcanzando un 40.0% (6/15) y, en menor porcentaje, el D,
F e Ia con 33.3%, 20.0% y 6.6% respectivamente. En el grupo masculino se encontr una
mayor diversidad, los genotipos D, E y F representaron el 75%, aportando 25% (3/12)
cada uno, el genotipo Ia correspondi al 16.7% (2/12) y B 8.3%. En 25 de 27 muestras se
evalu la asociacin entre genotipos y presencia o ausencia de sintomatologa,
encontrando los genotipos F e Ia nicamente en el grupo con sintomatologa, siendo
presencia de secrecin y disuria los sntomas principales. Tres de 8 Ct con genotipo D y
7/8 con genotipo E, correspondieron a pacientes que presentaban sntomas. La nica Ct
genotipo B, correspondi a presencia de secrecin y disuria como sintomatologa.
Si bien los datos preliminares obtenidos en este estudio no permiten realizar un anlisis
concluyente de los resultados, es importante destacar que la distribucin de genotipos
observada en este estudio es similar a la observada por otros autores tanto a nivel
nacional como internacional. Del mismo modo la asociacin de los genotipos E, F e Ia con
presencia de sintomatologa y, la circulacin en nuestro pas, del genotipo B, causante de
tracoma

P - 081
rea: Bacteriologa clnica
Autores: VALLE ROSSI, M; TOMASINI, A; SUREZ, M; MORONI, M; CAFFER, M; MUOZ, M.
Institucin: Instituto Modelo de Crdiologa; Laboratorio Central de la Provincia de Crdoba;
Laboratorio Nacional de Referencia - Servicio de Enterobacterias, INEI-ANLIS "Dr. C.G. Malbrn"

INFECCIN URINARIA POR Salmonella Adelaide, EN PACIENTE PEDITRICO.

Salmonella es un gnero bacteriano formado por bacilos gram negativos, anaerobios
facultativos, mviles, sin cpsula ni espora. Producen sulfuro de hidrgeno y no fermentan
lactosa.
Este gnero est ampliamente distribuido en la naturaleza y se encuentra como comensal
y patgeno en el tracto gastrointestinal de mamferos domsticos y silvestres, roedores,
aves y reptiles, causando un amplio espectro de enfermedades en el hombre. Est
constituido por 2 especies:
Salmonella enterica y Salmonella bongori. Salmonella enterica est compuesta por 6
subespecies. Las subespecies de S. entrica y la especie S. bongori se conforman de
diversas serovariedades, habindose identificado ms de 2500.
Las infecciones por Salmonella spp. en su mayora corresponden a una zoonosis de
distribucin mundial causando gastroenteritis, fiebre tifoidea, entre otros cuadros.
Objetivo: describir el hallazgo de este microorganismo poco frecuente como potencial
agente patgeno de infecciones urinarias.
Caso clnico: paciente de un ao de edad, con malformacin en el rin derecho y
antecedentes de infecciones urinarias a repeticin, constipacin y ausencia de
gastroenteritis en los ltimos 3 meses. Presenta en diciembre de 2013, un cuadro clnico
compatible con pielonefritis, tratada empricamente con ceftriaxona intramuscular en otra
institucin.
Transcurrido un mes y ante la alerta de una orina maloliente, sin signos clnicos, se remite
una nueva muestra para urocultivo por chorro medio y anlisis de orina completo, con
sedimento patolgico y respuesta inflamatoria.
En el cultivo en CLDE, a las 24 horas, se obtiene desarrollo de un bacilo gram negativo
que no fermenta la lactosa, en un recuento de ms de 100000 UFC/mL. Se lo tipifica
como Salmonella spp. Se lo deriva al Laboratorio Central de la Provincia de Crdoba y
posteriormente al Laboratorio Nacional de Referencia - Servicio de Enterobacterias, INEIANLIS "Dr. C.G. Malbrn", para su confirmacin y serotipificacin, resultando Salmonella
enterica subsp enterica serovar Adelaide. Esta serovariedad se aisla con muy poca
frecuencia de especmenes clnicos. Se le realiza uretrocistografa para descartar reflujo
por lo cual se asocia las infecciones urinarias recurrentes con la constipacin, indicndose
catrticos. Luego se registr una buena evolucin.
La tasa de incidencia de infeccin por Salmonella spp. es mayor en lactantes y nios de
corta edad que en adultos. Dentro de las etiologas de infecciones urinarias, es un agente
patgeno poco frecuente, siendo escasos los reportes clnicos citados en la literatura.
Este caso es una descripcin de infeccin urinaria por Salmonella Adelaide en paciente
peditrico,
como
agente
etiolgico,
no
comnmente
asociado.

P - 082
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Vazquez S., Bongiovanni M., Abiega C., Vilar M.
Institucin: Hospital Privado,Ciudad de Crdoba

AISLAMIENTO DE Campylobacter spp EN PACIENTES CON DIARREA INFECCIOSA

ATENDIDOS EN UN HOSPITAL PRIVADO DE LA CIUDAD DE CRDOBA
Introduccin: La infeccin por Campylobacter es una de las causas ms frecuentes de
gastroenteritis. Es una zoonosis de distribucin mundial que se adquiere, principalmente,
por el consumo de alimentos y agua contaminados. C. jejuni y C. coli son las especies
termfilas ms aisladas en las enterocolitis causadas por este gnero. El aspecto de la
materia fecal es lquido, con o sin reaccin inflamatoria y puede presentar sangre y moco.
Se trata de bacterias Gram negativas, no esporuladas con forma curva o espiralada y
movilidad rpida caracterstica, otorgada por la presencia de uno o dos flagelos polares.
Objetivos: Conocer la frecuencia de aislamiento de Campylobacter spp en la poblacin
atendida en este nosocomio y la prevalencia de C. jejuni y C. coli; relacionar el grado de
reaccin inflamatoria observada en examen en fresco con respecto al aislamiento de este
agente como causante de enterocolitis; y comparar la observacin de la morfologa tpica
en el examen directo con su crecimiento en el cultivo.
Materiales y Mtodos: En el perodo del 1 de enero de 2013 al 5 de mayo de 2014, las
muestras de materia fecal con algn signo patolgico en las que se hayan observado
formas compatibles con Campylobacter al examen directo o no se haya aislado otro
enteropatgeno, fueron sembradas en agar Campylosel (BioMrieux) en atmosfera de
microaerofilia a 42 C. Los cultivos positivos fueron identificados en forma presuntiva: por
la movilidad caracterstica en el examen en fresco, coloracin de Gram, pruebas de
oxidasa y catalasa; y en forma confirmatoria: por el mtodo de espectrometra de masa
MALDI-TOF (Microflex Bruker).
Resultados: Se procesaron 750 muestras de materia fecal, en 60 (8%) se recuper
Campylobacter spp. Se observ, adems, una prevalencia de C. jejuni de 88.33% frente a
6.66 % de C. coli y 5% de otras especies de Campylobacter. En 83,33% de los
aislamientos se observ abundante reaccin inflamatoria, en 16,67% moderada y no hubo
aislamientos con reaccin inflamatoria leve. Hubo una correlacin de 46.67% entre el
examen directo y el desarrollo en cultivo.
Conclusiones: Si bien Campylobacter spp es uno los principales agentes etiolgicos de
diarrea infecciosa, su aislamiento en cultivo es dificultoso debido a sus complejos
requerimientos nutricionales y culturales. La movilidad caracterstica al microscopio es
altamente sugestiva de su presencia, aunque no siempre se manifiesta. C. jejuni es la
principal especie responsable de las enterocolitis causadas por ste gnero. Si bien su
grado de patogenicidad no est claro, generalmente est asociado a abundante reaccin
inflamatoria. Se recomienda que todas las muestras con reaccin inflamatoria sean
sembradas
en
medios
especiales
para
estas
especies.

P - 084
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Moroni M, Della Gaspera A, Panagpulo M., Caffer MI, Vias MR y grupo Servicio
Enterobacterias
Institucin: Servicio Enterobacterias INEI - ANLIS Dr C.G.Malbrn. Buenos Aires.

VIGILANCIA LABORATORIAL DE INFECCIN POR VIBRIO CHOLERAE DESDE EL

LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL
V.cholerae (Vc) es reconocido como agente causal de clera epidmico, con
manifestaciones clnicas atribudas a la presencia de la toxina de clera (CT) y el factor de
colonizacin (TCP), asociado a los serogrupos O1 y O139. Aunque hay cepas, de estos
serogrupos, que no producen toxina y no involucradas en brotes epidmicos. LosVc noO1 no-O139 sin presencia de CT y TCP, han sido aislados como agentes causales de
infecciones diarreicas agudas de menor severidad y de brotes espordicos e infecciones
extraintestinales, asociados a los factores de virulencia tales como la hemolisina (HLY),
enterotoxina termoestable (NAG- STN), factor colonizacin (TCP), citotoxina RTX, etc. El
Laboratorio Nacional de Referencia (LNR) como parte de la vigilancia de Vc, confirma los
aislamientos remitidos en el marco de la Red Nacional de Diarreas (RND).
Objetivo realizar la vigilancia de Vc en el marco de la RND a travs de la caracterizacin
fenogenotpica de los aislamientos.
Materiales y Mtodos Entre el 2003 al 2014, se recibieron en el LNR en el marco de la
RND 476 aislamientos de Vc de origen humano y ambiental de Tucumn, Salta, Chaco,
Corrientes, Santa Fe, Buenos Aires y Crdoba. Se remitieron 133 aislamientos de Vc de
casos de diarrea aguda, a veces con sangre, principalmente de nios, 4 de hemocultivos
(HIV, leucemia, herida, cirrosis y suboclusin intestinal) y de brotes en la comunidad de
Tucumn y de un hospital de Santa Fe. En el LNR se confirmaron como Vc por pruebas
bioqumicas y se caracterizaron por PCR mltiple Vc ctxA, tcpA alelo El Tor, PCR para
antgenos somticos O1/O139, para la toxina termoestable NAG-ST y el gen regulador
tcpI del TCP. La diversidad gentica se estudi con el protocolo estandarizado de V.
cholerae de la Red Pulsenet.
Resultados La mayora de los aislamientos fueron confirmados feno-genotpicamente
como Vc no-O1 no-O139 negativos para CT y TCP alelo El Tor; excepto un Vc O1 CT
TCP alelo El Tor de un caso de clera, un Vc no-O1 no-O139 CT TCP, tres Vc O1 CT
negativo, un Vc O139 y tres Vc no-O1 no-O139 STN. La electroforesis en campo pulsado
(PFGE) en una seleccin de 165 aislamientos de Vc determin 135 patrones en la Base
de Datos Nacional (BDN) demostrando gran diversidad gentica. PFGE en el brote de
Santa Fe identific dos subtipos genticos diferentes y en la sospecha de brote de
Tucumn diferentes subtipos genticos. Los aislamientos de Vc O1 y O139 CT negativos
presentaron nuevos subtipos genticos diferentes a los de clera epidmico de los 90
ingresados en la BDN, como el caso de clera de Chaco.
Conclusiones Es necesario mantener y reforzar la vigilancia de Vc como agente causal de
diarreas agudas en el marco de la RND, a travs del uso de herramientas diagnsticas
oportunas, como diagnstico diferencial del clera epidmico. El estudio de la diversidad
gentica permiti la vigilancia de subtipos genticos que pudieran emerger con potencial
patognico.

P - 085
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Wolff L1, Surez M2, Castro G2, Giammarili M2, Rodrguez E2, Frassone N1, Zambrano
E1, Gmez Y1, Vazquez Pellegrini V1, Tevez J1, Peralta S1, Barbs G2, Cudol A2, Littvik A1.
Institucin: 1Laboratorio de Microbiologa - Hospital Rawson Ministerio de Salud de la Provincia
de Crdoba. 2 Laboratorio Central Ministerio de Salud de la Provincia de Crdoba

CONTRIBUCIN DE LA TCNICA DE AMPLIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS EN

TIEMPO REAL PARA LA DETECCIN DE MICOBACTERIAS EN ESCENARIOS CON
RECURSOS ECONMICOS LIMITADOS E INCIDENCIA MEDIANA DE
TUBERCULOSIS. Informe preliminar
Introduccin: La tuberculosis (TB) es un grave problema mundial de salud pblica. Segn
OMS 8.6 millones de personas desarrollaron TB en 2012 y 1.3 millones murieron. En
pacientes inmunodeprimidos una baciloscopa (+) exige tratar TB y micobacteriosis con
las consecuentes interferencias medicamentosas y prdida de adherencia al tratamiento.
El diagnstico clsico se basa en baciloscopa (B) y cultivo (C). En los ltimos aos han
surgido mtodos moleculares complementarios para instituir o cambiar conductas
teraputicas rpidamente.
El objetivo de este trabajo es evaluar la utilidad de la prueba de PCR en tiempo real
(qPCR) implementada en el Lab. Central, como tcnica complementaria a B y C, para
detectar la presencia de M. tuberculosis (MT) y Mycobacterium spp (MNT).
Materiales y Mtodos:Perodo estudiado:1/3/2012 a 28/2/2014. Se analizaron 32 muestras
clnicas y 3 aislamientos de pacientes atendidos en el Hosp. Rawson. Muestras:12
lquidos cefalorraqudeos (LCR), 11 biopsias de ganglio (G) y 1 pleural (PL),1 absceso
abdominal, 2 lquidos pleurales (LPL), 4 biopsias seas (BO) -3 vrtebras, 1 cadera- y 1
esputo. Pacientes estudiados: 23 VIH (+) y 8 VIH (-) con otra inmunodepresin. Se realiz
B (Ziehl Neelsen) y C (Lowenstein Jensen) :tcnica patrn. La extraccin de c. nucleicos
se llev a cabo por mtodos comerciales y el extracto se someti a qPCR con reactivo
comercial Lightmix-TibMolBiol para LightCycler (Roche)que detecta MT y MNT.
Resultados: De los estudios realizados (32 muestras y 3 aislamientos), 13 (35%)
resultaron (+) por qPCR y 22 (65%) (-). De las muestras (+), 9 (69%) fueron MNT y 4
(31%) MT. De los 12 LCR, con perfil citoqumico compatible con meningitis tuberculosa,
todos fueron (-) por qPCR y C. De las otras muestras extrapulmonares, 9/19(3G, 2LPL,
4BO): solamente en 1 G, B y C fueron (-) y qPCR(+) resultado verificado por la evolucin
clnica del paciente. En las 8 muestras restantes, B, C y qPCR (-).
La qPCR permiti definir especie en 10 muestras: 8 MNT y 2 MT y en los 3 aislamientos:
2 MT y 1 MNT (todas tuvieron correlacin con C). El tiempo promedio para el C primario
fue de 20 das vs 24 horas para qPCR.
Conclusiones: El caso de B(-), C(-) y qPCR(+) fue interpretado como una muestra con
baja carga bacilar y la qPCR permiti establecer el diagnstico precisa y rpidamente por
su mayor sensibilidad. De las 10 muestras en que qPCR permiti definir especie: B(+), C() y qPCR(+) para MNT, se consideraron micobacterias muy exigentes que no desarrollan
en los medios empleados. El caso de B(-), C(+) y qPCR(+), se atribuy a baja sensibilidad
de B; qPCR permiti rpida identificacin e instauracin del tratamiento.
Es de destacar que los resultados de qPCR deben interpretarse siempre en el contexto
clnico del paciente y complementando B y C. La conveniencia de adoptar esta

metodologa debera estar

prctica

ligada al eventual cambio de conducta que origine en la

mdica.

P - 086
rea: Bacteriologa clnica
Autores: ZARATE, M.; SERRUTO, G.; PEREZ, B.; SISUELA, J.; TRISTAN, M.; PANNAROTTI, M.;
BARRIOS, R.; SEMINO, I.
Institucin: Sanatorio Guemes

EVALUACIN DEL SISTEMA PHOENIX A PARTIR DE LA INOCULACIN DIRECTA DE

HEMOCULTIVOS POSITIVOS
Las bacteriemias constituyen una causa importante de morbi-mortalidad donde la
adecuada terapia antimicrobiana emprica es fundamental para minimizar la falla
teraputica, obtener una evolucin clnica favorable del paciente, disminuir los efectos
adversos de las drogas, reducir costos hospitalarios, y por ultimo evitar la seleccin de
cepas resistentes. El informe rpido es, aun hoy, un desafo donde la automatizacin y los
avances en la bioinformatica permiten acortar los tiempos.
El objetivo de este trabajo fue establecer una comparacin entre los resultados de
identificacin y de sensibilidad que se obtienen directamente desde el frasco de
hemocultivo positivo (BACTEC) por medio del sistema automatizado Phoenix (Becton
Dickinson) obtenidos el mismo da, y los correspondientes resultados obtenidos con el
mismo sistema a partir de la colonia aislada.
Se realiz un estudio prospectivo que incluy 94 episodios de bacteriemia
monomicrobiana (94 pacientes) que incluyo 50 bacilos gram negativos (BGN), 35 cocos
gram positivos en racimo (CGPR) y 8 cocos gram positivos en cadena (CGPC) en los que
se combin el uso del sistema automatizado de hemocultivos BACTEC FX (BD) con un
protocolo de extraccin en tubo y el sistema Phoenix (BD) de identificacin y sensibilidad.
Se compararon los resultados con los correspondientes a la metodologa habitual por el
mismo sistema.
La mediana para el tiempo hasta la positivizacin de los hemocultivos para BGN, CGPR y
CGPC fue de 9.8; 12.9 y 13.9 horas, en tanto que para obtener el resultado final de la
identificacin y el antibiograma directamente de la botella de hemocultivo por Phoenix fue
de 8.0, 7.0 y 7.0 horas, respectivamente. La correlacin obtenida en la identificacin de
BGN, CGPR y CGPC fue de 100 y 78 %, respectivamente. En CGPR se observ que la
correlacin de Staphylococcus aureus fue de 96% y no se observ correlacin con los
estafilococos coagulasa negativa. Con respecto a la sensibilidad a los antibiticos, para
BGN, CGPR y CGPC la correlacin total en categora fue del 100 %, 63% y 78%. Para
BGN los errores muy mayores (EMM) fueron 0,04 %, errores mayores (EM) 0,02% y
errores menores (Em) 0,22 %. En CGPC los EM fueron de 0.28 % y en CGPR no se
observaron errores. Estos resultados obtenidos indican que el resultado del antibiograma
directo desde el frasco de hemocultivo para BGN posee una muy buena correlacin con el
que se obtiene cuando este es realizado a partir de la colonia aislada. Dichos resultados
pueden ser proporcionados en el da al mdico tratante, lo que permitira una correcta
eleccin de tratamiento antimicrobiano.
En CGPR y CGPC observamos muy buena correlacin para S aureus y Enterococcus
faecalis, aunque debera ampliarse el nmero de cepas para obtener conclusiones ms
valederas
en
estos
gneros.

P - 087
rea: Bacteriologa clnica
Autores: Jure, MAa,b* Duprilot Mc,d, Musa, HEb, Lpez, Cb, Marta C de Castilloa, Weill FXe, Arlet
Gc,d,f and Decr D c,d,f
Institucin: a Ctedra de Bacteriologia. Instituto de Microbiologa Luis C. Verna. Fac. de Bioqca,
Qca y Fcia. Universidad Nacional de Tucumn. Ayacucho 491. San Miguel de Tucumn, Argentina.
CP 4000.
b Centro de Microbiologa Mdica. Rondeau 877. San Miguel de Tucumn, Argentina. CP
4000.
c Sorbonne Universits, UPMC Univ Paris 06 CR7, Centre dImmunologie et des Maladies
Infectieuses, CIMI, team E13 (Bacteriology), F-75013, Paris, France
d INSERM U1135, Centre dImmunologie et des Maladies Infectieuses, CIMI, team E13
(Bacteriology), F-75013, Paris, France
e Institut Pasteur, Unit des Bactries Pathognes Entriques, Centre Collaborateur de
lOrganisation Mondiale de la Sant pour la Rfrence et la Recherche sur les Salmonella, 28 rue
du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15, France.
f Assistance Publique des Hpitaux de Paris, Hpitaux Universitaires Est Parisiens, Dpartement
de Bactriologie, Paris, France

EMERGENCIA DE Salmonella enterica SEROTIPO SCHWARZENGRUND

PRODUCTORA DE KPC-2 EN ARGENTINA
Las carbapenemasas de tipo KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemasa) poseen
actividad hidroltica extrema frente a los antibiticos -lactmicos. En Argentina se
observa un marcado incremento de bla KPC-2 en enterobacterias desde 2009. El gen
codificante de esta enzima est localizado en un transposon (Tn 4401) y puede ser
movilizado mediante plsmidos transferibles de diferentes tipos de incompatibilidad, lo
que explica su gran poder de diseminacin. El objetivo del siguiente trabajo fue realizar la
caracterizacin bioqumica y molecular de una cepa de Salmonella spp productora de
KPC en nuestra regin.
El aislamiento fue recuperado en Noviembre de 2013 de una muestra de catter de orina
de un paciente de 18 aos, seis meses posteriores a su hospitalizacin. El joven fue
internado con palitraumatismo, recibi terapia antibitica previa con ceftriaxona,
ceftazidima y carbapenemes.
La identificacin bioqumica se realiz mediante API 20E (bioMrieux, Marcy lEtoile,
France). La serotipificacin con el esquema de White-Kauffmann-Le Minor con antisueros
(Bio-Rad, Marnes-La-Coquette, France). Los patrones de susceptibilidad a los
antimicrobianos se determinaron por difusin con discos (CLSI) y CIM por E-test
(bioMrieux). Hogde modificado para evaluar produccin enzimatica. Investigacin de
genes blaKPC-2 blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, and blaOXA y qnrB19 por PCR y posterior
secuenciacin. Los experimentos de conjugacin se realizaron en caldo Mueller Hinton
(bioMrieux) con la cepa E.coli J53 azida de sodio resistente como receptora. En los
transconjugantes seleccionados en agar Drigalsky (azida de sodio 100 g/ml, meropenem
2 g/ml), se realiz la genotipificacin de relaxasas plasmidicas: IncN, IncF, IncFIIk,
IncL/M. El tipo clonal se determin mediante Multilocus Sequence Typing (MLST).
El aislamiento fue identificado como Salmonella enterica serotipo Schwarzengrund
(formula antigenica 4,12:d:1,7), tipo clonal ST96, resistente a -lactmicos con bajos
niveles de resistencia a carbapenemes (zonas de inhibicion de 20 mm para imipenem y

19 mm para meropenem) y a quinolonas fluoradas y susceptible a gentamicina,

amikacina, chloramphenicol, trimetoprima/ sulfametoxazol, tigeciclina y fosfomicina. Se
confirm la presencia de los genes blaKPC-2 y qnrB19 . No se detectaron genes para las
-lactamasas blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, y blaOXA. La genotipificacin de relaxasas
plasmdicas revel un plasmido IncL/M
Las cepas de Salmonella productoras de KPC son extremadamente raras. Fueron
descriptas S. enterica serotipo Cubana, S. enterica serotipo Typhimurium. Por primera vez
se reporta en este trabajo el aislamiento de Salmonella enterica serotipo Schwarzengrund
productora de KPC 2 en argentina, la emergencia de este patgeno refleja la evidencia
de diseminacion de blaKPC en enterobacterias. La vigilacia nacional y la deteccin
temprana de estos aislamientos es de fudamebntal importancia para implementar las
medidas de control de infecciones.

P - 088
rea: Colecciones de cultivos
Autores: Barral Cabali, P.; Orussa, N.; Brero, M.L.; Geoghegan, P.; Asato, V.
Institucin: Centro Nacional de Control de Calidad de Biolgicos (CNCCB)- ANLIS "Dr. Carlos G.
Malbrn"

MTODO ALTERNATIVO DE CONSERVACIN DE MICROORGANISMOS EN DISCOS

DE PAPEL DE FILTRO
Introduccin: El mtodo de conservacin de un cultivo microbiano (CM) debe garantizar la
pureza, viabilidad y estabilidad del mismo durante un perodo de tiempo dado. Entre los
mtodos de conservacin a corto plazo est el de transferencia peridica (estras) donde
el CM es almacenado en estado viable en un medio de cultivo y es necesario el pasaje a
un nuevo medio peridicamente para preservar sus propiedades. ste no es un buen
mtodo, ya que hay riesgo de contaminacin, prdida de viabilidad e inestabilidad. Otro
mtodo de conservacin a corto plazo es el de discos de papel de filtro, que se basa en
embeber discos con una suspensin microbiana, desecarlos para suprimir el agua
disponible, con el consecuente detenimiento del crecimiento microbiano. Es un
procedimiento sencillo, de bajo costo y que permite conservar grandes cantidades de
CMs. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue evaluar el mtodo de conservacin de CMs
en discos de papel de filtro por un perodo de 6 meses, mediante el estudio de la pureza,
viabilidad e identidad de los CMs, para reemplazar el mtodo de conservacin de
transferencia peridica para el trabajo diario. Materiales y Mtodos: Se seleccionaron un
total de 11 aislamientos bacterianos de diferentes microorganismos, provenientes de
cepas ATCC y de aislamientos clnicos: 2 Shigella flexneri, 2 Salmonella typhimurium, 1
Salmonella enteritidis, 1 Escherichia coli, 1 Enterobacter aerogenes, 1 Staphylococcus
aureus, 1 Pseudomona aeruginosa y Bacillus subtilis. Para la preparacin de los discos se
utiliz papel de filtro Whatman N1, los cuales fueron autoclavados a 121C, 15 minutos y
secados en incubador a 362C por 48-72 horas. Se prepar un cultivo fresco en Agar
Tripticasa Soya (TSA) y se resuspendi en 3 ml de agua destilada estril. Los discos
fueron embebidos con la suspensin microbiana, secados a 362C por 72-96 horas. Se
colocaron 3 discos por vial y se almacenaron a 5C y a -20C por 6 meses. Se estudi la
estabilidad a los 15 das, 1, 3 y 6 meses, evaluando la viabilidad, pureza e identidad. Se
evalo el crecimiento en TSA, Caldo Tripticasa Soya, en un medio selectivo y diferencial,
para cada microorganismo. Posteriormente, se realizaron las pruebas bioqumicas
correspondientes. Resultados: En todos los casos, hasta los 6 meses, no se observaron
cambios en la viabilidad, pureza e identidad. Conclusiones: El mtodo de conservacin de
CMs en discos de papel de filtro result favorable en el periodo evaluado. Por la
experiencia del ensayo, se podra reemplazar el mtodo de transferencia peridica por el
de discos de papel de filtro. Se continuar con la evaluacin del mtodo, aumentando el
nmero de cepas, y prolongando el tiempo de estudio, hasta 24 meses. Este
procedimiento puede ser utilizado en laboratorios pequeos, ya que es sencillo,
econmico, y permite conservar grandes cantidades de CMs con un menor riesgo de
contaminacin,
prdida
de
viabilidad
e
inestabilidad.

P - 089
rea: Enseanza en microbiologa
Autores: TOMAS, L.; MEDINA, M.
Institucin: Facultad de Odontologa de la UNLP, Ctedra de Microbiologa y Parasitologa

ESTUDIO DEL RENDIMIENTO EN EXMENES DE MICROBIOLOGA Y

PARASITOLOGA DE LA FACULTAD DE ODONTOLOGA DE LA UNLP
La enseanza-aprendizaje de la Microbiologa y Parasitologa para los estudiantes de la
Facultad de Odontologa de la UNLP es de vital importancia, como en cualquier otra
Ciencia de la Salud, puesto que los contenidos se abordan con una adecuacin
epistemolgica acorde a las necesidades de un profesional odontlogo, haciendo especial
nfasis en el estudio de las enfermedades infecciosas microbianas epidemiolgicamente
relevantes, que se expresan primaria o secundariamente en el aparato estomatogntico y
sus proyecciones a nivel sistmico. El objetivo fue conocer la calidad del aprendizaje de
los alumnos en cuanto a los conceptos tericos de Microbiologa y Parasitologa. Para
evaluar dicho aprendizaje se analizaron los exmenes finales de los diez turnos de
examen del ao 2013, que en total comprendieron 868 preguntas. La calificacin obtenida
en cada pregunta de cada examen se dividi segn siguientes unidades temticas:
Generalidades de Bacterias (GB); Control de los Microorganismos (CM); Identificacin de
los Microorganismos (IM); Generalidades de Diversidad Microbiana (GDM); Relacin
Husped-Parsito (RH-P); Microbiologa Oral (MO), Microbiologa de las Enfermedades
Infecciosas (MEI). Las respuestas se agruparon en tres categoras: A- Satisfactorias (0,7
a 1), B- Poco satisfactorias (0,4 a 0,6) y C- No satisfactorias (0 a 0,3). Los datos obtenidos
se analizaron por medio del software estadstico InfoStat utilizando test de Duncan con
nivel de significacin =0,05. Con las 868 respuestas se construy un Intervalo de
Confianza al 0,95 (IC=0,95), que result 24,5% 2,9% respuestas en la categora C.
Dentro de la clasificacin B, se encontr un 19% 2,6% y el 56,5% 3,3% de las
respuestas fueron Satisfactorias. Dentro de la unidad temtica Control de los
Microorganismos no se encontr homogeneidad de respuesta (P<0,01). Cuando se
consulto respecto la accin de los agentes qumicos sobre los microorganismos, mostr el
80% 20,2% de desconocimiento (P=0,05). No se encontr homogeneidad de respuesta
dentro de la unidad temtica Microbiologa Oral, dado que la pregunta referida a
microbiologa periodontal mostr 40% 17,5% de desconocimiento. En cuanto a la unidad
temtica de Generalidades de Bacterias no mostr homogeneidad de respuestas (P<0,01)
y la pregunta que presento mayor dificultad fue la referida a las reacciones de
hipersensibilidad, 55,6% 32,5% (P<0,05). Se concluye que la formacin de los alumnos
de Microbiologa y Parasitologa, si bien no han mostrado la performance que pretende la
asignatura, han logrado niveles aceptables. Por ello se debe enriquecer las instancias y
metodologa de enseanza y de materiales de consulta para incrementar el rendimiento
acadmico
de
los
alumnos.

P - 090
rea: Micologa bsica
Autores: Gianotti, A.; Ermcora, M.; Ferreyra, R.
Institucin: Departamento de Ciencia y Tecnologa, Universidad Nacional de Quilmes. IMBICECONICET

COMPLEMENTACIN DE Saccharomyces cerevisiae CON LA PROTENA

TRANSPORTADORA DE LPIDOS SCP-2 DE Yarrowia lipolytica.
Introduccin: Yarrowia lipolytica, una levadura con acentuado metabolismo lipdico, es
modelo de estudio en secrecin de protenas, biognesis de peroxisomas, dimorfismo
fngico, utilizacin de sustratos hidrofbicos y reas aplicadas. Las protenas
transportadoras de esteroles (SCP-2) son portadores lipdicos no especficos implicados
en la transferencia y metabolismo de colesterol, cidos grasos de cadena ramificada,
steres de CoA y otros lpidos, encontrndose en todos los Dominios de la vida. El gen
que codifica SCP-2 en Y. lipolytica (YLSCP-2) fue clonado en nuestro laboratorio y
expresado en Escherichia coli. YLSCP-2 es una protena soluble de 128 residuos que une
diferentes lpidos, y es inducible por cidos grasos [1]. Se localiza en los peroxisomas y es
capaz de transferir in vitro los lpidos unidos hacia membranas fosfolipdicas, por un
mecanismo mediado por colisiones [2]. Su estructura cristalina fue resuelta en nuestro
laboratorio (PDB: 4JGX) [3]. Saccharomyces cerevisiae carece de SCP-2 y presenta
dificultades para asimilar lpidos como nica fuente de carbono, ya que requiere
prolongada adaptacin para la proliferacin de peroxisomas. Disponemos as de un
sistema para estudiar la funcin de SCP-2 in vivo.
Objetivos: Evaluar el rol de YLSCP-2 en levaduras durante su crecimiento en medio
mnimo, empleando lpidos como nica fuente de carbono y energa.
Materiales y Mtodos: YLSCP-2 fue expresada en S. cerevisiae desde el vector
p416GPD. El crecimiento de las cepas de Y. lipolytica y S. cerevisiae con y sin
complementacin, se midi en medio mnimo YNB lquido suplementado con cido
palmtico, cido olico, cido desoxiclico colesterol, como nica fuente de C y energa.
La utilizacin de lpidos se evalu en el mismo medio agarizado, por determinacin del
rea de consumo de los mismos (halo claro).
Resultados: Se comprob que la expresin heterloga de la protena YLSCP-2 en S.
cerevisiae es de localizacin organelar. Se observ un leve, aunque significativo, aumento
en la capacidad de utilizacin de lpidos en la levadura complementada con YLSCP-2,
respecto de la cepa parental. Dicha capacidad de consumo de lpidos es an muy inferior
a la observada en Y. lipolytica.
Conclusiones: Si bien no se puede demostrar una relacin directa entre el rol de YLSCP-2
como transportador lipdico, y el incremento en el consumo de lpidos en la cepa
complementada, un efecto positivo debido a su expresin heterloga es evidente.
[1] Ferreyra et al. (2006) A Yeast Sterol Carrier Protein with Fatty-Acid and Fatty-Acyl-CoA
Binding Activity. Arch. Biochem. Biophys. 453(2): 197-206.
[2] Falomir et al. (2009) Fatty Acid Transfer from Yarrowia lipolytica Sterol Carrier Protein
2 to Phospholipid Membranes. Biophys. J. 97(1): 248-56.
[3] Perez De Berti et al. (2013) The X-Ray structure of Sterol Carrier Protein 2 from
Yarrowia lipolytica and the evolutionary conservation of a large, non-specific lipid-binding
cavity.
J.
Struct.
&
Func.
Genomics.
14(4):145-53.

P - 091
rea: Micologa bsica
Autores: da Silva1, MA; Peralta2, M; Ortega2, G; Cabrera, JL2; Paraje, MG1
Institucin: 1Ctedra de Microbiologa, Fac. Cs. Exactas, Fsicas y Naturales e IMBIV-CONICET;
2Dpto. Farmacia, Fac. Cs. Qumicas e IMBIV-CONICET. Universidad Nacional de Crdoba

Estudio de la estructura tridimensional y del estrs oxidativo del biofilms de Candida

albicans utilizando Microscopa Confocal de Exploracin Lser
INTRODUCCIN
La incidencia de la infecciones por Candida se ha incrementado en la ltima dcada,
asociada muchas veces a la presencia de biofilms en implantes, prtesis y catteres;
agravado por la frecuente resistencia a los agentes quimioterpicos utilizados en la
clnica. Se ha tratado de contrarrestar con dosis ms altas de antifngicos (ATFs) o con
terapia combinada, con los riesgos de efectos adversos que esto implica. Por este motivo
esta temtica requiere la investigacin y bsqueda incesante de nuevas drogas
antifngicas.
Los flavonoides son compuestos naturales con diversas propiedades biolgicas entre las
que se destaca la actividad antimicrobiana; estamos estudiando la actividad inhibitoria
sobre el biofilms de Candida albicans de un flavonoide aislado de la raz de Dalea elegans
(8PP).
OBJETIVO
Analizar el efecto de dos flavonoides sobre la estructura y el estrs oxidativo del biofilms
de Cadida albicans mediante Microscopa Confocal de Exploracin Lser (MCEL).
MATERIALES Y MTODOS
Microorganismos: cepas de C. albicans de origen bucal, una sensible (CaS) y otra
resistente (CaR) a fluconazol (cortesa del Dr. E. White, Washington University, Seattle,
EE.UU). Esta ltima expresa transportadores de eflujo de tipo CDR1, CDR2 y MDR1.
Compuestos: Flavonoides (8PP y Robinetina). Fluconazol como ATF de referencia.
MCEL: Los biofilms fueron formados sobre discos de vidrio de 12mm de dimetro en
placas de 24wells y tratados con concentraciones sub-CIM de 8PP, Robinetina y
Fluconazol (segn CLSI-documentos M27-A3). Posteriormente, fueron teidos con
Calcofluor White (0,5%v/v) y con DCFH-DA (10M) durante 15 minutos. Calcoflour White
se une a las molculas de quitina de la pared celular y la sonda DCFH-DA permite
detectar especies reactivas de oxgeno (ROS) intracelularmente. Las muestras fueron
excitadas a 355 nm para Calcoflour y a 488 nm para DCFH-DA utilizando un Fluoview
FV1000 Espectral Olympus MCEL. Se realizaron cortes seriales del plano xy a intervalos
de 0,5m sobre el eje z y las imgenes resultantes fueron procesada con el software
Olympus Fluoview FV 1000.
RESULTADOS
Se observ formacin de biofilms de CaS y CaR de 12 m y 17,5 m de tamao
respectivamente. Con Fluconazol el tamao disminuy a 2,5 m (80% de reduccin) para
CaS y a 7 m (60%) para CaR. Para 8PP la formacin fue de 4,5 m (38%) y 7,5 m
(43%) para CaS y CaR respectivamente, mientras que con Robinetina los valores de
biofilms fueron de 8 m para ambas cepas (33% CaS; 54% CaR de reduccin). La sonda
DCFHDA evidenci la presencia de ROS intracelular con los tres compuestos,
principalmente en la base del biofilms.
CONCLUSIN

El biofilms no pudo ser erradicado completamente con Fluconazol debido a la resistencia

intrnseca del mismo. Si bien los flavonoides presentaron actividad antifngica contra el
biofilms, sta fue menor al de referencia. La utilizacin de la sonda correlacion con
estudios previos de estrs oxidativo (cuantificacin con NBT) permitiendo adems
estudiar la localizacin en la estructura tridimensional. En un futuro se trabajar en
combinaciones ptimas entre compuestos sintticos y naturales en bsqueda de una
sinergia que erradique el biofilms en infecciones asociadas a los mismos.

P - 092
rea: Micologa clnica
Autores: Etcharren M. V.; Aguilar J.; Pucheta J.; Vettorazzi M.L.; y Malano V.
Institucin: Produccin Equina, Facultad de Agronoma y Veterinaria, Universidad Nacional de Ro
Cuarto

INTOXICACIN CON ZEARALENONA EN YEGUAS RECEPTORAS EN UN CENTRO

DE TRASFERENCIA DE EMBRIONES EQUINOS
La transferencia de embriones equinos de alto valor gentico es una prctica frecuente en
la actualidad. Esta prctica suele concentrase en grandes centros reproductivos y debido
al incremento en su demanda en los ltimos aos tiende a intensificarse el manejo de las
yeguas, especialmente las receptoras. Este trabajo reporta lo ocurrido en un centro de
transferencias de embriones equinos en el cual las yeguas receptoras recibieron
alimentacin en base a un silo de maz. Dicho centro se encuentra ubicado en la regin
sur de la Pcia. de Crdoba; al inicio de la temporada 2013-2014 contaba con 215 yeguas
receptoras alojadas en corrales (tipo feed-lot). La alimentacin de estas yeguas vari a lo
largo de la temporada (agosto 2013- Abril 2014), y consisti en dietas compuestas por silo
de maz, pasturas frescas picadas de avena, alfalfa, maz y heno de moha en forma
alternada. Las yeguas recibieron aproximadamente un 2.5% de su peso vivo por da en
materia seca de dichas dietas y agua ad libitum. Las dietas conteniendo silo de maz (no
mas del 1%) se administraron entre junio y octubre 2013. El tracto reproductivo de las
yeguas fue revisado ultrasonogrficamente 3 veces/semana para el seguimiento de su
ciclo estral y deteccin de ovulacin. En los casos necesarios se utiliz closprostenol
(250g IM) y gonadotrofina corinica humana (1500 UI IM) como nicos agentes para
manejar los ciclos de las yeguas. Debido a la aparicin de las siguientes manifestaciones
clnicas en los mes de septiembre-octubre: acortamiento del diestro, bajo tono uterino y
cervical, enrojecimiento de mucosa vaginal, galactorrea, aciclicidad y cuerpos luetos de
pequeo tamao, y a una repentina y dramtica cada en las tasas de preez posttransferencia; se decidi testear el silo para cultivo micolgico y determinacin de
zearalenona (Zea). Los mismos arrojaron los siguientes resultados: cultivo positivo de
Fusarium spp. y 18 ppm de Zea siendo los valores >3ppm considerados de riesgo.
Inmediatamente se suspendi el silo en la dieta de las yeguas, sin embargo a pesar de
que los signos clnicos remitieron entre 1 y 2 semanas las tasas continuaron siendo bajas
y algunas yeguas recibieron progesterona (P4) larga accin (1400 mg/semana IM) para
ayudar a mantener la gestacin. Posteriormente, en enero 2014 se reemplazaron las
yeguas que haban comido silo por yeguas nuevas NO expuestas al silo de maz. Las
tasas de preez para las 4 categoras de yeguas receptoras fueron: en yeguas antes de la
aparicin de los signos clnicos (75% 60/80), con silo de maz (9,6% 3/31), con silo y P4
(55,7% 39/70) y en yeguas nuevas sin silo (87,8 % 72/82). La tasa de preez en las
yeguas con silo fue significativamente menor a la de los otros grupos (P<0.0001).
Conclusin, la zearalenona en la alimentacin de yeguas receptoras parece crear un
ambiente uterino hostil para el desarrollo embrionario temprano, con efecto residual de
varias semanas que puede ser revertido parcialmente con el uso de P4.

P - 094
rea: Micologa clnica
Autores: Belardinelli P, Barembaum SR, Scatena MG, Liandro MF, Castillo G del V, Azcurra AI
Institucin: Deptode Biologa Bucal y de Patologa Bucal, Facultad de Odontologa, Universidad
Nacional de Crdoba

ESPECIES CANDIDA Y FORMACION DE BIOFILM EN CEPAS AISLADAS DE

PACIENTES CON LESIONES BUCALES
El gnero Candida es un comensal de la cavidad bucal, pero debido a su perfil oportunista
puede afectar la mucosa bucal. Candida no slo est presente en la candidiasis, sino
tambin en lesiones potencialmente malignas, como lquenes atpicos (LIQ) y en el cncer
bucal (CB). La especie de mayor prevalencia es C.albicans, un comensal pleiomrfico,
aunque se ha observado un incremento de otras especies, incluso en nuestro pas.
Durante la infeccin estn involucrados cambios bioqumicos y eventos relacionados con
la morfognesis, expresin de molculas y produccin de factores de virulencia. Entre
stos, la formacin de biofilm le permite a los microorganismos eludir los diferentes
mecanismos de defensa del husped, disminuir la accesibilidad de la saliva y de frmacos
y facilitar el desarrollo de mecanismos de resistencia a antimicrobianos.
El objetivo fue determinar la prevalencia de especies Candida aisladas de pacientes con
lesiones bucales; adems, evaluar la capacidad para formar biofilm (FB) de la cepas
C.albicans aisladas.
Se trabaj con cepas aisladas de lesiones bucales de 61 pacientes de ambos sexos (23 a
85 aos; 44% varones; CB n=25, candidiasis crnica (CC) n=25 y LIQ n=11 y una cepa de
referencia (C.albicans NCPF 3153) que se identificaron mediante medio cromognico
identificadas como C.albicans (n=16) utilizando la tcnica de reduccin de XTT. Los datos
En todas las lesiones bucales, la especie prevalente fue C.albicans (55% en LIQ, 44% en
CC y 64% en CB), seguida de C.tropicalis (18% en LIQ, 28% en CC y 8% CB). Adems,
se aislaron otras especies (C.krusei, C.glabrata y C.dubliniensis) como as tambin, una
muestra con ms de una especie. Al clasificar los aislados como C.albicans o no albicans,
no se observaron asociaciones con el tipo de lesin (p=0,23). En las especies albicans,
por ser la de mayor prevalencia, se evalu la capacidad de FB. Se observaron menores
valores de FB en aislados de LIQ que en los de CC y CB (p=0,04 y p=0,05,
respectivamente). La especie de referencia mostr valores significativamente menores
que los aislados de CC y CB (p=0,02 y p=0,04, respectivamente).
Conclusiones:
-La presencia de especies Candida asociadas a CB y lesiones potencialmente malignas
destaca la necesidad de su deteccin e identificacin en dichas lesiones, considerando la
capacidad de FB, un importante factor de virulencia.
-La mayor capacidad de FB observada en aislados de CC puede asociarse a la alta tasa
de recidiva y al fracaso de los tratamientos de esta lesin bucal.
-Este modelo de FB representa una herramienta para profundizar los estudios de la
virulencia del hongo y sus mecanismos de resistencia a los tratamientos antifngicos.

P - 095
rea: Micologa clnica
Autores: BENEGAS, L.; ALFARO, C.; BRAGADO L.; NUEZ P.;LATAPIE C.;ALVAREZ C.
Institucin: HOSPITAL CENTRO DE SALUD ZENN SANTILLAN

A PROPOSITO DE UN CASO DE COCCIDIOMICOSIS PULMONAR PROGRESIVA.

La coccidioidomicosis es una micosis sistmica producida por hongos dimrficos
pertenecientes al gnero Coccidioides. Este patgeno primario puede producir
enfermedad pulmonar progresiva mediante una reactivacin y progresin por el
debilitamiento del paciente, desnutricin, edad avanzada y enfermedad pulmonar crnica.
Esta enfermedad progresiva puede tomar varias formas, puede presentarse como una
lesin simple que se extiende en forma local, como una neumona progresiva y
persistente, enfermedad miliar, agrandamiento y multiplicacin de cavidades y ndulos,
infiltrados que se extienden y ndulos que forman abscesos. Generalmente esta
activacin y progresin se acompaa de aumento de los sntomas y enfermedad torcica
grave. El objeto del presente trabajo fue presentar el caso clnico de un paciente con
antecedente de Coccidioidomicosis pulmonar tratada y resuelta con ms de diez aos de
antigedad que no realiz controles post-tratamiento, y sin presentar sintomatologa
pulmonar evidente fue diagnosticado nuevamente de la enfermedad activa, en el
Laboratorio de Micologa de Hospital Centro de Salud de la Ciudad de San Miguel de
Tucumn en el ao 2014. Materiales y mtodos: Paciente de sexo masculino de 36 aos
de edad, residente de la citada ciudad, con antecedente de TBC pulmonar (ao1999)
tratada y resuelta y de Coccidioidomicosis pulmonar (ao2000) tratada por lobectoma
pulmonar y antifngicos hasta negativizacin de las pruebas serolgicas de
Inmunodifusin (ID) para anticuerpos circulantes anti-coccidioidina. El mismo acude al
Hospital sin referir sintomatologa de enfermedad pulmonar por estudios preocupacionales
trece aos despus de la primoinfeccin fngica. En la radiografa de trax de frente se
observ imagen sugestiva de caverna por lo que se solicit baciloscopa y anlisis
micolgico de esputo y serologa para hongos. La muestra se observ en fresco, se
realizaron coloraciones y se sembr en medios Saboureaud con antibiticos y Lactrimel
que se incubaron a temperaturas de 28C y 37C durante 20 das. Con el suero se realiz
Inmunodifusin Radial en medio de Agarosa para diferentes antgenos fngicos.
Resultados: El Laboratorio inform: Baciloscopa negativa; Exmen Directo de esputo: Se
observ quistes con endosporos de Coccidioides spp.; Cultivo: Se obtuvo desarrollo de
colonias blancas de micelio algodonoso a los 15 das de incubacin que al exmen
microscpico con azul de lactofenol revelaron la presencia de abundantes
clamidoartroconidias morfolgicamente compatibles con Coccidioides spp. La
inmunodifusin a las 72hs de incubacin demostr reaccin de total identidad frente al
antgeno de coccidioides spp. Conclusin: Teniendo en cuenta que se han descripto las
formas progresivas crnicas y diseminadas de la CM es importante la implementacin de
controles
peridicos
post-tratamiento
en
este
tipo
de
pacientes.

P - 096
rea: Micologa clnica
Autores: Luqui O, Monzn Leyes A, Cattana ME, Sosa MA, Rojas F, Fernndez M, Giusiano G
Institucin: Ctedra de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa. Instituto de Medicina Regional.
Universidad Nacional del Nordeste.

Onicomicosis por dermatofitos en la ciudad de Resistencia, Argentina.

Introduccin: Las onicomicosis son patologas de las uas que afectan al 2 13% de la
poblacin mundial y representan aproximadamente el 50% de las onicopatias. Pueden ser
causadas por dermatofitos (D), hongos filamentosos no dermatofitos (HFND) o levaduras
(L).
Objetivos: Analizar la prevalencia de onicomicosis producidas por dermatofitos en uas de
mano (UM) y uas de pie (UP), las formas clnicas con que se presentan y los agentes
causales.
Materiales y Mtodos: Las muestras fueron procesadas en un sanatorio privado de la
ciudad de Resistencia y derivadas al Instituto de Medicina Regional (UNNE) para la
identificacin definitiva de los aislamientos y posterior anlisis de datos. Se confeccion
una ficha epidemiolgica para cada paciente. Se evaluaron todas las muestras de
lesiones en UP y UM en un periodo de 5 aos (enero 2007 diciembre 2011). Los
exmenes microscpicos directos se realizaron con KOH al 40%. Los cultivos se
realizaron en agar lactrimel y agar papa con y sin cicloheximida. Los aislamientos se
identificaron segn sus caractersticas morfolgicas y fisiolgicas.
Resultados: Se procesaron un total de 2190 muestras obtenidas de 2090 pacientes, de
las cuales 1533 fueron de UP y 576 de UM. La mediana de edad fue de 46 aos (rango
de 17 89).
En UP se obtuvieron exmenes directo positivo en el 91,71% de las muestras de las
cuales en el 87,67% se observaron hifas hialinas tabicadas. El 76,88% de cultivos
resultaron positivos, de los cuales desarrollaron D en el 66,4%. En 718 muestras
desarrollaron D como agente nico (T. rubrum 78,5%, T. mentagrophytes 19,9%, T.
tonsurans 0,27%, Trichophyton sp. 0,27%, M. gypseum 0,42%, E. floccosum 0,42%). Se
obtuvo una asociacin de T. rubrum + T. mentagrophytes. L a forma clnica ms frecuente
fue la distal subungueal con un 71,8% del total.
En UM se obtuvo examen directo positivo en un 76,73% de las muestras de las cuales en
el 6,25% se observaron hifas hialinas tabicadas. El 74,13% de cultivos resultaron positivos
y en el 6,42% (37/427) desarrollaron D como agentes nicos (T. rubrum 94,6%, T.
mentagrophytes 5,4%). L a forma clnica ms frecuentes fue la distal subungueal con un
21,62% del total.
Conclusiones: Las onicomicosis por dermatofitos tienen una mayor incidencia en las UP
que en las UM, siendo la onicomicosis distal subungueal la forma clnica ms frecuente. T.
rubrum es el mas prevalente tanto en UP como en UM. Este estudio es una contribucin
al conocimiento de la epidemiologia de los dermatofitos como agente de onicomicosis.

P - 097
rea: Micologa clnica
Autores: Orecchini, L., Paredes, M., Montanaro P.
Institucin: Hospital de Nios de la Santisima Trinidad de Crdoba

Peritonitis por Aspergillus seccin Nigri asociada a dilisis peritoneal continua:

presentacin de un caso.
La peritonitis infecciosa (PI) es la inflamacin de la membrana peritoneal causada por una
infeccin de la cavidad peritoneal y es la complicacin ms frecuente en los pacientes
sometidos a dilisis peritoneal continua (DP). La PI por Aspergillus spp es una
complicacin infrecuente en pacientes con DP, y se asocia a una alta mortalidad. Los
factores de riesgo son tratamiento antibitico previo, episodios de peritonitis reiterados,
inmunosupresin, edad avanzada, malnutricin y un tiempo prolongado de permaneca en
programa de dilisis peritoneal.
Presentamos el caso de una paciente peditrica con Sndrome nefrtico congnito tipo
Finnish con una nefrectoma bilateral en dilisis peritoneal continua. Adems tiene
antecedentes de mltiples internaciones por infecciones y otras complicaciones.
Ingresa con shock sptico a punto de partida del catter de dilisis (CD). Se toma
hemocultivo y lquido peritoneal (LP) con un recuento de leucocitos de 1170/mm3 a
predominio de neutrfilos. Se inicia tratamiento con ceftazidima y vancomicina, luego de
48 horas se agrega fluconazol. Diez das despus se observa obstruccin en el CD, el
que se enva a cultivo junto con una muestra de LP (recuento de leucocitos: 1400/mm3 a
predominio de neutrfilos).
El sistema automatizado BACT/ALERT detecta positivos ambos LP, pero no se visualizan
microorganismos (MO) y no se obtiene desarrollo. Las botellas se dejan a temperatura
ambiente, a los cinco das se observa un material algodonoso en la superficie del lquido
al que se le realiza examen en fresco, el cual revela hifas tabicadas hialinas. En ambos
LP y en el CD desarrolla un hongo filamentoso identificado por macro colonia y cultivo en
lmina como Aspergillus seccin Nigri.
Se cambia el tratamiento a anfotericina B liposomal y se continua por 30 das. Luego de
48 horas de finalizado el tratamiento se toma muestra de LP (recuento de leucocitos:
4/mm3). Sin embargo su cuadro se complica con hipertensin, convulsiones, dao
cerebral y se produce un paro cardiorrespiratorio irreversible.
La infeccin por Aspergillus spp representa un reto diagnstico y teraputico, ya que este
hongo se encuentra en la naturaleza y puede estar como contaminante en las muestras o
como agente infeccioso o colonizante en el paciente. La infeccin probada esta definida
por histologa que evidencie hifas, asociadas a dao tisular, cultivo positivo de muestras
obtenidas de sitio estril, en un contexto clnico de proceso infeccioso compatible.
Concluimos que la PI por Aspergillus es una complicacin infrecuente en pacientes con
dilisis peritoneal continua, y se asocia a una alta mortalidad.
El diagnstico precoz del agente etiolgico permite instaurar el tratamiento adecuado y la
rpida remocin del catter.
Es importante ante la deteccin de una muestra positiva por BACT/ALERT y la no
recuperacin de grmenes en el subcultivo insistir con la bsqueda de aquellos MO no tan
frecuentes
y
que
necesitan
condiciones
especiales
de
cultivo.

