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ENTOMOLOGIA FORENSE

Carlos Augusto Chamoun do Carmo


2 de setembro de 2014

ENTOMOLOGIA FORENSE
CONCEITO BSICO

o estudo que relaciona o conhecimento sobre


insetos a locais de crimes ou qualquer litgio
judicial, ajudando a transformar vestgios brutos
em evidncias, materializando provas.

POR QUE USAR OS INSETOS???

The insects will tell you everything,


people lie, but insects don't lie.

Murray Marks ---forensic anthropologist,


University of Tennessee

Nmero total de espcies animais

Insects
other
arthropods
Other
animals

ENTOMOLOGIA FORENSE
HISTRICO
Sung Tz.u (1235, China)

ENTOMOLOGIA FORENSE
HISTRICO
- Jean Bergeret (1855): primeiro IPM

- La Faune des Cadavres (1894) Jean Pierre Mgnin (1828-1905)


Dividiu os insetos em oito legies distintas

ENTOMOLOGIA FORENSE
HISTRICO
NO BRASIL

- Roquete-Pinto (1908)
- Oscar Freire (1914 1923)
- A Entomologia Forense caiu no esquecimento
- Monteiro-Filho & Penereiro 1987: ressurgimento

Estudo da decomposio e sucesso sobre uma carcaa animal


numa rea do estado de So Paulo, Brasil

ENTOMOLOGIA FORENSE
HISTRICO
......... NO BRASIL A PARTIR DE 1987

- Consolidao de pesquisa em algumas instituies


acadmicas
- Unicamp e Unesp - SP
- ICCE e Fiocruz - RJ
- UFPR; UNB; Polcia Tcnica da BA; UFPE e INPA

ENTOMOLOGIA FORENSE
HISTRICO
......... NO BRASIL A PARTIR DE 1987
- Grupos mais recentes: MG, AP e GO
- Em breve no ES
OBS: Ainda existe grande distncia entre a Percia Oficial e a
rea acadmica no Brasil.

ENTOMOLOGIA FORENSE
- Diversos centros renomados de investigao, como
o FBI (Federal Bureau Investigation) dos EUA.

Prdio do FBI.

ENTOMOLOGIA FORENSE
- CSI: Incio no ano 2000, nos EUA, e em 2001 no BR.

SUCESSO DE AUDINCIA L E AQUI


VANTAGEM OU DESVANTAGEM????
BOM OU RUIM PARA A PERCIA???

ENTOMOLOGIA FORENSE
- Podemos dividir em:

Entomologia Urbana

Produtos Estocados

Mdico-Legal / Criminal

ENTOMOLOGIA FORENSE
- URBANA
Cupim de madeira

ENTOMOLOGIA FORENSE
- URBANA

Cupim de parede

ENTOMOLOGIA FORENSE
- PRODUTOS ESTOCADOS

Sitophilus zeamais
(Besouro do caruncho)

ENTOMOLOGIA FORENSE
- PRODUTOS ESTOCADOS

ENTOMOLOGIA FORENSE
- PRODUTOS ESTOCADOS

ENTOMOLOGIA FORENSE
- MDICO-LEGAL / CRIMINAL

GRANDE INTERESSE GERAL


GRANDE REPERCUSSO PBLICA
GRANDE APELO SOCIAL
A MORTE CHAMA A ATENO DE TODOS

SEQUESTRO

ESTUPRO

HOMICDIO

MAUS TRATOS
QUEM A VTIMA?

QUEM O AUTOR?
QUANDO FOI A MORTE?

ENTOMOLOGIA FORENSE
- MDICO-LEGAL / CRIMINAL

O Brasil tem um dos


maiores ndices de
homicdio do planeta

Taxa de homicdios no Brasil entre1998 e 2012

Permanecemos em 2o lugar

FONTE: Mapa da Violncia 2014

MAUS TRATOS

Miase em idosa

- Escabiose;
- Pediculose;
- Miase
- Larvas e