P - 098
rea: Micologa clnica
Autores: Piccoli, l.; Sosa, Lorena E; Tracogna, Fernanda; Fiad, Mara E. ; Vignolles, Melani
Institucin: Laboratorio de Microbiologa del Hospital Dr. Julio. C. Perrando, Resistencia Chaco. Residencia de Bioqumica Clnica de la Provincia del Chaco Centro Dermatolgico Dr.
Manuel M. Gimnez"

A propsito de un caso: Ulcera genital, hallazgo inusual de Paracoccidioidomicosis

cutnea.
Introduccin:
El agente etiolgico ms habitual de las ulceras genitales es el Treponema pallidum.
La Paracoccidioidomicosis es una micosis sistmica endmica, en reas tropicales y sub
tropicales hmedas de Amrica Latina. Las formas crnicas de paracoccidioidomicosis
son ms frecuentes en el sexo masculino, el 90% de los casos son varones, mayores de
35 aos de edad, trabajadores rurales, con antecedentes de tabaquismo, etilenolismo y
desnutricin. El rgano afectado con mayor frecuencia en el adulto es el pulmn, seguido
de las lesiones mucosas, de las cuales, las ms frecuentemente afectadas son la
orofaringea y nasal; mientras que las lesiones cutneas pueden presentarse en cualquier
parte del tegumento.
Caso Clnico
Hombre de 74 aos de edad, oriundo de Humait, Paraguay, agricultor, que consulta por
lesin granulomatosa, dolorosa y eritematosa en pene, de 3 meses de evolucin, con
diagnstico presuntivo de sfilis. Se solicit estudio microbiolgico de la lesin.
Como antecedente de importancia el paciente relat, prdida de piezas dentarias y
neumona en su adolescencia, que resolvieron con tratamiento ambulatorio que no
recuerda.
La muestra se obtuvo por raspado de la lesin y se realizaron los siguientes exmenes:
examen directo en fresco y con la tcnica de campo oscuro, coloracin de Giemsa
prolongado, cultivo para grmenes comunes y hongos en medio de Sabouraud y agar
Dermasel con Cicloheximida, incubado a 28 y 35 en atmosfera comn, Inmuno
Fluorescencia Directa (IFD) para Virus Herpes simple I y II (VHS). Se realiz serologa
para micosis y para sfilis mediante la prueba de aglutinacin de partculas para
treponema pallidum (TTPA).
Se establece el diagnstico de paracoccidioidomicosis por observacin de levaduras
multibrotadas en el examen directo. Serologa positiva (titulo 1/8) por inmunodifusin con
paracoccidioidina.
A los 15 das se obtuvo desarrollo de colonias filamentosas en agar Dermasel a 28 y se
identific por micromorfologa de la colonia como Paraccocidiodes spp.
El examen en fresco (campo oscuro), IFD para VHS, cultivo para grmenes comunes
resultaron negativos. La serologa para Sfilis fue no reactiva.
Se inici Itraconazol 200 mg por da durante 6 meses, observndose buena evolucin a
los cuarenta das. No se evidenci lesin clnica, habiendo cumplido el tratamiento
instaurado.
Discusin:
En las lesiones genitales los agentes etiolgicos mas comnmente hallados son el
Treponema pallidum y el VHS.
Este trabajo demuestra la importancia de incorporar a la paracoccidioidomicosis, como
diagnstico diferencial de agentes etiolgicos, en ulceras genitales, en pacientes

provenientes de zonas endmicas, debido a que el diagnstico precoz y el tratamiento

adecuado
son
esenciales
para
lograr
curacin
de
estos
pacientes.

P - 099
rea: Micologa clnica
Autores: Theill, L.; Manas, V.; Morano, S.; Nagel, A.; Nardn, M.; Mndez, E.
Institucin: Hospital Dr. Jos Mara Cullen. Av. Freyre 2150. Santa Fe- Santa Fe

INFECCIONES VAGINALES CAUSADAS POR LEVADURAS DE IMPORTANCIA

CLNICA: PREVALENCIA, IDENTIFICACIN DE ESPECIES Y VIGILANCIA DE LA
SENSIBILIDAD ANTIFNGICA.
La infeccin vulvovaginal por levaduras es una causa frecuente de consulta en centros de
salud. El xito teraputico no slo depende de la susceptibilidad del husped sino de la
identificacin a nivel de especie y del manejo adecuado de los antimicrobianos.
Nuestros objetivos fueron determinar la prevalencia de levaduras en exudados vaginales,
as como identificar las especies y vigilar el perfil de sensibilidad de los aislamientos
respecto a dos antifngicos de uso frecuente.
Se estudiaron 636 muestras de exudados genitales de pacientes adultos que concurrieron
a un hospital pblico, en el perodo del 1 de junio al 31 de diciembre de 2013. Las
muestras se sembraron en agar Sabouraud glucosado (ASG). La identificacin presuntiva
se realiz mediante: test de tubo germinativo y crecimiento en CHROMagar Candida.
Para diferenciar el complejo C.albicans/dubliniensis (Ca/d), se estudiaron las colonias
verdes, a las que se les realiz las siguientes pruebas de identificacin: crecimiento en
ClNa 6,5%, prueba de la esterasa, crecimiento en ASG a 42 (termotolerancia) y al resto
de las colonias, fermentacin de hidratos de carbono. Se utiliz API ID 32C como otro
mtodo de identificacin para los aislados de C. dubliniensis. Los ensayos de sensibilidad
antimicrobiana se realizaron por el mtodo de difusin con tabletas Neo-Sensitabs Rosco;
para fluconazol (FCZ) segn normas M44-A2 del CLSI y para nistatina (NIS), sugerencias
del fabricante. Se usaron para C.albicans cepas ATCC 90028 y para C. dubliniensis cepas
NCPF3949 como control de identificacin, y para las pruebas de sensibilidad Candida
krusei ATCC 26258, y para Candida parapsilosis ATCC 22019.
De 636 muestras de exudados vaginales procesados, se aislaron 167 levaduras, lo cual
arroja una prevalencia del 26,25%. El complejo Ca/d fue el ms frecuente, representando
el 83,2% de los aislamientos (137 C. albicans, 2 C.dubliniensis), seguido por C. glabrata
10,2%, Saccharomyces cerevisiae 3%, C. tropicalis 1,8%, C. guillermondii 1,2% y C.
krusei 0,6 %. El complejo C a/d result sensible a NIS, dos aislamientos fueron sensible
dosis dependiente para FCZ y uno resistente. Las levaduras no C. albicans fueron
sensibles tanto a FCZ como a NIS.
La prevalencia de las levaduras halladas en nuestro estudio result similar a lo reportado
previamente en el pas. C.albicans fue la especie predominante en pacientes con
vulvovaginitis. El uso de FCZ Y NIS sigue siendo til para tratar las infecciones vaginales
debido
a
la
baja
resistencia
encontrada
en
nuestros
pacientes.

P - 100
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: MARZOCCA, M; BALDINI M.; GENTILI A.
Institucin: DTO. DE BIOLOGA BIOQUMICA Y FARMACIA. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL
SUR

EVALUACIN DE LA CALIDAD BACTERIOLGICA DE ENSALADAS DE ZANAHORIA

RALLADA
Las frutas y verduras son parte importante de una dieta saludable por lo cual la venta de
ensaladas listas para su consumo ha crecido exponencialmente en los ltimos aos. En
consecuencia, la mayora de las verduleras comenzaron a venderlas envasadas, sin
ningn tipo de rotulacin, dejando a criterio del consumidor si stas deben ser lavadas o
no previo al consumo. Los alimentos de origen vegetal pueden vehiculizar
microorganismos patgenos y causar enfermedades. La contaminacin de las verduras y
hortalizas crudas puede provenir del agua de riego, de la tierra, de materia fecal de
animales y humanos y de las prcticas aplicadas durante su recoleccin, transporte,
distribucin y manipulacin. La mayora de las veces, las ensaladas crudas son
consumidas sin ningn tratamiento de lavado y/o desinfeccin adecuado adicional que
elimine a las potenciales bacterias patgenas. El CAA en su art. 925 quater, regula la
aptitud de las mismas mediante el cumplimiento de ciertos criterios microbiolgicos. El
objetivo del trabajo fue estudiar la calidad microbiolgica de ensaladas de zanahoria
rallada, listas para el consumo, que se expenden en Baha Blanca, y evaluar la eficacia,
en la reduccin de los recuentos bacterianos, del lavado con agua potable. Entre Febrero
y Mayo de 2014 se analizaron 25 muestras adquiridas en distintas verduleras de la
ciudad. Cada establecimiento se muestre en dos oportunidades. Se realizaron recuentos
de Escherichia coli (NMP < 0.3.g-1) y la bsqueda de Salmonella spp en 25g. Los
estudios se hicieron en la muestra sin tratar y luego de lavarla tres minutos con agua
potable (0,3 mg.L-1cloro libre). La investigacin de E. coli se realiz por la tcnica de NMP
en caldo Lauril Sulfato para recuperar las clulas estresadas y luego en caldo Verde
Brillante. Los tubos positivos se repicaron en agar ENDO y las colonias tpicas se
identificaron bioqumicamente. Para Salmonella spp se efectu la siembra en agua
peptonada tamponada y luego un enriquecimiento selectivo en caldo tetrationato.
Posteriormente una alcuota del mismo se someti al mtodo rapidCheck (Romer). Los
casos positivos se confirmaron en agar sulfito-bismuto y las colonias tpicas se
identificaron bioqumicamente. Los resultados mostraron que el 68% de las muestras
cumplen con la exigencia del CAA para E. coli, porcentaje que se eleva a 84% si se las
lava previamente. Salmonella spp. se detect en una sola muestra (4%). Se puso en
evidencia la eficacia del lavado con agua potable. Se sugiere que someter a las ensaladas
listas para el consumo a un lavado, es una prctica eficaz y sencilla para lograr alimentos
ms seguros. Asimismo se plantea la necesidad del rotulado apropiado que ayude al
consumidor al momento de adquirir este tipo de productos. Para producir alimentos de
bajo riesgo es esencial poseer informacin veraz y reproducible que permita desarrollar
programas destinados a eliminar peligros microbianos asociados al consumo de vegetales
mnimamente
procesados.

P - 101
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: TARIFA, M.C.(1); LOZANO, J.E.(1); BRUGNONI, L.I.(1,2)
Institucin: (1) Planta Piloto de Ingeniera Qumica (UNS-CONICET), (2) Lab. de Microbiologa
Industrial y de los Alimentos, Departamento de Biologa, Bioqumica y Farmacia, UNS.

FORMACIN DE BIOFILMS MIXTOS DE CANDIDA TROPICALIS AISLADA DE

MEMBRANAS DE ULTRAFILTRACIN CON ESCHERICHIA COLI O157:H7 Y
SALMONELLA SP.
La formacin de biofilms es una estrategia adaptativa que permite a los microorganismos
incrementar sus posibilidades de supervivencia frente a agentes antimicrobianos y fuerzas
de arrastre presentes en los equipos de produccin de alimentos. En muchos casos los
biofilms iniciados por microorganismos con alta capacidad de colonizacin favorecen la
inclusin de patgenos aunque stos se encuentren en bajo nmero en el alimento; su
xito se debe en parte a la interaccin con microorganismos pre-existentes en las
superficies. Dentro de las plantas productoras de jugo clarificado de frutas, el paso por
membranas de ultrafiltracin (UF) representa un hot-spot para la formacin de biofilms
resultando en altos costos operativos. Debido al bajo pH y alto contenido de azcares de
la fruta, las levaduras son las principales colonizadoras de los accesorios de produccin,
representando un nicho potencial para microorganismos patgenos.
El objetivo del presente trabajo fue estudiar la formacin de biofilms mixtos de Candida
tropicalis, previamente aislada de membranas de UF de una empresa productora de jugo
clarificado de manzana y pera, y dos bacterias patgenas implicadas en brotes de origen
alimentario: Escherichia coli O157:H7 y Salmonella sp. La adhesin sobre acero
inoxidable AISI 304 se realiz colocando volmenes iguales para cada par
levadura/bacteria sobre las superficies durante 2, 8, 16 y 24 hs a 251C. Las
suspensiones celulares y los ensayos de adhesin se realizaron en jugo de manzana pH
4,30,2. Al cabo de cada tiempo, se realiz el recuento de microorganismos por tcnica
de recuento en placa y la evaluacin por SEM de la morfologa de los biofilms mono y
multiespecie.
Ambas bacterias ensayadas en biofilms monoespecie demostraron afinidad por la
superficie a lo largo de las 24 hs de ensayo, con recuentos que van desde 5,31 hasta 6,45
Log UFC/cm2 y 5,67 hasta 6,68 Log UFC/cm2 para E. coli O157:H7 y Salmonella sp.,
respectivamente. Los biofilms duales resultaron en un aumento significativo (p<0.05) de
las poblaciones bacterianas comparado con los biofilms monoespecie. La visualizacin
por SEM mostr una estrecha relacin entre las clulas bacterianas y las hifas de C.
tropicalis, as como la presencia de estructuras tipo fimbrias actuando como apndices de
anclaje bacteria/superficie, bacteria/bacteria y bacteria/levadura.
Tanto en biofilms monoespecie como duales, C. tropicalis demostr una gran capacidad
de formar biofilms sobre acero inoxidable, culminando en una extensa red de hifas a las
24 hs. A la fecha, este es el primer reporte de formacin de biofilms mixtos sobre acero
inoxidable por levaduras aisladas de la industria alimentaria con E. coli O157:H7 y
Salmonella sp. Los resultados de este estudio deberan alertar sobre la presencia de
comunidades complejas que podran afectar la eficacia de los procedimientos de
sanitizacin.

P - 102
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: ALVAREZ, O.; HERMAN, C.; CASTRO, M., CAYR, M.; GARRO, O.
Institucin: Universidad Nacional del Chaco Austral (UNCAus) Comandante Fernndez 755 (3700) P.R. Senz Pea, Chaco (Argentina).

EVALUACIN DE LA CAPACIDAD BIOPROTECTORA DE Lactobacillus sakei EN

PRODUCTOS CRNICOS COCIDOS
Las tcnicas de biopreservacin para carnes y productos crnicos estn orientadas
principalmente hacia el biocontrol usando especies de Lactobacillus productoras de
bacteriocinas como cultivos protectores. Una ventaja en el uso de estos cultivos es que
otorga al alimento una imagen de producto ms natural y libre de aditivos para la
preservacin. Lactobacillus sakei 268 fue aislado de un producto crnico cocido elaborado
artesanalmente en la provincia del Chaco. Esta cepa es productora de bacteriocina y
mostr un adecuado perfil de crecimiento y acidificacin sobre condiciones semejantes a
las que prevalecen en estos productos, evidenciando su potencial como biopreservador.
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la capacidad de Lb. sakei 268 para controlar el
desarrollo de Listeria innocua durante el almacenamiento refrigerado de un producto
crnico cocido envasado al vaco. Se trabaj con salchichas tipo Viena elaboradas
artesanalmente por una industria local, las cuales fueron esterilizadas en autoclave a
121C durante 15 minutos, procesadas aspticamente y divididas en porciones de 25 g.
Se utilizaron volmenes adecuados de suspensiones celulares de Lb. sakei 268 (bac+),
Lb. sakei ATCC 15521 (bac -) y L. innocua 7 para inocular las porciones y alcanzar
recuentos de 106 ufc.g-1 para los cultivos lcticos y 102-103 ufc.g-1 para L. innocua. Las
muestras inoculadas fueron envasadas al vaco y almacenadas a 7C durante 4 semanas.
Los tratamientos realizados fueron: i) muestras no inoculadas como control; ii) Lb. sakei
268 (bac+)+ L. innocua; iii) Lb. sakei (bac-) + L. innocua como control negativo y iv) L.
innocua como control positivo. Se tomaron muestras a intervalos de 7 das sobre las que
se determin: recuento de BL sobre agar MRS incubado a 30C por 48 hs, recuento de L.
innocua sobre Palcam Agar + suplemento selectivo incubado a 30C por 48 horas y pH.
Los resultados se expresaron como log (ufc.g-1). En las muestras inoculadas slo con L.
innocua, este microorganismos pudo crecer alcanzando recuentos de 6,870,04 log ufc.g1 al final del perodo de almacenamiento mostrando su capacidad para desarrollarse
sobre esta matriz alimenticia. En presencia de L. sakei (bac -), L. innocua tambin mostr
un incremento en los recuentos a lo largo del tiempo, aunque los obtenidos al final del
almacenamiento (4,200,12) fueron significativamente menores (p0,05) que los de las
muestras control. Sin embargo, cuando el crecimiento de L. innocua se monitore en
presencia de L. sakei (bac+) se detect una disminucin significativa de los recuentos de
1,5 ciclos logartmicos durante el almacenamiento, evidenciando la capacidad de L. sakei
268 para controlar eficazmente el crecimiento de L. innocua bajo las condiciones
ensayadas. Estos resultados sugieren que el uso de L. sakei 268 como cultivo protector
podra proveer una barrera adicional para mejorar la seguridad de estos productos

P - 103
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: RIVAS, F.(1.4); CASTRO, M.(1.4); IBARGUREN, C.(2.4); AUDISIO, M.(2.4); CAMPOS,
C.(3.4).
Institucin: 1.Universidad Nacional del Chaco Austral; 2.Universidad Nacional de Salta;
3.Universidad de Buenos Aires; 4.Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas

ACTIVIDAD LISTERICIDA DE LA BACTERIOCINA SAKACINA Q PRODUCIDA POR

Lactobacillus curvatus ACU-1
Listeria monocytogenes es una bacteria patgena causante de listeriosis, una seria
infeccin ocasionada por el consumo de alimentos contaminados con esta bacteria. Este
microorganismo es difcil de controlar, ya que puede crecer en una amplia gama de
temperaturas y valores de pH, y debido a su tolerancia a los altos niveles de cloruro de
sodio y nitritos; agentes comnmente utilizados por la industria de la carne.
Las bacteriocinas de bacterias lcticas (BL) han suscitado un gran inters en los ltimos
aos como conservantes naturales de alimentos, ya que tienen el potencial para prevenir
su deterioro microbiano y para inhibir el crecimiento de patgenos tales como L.
monocytogenes. El objetivo de este estudio fue determinar la actividad listericida de la
bacteriocina sakacina Q producida por Lactobacillus curvatus ACU-1 frente a ocho cepas
de listeria, para evaluar su uso potencial en la biopreservacin de alimentos.
Las cepas utilizadas en este estudio fueron: Lactobacillus curvatus ACU-1, productor de
bacteriocina, aislado de embutidos secos artesanales fabricados en Chaco (Argentina) y
ocho cepas de Listeria, a saber: Listeria monocytogenes 99/287 y 01/155, Listeria spp.
99/320, 00/220, 00-363/03, 01/31 y 00/110 y L. innocua ATCC 33090.
Para la determinacin de la actividad anti-listeria de la bacteriocina sakacina Q se utiliz el
mtodo de difusin en agar usando como microorganismos indicadores las diferentes
cepas de Listeria mencionadas. Para descartar la posibilidad que la inhibicin se debiera
a la acidificacin del medio, provocada por el metabolismo de la BL, el sobrenadante libre
de clulas (SLC) se neutraliz con NaOH. Para verificar que la actividad antibacteriana no
fuera por la produccin de perxido de hidrgeno, catalasa de hgado bovino en solucin
(1 mg/ml en buffer fosfato de pH 7,5) se agreg a un volumen igual del SLC, incubndose
por 3 h a 30 C. A su vez, para comprobar que la inhibicin se debiera a la bacteriocina
producida, al SLC neutralizado se lo trat con soluciones de las siguientes enzimas
proteolticas: tripsina en una concentracin de 1mg/ml, papana en una concentracin de
2mg/ml y proteasa tipo XIV en concentracin de 1mg/ml. El ensayo se realiz por
duplicado.
Es de resaltar que el SLC de Lact. curvatus ACU-1 produjo la inhibicin de las ocho cepas
de Listeria ensayadas. Este efecto se mantuvo al neutralizar el SLC, al tratarlo con
perxido de hidrgeno y con la solucin de catalasa; mientras que la inhibicin
desapareci al tratarlo con las enzimas proteolticas, demostrando de este modo que el
antagonismo producido por la cepa en cuestin, frente a los microorganismos indicadores
citados, se debe a un compuesto de naturaleza proteica. Se comprob de este modo el
efecto listericida de la bacteriocina sakacina Q estudiada, por lo cual su empleo en la
biopreservacin
de
alimentos
resulta
prometedor.

P - 104
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Colello, R.; Etcheverra, A.; Padola, N.
Institucin: Laboratorio de Inmunoqumica y Biotecnologa, Centro de Investigacin Veterinaria de
Tandil (CIVETAN), CONICET, CICPBA, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNCPBA.

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIN GENOTPICA DE ESCHERICHIA COLI

VEROCITOTOXIGNICO A PARTIR DE CANALES DE CERDOS Y CARNE
DESPOSTADA EN BUENOS AIRES, ARGENTINA
Introduccin: Escherichia coli verocitotoxignica (VTEC) es un patgeno emergente
transmitido por alimentos, asociado a casos espordicos o brotes de diarrea, colitis
hemorrgica o sndrome urmico hemoltico.
La caracterstica de VTEC es su capacidad de producir y liberar verocitotoxinas, que se
encuentran codificadas en genes (vtx1, vtx2) de bacterifagos insertados en el
cromosoma bacteriano. Una misma cepa puede sintetizar una o ambas toxinas a la vez.
Posee tambin otros factores de virulencia como la intimina, codificada en el gen eae que
media la adherencia de la bacteria al enterocito y un megaplsmido que contiene los
genes para la sntesis de una enterohemolisina codificada en el gen ehxA y una adhesina
autoaglutinante codificada por el gen saa.
Objetivo: aislar y caracterizar genotpicamente VTEC en un despostadero porcino en
Buenos Aires, Argentina
Materiales y Mtodos: en febrero del 2014 se tomarn 10 muestras de canales porcinas (5
hisopos por muestra -cuarto trasero y delantero externo e interno y cabeza-) y 12
muestras de carne despostada. El muestreo se realiz segn el Reglamento N
2073/2005 Diario Oficial de la Unin Europea L 338/1. Luego cada hisopo se cultiv en
medio luria bertani (LB) durante 18 h a 37 C. Posteriormente, se tom una alcuota del
crecimiento confluente y se sembr en agar McConkey incubndose a 24 h a 37 C. Se
realizaron pooles de 5 colonias c/u para detectar por la reaccin en cadena de las
polimerasas (PCR) los genes vtx1 y vtx2. Si el pool era positivo, cada colonia individual
del mismo se cultiv en 800 l de LB durante 18 h a 37C con agitacin analizndose
posteriormente por PCR multiplex los factores de virulencia de VTEC: ehxA, eae, vtx2,
vtx1 y saa
Resultados: de las 62 muestras analizadas se aislaron 29 cepas portadoras de los genes
vtx1-vtx2 (21 cepas de canales porcinas y 8 cepas de carne despostada). En ninguno de
los aislamientos se detect otro factor de virulencia.
Conclusin: las muestras positivas se podran atribuir a que los animales se podran
contaminar al cortar los intestinos y diseminar la materia fecal a la canal. Para disminuir el
riesgo de infeccin por patgenos se necesita un control microbiolgico estricto en toda la
cadena
de
produccin
de
alimentos.

P - 105
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Conti P, Salerno C, Polci P
Institucin: Departamento de Agronomia, Universidad Nacional del Sur

INFLUENCIA DE TEMPERATURAS DE ALMACENAJE SOBRE LA CALIDAD DE CEPAS

DE LEVADURAS UTILIZADAS EN FABRICACIN DE CERVEZA ARTESANAL
INTRODUCCIN
Es un reto desarrollar en el campo de la cervecera artesanal, estrategias para mantener
un control total del proceso fermentativo, que garanticen la estabilidad qumica y
microbiolgica del producto final. Un problema operacional frecuente, es no contar con
una metodologa, para cuantificar la concentracin y el volumen de un inculo axnico de
levadura, necesario para la fermentacin ptima de un mosto.
OBJETIVOS
-Determinar una metodologa para conservar de manera asptica y estable las cepas de
levadura Saccharomyces spp.
-Utilizar una tcnica para cuantificar la concentracin de clulas de levaduras vitales.
MATERIALES Y MTODOS
Se analizaron 4 cepas de levadura de uso en cervecera artesanal, de las cuales 2
pertenecen al tipo Ale, Saccharomyces cerevisiae y 2 al tipo Lager, Saccharomyces
pastorianus.
Las cepas se tomaron al azar de un cepario de la Ctedra de Microbiologa Agrcola de la
UNS.
Se realizaron recuentos totales de colonias por el mtodo de diluciones seriadas,
provenientes de cultivos puros en placa (RCP), en medio Hongos y Levaduras. Adems,
se efectuaron tratamientos de temperatura de conservacin de cepas, a partir de un
mosto de cebada enriquecido con Zn (Densidad 1.035 g/cm3).
Transcurridos 127 das del periodo de almacenaje, se efectuaron recuentos celulares en
cmara de Neubauer Improved.
Los resultados se analizaron estadsticamente con ANOVA simple, comparando medias
con test de Tukey, y un alfa=0,05.
RESULTADOS
Para el RCP de cepas Lager, Saccharomyces pastorianus, los valores mnimos y
mximos variaron entre 45,3 x 104 y 13,4 x 105 UFC/mL respectivamente.
En las cepas Ale, Saccharomyces cerevisiae, los valores mnimos y mximos variaron
entre
14,8 x 105 y 5,25 x 107 UFC/mL respectivamente.
Los recuentos celulares en la cepa Mauribrew 497 presentaron diferencias significativas
con un p >0,05 en T2 (3-5C), no as entre T1 (23-25C) y T3 (-16C), mientras que la
cepa Wieselburger Austraca se diferenci en todos los tratamientos de almacenaje.
La cepa Kolsch Ale present diferencias significativas con un p>0,05 en T1, no as en T2 y
T3; mientras que la London SB 1968 lo hizo solamente en T3.
CONCLUSIONES
-La tcnica de recuento celular, demuestra ser un mtodo til para determinar la tasa de
inoculacin correcta de levaduras, en un mosto cervecero.
-Las 2 cepas Lager tienen una cintica de crecimiento similar para los 3 tratamientos.
Factores reproductivos intrnsecos frente a la temperatura, podran ser la causa de las
diferencias demostradas entre las cepas Ale.

-La temperatura de -16C fue ineficaz nicamente para la cepa Kolsch.

-Esta investigacin, sienta las bases para el seguimiento en el tiempo de las cepas de
Saccharomyces ssp analizadas, con el fin de establecer variaciones atribuibles a periodos
ms
largos
de
almacenaje.

P - 106
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: RIBEIRO, B. C.; PAZ, J. L. P.; PEREIRA, M. F. B. C.; MENEZES, M. S.; FERNANDES, L.
M.
Institucin: INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA DO PAR CAMPUS TUCURU

MICROBIOLOGICAL EVALUATION OF AA PULP (EUTERPE OLERACEA MART.)

MARKETED IN TUCURU CITY, PAR, BRAZIL.
Aa pulp is a popular food in Brazil north region and it has a high energetic and nutritional
value, besides be associated with the prevention of several degenerative diseases. These
characteristics had provided to the aa large space in the national market, mainly in the
south and southeastern regions of Brazil. However, the microbial load present in the fruit
associated with deficiencies in hygienic and sanitary aspects from crop of fruits, through
the transportation, storage and processing represents a risk to the human health.
According to above description is needed to understand that microbiological safety of a
food product before consumption or sell it is very important because the quality of food is
essential for public human health. This study was to evaluate microbiologically aa pulp
marketed in the city Tucuru - PA, Brazil. A total of 18 samples were acquired in points of
sale of aa located in different districts of the city, and were tested for the presence or
absence of Salmonella sp., count of molds and yeasts, Staphylococcus aureus and
determination of total and fecal coliforms, using the technique of Most Probable Number
(MPN). The microbiological results of aa pulp showed that in 18 samples (100%)
presented a high contamination of total coliforms, and among these 12 (66.6 %) were
positive for the presence of fecal coliform, varying your score in 2,3 x 10 to > 1,1 x 10
and 1,1 x 102 to > 1,1 10, respectively. Being well above the standards set by collegiate
Board Resolution (RDC) N 12 of 2001, which was determined a maximum value of 102
NMP.g . Regarding the count of yeasts and molds was found that all samples tested
were contaminated with UFC.g values between 1,15 x 104 and 1,22 x 10. The
presence of Staphylococcus aureus was confirmed in 100% of the analyzed samples, with
ranging count of 3.5 x 10 to 1.4 x10 CFU g1 . Despite of the RDC N 12 does not to set
standards for Staphylococcus aureus , some authors , however, discuss to be needed the
population must be over 10 CFU g to the enterotoxin be significant . Thus, the analysis
of Salmonella sp. were negative in all tests and the results has presented according to the
current standard legislation, which recommends absence in 25g over acai pulp. From
these results, it is concluded that aa pulp marketed in Tucuru city was showed
inappropriate to the human consumption, which should be related to impractical hygiene
and
health
aspects
from
harvesting
to
processing.

P - 107
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Gonzalez Estevez, V.; Boiero, L.; Montenegro, M.
Institucin: 1 Universidad Tecnolgica Nacional. Facultad Regional Villa Mara. Departamento de
Ing. Qumica. Av. Universidad 450. Villa Mara, Crdoba, Argentina. 2 Centro de Investigacin y
Transferencia Villa Mara. Universidad Nacional Villa Mara. Campus Universitario, Arturo Jauretche
1555, Villa Mara, Crdoba, Argentina.

EVALUACIN DE ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE COMPUESTOS BIOACTIVOS

ADICIONADOS EN LECHE
La gran mayora de los alimentos durante su procesamiento, almacenamiento y/o
transporte pueden sufrir deterioro por la accin de microorganismos (MO) patgenos y
alterantes presentes en su matriz. Su desarrollo provoca modificacin organolptica (offflavour), produccin de enzimas lticas termorresistentes, y degradacin de nutrientes (de
alto valor nutricional), generando importantes prdidas en la calidad del producto.
Adems, la refrigeracin a bajas temperaturas, puede favorecer la seleccin de MO
psicrtrofos. Lo antes mencionado, sumado a una mayor exigencia de los consumidores
en alimentos saludables, hace imprescindible asegurar la calidad, estabilidad e inocuidad
de los mismos. Existe, una nueva tendencia a la preservacin de los alimentos mediante
el empleo de compuestos naturales (CN) biolgicamente activos que resulten
beneficiosos para la salud del consumidor.
Especialmente en la industria lctea, se adicionan CN con un rol tecnolgico definido, tal
como es el caso de Goma arbiga (GA) y Pectina (PE), polmeros empleados como
espesantes/estabilizantes y Bixina (BI), utilizado como colorante, todos permitidos por el
Cdigo Alimentario Argentino. El objetivo del presente trabajo consiste en evaluar, si estos
CN adems de su funcin tecnolgica, poseen actividad antimicrobiana (AAM). En
particular, se determin la capacidad de GA, PE y BI para reducir la velocidad de
Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853 (Pa), y a una cepa aislada de leche cruda e identificada
genotpicamente, Pseudomonas sp. (Ps).
Se determin AAM a travs de recuento en placa por triplicado en agar PCA, expresando
los resultados como unidades formadoras de colonia por mililitro (UFC/ml) y graficndolos
-1)) se determin a partir de la porcin lineal de la pendiente
(crecimiento exponencial) de las curvas de crecimiento del MO, con y sin agregado de
antimicrobiano. El porcentaje de reduccin del crecimiento microbiano (%R) ejercido por
los compuestos en estudio, se calcul a travs de relacin de las velocidades de
crecimiento bacteriano en ausencia y presencia del compuesto, multiplicado por 100.
Los resultados obtenidos indican que todos los compuestos evaluados poseen AAM frente
a ambos MO ejerciendo un efecto bacteriosttico, siendo BI mas eficiente frente a Pa
(%R=17) y GA frente a Ps (%R= 45). Lo cual estara demostrando una mayor
funcionalidad de los CN estudiados, con una potencial aplicacin en la preservacin de la
leche.

P - 108
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Soria, M.1; Ibarguren C.1,2; Barroso P.3; Villena J.4; Audisio C.1
Institucin: 1INIQUI-CONICET-Universidad Nacional de Salta, Argentina; 2 Facultad Cs. SaludUniversidad Nacional de Salta, Argentina; 3 IPE-CONICET-Universidad Nacional de Salta,
Argentina; 4 CERELA-CONICET, SM Tucumn, Argentina

ESTUDIO DE LA TOXICIDAD POTENCIAL DE LOS METABOLITOS SINTETIZADOS

POR DISTINTAS CEPAS DE Enterococcus EN RATONES HEMBRAS BALB/c
Las bacteriocinas son pptidos antimicrobianos sintetizados por diversas bacterias con
actividad bactericida frente a especies relacionadas. Aquellas sintetizadas por el gnero
Enterococcus, (enterocinas) despiertan inters como biopreservantes naturales debido a
su efecto sobre distintos patgenos de alimentos. Pero, aun cuando las bacterias lcticas
tienen carcter GRAS (Generally Recognized As Safe), el uso de sus metabolitos como
aditivos alimentarios no conserva tal estatus; por lo que es necesario analizar su
toxicidad. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto in vivo de los metabolitos
presentes en el sobrenadante libre de clulas (SLC) de E. faecium SM21 y E. avium
DSMZ17511 sobre ratones hembras BALB/c. Los SLC a administrar se obtuvieron por
centrifugacin de cultivos en caldo BHI y posterior concentracin por filtracincentrifugacin (cutoff 3kDa-6500g, 30min, 15C). Para el diseo experimental in vivo, se
utilizaron 20 ratones hembras BALB/c, separados en 4 grupos (Control, BHI, SLC SM21,
SLC DSMZ17511) de 5 animales cada uno. Cada grupo recibi, adems de dieta normal y
agua destilada ad libitum, dos dosis de 200uL de tratamiento por va oral (da 1 y 7). El
efecto de las distintas soluciones se evalu mediante observacin del estado y
comportamiento general de los ratones. El peso de los animales se registr los das 1, 7 y
15. La actividad de las enzimas hepticas transaminasa glutmico oxalactica (GOT) y
glutmico pirvica (GPT) se determin en muestras de sangre obtenidas los das 7 y 15.
Al final del experimento (da 15), los animales fueron sacrificados y se tomaron muestras
de hgado e intestino para su estudio histolgico. Se utiliz un ndice de puntuacin
semicuantitativo para evaluar alteraciones del tejido heptico considerando
presencia/ausencia e intensidad de esteatosis heptica, necrosis, degeneracin
intralobular, degeneracin hidrpica, fibrosis e inflamacin. Para el tejido intestinal, se
consider presencia/ausencia e intensidad de edema, necrosis, degranulacin de las
clulas de Paneth e inflamacin. Cada parmetro fue valorado en una escala de 1 a 4
(1:ausente-4:severa). Todos los resultados fueron analizados mediante ANOVA y test de
Tukey. Durante los 15 das de experimento, no se registraron muertes y los tratamientos
no produjeron cambios en el comportamiento de los animales. En general, no se
encontraron diferencias estadsticas entre los grupos experimentales con respecto a los
valores de peso, GOT y GPT. Tampoco se observaron lesiones en los cortes histolgicos
de hgado e intestino. Estos resultados indican que los SLC de E. faecium SM21 y E.
avium DSMZ17511 no producen efectos adversos en ratones hembras BALB/c en las
concentraciones probadas. Considerando que ambas cepas sintetizan enterocinas con
actividad anti-Listeria monocytogenes y/o anti-Bacillus cereus, la ausencia de toxicidad
aporta nuevas perspectivas para la potencial aplicacin de estos metabolitos como
aditivos
alimentarios.

P - 109
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: LEDESMA, C.; STIVALA, M.; RUBIO, M.; AREDES FERNNDEZ, P.
Institucin: FACULTAD DE BIOQUMICA, QUMICA Y FARMACIA - UNIVERSIDAD NACIONAL
DE TUCUMN

EFECTO DE COMPUESTOS FENLICOS SOBRE EL CRECIMIENTO DE Pediococcus

pentosaceus EN MEDIO SINTTICO SIMIL-VINO
Durante el proceso de vinificacin, pueden ocurrir alteraciones organolpticas producidas
por el desarrollo incontrolado de bacterias lcticas del gnero Pediococcus, que debido a
su capacidad de sintetizar exopolisacrido (EPS), pueden generar inconvenientes al
aumentar la viscosidad del vino, disminuyendo su calidad. Actualmente, el dixido de
azufre (SO2) es el preservante qumico ms utilizado, actuando como agente
antimicrobiano y antioxidante, ejerciendo a la vez efectos txicos en personas sensibles.
La utilizacin de cidos fenlicos podran representar una alternativa natural y eficaz
como agentes de control de la microflora perjudicial. El objetivo de este estudio fue
investigar el efecto de cidos fenlicos naturalmente presentes en vino sobre el
crecimiento y produccin de EPS de P. pentosaceus E2p aislado de vino de Cafayate,
Salta. Se utiliz medio vino sinttico (MVS), pH: 4.5, suplementado con diferentes
combinaciones de cidos fenlicos: glico + cafeico (G-C); glico + protocatquico (G-P);
glico + p-cumrico (G-PC); cafeico + protocatquico (C-P); cafico + p-cumrico (C-PC);
protocatquico + p-cumrico (P-PC) a concentracin final de 100 (50 + 50) y a 400
(200+200) mg/L. Se evalu la velocidad de crecimiento o muerte (K) y la diferencia entre
viabilidad final e inicial (A=Log N-N0). Al inicio y final de la incubacin (72 h) se obtuvieron
los sobrenadantes del cultivo por centrifugacin y se determin la concentracin de
polisacridos en los mismos por el mtodo de Dubois (fenol-sulfurico). En MVS (control),
P. pentosaceus creci con K = 0,03 h-1, alcanzando a 72 h concentracin celular de 8,34
Log ufc/mL con A = 0,69 Log ufc/mL. En todas las combinaciones ensayadas a 100 como
a 400 mg/L se observ muerte del microorganismo con una K entre - 0,02 y - 0,1 h-1 y
disminucin de la viabilidad microbiana detectndose valores de A entre -1,6 y -2,8 Log
ufc/mL. En cuanto a la produccin de EPS, las combinaciones ms efectivas fueron G+PC
100 y G+C 400 reduciendo la formacin del mismo en 51,47 y 76,5 %, respectivamente,
respecto al medio control (MVS). stos resultados podran tener un importante valor
tecnolgico al considerar el uso de cidos fenlicos como aditivos antimicrobianos
convirtindose en una alternativa natural para disminuir o reemplazar el uso de SO2 en el
proceso
de
vinificacin.

P - 110
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Lincor D., Salerno C., Fernandez H., Arenaz F., Amela M., Rodrguez H.
Institucin: DEPARTAMENTO DE AGRONOMA. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SUR.

LISTERIA MONOCYTOGENES. RIESGO ZOONTICO EN EL CONSUMO DE POLLOS

PARRILLEROS
INTRODUCCIN
La presencia de Listeria monocytogenes en alimentos constituye una problemtica,
motivada por la incorporacin de la bacteria a lo largo de la cadena productiva. Produce
una enfermedad atpica llamada Listeriosis, caracterizada por su alta letalidad en los
grupos de riesgo (20-30% de los casos).
Dentro del gnero Listeria se incluyen las siguientes especies: Listeria monocytogenes
(patgena para el hombre), L. innocua, L. welshemerii, L. seeligeri, L. ivanovii, L. grayi y L.
murrayi.
El objetivo del presente trabajo fue establecer la calidad bacteriolgica de trozados de
pollo en locales de comercializacin minorista y mayorista, mediante la deteccin y
tipificacin de Listeria spp. presentes en el alimento.
MATERIALES Y MTODOS
Se realizaron 13 muestreos al azar en diferentes comercios de la ciudad de Baha Blanca,
adquiriendo de cada uno, cuatro presas del mismo corte incluyendo muslo, pata y
pechuga.
Para el aislamiento de Listeria spp., se utiliz un protocolo basado en el criterio presenciaausencia en 25 g segn USDA/FSIS.
Las colonias sospechosas fueron repicadas en agar triptona soja y para su identificacin
se incluyeron las siguientes pruebas: tincin de Gram, iluminacin de Henry, catalasa,
movilidad y produccin de cido sulfhdrico en medio SIM, prueba de la ureasa, prueba de
CAMP, oxidasa, hemlisis en agar sangre, fermentacin de los azcares ramnosa, xilosa,
manitol y glucosa, hidrlisis de la esculina, reduccin de nitratos, desarrollo en cloruro de
sodio y en agar sangre e hidrlisis de almidn. La cepa patrn utilizada fue ATCC 19115.
RESULTADOS
En 12 de los 13 locales muestreados fue posible detectar el gnero Listeria. Un 92,31%
(48) del total de las presas analizadas (52) resultaron contaminadas.
Los 52 cortes investigados microbiolgicamente permitieron demostrar que de las 168
placas inoculadas para el aislamiento de Listeria en medio Oxford, 97 presentaron
colonias tpicas, lo que representa un 58 % del total de las cajas sembradas.
Pudieron ser identificadas 135 cepas de las 180 repicadas, lo que representa un 75%.
La clasificacin a nivel de especie, permiti determinar que: 12 (7%) correspondieron a
Listeria monocytogenes, 42 (24 %) a L. innocua, 18 (10%) a L. ivanovii, 15 (8%) a L.
seeligeri, 20 (11%) a L. welshemeri, 12 (7%) a L .grayi y 16 (9%) a L. murrayi. En las
muestras donde se aisl Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii predomin como
especie acompaante.
CONCLUSIONES
El aislamiento de especies del gnero Listeria revela condiciones sanitarias deficientes.
El tamao de los comercios y los diferentes tipos de cortes no influyeron en la prevalencia
de estas bacterias.
L. ivanovii puede considerarse indicador de la presencia de L. monocytogenes.

Implementar estrategias de control de inocuidad a lo largo de toda la cadena de

produccin y educar a los consumidores, son herramientas imprescindibles para la
prevencin
de
posibles
brotes
de
Listeriosis.

P - 111
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Manca, L.; Francavilla, A.; Garca-Ferreira, C.; Rondini, A.
Institucin: Municipalidad de la Ciudad de Crdoba (Laboratorio de Alimentos)

CALIDAD MICROBIOLGICA DE HORTALIZAS QUE SE EXPENDEN EN LA CIUDAD

DE CRDOBA
El consumo de vegetales es una tendencia a nivel mundial en aumento. Particularmente,
el consumo de hortalizas procesadas y envasadas est en expansin. Estos productos,
son ms perecederos que los vegetales intactos de los cuales proceden. Si el procesado
no es realizado mediante Buenas Prcticas de Manufactura (BPM), pueden estar
expuestos a diversas fuentes de contaminacin durante el cultivo, cosecha, distribucin o
elaboracin. Actualmente, la frecuencia de brotes de enfermedades transmitidas por
alimentos (ETAs) asociadas al consumo de hortalizas se ha elevado como resultado de
un incremento en el consumo. Esto es primordial porque las ETAs representan uno de los
problemas de salud pblica ms importante. En este sentido, la Direccin de Calidad
Alimentaria de la Municipalidad de Crdoba, realiza la vigilancia de hortalizas que se
expenden en la ciudad para prevenir la aparicin de ETAs. El Cdigo Alimentario
Argentino (CAA), mediante resolucin vigente desde 2012 (art. 925 quater), recin exige
el cumplimiento de ciertos parmetros microbiolgicos para que estos alimentos sean
considerados aptos. El objetivo fue evaluar la calidad microbiolgica de hortalizas que se
comercializan en el Mercado de Abasto y vegetales procesados y envasados que se
expenden listos para el consumo en la ciudad de Crdoba. Se seleccionaron dos sitios de
muestreo: el Mercado de Abasto (muestras de hortalizas mnimamente procesadas) y
comercios (muestras de bandejas de hortalizas procesadas y envasadas). En el Mercado
se tomaron 785 muestras y en comercios se obtuvieron 525 muestras y todos los
muestreos se realizaron desde octubre de 2012 a diciembre de 2013. En cada muestra se
determin: a) Escherichia coli por NMP (BAM-FDA-2002) y b) Salmonella spp. (ISO 65792002). En todos los casos se siguieron los criterios de muestreos establecidos segn el
CAA. Del total de muestras de hortalizas mnimamente procesadas (obtenidas del
Mercado), slo el 4,45 % fueron positivas para E. coli. En cambio, E. coli fue positiva en
un 20,95 % de las muestras de bandejas obtenidas de los comercios. Los casos positivos
para verduras mnimamente procesadas (Mercado) se encontraron siempre en los meses
de verano (diciembre a marzo). En cambio, en el caso de las hortalizas en bandejas no
hubo una asociacin estacional con la deteccin de E. coli. En ninguno de los casos se
detect Salmonella spp. En conclusin, el mayor porcentaje de E. coli encontrado en
hortalizas envasadas sugiere que las plantas elaboradoras de estos productos no estn
aplicando correctamente las BPM. Es crucial realizar en forma correcta el lavado y
desinfeccin de las hortalizas, ya que reduce la carga microbiana inicial. Si esto no ocurre,
los microorganismos seguirn multiplicndose durante el almacenamiento del producto
hasta su consumo. Es necesario seguir con el control riguroso de las hortalizas,
fortaleciendo los pilares de auditora y capacitacin en BPM y as evitar riesgos al
consumidor.

P - 112
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Mastrodonato A., Favier G., Escudero M.
Institucin: rea de Microbiologa, Facultad de Qumica, Bioqumica y Farmacia, Universidad
Nacional de San Luis.

DETECCIN Y CARACTERIZACIN FENOTPICA DE CEPAS DE Yersinia enterocolitica

AISLADAS DE ALIMENTOS EN SAN LUIS, ARGENTINA.
Yersinia enterocolitica es una enterobacteria que causa en el hombre, enterocolitis,
sntomas extraintestinales y secuelas inmunolgicas. Su transmisin es por va oral,
principalmente por alimentos contaminados. Esta especie incluye 6 biotipos y ms de 60
serotipos, siendo su patogenicidad atribuida a factores de virulencia codificados a nivel
plasmdico y cromosomal. El objetivo de este trabajo fue determinar la frecuencia de
deteccin de Y. enterocolitica en alimentos de origen vacuno, porcino y avcola
comercializados en San Luis, Argentina, y caracterizar fenotpicamente las cepas
aisladas. Se proces un total de 130 muestras de alimentos crudos que incluyeron:
embutidos, carne y cuero de cerdo; carcasas, vsceras y piel de pollo, y carne molida
vacuna que fueron adquiridas en 20 comercios de venta al pblico en la zona cntrica de
la ciudad de San Luis. Aspticamente, se pesaron 20 g de muestra que fueron colocados
en 80 ml de caldo peptona bilis sorbitol (PBS). Se homogeneizaron durante 90s en
digestor y se incubaron a 4C durante 10 das. Se tom una ansada de este
enriquecimiento y se realiz el aislamiento en placas de agar Mac Conkey (MC) que se
incubaron a 25C durante 48 h. Las colonias no fermentadoras de lactosa fueron
ensayadas por pruebas bioqumicas clsicas y coloracin de Gram. Posteriormente, las
cepas sospechosas fueron sometidas a pruebas de biotipificacin in vitro y a la tcnica de
difusin en agar, segn Kirby-Bauer, para determinar su susceptibilidad a diferentes
antibiticos. La confirmacin en bioserotipos fue realizada en el Centro de Referencia de
Y. enterocolitica del Instituto Pasteur, Pars, Francia. Del total de muestras analizadas en
este trabajo, se aislaron cuatro cepas de Y. enterocolitica biotipo 2 serotipo O:9, lo que
representa una frecuencia de deteccin del 3,07%. La mayor frecuencia de deteccin se
observ a partir de las muestras provenientes de carne de cerdo (2/12, 16,66%), seguido
por las muestras de embutidos de cerdo (2/18, 11,11%) (p<0.05). Todas las cepas de Y.
enterocolitica B2/O:9 aisladas fueron sensibles a: amikacina, cefotaxima, colistina,
cloranfenicol, fosfomicina, furazolidona, gentamicina y trimetropin-sulfametoxazol, y
resistentes a los siguientes agentes antimicrobianos: ampicilina, rifampicina y cefalotina.
La frecuencia de deteccin informada demuestra la implicancia de alimentos de origen
porcino como posibles vehculos de contaminacin para humanos. Los perfiles de
sensibilidad antimicrobiana obtenidos concuerdan con los recomendados y utilizados en la
teraputica
de
las
infecciones
debidas
a
Y.
enterocolitica.

P - 113
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Moreno S.M. (1)*, Maldonado V.N. (1), Calvo G.A. (1), Camusso C. (1), Cerezo G.M. (1),
Fernandez C.N. (1), Toledo I.E. (1), Ontivero S.L. (1), Turbay A.J. (1)
Institucin: Instituto de Tecnologa Agro Industrial - UNLaR

VNCULOS ENTRE LOS SISTEMAS DE PRODUCCIN DE ALIMENTOS, SEGURIDAD

ALIMENTARIA Y SALUD PBLICA EN AIMOGASTA Y CIUDAD CAPITAL DE LA
PROVINCIA DE LA RIOJA
Las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETAs), son aquellas que se originan por
la ingestin de alimentos infectados con agentes contaminantes en cantidades suficientes
para afectar la salud del consumidor. El presente trabajo se ha iniciado en red dentro del
marco de la convocatoria PICTO CIN II con otras cinco (5) Universidades Nacionales de la
Regin Centro Oeste, tiene como objetivo general organizar los datos existentes sobre
produccin y manipulacin de alimentos y la posible distribucin de los principales
patgenos emergentes en la Regin Centro Oeste de la Argentina.
El componente perteneciente a la UNLaR presento como objetivos identificar y determinar
los errores en la elaboracin de alimentos ms frecuentes asociados a brotes de ETAs,
conocer el nivel de aplicacin de manuales de Buenas Prcticas de Manufactura, evaluar
la necesidad de actualizacin de los mismos y formular las bases de un modelo educativo
para cambiar hbitos o conductas en la elaboracin de alimentos. Los datos finales
presentados se refieren a encuestas realizadas en 8 barrios de la ciudad de Aimogasta,
70 establecimientos elaboradores de comida y 18 casas expendedoras de pollos de
granja, relevados en la ciudad de La Rioja, de los cuales el 80 % han reconocido en la
encuesta realizada, que conocen parcialmente las normas de Buenas Prcticas de
Manufactura (BPM) y la reglamentacin vigente actualizada; y el 20% restante las
desconocen, por lo tanto, se aplican parcialmente o no se aplican. Tambin se ha
obtenido como resultado que el 97 % de las muestras analizadas de pollos crudos y
asados listos para la venta no presentaron niveles de contaminacin por bacterias
coliformes totales, aerobios y Salmonella.
Ante el desconocimiento de las exigencias de la normativa actual y de la aplicacin de
Buenas Prcticas de Manufactura se han formulado las bases para la implantacin de
BPM
en
cada
establecimiento
adaptado
a
la
realidad
local.

P - 114
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: PAZ, J. L. P.; PEREIRA, M. F. B. C.; COSTA, M. A. M.; PINHEIRO, M. T. S.; FREITAS,
G. K. P.
Institucin: INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA DO PAR CAMPUS TUCURU

COMPARATIVE MICROBIOLOGICAL ANALYSIS OF MARKETED HONEY BETWEEN

INDUSTRIALIZED PRODUCTS AND MANUFACTURED PRODUCTS BY SMALL
FARMERS IN THE TUCURU-PAR CITY.
Honey bee is largely utilized as homemade medicine herbal compounds preparation and
due to present great nutritional values is also used as food, many times it is the main
sugar substitute. This product is marketed as industrialized products and also is
manufactured by family farming. Several factors affect the quality of this such as climatic
conditions, bee species, processing and storage. The microbiotic also varies when
microorganisms are introduced by bees in the beehive or when it is occasionally
introduced by lack of hygiene in manipulation or during the extraction and processing of
honey. This microbial load can be considered low compared to other products such as
milk. In this context, this work aimed to analyze the microbiological quality of industrialized
honey samples marketed in Tucuru-Par, Brazil with the point of view to make a
comparison between both provenance. Thus, six samples were tested, with three of these
processed products (sold in drugstores and supermarkets); and three from small farmers
(informally sold).Microbiological analyzes was conducted as follow: survey of molds and
yeasts ( spread plate technique on Potato Dextrose Agar ) and the total and fecal coliforms
determination by the Most Probable Number (MPN ). Among the analyzed samples it was
found that three ( 50 % ) were contaminated with total coliforms above the tolerable level (
absence = <3.0 x 10 MPN / g ), according to the Normative Instruction number 11 of 20
October of 2000; considering all of these samples only one of it (representing 33.3 % of
total) was industrialized and another ones are coming from informal market .
Approximately two samples (which represents 36 % of total samples) were contaminated
with thermotolerant coliforms (similar to total tolerable coliforms limits) indicating a low rate
of fecal contamination. In spite of to yeast and mold counting , it was found that all
samples (100 %) presented yeast and molds above the acceptable limit of 1.0 x 102 CFU /
g, descripted by the same legislation above , with results ranging from 2.3 x 10 countless
microorganisms. Considering laboratory analysis was observed that the honey sold in the
city Tucuru / PA in both formal and the informal market, were inappropriate according to
Ministry of Agriculture and Supply requirements and international market standards. Thus,
becomes needed that entities and companies aimed to the agricultural development
present focus about issue of hygiene and well manipulation of raw materials, avoiding the
contamination
of
honey
bee.

P - 115
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Gmez Mirada J; Salerno C; Lincor D; Prez M; Rodrguez H.
Institucin: DEPARTAMENTO DE AGRONOMA. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SUR

MONITOREO BACTERIOLGICO EN ALIMENTOS BALANCEADOS DE POLLOS

PARRILLEROS
INTRODUCCIN
La calidad microbiolgica de las materias primas y alimentos balanceados es importante
no slo por su influencia sobre los rendimientos productivos y sobre la sanidad de los
animales, sino tambin por su posible contribucin a la aparicin de enfermedades de
origen alimentario en los humanos. El objetivo del presente trabajo fue investigar la
calidad bacteriolgica de los alimentos balanceados en galpones de pollitos BB y de
pollos adultos prximos a la edad de faena y determinar la carga microbiana tanto en los
sitios de acopio como en los comederos.
MATERIALES Y MTODOS
El estudio se llev a cabo en un establecimiento de cra de pollos parrilleros ubicado a 22
Km al sudoeste de la ciudad de Baha Blanca.
Se realizaron muestreos cada 15 das durante tres meses en dos galpones, uno destinado
a la crianza de pollitos BB de una semana de vida y otro de pollos prximos a la faena.
Dentro de cada galpn se tomaron aleatoriamente cuatro muestras de alimento
balanceado provenientes de comederos (bandejas, en el caso de pollos BB y tolvas
suspendidas en adultos) y una del sitio de acopio correspondiente.
Se pesaron 10 g de alimento y se coloc en una botella conteniendo 90 mL de agua
destilada estril. A partir de diluciones decimales realizadas a cada muestra se analiz:
recuento heterotrfico en placa (RHP), coliformes totales expresadas en UFC/mL, y
presencia-ausencia de Bacillus cereus y de clostridios sulfito reductores.
Para el anlisis estadstico de RHP se utiliz un diseo ANOVA Triple Mixto
desbalanceado proporcionalmente.
RESULTADOS
Recuento Heterotrfico en Placa
Se detectaron diferencias claras entre los galpones (p << 0,01) y se hall un componente
de varianza debido a las fechas (p < 0,01) durante el perodo de crianza.
Coliformes totales
La carga microbiana promedio en los comederos fue de 9,8 x103 y de 2 x 103 UFC/mL,
para pollos BB y adultos respectivamente.
Estos valores fueron superiores a los encontrados en sus correspondientes muestras
testigo (8,4 x 102 y 7,7 x102 UFC/mL en promedio).
Los recuentos de coliformes se mantuvieron por debajo de 106 UFC/mL, parmetro
bacteriolgico establecido para alimentos balanceados.
Bacillus cereus
La presencia en el alimento fue de un 40% para pollos BB, y de un 30% para adultos.
Clostridios sulfito reductores
En el alimento para pollos BB las muestras positivas representaron el 16,67 %, mientras
que en el de adultos correspondieron a un 13,33% con 50 y 43,75 UFC/mL en promedio
respectivamente.
Los valores determinados son inferiores a las 1200 UFC/mL, lmite bacteriolgico
determinado para alimentos balanceados.

CONCLUSIONES
La carga microbiana del alimento balanceado aumenta desde la llegada a la granja hasta
su consumo, aunque asegura una adecuada calidad microbiolgica para la produccin de
los pollos. Se recomienda el reemplazo de comederos bandejas en el galpn de pollitos
BB, para minimizar la contaminacin por el ingreso de los animales.

P - 116
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Gascn A. , Martinengo N., Bayardi F., Yanzn G., Lucentini H., Farrando S., Andr S.,
Barros A., Cerchiai, E.
Institucin: Facultad de Ciencias Agrarias. Universidad Nacional de Cuyo. Alte Brown 500.
Chacras de Coria (5505). Mendoza. Argentina.

INFLUENCIA DEL CONTENIDO DE CLORURO DE SODIO Y DE LA TEMPERATURA

EN LA ACIDEZ Y EL pH DE LAS SALMUERAS DE FERMENTACIN DE ACEITUNAS
VERDES DE MESA
La preparacin de las aceitunas verdes tipo espaol en Mendoza implica tratar con lcalis
a los frutos, usar varias concentraciones de NaCl en las salmueras y emplear
temperaturas ambientales durante la fermentacin. El objetivo de este trabajo fue
determinar la influencia de la concentracin de cloruro de sodio y de la temperatura en la
produccin de cidos, disminucin de pH y el nmero de bacterias lcticas en la
fermentacin de aceitunas verdes de mesa cv. Arauco. Las aceitunas se cosecharon y se
sometieron a un tratamiento alcalino con una solucin de NaOH al 2,5% por 6 h 8 h.
Luego se realizaron dos lavados de 12 hs con agua corriente. Las olivas se distribuyeron
en 24 bidones plsticos de 5 L con salmuera acidificada (2 por mil HCl y 2 por mil cido
actico) de acuerdo a un diseo factorial mixto compuesto por 3 concentraciones de NaCl
(4%, 6% y 8%) x 2 temperaturas de fermentacin (15C y 30C). Luego de 140 das se
midieron la acidez (expresada como porcentaje de cido lctico), el pH y el nmero de
bacterias lcticas. Los bidones fermentados a 15C alcanzaron mayores niveles de acidez
y menores niveles de pH en salmueras al 4% NaCl (0,393; 5,94) que a 6% NaCl (0,136;
6,01) y a 8% NaCl (0,0878; 6,23). El nmero de bacterias lcticas sigui el mismo patrn
de comportamiento: en salmueras al 4% fue mayor el n de bacterias lcticas (40 x 106
ufc/ml) que a 6% (6 x 106 ufc/ml) y a 8% (1,2 x 106 ufc/ml). En los bidones fermentados a
30C, no se observaron diferencias notables entre las salmueras al 4% (0,564; 4,88) y 6%
(0,564; 4,78) pero s con las al 8% (0,469; 4,91). El nmero de bacterias lcticas estuvo
en concordancia con los parmetros fsicos y qumicos medidos: en las salmueras al 4%,
el nmero (6 x 106 ufc/ml) fue similar a las de 6% (8 x 106 ufc/ml) mientras que a 8% fue
menor (2,4 x 104 ufc/ml). Las fermentaciones realizadas a 15C y 4% NaCl resultaron en
salmueras con mayor contenido de cido y menor pH dado por el mayor desarrollo de las
bacterias lcticas. En las fermentaciones llevadas a cabo a 30C, el mayor contenido
salino inhibi el desarrollo de las bacterias lcticas afectando la produccin de cidos y la
disminucin del pH. La menor temperatura de las salmueras afect la velocidad de
fermentacin. La concentracin de NaCl y la temperatura influyeron en la acidez, el pH y
el nmero de bacterias lcticas de las salmueras de fermentacin de las aceitunas cv.
Arauco
elaboradas
en
Mendoza.

P - 117
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: STIVALA, M.; LEDESMA, S.; VILLECCO, M.; FANZONE, M.; JOFRE, V.; AREDES
FERNNDEZ, P.
Institucin: Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Universidad Nacional de TucumnLaboratorio de Aromas y Sustancias Naturales, EEA Mendoza INTA

EFECTO DE FRACCIONES FENLICAS DE VINOS TINTOS REGIONALES SOBRE EL

CRECIMIENTO Y SOBREVIDA DE BACTERIAS DETERIORANTES DE VINO
La fermentacin malolctica, llevada a cabo por las bacterias del cido lctico (BAL),
constituye un proceso deseable durante la vinificacin que contribuye positivamente a la
estabilidad microbiana y a la calidad organolptica del producto final. Bajo ciertas
condiciones, pueden ocurrir alteraciones organolpticas e higinico-sanitarias por el
desarrollo incontrolado de BAL del gnero Lactobacillus y Pediococcus. Los compuestos
fenlicos de bajo peso molecular, ejercen actividad antimicrobiana sobre bacterias
lcticas. La utilizacin de compuestos de bajo peso molecular provenientes de vino, en
concentraciones adecuadas, representa una alternativa natural para el control de BAL
alterantes. En este trabajo se investiga el efecto de la fraccin fenlica de bajo peso
molecular (FBP) extrada de diferentes varietales de vinos comerciales sobre el
crecimiento de 3 cepas de Lactobacillus hilgardii (5w, 6F y X1B) y de Pediococcus
pentosaceus 12p en medio vino sinttico (MVS). La FBP se obtiene de vinos tintos de
Cafayate (Salta) varietales Malbec (M1), Cabernet Sauvignon (C1) y Tannat (T) y
varietales Malbec (M2) y Cabernet Sauvignon (C2) de Amaicha del Valle (Tucumn)
mediante extracciones sucesivas con acetato de etilo. Se determina la concentracin total
de polifenoles por el mtodo de Folin [mg/L GAE] y se caracteriza cuali-cuantitativamente
por HPLC-DAD.
Los microorganismos se cultivan en MVS pH 4.5. El MVS se suplementa con FBP a
idntica concentracin que la presente en el vino (1X), cuatro (4X) y ocho (8X) veces
concentrada. Se evalu la velocidad de crecimiento (max) y la diferencia entre viabilidad
final e inicial (A=Log N-N0). El contenido total de compuestos fenlicos de FBP-M1, FBPC1, FBP-T, FBP-M2 y FBP-C2 fue de 317,2; 229,4; 298,1; 249,97; 214,04 mg/L,
respectivamente. En MVS, L. hilgardii 5w, 6F y X1B y P. pentosaceus 12p crecen con una
max de 0,057; 0,086; 0,016 y 0,010 h-1 y un A de 1,65; 1,27; 0,460 y 0,286 Log ufc/mL
respectivamente. En presencia de FBP 1X de todos los varietales ensayados no se
observa modificacin significativa en el crecimiento microbiano respecto al control.
La FBP obtenida de todos los vinos ensayados produce la inhibicin y muerte de P.
pentosaceus a concentracin 4 y 8X.
La FBP-M2 produce la inhibicin y muerte de todos los microorganismos ensayados a
concentracin 8X. Idntico resultado se observa con la concentracin 4X excepto para
L.hilgardii 5w, cuyo crecimiento no es afectado.
La FBP-C1 a 4 y 8X produce inhibicin sin muerte de las 3 cepas de L. hilgardii
ensayadas.
La mayor actividad inhibitoria de la fraccin FBP-M2 podra estar relacionada a la
presencia del cido sirngico y miricetina y al mayor contenido de resveratrol, flavanoles,
flavonoles y dihidroflavonoles.
Entre las FBP obtenidas de Cafayate, el mayor efecto inhibitorio de la FBP-C1 sobre las 3
cepas de L. hilgardii ensayadas podra estar relacionado a la mayor concentracin de los
cidos
hidroxicinmicos
trans-cafeico
y
trans-cutrico.

P - 118
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: TOLAY, D.; RUEDA, J., ANCASI, G., SORIA, L.
Institucin: FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS - UNIVERSIDAD NACIONAL DE JUJUY

DETERMINACIN DE LA POTABILIDAD DEL AGUA DE CONSUMO POR METODOS

RAPIDOS Y CONVENCIONALES EN EL DEPARTAMENTO DE SAN ANTONIO JUJUY
ARGENTINA.
La Organizacin de las Naciones Unidas declar en el ao 2010 el derecho humano al
acceso de agua segura y a dispositivos bsicos de higiene. Si bien se han logrado
adelantos importantes en el cumplimiento de esta declaracin, an existen regiones que
adolecen de tales derechos. Se conoce un gran nmero de enfermedades infecciosas
transmitidas a travs de suministros de aguas inseguras contaminadas con materia fecal
humana o animal. Las provincias del Norte Argentino presentan altas tasas de
enfermedades gastrointestinales de origen diarreico y una marcada diferencia en el
acceso al agua potable y a dispositivos de saneamiento. El departamento de San Antonio,
al sur de la provincia de Jujuy, demuestra estas particularidades. La zona poblada, de
caractersticas urbanas, se abastece de agua red de una pequea y precaria planta
potabilizadora, mientras que, la zona rural es abastecida de agua mediante una cisterna
municipal y almacenada en reservorios domiciliarios. La Norma Sanitaria Argentina
establece parmetros de adecuacin en las caractersticas microbiolgicas que debe
reunir el agua destinada para el consumo humano. Se propuso evaluar las caractersticas
bacteriolgicas del agua potable distribuida en la zona urbana y rural del departamento de
San Antonio de la Provincia de Jujuy en el periodo estival. Se recolectaron un total de 79
muestras de agua de red y de los reservorios domiciliarios conforme a las caractersticas
urbanas y rurales de la zona. El recuento de microorganismos Aerobios Mesfilos y la
presencia de Pseudomona aeruginosa se determinaron mediante tcnicas
convencionales, mientras que el anlisis del grupo Coliformes y E. coli se efectuaron
mediante mtodos enzimticos de respuesta cromognica y fluorescente,
respectivamente. De un total de 47 muestras extradas de los reservorios domiciliarios,
53,2% de las muestras analizadas excedieron el lmite establecido por el Cdigo
Alimentario Argentino para el recuento Coliformes totales, 23,4% evidenciaron la
presencia de E. coli y un 51,1% de las muestras excedieron el lmite permitido para
Aerobios Mesofilos. Esto represent una diferencia significancia (p<0,05) en la
contaminacin detectada de las muestras provenientes de los reservorios de la zona rural
sobre aquellas muestras de red provenientes de la zona urbana. No se detect la
presencia de Pseudomona aeuriginosa pero si especies relacionadas al gnero. La
contaminacin fue consecuencia de la mala preservacin e higiene de los recipientes de
recoleccin domiciliaria. El mtodo para la deteccin de Coliformes y E. coli demostr ser
rpido y preciso, puesto que a travs de reacciones enzimticas especficas se pudo
obtener resultados en menos de 24 horas. Estos resultados demuestran la importancia de
focalizar acciones en sanear y gestionar la higiene hdrica en el Departamento de San
Antonio, especialmente en la zona rural, en las que an carecen de acceso al agua
segura
y
a
dispositivos
de
tratamiento
de
efluentes.

P - 119
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Jurez, M; Poma, H; Rajal, V
Institucin: Instituto de Investigaciones para la Industria Qumica (INIQUI-CONICET, UNSa)

RELEVAMIENTO DE LA CONTAMINACIN PARASITARIA EN AGUAS DE CONSUMO

DE LA PROVINCIA DE SALTA, ARGENTINA
La legislacin vigente para el control microbiolgico de agua de consumo no contempla la
bsqueda de virus ni de parsitos patgenos para el hombre. Si bien los mtodos de
potabilizacin vigentes para la remocin de bacterias de agua logran eliminar la gran
mayora de las formas parasitarias debido a su mayor tamao, algunos elementos de
resistencia de estos organismos son resistentes a tratamientos de cloracin. Estos
elementos constituyen una amenaza para la salud humana cuando el agua proviene de
redes y su concentracin de cloro final no es suficiente para la inactivacin de posibles
contaminaciones con los mismos. Otro tipo de riesgo lo constituye el agua proveniente de
pozos poco profundos de zonas rurales, en donde es muy comn realizar perforaciones
manuales para alcanzar las napas subterrneas y bombear el agua hacia la superficie.
Esas aguas son susceptibles de contaminarse de varias formas.
El objetivo del presente trabajo fue cuantificar los elementos parasitarios presentes en
agua de consumo humano de la Provincia, comparando muestras de red domiciliaria con
muestras de pozos rurales poco profundos.
Para ello se colectaron muestras de 20 l de agua de consumo humano de seis puntos
localizados en diferentes puntos de la Provincia de Salta: en la Capital, en una localidad
ubicada al norte (Vaqueros) y en otra al sur (San Luis), considerando dos fuentes muy
usadas para la obtencin de este recurso: red domiciliaria y pozo poco profundo. En los
puntos seleccionados se colectaron muestras tanto en poca seca (otoo e invierno)
como en poca hmeda (verano y primavera). Se utilizaron las tcnicas de ultrafiltracin
en mdulo de fibra de hueca para la concentracin de las muestras (400 veces) y
microscopa ptica (tcnica Gold Standard para la bsqueda de parsitos intestinales) con
cmara de Neubauer para la cuantificacin de los elementos.
Los resultados obtenidos muestran variedad de gneros de protozoarios presentes en las
muestras de agua tanto de pozo como de red, entre los que se encontraron Giardia
lamblia, quistes y trofozoitos de amebas, quistes de Acanthamoeba sp., quistes de
Balantidium coli, quistes de Chilomastix mesnilii y quistes de Blastocystis hominis. Solo en
aguas de pozo se encontraron helmintos: huevos de Ascaris lumbricoides, larvas de
nemtodes y solo en una de las muestras se encontr una cantidad elevada de huevos de
ancylostomdeos.
Concluimos que aunque en general las parasitosis ms comunes transmitidas por el agua
de consumo son la giardosis y la cryptosporidiosis, se han encontrado en muestras de
agua de consumo de la provincia elementos que constituyen elevado peligro para la salud
humana
tales
como
los
huevos
de
ancylostomdeos.

P - 120
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: LARROSA, N.; BRIGANTE, N.; FRIGERIO, S.; ORIGLIA, F.; BAZN, R.; LPEZ, A.
Institucin: Facultad de Ciencias Exactas, Fsicas y Naturales - Universidad Nacional de Crdoba

Calidad microbiolgica del agua del embalse Los Molinos (Crdoba, Argentina) evaluada
para actividades de recreacin
La determinacin de indicadores microbiolgicos de contaminacin es importante para
prevenir enfermedades de origen hdrico transmitidas por diferentes patgenos. En
general, estas enfermedades son transmitidas por la ruta fecal-oral como principal va de
infeccin, aunque otras vas como odos, ojos, cavidad nasal y tracto respiratorio superior
son vulnerables al contacto de aguas contaminadas. El embalse Los Molinos es un
cuerpo de agua de usos mltiples y la segunda fuente de abastecimiento de agua potable
de la ciudad de Crdoba. Adems, es uno de los sitios tursticos ms destacados de la
regin, elegido para el desarrollo de actividades recreativas y pesqueras. En los ltimos
10 aos se ha evidenciado un importante crecimiento urbano en la zona del perilago,
destinado fundamentalmente al turismo. El objetivo de este trabajo fue evaluar la calidad
bacteriolgica del agua del embalse Los Molinos y su aceptabilidad para uso recreativo, a
travs de la investigacin de los principales indicadores de contaminacin microbiolgica.
Materiales y Mtodos: Se efectu el seguimiento de tres playas del embalse, Baha El
Negro, Valle Fantstico y Solar del Lago. Las mismas fueron elegidas debido a que
reciben un importante nmero de baistas en poca estival. El monitore se realiz
durante tres temporadas: 1) diciembre de 2010 a marzo 2011, 2) diciembre de 2011 a
marzo de 2012 y 3) diciembre de 2012 a marzo de 2013. Las muestras de agua se
tomaron a 5 m de la costa. In situ se midieron temperatura del agua , pH, oxgeno disuelto
y transparencia mediante el disco de Secchi (m). Como indicadores bacteriolgicos se
investigaron coliformes totales (CT), coliformes termotolerantes (CTT), Escherichia coli y
Enterococos (con modificaciones) segn Standards Methods (APHA, AWWA, WEF,
2005). El anlisis estadstico de los datos se realiz con el programa InfoStat versin 2008
mediante un anlisis de varianza (ANAVA) y el test de Tukey. Las concentraciones
bacteriolgicas registradas fueron comparadas con los niveles gua de la Subsecretara
de Recursos Hdricos de la Nacin (SRHN) y de la Comisin Nacional de Medio Ambiente
de Brasil (CoNaMA). Resultados: No se observaron diferencias significativas entre las
campaas estudiadas ni entre las diferentes playas de los parmetros fsico-qumicos
(valores medios de los indicadores). Sin embargo, se observaron variaciones entre 1,8 y
1400 NMP para E. coli en la primera temporada y 1,8 y 460 NMP para Enterococos en la
ltima temporada. Por lo tanto, en las diferentes campaas, algunos sitios cumplieron con
los valores indicados por la normativa, mientras que otros no. Se concluye entonces que
existen diferentes niveles de contaminacin de acuerdo al sitio y a la temporada. En
funcin del incremento del turismo en el perilago del embalse, se manifiesta la importancia
del seguimiento continuo del mismo, sobre todo en pocas estivales, que aporten
herramientas
para
la
gestin
y
conservacin
del
recurso.

P - 121
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: LPORE C, DEL OLMO A, YORIO D, COSSAVELLA A, LPEZ A
Institucin: Instituto de Ciencia y Tecnologa de los Alimentos Universidad Nacional de Crdoba

Monitoreo de calidad microbiolgica del agua utilizada para riego en la zona periurbana
del Gran Crdoba: Canal Maestro Norte
La contaminacin de fuentes de agua es una problemtica regional en todo el mundo. Es
consecuencia del aumento de la poblacin de las ciudades que nacieron a orillas de los
mismos y del desarrollo industrial. La mayora de las fuentes de agua se ven afectadas
por la presin antropognica, los patrones climticos, la presencia de animales, y las
prcticas agrcolas. El destino y el transporte de microorganismos patgenos indicadores,
en aguas de riego, son de suma importancia para identificar los riesgos de contaminacin
en determinados sitios relacionados con un tipo de produccin especfica y la gestin de
riego utilizada. El objetivo del trabajo fue evaluar el estado sanitario del agua en los
canales troncales de riego del rea periurbana de Crdoba, a travs del diseo de un
sistema de monitoreo y determinaciones de indicadores microbiolgicos. Materiales y
Mtodos: Se realiz un relevamiento digital de los canales maestros norte y sur utilizando
el programa Google Earth versin 6.2 desde su nacimiento en el dique Mal Paso hasta las
zonas rurales. Para la determinacin de bacterias coliformes totales (CT), coliformes
termotolerantes (CTT) y Escherichia coli se emple la tcnica de fermentacin en tubos
mltiples, expresndose los resultados como Nmero Ms Probable por 100 mL de
muestra (NMP/100 mL) segn el Standard Methods (APHA, AWWA, WEF, 2005). Se
utiliz caldo Azida-Dextrosa para determinar Enterococos fecales. Los tubos con
desarrollo positivo, se inocularon en agar Bilis- Esculina- Azida y fueron confirmados en
caldo Infusin Cerebro-Corazn con NaCl. Para la determinacin de huevos de parsitos
se sigui el mtodo de Bailenger. Para detectar presencia de Salmonella spp. se utiliz la
tcnica descripta en el Standard Methods. El anlisis estadstico de los datos se realiz
con el programa InfoStat 2008 mediante un anlisis de varianza (ANAVA) y el test de
Tukey. Resultados: Se seleccionaron tres puntos de muestreo en el canal maestro norte
(CMN), el Dique Mal Paso (CMN 1), cercanas del aeropuerto (CMN 2) y en barrio
Guiazu (CMN 3). Resultados y conclusiones: El anlisis estadstico mostr que no hubo
diferencia significativa entre los recuentos de Enterococos, CT, CTT y E. coli en cada
punto de muestreo. Si pudo observarse, que los recuentos microbianos se redujeron
significativamente en el CMN 3 con respecto a los dos anteriores (CMN 1 y CMN 2). Los
valores medios obtenidos fueron de 2100 NMP en los recuentos de E. coli y en el CMN 3,
mientras que se determin un NMP de 5626 y 5400 en el CMN 2 y CMN 1
respectivamente. No se encontraron huevos de helmintos ni presencia de Salmonella spp.
en ninguna de las muestras analizadas. Se concluy que la calidad del agua del CMN es
variable, debido a probables fuentes de contaminacin exgenas y que no cumplieron con
los parmetros indicados por la OMS/1996 ni el decreto provincial 415/99.

P - 122
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Lsch, L..; Tracogna, M.; Gariboglio Vzquez, M.; Merino, L.
Institucin: 1-Facultad de Medicina- U.N.N.E.- 2-Instituto de Medicina Regional-U.N.N.E-

DETECCIN DE GENES DE VIRULENCIA DE Escherichia coli ENTEROAGREGATIVA

EN FUENTES DE AGUA SUBTERRNEAS DEL OESTE DE LA PROVINCIA DEL
CHACO, ARGENTINA
En la Provincia del Chaco el 58,6% de los hogares tienen acceso al sistema de
distribucin del agua potable dentro de la vivienda, para el resto el agua subterrnea
representa una fuente alternativa y muchas veces nica para el consumo humano.
Escherichia coli enteroagregativa (ECEA) es considerada un patgeno emergente y su
importancia en la salud pblica mundial se increment y clarific en los ltimos aos.
Agente causal de diarreas persistentes en poblacin peditrica y adulta y tanto en pases
en vas de desarrollo como industrializados el mecanismo de patognesis de este germen
no se conoce en su totalidad. Se reconoce a los alimentos y al agua como fuente de
infeccin de este patgeno.
El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de ECEA, mediante el
reconocimiento de sus factores de virulencia a travs de la tcnica de PCR, en ambientes
acuticos subterrneos destinados al consumo humano del oeste de la provincia del
Chaco.
Se analizaron 63 muestras de aguas de fuentes subterrneas destinadas al consumo
humano de la provincia del Chaco. Las muestras se procesaron por enriquecimiento
directo en medio EC doble concentracin y posterior incubacin de las mismas a 35C. A
partir de las botellas positivas se repicaron en placas de Agar Eosina Azul de Metileno las
que se incubaron a 35C durante 24 horas para la recuperacin de E. coli. Las cepas
fueron identificadas por pruebas bioqumicas clsicas. Los genes de virulencia estudiados
fueron AA probe, el activador transcripcional aggR y el de la dispersina aap. Como control
positivo se utiliz la cepa de E. coli 17-2. El protocolo de trabajo realizado fue el descripto
por Cerna y col. (J Clin Microbiol 2003; 41: 2138-2140). La electroforesis se realiz en
geles de agarosa los cuales se tieron con GelRed. El anlisis de las bandas se realiz
con el programa UVI Pro.
A partir de las 63 muestras estudiadas 27 (42,9%) resultaron positivas para E. coli. Por
PCR se detectaron 4 cepas (14,5%) en diferentes muestras portadoras de los genes
estudiados: 2 (7,4%) portaban solamente el gen aap y 2 (7,4%) slo portaba AA probe. No
se detectaron cepas con combinacin de genes.
Los resultados del presente trabajo evidencian la vulnerabilidad de las fuentes
subterrneas a la contaminacin fecal, su no aptitud para el consumo humano sin
tratamiento previo y el riesgo para la salud ante la presencia del patgeno objeto de
estudio. Si bien la tcnica de cultivo celular representa la prueba de referencia en la
identificacin de ECEA, la aplicacin de tcnicas moleculares en esta clase de muestras
ambientales proveen una alternativa eficiente en la rpida deteccin las cepas tpicas de
ECEA.

P - 123
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Gariboglio Vzquez, M.; Lsch, L.; Borges, E.; Merino, L.
Institucin: Instituto de Medicina Regional Resistencia, Chaco

DETECCION DE CAMPYLOBACTERIAS TERMOTOLERANTES AMBIENTALES: UN

VERDADERO DESAFIO
La presencia de Campylobacter termoflicos ha sido estudiada en una variedad de
ambientes acuticos entre ellos: fuentes superficiales de agua dulce, aguas subterrneas
y otras fuentes, donde cada una exhibe un patrn estacional distinto. Segn diversos
estudios, su nmero es alto en invierno y otoo pero bajo o nulo en verano y hasta fines
de la primavera. En el medio ambiente la supervivencia de estos microorganismos
depende de varios factores tales como el contenido de oxgeno, la presencia de
nutrientes, la temperatura, el pH, el tipo de agua, la exposicin a la luz, etc.
El tiempo de supervivencia reportado para poblaciones de Campylobacter presentes en
aguas ambientales vara considerablemente dependiendo del origen de las cepas, las
condiciones experimentales aplicadas, condiciones de crecimiento previo y calidad del
agua.
Ante la falta de recuperacin de estos microorganismos en muestras de ros y lagunas de
nuestra zona, se decidi estudiar el tiempo de supervivencia de campylobacterias en un
hbitat similar al natural evaluando el efecto de la temperatura, del nivel de nutrientes y
recuento de coliformes, con la supervivencia de las especies de Campylobacter termfilos
dentro del medio acutico.
Para ello se inocularon muestras de 5 litros de agua de laguna con colonias de
Campylobacter spp las cuales se mantuvieron a temperatura ambiente en la mesada del
laboratorio. Luego de 24 horas, 7, 14 y 21 das de incubacin, se aplic la metodologa de
filtracin del agua a travs de membranas utilizando filtros de 0,45 mm y 0,20 mm; se
realiz el cultivo de las mismas para enriquecimiento en caldo Bolton, y su posterior
subcultivo en medio selectivo CCDA. Tras incubacin en microaerofilia durante 48 hs se
procedi a la identificacin bioqumica de las colonias sospechosas, segn protocolos
preestablecidos.
Se observ desarrollo de campylobacterias termotolerantes hasta los 14 das, tiempo
despus del cual ya no se obtuvo crecimiento. El recuento de coliformes totales fue
creciendo con el correr del tiempo, mientras que el de Escherichia coli se negativiz al
cabo de 7 das.
Aunque estos microorganismos son sensibles a las condiciones ambientales no dejan de
ser una de las mayores causas de gastroenteritis. Es posible que las clulas
subletalmente estresadas, incapaces de crecer en medios selectivos, estn an presentes
y que estas sean las responsables de la infeccin, razn por la cual no debe dejarse de
lado la posibilidad de contaminacin del ambiente slo ante la presencia de una muestra
de cultivo negativa.
Adicionalmente pudo comprobarse que el comportamiento de los organismos indicadores
no
siempre
se
correlaciona
con
el
del
patgeno
buscado.

P - 124
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Pavan J1., Barril P1., Martnez L1., Masachessi G1., Isa M.B1., Giordano M1., Martnez
Wassaf M2., Prez V1., Rodriguez P2., Pisano M.B1., Grumelli Y2., Daz Panero M2., Aguirre B2.,
Ferreyra L1., Welter A2., Re V1-2., Nates S1.
Institucin: 1- Instituto de Virologa Dr. J.M.Vanella-Facultad de Ciencias Mdicas, Universidad
Nacional de Crdoba. 2- Facultad de Ciencias Qumicas-Universidad Catlica de Crdoba.

DISEO DE UNA ESTRATEGIA SOSTENIBLE DE MONITOREO DE CALIDAD

MICROBIOLGICA DE AGUAS SUPERFICIALES PARA IDENTIFICAR PUNTOS
FUENTES DE CONTAMINACIN.
El deterioro de la calidad microbiolgica de aguas como consecuencia de actividades
antropognicas es un problema creciente, que impacta directamente en la salud de la
poblacin expuesta. Objetivo. Disear una estrategia sostenible de monitoreo de calidad
microbiolgica del agua que tenga la robustez para identificar puntos fuentes de
contaminacin. Materiales y Mtodos: Se realiz un muestreo anual-estacional en aguas
del Ro Suqua durante el ao 2010, cubriendo desde el nacimiento del ro hasta que su
curso abandona la ciudad de Crdoba (Dique San Roque (DSR), Villa Warcalde (VW),
Vado San Antonio (VSA), Puente Zpoli (PZ), Puente Centenario (PC), Vado Sargento
Cabral (VSC) y Cantera San Jos (CSJ). Las muestras de agua (n=32) fueron analizadas
para parmetros fsico-qumicos (pH, slidos totales, cloruros, oxgeno disuelto -OD-,
demanda qumica de oxgeno -DQO-, demanda biolgica de oxgeno -DBO5-, nitritos,
nitratos, amonio total y ortofosfatos) y microbiolgicos (coliformes totales y fecales,
enterovirus viable, genoma de rotavirus y norovirus y cuantificacin genmica de
rotavirus). Los datos fueron procesados por tcnicas de anlisis multivariado. Resultados.
El anlisis factorial retuvo dos componentes principales. El primero explic el 88,8 % de la
variabilidad de los datos, agrupando la covariacin y relacin directa entre los parmetros
cloruros, coliformes fecales y totales, DBO5 y amonio. En el grfico biplot estas variables
agruparon con los puntos de muestreo PC y CSJ, que correspondieron a sitios de vertido
de efluentes de plantas de tratamiento cloacal. En contrapartida, el OD se correlacion
negativamente a las anteriores variables y en el biplot agrup con los puntos de muestreo
DSR, VW, VSA, PZ y VSC. Este resultado permiti la seleccin de los parmetros
coliformes totales y fecales, DBO5 y OD para un anlisis discriminante, el que seal 3
sitios diferenciados de calidad de agua (DSR, PC y CSJ) (p=0,002; R2=0,75). El anlisis
cualitativo de virus identific enterovirus viable y genoma de rotavirus y norovirus en todos
los puntos de muestreo durante todo el ao y el anlisis cuantitativo de rotavirus no
mostr diferencias significativas por sitio de muestreo. Conclusiones. El anlisis
multivariado utilizado permiti el diseo de una estrategia sostenible de monitoreo,
identificando similitud de calidad de agua entre puntos de muestreo y puntos fuentes de
contaminacin. El anlisis seleccion las variables para la evaluacin de calidad
microbiolgica del agua del ro Suqua y redujo a tres el nmero de sitios a muestrear:
DSR, PC y CJS. La actividad viral no se correlacion con variables bacteriolgicas,
comportndose los enterovirus, rotavirus y norovirus como agentes infecciosos ubicuos en
aguas del ro. Cualquiera de ellos puede ser seleccionado para identificar aguas
superficiales como fuente potencial de transmisin hdrica viral a poblacin expuesta, pero
ninguno
seala
puntos
fuentes
de
contaminacin.

P - 125
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Rolln, M, Strasorier, S., Giraudo, F., Ruiz, S.
Institucin: Universidad Catlica de Crdoba

AISLAMIENTO DE BACTERIAS POTENCIALMENTE PATGENAS DE LA MOSCA

COMN (Musca domstica L.) QUE SE ENCUENTRA EN AMBIENTES
CONTAMINADOS DE LA LOCALIDAD DE SALSIPUEDES, CRDOBA, ARGENTINA
Introduccin: La Musca domstica L., es un insecto cosmopolita que vive asociado al
hombre y a los animales domsticos, siendo un potencial vector de diversos
microorganismos entre los cuales se hallan las bacterias patgenas. Objetivo: Demostrar
la presencia de patgenos bacterianos trasportados por la Musca domstica L. que se
encuentra en un basural a cielo abierto y en los alrededores de un criadero de pollos de la
localidad de Salsipuedes, provincia de Crdoba, entre marzo de 2013 y febrero de 2014.
Material y Mtodos: Estudio descriptivo exploratorio transversal. Se cuantific el ndice de
infestacin de cada zona. Se tom una poblacin de estudio de 50 moscas adultas en
cada rea, empleando un dispositivo ambulatorio de malla fina. Estas se colocaron en un
frasco estril y se conservaron a temperatura ambiente hasta su traslado al laboratorio.
Para el aislamiento de las bacterias se procedi a colocar las moscas en Caldo Tripticasa
Soya, para luego sembrar por duplicado, tanto el lquido de lavado de las moscas como
su macerado, en medios de enriquecimiento (Caldo Selenito) y medios selectivos (Agar
Mc Conkey, Agar EMB, Agar SS, Agar Chapman y medio diferencial para E. coli 0157).
Posteriormente desde el Caldo Selenito se repico en Agar SS. La identificacin se realiz
por pruebas bioqumicas convencionales. Resultados: El ndice de infestacin en las
zonas fue alto (mayor de 20 moscas / hora de observacin). Se procesaron un total de
100 moscas, obtenindose los mismos gneros bacterianos tanto en el sobrenadante de
lavado como en el macerado. En las moscas procedentes del basural se aisl: Klebsiella
oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Escherichia coli O157, Acinetobacter
spp., Citrobacter freundii, Proteus spp, Salmonella spp., Estafilococos coagulasa
negativos, Yersinia spp., Shigella spp, Pseudomonas aeruginosa, Enterococos y otros
Bacilos Gram Negativos No Fermentadores. En los alrededores del criadero de pollo se
encontraron las mismas bacterias enunciadas precedentemente, adems de
Staphylococcus aureus. Conclusiones: De los resultados obtenidos queda demostrada la
presencia de enteropatgenos en moscas domsticas que se encuentran en ambientes
contaminados de la localidad de Salsipuedes. Si bien responsabilizarla como vector
mecnico de las enfermedades trasmitidas por alimentos es difcil, ya que se sabe que al
aislar los patgenos se demuestra que existe una carga microbiana pero esto no nos
confirma si verdaderamente es la responsable de la transmisin, el aislamiento de
bacterias patgenas permite evaluar los riegos que pueden representar las moscas para
la salud pblica en reas urbanizadas cercanas a ambientes contaminados, por estar en
contacto
directo
con
la
poblacin.

P - 126
rea: Microbiologa de alimentos
Autores: Streitenberger M.; Kopprio G.; Lara R.; Baldini M.
Institucin: Departamento de Biologa, Bioqumica y Farmacia, Universidad Nacional del Sur.
Instituto Argentino de Oceanografa, CONICET. Baha Blanca.Provincia de Buenos Aires.

EVALUACIN DE LA POLUCIN FECAL EN ROS NORPATAGNICOS USANDO

INDICADORES BACTERIOLGICOS
El ro Negro (RN), el ms caudaloso de la Patagonia (762,5 ms-1), alcanza el ocano
Atlntico tras recorrer 730 km y no recibe ningn afluente. Es navegable desde su
desembocadura hasta la confluencia de los ros Limay y Neuqun que le dan origen. Su
aprovechamiento para actividades recreacionales y riego es muy importante. Adems se
utiliza como receptor de las cloacas de numerosas poblaciones establecidas en sus
mrgenes (Gral. Roca, Viedma, Patagones). El ro Colorado (RC) (130 m s -1) nace en la
Cordillera de los Andes, desemboca en el mar Argentino y seala el lmite norte de la
Patagonia. Sus aguas son la fuente de suministro de 150.000 pampeanos y de
poblaciones menores de Neuqun, Rio Negro y Bs. As. Tambin se utiliza para
actividades recreativas y riego. Si bien son importantes recursos hdricos en la franja
semirida Norpatagnica, son sistemas poco estudiados desde el punto de vista
bacteriolgico.
El objetivo del trabajo fue evaluar la calidad bacteriolgica de los cursos mencionados,
desde el punto de vista de la contaminacin fecal y determinar si son aptos para los usos
que se les da.
Entre noviembre de 2013 y marzo de 2014 se realizaron muestreos mensuales de agua.
Se ubicaron siete estaciones sobre el RC y diez en el RN, desde sus desembocaduras
hasta 30 kilmetros aguas arriba. Se buscaron coliformes fecales (CF) (tcnica de filtro de
membrana y siembra en medio ENDO) y bacterias hetertrofas, mesfilas en PCA (HM).
Se registr in situ temperatura del agua.
En todas las estaciones del RN el promedio de CF fue menor de 100 UFC.100ml-1,
excepto en la estacin 8 (desage de la Planta de tratamiento de lquidos cloacales de
Patagones) donde los valores alcanzaron 40000 UFC.100ml-1, y con grandes
fluctuaciones. La misma tendencia se vio en las HM donde los valores promedio
estuvieron en 1000 UFCml-1con un mximo de 350000 (est.8). Las temperaturas
fluctuaron entre 19 (noviembre) y 26C (enero), entre los sitios de muestreo se
mantuvieron bastante regulares, si bien las estaciones ms cercanas al mar fueron dos
grados ms fras. En el RC las temperaturas variaron entre 22 (noviembre) y 25C
(enero). Los valores promedio de CF, en todas las estaciones de muestreo, estuvieron por
debajo de las 100 UFC. 100ml-1, si bien en una oportunidad alcanzaron 440.UFC. 100ml1 (est.5). El valor mximo de las HM fue de 9800 UFC.ml-1 (est.4, Fortn Mercedes) si
bien en promedio se mantuvieron entre 200 y 900 UFC ml-1 (est.6 y 3 respectivamente).
Se concluye que ambos ros en el tramo estudiado, presentan una calidad bacteriolgica
compatible con los usos que se les da (riego: 1000 CF 100 ml-1, uso recreacional:
Escherichia coli: 126 UFC 100ml-1). Excepto la est. 8 del RN que coincide con la Planta,
cuyos valores oscilan notablemente, lo que sugiere un funcionamiento deficiente de la
misma. Los estudios de calidad de aguas tienen como propsito aportar herramientas de
decisin a la gestin de la calidad de los recursos con miras a su preservacin.

P - 127
rea: Microbiologa de medicamentos y cosmticos
Autores: Pussetto, L.; Basualdo, C.; Maas Torres, F.
Institucin: Universidad Nacional de Ro Cuarto

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE UN EXTRACTO ETANLICO

DE ROMERO (Rosmarinus officinalis L.)
Desde la antigedad, las plantas han representado la nica fuente de principios activos
para el tratamiento de las enfermedades que afectan a los seres humanos. De acuerdo a
la Organizacin Mundial de la salud, aproximadamente el 65% de la poblacin mundial
emplea plantas medicinales para el cuidado de la salud. Si bien las propiedades
biolgicas del Romero han sido extensamente estudiadas, su potencial actividad
antimicrobiana no ha sido completamente caracterizada. Cinco gramos de hojas secas de
romero fueron sometidos a extraccin con 100 ml de etanol al 80% durante cinco das.
Este extracto se concentr en rotaevaporador hasta secarlo totalmente y finalmente se
disolvi en DMSO a una concentracin de 20 mg/ml. Las cepas utilizadas para evaluar la
actividad antimicrobiana del extracto etanlico de Romero fueron Escherichia coli,
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Pseudomonas aeruginosa, cedidas
por el Departamento de Microbiologa; y Escherichia coli (FV 10188), provista por el
Departamento de Anatoma, ambos departamentos pertenecientes a la Universidad
Nacional de Ro Cuarto. La actividad antibacteriana del extracto de Romero se evalu
empleando la tcnica de difusin en pozo en agar. En pocillos de 6 mm en el Agar
Meller-Hinton (AMH) de cada placa se adicionaron 50 l del extracto de Romero, e
idntico volumen de DMSO como control del vehculo. Finalmente, las placas se
incubaron a 37C durante 24 horas. La prueba se realiz por duplicado. La determinacin
de la CIM se realiz por el mtodo de microdilucin en caldo (CMH), en placas de 96
pocillos, empleando diez diluciones seriadas del extracto. La CIM se determin como la
mnima concentracin del extracto que inhibe el crecimiento bacteriano y se expres en
g/ml. Para la determinacin de la CBM, se tomaron 200 l de todos pocillos de las placas
y se realiz una siembra en superficie, en AMH. En todos los casos, los ensayos se
realizaron por triplicado. Los resultados obtenidos indican la existencia de actividad
antimicrobiana para el extracto de Romero frente a S. aureus y S. epidermidis mediante el
ensayo de difusin en agar, obtenindose halos de inhibicin de 9 y 10 mm
respectivamente. Se obtuvo una CIM de 312,5 g/ml y una CBM de 1250 g/ml para el S.
aureus; mientras que para el S. epidermidis, los valores fueron de 312,5 y 2500 g/ml
para la CIM y CBM respectivamente. En su conjunto, los resultados obtenidos sugieren
que el extracto etanlico de Romero tendra actividad antimicrobiana frente a las bacterias
Gram positivas S.aureus y S. epidermidis a las concentraciones sealadas. Es necesario
ampliar el nmero de microorganismos ensayados, y realizar pruebas toxicolgicas para
descartar que las concentraciones con actividad antimicrobiana tengan posibles efectos
txicos
en
clulas
eucariotas.

P - 128
rea: Microbiologa de medicamentos y cosmticos
Autores: GUTIRREZ, C.(1,2); RODRGUEZ-LLAMAZARES, S.(1); VALENZUELA, C.(1);
Institucin: 1. Centro de Investigacin de Polmeros Avanzados, CIPA, Beltrn Mathieu 224, Piso
2, Concepcin, Chile 2. Universidad de Concepcin, Facultad de Ciencias Biolgicas, Concepcin,
Chile

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE FILMS EN BASE A ALMIDN CON EXTRACTOS DE

HOJAS DE UGNI MOLINAE TURCZ.
Introduccin: Los diversos compuestos fenlicos, terpenos y taninos (principalmente
flavonoles glicosilados y flavan-3-ol) presentes en las hojas de murta (Ugni molinae
Turcz.) poseen potencial como agentes antioxidantes y antimicrobianos. El objetivo de
este trabajo fue estudiar la capacidad antimicrobiana de extractos de murta y films de
almidn/extractos de murta frente a Staphylococcus aureus. Metodologa: Hojas de murta
secas fueron extradas con etanol-acuoso 50%. El extracto fue separado del solvente
mediante rotavapor, resuspendido en agua y finalmente liofilizado, obteniendo un extracto
crudo (C). El extracto C fue fraccionado mediante extraccin lquido/lquido obtenindose
una fraccin orgnica (O). A los extractos C y O se les midi la actividad antioxidante a
travs de su contenido de polifenoles totales (mtodo Folin-Ciocalteu), los que fueron
expresados como cido glico equivalente (GAE). La actividad antimicrobiana frente a
Staphylococcus aureus ATCC 25923 fue determinada por mtodo de difusin del disco
utilizando penicilina como patrn. Los extractos fueron incorporados a una matriz
polimrica de almidn/glicerol (60:40) para formar los films de almidn (AG),
almidn/extracto C (AGC) y almidn/extracto O (AGO). A los films se les determin la
concentracin de polifenoles totales liberados al ser almacenados en agua durante 24
horas; adems se determin la actividad antimicrobiana por difusin y la capacidad
antiadherente de los films, mediante observacin por microscopa electrnica de barrido.
Resultados: El contenido de polifenoles totales del extracto C fue 132,286 20,8 mg
GAE/g de extracto, con un halo de inhibicin de 11% utilizando penicilina como patrn. El
extracto O mostr un contenido polifenlico total de 160,195 30,2 mg GAE/g de extracto,
con un porcentaje de inhibicin de 23% con respecto a la penicilina. De los films obtenidos
AG, AGC y AGO se logr recuperar por extraccin acuosa 0,21 0,11 mg GAE/g film,
13,13 0,83 mg GAE/g film y 2,11 0,2 mg GAE/g film, respectivamente. Los films AG,
AGC y AGO frente a la inhibicin de S. aureus, por la tcnica de difusin, no presentaron
halo de inhibicin, entendiendo que los compuestos liberados desde el film no son
capaces de difundir en el agar tripticasa. En el ensayo de adherencia de S. aureus a los
films AG, AGC y AGO, se observ que en las 3 mezclas ensayadas existe formacin de
biofilm, es decir, adherencia bacteriana a la superficie del material, por lo que la
concentracin de extracto incorporado no tiene efecto sobre la completa inhibicin de la
adherencia bacteriana. Conclusin: Se evidencia la actividad inhibitoria de los extractos
de murta (Ugni molinae Turcz.) frente a S. aureus. El film de almidn/extracto O es el que
present un menor desarrollo de biofilm.
Se agradece el financiamiento de este trabajo a CIPA, CONICYT Regional R08C1002 y a
CONICYT-PCHA/Doctorado
Nacional/201221120911

P - 129
rea: Microbiologa industrial
Autores: Avaro, M.; Benzzo, M.; Isla, M.; Comelli, R.
Institucin: Facultad de Ingeniera y Ciencias Hidricas (FICH) - Universidad Nacional del Litoral
(UNL)

COMPARACIN DEL DESEMPEO DE DIFERENTES CEPAS DE LEVADURAS EN LA

PRODUCCIN DE BIOETANOL A PARTIR DE EFLUENTES PROVENIENTES DE LA
INDUSTRIA DE BEBIDAS GASEOSAS.
La industria de bebidas gaseosas comercializa aprox. 5000 millones de litros/ao.
Alrededor del 5% de este volumen es descartado por problemas de calidad (producto
rechazado durante el proceso de elaboracin, devuelto desde gndola por falta de gas o
cumplimiento de la fecha de vencimiento). Estos efluentes poseen una elevada
concentracin de azcares simples (10-12 % m/v), representando un sustrato novedoso
para la produccin de bioetanol, biocombustible empleado para el corte obligatorio de las
naftas (segn Ley 26.093).
El objetivo del presente trabajo fue comparar el desempeo de diferentes levaduras como
productoras de bioetanol por fermentacin de los efluentes lquidos provenientes de la
industria de bebidas gaseosas.
La metodologa consisti en el aislamiento previo de levaduras a partir de efluentes
industriales (cervecera, sidra y alcoholeras) y la purificacin de levaduras liofilizadas
comerciales. Los ensayos de fermentacin batch se realizaron en reactores de vidrio de
500 mL durante 12 horas, sobre medios sintticos de composicin similar a las gaseosas
y suplementados con nutrientes adecuados. Los reactores se inocularon con una biomasa
inicial de 2 g/L. Se determinaron las concentraciones de azcares (espectrofotometra),
biomasa (turbidimetra), etanol (dispositivo basado en un sensor de SnO2) y glicerol
(mtodo enzimtico-colorimtrico). Luego, se evalu el desempeo de las cepas
seleccionadas sobre efluente real (mezcla de gaseosas en funcin de los volmenes de
produccin). Se utiliz la cepa Saccharomyces cerevisiae var. Windsor como control [C],
utilizada en estudios previos donde se demostr la factibilidad tcnica del proceso
propuesto, con excelentes resultados.
Se seleccionaron seis de las catorce cepas evaluadas inicialmente en funcin del anlisis
de diferentes parmetros, siendo el rendimiento en etanol (Ye) el ms relevante: una
aislada de efluentes de planta productora de bioetanol (PdB) y cinco disponibles en el
mercado para la elaboracin de sidra (CY), cervezas (BP y S-23) y vinos espumantes (G3
y G89). Se obtuvieron los siguientes Ye (g bioetanol/g azcar consumido): G89= 0,51; S23= 0,51; CY= 0,48; PdB= 0.48; G3= 0.44, BP= 0.41 y C= 0.41, es decir, cinco de las seis
cepas seleccionadas en el screening mostraron un rendimiento mayor en bioetanol
respecto a la control, siendo muy interesante el desempeo de las cuatro primeras de la
lista. El consumo de azcares fue total en todos los casos. La produccin de glicerol fue
similar para todas las cepas, detectndose diferencias principalmente en los rendimientos
en biomasa.
Los resultados indican que es posible mejorar la produccin de bioetanol por m3 de
efluente de la industria de bebidas gaseosas, restando an profundizar el estudio del
desempeo de las cepas de levaduras ante variaciones en las caractersticas
fisicoqumicas del efluente (pH, presencia de conservantes, etc.), requerimientos
nutricionales
y
condiciones
operativas
de
la
fermentacin.

P - 130
rea: Microbiologa industrial
Autores: Decarlini M, Aimar M, Vzquez A, Rustan M, Peralta N, Mattos M.
Institucin: Facultad de Ciencias Qumicas- Universidad Catlica de Crdoba

BIO-REDUCCION ESTEREOSELECTIVA DE ACETOFENONA A (+)-(R)-1FENILETANOL CATALIZADA POR ESPECIES DEL GENERO Candida.
Introduccin: La reduccin estereoselectiva de cetonas proquirales es una de las
reacciones ms importantes de la Qumica Orgnica. Mediante estas transformaciones es
posible la obtencin de alcoholes enantiomricamente puros los cuales son precursores
claves en la sntesis de compuestos de inters farmacutico. Una de las formas preferidas
de realizar esta transformacin es a travs de la utilizacin de procesos biocatalticos
empleando diversos microorganismos. Estos sistemas biocatalticos tienen la ventaja de
ser ambientalmente amigables comparados a los mtodos clsicos de sntesis que en
general utilizan metales pesados, auxiliares quirales y solventes orgnicos bajo atmsfera
de hidrgeno.
Objetivo: Encontrar especies de Candida (C.) que permitan reducir estereoselectivamente
a la acetofenona y, de esta forma, producir 1-feniletanol enantiomricamente puro.
Materiales y mtodos:
a) Microorganismos ensayados: C. albicans ATCC 10231 y ATCC 982891; C. krusei
ATCC 6258; C. parapsilosis ATCC 22019; C. guilliermondii DMic* 021150; C. tropicalis
DMic *103767 y NCPF 3111.
b) Desarrollo del microorganismo: Medio de cultivo: caldo GPY. Temperatura: 30C.
Agitacin: 100 rpm. Tiempo de incubacin: 48 hs. Separacin de los microorganismos por
centrifugacin a 2000 rpm.
c) Sistema de bio-reduccin: Todos los ensayos se realizaron por duplicado. Condiciones
de reaccin: 2 g de la levadura (peso hmedo); 80 ml de buffer fosfato 0,05 mM pH 7,0;
50 mg de acetofenona (disuelta en 1 ml de dimetilsulfxido); 30C, agitador orbital a 100
rpm; 7 das de reaccin. Extraccin con acetato de etilo y anlisis por GC-FID y GC-MS
frente a testigo.
Resultados: Con C. albicans ATCC 10231 y ATCC 982891 y C. krusei ATCC 6258 no se
observ reaccin de reduccin. Con C. parapsilosis ATCC 22019 se observ 9% de
reduccin con 85% de exceso enantiomrico (% ee). Con C. guilliermondii se observ
40% de reduccin con 38% ee. Con C .tropicalis DMic 103767 se observ 13% de
reduccin con 99% ee y con C. tropicalis NCPF3111 se observ 40% de reduccin con
100% ee. Es de destacar que todas las cepas de Candida que presentaron capacidad
reductiva lo hicieron con estereoselectividad hacia el enantimero R (en desacuerdo con
la regla de Prelog). Este hecho resulta significativo ya que la mayora de los reportes
descritos en literatura cientfica se observa la preferencia hacia la formacin del
enantimero S.
Conclusiones: C. tropicalis NCPF311 result ser el microorganismo ms eficiente para la
reduccin estereoselectiva de acetofenona a (+)-(R)-1-feniletanol. Actualmente se estn
realizando estudios para optimizar las condiciones de reaccin y as poder mejorar los
rendimientos de reduccin sin perder la excelente estereoselectividad presentada por esta
levadura.
*
Coleccin
INEI
Dr.
Carlos
G.
Malbrn

P - 131
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Aguirre,G.1; Caccia, M. 1; Lorenzutti, M.1,2; Bonetto, C. 1; Fernandez, M. 1; Frizzo,
L.S.3,4; Litterio, N.J.2
Institucin: 1 Universidad Nacional de Villa Mara. Instituto de Cs. Bsicas y Aplicadas Carrera de
Veterinaria. 2 Universidad Catlica de Crdoba. Facultad de Cs Agropecuarias, carrera de
Veterinaria.3 Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Cs. Veterinarias. Departamento de
Salud Pblica Veterinaria. 4 Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICiVet LitoralCONICET/UNL).

MASTITIS BOVINA POR Staphylococcus aureus EN LA PROVINCIA DE CRDOBA,

ARGENTINA: PREVALENCIA Y PERFILES DE SUSCEPTIBILIDAD CUANTITATIVA
ANTIMICROBIANA
Debido a que la mastitis bovina es una enfermedad que conlleva a grandes prdidas
econmicas y su control con antimicrobianos (ATMs) en general es desmedida e
irracional, en el presente trabajo se estim la prevalencia de la infeccin intramamaria por
S. aureus en la leche de vacas de tambos localizados en la provincia de Crdoba
(Argentina) y se evalu el perfil de sensibilidad / resistencia para ATMs de uso frecuente
en produccin lechera regional. De 390 vacas en lactancia, se tomaron muestras
aspticas de leche (pool de los cuatro cuartos mamarios), de las que se aislaron las cepas
bacterianas y se realizaron recuentos de celulas somaticas. Se determin la
concentracin inhibitoria mnima (CIM) para penicilina, cloxacilina, ampicilina,
gentamicina, oxitetraciclina y tilosina frente a las cepas aisladas de S. aureus, mediante la
prueba cuantitativa de dilucin en agar, segn recomendaciones CLSI (2008). Para las
diluciones de los ATMs escogidos se emplearon drogas puras (con potencia conocida), y
como microorganismo control a S. aureus ATCC 29213. Los datos fueron expresados en
forma absoluta y en porcentaje de inhibicin; se realizaron grficas donde se observ la
distribucin de las cepas inhibidas para las CIM; se compar la distribucin de la CIM de
cada ATM con los puntos de corte propuestos por CLSI (2013) y EUCAST (2014). La
prevalencia de infeccin intramamaria S. aureus result ser del 11,79 %. Los valores de
CIM90 para todos los ATMs (exceptuando la penicilina), estuvieron por debajo de los
puntos de corte clnicos propuestos por CLSI y EUCAST. Si bien el nmero de cepas
empleadas es insuficiente para proponer un punto de corte de CIM que diferencie cepas
bacterianas salvajes (sin adquisicin de resistencia) de las resistentes, se observaron
valores de CIM para cada ATM (excepto para gentamicina) que coincidiran con los
propuestos por EUCAST para la vigilancia epidemiolgica de la resistencia.

P - 132
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Mierez, J.; Guidoli, M.; Amable, V.; Boehringer, S.
Institucin: Ctedra de Microbiologa - Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional
del Nordeste. Sargento Cabral 2139, Corrientes, Argentina.

MICROORGANISMOS RESISTENTES A PROCESOS DE DESINFECCIN APLICADOS

EN UN HOSPITAL DE CLNICAS VETERINARIA
En los ltimos aos se ha evidenciado un incremento en el nmero de microorganismos
resistentes a los procesos de limpieza, desinfeccin y/o asepsia en hospitales y clnicas,
humanas y de animales. Estos microorganismos son capaces de colonizar las superficies
inertes, multiplicarse y, en algunos casos, formar biofilms. La ocurrencia de este tipo de
organismos en sitios altamente expuestos a antimicrobianos genera seleccin de
bacterias y hongos con resistencia a los mismos. La generacin de resistencia a
desinfectantes, antispticos y antibiticos dificulta su erradicacin convirtindolos en
fuente de infeccin pudiendo ocasionar enfermedades nosocomiales. El objetivo de este
estudio determinar la eficacia de los mtodos de limpieza y desinfeccin, de superficies y
manos de veterinarios, utilizados en el Hospital de Clnicas de Pequeos Animales
(HCVPA) de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional del Nordeste
(UNNE). Las mesadas (M) de los tres consultorios externos del HCVPA fueron
muestreadas por hisopado de reas de 25 cm2 antes (A), 30 minutos (30) y 72 horas (72)
despus del proceso de limpieza. Las manos de los veterinarios (V) se muestrearon por
hisopado de palmas, espacios interdigitales y dorso despus de atender a un paciente,
antes (A) e inmediatamente despus del lavado de las manos (D). Las muestras se
colocaron en agua peptonada estril y se mantuvieron refrigeradas hasta su posterior
procesamiento. Los recuentos se realizaron por el mtodo de diluciones seriadas y cultivo
durante 24 horas a 37 C en Recuento en Placa Agar. Los aislamientos se realizaron en
tres meses diferentes y siempre por triplicado. De las 108 muestras procesadas se
obtuvieron los siguientes resultados: MA 1.933; M30 80; M72 1.290; expresados en
Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por cm2. Respecto a las manos de los
veterinarios, VA y VD, se obtuvieron valores de 4420 y 19032, respectivamente,
expresando ambos valores el nmero total de microorganismos. Estos resultados reflejan
que el mtodo de desinfeccin empleado para la limpieza de las mesadas disminuye la
carga microbiana de las mesadas en un 95,86%, mientras que a las 72 horas se observa
un incremento del 62,60%, atribuible a la presencia de grmenes ambientales. Los
resultados del cultivo de manos de los veterinarios demostr que el nmero de
microorganismos se cuadruplic luego del lavado de las manos. Estos resultados
corresponden al promedio de los tres aislamientos realizados. La determinacin del
nmero de microorganismos en el jabn revel un elevado recuento de grmenes
(1,1x107 UFC/cm2), indicando la necesidad del uso de dispenser de jabn lquido, que
disminuye
las
contaminaciones
de
este
tipo.

P - 133
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Asurmendi P, Pascual L, Dalcero A, Barberis L
Institucin: Universidad Nacional de Ro Cuarto y Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas
y Tcnicas

Estudio de la interaccin de factores medioambientales y Listeria monocytogenes sobre la

produccin de aflatoxina B1 por Aspergillus flavus.
Las bacterias y hongos comparten numerosos hbitats tales como el suelo, plantas,
alimentos, entre otros. Estudios previos han demostrado la co-existencia de Listeria
monocytogenes y Aspergillus flavus productores de aflatoxinas (AFs) en residuos de
cervecera, alimento alternativo para consumo de cerdos. Las aflatoxinas (AFs) son
metabolitos secundarios txicos para la salud humana y animal. La aflatoxina B1 (AFB1)
es considerada la ms potente de todas las AFs existentes y ha sido clasificada como
carcingeno humano del grupo 1A por la Agencia Internacional de Investigacin sobre el
Cncer. La sntesis de AFB1 en los alimentos almacenados es afectada por diversas
condiciones medioambientales que incluyen la interaccin con otros microorganismos y
con factores abiticos. El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de
parmetros ecofisiolgicos (aW, pH y temperatura) y la influencia de L. monocytogenes
sobre la produccin de AFB1 in vitro por A. flavus. Las cepas A. flavus AF21, L.
monocytogenes LM1 y L. monocytogenes LM6 fueron utilizadas para realizar los ensayos
de interaccin. El medio bsico empleado fue agar a base de residuo de cervecera,
previamente ajustado a diferentes aW (0,95, 0,98 y 0,995) y pH (5, 7 y 9). Se inocularon
100 l (108 UFC/ml) del cultivo de L. monocytogenes seleccionada empleando el mtodo
de placa vertida. Luego de solidificado el agar fue sembrada centralmente la cepa de A.
flavus en cada placa y fueron incubadas a 25C, 37C o 42C. Se realizaron controles de
la cepa fngica a las distintas condiciones de incubacin y sin la inoculacin de L.
monocytogenes. La AFB1 fue extrada del medio de cultivo de cada placa y fue
cuantificada mediante HPLC. Los tratamientos se realizaron por triplicado. La coinoculacin con L. monocytogenes LM1 o LM6 a diferentes aW, pH y temperaturas
demostr un incremento en la produccin de AFB1 cuando se compar con los controles.
Las condiciones abiticas que ms influyeron en la sntesis de AFs fueron aW y
temperatura. Generalmente, en presencia de Listeria la mayor cantidad de AFB1 fue
detectada a 0.98 aW para todos los pH y temperaturas ensayadas. A 25C se observ la
mayor produccin de la toxina mientras que a 37C la sntesis fue menor y a 42C no fue
detectada para ninguna condicin ensayada. La mxima concentracin de AFB1
producida por A. flavus AF21 fue observada a 0.98aW, 25C, pH7 y co-inoculada con L.
monocytogenes LM6 con un valor promedio de 2892 ng/g (p0.05). Siendo esta
concentracin 100 veces mayor al lmite propuesto por la Unin Europea y FDA (Food
and Drugs Administration) para materias primas de alimentos destinados a consumo
animal (20 ng/g). En conclusin, los estudios ecofisiolgicos in vitro de A. flavus en coocurrencia con L. monocytogenes son esenciales para predecir el riesgo de
contaminacin por AFB1 en un determinado sustrato cuando ambos microorganismos
estn
interaccionando
bajo
distintas
condiciones
medioambientales.

P - 134
rea: Microbiologa Veterinaria
Autores: BLAJMAN, J.2; FUSARI, M.1; ASTESANA, D.2; BERISVIL, A.2; ROMERO SCHARPEN,
A.2; CONTI, G.1; SOTO, L.1, 2; ZBRUN, M.1, 2; SIGNORINI, M.1, 3; FRIZZO, L.1, 2
Institucin: 1 Departamento de Salud Pblica, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad
Nacional del Litoral (UNL). 2 Laboratorio de Anlisis de Alimentos, Instituto de Ciencias
Veterinarias del Litoral, Consejo Nacional del Investigaciones Cientficas y Tcnicas (ICIVETCONICET). 3 Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria Estacin Experimental Agropecuaria
Rafaela.

MONITOREO DE LACTOBACILLUS SALIVARIUS DSPV 001 DE ORIGEN AVIAR

MEDIANTE ELECTROFORESIS EN GEL CON GRADIENTE DESNATURALIZANTE
La electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante (DGGE) es una tcnica molecular
utilizada para identificar microorganismos dominantes en comunidades microbianas
complejas. La tcnica se basa en la migracin de molculas de ADN a travs de geles de
poliacrilamida que contienen concentraciones crecientes de agentes desnaturalizantes, lo
que da lugar a un patrn de bandas que refleja la diversidad gentica presente en la
comunidad microbiana. El objetivo del presente trabajo fue monitorear la cepa
Lactobacillus salivarius DSPV 001P de origen aviar con propiedades probiticas
empleando DGGE. Para el ensayo fueron utilizados 2 pollos parrilleros de 1 da de vida.
Uno de los pollos recibi una dosis diaria de L. salivarius DSPV 001P de 1x109 UFC por
va oral durante 5 das, mientras que en el pollo restante la cepa fue administrada en el
agua de bebida (1x109 UFC). Los pollos fueron luego sacrificados mediante dislocacin
cervical. Se realizaron hisopados cloacales y se tomaron muestras de ciego. A partir de
estas muestras se extrajo ADN empleando el kit comercial Wizard Genomic DNA
Purification. Las muestras fueron amplificadas empleando los primers universales GCHDA1f y HDA2r que amplifican la regin V2-V3 del gen del ARNr 16S. El programa de
amplificacin empleado fue: 4,5 min de desnaturalizacin, 30 ciclos de 94 C por 30 s, 58
C por 30 s y 68 C por 1 min; y elongacin final a 68 C por 7 min. Las muestras se
sembraron en geles de poliacrilamida 8 % p/v en buffer TAE. Se incluy en el gel una
calle con el producto de amplificacin de L. salivarius DSPV 001P a fin de analizar si
poda detectarse la colonizacin intestinal de esta bacteria. La separacin ptima de las
bandas se alcanz empleando gradientes desnaturalizantes urea-formamida 30-55 %. La
electroforesis se llev a cabo a 130 V (voltaje constante) durante 4 h a 60 C. Los geles
se tieron y visualizaron bajo luz UV. La tcnica DGGE permiti identificar en las
muestras provenientes de ciego de ambos pollos una banda ubicada en la misma posicin
que la cepa L. salivarius DSPV 001P. Sin embargo, dicha banda no pudo ser visualizada
en las muestras provenientes de hisopados cloacales, lo que podra deberse a una menor
cantidad de microorganismos a nivel de la cloaca y a una menor recuperacin de
muestras por el mtodo de hisopado. La comparacin de la posicin de las bandas con
aquellas generadas por cepas de referencia resulta de utilidad para determinar presencia
o ausencia de los microorganismos de inters. Por otro lado, los diferentes perfiles
generados, permiten hacer una primera comparacin de comunidades entre los dos
individuos. Adems deja abierta la posibilidad, que mediante la secuenciacin de las
bandas generadas, se determine la composicin de la microbiota cultivable y no cultivable
de pollos parrilleros que reciben un tratamiento con probiticos, en relacin a pollos
parrilleros
de
un
grupo
control.

P - 135
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Bueno1, D.J.; Soria1, M.A.; Godano2, E.I.
Institucin: 1EEA INTA Concepcin del Uruguay, 3260, Concepcin del Uruguay, Entre Ros,
Argentina. 2 Tecnovo S.A., 3116, Crespo, Entre Ros, Argentina

COMPARACIN DE DOS TECNICAS PARA LA DETECCION DE SALMONELLA EN

SANGRE DE GALLINAS PONEDORAS
Las infecciones con bacterias del gnero Salmonella son responsables de una gran
variedad de enfermedades agudas y crnicas en las aves. Dentro de este gnero,
Salmonella enterica subespecie enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG)
continua siendo una constante en infecciones de aves de distinto tipo y cuyo control ha
mostrado ser bastante dificultoso en Argentina. SG produce la llamada tifosis aviar, que
es una enfermedad sistmica aguda crnica que afecta ms frecuentemente a animales
adultos. El diagnstico de esta enfermedad se puede realizar de diferentes maneras,
entre ellas, el aislamiento del agente causal y la deteccin serolgica. Por ello, el objetivo
de este trabajo fue comparar la deteccin serolgica con el aislamiento de Salmonella en
sangre de gallinas ponedoras pertenecientes a establecimientos con antecedentes de
tifosis aviar. Se tomaron 2 ml de sangre a partir de la vena alar de 53 gallinas en postura
pertenecientes a 6 establecimientos avcolas de las provincias de Entre Ros y Santa Fe.
Posteriormente se separ el suero y el cogulo en esterilidad. El primero fue inactivado a
56C durante 30 minutos antes de realizar la tcnica de aglutinacin rpida en placa
(ARP) para la deteccin de anticuerpos para Salmonella. Los sueros que resultaron
positivos fueron diluidos con solucin fisiolgica 1/8, para realizar nuevamente la tcnica
de ARP y confirmar las muestras positivas. Por otro lado, el cogulo fue disuelto en caldo
Salmosyst, incubado 18-14 hs a 352C, luego se agreg una tableta de Salmosyt y se
incub 18-24 hs. a 352C. Posteriormente, el caldo fue sembrado en agar Xilosa-LisinaDesoxicolato con el agregado de tergitol y agar EF-18. Luego de su incubacin, las cepas
compatibles con Salmonella fueron caracterizadas a travs de diferentes pruebas
bioqumicas. La concordancia entre el mtodo bacteriolgico y el serolgico para la
deteccin de Salmonella en sangre para aves fue evaluada mediante el estadstico
Kappa. La concordancia entre ambos mtodos fue nula. Veintitrs sueros (43,4% del total)
resultaron positivos a Salmonella por ARP, 14 de ellos (60,9%) mantuvieron la positividad
al diluirse 1/8. Por otro lado, 4 muestras de cogulos fueron positivas a SG. Aun cuando
los establecimientos muestreados tenan antecedentes de tifosis, el nmero de resultados
positivos en sangre por serologa pueden incrementarse con el aislamiento de SG en el
cogulo.

P - 136
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Aguirre, G.1; Caccia, M.1; Frizzo, L.S.3,4; Litterio, N.J.2
Institucin: 1 Universidad Nacional de Villa Mara. Instituto de Cs. Bsicas y Aplicadas Carrera de
Veterinaria.2 Universidad Catlica de Crdoba. Facultad de Cs Agropecuarias, carrera de
Veterinaria.3 Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Cs. Veterinarias. Departamento de
Salud Pblica Veterinaria.4 Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICiVet LitoralCONICET/UNL)

ACTIVIDAD in vitro DE SUSTANCIAS TIPO BACTERIOCINAS FRENTE A CEPAS DE S.

aureus PRODUCTORAS DE MASTITIS BOVINA
La mastitis bovina constituye un problema sanitario en la ganadera lechera e industria
lctea que ocasiona importantes prdidas econmicas. El tratamiento con antimicrobianos
en forma desmedida e irracional, ha ocasionado la emergencia de cepas bacterianas
resistentes, conllevando a la readecuacin de su empleo, o bien a la implementacin de
otro tipo de sustancias para el control de la infeccin intramamaria. Debido a ello, en este
trabajo se propone evaluar la actividad in vitro de sustancias inhibitorias (tipo
bacteriocinas) procedentes de bacterias cido lcticas (BAL), frente a S. aureus
productoras de mastitis en vacas en perodo de lactancia. Se tomaron muestras de leche
(pool de los cuatro cuartos mamarios) de 300 animales en forma asptica, de donde se
realizaron aislamientos de S. aureus y BAL en medios diferenciales. Los caldos con
crecimientos de BAL se centrifugaron (3500 rpm; 15 minutos) para obtener extractos
libres de clulas (ELC); una alcuota del sobrenadante se re-centrifug (10000 rpm; 15
minutos) y filtr (0,22 m) y la otra, antes de realizar el mismo procedimiento se ajust a
pH 6 - 6,5 con hidrxido de sodio y calent a 70C durante 30 minutos. De esta manera
los ELC obtenidos se clasificaron en dos grupos sin neutralizar y neutralizados,
respectivamente. La actividad antimicrobiana de las sustancias tipo bacteriocinas
presentes en los ELC se evalu, frente a cinco aislamientos de S. aureus, mediante la
tcnica microbiolgica cuantitativa de difusin en agar. Se emple como control S. aureus
ATCC 29213 y los resultados se expresaron segn el tamao del halo de inhibicin. De 54
ELC (neutralizados y sin neutralizar), 13 pares presentaron halos de inhibicin
antimicrobiana. El tamao del grupo sin neutralizar fue 1,62 0,86 mm, mientras que el
del grupo neutralizado fue de 1,25 0,51 mm. Posiblemente, la diferencia observada en el
mayor tamao de halos en el primer grupo podra deberse a que, adems de sustancias
tipo bacteriocinas, existira un efecto adicional producido por sustancias proteicas ms la
acidez del medio. Estos resultados son alentadores para realizar estudios ulteriores sobre
estas cepas, tendientes a comprobar el efecto inhibitorio de dichas sustancias, as como
la
identificacin
de
la/s
bacteriocina/s
correspondiente/s.

P - 137
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Cceres, M.; Rivelli, S.; Guilln, R.; Etcheverra, A. I.; Padola, N. L.; Russomando G.
Institucin: Lab Inmunoqumica y Biotecnologa. CIVETAN-CONICET-CICPBA. Fac. Cs.
Veterinarias, UNCPBA. Rep. Argentina. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud,
Universidad Nacional de Asuncin. Rep. de Paraguay

CARACTERIZACIN DEL MEGAPLSMIDO EN AISLAMIENTOS DE Escherichia coli

PRODUCTOR DE TOXINA-SHIGA DE ORIGEN BOVINO EN LA REPBLICA DE
PARAGUAY
Escherichia coli productor de toxina-Shiga o verocitotoxignica (VTEC) es un importante
patgeno relacionado con la Salud Pblica. Cepas VTEC han sido reportadas como
causantes de severas enfermedades como colitis hemorrgica (CH) y sndrome urmico
hemoltico (SUH) en humanos. Adems de los genes que codifican para las toxinas Vt1 y
Vt2, algunas cepas producen una protena de adherencia denominada Intimina, codificada
por el gen eae, que es responsable de la lesin de adherencia y borrado de la mucosa
intestinal (lesin A/E). Otros factores de virulencia codificados por genes presentes en
plsmidos son: una enterohemolisina (exhA), una adhesina autoaglutinante (saa), una
catalasa-peroxidasa (katP), una serin-proteasa extracelular (espP), una zincmetaloproteasa (stcE) y una citotoxina subtilasa (subAB). EhxA es responsable de la lisis
de eritrocitos. KatP contribuye a la colonizacin del intestino reduciendo el estrs
oxidativo, EspP escinde la pepsina A y el factor V de coagulacin humana contribuyendo
a la hemorragia de las mucosas observadas en CH, adems de favorecer la colonizacin
y adherencia al intestino bovino. StcE contribuye a la ntima adherencia de esta bacteria a
las clulas husped. SubAB se ha descripto como un factor de virulencia importante en
cepas VTEC especialmente eae-negativas demostrando fuerte actividad citotxica. El
ganado bovino de diferentes sistemas de produccin ha sido identificado como el principal
reservorio de VTEC. Los alimentos como la carne contaminada, la leche y subproductos,
jugos de fruta sin pasteurizar, el agua contaminada, y tambin el contacto persona a
persona, contacto directo o indirecto con heces bovinas y el ambiente de animales, son
las principales vas de contagio en brotes y casos espordicos de SUH.
Este trabajo tuvo como objetivo analizar la presencia de cuatro genes presentes en el
megaplsmido, katP, espP, subA y stcE, en 18 cepas VTEC ehxA+ aisladas de bovinos,
mediante la tcnica de PCR.
El 100% de las cepas analizadas presentaron el gen espP y el 50% de las cepas fue
positivo para subA. No se obtuvieron cepas positivas para los genes katP y stcE. Se
observaron dos perfiles de virulencia caractersticos: espP-ehxA (8/18) y espP-subA-ehxA
(10/18).
El conocimiento de los genes de virulencia putativos del megaplsmido puede
proporcionar datos para evaluar la capacidad de cepas VTEC provenientes de bovinos
para sobrevivir a condiciones hostiles del medio, colonizar el tracto intestinal y provocar
enfermedad
en
humanos.

P - 138
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Parada, J.; Carranza, A.; Pichel, M.; Chemolli, M.; Busso, J.J.
Institucin: 1Depto. de Patologa Animal, Facultad de Agronoma y Veterinaria, Universidad
Nacional de Ro Cuarto, Ruta 36 km 601. Ro Cuarto. Crdoba. Argentina. 2CONICET. 3 INEIANLIS Carlos G Malbrn.

DESARROLLO DE UN PROTOCOLO RPIDO Y EFICAZ PARA LA DETECCIN DE

SALMONELLA SPP. EN MATERIA FECAL DE CERDO
Las infecciones por Salmonella spp. en cerdos constituyen una de las causas de perdidas
productivas en granjas porcinas, adems de ser una de las enfermedades zoonticas ms
importantes en el mundo. Una de las limitantes que existen para el control de este
patgeno, radica en la dificultad de establecer un diagnstico precoz y certero de
animales portadores de Salmonella spp., sobre todo cuando se trabaja con matrices
complejas como tejidos o materia fecal. Por esto, el objetivo del presente trabajo fue
evaluar un protocolo que sea rpido y eficaz para la deteccin de animales que excretan
Salmonella spp. en sus heces, a partir de la combinacin del cultivo bacteriolgico y PCR.
Para ello, se trabaj con 40 muestras de 10 g de materia fecal de cerdos en edad de
faena, que fueron procesadas por cultivo bacteriolgico siguiendo el protocolo
estandarizado ISO 6579/02. Las cepas de S. enterica aisladas fueron serotipificadas de
acuerdo a la presencia de antgenos somticos (O) y flagelares (H), clasificados en el
Esquema de White-Kauffmann-Le Minor. Paralelamente, en cada una de las muestras se
extrajo una alcuota del medio del pre-enriquecimiento no selectivo (12 h de cultivo) y una
alcuota del enriquecimiento selectivo a las 4, 8 y 24 h de cultivo, para la deteccin del
gen invA mediante PCR utilizando un control interno de reaccin, previa extraccin de
ADN por mtodos fsicos. Tres heces fueron positivas al protocolo bacteriolgico, con
aislamientos clasificados como S. Livingstone (2) y S. Panama (1). En cuanto a la PCR,
en todas las alcuotas del pre-enriquecimientos no se observ amplificacin alguna,
mientras que 7, 3 y 3 heces fueron positivas a las 4, 8 y 24 h de cultivo, respectivamente.
La PCR del enriquecimiento selectivo a las 4 h de cultivo fue la prueba con mayor
sensibilidad relativa, seguida por las realizadas a las 8 y 24, que presentaron valores
similares al cultivo bacteriolgico. El grado de acuerdo (kappa) entre los mtodos de PCR
con la bacteriologa (como prueba de oro) fueron 0,5436 (95% IC 0,1347 - 0,8091), 1
(95% IC 0,4734 - 1.0000) y 1 (95% IC 0,5072 - 1.0000) para la PCR del enriquecimiento
selectivo a las 4, 8 y 24 h, respectivamente. De lo anterior, se puede concluir que la
deteccin de Salmonella spp. en heces mediante PCR requiri de un cultivo primario
incubado por 12 h, seguido de otro selectivo por al menos 4 h para lograr amplificar el gen
invA en muestras donde se aisl el patgeno. Este PCR adems, fue el de mayor
sensibilidad relativa, quizs relacionado a la deteccin de bacterias injuriadas incapaces
de sobrevivir al cultivo bacteriolgico, por lo que podra constituir un mtodo adecuado
para el monitoreo de Salmonella spp. Aunque, el excelente grado de acuerdo entre el
cultivo bacteriolgico y la PCR a partir de las 8 h de cultivo selectivo, propone a este
mtodo molecular como un buen predictor del resultado del cultivo bacteriolgico, factible
de
utilizar
como
prueba
tamiz.

P - 139
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Flores Len, M.; Dvila, S.; Roco, G.; Parada, J.; Camacho, P.; Carranza, A.
Institucin: Depto. de Patologa Animal, Facultad de Agronoma y Veterinaria, Universidad
Nacional de Ro Cuarto, Ruta 36 km 601. Ro Cuarto. Crdoba. Argentina.

TIEMPO PARA LA DETERMINACIN DE ESPECIE DE BRACHYSPIRA POR

AISLAMIENTO Y PRUEBAS BIOQUMICAS A PARTIR DE MATERIA FECAL DE
CERDOS EN TERMINACIN
En el Orden Spirochaetales se encuentra la Familia Brachyspiraceae que contiene un solo
gnero, Brachyspira (B.), que involucra especies patgenas y no patgenas que afectan a
los cerdos, a otras especies animales y al hombre. Son bacterias anaerobias, gram
negativas y de morfologa espiroquetal. En produccin porcina, las especies de
patogenicidad reconocida son B. hyodysenteriae y B. pilosicoli, mientras que B. murdochii
y B. innocens previamente reconocidas como inocuas, podran producir grados leves de
patogenicidad. Estas espiroquetas afectan a los cerdos durante las etapas de desarrollo y
terminacin. El diagnstico de certeza se realiza a travs del aislamiento y la realizacin
de pruebas bioqumicas, aunque este proceso es fastidioso por el crecimiento lento y la
aparicin de una ptina (no colonias), lo que hace necesario varios das para llegar a
determinar la especie actuante. El objetivo de este trabajo fue determinar el tiempo
necesario para identificar la especie de Brachyspira por aislamiento y pruebas
bioqumicas. Para ello, se trabaj con 1496 muestras de materia fecal de cerdos de 22
semanas de edad de diferentes granjas porcinas. Las muestras se sembraron en agar
sangre equina (8%) con los antibiticos espectinomicina, vancomicina y colistina, se
incubaron en anaerobiosis a 42C durante 7 das. En las placas donde se observ fuerte o
dbil hemlisis y/o ptina, se realiz un frotis y se lo colore con Gram para identificar
las espiroquetas. De los cultivos positivos se realizaron subcultivos cada 3-4 das, en agar
sangre sin antibiticos con las mismas condiciones de cultivo anteriores, hasta lograr la
purificacin de la cepa. Se realizaron las siguientes pruebas bioqumicas: produccin de
indol (reactivo de Kovacs), hidrlisis del hipurato, glucosidasa, galactosidasa y
glucosidasa, con tabletas. Se reconocieron 270 cultivos positivos a espiroquetas, de los
que se purificaron 99 cepas, purificacin que requiri entre 1 y 12 subcultivos. El 76.2%
de las cepas se lograron purificar entre 2 a 5 subcultivos, lo que llev entre 15 y 27 das.
Pero para el 95.2% de las cepas puras el tiempo para determinar la especie oscil entre
11 y hasta 43 das. Se identificaron 84/99 cepas puras, entre las que se reconocieron las
especies B. pilosicoli, B. hyodysenteriae, B. murdochii y B. innocens. Si bien se
encuentran desarrolladas tcnicas moleculares que permiten un diagnstico ms rpido,
es necesario obtener la cepa actuante para realizar antibiograma y tratamientos eficaces
para el control de estas bacterias. Las especies que podran producir una leve
patogenicidad pueden confundir el diagnstico de certeza, por lo tanto es necesario
desarrollar
un
protocolo
de
aislamiento
ms
rpido.

P - 140
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: FELIPE, V.; VARRONI, F.; SOMALE, P.; MORGANTE, C.; PORPORATTO, C.
Institucin: IAP de Cs Bsicas y Aplicadas, Universidad Nacional de Villa Mara y Centro de
Investigaciones y Transferencia de Villa Mara, CONICET

CAPACIDAD DE FORMACIN DE BIOFILM EN STAPHYLOCOCCUS COAGULASANEGATIVOS AISLADOS DE ANIMALES CON MASTITIS BOVINA
La mastitis bovina (MB) es una enfermedad en la ubre que causa grandes prdidas
econmicas para la industria lctea. Si bien es causada por numerosos agentes
etiolgicos, en los ltimos aos la prevalencia de los Staphylococcus coagulasa-negativos
(SCN) se ha incrementado a nivel mundial, considerndose un patgeno emergente. La
patogenicidad de microorganismos del gnero Staphylococcus se atribuye a factores de
superficie celular y factores de secrecin que promueven mecanismos como la adhesin y
en algunas cepas, la formacin de biofilm. En etapas iniciales participan protenas de
adhesin tales como protenas de unin a fibronectina (fnbp) y de aglutinacin (clfA y
clfB), entre otras. Por otra parte, la formacin del biofilm es un proceso complejo y
depende, principalmente, del polisacrido de adherencia intercelular (PIA) cuya sntesis
se encuentra codificada por el opern icaADBC y regulada por genes como sigB, entre
otros. Se demostr un mecanismo independiente mediado por la expresin de una
protena de superficie celular asociada a la formacin de biofilm (Bap). El objetivo de este
trabajo fue evaluar la capacidad fenotpica de formacin de biofilm y la distribucin de los
genes asociados en aislamientos SCN de animales con MB. Se aislaron e identificaron
(tincin de Gram y pruebas de Catalasa y Coagulasa con plasma de conejo) 82
aislamientos SCN de animales con MB de 15 tambos de Crdoba. La capacidad de
formacin de biofilm in vitro se determin mediante el mtodo de adherencia al plstico y
tincin con cristal violeta (CV). A partir del valor de DO570nm obtenida, los SCN se
clasificaron en Fuerte (F), Intermedio (I), Dbil (D) y No Formador (NF) de biofilm. Todos
los aislamientos SCN demostraron habilidad para formar de biofilm, siendo 50/82 F, 24/82
I y 8/82 D. Conjuntamente, se evalu la presencia de los genes icaAD, bap, fnbpA, sigB y
clfAB mediante PCR. Se observ seal de amplificacin de icaAD en 60/82 aislamientos
(35/60 F, 18/60 I y 7/60 D) y del gen bap en 11/82 aislamientos (7/11 F, 3/11 I y 1/11 D).
Por otra parte, la presencia del gen regulador sigB se observ en 7/82 (4/7 F y 3/7 I) y los
genes fnbpA en 13/82 aislamientos (8/13 F, 4/13 I y 1/13 D), clfA en 10/82 (6/10 F, 3/10 I y
1/10 D) y clfB en 38/82 (23/38 F, 12/38 I y 3/38D). Este estudio demuestra la alta
prevalencia de SCN formadores de biofilm en bovinos lecheros de la regin. Adems, los
genes evaluados jugaran un rol importante en dicho proceso dado que su prevalencia es
mayor en aislamientos F formadores de biofilm. Nuestros resultados aportan
conocimientos sobre el rol de la formacin de biofilm como mecanismo de virulencia
utilizado por SCN en MB, que sientan bases para la implementacin de nuevas
estrategias de prevencin y/o control de esta patologa en los establecimientos lecheros.

P - 141
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Illanes N., Romanini S., Bertone J., Cabral, A., Martinez M. C., Vazquez, M., Yaciuk R.,
Pelliza B.
Institucin: Facultad de Agronoma y Veterinaria. Universidad Nacional de Ro Cuarto.

HALLAZGO DE CEPAS DE BRACHYSPIRA spp EN GRANJAS AVICOLAS DE

ARGENTINA
La Espiroquetosis Intestinal Aviar es una enfermedad de aves de corral producida por
bacterias del gnero Brachyspira y constituye un problema productivo en ponedoras
comerciales. El gnero incluye espiroquetas comensales y patgenas para animales y el
hombre. En gallinas ponedoras se reconocen B.pilosicoli, B. intermedia y B. alvinipulli
como especies patgenas. En Argentina se ha informado la presencia de espiroquetas
intestinales del gnero Brachyspira en cerdos y en perros pero no se han encontrado
informes de su presencia en aves. El objetivo de este trabajo es informar la presencia de
B.pilosicoli y otras especies de Brachyspiras en gallinas ponedoras en Argentina. Se
tomaron muestras de contenido de ciego de 30 gallinas ponedoras de establecimientos
ubicados prximos al Dpto. Ro Cuarto, Crdoba. Las muestras fueron sembradas en agar
sangre selectivo e incubadas a 42C con un sistema de anaerobiosis, durante 6-7 das. Se
realizaron varios subcultivos, de reas de hemlisis, hasta purificar las cepas en agar
sangre sin antibiticos. Se identificaron las especies segn las siguientes caractersticas
bioqumicas: produccin de indol, hidrlisis del hipurato, y glucosidasa y
galactosidasa. Para confirmar los resultados positivos se realiz la prueba de PCR para
gnero. Las 10 aves de 4 meses fueron negativas al cultivo, bioqumica y PCR. De las 15
aves de 12 meses, 13 dieron positivas al cultivo y PCR, identificndose 4 de ellas como B.
pilosicoli. De las 5 gallinas de 24 meses, 2 fueron positivas al cultivo y PCR. Los
resultados confirman la presencia de B. pilosicoli y otras especies de Brachyspira en las
granjas avcolas analizadas. El aislamiento e identificacin de B. pilosicoli en una de las
granjas resulta trascendente en salud pblica ya que este patgeno se considera
zoontico. La metodologa utilizada para la identificacin de estos microorganismos
requiere de muchos pasajes en medios de cultivo y varios das para la purificacin de las
cepas y la identificacin mediante pruebas bioqumicas. Esto dificulta la identificacin de
especie por pruebas bioqumicas. Las cepas obtenidas de las muestras de aves de ms
de 24 meses de edad no pudieron ser identificadas bioqumicamente, sin embargo el
aislamiento y la PCR coinciden en que se trata de bacterias del gnero Brachyspira. Estos
resultados confirman la necesidad de combinar varias tcnicas para llegar a un
diagnstico adecuado. Se describe que tanto la enfermedad como la presencia del agente
se encuentran en aves criadas en sistemas semi-intensivos, con piso y pastoreo y que las
muestras que proceden de granjas con sistemas de jaulas resultan negativas. En este
trabajo se realizaron aislamientos positivos en aves de sistemas productivos en jaulas,
con gallinas que no realizaban ningn ciclo de su produccin en piso. Debido a su
carcter zoontico, el hallazgo de B. pilosicoli en aves de nuestro pas, compromete al
conocimiento
del
microorganismo
y
a
la
enfermedad
que
produce.

P - 142
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Molina, I, Fiorimanti, M, Gregori S, Escobar, G, Lucero, N, Trangoni M, Cravero S, Elena
S; Bagnis, G; Espsito N, Martin V
Institucin: Departamento de Patologa Animal. FAV. UNRC. Rio Cuarto. INEI-ANLIS
C.G.Malbrn. INTA Castelar. DILAB-SENASA

ABORTO PRODUCIDO POR BRUCELLA SUIS BIOVAR 1 EN UN CRIADERO CANINO

La brucelosis canina es causada principalmente por Brucella canis aunque se han
reportado casos espordicos producidos por B. abortus, B. suis y B. melitensis. La
infeccin, por su carcter zoontico, representa un riesgo para veterinarios, criadores y
propietarios de animales infectados debido al contacto con sangre, orina, semen,
secreciones vaginales y material abortado. Existen escasos reportes de infeccin de
perros con B. suis y aunque inicialmente se describieron como resistentes a dicha
infeccin luego se demostr que pueden ser infectados y desarrollar signos clnicos ms
graves que con B. canis. El objetivo de este trabajo es describir un caso de aborto canino
producido por B. suis biovar 1. El caso en estudio se present en un criadero canino,
lindero a una granja familiar de cerdos. Se remitieron a la UNRC 6 fetos abortados por
una perra de 45 das de gestacin. El propietario intervino manipulando abortos y
realizando respiracin boca a boca a uno de ellos. Para determinar la situacin
epidemiolgica, se muestrearon todos los caninos del criadero (N=14), realizndose
pruebas de aglutinacin con antgeno tamponado (BPA) y Rosa de Bengala (RB) para
detectar anticuerpos contra brucelas lisas (B. abortus, B. melitensis y B. suis). Para B.
canis se realiz inmunodifusin en gel (IDGA) y prueba de aglutinacin rpida en
portaobjeto (RSAT). Todos los antgenos fueron provistos por DILAB-SENASA. Los
sueros positivos se derivaron a INEI-ANLIS C.G. Malbrn (INEI) para confirmarlos con
iELISA. De la hembra que abort se sembraron 5 ml de sangre en Tripticasa Soya-citrato
y se realiz un hemocultivo del propietario en medio bifsico a 36C con 10 % de CO2 por
30 das. A la necropsia fetal se observ placentitis necrtica, congestin pulmonar y
colecta sanguinolenta en cavidades. De la siembra en agar sangre (48h a 36C) se
obtuvieron colonias puras pequeas, translcidas, de bordes lisos, caractersticas de
Brucella spp. La cepa aislada fue identificada en el INEI como Brucella suis biovar 1
disociada y confirmada por PCR en INTA Castelar. La serologa de todo el criadero
result negativa a RSAT e IDGA, aunque con aglutinaciones inespecficas de BPA en 9
animales, confirmndose slo la perra abortada por RB, seroaglutinacin en tubo (SAT)
(1:3200) y aislamiento bacteriolgico. Aunque el propietario result negativo al primer
control serolgico y bacteriolgico, es importante destacar que los canes infectados
representan situaciones de riesgo para la Salud Pblica. B. suis slo es superado en su
patogenicidad para los humanos por B. melitensis, por lo tanto, los perros deben ser
testeados para brucelas lisas cuando coexisten con cerdos o tienen acceso a material
abortado. Es importante destacar que las tcnicas de BPA y RB fueron desarrolladas para
el diagnstico de brucelosis en bovino y si bien es posible utilizarlas para la deteccin de
brucelas lisas, se desconoce su sensibilidad y especificidad en caninos.

P - 143
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Mendoza, J.; Guidoli, M.; Nader Macias, M.; Boehringer, S.; Snchez, S.
Institucin: Ctedra de Microbiologa e Instituto de Ictiologa del Nordeste - Facultad de Ciencias
Veterinarias - Universidad Nacional del Nordeste. Sargento Cabral 2139, Corrientes, Argentina.
Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET). Chacabuco 145, San Miguel de
Tucumn, Tucumn, Argentina

CARACTERIZACIN DE LEVADURAS PARA LA FORMULACIN DE UN PROBITICO

APLICADO EN PISCICULTURA
La piscicultura en el Noroeste Argentino evidenci un gran avance debido a la
introduccin de especies nativas como Piaractus mesopotamicus (pacu), Prochilodus
lineatus (sbalo) y Rhamdia quelen (bagre). Los sistemas de cultivo de tipo intensivo o
super-intensivo aumentan los niveles de estrs y la aparicin de enfermedades generando
cuantiosas prdidas econmicas, adems el uso de antibiticos, antispticos y
desinfectantes es una tcnica poco recomendable debido al incremento de
microorganismos resistentes y a la posibilidad de su ocurrencia en carne de consumo
humano. As surge la propuesta del uso de medicamentos conteniendo microorganismos
vivos que evidencian una funcin fisiolgica benfica en el hospedador por modificacin o
restablecimieto de la microbiota intestinal e incremento de la resistencia innata a
patgenos, siendo de vital importancia la seleccin de microorganismos adecuados para
la composicin de estos adjuntos benficos. El objetivo de este trabajo consiste en
caracterizar levaduras seleccionadas como pontencialmente benficas para su inclusin
en un medicamento probitico de aplicacin en acuicultura. Las cepas se aislaron por
lavado o raspado leve de la mucosa del intestino de peces de ambientes naturales en
diferentes pocas estivales. Las muestras se cultivaron en agar Sabouraud a 37 C y las
levaduras obtenidas fueron aisladas, purificadas y conservadas a - 20 C. Las
propiedades benficas evaluadas para la seleccin de microorganismos fueron:
produccin de perxido de hidrgeno en placas de agar Sabouraud adicionado con
tetrametil benzidina y peroxidasa, produccin de sustancias inhibitorias de patgenos de
peces en placas de agar blando, hidrofobicidad y autoagregacin mediante
determinaciones espectrofotomtricas, capacidad de emulsificar mezclas de sustancias
polares y agua, produccin de biosurfactantes por disminucin de la tensin superficial
entre el agua y el aceite y produccin de exopolisacridos por tincin con una solucin de
lugol. La identificacin fenotpica parcial se realiz por tcnicas puestas a punto en la
Ctedra de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad
Nacional del Nordeste. Por los resultados obtenidos se seleccionaron los aislamientos
SL4, SR3R y SL1 como potencialmente benficos por poseer un elevado ndice de
hidrofobicidad (97,6%), un elevado ndice de autoagregacin luego de una hora (54,8%) y
una elevada produccin de perxido de hidrgeno, respectivamente. Los aislamientos
fueron obtenidos de diferentes especmenes de sbalo (P. lineatus) en otoo, las cepas
SL4 y SL1 fueron aisladas por lavado del tubo digestivo de los ejemplares y el aislamiento
SR3R por raspado suave de la mucosa intestinal. La tipificacin parcial de los
microorganismos permiti identificar a los aislamientos SL4 y SR3R como Cndida
tropicalis y Rhodotorula sp. respectivamente. La cepa SL1 se encuentra en proceso de
identificacin. Las tres cepas sern incluidas en ensayos in vivo.

P - 144
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: MOLINERO D.; BELLINGERI R.; MOTTA C.; PICCO N.; ALUSTIZA F.; GROSSO M.;
VIVAS A.
Institucin: Departamento de Anatoma Animal, Universidad Nacional de Ro Cuarto.

CARACTERIZACIN DE UNA CEPA DE ESCHERICHIA COLI ENTEROTOXIGNICA Y

EVALUACIN DE SU CRECIMIENTO EN PRESENCIA DE IGY ESPECFICA
Actualmente en Argentina existe un incremento de la produccin porcina generado por un
mercado interno en crecimiento. El manejo sanitario de los animales es un pilar
fundamental para lograr ste crecimiento y una produccin rentable. La Escherichia coli
enterotoxignica (ECET) es una de las principales causas de diarrea en cerdos recin
nacidos o post-destete y responsable de grandes prdidas econmicas. El uso excesivo
de antibiticos en los sistemas de crianza intensivos trae numerosas consecuencias sobre
la salud humana y animal. Una nueva alternativa es la utilizacin de la inmunoglobulina de
yema de huevo (IgY). El objetivo de este trabajo fue caracterizar la cepa ECET FV 10188
y evaluar el efecto de IgY anti-ECET FV 10188 sobre su crecimiento. Para evaluar el
crecimiento de ECET FV 10188 (prevalente en la zona centro-sur de Crdoba) se
resuspendi la cepa en caldo Cerebro Corazn, se tomaron alcuotas hasta las 10 h de
incubacin y se evalu el crecimiento por espectrofotometra. Paralelamente, se
sembraron diluciones del caldo en placas de agar Mac Conkey para el recuento de
UFC/mL. ECET mostr un crecimiento caracterstico de las cepas E. coli: una fase de
latencia de 6 h, una fase exponencial de 2 h, una fase estacionaria de aproximadamente 1
h y una fase de muerte celular a partir de las 9 h. Se realiz un antibiograma utilizando:
Norfloxacina,
Cefotaxima,
Tetraciclina,
Cloranfenicol,
Gentamicina,
Trimetroprimasulfametoxazol, Ampicilina, Ampicilina + clavulnico. Para evaluar el efecto
de la IgY anti-ECET en el crecimiento bacteriano se establecieron los siguientes grupos:
1) ECET + 60 mg/mL IgY anti-ECET, 2) ECET + 80 mg/mL IgY anti-ECET, 3) ECET + 80
mg/mL IgY control, 4) Control positivo (ECET + Norfloxacina 1%) y 5) Control negativo
(ECET). Se monitore el crecimiento de ECET por espectrofotometra. Para el anlisis
estadstico se utiliz Anlisis de la Varianza y Test de Tukey a posteriori con significancia
p0,05. ECET FV 10188 present resistencia a los antibiticos de uso comn y fue
sensible a Norfloxacina. El crecimiento de la cepa de ECET fue caracterstico de las
cepas E. coli. En la curva de crecimiento de ECET, no se observ modificacin en la
duracin de las fases para ninguno de los grupos estudiados. En el recuento de UFC/mL
de ECET en presencia de IgY anti-ECET se encontraron similitudes en las fases iniciales.
Sin embargo, a partir de las 6 hs hubo una disminucin significativa del crecimiento con la
mayor concentracin (Grupo 2) respecto de la menor (Grupo 1). El crecimiento de ECET
con IgY control (Grupo 3) fue significativamente mayor respecto a los grupos 1 y 2, y al
mismo tiempo, similar al Control negativo. La IgY anti-ECET inhibe significativamente el
crecimiento de ECET en medio lquido, a partir de 60 mg/mL. Los resultados de este
trabajo proporcionan nuevos conocimientos sobre el potencial uso de la IgY en la
proteccin
de
infecciones
por
ECET
en
lechones.

P - 145
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Picech F, Pereyra EAL, Renna MS, Baravalle C, Calvinho LF, Dallard BE, Diez C
Institucin: Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas. Facultad de Ciencias Veterinarias.
Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICIVET-Litoral), UNLCONICET. Estacin Experimental Agropecuaria Rafaela (INTA)

Evaluacin de la expresin de factores de Staphylococcus aureus asociados a

adherencia, internalizacin y formacin de biopelculas en un modelo de invasin a
clulas epiteliales mamarias
El objetivo del trabajo fue evaluar la expresin relativa de genes involucrados en la
adherencia, internalizacin y formacin de biopelculas en la glndula mamaria bovina
utilizando un modelo de infeccin in vitro. Se seleccionaron 7 cepas de S. aureus en base
a parmetros genticos, clnicos, epidemiolgicos y de susceptibilidad a antibiticos. Las
mismas se agruparon en diferentes pulsotipos con un porcentaje de similitud <20%
(evaluado por electroforesis de campos pulsantes). Cinco cepas fueron aisladas de
infecciones intramamarias (IIM) clnicas y dos de IIM subclnicas (crnicas). En una
primera etapa se evalu la prevalencia de genes involucrados en la adherencia e
internalizacin (ClfA, ClfB, FnbA, FnbB, fib, cna) y formacin de biopelculas (IcaA, IcaC,
IcaD, bap) a partir de ADN genmico de la totalidad de las cepas por PCR de punto final.
Posteriormente, se realizaron ensayos de internalizacin en una lnea de clulas
epiteliales mamarias bovinas (MAC-T) con todos los aislados estudiados y se extrajo
ARNm de muestras tomadas en 3 etapas diferentes del ensayo: cultivos bacterianos que
no estuvieron en contacto con clulas del hospedador (grupo control), sobrenadante del
co-cultivo de bacterias con clulas MAC-T (bacterias no internalizadas) y sobrenadante
obtenido de la lisis de estas clulas (bacterias internalizadas). Se cuantific la expresin
relativa de aquellos genes que tuvieron mayor prevalencia en el genoma de los aislados
estudiados (ClfA, ClfB, FnbA, FnbB, IcaA, IcaD) por PCR cuantitativa en tiempo real (RTqPCR). Finalmente, se evalu el comportamiento de cada cepa en su capacidad de
multiplicacin in vitro mediante la construccin de curvas de crecimiento. La mayora de
los genes involucrados en la adherencia e invasin bacteriana y los de protenas
asociadas a formacin de biopelcula presentaron expresin relativa significativamente
superior en bacterias internalizadas respecto al control (p<0,05), principalmente los genes
Fnb e IcaD. La expresin de estos genes estuvo principalmente ligada a cada aislado de
S. aureus y no a las caractersticas de la IIM (clnica o subclnica). En relacin a su
capacidad de multiplicacin in vitro, los distintos aislados de S. aureus exhibieron
diferentes tiempos de duplicacin (TD) pero alcanzaron la misma densidad celular
mxima (109 UFC/ml) durante la fase estacionaria. Los TD obtenidos no se relacionaron
con la capacidad invasiva de la cepa pero s con la persistencia de la IIM, a juzgar por los
TD de los aislados de IIM crnicas, significativamente mayores a los restantes (p<0,05).
Se puede concluir que los factores de adherencia celular y formacin de biopelcula
analizados demostraron estar sobreexpresados en bacterias capaces de invadir clulas
del epitelio mamario bovino, pero sin relacin aparente con las caractersticas de la IIM
producida. Sin embargo, aquellos aislados provenientes de IIM crnicas mostraron una
menor
velocidad
de
crecimiento.

P - 146
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Rivelli, S.(1); Guilln, R.(1); Rodrguez, F.(1); Etcheverra, A. I.(2); Padola, N. L.(2);
Russomando, G.(1)
Institucin: (1)Departamento de Biologa Molecular y Gentica, Instituto de Investigaciones en
Ciencias de la Salud, Universidad Nacional de Asuncin; (2)Laboratorio de Inmnoqumica y
Biotecnologa, Facultad de Veterinaria, Universidad del Centro de la Provincia de Buenos Aires

PERFIL DE VIRULENCIA DE AISLAMIENTOS DE Escherichia coli PRODUCTORES DE

TOXINA SHIGA PROVENIENTES DE GANADO BOVINO PARAGUAYO.
Introduccin
Las cepas de E. coli productoras de toxina Shiga (STEC) son patgenos emergentes
asociados a enfermedades transmitidas por alimentos, adems de patologas ms graves
como Sndrome Urmico Hemoltico. Se han reportado a nivel mundial brotes a partir del
consumo de productos crnicos contaminados durante su manipulacin, ya que esta
bacteria puede encontrarse en la materia fecal de los bovinos, considerados reservorios.
Estas bacterias adems de los genes codificantes para las toxinas shiga (stx1 y stx2)
pueden ser portadoras de otros factores de virulencia como eae, saa, ehxA y otros.
En Paraguay la cra de ganado bovino es un rubro econmicamente fundamental para el
pas, sin embargo no hay estudios que muestren la frecuencia de portacin de STEC en
ganado en pie, ni mucho menos datos sobre las caractersticas de perfil de virulencia de
estos aislados STEC.
Objetivos
Determinar la frecuencia de portacin de STEC en materia fecal de bovinos de
explotacin extensiva y caracterizar los aislados respecto a factores de virulencia.
Materiales y Mtodos
Se colectaron 98 muestras de materia fecal de bovinos de un establecimiento de
explotacin extensiva de la regin occidental del Paraguay en noviembre del 2012. Las
muestras fueron cultivadas en agar Mac Conkey Sorbitol. Se extrajo ADN por el mtodo
de ebullicin tanto de la zona de confluencia de crecimiento, como de colonias aisladas.
Se emple el ADN obtenido para la deteccin por PCR de genes stx1, stx2, saa, eae,
exhA y rfb0157, empleando primers y condiciones de amplificacin especficas para cada
uno.
Resultados
La presencia de los genes codificantes de las toxinas shiga fue detectada en el 85,7% de
los bovinos estudiados (n=84), sin embargo ninguno de stos dio resultados positivos
para el gen rfb 0157, descartando la presencia de STEC de tipo O157.
Con la finalidad de caracterizar el perfil de virulencia se analizaron un total de 310
colonias aisladas provenientes de las muestras de bovinos que haban sido positivas para
genes stx en la zona de confluencia.
Los resultados obtenidos a partir de este anlisis muestran: 185 aislados portadores solo
de stx2 (59,7%); 40 aislados portadores en simultneo de stx1 y stx2 (12,9%); 33 aislados
que presentaban stx2, stx1, saa y ehxA (10,6%); 25 colonias con stx2, saa y ehxA (8,1%);
15 portadores stx2 y saa (4,8%); 6 aislamientos con stx2,stx1 y saa (1,9%); 4 con stx1
(1,3%); 1 aislamiento portador respectivamente de stx2 y eae (0,35%) y stx2 y ehxA
(0,35%).
Conclusiones

La frecuencia de portacin de STEC es elevada en las muestras analizadas, sin embargo

no hay indicios de la presencia de cepas de serotipo O157. El factor de virulencia ms
frecuentemente detectado en los aislados STEC fue stx2. Estos datos corresponden a los
primeros en su gnero para ganado bovino en pie de Paraguay y resaltan la necesidad de
reforzar las buenas prcticas de manipulacin de productos crnicos.

P - 147
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Bertone, J.; Illanes, N.; Lovera, H.; Cabral, A.; Pelliza, B.; Yaciuk, R.; Romanini, S.
Institucin: Universidad Nacional de Ro Cuarto

UTILIZACION DE LA TECNICA WARTHIN STARRY PARA LA DETERMINACIN DE

Lawsonia intracelullaris y Brachyspira spp EN CORTES HISTOPATOLGICOS DE
INTESTINO DE CERDO
Lawsonia intracelullaris (Li) y Brachyspira spp (Br) son causantes de enteritis en los
cerdos, con o sin presencia de diarrea. Estos microorganismos se ubican en leon y colon
produciendo all lesiones caractersticas. Los cuadros clnicos y las lesiones
anatomopatolgicas son insuficientes para dar diagnsticos certeros de las enfermedades
causadas por estos patgenos. Lawsonia es una bacteria intracelular, no crece en medios
in vitro convencionales, por lo que el aislamiento y diagnstico serolgico resultan
complicados, cobrando relevancia el diagnstico histopatolgico. Las lesiones observadas
en tejidos (tincin hematoxilina-eosina HE) evidencian alteraciones tpicas de las acciones
patgenas de Li y Br en colon, pero es necesario encontrar la asociacin de las lesiones
histopatolgicas con la presencia de las bacterias en su ubicacin tpica y con la forma
caracterstica, para confirmar la enfermedad. La tcnica de Warthin Starry (WS) posee
Nitrato de Plata, este precipita sobre la pared de la bacteria haciendo que se observe ms
gruesa de lo normal. Esta tcnica es utilizada para poner en evidencia la presencia de
agentes bacterianos de estructuras espiroquetales y Li. En el presente estudio se realiz
un muestreo en 61 cerdos con diarrea, de entre 8 y 21 semanas de edad, mediante
necropsia y toma de muestras de la ltima porcin del leon y la primera del colon,
fijndose en formalina al 10%. Se procesaron de rutina hasta su inclusin en parafina. Se
realizaron dos cortes de cada muestra. Luego se desparafinaron, rehidrataron y tieron
una con HE y la otra con WS segn lo expresado por Faine en 1965, Luna en 1968, y con
las modificaciones realizadas por Youngs en 1969 y Woods y Ellis en 2000. De 61
animales, 5 presentaron lesiones tpicas de Li y 2 mostraron numerosas bacterias
intracelulares de color negro, de forma curva o de coma, compatibles con Li por WS, en la
porcin apical del citoplasma de los enterocitos inmaduros de las criptas de Lieberkhn,
dentro de macrfagos de la lmina propia, sueltas en la luz de las glndulas y en
abscesos criptales. En colon 24 animales evidenciaron la presencia de lesiones
compatibles con Br y estructuras espiroquetales en la superficie epitelial y luz de criptas
de Lieberkhn. Los hallazgos histopatolgicos, tanto en las criptas ileales como en colon,
coinciden con los descriptos para Li y Br como agentes causantes de diarrea. Si bien WS
no es especfica, result til a la hora de visualizar ambos agentes etiolgicos (forma,
tamao y ubicacin). Siendo una tcnica rpida y simple, cuando se lograron ajustar las
variables: temperatura y tiempos de trabajo. Concluimos que WS podra ser aplicada de
rutina, en cortes histopatolgicos, para diagnosticar agentes espiroquetales y Li causantes
de enteritis en cerdos, resultando ser ms econmica y rpida que los mtodos
convencionales.

P - 148
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Reinoso EH(1); Aprea AN(2); Rosa DE(1); Jeanneret L(3); Giordano AL(2); Reynaldi
FJ(1).
Institucin: (1)Ctedra de Micologa Medica e Industrial "Prof. Dr. Pablo Negroni". Carrera de
Microbiologa. Fac. Cs. Veterinarias. UNLP.; (2)Servicio de Endoscopa, Hospital Escuela. Fac. Cs.
Veterinarias. UNLP; (3)Veterinaria Kennedy. Berazategui, Prov. Bs. As. Argentina.

Aspergilosis nasal asociada a Eucoliosis en un canino hembra

Diferentes especies de Aspergillus son causantes de Aspergilosis nasal en caninos,
siendo los jvenes adultos de razas dolicocfalas ms susceptibles. Los sntomas de esta
micosis incluyen estornudos, nariz visiblemente hinchada con dolor y descarga nasal con
moco, pus, sangre y prdida de apetito; tambin prdida de pigmento o tejido de la
superficie de la mucosa. La invasin fngica se origina por contacto directo con el hongo a
travs de la nariz y los senos nasales; y ocurre por deficiencia inmune de las mascotas,
debilitamiento por otras enfermedades, descarga nasal pre-existente, antibitico terapia
prolongada y exposicin excesiva al agente. En el caso de Eucoleus boehmi (Capillaria)
Phylum Nematelmintos, un huevo infectivo o una lombriz de tierra que contiene larvas es
ingerido por el husped definitivo; las larvas atraviesan su pared intestinal, y por sangre
migran a las vas respiratorias, llegando a su estado adulto en la mucosa de la cavidad
nasal, senos frontal y paranasales; causando estornudos, descarga muco-purulenta y
algunas veces sangrado.
CASO CLNICO. Canino, hembra, de raza indefinida, de 7 aos, presentaba desde hace
un mes, estornudo inverso, descarga nasal izquierda purulenta y hemorrgica en la
derecha; prdida de peso. Haba recibido tratamientos con amoxi-clavulanico 12,5mg/kg
por 21 dias, sin mejora.
MATERIALES Y MTODOS. En el animal, se realizaron incidencias radiogrficas y
rinoscopa bajo anestesia general. Se lav la zona con solucin salina estril y fra, e
infiltracin de adrenalina. Se realiz inspeccin endoscpica y toma de muestras para
histopatologa y microbiologa.
Laboratorio: se realiz observacin microscpica directa en fresco (OMD) y Cultivo en
Agar Sabouraud glucosado + cloranfenicol (0,05gr/L). Incubando a 28 y 37C, entre 7-10
das.
RESULTADOS. Rinoscopa posterior: eritema de mucosa, presencia de ndulo linftico.
Cavidad nasal derecha con moco y mucosa eritematosa. En ambas cavidades, ausencia
de cornetes y masa blanquecina griscea, de aspecto caseoso y consistencia friable.
Por OMD, se estableci presencia de hifas hialinas compatibles con un eumyceto y
huevos de Eucoleus bohemi. En el cultivo se identific Aspergillus fumigatus-complex. El
estudio hematolgico revel eosinofilia en sangre. El tratamiento con Ivermectina 1%
subcutnea 200 mcg/kg dos dosis, e Itraconazol oral 9mg/Kg/ da por tres meses, fue
exitoso.
DISCUSIN. En muchos casos, los hallazgos endoscpicos son patognomnicos de esta
micosis.
La descarga purulenta profusa y hemorragias nasales que evolucionan de uni a bilateral,
decoloracin pigmentaria, ulceracin en trufa y signos de dolor, son parmetros clnicos
importantes en la presuncin de Aspergilosis nasal en caninos. Por la similitud de signos y
sntomas entre Aspergilosis y Eucoliosis en estos animales, se recomienda la OMD de las

muestras por su prctica simple y rapidez diagnstica. Medidas higinicas del entorno de
las
mascotas,
reducen
el
riesgo
de
una
y
otra
enfermedad.

P - 149
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: Soria1, M.A.; Gmez3, S.C.; Pulido2, D.; y Bueno1, D.J.
Institucin: 1Estacin Experimental Agropecuaria INTA Concepcin del Uruguay, 2Fundacin
ArgenINTA,3Universidad Autnoma de Entre Ros, Concepcin del Uruguay

AISLAMIENTO DE SALMONELLA GALLINARUM EN AVES DE POSTURA Y SU

RELACIN CON LOS PESOS RELATIVOS DE HGADO Y BAZO
La Tifosis aviar (TA) es una enfermedad septicmica especfica de aves adultas producida
por S. Gallinarum (SG). Las prdidas econmicas causadas por TA pueden ser muy altas,
no slo por la prdida de animales debido a la mortalidad, sino tambin por los costos
veterinarios involucrados, eliminacin de las aves muertas, saneamiento de las
instalaciones infectadas, etc. En general, se informa que los rganos ms afectados en la
TA son el hgado y bazo, los cuales aumentan de tamao y presentan focos necrticos
como manchas blanquecinas en sus superficies. Por ello, el objetivo de este trabajo fue
determinar la relacin entre el aislamiento de SG en distintos rganos y los pesos
relativos de hgado y bazo en aves de postura procedentes de galpones con antecedentes
de tifosis aviar. Se analizaron 39 aves de postura pertenecientes a 6 establecimientos
avcolas de las provincias de Entre Ros y Santa Fe. Se las sacrificaron en la granja, y se
trasportaron inmediatamente al laboratorio, donde fueron conservadas a 4C y
procesadas dentro de las 24 hs. Se pesaron cada una de las aves y se abri el abdomen
para obtener los hgados y bazos enteros, los que fueron colocados separadamente en
bolsa estril. A su trmino, los rganos fueron pesados para determinar el peso relativo de
cada uno. Posteriormente, se realiz la siembra directa de hgado, bazo, folculos
ovricos, ciego y mdula sea en agar Mac Conkey y agar Salmonella-Shigella. Las
placas sembradas fueron incubadas durante 18-24 a 352C. Luego de su incubacin, las
cepas compatibles con Salmonella fueron caracterizadas a travs de diferentes pruebas
bioqumicas. Las placas que no presentaron crecimiento al tiempo de incubacin
nombrado anteriormente fueron incubadas durante 18-24 hs ms a la misma temperatura.
Los resultados de aislamiento de SG y los pesos relativos de hgado y bazo fueron
comparados utilizando el test de ANOVA. Del total de animales analizados, en 14 (36%)
se aisl SG, de los cuales 9 (64%) fueron positivos en ms de un rgano analizado. De
los rganos, se aisl SG principalmente en folculos ovricos (10 animales) y de mdula
sea slo se aisl dicha bacteria en 3 animales. Los pesos relativos de hgado y bazo
fueron diferentes estadsticamente entre los animales que resultaron positivos al
aislamiento de SG en relacin a los negativos a dicho aislamiento, 3,3% vs. 2,5%, y 0,3%
vs.0,1%, respectivamente. Por otro lado, en 6 y 7 animales no se pudo aislar SG de
hgado y/o bazo, respectivamente, pero si de otros rganos. Por ello, altos pesos relativos
de hgado y bazo en un caso de sospecha de TA puede ayudar al diagnstico. Sin
embargo, se deben tomar distintas muestras a fin de aislar el agente y confirmar el
diagnstico.

P - 150
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: TAMIOZZO, P.J.; LUCCHESI, P.M.A.; GUENDULAIN, C.; AMBROGI A
Institucin: UNIVERSIDAD NACIONAL DE RIO CUARTO, UNIVERSIDAD NACIONAL DEL
CENTRO DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES, CONICET

ACTUALIZACIN SOBRE LA DETECCION DE SUBTIPOS GENTICOS DE

Mycoplasma hyopneumoniae EN LA ARGENTINA
INTRODUCCION: Mycoplasma hyopneumoniae es el agente causal de la neumona
enzotica porcina (NEP). El anlisis gentico basado en la determinacin del nmero de
serinas repetidas codificadas en un VNTR (Variable Number Tandem Repeat) de la regin
R3 del gen p146 ha sido utilizado para la tipificacin de M. hyopeumoniae. Utilizando esta
metodologa se obtuvo el primer antecedente de diversidad gentica del microorganismo
en Argentina.
OBJETIVO: Actualizar la informacin acerca de la identificacin de subtipos genticos de
M. hyopneumoniae en Argentina.
MATERIALES Y METODOS: Los resultados de las granjas A, B, C y E ya han sido
comunicados en un trabajo previo nuestro. En las granjas D, F y G se trabaj con
muestras clnicas (hisopados nasales HN- y lavados bronquio-alveolares- LBA-) de
cerdos de diferentes edades. Para la tipificacin se seleccionaron las muestras positivas a
M. hyopneumoniae mediante una PCR tamiz anidada. Tipificacin: El ADN de las
muestras de HN fue amplificado por una PCR anidada especfica para p146 R3. El ADN
de las muestras de LBA fue amplificado mediante una PCR convencional para R3. Los
amplmeros obtenidos (previa visualizacin) fueron purificados cuantificados y
secuenciados. Las secuencias de nucletidos fueron alineadas (BioEdit) y se calcul el
nmero de repeticiones de serina considerando los codones: TCT, TCC y TCA. En total
fueron tipificadas 68 muestras provenientes de cerdos de diferentes categoras
(reproductores, maternidad, recra, desarrollo y terminacin) de 7 establecimientos.
RESULTADOS: Con el anlisis de las muestras de las granjas D, F y G adicionalmente a
lo previamente descripto para las otras granjas se identificaron 10 subtipos genticos de
p146 R3. El subtipo con 14 serinas sigui siendo el ms prevalente [32,3% (22/68)] y tuvo
una amplia distribucin (5/7 establecimientos). Tipologas con motivos de repeticin de 26
y 21 serinas le siguieron en prevalencia [22% (15/68), y 17,7% (12/68)], respectivamente)
pero estuvieron acotadas a 1 granja la primera y a 2 la segunda. Se observ la existencia
de ms de una tipologa de M. hyopneumoniae dentro de una misma granja
(establecimientos B, D, E, F y G). Se observ la misma tipologa en animales de
diferentes edades dentro la misma granja (Granjas A, B, E y G).
CONCLUSIONES: El anlisis global de los resultados permiti identificar un total de 10
subtipos genticos, de cuales 4 (Con motivos de repeticin de 18, 26, 27 y 28 serinas)
an no se haban detectado en nuestro pas (correspondientes a la granja G). En nuestro
trabajo previo habamos logrado identificar 6 subtipos. El hecho de haber hallado la
misma tipologa en animales de diferentes edades dentro de la misma granja podra
indicar la existencia de un clon dominante en ciertos establecimientos. Estos cambios
genotpicos ocurriran
para alterar
el fenotipo de M.
hyopneumoniae.

P - 151
rea: Microbiologa veterinaria
Autores: VINTII, E.1; MEDINA, M.2
Institucin: 1-LARIVENOA -Fac. de Agronoma y Zootecnia- Florentino Ameghino S/N El
Manantial -Tucumn; 2-Fac. de Bioqumica, Qumica y Farmacia-UNT, Ayacucho 471-Tucumn

Deteccin de Salmonella en pollos por rt-PCR. Identificacin diferencial de S. pullorum y

S. gallinarum por dplex-PCR.
Salmonella es un agente causal de enfermedades entricas bacterianas, tanto en
animales como en seres humanos. En las aves Salmonella pullorum (pullorosis) y
Salmonella gallinarum (tifosis aviar) determinan las enfermedades clnicas caractersticas
que pueden producir grandes perjuicios a la industria avcola con consecuencias
socioeconmicas o sanitarias graves y cuya incidencia en el comercio nacional e
internacional de animales y productos de origen animal es de fundamental importancia.
Los mtodos clsicos de diagnstico bacteriolgico son laboriosos, requieren tiempo y la
informacin que brindan es limitada. Debido a ello es necesario estandarizar tcnicas de
deteccin rpida y especfica para implementar la vigilancia y el control de este
microorganismo para prevenir las enfermedades que producen. Objetivos: a) Poner a
punto la deteccin por PCR en tiempo real (rt-PCR) de Salmonella spp a partir de heces
de pollos, b) Identificar por PCR convencional Salmonella enterica serovar Gallinarum y
Pullorum en las muestras que resultaron positivas por rt-PCR. Metodologa: 1) Se
disearon cebadores especficos para la deteccin del gnero Salmonella por rt-PCR con
SYBR Green (Master Mix-Roche). Las condiciones ptimas de amplificacin del gen
fueron determinadas empleando cepas patrones de Salmonellas (LightCycler-Nano,
Roche). Como controles negativos se usaron 2 cepas de Escherichia coli. Se tomaron
muestras de heces de 15 pollos provenientes de 3 granjas de la provincia de Tucumn.
Luego de un pre-enriquecimiento de las muestras, se extrajo el DNA mediante kit
comercial (Roche). 2) Identificacin diferencial de S. pullorum y S. gallinarum mediante
dplex de PCR convencional de las muestras que resultaron positivas por rt-PCR.
Resultados: La tcnica de rt-PCR permiti la identificacin de Salmonella spp en 3
muestras de pollos. El producto de amplificacin correspondi a un amplicn de 108 Kb.
El dplex-PCR permiti la identificacin de la Salmonella enterica serovar Gallinarum en
las 3 muestras. Conclusiones: Se puso a punto un mtodo de rt-PCR para la deteccin de
Salmonella spp a partir de heces de pollos de manera rpida y especfica en comparacin
a los mtodos tradicionales de diagnstico microbiolgico. El dplex de PCR convencional
permiti identificar la biovariedad gallinarum en las muestras que resultaron positivas por
rt-PCR. La deteccin de los microorganismos permitira implementar estrategias
preventivas tempranas para el control de las infecciones por salmonella, lo cual tendra un
impacto positivo en el rendimiento econmico de la produccin de pollos.

P - 152
rea: Parasitologa clnica
Autores: Astudillo O; Diego G; Garca Messina O; Orduna T; Cabrera M; Ferreyra R. G.
Institucin: 1. Administracin Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud Dr. Carlos G.
Malbrn. Av. Vlez Sarsfield 563. CABA. CP: 1281. e-mail: gastudillo@anlis.gov.ar 2. Hospital
General de Agudos Dr. Parmenio Piero. 3. Hospital de Infecciosas Dr. Francisco Javier Muiz. 4.
Departamento de Ciencia y Tecnologa. Universidad Nacional de Quilmes. Laboratorio de
Expresin y Plegado de Protenas.

NEUROCISTICERCOSIS: ANALISIS DE DATOS COLECTADOS EN UN CENTRO DE

REFERENCIA
Introduccin: La neurocisticercosis (NC) humana por Taenia solium es endmica en
numerosos pases. En particular en Argentina, existen muy pocos datos sobre la
prevalencia de esta parasitosis.
En este trabajo se reporta la seroprevalencia de anticuerpos anti-cisticercos detectados
por ELISA en sueros del laboratorio de Enteroparsitos del Instituto Malbrn.
Materiales y mtodos: En 18 meses se colectaron 131 muestras recibidas para el
diagnstico serolgico de cisticercosis. La edad promedio fue de 35 aos sin diferencias
de sexos. Los pacientes residentes en Argentina provenan de Bolivia 38/131 (29%), Per
2/131 (1.5%) y Paraguay 1/131 (0.8%) y 12 de Argentina (9.2%) de las provincias
Tucumn, Chaco, Entre Ros, Buenos Aires, San Juan, Santa Fe y Jujuy. Solo el 5% de
los pacientes refirieron criar cerdos para consumo directo. Se describieron clnicamente
solo 54 pacientes. Las convulsiones fue el sntoma ms frecuente (70.4%), seguidas por
la cefalea (42.6%), hidrocefalia y alteracin visual (13%), epilepsia y alteraciones en la
marcha (7.4%), alteraciones motoras, sensitivas, del lenguaje y alteraciones de conciencia
(3.7%). En algunos de los casos se pudo contar con el expediente radiolgico (TAC con o
sin contraste, RMN y RMN+TAC).
Resultados: Se observ una sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y
negativo en sueros de 98,3%, 96,4%, 96,6%, 98,2% y en LCR de 87,5%, 100%, 100%,
96%, respectivamente. Se report un falso positivo en suero con diagnstico de
hidatidosis y un falso negativo en suero y LCR con un quiste calcificado. Los estudios
radiolgicos y/o clnicos encuentran evidencias compatibles con NC en todos los dems
seropositivos. El 35.2 % (19/54) present hipertensin intracraneal y el 29.6% (16/54)
mltiples lesiones qusticas. El 100% de las muestras con imgenes compatibles fueron
serologa positiva.
Conclusiones: En este trabajo se reportan las primeras evidencias extensas de la
existencia de casos de NC en Argentina, tanto en individuos de pases vecinos endmicos
como Bolivia y Per como autctonos. La evaluacin de la especificidad del ensayo de
ELISA seala que este ensayo utilizando antgenos totales presenta falsos positivos,
resultado que seala el inters de optimizar estas tcnicas diagnsticas que permitan
evitar estos resultados. Esta informacin es de cuantiosa importancia en el marco de
organizacin de campaas de prevencin y control de la enfermedad.

P - 153
rea: Parasitologa clnica
Autores: Ramrez, J.D, Mongi, F.;Casero RD
Institucin: Dpto de Parasitologa. Hospital Nacional de Clnicas, Facultad de Cs Mdicas,
Universidad Nacional de Crdoba, Argentina. Unidad Clnico-Molecular de Enfermedades
Infecciosas (UCMEI), Facultad de Ciencias Naturales y Matemticas, Universidad del Rosario,
Bogot, Colombia.

BLASTOCYSTIS sp SUBTIPO 3 (ALELO 34) DETECTADO EN PACIENTES CON

URTICARIA CRNICA
INTRODUCCION
Blastocystis sp es un protozoo anaerbico extracelular, habitante del intestino grueso de
humanos y animales y de patogenicidad largamente discutida. La biologa molecular
permiti identificar subtipos (STs) de este parsito, los que estaran asociados con
patologas intestinales (GI) y dermatolgicas (DER).
OBJETIVOS
En trabajos previos detectamos asociacin significativa entre la presencia de Blastocystis
vs GI y DER. Con el objeto de conocer los STs prevalentes de este protozoo en pacientes
portadores de estas patologas, investigamos aislamientos del parsito mediante tcnicas
moleculares de genotipificacin.
MATERIALES Y MTODOS:
Muestras fecales (n=36) de pacientes con GI y dermatolgicas, parasitadas con
Blastocystis sp, fueron mantenidas en etanol 70 a -20C. Luego de la extraccin del DNA,
la SSU-rDNA de Blastocysits se amplific por PCR ( primers RD5 y BhRDr). Los
amplicones se purificaron, secuenciaron (mtodo de dideoxi-terminal, Macrogen, Korea) y
la secuencias se editaron en MEGA 4.0 y se compararon con las de referencia (GenBank
/ BLAST queries). Para la confirmacin de variantes intrasubptipos (alelos) las secuencias
se enviaron a consulta de secuencias en la base de Blastocystis 18S
(http://pubmlst.org/blastocystis/ Blastocystis 18S). La asociacin entre sntomas y STs fue
evaluado por el test del Chi cuadrado desde al programa MedCal V.10.0.2
RESULTADOS: El anlisis molecular revel 4 STs prevalentes: ST3 (78%), ST1 (12%),
ST2 (8%), y ST6 (2%). No se detect asociacin estadsticamente significativa entre STs
y sintomatologa clnica (p=0.5). Las secuencias de la subunidad 18S, identificaron en
pacientes con sntomas no dermatolgicos los alelos (a): a2 y a4 (ST1), a9 (ST2), a134
(ST3) y a122 (ST6); mientras que en la cohorte de pacientes con urticaria slo fue
detectado el a34 (ST3).
CONCLUSIONES:
1) La prevalencia del ST3 revelada en este estudio coincide con las reportadas hasta el
presente en aislamientos de Blastocystis provenientes de muestras humanas. 2) La
deteccin del a34 slo en pacientes con urticaria representa el hallazgo de un alelo
particular en esta asociacin husped parasito, a la vez que constituye el primer reporte
de STs de Blastocystis vinculados con esta patologa dermatolgica en nuestro pas.

P - 154
rea: Parasitologa clnica
Autores: Mongi F, Laconte L, Casero RD.
Institucin: Departamento de Parasitologa- Hospital Nacional de Clnicas- UNC Santa Rosa 1564
(5008) Crdoba, Argentina

URTICARIA Y DIARREA AGUDA COMO SNTOMAS PREVALENTES EN

PORTADORES DE BLASTOCYSTIS sp
.INTRODUCCIN: Blastocystis spp es un protista polimrfico de taxonoma incierta, de rol
patognico discutido y a menudo es el protozoo ms frecuentemente aislado del tracto
intestinal de los seres humanos y muchos animales. Coloniza pacientes
inmunocompetentes e inmunocomprometidos con o sin sintomatologa y su presencia se
vincula con diversas patologas gastroentricas y/o dermatolgicas.
OBJETIVOS: Conocer el grado de asociacin entre la presencia de Blastocystis vs
sntomas y determinar que manifestaciones clnicas resultan prevalentes en pacientes
portadores de este protista.
MATERIALES Y MTODOS: 924 muestras fecales de pacientes mayores de 14 aos
recolectadas en forma seriada (n=704) y diarreicas (N=220), se evaluaron mediante
exmenes directos, concentracin por sedimentacin (formol-acetato de etilo),
sedimentacin espontnea y coloraciones permanentes (tricrmica de Wheatley).
Paralelamente, se confeccionaron fichas consignando la epidemiologa y los sntomas de
los pacientes. Para determinar la asociacin entre Blastocystis vs manifestaciones clnicas
se utiliz el Test de Fischer desde el programa MedCal V.10.0.2
RESULTADOS: El 24% (n= 221) correspondi a muestras parasitadas con Blastocystis,
de las cuales el 68,3% (n= 151) slo estaban parasitadas con este protozoo y el 31,7%
(n= 70) coparasitadas. La presencia de Blastocystis revel una asociacin significativa
con diarrea (p<0,0001) y frente a urticaria tanto cuando el microorganismo se encontraba
como monoparsito (p< 0,03) o bien junto a otros enteroparsitos (p= 0,01). Otros
sntomas gastroentricos (colon irritable, meteorismo, constipacin, dolor abdominal,
nauseas, ruidos intestinales) no estuvieron asociados significativamente con este protista
(p= 0,18).
CONCLUSIN: Consideramos que ante diarreas con Blastocystis, sin PMN y/o de otros
patgenos microbianos demostrables, resultara necesario categorizar su presencia como
probable causal del sndrome diarreico. La asociacin significativa entre Blastocystis y
urticaria, amerita que frente este sntoma se evale el uso de un antiparasitario especfico
o bien de un tratamiento sintomtico. Asimismo estos resultados promueven estudios que
esclarezcan bajo que circunstancias la colonizacin por este protozoo es de tipo
comensal, o bien cules mecanismos gatillara Blastocystis para activar procesos
alrgicos.

P - 155
rea: Parasitologa clnica
Autores: Laconte, L., Mongi, F.; Casero, R.D.
Institucin: Departamento de Parasitologa, Hospital Nacional de Clnicas, UNC.

LAS TCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO POR SEDIMENTACIN ESPONTNEA Y LOS

EXMENES DIRECTOS: SON MTODOS DE DIAGNSTICO PARASITOLGICO
CONFIABLES Y APLICABLES EN LABORATORIOS NO ESPECIALIZADOS?
INTRODUCCIN: Los mtodos de enriquecimiento aplicados para la concentracin de
parsitos en heces requieren de metodologas frecuentemente no disponibles en muchos
laboratorios de diagnstico. Por ello resultara de utilidad que Laboratorios no
especializados puedan disponer de tcnicas de enriquecimiento de fcil aplicacin, ms
sensibles y confiables adems de contar con el clsico parasitolgico directo.
OBJETIVOS: Utilizando el mtodo de concentracin del formol acetato de etilo (FAE),
como gold Standard, se compar la sensibilidad (S), especificidad (E) y valores
predictivos positivo y negativo (VPP y VPN) de una tcnica de sedimentacin espontnea
(SE) (adaptacin de Hoffman-Pons-Janer) y del exmen directo (ExD) a fin de evaluar la
aplicacin de estos procedimientos simples y de bajo costo, en laboratorios de
diagnstico.
MATERIALES Y MTODOS: 290 muestras fecales se procesaron por tcnicas de FAE
(filtracin, extraccin con acetato de etilo, sedimentacin por centrifugacin), SE
(filtracin, sedimentacin por gravedad especfica en H2O destilada) y ExD. Los
diagnsticos se realizaron simultneamente por 3 operadores y las muestras parasitadas
se agruparon en: parsitos totales (PT), helmintos (HEL) y protozoos (PZ). Los resultados
obtenidos por FAE se compararon con los arrojados por los otros dos mtodos,
calculndose la S, E, VPP y VPN para ambos.
RESULTADOS: En el 48% de las muestras (n=139), se detect algn tipo de parsito por
alguno de los 3 mtodos utilizados. SE para el diagnstico de PT y PZ, arroj valores de
S, E, VPP y VPN mayores al 85%; mientras que para HEL su S, E y VPN resultaron
superiores al 98%, y con VPP de 63%. El ExD revel valores de E, VPP y VPN por
encima del 87% para los tres grupos evaluados, demostrando una S del 82%, 83% y 60%,
para PT, PZ y HEL respectivamente.
CONCLUSIN: La tcnica de SE demostr valores aceptables como mtodo de
identificacin tanto para HEL como PZ. La baja frecuencia de HEL en la poblacin
testeada, explicara los datos obtenidos de VPP y VPN para este grupo de parsitos.
Nuestros resultados indican que SE es un mtodo valido, sencillo y econmico para
concentracin e identificacin de parsitos si no se contara con otras tcnicas para
diagnstico parasitolgico. Por otra parte si bien el ExD revel E, VPP y VPN aceptables
para los tres grupos, su baja sensibilidad una vez ms lo descarta como nico mtodo
para
el
diagnstico
de
rutina.

P - 156
rea: Parasitologa clnica
Autores: Marini V., Mangeaud A., Caffe G., Varengo H.
Institucin: Facultad de Ciencias Qumicas y Ciencias Agropecuarias Universidad Catlica de
Crdoba. Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales Universidad Nacional de Crdoba

Estandarizacin de un test de Enzimoinmunoensayo para el diagnstico serolgico de

toxocariosis.
La toxocariosis es una zoonosis de amplia distribucin geogrfica transmitida
principalmente por Toxocara canis (T. canis) y con menor frecuencia por Toxocara cati. El
diagnstico de certeza en el hombre implica el hallazgo de larvas en los tejidos mediante
estudio histopatolgico. Este mtodo es invasivo motivo por el cual frente a la sospecha
clnica de toxocariosis se realiza la deteccin de anticuerpos (Acs) especficos mediante
enzimoinmunoensayos (ELISA) empleando antgenos de excrecin/secrecin (E/S) de
larvas L2/L3 de T. canis. Para minimizar la frecuencia de reacciones cruzadas debido a
otras helmintiosis se realiza confirmacin mediante Western blot. Basados en trabajos
previos publicados realizados en nuestro laboratorio en los cuales se observ
contaminacin de tierras con huevos de T. canis y Acs especficos en nios y teniendo en
cuenta el elevado costo de los equipos comerciales para serodiagnstico, se propuso
como objetivo el desarrollo y la validacin de una tcnica de ELISA in house para
determinar la prevalencia de toxocariosis. El procedimiento se realiz en varias etapas: 1)
Obtencin de huevos de T. canis del tero de hembras adultas recuperadas de las heces
de cachorros. 2) Embriognesis de huevos cultivados en formol 2% durante 40 das. 3)
Aislamiento y cultivo de larvas en RPMI 5% CO2 luego de la eclosin de huevos. 4)
Obtencin de antgenos de E/S luego de concentrar el sobrenadante de cultivo en un
rango de 35 a 200 kd cuya concentracin se determin mediante el mtodo de Bradford.
Este producto proteico se utiliz como antgeno (Ag) en el desarrollo del ELISA. 5)
Estandarizacin: se sensibilizaron placas de poliestireno con diferentes concentraciones
de antgeno: 350 150 - 50 y 25 ug/ml. Se incubaron sueros sin inactivacin previa
diluidos hasta 1:1600. Se utilizaron diferentes concentraciones de conjugado (anti IgGperoxidasa) desde 1:5.000 hasta 1:100.000. Se procesaron a doble ciego 134 sueros de
nios con edades comprendidas entre 1 y 16 aos, 30 muestras con serologa negativa y
10 sueros positivos confirmados. Paralelamente en todas las muestras se detect IgG anti
T. canis mediante equipo comercial (Biopharm). Los mejores resultados se obtuvieron con
25 ug/ml de Ag, dilucin 1:800 de sueros y 1:40000 de conjugado. El cut off se calcul
como la media de las absorbancias de los sueros negativos +- una desviacin estndar.
Se comprob la reproductibilidad de la tcnica, con un porcentaje de variabilidad
interensayo menor al 5%. El test de Fisher demostr una significativa asociacin entre
ELISA in house y comercial (p<0,001) y una concordancia de resultados del 69%.
Mediante Test de Spearman se observ correlacin significativa de absorbancias entre
ambos mtodos (p<0,001). Conclusiones: basados en las experiencias realizadas se pudo
estandarizar una tcnica de ELISA desarrollada con Ags locales purificados en nuestro
laboratorio, til como mtodo de screening para abordar el diagnstico serolgico de
toxocariosis
humana.

P - 157
rea: Parasitologa clnica
Autores: Mongi, F, Casero, R.D.;Trucchia, R.;
Institucin: Departamento de Parasitologa, Hospital Nacional de Clnicas. UNC . Ctedra II de
Infectologa Fac. de Cs Mdicas, UNC

SARNA NORUEGA EN UN PACIENTE CON LINFOMA NO HODGKIN

INTRODUCCIN Y OBJETIVOS: la sarna humana es una parasitosis cutnea producida
por la infestacin del caro Sarcoptes scabiei var. hominis. Es una dermatosis pruriginosa
y presenta mltiples manifestaciones clnicas, en ocasiones comunes a otras patologas
dermatolgicas. Actualmente, se ha observado un incremento en la incidencia de la
variedad conocida como sarna costrosa o hiperqueratsica (popularmente denominada
sarna noruega), forma prevalente en muchos pacientes inmunocomprometidos, quienes
constituyen un grupo de riesgo para esta parasitosis. Presentamos un caso clnico con el
objetivo de considerar a esta patologa parasitaria, confirmar su diagnstico y de esta
manera contribuir a minimizar su diseminacin especialmente en pacientes
hospitalizados.
CASO CLNICO: paciente masculino de 83 aos de edad, oriundo de Bulgaria, reside en
geritrico, ingresa al Servicio de Oncohematologa del hospital (2008) para tratamiento de
Linfoma no Hodgkin (LNH) E III. Antecedentes: trabaj en una mina de uranio, ex
tabaquista, diabetes II, HTA, insuficiencia cardaca y renal. Serologa para VIH, VDRL,
Hepatitis B y C negativas. Estable y en control hasta el ao 2012, cuando es internado por
neumopata con derrame pleural. Por recada del LNH recibe nuevamente quimioterapia.
Posteriormente, refiere una lcera en paladar cuyo examen directo y cultivos identificaron
Histoplasma capsulatum, y dado el bajo recuento de DC4:119/mm3 (citometra de flujo),
se le indic tratamiento con anfotericina B e itraconazol (profilaxis secundaria). En marzo
del 2013, reingresa por neumona asociada al cuidado de la salud y en octubre consulta
por erupcin cutnea, refiriendo que desde la ltima internacin (marzo) tiene prurito
generalizado. Diagnstico clnico: lesiones mculo-papulares eritematosas en rostro,
tronco, abdomen y miembros. Anlisis parasitolgico: presencia de huevos, ninfas y
adultos de Sarcoptes scabiei var. hominis. Biopsia de piel: hiperqueratosis, acantosis,
espongiosis con infiltrado histiocitario perivascular, no indicando visualizacin de agentes
biolgicos. Se indic ivermectina oral 12mg/da durante 8 das en forma alternada durante
1 mes) y permetrina local c/72hs, con excelente respuesta y remisin de las lesiones.
CONCLUSIN: el nmero creciente de pacientes con VIH y con terapias
inmunosupresoras hacen de la sarna costrosa una patologa mas frecuente de lo
esperado. Asimismo tanto las comorbilidad de las sobreinfecciones como la elevada tasa
de parsitos presentes en las lesiones, hacen que esta parasitosis amerite un correcto
diagnstico
especialmente
en
pacientes
hospitalizados
o
geriatrizados.

P - 158
rea: Vacunas
Autores: GERTISER, M; RANDAZZO, V; POGGIO, T; JENSEN, O.
Institucin: Centro de Investigacin en Zoonosis y Enfermedades que afecten la produccin
ganadera. Pcia del Chubut. Universidad Nacional del Sur. CEVAN-Centro de Virologia Animal- ICT
Milstein -CONICET

HIDATIDOSIS, INMUNIDAD CALOSTRAL: TRANSFERENCIA PASIVA DE

ANTICUERPOS A CORDEROS HIJOS DE MADRES INMUNIZADAS CON LA VACUNA
RECOMBINANTE EG95 CONTRA ECHINOCOCCUS GRANULOSUS EN LA
LOCALIDAD DE SARMIENTO, CHUBUT.
Introduccin: Hidatidosis es una enfermedad zoontica controlable y cosmopolita causada
por cestodes del gnero Echinococcus. La enfermedad, representa un serio inconveniente
para la poblacin ganadera y la salud pblica en Argentina. En la dcada del 70 se inician
los Programas de control en las provincias patagnicas, utilizando como medidas de
control la educacin sanitaria, el control de faena y la desparasitacin peridica canina. La
incorporacin de la vacunacin de ovejas y cabras, abre nuevas perspectivas a los
programas de control, al posibilitar atacar al ciclo de la enfermedad hidatdica en un nuevo
frente, lo que va a permitir lograr un control sostenido de la enfermedad.
En Patagonia, al inicio del programa, el esquema de vacunacin propone la aplicacin de
dos dosis de vacuna a todo rumiante menor: la primera en los trabajos previos a la
paricin y la segunda en la esquila. Mientras que los corderos y chivitos reciben dos dosis
con al menos treinta das entre ambas y todos los animales reciben un refuerzo anual.
Objetivo: Detectar la presencia, en funcin de la edad, de los anticuerpos (Ac) anti-EG95
transferidos por el calostro a los corderos nacidos de madres vacunadas con Providean
Hidatil EG95 para prevenir la hidatidosis. Determinar el momento ideal para la aplicacin
de la primera dosis de vacuna en corderos nacidos de madres vacunadas.
Materiales y Mtodos: Las experiencias se desarrollaron en Centro de Investigacin en
Zoonosis en Sarmiento, Chubut. Ovejas Merino destinadas a vientre fueron divididas en
dos grupos: M1 y M2 segn fueran vacunadas con una o dos dosis de Providean Hidatil
EG95. Despus del parto, y durante 28 das, se extrajo suero y calostro/leche en cada
grupo. Se definieron dos poblaciones de corderos recin nacidos C1 y C2 segn fueran
hijos de M1 o M2. Inmediatamente despus del nacimiento, y durante 90 das, se
extrajeron muestras de suero. Se determinaron los ttulos de anticuerpos anti-EG95 para
cada muestra (suero/calostro) de cada grupo de madres y corderos en diferentes tiempos.
Resultados: Se observ que en todos los animales expuestos a dos dosis de vacunacin
los ttulos sricos de Ac IgG anti Eg95 fueron significativamente mayores a los expuestos
a una nica dosis. En el caso del calostro el mayor ttulo de Ac se present en las horas
inmediatas al parto. En ningn cordero se detect Ac anti-EG95 previo a la primera
ingestin de calostro observndose un pico en el nivel de Ac vacunales en las primeras 24
hs posteriores al parto.
Conclusiones: Los resultados indican que los Acs IgG anti-EG95 se concentran
significativamente en el calostro de las ovejas previo al parto originndose la transferencia
efectiva de los anticuerpos a la cra. Teniendo en cuenta la persistencia en suero de los
Ac vacunales adquiridos por los corderos en forma pasiva, se observa que sera ideal
iniciar la vacunacin durante la cuarta semana de vida de las cras de madres vacunadas.

P - 159
rea: Vacunas
Autores: Serafino J , Jensen O , Lightowlers M , Heath D , La Torre J , Poggio T
Institucin: Laboratorio Tecnovax S.A. Luis Viale 2835. CABA. Argentina. Departamento Zoonosis
- Secretara de Salud (Chubut). Molecular Parasitology Laboratory, The University of Melbourne,
Australia. AgResearch, Wallaceville Animal Research, New Zealand. Centro de Virologa AnimalCEVAN-Centro de Ciencia y Tecnologa Milstein (CONICET). Saladillo 2468 CABA. Argentina.

Primera vacuna recombinante contra Hidatidosis producida en Argentina: Estudio de su

bioequivalencia con la formulacin australiana.
INTRODUCCION
La vacuna recombinante fue desarrollada por Heath y Ligthtowlers para la prevencin de
la enfermedad hidatdica producida por Echinococcus granulosus en hospederos
intermediarios en 1995.
En Argentina, se ajustaron los procedimientos de optimizacin de la expresin de la
protena recombinante EG95 y seleccin de adyuvantes para la produccin de la vacuna a
escala piloto. Providean Hidatil EG95 fue aprobada por SENASA como la primera vacuna
recombinante para uso veterinario en 2011.
En un ensayo a campo en ovinos, que a la fecha, lleva mas de 5 aos ha sido comparada
la eficacia de Providean Hidatil EG95 con la vacuna recombinante australiana,
demostrndose su bioequivalencia y la correlacin entre los ttulos sricos y la proteccin.
OBJETIVO
Demostrar de la bioequivalencia de la primera vacuna recombinante contra hidatidosis
producida en Argentina comparando su eficacia con la formulacin australiana
MATERIALES Y MTODOS
Tres grupos de ovejas merino de 6 meses (n=10) fueron vacunados subcutneamente a
da 0 y 30. Las dosis de refuerzo se aplicaron a dia 465-1400.
El grupo 1 fue inmunizado con Providean Hidatil EG95 (50 g EG95+Montanide ISA 70) y
el Grupo 2 recibi la vacuna australiana (50 g Eg95+QuilA 1mg). El Grupo Control no
recibi antgeno. La eficacia de Providean Hidatil EG95 fue demostrada a travs del
monitoreo de la respuesta serolgica por tcnica de ELISA a 0, 30, 45, 465, 730, 1000,
1300, 1400 y 1430 post-vacunacin (dpv) y comparada con los datos serolgicos
obtenidos en grupo control y con el grupo inmunizado con la formulacin Australiana.
RESULTADOS
En los ovinos inmunizados a dia 0 y 30, la vacuna Providean Hidatil EG95 indujo ttulos de
anticuerpos sricos 1000 a 10000 veces mayores a los obtenidos en el grupo control y
que persistieron durante ms de un ao. Luego del refuerzo a da 465, los ttulos sricos
persistieron por mas de dos aos y no mostraron diferencias significativas con los ttulos
sricos inducidos por la formulacin Australiana.
A 1430 dpv y luego de la dosis refuerzo a dia 1400, los animales vacunados mostraron
ttulos sricos similares a los alcanzados con la vacuna Australiana.
CONCLUSIONES
Los resultados demuestran que Providean Hidatil EG95 es bioequivalente a la vacuna
australiana y que existe correlacin entre ttulos sricos anticuerpos anti-EG95 y
proteccin contra la enfermedad.
Nueva tecnologa diagnstica para la deteccin de anticuerpos anti-EG95 en hospederos
intermediarios fue desarrollada y validada debido a que no existe en el mercado
disponibilidad de equipos para el monitoreo de anticuerpos vacunales.

La vacuna fue incluida en el Programa Nacional de Hidatidosis como una nueva

herramienta para prevenir la enfermedad en hospederos intermediarios a travs de la
seroproteccin inducida y la subsecuente reduccin de la oferta de quistes hidatdicos
disponibles para los perros, posibilitando as la disminucin del riesgo de contraer la
enfermedad
a
la
poblacin.

P - 160
rea: Virologa bsica
Autores: Gallo Caldern, M.; Romanutti, C.; Keller, L.; Grippo, V.; Mattion, N.; La Torre, J.
Institucin: Instituto de Ciencia y Tecnologia Dr Cesar Misltein

ANALISIS DE LAS SECUENCIAS DE LAS PROTEINAS NO ESTRUCTURALES EN

CEPAS LOCALES DE PARVOVIRUS CANINO
INTRODUCCION: el Parvovirus Canino (PVC) es un virus altamente contagioso, que
provoca gastroenteritis hemorrgicas severas en cachorros, con altas tasas de morbilidad
y mortalidad.
Es un virus pequeo, no envuelto, con estructura icosadrica, y su genoma a ADN
monocatenario, es de aproximadamente 5200 nucletidos, y de polaridad negativa. El
mismo, codifica para 2 protenas estructurales (VP1 y VP2) y 2 protenas no estructurales
(NS1 y NS2).
Desde su primer aislamiento en 1978, el PVC ha sufrido cambios antignicos. Las
variantes PVC-2a, PVC-2b, y PVC-2c reemplazaron secuencialmente a la cepa original
PVC-2 (presente en la mayora de las vacunas comerciales). Estas variantes se han
descripto en relacin a cambios aminoacdicos con respecto a la cepa original, en la
protena de la cpside, VP2.
En trabajos previos, hemos analizado las secuencias de la VP2 y reportado la presencia
de estas 3 variantes antignicas en nuestro pas, pero poco se conoce acerca de las
secuencias de las protenas no estructurales del virus, las cuales, son esenciales para la
replicacin viral, la infeccin ltica, y tienen diversas funciones, tales como ATPasa, ADN
helicasa, y de transactivacin del promotor P38 evidenciando un rol oncosupresor. Se
sabe adems, que las protenas NS estn altamente conservadas entre los parvovirus.
OBJETIVO: el objetivo del presente trabajo, fue clonar, secuenciar y analizar las
secuencias de los genes completos de las protenas no estructurales (NS1) de cepas
Argentinas de PVC.
MATERIALES Y MTODOS: a partir de hisopados rectales tomados de 3 perros con
sintomatologa clnica compatible con PVC, se extrajo el ADN. Cada muestra es
acompaada de un formulario con informacin referida al animal tal como: sintomatologa,
historial de vacunaciones, sexo, edad, etc.
Para el diagnstico molecular, se amplific por PCR, un fragmento de 583 pares de bases
(pb) del gen de la VP2. Adems, se amplificaron por PCR los genes completos de las
protenas NS1. Los fragmentos obtenidos, fueron clonados en PgemT easy vector y
secuenciados por Macrogen Inc (Corea). Las secuencias obtenidas, se analizaron y
alinearon utilizando el programa Clustal W.
RESULTADOS: la comparacin de las secuencias del gen completo de las protenas NS1,
obtenidas de cepas locales, mostraron un porcentaje de homologa 99.2% entre s. El
alineamiento a nivel aminoacdico, mostr un porcentaje de identidad 99.4% de la cepa
Argentina (PVC-2b) con respecto a la cepa vacunal (PVC-2).
CONCLUSIONES: se analizaron por primera vez en Argentina, las secuencias de los
genes completos de las protenas NS de las diferentes variantes antignicas del PVC,
confirmndose el alto grado de homologa en esta protena y evidenciando que
mutaciones
en
esa
regin
del
genoma,
son
deletreas.

P - 161
rea: Virologa bsica
Autores: Gil, P.I., Fozzatti, L. y Paglini, M.G.
Institucin: Laboratorio de Relacin Virus-Clula. Instituto de Virologa JM Vanella, Facultad de
Ciencias Mdicas de la Universidad Nacional de Crdoba.

DEPENDENCIA DE LOS MICROTBULOS EN LA REPLICACIN DEL VIRUS PIXUNA

En las ltimas dcadas se ha registrado un resurgimiento a nivel mundial de patgenos
virales transmitidos por artrpodos, particularmente por mosquitos. Dentro de los
Aphavirus de importancia medico-veterinaria se encuentran los virus pertenecientes al
complejo antignico de Encefalitis Equina Venezolana (EEV). Resultados preliminares de
nuestro laboratorio han demostrado que la infeccin con el virus Pixuna (PXV),
representante no patgeno para el hombre del complejo de EEV, afecta de manera crucial
la morfologa celular, la cual se ve acompaada de severos cambios en la organizacin
del citoesqueleto tanto de microtbulos como de actina. Se sabe que componentes del
citoesqueleto y sus protenas asociadas son cofactores esenciales para la replicacin de
algunos virus animales. Con el objeto de indagar sobre la participacin de los
microtbulos en la replicacin del PXV, utilizamos diferentes drogas que alteran la
dinmica de los componentes del citoesqueleto de microtbulos de las clulas husped
durante la infeccin viral. As, clulas Vero fueron incubadas durante las diferentes fases
de la curva de replicacin del PXV (eclipse y exponencial) con drogas que depolimerizan
o estabilizan los microtbulos (Nocodazole y Paclitaxel). Los sobrenadantes de cultivo
fueron recolectados a diferentes tiempos y titulados mediante ensayo de placa. Ninguna
de las drogas que afectan la dinmica del citoesqueleto fueron capaces de inhibir el
ingreso del virus a la clula; sin embargo, el tratamiento durante toda la curva de
replicacin viral y en la fase exponencial, provoc una significativa disminucin de los
ttulos virales extracelulares. Por otra parte observamos una asociacin de las protenas
virales con los microtbulos mediante dos estrategias distintas: a partir de ensayos
realizados en monocapas de clulas Vero transfectadas con un plsmido conteniendo
tubulina acoplada a la protena verde fluorescente (tub-GFP) e infectadas con el PXV; y
mediante la inmunoprecipitacin de tubulina con anticuerpos especficos a partir de
homogenatos totales de clulas infectadas. As, el conjunto de resultados sugieren que el
PXV necesita de un citoesqueleto de microtbulos intacto para completar su ciclo de
replicacin y egresar de la clula hospedadora. Dilucidar los mecanismos moleculares de
las distintas etapas del ciclo de replicacin viral es crucial no solo para entender la
patognesis, sino tambin para el diseo inteligente de vectores virales seguros para ser
usados
en
investigacin,
y
en
terapia
gnica
humana.

P - 162
rea: Virologa bsica
Autores: Martnez F.; Konigheim, B.; Massuh, Y.; Aguilar J.; Batallan, G.; Farias, A.; Ojeda, M.;
Contigiani M.
Institucin: 1- Instituto de Virologa Dr. J. M. Vanella- Facultad de Ciencias Medicas-UNC. 2Ctedra de Gentica, Facultad de Ciencias Agropecuarias - U. N. C.

BIOACTIVIDAD DE EXTRACTOS ETANOLICOS DE Tagetes minuta L. (Asteraceae)

SOBRE VIRUS DE IMPORTANCIA MEDICO-VETERINARIO
Tagetes minuta L. (Asteraceae) popularmente conocida como "Suico", es una hierba
aromtica ampliamente presente en Crdoba. Se sabe que su aceite esencial es utilizado
en medicina popular por poseer principalmente actividad antimicrobiana. Sin embargo, los
antecedentes relacionados a su actividad antiviral solo se enfocan en el virus Hepatitis B.
Por ello, nos planteamos evaluar la actividad antiviral de extractos de esta especie sobre
otros virus de importancia medico-veterinario para nuestro pas.
A partir de material vegetal seco de partes areas de T. minuta, obtenido de tres
poblaciones seleccionadas y domesticadas se prepararon, extractos etanlicos (PI, P2 y
P3) y aceites esenciales (AE) de cada poblacin. Se caracteriz el perfil qumico de los
AE, as el AE que se corresponde con P1 fue rico en E-Ocimenona (72%), el de P2 en EOcimenona (60%) y una mayor proporcin de Ocimeno (15%) que P1 (<10%) y el de P3
en Dihidrotagetona (30%), presente slo en este perfil y en proporcin equivalente a la EOcimenona (32%).
Concentraciones subtxicas de cada extracto (CC80) fueron obtenidas por anlisis de
regresin logstica (R2>0.9) utilizando el mtodo de captacin del Rojo Neutro (RN),
cuyos valores fueron de 83, 64 y 34g/ml para P1, P2 y P3 respectivamente. La actividad
virucida se evalu sobre los arbovirus Encefalitis de Saint Louis (SLEV), West Nile (WNV)
y Encefalitis Equina Venezolana (VEEV). Cada virus fue pre-incubado con cada uno de
los extractos a su CC80 durante 1hora a 37C. Posteriormente, se realizaron diluciones
seriadas (1/10) que se sembraron por duplicado sobre monocapas de clulas Vero y se
incubaron a 37C, durante 3-7 das. Se incluyeron controles de clulas, virus y extractos
(n=4). Mediante el mtodo de reduccin de unidades formadoras de placa (ESLV y WNV)
o evaluacin basada en la viabilidad celular mediante RN (VEEV), se estim el porcentaje
de inhibicin viral (%I), observndose que P1 fue capaz de inhibir a los 3 virus, SLEV y
WNV entre un 85-82%I, y VEEV en 2 logaritmos. Por su parte, P2 solo tuvo actividad
sobre SLEV (77%I) y VEEV (2 logaritmos). P3 no fue activo para ninguno de los virus
evaluados.
Los resultados destacan al extracto P1 como ms activo y menos citotxico y al P3 sin
actividad con alta toxicidad. Considerando la composicin qumica del AE, la presencia de
E-Ocimenona en porcentajes mayores al 50% sera importante para la actividad virucida.
Cabe destacar que si bien la composicin de P1 y P2 sera similar, solo P1 produjo
inhibicin sobre WNV, probablemente por la presencia de una mayor proporcin de EOcimenona como de otros compuestos minoritarios que favoreceran la actividad.
Estos resultados sugieren, que T. minuta tendra compuestos con baja citotoxicidad y
potenciales propiedades antivirales. Lo cual justifica la planificacin de futuros estudios
qumicos y biolgicos para evaluar ms detalladamente las actividades observadas
principalmente de P1 como as tambin la bioactividad de los compuestos mayoritarios
presentes,
y
sus
sinergismos.

P - 163
rea: Virologa bsica
Autores: BIGANZOLI, P.; FERREYRA, L.; NATES, S.; SICILIA, P.; PAVAN, J.
Institucin: Instituto de Virologa, Facultad de Ciencias Mdicas, Universidad Nacional de
Crdoba. Ctedra de Bacteriologa y Virologa Mdicas, Departamento de Ciencias de la salud y
Educacin, Universidad Nacional de La Rioja

ACTIVIDAD DEL VIRUS HERPES HUMANO 6 (HHV-6) EN POBLACIN DE ADULTOS

MAYORES
El virus HHV-6 es altamente prevalente en la poblacin humana. La infeccin primaria
ocurre a muy temprana edad y el virus persiste en estado de latencia durante toda la vida
del individuo en clulas linfoides y glndulas salivales. La reactivacin puede ocurrir
sucesivas veces durante la vida de un infectado, pudiendo el virus ser detectado en saliva
y/o plasma. En situaciones de inmunodepresin nuestro grupo de trabajo ha caracterizado
la reactivacin viral en trminos de respuesta inmune y patrn de isotipos de IgG. La
historia natural de la infeccin en individuos sanos de poblacin general es poco
conocida.
El objetivo de este trabajo fue analizar la infeccin de HHV-6 en individuos adultos sanos
pertenecientes a dos grupos etarios (adultos y adultos mayores) para caracterizar la
actividad de este virus.
Se obtuvo saliva, plasma y suero de individuos sanos que fueron categorizados segn su
grupo etario. Grupo A: 40 adultos con una media de edad de 36 aos (rango: 18-60).
Grupo B: 18 adultos mayores con una media de edad de 79 aos (rango: 68-93). En las
muestras de saliva y plasma se detect la presencia de ADN viral por Nested-PCR y en
las muestras de suero se determin el ttulo de IgG especfica y presencia de isotipos de
IgG (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) por inmunofluorescencia indirecta. El tratamiento
estadstico inferencial se realiz mediante pruebas no paramtricas: test de Wilcoxon y
test de X2.
En el grupo A se detect ADN de HHV-6 en el 15% (6/40) de las salivas y no se detect
en las muestras de plasma. La media geomtrica del ttulo de IgG especfica fue de 104.
En el perfil de isotipos de IgG se encontr un 100% de positivos para IgG1 (40/40),
mientras que los restantes isotipos (IgG2, IgG3 e IgG4) fueron negativos. En el grupo B
no se detect ADN de HHV-6 en saliva mientras que fue detectado en el 72,2% (13/18) de
los plasmas (P<0.001; x2test). La media geomtrica del ttulo de IgG especfica fue de
119,4 (Wilcoxon P>0.05). En el perfil de isotipos se detect IgG1 en el 100% (18/18), IgG3
en el 70,6% (12/18) e IgG4 en el 58,8% (10/18) de las muestras (P<0.001; x2test).
Fue posible caracterizar diferentes modelos de infeccin para HHV-6 en poblacin sana.
En adultos, la persistencia viral se caracteriza por un modelo de latencia (ausencia de
ADN en plasma y un patrn de isotipos de IgG especfica dada por la IgG1), mientras que
en adultos mayores por un modelo de cronicidad (presencia de ADN en plasma y un
patrn de isotipos de IgG especfica dada por la IgG1, IgG3 e IgG4). Esto sugiere que la
edad avanzada podra ser un factor influyente para la replicacin de HHV-6.

P - 164
rea: Virologa bsica
Autores: Romanutti C., Gallo Caldern M., Keller L., Mattion N., La Torre J.
Institucin: Instituto de Ciencia y Tecnologa Dr. Csar Milstein

EL ANALISIS COMPARATIVO DE LAS SECUENCIAS DE UN FRAGMENTO DE LA

PROTEINA DE FUSION DEL VIRUS DISTEMPER CANINO PERMITE LA
DIFERENCIACION ENTRE CEPAS SALVAJES Y VACUNALES
Introduccin. El Virus Distemper Canino (VDC) es altamente contagioso y afecta a
cnidos domsticos y salvajes. Las vacunas a virus vivo modificadas desarrolladas en los
60 lograron controlar la enfermedad, pero recientemente se han registrado a nivel
mundial y en Argentina un aumento de casos de VDC tanto en animales vacunados como
en no vacunados. En el ICT Milstein se realiza hace aos, el diagnstico molecular del
VDC, entre otros patgenos caninos, el cual consta de una amplificacin por RT-PCR de
un fragmento del gen de la Nucleoprotena (NP). Sin embargo, la secuencia de este
fragmento no permite la diferenciacin de cepas salvajes con respecto a cepas vacunales.
Para poder establecer relaciones evolutivas entre las cepas de VDC, es necesario
analizar los genes codificantes para la Hemaglutinina (H) y la protena de Fusin (F). Si
bien el gen de la H es el ms variable, su amplificacin (incluso en fragmentos pequeos)
suele ser dificultosa. Por otro lado, se desconocen las secuencias del gen de la F en
cepas argentinas. El objetivo del trabajo fue evaluar en cepas locales, la variabilidad
gentica de la secuencia completa del gen de la F, con respecto a cepas vacunales y a su
vez, definir una regin sub-gnica que pueda ser utilizada con fines diagnsticos,
permitiendo la diferenciacin de cepas vacunales y salvajes.
Materiales y mtodos. Se amplific por RT-PCR el gen completo de la F de 15 muestras
de sangre de animales con diagnstico positivo para VDC. Los fragmentos fueron
clonados en el vector pGEMT-easy y secuenciados. Adems, se amplific por RT-PCR un
fragmento de 558 pb, incluido en el gen de la F, a partir del ARN extrado de 13 muestras.
Los productos obtenidos se secuenciaron directamente y se realiz el anlisis de las
secuencias.
Resultados. Se alinearon las secuencias aminoacdicas correspondientes al gen completo
de la protena F de las cepas argentinas junto con la cepa vacunal Onderstepoort y otras
cepas salvajes internacionales. La mayor cantidad de cambios (46 cambios) estuvo
presente en la regin correspondiente al pre-pptido, seguido por la regin F1 (15
cambios) y por ltimo la regin F2 (2 cambios). Con respecto al fragmento de 558 pb, que
abarca 238 pb de la regin F2 y 320 pb de F1, el mismo pudo ser utilizado con fines
diagnsticos, distinguiendo muestras positivas de negativas (en coincidencia con los
resultados obtenidos con la NP) y a su vez permiti, luego del anlisis filogentico, la
diferenciacin de cepas vacunales y cepas argentinas, las cuales formaron un nico
clado.
Conclusiones. Se estableci una regin sub-gnica dentro de la protena F del VDC que
pudo ser utilizada tanto para fines diagnsticos como para diferenciar cepas salvajes y
vacunales. Esta regin no present ninguna dificultad en su amplificacin, y otorga la
ventaja adicional del secuenciamiento directo (evitando el clonado) permitiendo de una
manera ms rpida y econmica el diagnstico y diferenciacin entre cepas.

P - 165
rea: Virologa clnica
Autores: BARBS, MG.; KADEMIAN, S.;BISSIO, E.; SUAREZ ORNANI,
L.;SCICILIA,P.;CASTRO,G;SOSA,MP;MARIN,A;FALISTOCO,C;CUDOLA,A
Institucin: LABORATORIO CENTRAL DE LA PROVINCIA DE CRDOBA- DIRECCIN DE
SIDA Y ETS, MINISTERIO DE SALUD DE LA NACION, ARGENTINA

MONITOREO DE CARGA VIRALCOMUNITARIA DE PACIENTES INFECTADOS CON

VIH-1 COMO INDICADOR DE LA CALIDAD DE ATENCIN Y DE ADHERENCIA AL
SEGUIMIENTO. (SUBSECTOR PBLICO DE LA PROVINCIA DE CRDOBA,
ARGENTINA )
Introduccin:
El control asiduo de la carga viral es de fundamental importancia por muchas razones,
principalmente para el seguimiento del curso de la infeccin por VIH-1 y para la toma de
decisiones acerca del momento de inicio de tratamiento. La carga viral comunitaria se ha
propuesto tambin como una herramienta para supervisar la incorporacin de los
individuos a los tratamientos y el riesgo de transmisin de la infeccin dentro de una
comunidad especfica. En la Provincia de Crdoba, la carga viral comunitaria ha
demostrado una favorable tendencia a la disminucin en los ltimos 3 aos (1). Todos los
pacientes incluidos en el sistema de salud pblica tienen acceso a la realizacin de al
menos 3 determinaciones de carga viral por ao. Sin embargo, en los ltimos aos, la
frecuencia en el monitoreo de carga viral parece no ser ptima.
Objetivo: Evaluar el monitoreo de la carga viral comunitaria en las personas infectadas
con VIH-1 en la Provincia de Crdoba en el perodo 2010-2012.
Materiales y Mtodos: Se analizaron los datos obtenidos de los registros informticos de
todos los resultados de las cargas virales realizadas en el subsector pblico de Crdoba.
Se calcul el nmero de determinaciones de carga viral efectuadas por paciente por ao.
Resultados: En todo el perodo analizado (3 aos), se procesaron un total 7.837 muestras,
correspondientes a 5562 pacientes. El nmero de muestras estudiadas por ao fue: 2726
(1.905 pacientes) en 2010, 2262 muestras (1641 pacientes) en 2011, y 2.849 muestras
(2.016 pacientes) en 2012. Estos datos se reflejan en un promedio de 1,43
determinaciones/paciente/ao en 2010, 1,38 en 2011 y 1,41 en 2012. Adems, slo el 38
% de los individuos se realiz por lo menos 2 determinaciones de carga viral/ao en 2010,
y slo el 32 % en cada uno de los dos aos subsiguientes. Sin embargo, la proporcin de
personas con niveles de carga viral indetectable (supresin virolgica) increment
favorablemente de 29 % (2010) a 43 % (2011) y a 55 % en 2012.
Conclusiones: A partir del ao 2011, en el marco de polticas sanitarias locales nacionales y provinciales- se implementaron intervenciones tendientes a una mejora
observable en la cantidad de pacientes con valores de carga viral controlados. Por el
contrario, la proporcin de personas con al menos 2 determinaciones de carga viral por
ao disminuy en los ltimos aos en nuestro medio. Adems, se observ que
aproximadamente slo 1 de cada 3 individuos infectados con VIH-1 se realiz los
controles de sus cargas virales por lo menos dos veces al ao. Considerando que la carga
viral constituye indiscutiblemente un indicador crtico de la adecuada adherencia de los
pacientes a los controles y de la calidad de la atencin brindada, el monitoreo regular la
de la misma debe intensificarse.

1- Community viral load after implementation of new treatment guidelines in Crdoba,

Argentina. Bissio et al. 20 th International AIDS Conference, 2014.

P - 166
rea: Virologa clnica
Autores: Borda, M. 1; Barbs, G.1; Blanco,S.1; Castro,G.1; Cudola,A.1; Morales,A.2; Fabbri,C.2;
Luppo,V.2.
Institucin: 1 Laboratorio Central del Ministerio de Salud de la Provincia de Crdoba. Argentina;2
Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas, Dr. Julio I. Maiztegui. Pergamino.Argentina

CIRCULACIN DEL VIRUS DE LA ENCEFALITIS DE SAN LUIS EN LA PROVINCIA DE

CRDOBA, PERODO NOVIEMBRE 2011 - DICIEMBRE 2012
El virus de la Encefalitis de San Luis (SLEV) es un Arbovirus que pertenece la familia
Flaviviridae, gnero Flavivirus y forma parte del complejo serolgico de la encefalitis
japonesa. Se transmite por la picadura de mosquitos infectivos pertenecientes al complejo
Culex pipiens-quinquefasciatus. En Argentina, se ha reconocido la presencia del SLEV
desde 1963. En Crdoba, se report el primer brote epidmico humano durante el ao
2005 con 47 casos confirmados por laboratorio y 8 casos fatales. A partir de entonces se
intensific la vigilancia epidemiolgica, registrndose la circulacin del SLEV todos los
aos. Durante el ao 2012, a travs del sistema de vigilancia de sndrome febril
inespecfico y de meningoencefalitis virales, se detectaron casos de infecciones por SLEV
en el transcurso de un brote de dengue.
El objetivo de este trabajo fue investigar la circulacin del SLEV en la provincia de
Crdoba durante el perodo comprendido entre noviembre del 2011 y diciembre del 2012.
En este lapso, en nuestro laboratorio se recibieron 326 muestras de suero y/o lquido
cefalorraqudeo, correspondientes a 249 pacientes. De estos, 121 tenan diagnstico
sospechoso de sndrome febril inespecfico por dengue y 128 de meningoencefalitis viral
por Flavivirus. Al total de muestras, se les realiz deteccin de IgM anti-Dengue e IgM
anti-SLEV mediante la tcnica de captura de anticuerpos (MAC-ELISA). Las muestras
reactivas para Flavivirus, fueron derivadas al Laboratorio de Referencia Nacional del
INEVH para confirmacin diagnstica, por tcnica de neutralizacin (NT) en cultivo
celular. La notificacin de casos y el criterio de clasificacin de los mismos se realizaron
segn el tutorial de notificacin de eventos del Ministerio de Salud de Nacin, a travs del
SIVILA.
Se detectaron 45 (18%) pacientes reactivos para Flavivirus y 204 (82%) no reactivos. De
los 45 pacientes reactivos, en 14 (31%) se confirm infeccin por SLEV por NT y 23
(51%) se definieron como casos confirmados y/o probables para Virus Dengue. Los 8
(18%) casos restantes, correspondieron a muestras de suero en las que no se pudo
confirmar la infeccin por no disponer del par serolgico, definindose como infeccin
probable por Flavivirus. Al evaluar los datos clnico-epidemiolgicos de los pacientes en
los que se confirm infeccin por SLEV y en los clasificados como infeccin probable por
Flavivirus, el promedio de edad fue de 38 aos (rango: 9 a 64 aos). De ellos, 9 tenan
diagnstico presuntivo de meningoencefalitis viral, requiriendo internacin el 100% de los
mismos. Los 13 restantes tenan diagnstico sospechoso de dengue.
El presente estudio destaca la importancia de la vigilancia de los Flavivirus circulantes en
nuestra regin, identificndose as nuevos casos humanos de infeccin por SLEV; y la
necesidad de realizar el diagnstico diferencial debido a la similitud de la sintomatologa y
el
cruce
serolgico
entre
los
mismos.

P - 167
rea: Virologa clnica
Autores: CASTAEIRA,M.; DE ZAN, L.; SOSA,M.
Institucin: HOSPITAL DE NIOS DE SANTA FE "Dr ORLANDO ALASSIA"

REPORTE DE UN CASO: DIAGNSTICO MOLECULAR DE ENTEROVIRUS EN

LQUIDO CEFALORRAQUDEO ASOCIADO A ACCIDENTE CEREBROVASCULAR
ISQUMICO EN PEDIATRA
La enfermedad cerebrovascular en el nio alcanza una incidencia anual 1,5-2,5/100000
en nios menores de 15 aos. Las infecciones del Sistema Nervioso Central (SNC) por
enterovirus son una causa poco frecuente de Accidente Cerebrovascular (ACV) isqumico
.Precisar la etiologa de las infecciones neurolgicas en el menor tiempo posible sirve
para la toma de decisiones con respecto al tratamiento y profilaxis adecuada.Presentamos
el caso de un nio de 4 meses de edad con antecedente de diarrea aguda de 13 das de
evolucin asociada a hiporexia, vmitos y fiebre que ingresa al hospital por deshidratacin
grave con shock, secundaria a gastroenteritis. Al ingreso se realiza urocultivo,
hemocultivos, recuento de polimorfonucleares, parasitolgico directo, coprocultivo,
serologa pretransfusional, tomografa axial computada (TAC), todos negativos. Cultivo de
LCR sin desarrollo. Se realiz nested PCR para deteccin de Enterovirus segn lo
publicado por Casas et al (1997): Para la extraccin y purificacin se utilizaron columnas.
Se amplific una secuencia altamente conservada del ARN (5 NCR de 306-311 pb,),
visualizndose los amplicones en gel de agarosa 2%. Con resultado para Enterovirus
positivo. PCR para Herpes Virus I y II en LCR negativa. A las 24 horas de internacin
agrega alteracin del estado de conciencia, taquipnea , episodio convulsivo y hemiparesia
braquicrural derecha por lo cual ingresa a unidad de cuidados intensivos (UCI). Recibe
tratamiento emprico (vancomicina, meropenem y aciclovir) con asistencia mecnica
respiratoria. Se solicita nueva TAC de crneo con contraste que informa ACV isqumico
en regin temporoparietal izquierdo, sin hemorragia ni edema. La Resonancia magntica
nuclear (RMI) contrastada mostr reforzamiento con alteracin en la intensidad de seal
de la zona que sugiere patologa vascular isqumica. Endoscopa alta y
Videocolonoscopa baja con biopsias de mucosa: normal. Luego de 14 das de internacin
present tres fallas en la extubacin y requiri traqueotoma. Contina internado en
UCI.Debido a la presentacin poco habitual de esta forma de manifestacin en el SNC de
EV, se procedi a la revisin de bibliografa y al trabajo interdisciplinario. Desde el punto
de vista diagnstico representa un reto y nos permite recalcar la importancia de tener
presente la etiologa viral dentro de los diagnsticos diferenciales. Por lo expuesto
queremos destacar la importancia de considerar la solicitud del estudio de virolgicos en
LCR por PCR a todos los pacientes con sospecha clnica de ACV isqumico.

P - 168
rea: Virologa clnica
Autores: Mosmann, J.1*; Talavera, A.2; Monetti, M.1; Frutos, M.1; Kiguen, A.1; Venezuela, R.1;
Panico, R.2; Ferreyra de Prato, R.2; Cuffini, C1
Institucin: 1-Instituto de Virologa Dr. J.M. Vanella. Facultad de Ciencias Mdicas. Universidad
Nacional de Crdoba. Argentina. 2-Facultad de Odontologa. Universidad Nacional de Crdoba.
Argentina. *-Becaria Instituto Nacional del Cncer- Ministerio de Salud de la Nacin.

IDENTIFICACION DE LOS GENOTIPOS DEL VIRUS PAPILOMA HUMANO EN

LESIONES DE LA CAVIDAD ORAL
Al Virus Papiloma Humano (VPH) se lo conoce como el agente etiolgico del cncer
cervical, no obstante su papel como agente del cncer oral es controversial y debe ser
estudiado con mayor profundidad. Las lesiones precancerosas o potencialmente malignas
(LPM) de la mucosa oral fueron descriptas por la OMS como aquel tejido de morfologa
alterada con mayor predisposicin a la cancerizacin (superior al 5%) que el tejido
equivalente de apariencia normal, independientemente de sus caractersticas clnicas
(leucoplasia verrugosa, lquen querattico, queratoacantoma, candidiasis crnica y lquen
atrfico) o histolgicas. En muchas ocasiones, estas lesiones son clnicamente
indistinguibles del carcinoma oral de clulas escamosas (OSCC)
El objetivo del trabajo fue determinar la presencia del VPH y sus genotipos, en LPM de la
cavidad oral.
Materiales y mtodos. Se realiz citologa exfoliativa y anatoma patolgica de 40
pacientes con LPM y 30 voluntarios sin lesiones de la cavidad oral. Paralelamente, las
muestras fueron analizadas por PCR dirigida a la regin L1 del VPH y genotipificadas por
el mtodo de RFLP con enzimas de restriccin.
Resultados. Se detect VPH en el 50% de las LPM; los genotipos hallados fueron: 6, 11,
13, 16, 52 y 61. Se evidenci asociacin estadsticamente significativa entre la presencia
del VPH y las LPM (p<0,0001; X2= 21), ya que las muestras de todos los voluntarios
resultaron negativas para VPH.
Conclusin. Estos resultados estn en concordancia con los detectados en estudios
anteriores, tanto en la ciudad de Crdoba como en otros lugares del mundo.
Teniendo en cuenta la asociacin del VPH con cncer de crvix, su naturaleza
epiteliotrpica y la similitud morfolgica entre el epitelio genital y oro farngeo, estos
resultados preliminares, nos permiten inferir que la evolucin de las LPM podra verse
condicionada por los factores de riesgo convencionales (por ej.: tabaco, alcohol,
inmunosupresin), e inclusive por el genotipo de VPH detectado.
Apoyo
financiero:
PIO-MincytCba
N170/2011.

P - 169
rea: Virologa clnica
Autores: MEDINA, M.1; VINTII, E3.; LOPEZ DE CAILLOU, S.1,2; ZAMORA, A.1,2; RUIZ DE
HUIDOBRO, G.1,2
Institucin: 1-Fac. de Bioqumica, Qumica y Farmacia-UNT, Ayacucho 471. Laboratorio de
Diagnstico Virolgico, Htal Avellaneda, Tucumn. 3-LARIVENOA-Fac. de Agronoma y ZootecniaFlorentino Ameghino S/N. El Manatial. Tucumn

Primera deteccin de subtipos de Virus Respiratorio Sincitial por RT-PCR en tiempo real
en nios internados de la provincia de Tucumn
Las infecciones respiratorias agudas (IRA) constituyen una de las problemticas ms
importantes en salud pblica y son causa de elevada morbilidad y mortalidad en el
mundo, principalmente en pases en vas de desarrollo. El Virus Respiratorio Sincitial
(VRS) es a nivel mundial, la causa ms frecuente de IRA Baja (IRAB) en lactantes y nios
pequeos, siendo responsable de aproximadamente tres cuartas partes de las
hospitalizaciones con diferentes grados de severidad. Las manifestaciones ms comunes
son bronquiolitis y neumona. Este virus presenta dos subtipos virales A y B: VRS-A y
VRS-B. Algunos estudios atribuyen mayor severidad clnica al subtipo A y unos pocos al
B. Objetivos: a) Identificar por primera vez la circulacin de subtipos de VRS A y B (VRSA, VRS-B) en muestras positivas por inmunofluorescencia (IF) para VRS de nios
menores de 5 aos internados con IRAB, b) determinar el subtipo de mayor prevalencia
en nuestra provincia en el perodo abril-diciembre de 2013. Metodologa: Se analizaron
por IF indirecta 298 muestras de aspirados nasofarngeos de nios de hasta 5 aos de
edad internados en servicios de salud privados de la provincia de Tucumn durante el
perodo evaluado. Las muestras positivas para VRS fueron subtipificadas por reaccin en
cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa en tiempo real (RT-PCR) para
deteccin de VRS-A y VRS-B (Kit Retrotranscripcin-Roche, Master Mix-Roche).
Resultados: El 50 % (149) de las muestras estudiadas por IF resultaron positivas para
algn virus respiratorio, de las cuales 101 (68%) correspondan a VRS. La subtipificacin
de VRS por RT-PCR mostr un 83 % de muestras positivas para VRS-A y slo el 17% de
las mismas fueron positivas para VRS-B. La circulacin de VRS comenz a incrementarse
a partir de la semana epidemiolgica 33. Los resultados de otros virus estudiados fueron:
Influenza A (5,7 %), Influenza B (0,3 %), Adenovirus (0,3 %), Parainfluenza (1,3 %),
Metapneumovirus (8,4 %), con un 50 % de muestras negativas para estos virus sobre el
nmero total de muestras evaluadas.
Conclusiones: El VRS fue el principal agente etiolgico asociado a IRAB, observndose
una marcada prevalencia del subtipo A y la bronquiolitis fue la entidad clnica
predominante. El presente trabajo es el primer reporte de deteccin en Tucumn de los
subtipos
circulantes
del
VRS
en
una
cohorte
de
nios
internados.

P - 170
rea: Virologa clnica
Autores: NASI MEDEOT,L; FRUTOS, M; RODRCUEZ, P; TENAGLIA, M; CUFFINI, C; ISA, M;
CAMARA, A.
Institucin: INSTITUTO DE VIROLOGA "J.M. VANELLA" FCM-UNC; CLNICA PRIVADA REINA
FABIOLA-UCC; CRDOBA, ARGENTINA.

DETECCION DE METAPNEUMOVIRUS HUMANO EN POBLACIN INFANTIL DE UN

CENTRO DE SALUD PRIVADO DE CRDOBA
En 2001 se descubri en Holanda el Metapneumovirus humano (MPVh). Pertenece a la
Familia Paramixoviridae, Subfamilia Pneumovirinae y Gnero Metapneumovirus. Se ha
encontrado en numerosos estudios donde las pruebas resultaron negativas para Virus
Respiratorio Sincicial (VRS) y Virus Influenza (VI), con los que comparte sntomas
clnicos. Produce morbimortalidad infantil de importancia y puede ser asociado a un rol
patognico de asma.
El MPVh circula en varios pases del mundo. En Argentina, se report en Buenos Aires,
Ushuaia, Mendoza, Santa Fe y Crdoba.
Es un virus estacional con pico hacia finales de invierno y disminuyendo hacia finales de
primavera. La edad de los nios va de los 16 a los 36 meses. Se ha comunicado una
prevalencia del 5 al 10% tanto en infecciones nicas y en coinfecciones por tcnicas
clsicas como la Inmunofluorescencia directa (IFD) y alcanza ms del 50 % por tcnicas
moleculares.
El objetivo del trabajo fue conocer la circulacin de MPVh en un centro de salud
de la ciudad de Crdoba, utilizando la tcnica de biologa molecular.
Las muestras fueron hisopados o aspirados nasofarngeos (HNF o ANF) de poblacin
infantil hospitalizada en la Clnica Privada Reina Fabiola- UCC, durante 2012. En este
centro, las muestras se analizaron previamente por IFD los siguientes agentes virales:
VRS, VI A, VI B, Adenovirus (Adv) y Virus Parainfluenza 1, 2, 3 (VPI 1, 2, 3). La bsqueda
fue en dos perodos de mayo a agosto y de noviembre a diciembre.
En esta investigacin se determin MPVh en 54 de las 65 (83%) muestras analizadas por
RT-PCR, observndose el mayor nmero de casos en Junio. Se detectaron coinfecciones
en un 47% de los casos estudiados (entre MPVh por biologa molecular con RSV, VI, Adv,
VPI por IFD). El rango etario de las muestras de nios positivos de mayor frecuencia
estaba comprendido entre 1 y 2 aos.
En conclusin, el estudio nos permiti afirmar la circulacin de Metapneumovirus en nios
que fueron asistidos en esta Clnica de Crdoba durante el ao 2012.
La elevada incidencia es mayor que la reportada por otros autores, posiblemente debido a
que el muestreo fue realizado en el pico de mayor frecuencia de casos de MPVh. Se
debera realizar una pesquisa anual para obtener una prevalencia similar a la reportada
por la bibliografa. A su vez, hay que tener en cuenta que en los centros de salud el
diagnstico se hace a demanda y este perodo fue el ms solicitado.
Por lo tanto, MPVh circul durante 2012 en poblacin infantil de Crdoba, lo que
promovera a incluir su determinacin molecular en el diagnstico de rutina de infecciones
respiratorias.

P - 171
rea: Virologa clnica
Autores: Pisano, M. B. (1); Gallego, F. (1); Torres, C. (2); Martnez Wassaf, M. (3); Campos, R. (2);
R, V. (1).
Institucin: 1-Instituto de Virologa "Dr. J. M. Vanella", Facultad de Ciencias Mdicas, UNC. 2Ctedra de Virologa, Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA. 3- rea de Virologa y Biologa
Molecular, LACE Laboratorios

ANLISIS DE MUTANTES DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B EN PACIENTES MONOINFECTADOS Y CO-INFECTADOS CON HIV DE CRDOBA.
El virus de la hepatitis B (HBV) se clasifica en 9 genotipos (gts) (A-I) y varios subtipos,
distribuidos geogrficamente. Se han descripto mutaciones en distintas regiones
genmicas del HBV asociadas con la progresin de la enfermedad y la respuesta a la
terapia, algunas de las cuales dependen del gt. Existen mutaciones con importancia
clnica dentro de la regin codificante del antgeno de superficie (AgHBs), de la
polimerasa (ORF-P) y de la regin del precore/promotor basal del core (pC/BCP). En
Argentina se ha descripto presencia de gts A, B, C, D, E, F, H y G en distintas
poblaciones; en Crdoba se detectaron los gts A (37.5%), C (5%), D (5%) y F (52.5%).
Estudios realizados en Buenos Aires muestran que la prevalencia de mutantes de AgHBs
y pC/BCP es significativa, pero nada se conoce sobre la presencia de estas variantes en
la regin central del pas.
El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de mutaciones de importancia
clnica en la infeccin por el HBV en individuos de Crdoba. Se estudiaron muestras de
pacientes mono-infectados con HBV (n=40) y co-infectados con HIV (n=12). Se analizaron
secuencias de dos fragmentos genmicos correspondientes al gen S (AgHBs-585 bp), el
que se superpone con parte del ORF-P, y a la regin pC/BCP (742 bp), mediante los
programas Mega v5.0 y Mutation Reporter Tool.
De los pacientes mono-infectados, 21 presentaron mutaciones en alguna de las regiones
estudiadas. Las mutaciones en pC/BCP asociadas a bajos niveles de AgHBe fueron
halladas casi exclusivamente en pacientes crnicos, algunos de los cuales tambin
presentaron sustituciones aminoacdicas asociadas a resistencia a la terapia antiviral
(ORF-P) y/o asociadas a falla en el diagnstico o escape a la vacuna (ORF-S). Se
encontr la nueva mutacin I110L en ORF-S, hallada frecuentemente en gt F y en
pacientes crnicos.
En los individuos co-infectados con HIV, 7 mostraron mutaciones en alguna de las
regiones investigadas. En este grupo una mayor proporcin de pacientes con IgM antiHBc (-) present sustituciones aminoacdicas asociadas a resistencia a la terapia antiviral.
No se detectaron mutaciones en la regin pC/BCP.
La mayora de las mutaciones observadas correspondieron a pacientes IgM anti-HBc (-),
tanto en pacientes mono como co-infectados. En los primeros, a pesar de que la mayora
de las mutaciones encontradas en el AgHBs estaban asociadas a escape inmunolgico o
falla en el diagnstico, ninguna de las muestras fall en ser detectada por kits comerciales
de rutina. Para la regin pC/BCP, el patrn de mutaciones encontrado es similar a la
regin Metropolitana, y responde al gt. Mutaciones relacionadas a resistencia a la terapia
se hallaron principalmente en pacientes crnicos. Se necesitan ms estudios para
dilucidar la importancia de la nueva mutacin encontrada, como tambin para profundizar
en
el
conocimiento
de
las
previamente
descriptas.

P - 172
rea: Virologa clnica
Autores: Rodrguez PE.; Frutos MC.; Cuffini C.; Cmara JA.; Cmara A.
Institucin: Instituto de Virologa "Dr. J. M. Vanella"

Nuevos aportes al estudio filogentico de Metapneumovirus humano en Crdoba,

Argentina.
Las infecciones respiratorias agudas (IRA) son la mayor causa de morbimortalidad en
nios, uno de los agentes asociados es Metapneumovirus humano (MPVh). Fue
descubierto por Van den Hoogen en el ao 2001 en Holanda (Familia Paramixoviridae,
Subfamilia Pneumovirinae y Gnero Metapneumovirus). Se han identificado dos grupos
genticos: A y B, que se subdividen en dos subgrupos, 1 y 2 (A1, A2a, A2b, B1, B2). En
Argentina, Galiano en el 2006 determin la presencia de MPVh A1, A2 y B1 y
posteriormente Vlez Rueda (2013) demostr que A2 y B2 circularon conjuntamente en
2009 y 2010 mientras que en 2011 slo circul MPVh A2. En Crdoba fue detectado por
primera vez en el ao 2011 en nios con una prevalencia del 4%. Estudios filogenticos
realizados en el laboratorio de Influenza del Instituto de Virologa, concluyeron que
durante 2011 las cepas circulantes pertenecan al subtipo A2.
En este trabajo se busc ampliar la informacin aportada por nuestro laboratorio sobre las
detecciones e identificaciones filogenticas de MPVh en poblacin infantil de Crdoba.
Se analizaron 181 muestras respiratorias de nios menores de 5 aos hospitalizados por
IRA en 2011. Fueron procesadas para la extraccin de ARN y se detect una regin del
gen N de MPVh (199pb) por medio de RT-PCR convencional, adaptada de BouscambertDuchamp (2005). Cinco muestras positivas fueron secuenciadas para corroborar su
identidad y se sometieron a anlisis filogentico.
Se detect ARN de MPVh en el 60% de las muestras. Luego del anlisis filogentico, las
secuencias agruparon junto con dos identificadas e informadas para Crdoba y de otras
regiones, indicando su pertenencia a MPVh subtipo A2.
Estos resultados concuerdan con lo reportado por nuestro laboratorio durante el ao
2013, donde secuencias analizadas pertenecan a MPVh A2. Asimismo coinciden con lo
reportado por Velez Rueda et.al. (2013) que indican un predominio de dicho subtipo
durante 2011. Este genotipo se considera un linaje emergente en los ltimos aos y se ha
detectado en mayor medida en nios con neumona, pero existen pocos estudios que
asocian cuadros clnicos ms severos en presencia del genotipo A.
Estos resultados amplan las detecciones y caracterizacin gentica de MPVh en
Crdoba, contribuyendo a la epidemiologa del agente a nivel local y del pas, pudiendo
asociar y comparar los datos con los reportados. Aportan datos para implementar
medidas preventivas y sanitarias a nivel de salud pblica. Son escasos, en nuestra regin,
los antecedentes sobre este agente que causa problemas respiratorios principalmente en
nios y se encuentra asociado a un rol patognico en el desarrollo de asma en el tiempo.
Como consecuencia y con intensiones de ampliar el conocimiento sobre epidemiologa y
patognesis de MPVh, se busca seguir con las detecciones, biologa de la infeccin y
tipificaciones de cepas circulantes a travs de la utilizacin de otras regiones del genoma
de
MPVh.

P - 173
rea: Virologa clnica
Autores: ZITTA, M.; NAVELLO, M.; MULLER, M.; MAZZEO, M.; PIANCIOLA, L.
Institucin: Laboratorio Central, Subsecretaria de Salud de Neuqun, Argentina

METAPNEUMOVIRUS HUMANO (MPVh) EN INFECCIONES RESPIRATORIAS

AGUDAS (IRA) DE LA PROVINCIA DEL NEUQUN EN EL PERIODO 2010-2013
Las IRA son una causa importante de morbimortalidad en todo el mundo. A pesar que las
manifestaciones clnicas de estas infecciones son fcilmente reconocibles, el agente
etiolgico de las mismas no se puede identificar en hasta el 50% de los casos. En 2001,
se describe un nuevo virus involucrado en estas infecciones: MPVh. Este agente viral
est estrechamente relacionado al Virus Respiratorio Sincicial Respiratorio (RSV). Ha sido
vinculado con IRA en todos los grupos etarios, aunque de mayor gravedad en nios
pequeos, ancianos e inmunocomprometidos. Se asocia a una gran variedad de
sndromes clnicos, incluyendo IRA alta y bajas. Muchos trabajos han abordado el estudio
de las infecciones por este virus en nios menores de 2 aos. Sin embargo, la informacin
en mayores de 2 aos es mucho ms escasa.
El objetivo de este trabajo es presentar datos de las IRA por MVPh en mayores de 2 aos
en la provincia de Neuqun durante el periodo 2010-2013.
Se estudiaron 1128 aspirados o hisopados nasofarngeos de pacientes mayores de 2
aos hospitalizados en Centros de Salud Pblica de Neuqun entre enero 2010 y
diciembre 2013. Para el diagnstico se utiliz una RT-PCR (Falsey et al., 2002) en las
muestras tomadas hasta julio del 2013. A partir de agosto del 2013 se us una RT- PCR
real time con Sybr Green (segn protocolo Bio-Rad). La extraccin de RNA se realiz
utilizando QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen, Alemania).
Se obtuvieron 171 resultados positivos, con un 15,2% de positividad. El grupo de 2 a 14
aos present 108 positivos (63,2%). El grupo de 15 a 34 aos tuvo 13 positivos (7,6%).
En el siguiente (35-64 aos) hubo 27 positivos (15,8%). En los mayores de 65 aos se
observaron 23 positivos (13,4%). La distribucin de positividad por ao fue la siguiente: en
2010 fue de 51,0% (26 positivos de 51 muestras estudiadas), en 2011 fue 17,9% (62 de
347), 5,8% en 2012 (9 de 154) y 12,8% en 2013 (74 de 576). Un 12,3% (98 de 796) de los
diagnsticos positivos provinieron de pacientes con diagnstico de neumona. El resto de
las muestras positivas correspondieron a pacientes con Enfermedad tipo Influenza u otras
patologas respiratorias. Se observ una distribucin temporal con marcada
estacionalidad. Los brotes por MPVh fueron posteriores al de RSV, a excepcin del ao
2011 en donde los picos de circulacin de ambos virus coincidieron.
Estos resultados muestran que el grupo ms afectado fue el de pacientes de 2 a 14 aos.
El virus present una marcada estacionalidad, similar a RSV, con brotes posteriores a
ste, a excepcin del 2011. Tambin se observ una mayor circulacin del virus en el
2010. El anlisis de estos datos, con un alto nmero de muestras estudiadas para MVPh,
demuestra una considerable presencia del virus en otros grupos etarios distintos al
considerado habitualmente (menores de 2 aos). Incluso el alto porcentaje de pacientes
con neumona por MPVh implica la necesidad de considerarlo como posible agente
etiolgico
de
esta
patologa.

TRABAJOS CIENTFICOS - ORALES

rea: Microbiologa agrcola
Autores: ARNEODO, J.; JAKUBOWICZ, V.; TAIBO, C; SCIOCCO-CAP, A.
Institucin: ARNEODO: CONICET e IMyZA-INTA Castelar; JAKUBOWICZ: IMyZA-INTA Castelar;
TAIBO: Laboratorio de Microscopa y Capacidades Afines-INTA Castelar; SCIOCCO-CAP: IMyZAINTA Castelar

AVANCES EN LA CARACTERIZACIN DE DOS BACULOVIRUS AISLADOS DE LA

ORUGA MEDIDORA Rachiplusia nu (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE)
La oruga medidora, Rachiplusia nu, es originaria de Amrica del Sur. Esta especie
defoliadora, muy voraz y polfaga, ocasiona daos de importancia en alfalfa, girasol, soja,
lino y algunas hortcolas. En el marco de las estrategias de manejo integrado de plagas,
los entomopatgenos, entre ellos los baculovirus, pueden ser una herramienta para
reducir las poblaciones de lepidpteros en el cultivo. En este trabajo, se exponen los
resultados preliminares de la caracterizacin de dos aislamientos baculovirales
conservados en la coleccin del Laboratorio de Virus Entomopatgenos del IMyZA-INTA
Castelar. Los mismos fueron obtenidos y multiplicados a partir de ejemplares de R. nu
naturalmente infectados colectados en campo (Oliveros, Sta. Fe) en 1992 y 1994. Los
estudios involucraron la realizacin de bioensayos, microscopa ptica y electrnica, y
para el caso del aisl-1992, la amplificacin y secuenciacin parcial del gen de la poliedrina
(altamente conservado, comnmente utilizado en taxonoma de baculovirus). Para evaluar
la infectividad de ambos aislamientos (mantenidos en freezer a -20 C) se us el mtodo
de suministro de virus por va oral mediante lquido con colorante y fagoestimulante
(drop-feeding method). Se trabaj con larvas hambreadas de tercer estadio de R. nu y
Epinotia aporema (Lepidoptera: Tortricidae) provenientes de cra en laboratorio, siendo las
dosis de aprox. 1000 cuerpos de oclusin (OBs) por larva. stas fueron llevadas a cmara
de cra (26 C) y alimentadas con dieta artificial. A tres das post-infeccin, ya se
visualizaban OBs por microscopa ptica en la hemolinfa de ejemplares de R. nu, y a los 6
das la mortalidad de las larvas de esta especie expuestas a cualquiera de los
aislamientos alcanz el 100%. Los testigos sanos de R. nu (colorante y fagoestimulante,
sin virus) y los ejemplares de E. aporema, en cambio, se desarrollaron normalmente hasta
el estado de pupa. Los OBs fueron extrados de los cadveres de R. nu infectados y
observados en microscopio electrnico de barrido. Se registraron dos tipos de morfologa:
el aisl-1992 estaba constituido por poliedros piramidales, mientras que los OBs del aisl1994 mostraron una forma cbica que concuerda con Autographa californica
Nucleopolyhedrovirus, ya identificado en R. nu en Argentina (Rodrguez et al., Int. J. Virol.
Mol. Biol. 1:28-34). La secuencia parcial del gen de la poliedrina del aisl-1992 present un
mximo de 88% de identidad nucleotdica con un nucleopoliedrovirus aislado de
Trichoplusia ni (polilla perteneciente a la subfam. Plusiinae, al igual que R. nu). La
evidencia indica, por lo tanto, que se trata de un virus an no descripto, lo que amerita
continuar los estudios tendientes a su caracterizacin biolgica y molecular. Respecto al
aisl-1994, se realizarn los anlisis moleculares correspondientes para corroborar su
identidad. Para ambos, se completarn ensayos de virulencia y patogenicidad en vistas
de
su
posible
empleo
como
controladores
biolgicos.

rea: Microbiologa Agrcola

Autores: Sabat DC.1*, Prez Brandan C.2, Audisio MC.1,3
Institucin: 1 INIQUI-CONICET-Facultad de Ingeniera. Universidad Nacional de Salta. 2 Estacin
Experimental Agropecuaria INTA Salta-Cerrillos. 3 Facultad de Ciencias Exactas. Universidad
Nacional de Salta.

AISLAMIENTO DE BACTERIAS PERTENECIENTES AL GNERO Bacillus CON

PROPIEDADES COMO PROMOTORES DEL CRECIMIENTO EN PLANTAS
En la agricultura, existen enfermedades causadas por microorganismos patgenos que
afectan los cultivos y ocasionan importantes prdidas econmicas. Para combatir estas
enfermedades y asegurar el crecimiento del cultivo, se utilizan pesticidas sintticos, los
cuales tienen un importante impacto ambiental. Una alternativa podra ser el uso de
microorganismos benficos, como las bacterias pertenecientes al gnero Bacillus, las que
son utilizadas comercialmente en agricultura como agentes de biocontrol debido a que
poseen efecto antagnico frente a gran variedad de fitopatgenos y tambin como
rizobacterias promotoras del crecimiento en plantas (PGPR, del ingls plant growthpromoting rhizobacteria).
El objetivo de este trabajo fue aislar bacterias pertenecientes al gnero Bacillus con efecto
antagnico frente a fitopatgenos de plantas y con actividad PGPR. Para esto, se
realizaron aislamientos de Bacillus spp. a partir de muestras de suelo procedentes de
diferentes localidades del noroeste argentino. Se aislaron las colonias que a simple vista
presentaron morfologa caracterstica del gnero. Se realizaron pruebas de antagonismo
por el mtodo del cultivo dual frente a diferentes fitopatgenos: Fusarium solani,
Macrophomina phaseolina, Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum y Sclerotium rolfsii.
Se calcul el grado de inhibicin de crecimiento radial (%IR) despus de 7 das de
contacto. Por otra parte, se realizo un anlisis cualitativo de algunas propiedades PGPR
como: produccin de cido indol actico, siderforos, cianidas y solubilizacin de fsforo
inorgnico.
De un total de 35 cepas de Bacillus spp. aisladas, 8 fueron seleccionadas al azar para
realizar los estudios. Se observ que 4 cepas (B18, B19, B25 y B30) inhibieron todos los
fitopatgenos analizados y solo 1 cepa (B15) no tuvo efecto antagnico sobre ningn
patgeno. Las cepas B5 y B31 solo inhibieron a F. solani y Mp. phaseolina,
respectivamente. F. solani fue el que mayor resistencia present frente al efecto
antagnico de los Bacillus spp., ya que el %IF oscil entre el 30-50%. Para los dems
patgenos el %IF vari entre el 50-80% dependiendo de las cepa de Bacillus utilizada.
Cuando se analizaron las propiedades PGPR de los aislados, se observ que todas
tuvieron la capacidad de crecer en los medios de cultivos suplementados con 8hidroxiquinolina, lo que sugiere que podran sintetizar siderforos. Adems, excepto B30 y
B31, el resto de los bacilos sintetizaron cido indol actico. Sin embargo, con las tcnicas
utilizadas, no se detect la produccin de cianidas ni solubilizacin de fosforo inorgnico.
Por estos resultados, se observa que la mayora de los bacilos aislados tienen importante
efecto antagnico sobre fitopatgenos que afectan diferentes cultivos y adems poseen
propiedades como PGPR, por lo que sern preseleccionadas para estudios ms
complejos.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Bartolini M., Leini C., y Grau R.
Institucin: Universidad Nacional de Rosario, Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas,
Departamento de Microbiologa, CONICET-Rosario.

CALIDAD Y EFICIENCIA DE BIOFUNGUICIDAS FORMULADOS CON BACILLUS SPP.

Introduccin
La habilidad del gnero Bacillus de formar esporas, altamente resistentes, conjuntamente
a la sntesis de metabolitos controladores del desarrollo de hongos los habilita como
grandes candidatos para el desarrollo de biofunguicidas sumamente eficaces,
respetuosos del medio ambiente y de alta estabilidad.
Objetivos
Presentar, discutir y establecer protocolos experimentales para evaluar la calidad de
biofunguicidas a base de esporas del gnero Bacillus para su uso agrcola y/o ambiental.
Materiales y Mtodos
Anlisis cualitativo de clulas viables y esporas: Observacin mediante microscopa de
contraste de fase de las esporas refringentes y su tincin diferencial con verde de
malaquita. Anlisis cuantitativo (recuento) de clulas viables y esporas: Medio de cultivo
slido LB (Luria Bertani o equivalente) para la recuperacin y el recuento de clulas
viables (UFC/ml). Medio de cultivo SM (Schaeffer Medium) para el recuento de esporas
viables. Para la distincin de las esporas viables del conjunto de clulas totales de la
muestra se realiza un tratamiento con calor (20 min a 80C) para inactivar
irreversiblemente (matar) las clulas viables, quedando solamente esporas viables.
Recuento de UFC antes y despus del tratamiento trmico, calculando el porcentaje de
clulas esporuladas de la muestra. Anlisis cuali-cuantitativo de la pureza de especies y/o
cepas de Bacillus presentes en la muestra: Siembra puntual y por estras en placas de
Petri preparadas con el medio de cultivo, estimulador de la formacin de biofilms, LBY.
Bioensayos de actividad biofunguicida: Enfrentamiento dual y mltiple contra diferentes
hongos fitopatgenos (Fusarium, Celletotrichum Macrophomina, y otros) en diferentes
medios de cultivo (agar Sabouraud, LB-agar, agar-papa-dextrosa) que permiten tanto
desarrollo fngico como de Bacillus. Tipificacin de Bacillus: Extraccin de cidos
nucleicos para la secuenciacin del ADN codificante para el ARN ribosomal 16S.
Resultados y Conclusiones
Los biofunguicidas evaluados deben poseer al menos un 85% de su formulado como
esporas. La pureza se determina en el momento del recuento de UFC en medio LB para
el caso de bacterias que no pertenezcan al gnero Bacillus y en los medios SM y LBY
para determinar la presencia de ms de una especie o cepa de Bacillus adems de su
estabilidad. La presencia de contaminacin fngica puede determinarse por siembra en
medio Sabouraud. El biofunguicida evaluado podr ser considerado adecuado si
solamente contiene la especie/s de Bacillus declarada, corroborado por los ensayos
indicados y por secuenciacin de genes seleccionados de su repertorio gentico
(16SRNA). Adems, deber evidenciar, en ensayos de laboratorio, la capacidad de
controlar, al menos, tres especies entre las ms comunes de hongos fitopatgenos y
contener un ttulo mnimo de esporas puras por mL o g de producto.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: HEREDIA, J.; OLIVA, M.; BEOLETTO, V.; MEZZANO, A.; DEMO, M.; MARIOLI, J.
Institucin: Dpto. de Microbiologa e Inmunologa. Dpto. de Qumica Fac de Cs. Ex, Fco-Qcas y
Nat. Universidad Nacional de Ro Cuarto

ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE EXTRACTOS DE ACHYROCLINE SATUREIOIDES

(MARCELA) SOBRE PAENIBACILLUS LARVAE Y PSEUDOMONAS SYRINGAE
Achyrocline satureioides (Marcela) ha sido ampliamente estudiada por sus propiedades
medicinales. Su aceite esencial y sus extractos acuosos han presentado efecto
antimicrobiano contra diversos patgenos de inters clnico y agroindustrial. Paenibacillus
larvae es la bacteria responsable de Loque americana, una de las enfermedades ms
serias e infecciosas de las abejas (Apis mellifera), con alto grado de patogenicidad y
virulencia sobre sus larvas. La mala manipulacin e inadecuada gestin de colmenas
contaminadas contribuye a la dispersin de la enfermedad. Del mismo modo,
Pseudomonas syringae pv. glycinea es responsable del tizn bacteriano en soja,
enfermedad de fin de ciclo (EFC) causada por el monocultivo y la siembra directa
generando condiciones para la multiplicacin y supervivencia del patgeno. El uso de
productos naturales derivados de plantas contribuira a la reduccin de estos patgenos.
En este trabajo se evalu la actividad antimicrobiana (AA) de las fracciones en hexano
(FH), benceno (FB), ter etlico (FE) y acetato de etilo (FAE) del extracto hidroalcohlico
(EHA) de A. satureioides sobre P. larvae y P. syringae. Las fracciones se obtuvieron por
extracciones sucesivas lquido lquido. La AA fue evaluada utilizando tcnica de difusin
en disco y tcnica de microdilucin en caldo para obtener la concentracin inhibitoria
mnima (CIM) y concentracin bactericida mnima (CBM). Se utilizaron 13 cepas de P.
larvae aisladas de cuadros de colmenas con sntomas de Loque Americana, 4 provistas
por el Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA) Balcarce; 6 cepas de P.
syringae aisladas de soja con sintomatologa caracterstica de tizn y 2 cepas de
referencia de P. syringae. Ambas especies fueron identificadas con pruebas bioqumicas y
tipificadas por ARNr 16S. Todas las fracciones del EHA (1 mg/mL) tuvieron AA contra P.
larvae presentando mayor actividad FH (halos de inhibicin 2,5 0,46 cm), seguida de FE
(1,2 0,11 cm), FB (1,0 0,10 cm) y FAE (0,8 0,08 cm). FH y FE presentaron valores
de CIM entre 0,015 mg/mL y 0,031 mg/mL. La CBM se obtuvo con las fracciones FH y FE
en el 61,5% y el 53,8% de las cepas de P. larvae, respectivamente. Todas las cepas de P.
syringae fueron resistentes a las cuatro fracciones del EHA de A. satureioides. Estos
resultados demuestran que extractos obtenidos de A. satureioides son efectivos para
inhibir al agente causal de Loque Americana, no as a bacterias fitopatgenas como P.
syringae. Por lo tanto, estos compuestos podran ser considerados en la formulacin de
nuevos antimicrobianos como alternativas para el control de P. larvae.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Carezzano, M.; Oliva, M.; Giuliano, M.; Giordano, W.; Demo, M.
Institucin: Dpto. de Microbiologa e Inmunologa. Dpto. de Biologa Molecular. Fac de Cs. Ex,
Fco-Qcas y Nat. Universidad Nacional de Rio Cuarto.

TCNICAS PARA LA DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE

PRODUCTOS NATURALES SOBRE PSEUDOMONAS SYRINGAE AISLADAS DE SOJA
El estudio de las propiedades biolgicas de extractos vegetales tales como decocciones
(D), extractos etanlicos, aceites esenciales (AE), comenz hace algunos aos en nuestro
pas. Existen diferentes mtodos para determinar la actividad antimicrobiana (AA) de
estos compuestos, como tcnicas de difusin en medios agarizados y tcnicas en medios
lquidos. Los resultados obtenidos para cada una de ellas dependen principalmente de la
difusin del componente en el medio y el disolvente utilizado. El control de bacterias
fitopatgenas presenta grandes dificultades en la agricultura; este se realiza mediante
pesticidas que generan resistencia bacteriana e implican una alta toxicidad para
consumidores y el ambiente. Como estrategia alternativa se est ensayando el uso de
compuestos derivados de plantas medicinales. Varios estudios confirman la actividad
antibacteriana, antifngica y antiviral de los mismos. En zonas rurales de Santa Fe y
Crdoba, a partir de cultivos de soja, fueron aisladas cepas de Pseudomonas syringae,
demostrando la presencia del agente causal del tizn bacteriano. Los cultivos de
hortalizas y otros cereales tambin son susceptibles al ataque de diferentes patovares de
esta especie. En este trabajo se determin la actividad antimicrobiana de AE y D de
Origanum vulgare (organo) y Thymus vulgaris (tomillo) sobre P. syringae aisladas de
soja. Como mtodo de screening para la deteccin de la AA se utiliz la tcnica de
estras radiales para D y tcnica de difusin en disco para AE. Se determin la
concentracin inhibitoria mnima (CIM) y la concentracin bactericida mnima (CBM) de
los productos naturales activos (macromtodo para D y micromtodo para AE). Las D
presentaron actividad inhibitoria con valores de CIM para organo de 0,0976 g/ml para el
70% de las cepas y para tomillo CIM entre 0,0976 g/ml y 25 g/ml. Los AE presentaron
AA con halos de inhibicin de hasta 17 mm para tomillo y 12,5 mm para organo. La CIM
para AE de tomillo fue de 11,5 mg/ml para el 75% de las P. syringae. El AE de organo
present CIM en todas las cepas ensayadas, con valores entre 5,8 mg/ml y 46,3 mg/ml.
Cabe destacar que la decoccin de organo present efecto bactericida frente a 2 cepas
de P. syringae pv. glycinea. Las tcnicas por estras radiales y en disco determinaron de
forma rpida el efecto inhibitorio de ambos compuestos naturales. Las tcnicas en medios
lquidos fueron ms sensibles y permitieron obtener CIM para cada cepa evaluada. El
mtodo de microdilucin en caldo posee la ventaja de que permite realizar un mayor
nmero de repeticiones, adems de usar pequeos volmenes. Este mtodo permite
tambin determinar el efecto cida de una sustancia. La elevada eficacia antimicrobiana de
D y AE de organo y tomillo, sobre P. syringae constituyen una alternativa promisoria para
el control de enfermedades que afectan diferentes cultivos de inters agroalimentario.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Cassn, F.; Molina R.; Torres D.; Obando M.; Rivera D.
Institucin: Laboratorio de Fisiologa Vegetal y de la Interaccin Planta-Microorganismo.
Universidad Nacional de Ro Cuarto.

Estandarizacin de un mtodo para la cuantificacin de cido-indol-3-actico en

formulaciones de Azospirillum brasilense.
El uso de bacterias promotoras de crecimiento [PGPR] se ha convertido en una alternativa
biotecnolgica para optimizar la produccin de cultivos. Actualmente, el anlisis funcional
de la produccin de fitohormonas por PGPR y su regulacin en plantas superiores ha
resurgido debido a los espectaculares avances en la integracin de los modelos de
estudios bioqumicos, fisiolgicos y moleculares. Es por ello que miembros del gnero
Azospirillum han proporcionado un excelente modelo experimental para investigar y
comprender el papel fisiolgico y molecular de auxinas sobre el crecimiento de las
plantas. Debido a esto, se hace necesario estandarizar un mtodo simple, efectivo y
reproducible para la cuantificacin de cido-indol-3-actico en formulaciones de
Azospirillum sp. Por esta razn, el objetivo del trabajo fue la validacin del procedimiento
colorimtrico de cuantificacin de auxinas propuesto por Salkowsky en formulaciones de
A. brasilense. Para generar la propuesta, se parti de informacin preliminar, obtenida por
nuestro grupo o por otros a nivel mundial: (1) la mayor proporcin de auxinas que produce
Azospirillum brasilense en presencia de L-triptofano [su precursor natural] son del tipo
cido-indol-3-actico [AIA], siendo las otras extremadamente minoritarias en esta relacin.
Esto determina que se encuentren casi por debajo del lmite de deteccin del mtodo
colorimtrico y en algunos casos de ciertos mtodos cromatogrficos; (2) la cantidad de
AIA producida por este microorganismo se ubica entre 10-50 g.ml-1 y est dentro del
rango de deteccin del mtodo. Adicionalmente, tiene poca variabilidad entre cepas o
especies de este gnero; (3) existe una fuerte correlacin entre los resultados obtenidos
por la metodologa propuesta, con otras metodologas de mayor complejidad, tales como
la cromatografa lquida [HPLC], gaseosa [GC] o aquellas acopladas a espectrometra de
masas [MS]. Sobre la base de estas consideraciones hemos validado esta propuesta
experimental sobre la base de una innumerable cantidad de muestras experimentales
durante ms de 5 aos de trabajo y sobre la correlacin con metodologas de mayor
complejidad. Se toman 1000 l del cultivo bacteriano y se colocan en un tubo plstico del
tipo eppendorf de 1,5 ml de capacidad. Se centrifugan a 10.000 rpm por 10 m y
opcionalmente se filtran [0.2 m]. Se toman 500 l del sobrenadante y se mezclan con
500 l del reactivo de Salkowsky [7.9 M H2SO4 y 12,5 g/L FeCl3] agitando 10 veces en
forma de inversin y suavemente. Se incuban por 30 minutos en completa oscuridad y se
mide la absorbancia en un espectrofotmetro a 530 nm. Con los datos de absorbancia se
obtiene un promedio de 3 rplicas de la muestra [rplica experimental] y 3 rplicas del
tratamiento [rplica biolgica] y se hace el clculo de concentracin por el uso de la
ecuacin obtenida de una curva patrn obtenida con soluciones entre 0.1- 50 mM de AIA
puro.
La
concentracin
de
AIA
deber
expresarse
en
g.ml-1.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Cossoli, Marcela R. Villar, Natalia E. Ibaez, Julia M. Ojeda, Facundo N. Iglesias
Mara C.
Institucin: Microbiologa Agrcola, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del
Nordeste

MEDICIN DE LA ACTIVIDAD RESPIRATORIA POR VOLUMETRA PARA DETECTAR

DIFERENCIAS EN SUELOS CON DISTINTOS MANEJOS
La respiracin del suelo tiene un claro significado ecolgico, y una enorme importancia
dentro del conocimiento de la calidad y salud del mismo. Es uno de los parmetros ms
antiguos y ms frecuentemente usados para cuantificar actividad microbiana en el suelo.
Se pone de manifiesto a travs del desprendimiento de CO2, en un tiempo determinado.
El objetivo de este trabajo fue comprobar la eficacia de una tcnica de medicin de
actividad respiratoria, para encontrar diferencias entre suelos con distintos manejos
agrcolas. Se utiliza la tcnica volumtrica planteada por hlinger (1996) con
modificaciones incorporadas en la Ct. de Microbiologa Agrcola (FCA-UNNE). Se trabaja
con dos condiciones de muestras de suelo, por un lado, suelo seco al aire, tamizado por
malla de 2 mm, humedecido hasta un 20 o 30 % de la capacidad mxima de retencin
hdrica (dependiendo del tipo de suelo) y por otro, suelo fresco con humedad de
muestreo. Este se coloca en bolsitas de polietileno, permeables a los gases. Se incuban
en sistema suspendido con recipientes cerrados que contienen solucin de lcali (NaOH
0,5 N), para captar el CO2 desprendido. Se lo determina, luego de 7 das, por
retrovaloracin con cido (HCL 0,5 N), y se expresa como mg CO2.100g de suelo-1.da-1.
Se trabaj con muestras de suelos provenientes de diferentes ensayos: 1) Se midi la
actividad respiratoria buscando encontrar diferencias entre lotes con diferentes manejos
agrcolas: Buenas Prcticas Agrcolas (BPA-Rotacin intensiva de cultivos), Prcticas
Agrcolas no sustentables (MPA-tendencia al monocultivo de soja) y AN (Ambiente
Natural); ubicados en cuatro localidades, Bengolea, Monte Buey, Pergamino y Viale. Se
evaluaron cinco muestreos a lo largo de tres aos, en el total de muestras se trabaj con
suelo seco, luego humedecido y en un muestreo, adems, con suelo fresco y humedad de
muestreo; 2) Se midi la actividad respiratoria en parcelas de un ensayo instalado en la
localidad de Monte Buey (Crdoba), considerando tres factores con dos niveles: 1)
Fertilizacin: Sin Fertilizacin y Mxima Fertilizacin; 2) Siembra Directa: Interrumpida y
Continuada; 3) Rotacin: Estndar e Intensiva. En el primer caso, con las muestras de
suelo seco, la actividad respiratoria reflej un comportamiento diferencial donde se
observ que el AN fue significativamente mayor, el MPA present el menor valor y el BPA
fue intermedio; en el caso de las muestras de suelo fresco, si bien fue menor la
produccin de CO2, se mantuvo la tendencia en relacin a los tratamientos. En el ensayo
2, la Siembra directa Continuada marco diferencias significativas con respecto a Siembra
directa Interrumpida, con el doble de CO2 producido, lo mismos ocurri cuando se
combinaron los factores. Esta tcnica utilizada ha sido efectiva para detectar cambios en
la actividad respiratoria, en relacin a diferentes manejos, situaciones y pocas de
muestreos.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Fasciglione G1.; Casanovas M1.; Quilleauquy V1.; Yommi A1.; Borajo, P2.; y Barassi C1.
Institucin: 1Facultad de Cs. Agrs.UNMdP UIB: FCA- EEA INTA Balcarce, Bs. As.2 CIC

TEST DE GERMINACIN BAJO ESTRS SALINO COMO ESTRATEGIA PARA DEFINIR

EL NIVEL PTIMO DE INCULO DE Azospirillum brasilense EN LECHUGA.
La asociacin de vegetales-rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPR),
especialmente Azospirillum spp., puede actuar como paliativo del estrs salino1. Inocular
con el nmero adecuado de bacterias a la semilla es un factor clave para lograr un efecto
benfico. El objetivo del presente trabajo fue determinar la concentracin de A. brasilense
Sp245 capaz de maximizar el poder germinativo de L. sativa cv Elisa bajo estrs salino.
Para determinar el tiempo de inoculacin se realiz la curva de imbibicin de la semilla en
agua destilada (AD). Muestras de 0,5g cada 30 min se secaron superficialmente y
pesaron hasta alcanzar peso constante. Colonias de A. brasilense Sp245 obtenidas
durante 96 Hs a 32C en medio Rojo Congo agarizado1 se transfirieron a medio OAB
lquido2, e incubaron 17 Hs a 32 C con agitacin orbital de 100 rpm. El cultivo se
centrifug durante 10 min a 7500 rpm, se resuspendi el pellet en buffer fosfato 66 mM
(pH 7) a fin de obtener inculos con: 0, 106, 107, 108, 109, 1010 1011 clulas
bacterianas.semilla-1. Las semillas se esterilizaron superficialmente con NaOCl al 1%
durante 1 min, se enjuagaron con AD y luego se sumergieron en los respectivos inculos
durante 90 min. Semillas control e inoculadas se sembraron en placas de Petri
conteniendo papel de germinacin embebido en: 0, 40, 80 120 mM de NaCl, e
incubaron en cmara a 230C y fotoperodo de 8 hs. Luego de 7 das, se determinaron el
poder germinativo3 (PG) y el Nmero Ms Probable4 (NMP) de bacterias por gramo de
peso fresco (PF) de raz.
El grado de colonizacin en races fue de 4,5 x 108 clulas.g-1 PF para las controles y de
1,5 106 clulas.g-1 PF para las sometidas a 120 mM NaCl. El PG de las semillas
disminuy al aumentar la concentracin de sal en el medio (0 mM: 71,3+3,2a; 40 mM:
59.9+2.3ab; 80 mM: 41.0+3,7c; 120 mM: 2,9+1,0d). Sin embargo, independientemente del
nivel de estrs aplicado, el inculo con 109 bacterias.semilla-1 increment (p<0,05) el PG
de las semillas de lechuga (Control:61,8+8,7ab; 106:56, 7+7,4b; 107:63,3+6,0ab;
108:60,5+5,3ab; 109:72,7+8,9a; 1010:67,0+7,0ab; 1011:58,8+7,9ab).
En conclusin, el inculo que contena 109 clulas A. brasilense Sp245.semillas permiti
obtener valores de colonizacin en la raz del orden de 106 bacterias.gr PF en el mximo
nivel de salinidad, y fue el ms efectivo para incrementar la germinacin de L. sativa cv.
Elisa independientemente del nivel de salinidad aplicado.
Referencias
1. Barassi C; Sueldo R; Creus C; Carrozzi L; Casanovas E.2007. Dynamic Soil, Dynamic
Plant, 1, 68-82.
2. Okon, Y, Galkmakgi, I, Nur and Chet, I.1977. Microbiol., 33:85-88.
3. ISTA (2004). International Seed Testing. International Rules for Seed Testing. Zurich.
275.
4. Postgate J,1969. In: Metods in Microbiology. Norris J.R and D.W. Ribbons

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Grau, R., Bartolini M., y Leini C.
Institucin: Universidad Nacional de Rosario, Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas,
Departamento de Microbiologa, CONICET-Rosario.

CALIDAD Y EFICIENCIA DE INOCULANTES PROMOTORES DEL CRECIMIENTO

VEGETAL FORMULADOS CON BACILLUS SPP.
Introduccin
El gnero Bacillus est conformado por bacterias Gram-positivas, aerobias facultativas y
formadoras de endo-esporas. Es bien conocida la existencia de una pltora de sustancias
beneficiosas para la planta que diversas especies de Bacillus secretan al medio y que
hacen que miembros de este gnero sean utilizados como bacterias promotoras del
crecimiento vegetal (PGPB).
Objetivos
Presentar, discutir y establecer protocolos experimentales para evaluar la calidad de
productos desarrollados como inoculantes o promotores del crecimiento vegetal a base de
Bacillus.
Materiales y Mtodos
Anlisis cualitativo de clulas viables y esporas: Observacin por microscopa de
contraste de fase de las esporas refringentes y tincin diferencial con verde de malaquita.
Anlisis cuantitativo de clulas viables y esporas: Medio de cultivo slido LB (Luria Bertani
o equivalente) para la recuperacin y el recuento de clulas viables (UFC/ml). Medio de
cultivo SM (Schaeffer Medium) para el recuento de esporas viables. Para la distincin de
las esporas viables del conjunto de clulas totales de la muestra se realiza un tratamiento
con calor (20 min a 80C) para inactivar irreversiblemente (matar) las clulas viables,
quedando solamente esporas viables. Recuento de UFC antes y despus del tratamiento,
calculando el porcentaje de clulas esporuladas. Anlisis cuali-cuantitativo de la pureza
de especies y/o cepas de Bacillus presentes en la muestra: Siembra puntual y por estras
en placas de Petri preparadas con el medio de cultivo, estimulador de la formacin de
biofilms, LBY. Evaluacin de algunas propiedades como PGPB: (i) Produccin in vitro de
surfactantes (test de colapso de la gota); (ii) fitohormonas (ensayo de Mitchell y
Brunstetter para AIA); (iii) anlisis de la promocin temprana del crecimiento vegetal
(partes areas y races). (iv) estimulacin de la inmunidad vegetal; (v) compatibilidad con
otros microorganismos PGPB. Identificacin y tipificacin: Extraccin de cidos nucleicos
y secuenciacin del ADN codificante para el ARN ribosomal 16S.
Resultados y Conclusiones
Los productos utilizados como inoculantes a base de Bacillus deben poseer un ttulo
mnimo de UFC y de ste ttulo al menos un 85% deben ser esporas. La pureza del
inoculante se determina al momento del recuento de UFC en LB para caso de bacterias
que no sean Bacillus y en los medios SM y LBY para determinar la presencia de ms de
una especie o cepa de Bacillus adems de su estabilidad. La presencia de contaminacin
fngica puede determinarse por siembra en medio Sabouraud. El inoculante evaluado
podr ser considerado adecuado si solamente contiene la especie/s de Bacillus
declarada, corroborado por los ensayos indicados y por secuenciacin de genes
seleccionados de su repertorio gentico (16SRNA). Deber evidenciar, en ensayos de
laboratorio, al menos dos de las propiedades indicadas anteriormente como necesarias en
un
producto
con
actividad
PGPB.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: HEREDIA, J.; OLIVA, M.; BEOLETTO, V.; MEZZANO, A.; DEMO, M.; MARIOLI, J.
Institucin: Dpto. de Microbiologa e Inmunologa. Dpto. de Qumica Fac de Cs. Ex, Fco-Qcas y
Nat. Universidad Nacional de Ro Cuarto

ANLISIS BIOGUIADO DE DOS FRACCIONES DEL EXTRACTO HIDROALCOHLICO

DE ACHYROCLINE SATUREIOIDES (MARCELA) CONTRA PAENIBACILLUS LARVAE
AGENTE CAUSAL DE LOQUE AMERICANA
El control de Paenibacillus larvae, agente causal de Loque Americana, presenta grandes
dificultades; en la actualidad se realiza con antibiticos que generan rpida resistencia
microbiana. El desarrollo de nuevas alternativas para su control es una necesidad en la
produccin apcola. Los productos naturales bioactivos como extractos vegetales son una
excelente alternativa ya que evitan la contaminacin y diseminacin de antibiticos
convencionales al ambiente y la aparicin de cepas resistentes a estos. Diferentes
extractos de Achyrocline satureioides poseen actividad antimicrobiana (AA) frente a un
amplio nmero de patgenos, principalmente bacterias Gram positivo, como P. larvae. Se
propone determinar, desde un estudio con enfoque bioguiado, si las bandas de las
fracciones del extracto hidroalcohlico (EHA) de A. satureioides separadas por tcnicas
cromatogrficas, tienen AA sobre P. larvae. Las fracciones en hexano (FH) y en ter
etlico (FE) del EHA de A. satureioides se analizaron por cromatografa en capa delgada
(CCD) y cromatografa en columna flash (CCF). La AA fue evaluada utilizando tcnica de
difusin en disco y tcnica de microdilucin en caldo para hallar concentracin inhibitoria
mnima (CIM) y concentracin bactericida mnima (CBM). En CCD se utiliz el sistema de
solventes hexano:acetona (8,5:1,5) obtenindose 4 bandas definidas de cada una de las
fracciones; los Rfs para cada una fueron, FH: 0,14; 0,24; 0,35 y 0,48; FE: 0,14; 0,26; 0,38
y 0,52. Se realiz la CCF a partir de 0,4922 g de FH y a partir de 0,2508 g de FE, se
obtuvieron dos perfiles de separacin de bandas para cada uno. La FH present los
siguientes resultados: Banda 1: Rf: 0,94; 81,5 mg; 16,5%; Banda 2: Rf: 0,48; 42,8 mg;
8,7%; Banda 3: Rf: 0,35; 39,1 mg; 8,0 %; Banda 4: Rf: 0,24; 37,7 mg; 7,6%; y Banda 5: Rf:
0,14; 4,6 mg; 0,93%. Para FE los resultados fueron: Banda 1: Rf: 0,52; 42,3 mg; 16,8%;
Mezcla 1: Rfs: 0,52 y 0,38; 15,5 mg; 6,1%; Mezcla 2: Rfs: 0,38 y 0,26; 4,3 mg; 1,7%;
Banda 2: Rf: 0,26; 27,2 mg; 10,8%; y Banda 3; Rf: 0,14; 22,4 mg; 8,9%. De las cinco
bandas obtenidas para FH por CCF las bandas 2 a 5 tuvieron AA contra 13 cepas de P.
larvae, (1,40,15 cm; 1,20,14 cm; 1,00,08 cm y 0,90,23 cm) mientras que todas las
bandas y/o mezclas de FE presentaron AA contra las 13 cepas (B1: 1,00,11 cm; M1:
1,460,23 cm; B2: 1,590,21 cm; M2: 0,90,19 cm; y B3: 1,40,30 cm). Las bandas FH
obtuvieron valores de CIM entre 0,062 a 0,25 mg/mL y las bandas FE tuvieron valores de
CIM entre 0,031 y 0,25 mg/mL. Las fracciones FH y FE no presentaron CBM. Este estudio
bioguiado permiti separar diferentes bandas a partir de dos fracciones del EHA de A.
satureioides. Cada una de estas bandas indicara la presencia de distintos grupos de
compuestos con AA sobre P. larvae. La identificacin de estos compuestos bioactivos
permitira desarrollar en un futuro nuevas formulaciones para el control de Loque
Americana.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Ibez, Julia M. Gonzalez, Emanuel Cossoli, Marcela R. Iglesias, Mara C.
Institucin: Microbiologa Agrcola, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del
Nordeste

UTILIZACIN DE COMPOST PARA PLANTINES DE ALGARROBO: SU EFECTO

SOBRE LA SIMBIOSIS CON RIZOBIOS NATIVOS
El algarrobo (Prosopis sp.) incrementa la fertilidad del suelo importando nutrientes desde
las capas sub-superficiales, mejora su estructura y disminuye los procesos de erosin, es
considerado en la rehabilitacin de suelos degradados. Posee la capacidad de fijar
nitrgeno atmosfrico debido a la relacin simbitica con bacterias del grupo de los
rizobios (Rhizobium, Mesorhizobium, Sinorhizobium, Ensifer). Existen investigaciones
donde se registr un aumento del nmero y diversidad de cepas diazotrficas en suelos
con el agregado de compost, atribuyndose a la optimizacin de la disponibilidad de
nutrientes. Los objetivos fueron: a) Determinar el efecto del compost sobre la infeccin de
rizobios en sustrato para plantines de algarrobos; b) Obtener aislamientos de rizobios
nativos a partir de ndulos de plantines de algarrobos, logrados con diferentes dosis de
compost. Se trabaj con muestras de suelo de algarrobales ubicados en dos localidades
de Chaco: Concepcin del Bermejo (CB) y Machagai (M). Se utiliz compost proveniente
de estircol de caballo y aserrn en relacin 1:2. El ensayo en macetas consisti en 10
tratamientos con 5 repeticiones cada uno, teniendo dos testigos (suelo solo) y mezclas de
suelo y compost en relacin 1:1 y 2:1 P/P y 1:1 y 2:1 V/V, denominndose C1, C2, C3 y
C4 respectivamente; quedando los siguientes tratamientos: T1: Suelo (S) de CB; T2: S CB
+ C1; T3: S CB + C2; T4: S CB + C3; T5: S CB + C4; T6: S M; T7: S M + C1; T8: S M +
C2; T9: S M + C3; T10: S M + C4. A los 90 das de la siembra se extrajeron las plantas de
algarrobo y se registr la cantidad de ndulos presentes en las races. Para el aislamiento
de rizobios, los ndulos obtenidos fueron lavados y machacados. La suspensin
resultante se sembr en placas de Petri con medio de cultivo EMA (Extracto de levadura
manitol - agar). Se incubaron durante 48hs, las colonias resultantes se caracterizaron
macroscpicamente y se repicaron con el fin de conseguir un cultivo puro. Finalmente, se
realiz tincin de Gram y observacin en microscopio ptico para determinar tipo de
clulas. Con los datos se efectu ANAVA y Prueba de Tukey (p 0,05). La nodulacin se
dio en todos los tratamientos, evidencindose mayor nmero y tamao en los tratamientos
con compost, teniendo menor cantidad T1 y mayor T7. Los aislamientos arrojaron 5
morfotipos diferentes de colonias: claras pequeas, rosadas, rosadas cremosas, claras
cremosas y sin bordes definidos. La tincin de Gram confirm que todas las colonias
pertenecan al grupo de las Gram negativas. Las clulas se caracterizaron por tener forma
y tamao similar a rizobios, excepto las pertenecientes a las colonias claras cremosas,
que resultaron ser de un tamao muy superior. El agregado de compost tuvo un efecto
estimulador para la simbiosis algarrobo-rizobios, presentando mayor cantidad de ndulos.
En los aislamientos obtenidos se observaron distintos morfotipos de colonias, con clulas
de
caractersticas
similares
en
4
casos.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Leini C., Bartolini, M. y Grau R.
Institucin: Universidad Nacional de Rosario, Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas,
Departamento de Microbiologa, CONICET-Rosario.

CALIDAD Y EFICIENCIA DE BIOINSECTICIDAS FORMULADOS CON BACILLUS SPP.

Introduccin.
Bacillus thuringiensis es una bacteria Gram-positiva que produce durante la esporulacin
cristales proteicos parasporales (protenas Cry) con actividad txica hacia insectos de
diversos rdenes. Dependiendo del tipo de toxina que se produzca se da origen a
diversas subespecies de B. thuringiensis, por ejemplo B. thuringiensis serovares kurstaki
con actividad txica hacia larvas de insectos Lepidpteros (orugas y mariposas) y B.
thuringiensis serovares israeliensis con actividad txica hacia larvas de Dptera
(mosquitos y jejenes). Adems de las toxinas Cry, B. thuringiensis es tambin capaz de
producir toxinas tipo Cyt y Vip.
Objetivos
Presentar, discutir y establecer protocolos experimentales para evaluar la calidad de
productos a base de esporas de Bacillus thuringiensis.
Materiales y Mtodos
Anlisis cualitativo de clulas viables y esporas: Observacin por microscopa de
contraste de fase de las esporas refringentes y tincin diferencial con verde de malaquita.
Anlisis cuantitativo de clulas viables y esporas: Medio de cultivo slido LB (Luria Bertani
o equivalente) para la recuperacin y el recuento de clulas viables (UFC/ml). Medio de
cultivo SM (Schaeffer Medium) para el recuento de esporas viables. Para la distincin de
las esporas viables del conjunto de clulas totales de la muestra se realiza un tratamiento
con cloroformo 10% (3 min) para inactivar irreversiblemente (matar) las clulas viables,
quedando solamente esporas viables. Recuento de UFC antes y despus del tratamiento,
calculando el porcentaje de clulas esporuladas de la muestra. Evaluacin de algunas
propiedades como bioinsecticida: (i) Observacin mediante microscopa de contraste de
fase de los cristales proteicos Cry refringentes; (ii) Determinacin del tipo de toxina
mediante el uso de tiras reactivas y/o PCR, (iii) Bioensayos con larvas de dptera y
lepidpteros segn sea el tipo de bioinsecticida analizado. Identificacin y tipificacin:
Extraccin de cidos nucleicos y secuenciacin del ADN codificante para el ARN
ribosomal 16S.
Resultados y Conclusiones
Los productos utilizados como bioinsecticidas a base de Bacillus deben poseer un ttulo
adecuado por mL o gramo de producto y de ste al menos un 85% deben ser esporas. La
pureza del producto se determina al momento del recuento de UFC en medio LB para el
caso de bacterias que no pertenezcan al gnero Bacillus y en medio SM para determinar
la presencia de ms de una especie o cepa de Bacillus adems de su estabilidad. La
presencia de contaminacin fngica puede determinarse por siembra en
medio
Sabouraud. El bioinsecticida evaluado podr ser considerado adecuado si solamente
contiene la especie/s y serovar de Bacillus declarada, corroborado por los ensayos
indicados y por secuenciacin de genes seleccionados de su repertorio gentico
(16SRNA). Deber evidenciar, en ensayos de laboratorio, la capacidad de matar larvas de
al menos dos insectos plaga testigos (por ejemplo Spodoptera y Rachiplusia).

rea: Microbiologa agrcola

Autores: LOPEZ GARCIA, S; LODEIRO A.
Institucin: Laboratorio de Interacciones entre Rizobios y Soja (LIRyS), IBBM-Facultad de
Ciencias Exactas, UNLP-CONICET

EVALUACION DE LA COMPETICION PARA LA NODULACION

Para evaluar un inoculante es importante conocer, adems del nmero de bacterias
viables y su capacidad para nodular, la competitividad intrnseca de la cepa utilizada.
Entendemos por competitividad intrnseca a la capacidad de dicha cepa para ocupar
ndulos en presencia de una cepa de referencia, en un ensayo de nodulacin donde
todas las otras variables que pueden condicionarla se mantienen en el ptimo. En este
resumen describiremos la metodologa para evaluar la competitividad intrnseca de
Bradyrhizobium japonicum, aunque la misma puede ser aplicada con ligeras
modificaciones a cualquier simbiosis rizobio-leguminosa.
Para determinar con facilidad si un ndulo est ocupado por la cepa problema o por la
cepa de referencia recomendamos utilizar una resistente a antibiticos como cepa de
referencia; en este caso, B. japonicum LP 3018, derivada resistente a estreptomicina y
espectinomicina de E109 y con igual competitividad intrnseca.
Las bacterias se cultivan en medio rico hasta fase exponencial y previo a la inoculacin se
registra la DO a 500-600 nm y el nmero de clulas totales por recuento al microscopio
ptico. Una vez conocidas las concentraciones bacterianas, se realizan diluciones en
solucin de cultivo de plantas libre de nitrgeno (SCPLN) para obtener cada cepa en un
recipiente separado con la misma concentracin bacteriana. Al momento de la inoculacin
deben sembrarse placas para el recuento de UFC.
Las plantas pueden cultivarse en vasos de plstico descartables desinfectados llenados
con vermiculita estril, cada uno regado con un exceso de SCPLN conteniendo un milln
de bacterias por ml de cada cepa. La siembra de semillas de soja germinadas en forma
axnica se realiza inmediatamente despus con al menos 15 plantas por competicin. Se
incluyen macetas inoculadas con SCPLN sin bacterias y con cada cepa en forma
separada. Las plantas se cultivan en invernculo en condiciones ptimas de luz,
temperatura y riego al menos hasta que el segundo trifolio est completamente
expandido.
Cada ndulo es extrado y colocado en una fosa de placas multipocillo estriles (de 96
pocillos con fondo cnico). Se lo desinfecta superficialmente y se lo macera con un palillo
estril de punta trunca. Este material se deposita en placas de Petri rplicas con medio
rico, una de ellas con los antibiticos selectivos para la cepa de referencia.
Un ndulo puede estar ocupado simultneamente por las dos cepas, lo que se conoce
como doble ocupacin, la que en general no supera el 10% del total de ndulos.
Para evaluar el resultado puede utilizarse una prueba de chi-cuadrado. Los resultados
esperados para la hiptesis nula (competitividades intrnsecas iguales) seran: 45% cepa
problema : 45% cepa de referencia : 10% doble ocupacin. Si no se dispone de antibitico
selectivo para la cepa problema, los resultados esperados seran 45% cepa sensible :
55% cepa resistente. La escala de competitividad intrnseca puede obtenerse con el valor
de
chi-cuadrado
calculado.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Gerez, C.; Martos, G.; Fornaguera, M.; Cruz Pintos, L.; Font de Valdez, G.
Institucin: Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET). Tucumn, Argentina.
Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, UNT, Tucumn, Argentina

EVALUACIN DE LA CAPACIDAD ACIDIFICANTE DE BACTERIAS LCTICAS PARA

ENSILADO
El ensilado es un mtodo de conservacin de forrajes que se basa en una fermentacin
lctica bajo condiciones anaerbicas. Las bacterias cido lcticas (BAL), propias del
material a ensilar, fermentan los carbohidratos solubles del forraje produciendo
principalmente cido lctico y, en menor grado, cido actico. El rpido descenso de pH
inhibe el crecimiento de hongos y la fermentacin butrica. La tendencia actual plantea el
uso de inoculantes, combinaciones de BAL y enzimas, lo que estandariza las
caractersticas del producto final y garantiza la conservacin del silo. En nuestro pas, el
uso de inoculantes est muy extendido; sin embargo, la mayora de los productos
comerciales disponibles en el mercado son importados y de elevado costo. El objetivo del
estudio fue seleccionar cepas lcticas a partir de su actividad acidificante como
parmetros de evaluacin.
Se evaluaron 146 cepas de Pedicoccus (P.) acidilactici (17), P. pentosaceus (15) y
Lactobacillus (L.) plantarum (114) pertenecientes a la coleccin de cultivos de CERELA
(CRL) utilizndose un medio de cultivo formulado con harina de soja. A distintos tiempos
de fermentacin (4, 6 y 24 h a 37C) se midieron pH y acidez titulable (TTA, como D). Los
resultados se expresaron como pH TTA (diferencia entre el valor inicial del medio y
los valores finales). Al final de la fermentacin (24h) se determin la concentracin de
cidos orgnicos por HPLC.
Todos los pediococos evaluados crecieron acidificando el medio de cultivo mientras que
39 cepas de L. plantarum dieron resultado negativo luego de 24 h. En general, las cepas
de esta especie mostraron la mayor actividad acidificante (pH > 2.0 y TTA > 50D)
comparado con los pediococos (pH <1.5 y TTA < 35D) a las 6 h de incubacin. No se
observaron diferencias significativas entre estos grupos a las 24 h. El descenso de pH se
correlacion con la produccin de cidos orgnicos. Una mayor produccin de cido
lctico se observ en los cultivos de L. plantarum (10.1-17.5 g/l) respecto a Pedicoccus
(5.9-9.9 g/l). Cuando se analiz la produccin de cido actico (que tiene propiedades
antifngicas) se observaron similares resultados. Entre todas las cepas evaluadas, se
destacaron las de P. acidilactici (CRL 913 y CRL 914) por producir elevadas
concentraciones (0.15-0.18 g/l) de cido fenil lctico potente antifngico que tiene adems
efecto antibacteriano.
La velocidad de acidificacin y el tipo de cidos orgnicos producidos son parmetros
relevantes en la seleccin de bacterias lcticas para la formulacin de inoculantes para
silo.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Mestre, M.C.1*; Severino M.E.2; Fontenla S.B.1,2
Institucin: 1: Instituto de Investigacin en Biodiversidad y Medio Ambiente INIBIOMA
(UNComahue-CONICET) Argentina. 2: Centro Regional Universitario Bariloche, UNComahue,
Argentina. *: mestremc@comahue-conicet.gob.ar

Propuesta de un medio de cultivo para evaluar la produccin de compuestos tipo auxinas

en levaduras de suelo
En suelo de Noroeste de Patagonia se ha aislado e identificado alrededor de 500 de
levaduras de los Phylla Ascomycota o Basidiomycota. Estas levaduras tienen
requerimientos nutricionales y fisiolgicos distintos de los bacterianos. Todas ellas se
cultivaron a temperaturas de entre 20 y 25C. Tradicionalmente los estudios de
microrganismos promotores del crecimiento vegetal (PGP) se han enfocado en las
rizobacterias, y por ello se tenan en cuenta los requerimientos bacterianos.
Recientemente se ha extendido el estudio de las capacidades PGP a otros
microrganismos del suelo como por ejemplo actinomicetes, hongos filamentosos y
levaduras. Entre las caractersticas PGP ms estudiadas destaca la produccin de
metabolitos tipo auxinas, que pueden ser identificados en forma rpida y confiable en el
sobrenadante de cultivo utilizando el mtodo de Salkowski. En este trabajo se propuso
comparar el poder de deteccin de auxinas en cultivos de levaduras utilizando medios de
cultivos para bacterias (DEV) y levaduras (YPD), variando el agregado de triptfano, como
precursor en la va de las auxinas, y el porcentaje de la fuente de C.
Se utilizaron 3 aislamientos de levaduras obtenidos de suelo del bosque de Patagonia.
Como control bacteriano se utiliz la cepa de Azopirillum brasilensis AZ39. Los medios
DEV (NaCl 0.5%, peptona de soja 1%) e YPD (extracto de levadura 1%, peptona de soja
2%, dextrosa 2%) se utilizaron con y sin el agregado de 0,1% de triptfano. Se repiti el
mismo diseo con una concentracin final de 0,5% de glucosa en ambos medios. Los
cultivos se incubaron a 20C durante 5 das y hasta 12 das. La determinacin de
compuestos tipo auxinas se realiz con el mtodo de Salkowskiy y se cuantific utilizando
una curva patrn realizada con cido 3-Indol Actico (AIA) comercial.
En todos los casos se observ que la presencia de triptfano es necesaria como
precursor para produccin de compuestos auxnicos en levaduras. El medio YPD es el
medio de eleccin para el crecimiento de las levaduras sin embargo en todas sus
formulaciones present un color rojizo posterior a la esterilizacin que afecta la deteccin
colorimtrica de auxinas. El medio DEV con agregado de 0,5 % glucosa aument el
crecimiento de las levaduras respecto del mismo medio sin glucosa. El tiempo de
incubacin es un factor importante, algunos aislamientos requirieron hasta 12 das para
alcanzar un valor detectable de auxinas. Se determin una mayor eficiencia de produccin
de auxinas utilizando el medio DEV+Trp+glucosa 0.5% en levaduras, por lo cual
proponemos el uso de este medio sumado a tiempos prolongados de cultivo.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Oliva, M.; Carezzano, M.; Giuliano, M.; Giordano, W.; Demo, M.
Institucin: Dpto. de Microbiologa e Inmunologa. Dpto. de Biologa Molecular. Fac de Cs. Ex,
Fco-Qcas y Nat. Universidad Nacional de Rio Cuarto

METODOLOGAS EMPLEADAS PARA EVALUAR EL EFECTO DE ACEITES

ESENCIALES DE ORIGANUM VULGARE Y THYMUS VULGARIS SOBRE EL BIOFILM
PRODUCIDO POR CEPAS FITOPATGENAS DE SOJA
El biofilm es una importante estrategia de colonizacin en bacterias fitopatgenas ya que
ofrece ventajas proporcionando un aumento de la resistencia a condiciones ambientales
desfavorables, as como tolerancia frente a antimicrobianos, proteccin contra la
depredacin, oportunidad de transferencia horizontal de genes, expresin de factores de
virulencia y metabolitos secundarios, que permiten la colonizacin exitosa en el
hospedador. La bsqueda de sustancias naturales capaces de inhibir la formacin de
estructuras que contribuyen a la patogenicidad como el biofilm, est siendo cada da ms
estudiada. Se evalu la capacidad de producir biofilm de cepas de Pseudomonas syringae
y Xanthomonas axonopodis aisladas de soja y el efecto de aceites esenciales (AE) de
Origanum vulgare (organo) y Thymus vulgaris (tomillo) sobre este biofilm. Los cultivos
bacterianos (109 UFC/ml) fueron inoculados en placas de 48 pocillos conteniendo caldo
King B junto a concentraciones inhibitorias y subinhibitorias de AE de organo y tomillo.
Se incubaron hasta 48hs y la formacin y/o la inhibicin del biofilm fue revelada a
diferentes tiempos por la tcnica de cristal violeta. Todas las cepas fueron capaces de
producir biofilm, observndose valores de DO570nm por encima de 1,4 a las 48hs. La
cantidad de biofilm producido present variabilidad en los distintos tiempos analizados (8,
24, 36 y 48 hs) dependiendo de la cepa productora. Cuando fueron expuestas a
concentraciones sub-inhibitorias ( CIM) de los AE de organo y tomillo se pudo observar
que estos fueron capaces de disminuir considerablemente la produccin del polisacrido
en todos los tiempos, mientras que a concentraciones inhibitorias mnimas (CIM) no se
detect produccin de biofilm en la mayora de las cepas analizadas. La efectiva actividad
antibacteriana que poseen los AE de organo y tomillo y la importancia de la inhibicin de
la formacin de biofilm, a dosis inhibitorias y sub-inhibitorias, constituyen una alternativa
promisoria para el tratamiento de enfermedades ocasionadas por bacterias fitopatgenas
en cultivos de soja, hortalizas, frutales, legumbres, cereales y ornamentales. Este control
puede estar dirigido al microorganismo directamente o a evitar la produccin de factores
de virulencia que colaboren con la patogenicidad. Disminuir o impedir que el biofilm se
forme estara ayudando a que las bacterias fitopatgenas no puedan establecer un hbitat
adecuado para poder colonizar un ambiente y de ese modo producir la enfermedad. Estos
compuestos naturales, al no generar resistencia bacteriana, no dejar residuos txicos en
el ambiente y obtenerse a un bajo costo, permitiran desarrollar en un futuro estrategias
de control de tizn y pstula bacteriana, as como de otras enfermedades vegetales.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: SAUKA, D.; ONCO, M.; PREZ, M.; LOPEZ, N.; BERRETTA, M.; BENINTENDE, G.
Institucin: INSUMOS BACTERIANOS. INSTITUTO DE MICROBIOLOGA Y ZOOLOGA
AGRCOLA (IMYZA), INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGA AGROPECUARIA (INTA).
BUENOS AIRES, ARGENTINA.

RPIDA PREDICCIN DE LA PRODUCCIN DE -EXOTOXINA DE TIPO I EN

BACILLUS THURINGIENSIS MEDIANTE AMPLIFICACIN GNICA
La bacteria entomopatgena Bacillus thuringiensis radica su capacidad txica en
inclusiones cristalinas proteicas que sintetiza durante la esporulacin y en otros factores
de virulencia que produce durante su crecimiento vegetativo. Algunas cepas pueden
secretar -exotoxina de tipo I, un metabolito termoestable con actividad toxica inespecfica
para un rango amplio de especies de insectos. Tambin es txico para clulas de
mamferos y persiste por largo tiempo en el ambiente. El empleo de cepas de B.
thuringiensis productoras de este metabolito como ingrediente activo de bioinsecticidas
est prohibido en algunos pases, entre ellos Argentina. Su deteccin se realiza
tradicionalmente a travs de bioensayos con Musca domestica y/o HPLC. Estos mtodos
tienen en comn que son laboriosos y consumen mucho tiempo de trabajo. En ese
sentido, creemos que suena imperativo disponer de un mtodo de prediccin de la
produccin de -exotoxina de tipo I en B. thuringiensis que sea rpido y sencillo. El
objetivo de este estudio fue establecer un mtodo de PCR para la deteccin de un gen
asociado a la sntesis dicho metabolito. Se dise un par de cebadores especficos
empleando un software online (Oligoanalyzer 3.1), que amplifica un fragmento de 406 pb
del gen thuE. Estos generaron productos de amplificacin en 13,3% (4/30) de las cepas
exticas, y en 3,7% (4/107) de las nativas sugiriendo la posibilidad de que sean
productoras de dicho metabolito. La cepa HD-1 utilizada como control negativo, no
produjo amplificacin. Para confirmar la especificidad de las reacciones, los productos de
PCR positivos fueron purificados, secuenciados y analizados utilizando BLAST. Los
resultados confirmaron la especificidad de la amplificacin. La informacin obtenida por
PCR se correlacion con la de bioensayos con M. domestica con el fin de validar la
tcnica. Las cuatro cepas exticas y las cuatro nativas que albergan el gen thuE
mostraron tambin producir -exotoxina. Adems, las cepas exticas 4K1 del serovar
morrisoni y HD-542 del serovar thompsoni que haban dado negativo por PCR, resultaron
positivas mediante bioensayos con M. domestica. La toxicidad de la cepa 4K1 se sabe
que es debida a una -exotoxina de tipo II. Pensamos que este compuesto podra ser
tambin responsable de la toxicidad en HD-542. La produccin de esta toxina no puede
ser predicha por nuestro mtodo de PCR, ya que las cepas productoras de -exotoxina de
tipo II careceran del gen thuE. Esta -exotoxina estara codificada por otros genes
diferentes a los requeridos para la biosntesis de la de tipo I. En conclusin, se demuestra
que esta metodologa constituye un ensayo til para la prediccin de la produccin de exotoxina de tipo I en B. thuringiensis. La misma se podra utilizar como primera
aproximacin en el tamizaje de cepas productoras de -exotoxina en colecciones de B.
thuringiensis, o en cepas puntuales que quieran destinarse a la formulacin de
bioinsecticidas.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: * Cabrini, P; ** Ferretti, M; * Scarabel, D; **Penna, C; ** Massa, R
Institucin: * Stoller do Brasil, Cosmopolis, Sao Paulo, Brasil; ** Stoller Biociencias, Buenos Aires,
Argentina.

Variante de la metodologia vigente en la RedCAI para Azospirillum

Azospirillum brasilense es un microorganismo que presenta algunas dificultades en el
desarrollo de formulaciones, especialmente lquidas. Es un microorganismo que tiende a
agregarse y esto hace muy variables los recuentos. Actualmente existe una metodologa
consenso de la REDCAI para el gnero Azospirillum que incluye un primer paso de
dilucin de la muestra en solucin fisiolgica con Tween 80 al 0,01% y luego diluciones
seriadas al dcimo en solucin fisiolgica.
Teniendo en cuenta un protocolo de referencia propuesto por W. Bettiol para la
desagregacin de otro microorganismo hemos planteado como objetivo de este trabajo
sugerir una variante a la metodologa vigente en la REDCAI para mejorar la
reproducibilidad de los recuentos de Azospirillum.
Las muestras utilizadas fueron cinco diferentes lotes de un inoculante comercial
conteniendo las cepas Abv5 y Abv6 de Azospirillum brasilense. Los recuentos fueron
realizados con un mismo protocolo consenso en dos laboratorios simultneamente. Para
cada cultivo fueron realizadas diluciones seriadas al dcimo, utilizando como diluyente
0,1% de Tween 80 en solucin fisiolgica. Y sembrado en duplicado por distribucin con
esptula de Drigasky en placa de Petri conteniendo medio Rojo Congo (RC), desarrollado
por E. Rodriguez Cceres en 1982. Los recuentos tambin fueron sembrados en medio
tripticasa soja agar (TSA) con el agregado del colorante Rojo Congo y en el medio Luria
Bertani (LB) con el agregado del mismo colorante, en ambos medios de cultivo, en
idntica proporcin a la que es utilizada en el medio RC.
Comparativamente con los medios TSA +RC y LB+ RC, el medio RC permiti una mejor
identificacin de las colonias compatibles culturalmente con Azospirillum. Los resultados
obtenidos de recuento en placa en medio RC son ms reproducibles comparados con
recuentos en donde no se utiliz el Tween 80.
El uso de esta variante para realizar las diluciones de los recuentos de Azospirillum,
mejora la reproducibilidad y aumenta los recuentos de cultivos de este microorganismo.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: * Massa, R; * Ferretti, M; * Espeche, MC; * Penna, C; ** Cassn, F.
Institucin: *Stoller Biociencias, Buenos Aires, Argentina. **Universidad Nacional de Rio Cuarto,
Rio Cuarto, Crdoba, Argentina.

ANLISIS DE NODULACIN DE SOJA Y USO DE UN INOCULANTE PATRN EN

INVERNADERO PARA DETERMINAR LA CALIDAD DE PRODUCTOS COMERCIALES.
Una de las mayores dificultades para el desarrollo, registro, fiscalizacin y control de
calidad de inoculantes, es la imposibilidad de contar con parmetros confiables y
reproducibles que definan las propiedades y caractersticas de los mismos.
Durante aos se ha utilizado el recuento de ndulos, o el porcentaje de plantas noduladas
como metodologa para evaluar inoculantes formulados con rizobios. Sin embargo, la
variabilidad y la poca sensibilidad de tales mtodos, no permite discriminar diferencias en
la calidad de los productos, ni establecer parmetros de referencia.
En comunicaciones anteriores hemos propuesto nuevos parmetros de evaluacin de
inoculantes para la recuperacin de bacterias viables sobre semilla y la utilizacin de un
inoculante patrn para este tipo de ensayos.
El objetivo de este trabajo es presentar una nueva metodologa de evaluacin de la
nodulacin que permite discriminar diferencias en la calidad de los productos analizados,
definir parmetros de referencia y consolidar el uso del inoculante patrn en condiciones
de invernadero.
La metodologa incluye el uso de una mezcla del sustrato perlita:arena (3:1 v/v) estril.y
riego con solucin de Hoagland estril (10% v/v) sin nitrgeno. La iluminacin es artificial
del tipo led con un fotoperiodo de 16 hs de luz (aprox 10000 lux) a 30C y 8 hs de
oscuridad a 20C. Cada tratamiento cuenta con un n = 27 plantas. Los ensayos se
realizan en vasos plsticos nuevos de 300 ml de capacidad. Se siembran 3 semillas en
cada uno de ellos. Luego de la emergencia, se deja slo una planta por vaso. Durante el
crecimiento de las plantas se realiza la medicin del ndice de verdor (SPAD) en la hoja
central del segundo trifolio. El anlisis de la nodulacin es por recuento y peso hmedo de
los ndulos del cilindro (2,5 cm x 2,5cm), discriminando entre los de raz primaria y
secundaria.
Para esta metodologa se define como inoculante patrn un inoculante formulado con
Bradyrhizobium japonicum SEMIA 5079, en caldo YEM modificado por la adicin de 1,5
g/l de glutamato monosdico con un rango de uso entre los 15-30 das desde la
fermentacin y una concentracin de 1.109 UFC/ml.
El comportamiento a nivel de la relacin entre la nodulacin y el ndice SPAD de plantas
tratadas con el inoculante patrn y el inoculante analizado se diferencian entre s y con el
control sin inocular. En todos los casos el mayor ndice de verdor correlaciona con un
mayor tamao de ndulos en raz primaria. A la inversa, la nodulacin se compensa con
mayor nmero de ndulos de menor tamao en raz secundaria.
La metodologa propuesta permite detectar diferencias entre los comportamientos de
diferentes formulaciones y correlacionarlas con recuentos sobre semilla. La utilizacin de
un inoculante patrn permite comparar el comportamiento de diferentes formulaciones de
inoculantes a nivel del establecimiento de la simbiosis y dinmica de nitrgeno en plantas
de
soja.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: PREZ, M.; SAUKA, D.; ONCO, M.; BENINTENDE, G.
Institucin: INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGA AGROPECUARIA

DETERMINACIN DE CARACTERES FENOTPICOS Y GENOTPICOS EN CEPAS DE

BACILLUS THURINGIENSIS PATGENAS PARA LARVAS DE COLEPTEROS
Bacillus thuringiensis es la bacteria entomopatgena ms utilizada como agente de
control biolgico a nivel mundial. Tiene la propiedad de producir durante la esporulacin
inclusiones que contienen protenas Cry con actividad txica de gran especificidad en
determinados insectos. Algunas cepas pueden producir durante el crecimiento vegetativo
otros factores de virulencia tambin especficos como es el caso de las protenas Vip y
Sip, y otros altamente inespecficos como la thuringiensina, que es txica incluso para
clulas de mamferos. Una plaga principal en las regiones algodoneras de Latinoamrica
es el picudo Anthonomus grandis (Coleoptera: Curculionidae), tanto por los daos que
causa como por las dificultades que representa su control. De estudios previos se
seleccionaron cuatro cepas nativas de B. thuringiensis por tener la mayor tasa de
mortalidad para el picudo. Se observ que la fraccin activa de estas cepas corresponda
al sobrenadante, por lo que podra asociarse a la accin de thuringiensina o tambin a
protenas que secretan al medio como la Cry1Ia. El objetivo de este trabajo fue brindar
nuevos caracteres fenotpicos y genotpicos de estas cepas nativas de Bacillus
thuringiensis. Otras dos cepas nativas de menor toxicidad no productoras de
thuringiensina y otras tres exticas fueron tambin incluidas en este estudio. La presencia
de cristales se evidenci en un microscopio de contraste de fases y sus componentes
proteicos analizados mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Una
PCR basada en secuencias palindrmicas extragnicas repetidas (REP) se us para
conocer la diversidad y relacin entre ellas. A su vez se obtuvo ADN plasmdico mediante
lisis alcalina y extracciones de fenol:cloroformo:alcohol isoamlico. Los patrones de
plsmidos se obtuvieron mediante electroforesis en geles de agarosa 0,6%. Se identific
en todas las cepas nativas la presencia de cristales bipiramidales y cbicos. Todas
presentaron un perfil proteico similar entre ellas (130 y 65 kDa), y al de la cepa HD-1 del
serovar kurstaki. Tambin presentaron un perfil electrofortico de REP-PCR idntico al de
HD-1, sugiriendo su posible clasificacin dentro del mencionado serovar. Algunas
diferencias empezaron a aparecer entre las cepas nativas cuando se analizaron sus
patrones plasmdicos. Las cuatro cepas nativas productoras de thuringiensina presentaron
perfiles muy similares, pero distintos al del resto de las cepas analizadas. Estas ltimas
comparten una banda de ca. 7900 pb con la cepa productora de thuringiensina HD-2,
ausente en aquellas no productoras de dicho metabolito. Los resultados sealan que las
cuatro cepas nativas que haban producido una alta tasa de mortalidad para el picudo,
comparten gran similitud con la cepa extica HD-1, difiriendo radicalmente en la
produccin de thuringiensina. La banda correspondiente a un plsmido que comparten
con HD-2, podra contener el cluster de genes codificantes de la misma.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Riva, D.S.; Molina, C.; Ribaudo, C.M.
Institucin: Ctedra de Bioqumica, Facultad de Agronoma. Universidad de Buenos Aires

RESPUESTA DE INVERTASA DE PARED EN LA DEFENSA INDUCIDA POR

Azospirillum brasilense EN PLANTAS DE TOMATE DESAFIADAS CON PATGENOS
Una alternativa sustentable para el manejo de adversidades en plantas es el control
biolgico mediante el uso de rizobacterias promotoras del crecimiento de plantas
(PGPRs). ltimamente se ha hecho hincapi en el rol de factores metablicos, como la
sacarosa y los productos de su hidrlisis, en la respuesta de la planta a situaciones de
estrs. Su rpida movilizacin es determinante en dicha interaccin, como fuente de
energa y como factores de sealizacin en la induccin de defensas. Entre las enzimas
que juegan un rol importante en la movilizacin de estos azcares se encuentran las
invertasas (INV). Dentro de estas, las cwINV (INV apoplticas o de pared) son inducidas
durante diversas interacciones planta-microorganismo. El objetivo de este trabajo fue
analizar el efecto de la inoculacin con A. brasilense (cepa FT326) sobre la enfermedad
ocasionada por: X. campestris pv. vesicatoria (Xcv) y S. rolfsii (Sr) en plantas de tomate, y
evaluar la respuesta a dicha inoculacin sobre la actividad de la cwINV y en el contenido
de azcares solubles. En dos experimentos independientes, para cada uno de los
patgenos, 40 plntulas de la variedad Ro Grande fueron inoculadas con 1 mL
conteniendo 106 UFC de A. brasilense. Las plantas control recibieron igual volumen de
medio de cultivo libre de bacterias. A los 45 das, fueron desafiadas con Xcv o Sr y
posteriormente (a las 24 y 48 h) se determin en hojas la actividad de cwINV y el
contenido de azcares solubles (sacarosa, fructosa y glucosa) por HPLC. La severidad,
incidencia y mortalidad ocasionadas por los patgenos fue evaluada a los 10 das para Sr
y a los 14 das para Xcv. Las plantas infectadas con patgenos mostraron un aumento
significativo en la actividad de cwINV de un 80% con respecto al control. En plantas
inoculadas con A. brasilense se registr un aumento del 60%, tanto en presencia como en
ausencia del patgeno. La concentracin de azcares solubles aument
significativamente en respuesta a la infeccin por patgenos y a la inoculacin con A.
brasilense en forma congruente con la actividad enzimtica. En plantas inoculadas se
observ una reduccin en la incidencia y la mortalidad ocasionada por Sr (12,5% y 37%
con respecto al control). La severidad generada por Xcv fue 15% menor. No hubo efecto
sobre la incidencia de la enfermedad. Los resultados obtenidos en plantas inoculadas con
A brasilense en cuanto a la actividad cwINV y contenido de azucares, mostr cierta
similitud con los obtenidos en plantas infectadas por los patgenos; resultados similares
fueron encontrados en plantas de tomate inoculadas con el hongo benfico Glomus
intraradices. La mayor actividad cwINV proveera de azcares solubles que conducira a
un aumento de ATP, necesario para los mecanismos de defensa como el reforzamiento
de la pared celular y sntesis de enzimas relacionadas con la patognesis, lo que
explicara que las plantas inoculadas con A. brasilense estn ms protegidas frente al
ataque
de
patgenos.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: RIVERA D.; MOLINA R.; OBANDO D.; TORRES D.; CASSN F.
Institucin: Laboratorio de Fisiologa Vegetal y de la Interaccin Planta-Microorganismo.
Universidad Nacional de Ro Cuarto.

Evaluacin de la tcnica de recuento por microgota para la cuantificacin de

formulaciones conteniendo Azospirillium brasilense.
Azospirillum es uno de los gneros de rizobacterias ms estudiados debido a su
capacidad de promover el crecimiento vegetal. La cepa Az39 de A. brasilense es una de
las ms utilizadas para la formulacin de inoculantes en Argentina y el control de calidad
de tales formulaciones, juega un papel clave al momento de asegurar su funcionalidad en
condiciones agronmicas. El objetivo de este trabajo fue evaluar la precisin y practicidad
de la tcnica de recuento por microgota para la cuantificacin de Azospirillum brasilense,
utilizando como medio de cultivo agar Luria Bertani modificado por la adicin del indicador
Rojo Congo [LBRC]. Para este desarrollo experimental, se emplearon la tcnica de
recuento tradicional por siembra en superficie versus la tcnica de recuento por microgota
de manera comparativa en los siguientes medios de cultivo: Luria Bertani [LB], Rojo
Congo [RC], Nitrogen Free [NFb] y Luria Bertani-Rojo Congo [LBRC] cuya formulacin se
describe en otro resumen de estas jornadas. Para ello, la cepa Az39 de A. brasilense se
inocul al 1% (v/v) en caldo LB durante 24 horas con agitacin a 180 rpm y una
temperatura de incubacin de 372C. Una vez alcanzada la fase exponencial
correspondiente a una DO595=1.0-1.2 y un recuento aprox. de 1E+9 UFC.ml-1, se
realizaron diluciones decimales hasta alcanzar 10-6 y se sembraron 100 l por placa de
las diluciones 10-5 y 10-6 para la tcnica clsica y 4 deposiciones de 20 l por placa para
la tcnica de microgota en las mismas diluciones. Ambas metodologas fueron
reproducidas por triplicado. Una vez sembradas, las placas fueron incubadas de forma
invertida a 372C durante 48-72 horas, momento en el que se desarroll el recuento.
Para la interpretacin de los resultados, se realiz un anlisis de varianza (ANOVA)
seguido de un Test HSD Tukeys, con un nivel de confianza del 95 %, empleando el
software SAS 9.0 para Windows. Se realizaron controles de pureza sobre la base de
caracterizacin morfolgica de la cepa Az39. De acuerdo a nuestros resultados, no se
observaron diferencias significativas cuando se compararon los medios de cultivo entre s
para una misma metodologa, pero s una tendencia de menor recuperacin para el medio
NFb en ambos procedimientos. Cuando se realiz el anlisis comparativo entre la tcnica
clsica versus la tcnica por microgota, fueron evidenciadas diferencias estadsticamente
significativas (P<0.05) ya que se determin que la tcnica de microgota present una
mayor precisin, evidenciada como menor dispersin de datos y mayor ttulo de recuento,
en comparacin con la tcnica de recuento tradicional. Se concluye as, que la tcnica de
microgota podra ser empleada de rutina en control de calidad de formulaciones que
contienen Azospirillum brasilense debido a su mayor confiabilidad, menor costo y mayor
simplicidad experimental, contribuyendo as a una mejora en los procedimientos de
control
de
calidad
de
inoculantes
para
este
microorganismo

rea: Microbiologa agrcola

Autores: SNCHEZ, C. (1); CANO, M. (2), SPIZZO, S. (1); SEQUN, C. (1); DRAGN, A. (1)
Institucin: (1) Fac. de Cs. Agropecuarias. UNER. Ruta 11. Km 10. 3101. Oro Verde. (2) D.C.
Ficologa, Fac. Cs. Nat. y Museo, UNLP-CONICET

UTILIZACIN DE LA TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE PARA EVALUAR LA

ABUNDANCIA POTENCIAL DE CIANOBACTERIAS EN CAMPOS ARROCEROS DE
ENTRE ROS
La capacidad de las cianobacterias para realizar fijacin biolgica de N es la principal
caracterstica para evaluar el potencial agronmico de estos microorganismos en
arroceras. El desarrollo de estos microorganismos depende de factores ambientales como
disponibilidad de luz, humedad, temperatura y pH, y de las prcticas relacionadas al
manejo de los lotes. Los mismos pasan por perodos secos e inundados, por lo que se
torna difcil la evaluacin y comparacin de la abundancia absoluta de las poblaciones de
cianobacterias entre ambos perodos. Una solucin a este problema es evaluar la
abundancia potencial de este grupo a travs de la tcnica de nmero ms probable. El
estudio de estos microorganismos en arroceras de Entre Ros se orienta a medir la
abundancia potencial de cianobacterias y relacionar esta variable con prcticas de manejo
agrcolas. Se trabaj en tres lotes provenientes de rotaciones con diferente nmero de
aos de arroz y una situacin de menor grado de perturbacin antrpica considerada
como situacin de referencia (monte). Las metodologas tradicionales de estudio de
microorganismos del suelo fueron modificadas en relacin a la naturaleza del cultivo del
arroz y al hecho que las cianobacterias pueden formar masas flotantes cuando el suelo
est inundado. Se trabaj con muestreo compuesto y la recoleccin de la muestra fue
diferente segn el suelo estuviera seco o inundado. Cuando el suelo estuvo seco se
emple un aro que delimit el rea de 4 cm y se removieron los primeros 0,5 cm de suelo,
mientras que cuando estaba inundado se recolect con un corer de 2,6 cm de dimetro,
en una sola operacin, los primeros 0,5 cm de sedimento y agua de inundacin. Para
estimar la abundancia de cianobacterias se emple la tcnica del nmero ms probable
dada la capacidad de estos microorganismos para aprovechar fuentes inorgnicas de C y
N. Esta metodologa requiere menos trabajo respecto del mtodo de recuento en placa y
emplea como medio de cultivo Foggs libre de C y N. Los resultados hallados al evaluar la
evolucin estacional de este grupo microbiano muestran que la abundancia potencial de
cianobacterias est condicionada por la estacin climtica y el manejo del lote. Los
mayores recuentos corresponden al perodo en el que est implantado el arroz en dos de
las tres rotaciones evaluadas. Se observ que la rotacin con mayor nmero de aos de
arroz en un mismo lote (monocultivo de arroz) es la que presenta mayor recuento
potencial de cianobacterias. La situacin monte fue la que comparativamente present
menor recuento respecto de la rotacin monocultivo de arroz. Si bien esta tcnica estima
la abundancia potencial de las cianobacterias, desde el punto de vista ecolgico
constituye una herramienta til para evaluar la biota de cianobacterias al brindar
informacin sobre la importancia relativa de este grupo microbiano en lotes con distintas
historias de manejo, tanto en condiciones de suelo seco como inundado.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Sirio A.; Sotelo C.; Mecco J.; Prez G.; Driutti A.
Institucin: Instituto Agrotcnico "Pedro M. Fuentes Godo" - UNNE

CARACTERIZACIN BIOQUMICA DE RIZOBIOS POR MEDIO DE UN MTODO DE

REPLICACIN MODIFICADO
En la tipificacin de la mayora de las bacterias, el estudio de sus caractersticas
bioqumicas es de gran importancia, para minimizar el tiempo y los materiales gastados
en ello, surgieron aparatos de multiinoculacin, pero este debe ser construido a pedido y
su costo es elevado. Por ello, hemos buscado la manera de replicar el mtodo propuesto
por Steers utilizando una micropipeta automtica y un diagrama de una placa de Petri
dividida en cuadrantes. Los objetivos fueron a)Buscar una alternativa al uso del replicador
de Steers y b)Adaptar a la tcnica de replicacin, pruebas bioqumicas utilizadas para
caracterizar rizobios. Se probaron medios con a)Glucosa, Fructosa y Sacarosa (10 g.L-1);
b)Glicina y Triptfano (1 g.L-1); c)NaCl (0,5%, 1% y 2%); d)Cobre cloruro II y Plomo
acetato (10 mg.mL-1); e)pH: 8,5. Organismos testeados: Aislamientos obtenidos de
ndulos de Glycine max L. (n=216). Interpretacin: los resultados se clasificaron respecto
al testigo positivo (sembrado en medio YEM-RC: Extracto de levadura, Manitol, Agar, Rojo
Congo) en: Positivo (crecimiento mayor o igual al testigo), intermedio (crecimiento menor
al testigo) y crecimiento nulo. Los resultados fueron: a)El medio con sacarosa present un
60% de aislamientos positivos, mientras que Fructosa present 43% y Glucosa solo un
0,5% de los mismos, el medio con glucosa present un crecimiento nulo en el 43%,
mientras que el 4% lo fue en Fructosa y 3% en sacarosa. El resto de los aislamientos
present un crecimiento intermedio; b)El 78% tuvo un crecimiento positivo en Triptfano y
un 63% en Glicina, mientras que no hubo crecimiento en un 4% de los aislamientos en
Triptfano y en 12% en Glicina, el resto de los aislamientos tuvieron crecimientos
intermedios respecto al control; c)El crecimiento fue positivo en un 2,3% en el medio con
0,5% NaCl, mientras que fue slo un 0,5% en medios con 1% y 2% de NaCl, el mayor
porcentaje de crecimiento fue intermedio: 95,8% en 0,5% NaCl, 96,7% en 1% NaCl y
89,8% en 2% NaCl; el resto de los aislamientos no present crecimiento; d)El 100% de los
aislamientos no creci con Plomo y slo un 2,3 % de los aislamientos creci en el medio
con Cobre; e)El 51 % de los aislamientos present un crecimiento positivo a pH 8,5 y un
39% fue intermedio en los resultados obtenidos. La adaptacin del fundamento del
aparato propuesto por Steers permiti evaluar de manera simultnea distintos medios, los
resultados permitieron caracterizarlos segn su metabolismo y tolerancia a distintos
sustratos, categorizndolos. Considerando que el volumen del inculo es fijo, habindolo
llevado a una concentracin de 0,5 de MacFarland, se puede comparar el crecimiento de
los aislamientos ya sea de manera cualitativa (respecto al control) o de manera
cuantitativa (midiendo el dimetro de la colonia obtenida). El prximo paso ser identificar
genticamente a estos aislamientos, de manera de corroborar si las pruebas bioqumicas
concuerdan
con
lo
estudiado
para
cada
gnero
de
rizobios.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Mansilla N.; Mecco J.; Caballero C.; Sirio A.; Sotelo C.; Driutti A.
Institucin: Instituto Agrotecnico Fuentes Godo UNNE

ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD DE RIZOBIOS MEDIANTE TCNICAS BIOQUMICAS Y

FENOTPICA DESDE NDULOS DE PROSOPIS sp.
En la Provincia del Chaco se est impulsando la reforestacin con especies de Prosopis
sp. (algarrobo) y otras leguminosas nativas maderables. El establecimiento de
plantaciones forestales constituye una de las posibilidades de utilizacin de suelos
degradados, as como elemento de estabilizacin y proteccin de sitios inestables como
costas de ros y mares, dunas de arena y laderas de alta pendiente. Es una planta
adaptada a climas ridos y semiridos, a suelos salinos y degradados. Entre las cepas
que nodulan leguminosas existen grandes diferencias con respecto a la tolerancia a la
acidez, salinidad y toxicidad del aluminio y manganeso. La evaluacin de la diversidad
gentica y de las relaciones genticas entre las cepas de bacterias de las poblaciones
naturales puede proporcionar informaciones muy valiosas referentes a los genotipos que
se adaptan bien a determinados medios ambientes. El objetivo del trabajo fue caracterizar
fenotpicamente y bioqumicamente los aislamientos de rizobios provenientes de Prosopis
sp. Se muestrearon 4 plantaciones pertenecientes a las localidades de Presidencia Roque
Senz Pea; Concepcin del Bermejo; Presidencia de la Plaza y General San Martn. A
partir de los muestreos de suelos, se llenaron macetas con los mismos y se sembraron las
semillas de algarrobo. A los 8 meses de realizada la siembra, se extrajeron los ndulos y
se procedi al aislamiento de los rizobios. Posteriormente se procedi al macerado
individual de cada ndulo y se sembr en placas Petri conteniendo YEM-RC. Las placas
se incubaron a 28 C hasta la obtencin de colonias. Los aislamientos se conservaron en
stock glicerol a -10 C. Las pruebas bioqumicas realizadas fueron: Produccin de acidez
y alcalinidad del medio YEM (extracto de levadura manitol agar), Tolerancia a pH cido y
alcalino, Tolerancia a concentraciones de NaCl y morfologa de Colonias (coloracin y
produccin de exopolisacridos). Los resultados de la produccin de acidez y alcalinidad
dieron que el 100% de los aislamientos acidificaron el medio, lo que nos indicara que
todos son de crecimiento rpido. En la prueba de tolerancia a pH cido (4,5) el 100 % de
los aislamiento no crecieron y a pH alcalino (7,8) el 74 % present crecimiento menor al
control, el 16% igual al control y el 10% present colonias aisladas. Tolerancia a
concentraciones de NaCl mostr que todos los tratamientos crecieron en concentraciones
del 0,5 y 1 %, pero la concentracin del 2 %, 5 aislamientos no crecieron. En esta
determinacin vemos que a mayores concentraciones hay aislamiento que no crecen,
pero tambin un grupo interesante crece igual al control. En cuanto a la coloracin de las
colonias los resultados fueron: 46% rosa; 20% naranja; 13 % rosa claro; 7 % Salmon y 7%
Naranja claro. Otra caracterstica es la produccin de exopolisacaridos el cual arroj que
el 37 % produjo en forma moderada, el 25 % poco, 19 % abundante y el 19% muy poco.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: MOLINA R.; OBANDO D.; TORRES D.; RIVERA D.; CASSN F.
Institucin: Laboratorio de Fisiologa Vegetal y de la Interaccin Planta-Microorganismo.
Universidad Nacional de Ro Cuarto.

Utilizacin de un medio de cultivo para la cuantificacin de Azospirillum brasilense y la

diferenciacin de bacterias presentes en la misma formulacin.
Azospirillum es uno de los gneros de rizobacterias ms estudiados de los ltimos aos
debido a su capacidad de promover el crecimiento en un gran nmero de especies
vegetales de todo el mundo, lo que ha devenido en su utilizacin desde el punto de vista
agronmico. La cepa Az39 de A. brasilense es una de las ms utilizadas para la
formulacin de inoculantes en Argentina y el control de calidad de tales formulaciones,
juega un papel clave para asegurar su funcionalidad en condiciones agronmicas. En la
actualidad, existen procedimientos validados para la cuantificacin de Azospirillium
brasilense, que incluyen el procedimiento de recuento y otros procedimientos adicionales
para la identificacin de microorganismos contaminantes. El objetivo de este trabajo fue el
de evaluar un medio de cultivo de fcil preparacin, que permitiese integrar el
procedimiento de recuento y la identificacin de microorganismos contaminantes en una
misma secuencia de trabajo. Para ello, utilizamos la cepa Az39 de Azospirillum brasilense
como cepa de referencia y las tcnicas de recuento por microgota y de siembra en
superficie como procedimientos analticos estndares. El medio de cultivo se formul
sobre la base del caldo Luria Bertani [LB] modificado por la adicin de 15g.L-1 del
indicador Rojo Congo y 18 g.L-1 de agar y fue denominado LBRC. Para los ensayos, se
obtuvieron cultivos en fase exponencial de Sinorhizobium meliloti, Bradyrhizobium
japonicum, Pseduomonas protegens y Bacillus subtilis que fueron mezclados en una
relacin al 50% (v/v) con cultivos en igual fase de crecimiento [DO595=1.0 y aprox. 1x109
UFC.ml-1] de Azospirillum brasilense Az39. Adems se consideraron controles de cada
microorganismo sembrados de manera individual en los medios propuestos: Rojo Congo
[RC]; Nitrogen Free [NFb] y LBRC. Los resultados de nuestros experimentos determinaron
que ambos medios, LBRC y RC permitieron diferenciar colonias de Azospirillum
brasilense de aquellas formadas por S. meliloti, P. protegens y B. subtilis a diferencia de
lo que ocurri en medio NFb, en el que no se pudieron diferenciar colonias de cada
gnero microbiano. Por otra parte, B. japonicum fue incapaz de desarrollarse en todos los
medios propuestos. El medio LBRC tiene dos ventajas considerables con respecto al
medio RC considerado selectivo y diferencial para el gnero Azospirillum: es de fcil
preparacin y no es selectivo, por lo que permitira el desarrollo de microorganismos
contaminantes con mayores requerimientos nutricionales y no con los comnmente
utilizados para la formulacin de inoculantes, como los empleados en nuestros ensayos.
En base a estos resultados, proponemos que el medio LBRC es adecuado para el
recuento de Azospirillum brasilense y la deteccin de otros microorganismos en un mismo
procedimiento.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: Vzquez, C.; Merlo, C.; Abril, A.; Kowaljow, E.; Meriles, J.
Institucin: Microbiologa Agrcola, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de
Crdoba. Instituto Multidisciplinario de Biologa Vegetal (IMBIV-CONICET)..

IMPACTO DEL USO DEL SUELO SOBRE LA ACTIVIDAD MICROBIOLGICA EN EL

CHACO RIDO DE CRDOBA
Dos procesos microbiolgicos edficos son claves al momento de evaluar el efecto de las
prcticas productivas: la actividad microbiana total (respiracin) y la liberacin de
nutrientes (nitrificacin). La respiracin es un reflejo directo de la degradacin de materia
orgnica del suelo fcilmente mineralizable. Los niveles de respiracin son importantes
indicadores del impacto producido por el manejo agronmico. La nitrificacin es un
proceso llevado a cabo por bacterias quimiolitoauttrofas que oxidan amonio produciendo
nitrato. La nitrificacin es fundamental para el mantenimiento de la fertilidad del suelo y los
nitrificadores suelen ser muy sensibles a los disturbios provocados en ecosistemas
alterados. El objetivo de este trabajo fue evaluar los cambios producidos en la actividad
microbiana total y en el proceso de nitrificacin provocados por efecto de las prcticas
productivas actuales en el Chaco rido de Crdoba. Se seleccionaron 4 sitios de
muestreo: un sitio no disturbado (Reserva Chancan) y tres sitios productivos: desmonte
total y selectivo con ganadera (DT-ganadera y DS-ganadera) y desmonte total con
agricultura bajo riego (DT-agricultura). En cada sitio se tomaron 3 muestras de suelo (020cm), en la temporada seca y hmeda. Se determin: a) actividad microbiana hetertrofa
total in situ, b) abundancia de nitrificadores y c) actividad nitrificadora. Los datos fueron
analizados mediante ANOVA y comparacin de medias por LSD (p0.05). La respiracin
vari entre sitios y temporadas, incrementndose ms del doble durante la temporada
hmeda. Los mayores valores se encontraron en el sitio DT-agricultura. La abundancia de
nitrificadores vari entre temporadas y sitios de muestreo. Los mayores valores se
encontraron en los sitios con desmonte para ganadera durante la temporada hmeda. La
actividad de nitrificadores slo vari entre temporadas en el sitio no disturbado, donde
adems se detect la mayor actividad durante la temporada hmeda. El hecho que el sitio
DT-agricultura presente los valores ms elevados de respiracin en ambas temporadas,
puede deberse al mayor contenido de humedad que presenta en el suelo (riego) y a la
incorporacin de residuos a travs del laboreo para la siembra de papa, aumentando la
aireacin del suelo y favoreciendo el crecimiento de microorganismos arobicos. La baja
abundancia de nitrificadores pero con altos valores de actividad nitrificadora en el sitio no
disturbado, estara indicando que la comunidad de nitrificadores se encuentra ms activa
queen los sitios productivos. Adems, que la actividad nitrificadora se incrementara en el
sitio no disturbado durante el perodo de transicin (temporada seca a temporada de
lluvias), puede deberse a la fuerte acumulacin de hojarasca durante la temporada seca y
su posterior mineralizacin durante la hmeda. Estos resultados demuestran que las
prcticas productivas provocan importantes cambios en los procesos microbianos del
suelo.

rea: Microbiologa agrcola

Autores: ZABALLA, I.J.; GORI, J.I.; CURA, J.A.; GOLLUSCIO, R.; RIBAUDO, C.M.
Institucin: FACULTAD DE AGRONOMA, UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES, ARGENTINA;

MICROORGANISMOS RIZOSFRICOS SOLUBILIZADORES DE FSFORO Y SU

EFECTO SOBRE LA PROMOCIN DEL CRECIMIENTO EN LOLLIUM MULTIFLORUM
El rye grass anual (L. multiflorum) es una gramnea forrajera muy utilizada en sistemas
ganaderos, debido a su elevado potencial de produccin y su alta calidad nutritiva, en
comparacin con otros verdeos de invierno. Su crecimiento se ve restringido por el
abastecimiento de nutrientes minerales, dentro de los cuales, por la magnitud de su
demanda y su variabilidad, tanto espacial como temporal, se destacan el nitrgeno (N) y
el fsforo (P). Esto hace necesario recurrir a la fertilizacin para evitar que la
disponibilidad de los mismos resulte limitante, con el consecuente aumento de los costos
de produccin. El objetivo del trabajo fue evaluar la promocin del crecimiento de plantas
de rye grass anual inoculadas con rizobacterias promotoras del crecimiento (PGPRs) y
determinar la capacidad solubilizadora de fosfato inorgnico por parte de distintas cepas
bacterianas. Se realiz un modelo factorial 4 x 2, en donde el factor bacteria incluy las
inoculaciones con cepas de Enterobacter ludwigii BNM 0357, Azospirillum brasilense FT
326, un inoculante comercial y un tratamiento control sin inocular, y en donde el factor
fertilizante incluy 2 niveles de fosfato triclcico: 0,1 gr/l y 5 gr/l. Las plantas se
cosecharon para su anlisis a los 20, 40 y 60 das posteriores a la siembra, y se
determin la evolucin del peso seco areo y radical, la superficie radical, la actividad
nitrogenasa, y el contenido de fsforo en planta. Las plantas inoculadas con PGPRs,
evidenciaron una mayor promocin de crecimiento, tanto areo como radical, a los 60
das del ciclo del cultivo y fue ms evidente a dosis bajas del fertilizante. El aumento en el
peso seco de las plantas inoculadas fue del orden del 44 al 73 % para la fraccin area y
del 46 al 69 % para la fraccin radical con respecto al tratamiento control. En cuanto a la
superficie radicular un incremento del 35% fue registrado para las plantas inoculadas A.
brasilense y de un 26% para aquellas plantas inoculadas con E. ludwigii, ambos casos en
condiciones de baja fertilizacin fosforada. Se registr diferencia en cuanto al contenido
de P en el inicio del cultivo (20 das) para las plantas con alto nivel de fertilizacin,
alcanzando un nivel de 2,38 mg P/gr planta para el tratamiento con E. ludwigii, en tanto
que plantas controles registraron un 19 % menos de dicho elemento. Los resultados
obtenidos sugieren que la inoculacin con bacterias PGPRs en las diferentes condiciones
evaluadas, promueven la produccin de biomasa a lo largo del ciclo ontognico del
cultivo.

rea: Microbiologa ambiental

Autores: AGUIRRE, B.1,2; MARTNEZ WASSAF, M.2; GRUMELLI, Y.1,2; DIAZ PANERO, M.1,2;
CASTILLO, J.3; WELTER, A.1,2
Institucin: 1-Laboratorio Central -Divisin Aguas y Efluentes-, Universidad Catlica de Crdoba
2-Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad Catlica de Crdoba 3-Facultad de Ingeniera,
Universidad Catlica de Crdoba

LA BIOPELCULA EN CONTACTORES BIOLGICOS ROTATIVOS -RBC-COMO

INDICADOR BIOLGICO DE LA EFICIENCIA DEL SISTEMA DEPURADOR
Los RBC o biodiscos son una tecnologa no convencional para el tratamiento biolgico
aerbico de cultivo fijo de lquidos residuales orgnicos.
La biopelcula, componente depurador del sistema, est formada por microorganismos
que se adhieren a la superficie de discos plsticos rotatorios. Su composicin est
relacionada con las caractersticas generales del lquido que fluye por el reactor (carga
orgnica, temperatura, pH, tiempos de retencin y caudal). El objetivo es caracterizar y
emplear la biopelcula como indicador biolgico de la eficiencia en la remocin de materia
orgnica en un lquido residual domstico.
Entre abril y diciembre de 2013 se tomaron porciones de biopelcula (12x12 cm2)
adherida a los discos en las tres etapas internas de un biodiscos (n=27) empleado para el
tratamiento de un lquido residual domstico. Se calcul el peso hmedo (%) y seco (%) y
se realizaron recuentos de bacterias aerobias mesfilas -BAM- (UFC/mL), de hongos y
levaduras -Ho- (UFC/mL) y se efectu una observacin microscpica directa a 400X para
identificar las especies que estaran constituyendo la biopelcula. Adems se determin la
demanda biolgica de oxgeno -DBO5- al inicio y al final del tratamiento para corroborar la
eficiencia del sistema. Se utiliz ANOVA (=0,05).
Se observaron diferencias entre el peso hmedo (p=0,0097) y seco (p=0,0096) de las tres
etapas, con un mayor porcentaje de humedad en la etapa 1 (96,45%). sta posee mayor
carga orgnica particulada (detritus), flagelados, amebas de vida libre y ciliados
caminadores y pedunculados coloniales como Opercularia sp. Aqu se obtuvo la media
mayor de BAM (4,09x107) y Ho (6,00x109) y aunque no existen diferencias significativas
con las siguientes etapas (p>0.05), los recuentos van disminuyendo a medida que el
lquido avanza.
En la etapa 2 se observ una menor abundancia de detritus y bacterias filamentosas.
Siguen existiendo especies de flagelados, amebas y aparecen helmintos y sus huevos.
En la etapa 3, la ms laxa, se destac una menor proporcin de bacterias filamentosas y
flagelados. Disminuy la abundancia de ciliados coloniales y hubo un incremento de la
cantidad de helmintos y rotferos del gnero Philodina sp. Al analizar los valores de DBO5
a la entrada y a la salida del tratamiento se observ su disminucin en un 48,3%
(p<0.0001), lo que denota la eficiencia del sistema depurador.
La composicin de la biopelcula vara a lo largo del sistema de tratamiento observndose
al inicio microorganismos de un nivel trfico inferior que son reemplazados por
organismos de una mayor complejidad estructural. El movimiento en el interior de la
biopelcula favorece adems la difusin del oxgeno que facilita la descomposicin
aerobia. En la ltima etapa, los rotferos se alimentan de bacterias, amebas y ciliados
disminuyendo an ms la carga orgnica. La biopelcula mantiene un equilibrio biolgico
tal que provoca la reduccin de la DBO5 del lquido tratado siendo responsable del
proceso
depurativo.

rea: Microbiologa ambiental

Autores: Alfonzo, M.; Benzzo, M.; Piovano, N.
Institucin: Departamento de Qumica y Ambiente de la Facultad de Ingeniera y Ciencias Hdricas

ACTIVIDAD BIOLGICA Y PERFORMANCE DE MICROORGANISMOS DE INTERS

PARA EL TRATAMIENTO BIOLGICO DE EFLUENTES LIQUIDOS PROVENIENTES
DE LA INDUSTRIA ALIMENTARIA.
Las industrias lcteas y frigorficas generan efluentes lquidos con alto contenido de
materia orgnica. La legislacin vigente establece un tratamiento previo a su volcado en
coherencia con un medio ambiente sustentable.
El tratamiento aerbico por barros activados es el ms efectivo, ya que la materia
orgnica presente es metabolizada por los microorganismos a CO2, NH4+, H2O y
biomasa. Su seguimiento se realiza por determinacin de la DQO (Demanda Qumica de
Oxigeno) y de los SSV (Slidos Suspendidos Voltiles. Para optimizar costos y tiempos
de tratamiento, la bioaumentacin resulta de utilidad para reforzar la microbiota autctona
presente.
Los objetivos fueron determinar la actividad biolgica de diversas cepas bacterianas sobre
efluentes sintticos e industriales, estudiar la evolucin de la DQO y los SSV en el tiempo
y determinar la ks (constante de velocidad especfica de degradacin de materia
orgnica).
La metodologa consisti en el aislamiento de bacterias de un efluente frigorfico
(proveniente de una laguna aerbica) y de un liofilizado comercial (Bi-Chem SM 700). Se
realizaron ensayos biolgicos en reactores aerbicos tipo batch, sobre un efluente
sinttico (smil lcteo) y dos industriales (frigorfico y lcteo). Los ltimos recibieron un
tratamiento fisicoqumico previo. Como inculo se utilizaron barros de cada bacteria
aclimatados previamente en el efluente sinttico durante 20 das. Se determin pH, DQO
y SSV para cada muestra/h. El parmetro ks se obtuvo a partir de los datos
experimentales aplicando el Modelo de Monod.
Se aislaron ocho cepas bacterianas identificadas como bacilos Gram positivos
esporulados. Slo cuatro, denominados B4, B8, B1l y B5, mostraron actividad biolgica.
B4 y B8 exhibieron los mayores porcentajes de remocin de la DQO del efluente sinttico
en 4 horas de ensayo (85 % y 74%, respectivamente) con aumento simultneo de la
biomasa (SSV).
En el efluente lcteo B1l y B4 presentaron fase de latencia, a diferencia de B5 y B8. B5
present la mejor performance (87% de remocin de la DQO en 5 hs), seguido de B4
(82% en 8 hs). B8 y B1l mostraron un 79% y 71% de remocin en 6 horas,
respectivamente. Para el efluente frigorfico no se observ fase de latencia, mientras que
los SSV resultaron mayores respecto de los otros efluentes. B1l mostr la mayor remocin
de la DQO (82% en 11 hs). En cuanto a ks, en el lcteo se obtuvieron menores valores
respecto del sinttico, a excepcin de B1l. En el sinttico y lcteo se obtuvieron valores de
ks=0.00178 y 0.00047 L/mg.biomasa x h. para B4, respectivamente. El efluente frigorfico
arroj menores valores (ks=0.00007 L/mg.biomasa x h para B1l).
Estos resultados demuestran que el valor de ks se relacionara con la complejidad
qumica del efluente, y que la utilizacin de barros aclimatados previamente (formados a
partir de una cepa bacteriana nica) resulta factible en la optimizacin del tratamiento
biolgico
de
efluentes
con
alta
concentracin
de
materia
orgnica.

rea: Microbiologa ambiental

Autores: Orussa, N.; Barral Cabali, P.; Torres, A.; Geoghegan, P.; Brero, M.L.; Asato, V.
Institucin: Centro Nacional de Control de Calidad de Biolgicos (CNCCB)- ANLIS "Dr. Carlos G.
Malbrn"

MONITOREO AMBIENTAL EN UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGA:

COMPARACIN DEL RECUENTO EN DOS MEDIOS DE CULTIVO
Introduccin: Los resultados del monitoreo ambiental realizado en un laboratorio brinda
conocimiento sobre el estado microbiolgico de las reas de trabajo. Con esta
informacin, se puede comprobar si la contaminacin microbiana se encuentra dentro de
los parmetros establecidos por el laboratorio. Una forma econmica y simple de realizar
el monitoreo de la contaminacin microbiana ambiental es utilizando el mtodo de
sedimentacin en placas de petri, por perodos prolongados de tiempo. Generalmente, los
medios de cultivo utilizados para este monitoreo son: Agar Tripticasa Soya (TSA), para
recuento de aerobios totales, y Agar Sabouraud, para recuento de hongos y levaduras. El
Centro Nacional de Control de Calidad de Biolgicos (CNCCB) posee reas controladas y
laboratorios de microbiologa a los cuales se les realiza un monitoreo microbiolgico
ambiental mensual, con el objeto de conocer cules son las condiciones microbiolgicas
de las reas, ya que mantener un nivel mnimo de microorganismos es un requisito de las
buenas prcticas de trabajo en un laboratorio de microbiologa. Objetivo: El objetivo de
este trabajo fue comparar el resultado del monitoreo ambiental, por sedimentacin en
placas de petri, realizado con TSA (medio recomendado para este ensayo) y MH (medio
muy rico en nutrientes) en un laboratorio de microbiologa. Materiales y Mtodos: Se
seleccion el rea con ms recuentos dentro del CNCCB, para realizar la comparacin
entre los dos medios. Se realiz el monitoreo ambiental en reposo utilizando el mtodo de
sedimentacin en placas de petri. En cada uno de los puntos de monitoreo, se expusieron
2 placas de petri, una con TSA y otra con MH, por 4 horas. Las placas se incubaron a
362C por 48 horas y se realiz una primera lectura. Se continu incubando las placas
hasta los 7 das. Cumplido el perodo de incubacin, se realiz la lectura final y el registro
de los resultados. El ensayo fue realizado mensualmente, por un total de 11 meses. Para
el anlisis estadstico se utiliz la prueba F de Fischer, la cual verifica si los dos mtodos
son igualmente precisos, de acuerdo a sus varianzas, y el test t de Student para la
comparacin de las medias de ambos mtodos. Resultados: De un total de 154
resultados, 68 dieron recuentos iguales en ambos medios y dentro de estos, 64
corresponden a recuentos <1 UFC/placa. Por otro lado, 57 resultados dieron recuentos
ms altos con MH que con TSA y 29 recuentos fueron ms bajos con MH que con TSA. El
anlisis estadstico de los resultados sugiere que no existe diferencia significativa al
utilizar el medio de cultivo TSA o el MH para el monitoreo microbiolgico ambiental.
Conclusiones: De acuerdo a los datos obtenidos hasta el momento, se puede inferir que
ambos medios pueden ser utilizando indistintamente en el monitoreo microbiolgico
ambiental. Se continuar con la evaluacin, incorporando al estudio comparativo el rea
con
menor
recuento
dentro
del
CNCCB.

rea: Microbiologa ambiental

Autores: Borges, E. (1); Bojanich, M. (1); Merino, L. (1,2)
Institucin: 1.Instituto de Medicina Regional. Universidad Nacional del Nordeste. Av. Las Heras
727. Resistencia. Chaco. 2.Facultad de Medicina. Universidad Nacional del Nordeste. Sargento
Cabral 2001. Corrientes

Caracterizacin de cepas autctonas de Bacillus spp con potencial efecto biocontrolador

Existen estudios que sealan al gnero Bacillus con un gran potencial en la produccin de
exoenzimas que podran jugar un papel dentro del proceso antagnico de los
microorganismos, ya que estn involucradas en la patogenicidad hacia insectos y
nematodos parsitos de plantas y animales.
El tipo de especie presente en las tierras como as tambin su capacidad para producir
exoenzimas est condicionada por la interaccin entre la biota microbiana y otros
componentes biticos (insectos y parsitos) y/o abiticos (minerales y detritus orgnicos)
en conjuncin con factores fsicos (temperatura, pH, luz), lo que le otorga a cada sitio
geogrfico caractersticas particulares en cuanto a su biomasa bacteriana.
El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la produccin de enzimas extracelulares,
especialmente proteasas y quitinasas en cepas de Bacillus spp. recuperadas a partir de
suelos de la ciudad de Corrientes
Se aislaron 8 cepas de Bacillus pertenecientes a las siguientes especies: B. lentus (1
aislamiento), B. subtilis (1 aislamiento), B. licheniformis (2 aislamientos), B. cereus 1 (1
aislamiento), B. amyloliquefasciens (1 aislamiento), B. turingiensis (1 aislamiento), B.
cereus 1/B. turingiensis (1 aislamiento).
El estudio de la capacidad de produccin de enzimas extracelulares se llev a cabo
siguiendo tcnica previamente descriptas utilizando agar quitina coloidal, agar gelatina,
agar casena y agar Tween 80 para evaluar la produccin quitinasa, gelatinasa, caseinasa
y lipasa, respectivamente.
Entre las cepas estudiadas se encontr una gran diversidad en cuanto a la produccin de
las diferentes exoenzimas no pudiendo registrarse la produccin de quitinasa por ninguna
de las cepas estudiadas
La produccin de exoenzimas y la combinacin de ellas vari en funcin de las especies
incluidas en el trabajo.
La deteccin de cepas con variada produccin de exoenzimas permitir en una prxima
etapa evaluar su actividad para la destruccin de huevos de geohelmintos, alternativa
que, usada en combinacin con otras medidas profilcticas, puede contribuir al control de
especies
de
importancia
epidemiolgica.

rea: Microbiologa ambiental

Autores: CARRON, A.I. 126; FONTENLA, S.2; GARIBALDI, L.A.34; CASSN, F.135 y
FERNNDEZ, N. 23
Institucin: 1 Universidad Nacional de Ro Cuarto ; 2 Lab. De Microbiologa Aplicada y
Biotecnologa. CRUB UNComahue-INIBIOMA ; 3 CONICET ; 4 Universidad Nacional de Ro Negro
; 5 Laboratorio de Fisiologa Vegetal y de la Interaccin Planta-Microorganismo ; 6
ayecarron@gmail.com

EFECTO DEL MANEJO FORESTAL EN LAS POBLACIONES MICROBIANAS DE UN

MATORRAL NATIVO DEL NOROESTE PATAGNICO
Los ambientes boscosos Andino-patagnicos constituyen un reservorio de diversidad y
poseen potencial productivo. Es limitada la informacin de los procesos involucrados en el
manejo sustentable en la regin. Las bacterias y los hongos del suelo pueden promover o
limitar el establecimiento y la productividad de especies forestales nativas, y a su vez el
manejo forestal puede modificar las poblaciones microbianas. El objetivo de este trabajo
fue analizar el efecto del manejo forestal (raleo) sobre distintos grupos funcionales de
microorganismos del suelo. Adems, se propone una metodologa de muestreo para
trabajar con microorganismos en ambientes boscosos extensos y heterogneos. En un
establecimiento en El Foyel, delimitamos 2 parcelas de 31,5x45m en las que implantamos
6 especies nativas de importancia forestal, producidas en vivero. Este ambiente fue un
bosque quemado y en la actualidad es un matorral alto de especies nativas. Una de las
parcelas fue sujeta a raleo intenso (70% del rea basal removida) y la otra no tuvo
intervencin forestal. En cada parcela se trazaron 5 transectas, y sobre cada una se
tomaron 5 muestras de suelo. Se realiz un pool para cada parcela (25 submuestras) y se
cultivaron distintos grupos funcionales de microorganismos. Se usaron diferentes medios
de cultivo: TSA (tripticasa-soya), NFB modificado (nitrogen free), RC (Rojo Congo) y AC
(Agar Cetrimida) para bacterias aerobias totales, fijadoras de N2, presuntivas Azospirillum
y Pseudomonas sp., respectivamente. Tambin se cultivaron levaduras en agar
MYP+fungisttico. En todos los casos, fueron cultivadas por triplicado a 25C por 48-72h y
luego a 4C. Todos los grupos microbianos se encontraron en ambas parcelas. Los
recuentos presentaron tendencias similares: las bacterias totales se encontraron en mayor
cantidad (106), seguidas por las bacterias fijadoras de N2 (104), presuntivas Azospirillum
(104), levaduras (103-104), y por ltimo las presuntivas Pseudomonas (102). Con
respecto al manejo forestal, para bacterias totales y fijadoras de N2 el recuento fue
significativamente mayor en la parcela sin raleo, mientras que para bacterias en RC y AC
y levaduras fue mayor en la parcela raleada. Los resultados obtenidos sugieren que el
diseo experimental y de muestreo permiten analizar el efecto del manejo forestal sobre
poblaciones microbianas en parcelas de gran tamao. El raleo influye en las comunidades
microbianas del suelo de distinta manera, favoreciendo determinados grupos de
microorganismos, como a las Pseudomonas y levaduras, y disminuyendo en forma
cuantitativa el nmero de bacterias totales, lo cual puede asociarse al disturbio antrpico y
al cambio de las condiciones ecolgicas. Dado que, por ejemplo, las Pseudomonas
pueden actuar como biocontrol y las fijadoras de N2 mejorar las condiciones nutricionales
del suelo, es importante tener en cuenta esta informacin para describir la implicancia de
este
tipo
de
manejo
sobre
las
especies
forestales
implantadas.

rea: Microbiologa ambiental

Autores: MOGUILEVSKY, D. (1); FERNNDEZ, N. (1, 2); FONTENLA, S. (1)
Institucin: (1) Laboratorio de Microbiologa Aplicada y Biotecnologa, Centro Regional
Universitario Bariloche, Universidad Nacional del Comahue - INIBIOMA, Quintral 1250, Bariloche
(CP: 8400), Ro Negro, Argentina.; (2) Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas
(CONICET), Argentina.

Consecuencias de la erupcin del complejo volcnico Puyehue-Cordn Caulle sobre la

abundancia y riqueza de ectomicorrizas en plntulas de Nothofagus pumilio
Las especies de Nothofagus, dominantes en los bosques Andino-patagnicos, presentan
ectomicorrizas (EcM) en sus races. Esta asociacin entre hongos del suelo y las races
de plantas est relacionada con el intercambio de nutrientes y la aptitud vegetal. Grandes
extensiones de bosque fueron afectadas por la erupcin del volcn Puyehue (2011), y se
desconocen las consecuencias sobre las plntulas de Nothofagus y sus EcM. El objetivo
de este trabajo consisti en evaluar el efecto de la erupcin sobre el crecimiento de las
plntulas y sobre la abundancia y la riqueza de las EcM asociadas a races de N. pumilio
(Lenga). Se estudiaron tres sitios: uno control sin ceniza y dos afectados por la deposicin
de 40-50 cm de ceniza, uno con el estrato arbreo poco afectado y el otro con la mayor
parte de los rboles secos (sin hojas). Se colectaron 10 plntulas/sitio (2 aos de edad) y
se registraron sus caractersticas morfolgicas (longitud y dimetro de tallo y raz). Se
cuantific el porcentaje de puntas colonizadas y la riqueza de EcM en sus races,
utilizando tcnicas micro-macromorfolgicas para describirlas. Se encontraron diferencias
significativas en las variables analizadas. Las plntulas del sitio seco presentaron mayor
tamao que las del control y del sitio con el estrato arbreo poco afectado. El mayor
crecimiento puede deberse a un aumento de la disponibilidad de luz, factor limitante en
este tipo de bosques, y/o a la disminucin en la competencia ya que los ambientes con
ceniza presentan menor diversidad y densidad del sotobosque. Todas las plntulas
posean EcM, siendo la abundancia del sitio seco y el control (>80%) mayor a las del sitio
afectado (49%). Es poco lo que se conoce del ciclo de nutrientes en los sitios afectados
por la erupcin, siendo posiblemente uno de los principales factores a estudiar para
describir este fenmeno. Otro aspecto a tener en cuenta es la disponibilidad de inculo
micorrcico, el cual probablemente vara segn la presencia de hojas en el estrato
arbreo, las condiciones fsico-qumicas dismiles de la ceniza, viento y otras
caractersticas climticas. La riqueza de EcM en el sitio control, donde las plntulas se
encuentran directamente en suelo, es significativamente mayor que en los sitios con
ceniza y similar a la obtenida en individuos adultos en otros bosques de la regin. Es decir
que si bien la ceniza posee un inculo micorrcico, cuyo origen puede provenir de la
dispersin desde sitios sin ceniza o por la dispersin del micelio fngico desde el suelo, la
diversidad y riqueza de EcM es menor que la existente en el suelo an 3 aos luego de
producida la erupcin. El estudio de esta simbiosis y sus mecanismos de dispersin e
eficiencia de colonizacin en ambientes afectados por erupciones debe ser profundizado,
siendo esta informacin relevante en la regeneracin del bosque ya sea desde una
perspectiva ecolgica o de restauracin de los ambientes afectados por disturbios a gran
escala.

rea: Microbiologa ambiental

Autores: PAJAROLA, A.; DUO SAITO, R.; de GARCIA, V.; MOLIN, M.
Institucin: Laboratorio de Microbiologa Aplicada y Biotecnologa (MABB), INIBIOMAUNComahue

ROL DE LOS PIGMENTOS CAROTENOIDES Y DE LA MICOSPORINA-GLUTAMINOLGLUCSIDO EN LA SUPERVIVENCIA DE PHAFFIA RHODOZYMA AL PERXIDO DE

HIDRGENO
Las levaduras constituyen un grupo heterogneo de hongos que tiene la capacidad de
sobrevivir en prcticamente todos los ambientes terrestres, an en aquellos que
presentan condiciones extremas. Para ello, cuentan con distintas estrategias entre las que
destacan la capacidad de sintetizar metabolitos secundarios. Phaffia rhodozyma es una
levadura pigmentada de inters industrial que tiene la capacidad de sintetizar compuestos
de alto valor biotecnolgico como son los pigmentos carotenoides y la micosporinaglutaminol-glucsido. Ambos metabolitos ejercen proteccin contra la radiacin UV y
actividad antioxidante (in vitro) contra las especies reactivas de oxgeno (ROS). Los ROS
son un grupo de molculas derivadas del oxgeno molecular que se caracterizan por su
alta reactividad qumica. El objetivo de este trabajo fue determinar si la acumulacin de
micosporina-glutaminol-glucsido y pigmentos carotenoides aumentan la supervivencia de
Phaffia rhodozyma al estrs oxidativo generado por perxido de hidrgeno (H2O2).
Se utilizaron 6 cepas de la especie Phaffia rhodozyma: 2 cepas pertenecientes a
colecciones internacionales, 1 cepa mutante hiperproductora de ambos metabolitos, y 3
cepas mutantes de delecin para la produccin de carotenos y/o micosporinas. Se
tomaron alcuotas de los cultivos en medio lquido y se las expuso durante 60 minutos a
distintas concentraciones de H2O2 (diluciones a partir de un stock concentrado). Se
tomaron muestras de cada tratamiento y se estim la supervivencia por el mtodo de
unidades formadoras de colonias (UFC). A su vez, se evalu el efecto del tiempo de
exposicin a una concentracin de 10 mM de H2O2. En este caso los tubos con H2O2
fueron sembrados cada 30 minutos por un perodo total de 270 minutos y la supervivencia
se estim por UFC.
Los resultados obtenidos permitieron determinar diferencias significativas en la
supervivencia de las distintas cepas expuestas a 120 minutos de 10 mM H2O2. La cepa
mutante hiperproductora de carotenos y micosporinas present los valores ms altos de
supervivencia (41,04% H2O2 a los 120 minutos), seguida de las cepas de coleccin (5,3%
y 0,22%). La cepa albina y la cepa pigmentada deficiente para la produccin de
micosporina, no presentaron diferencias significativas en sus valores de supervivencia, y
no se registraron UFC a partir de los 90 minutos de exposicin a H2O2.
Los resultados obtenidos hasta el momento permiten demostrar que tanto los pigmentos
carotenoides como la micosporina-glutaminol-glucsido protegen a Phaffia rhodozyma
contra
el
estrs
oxidativo
generado
por
el
perxido
de
hidrogeno.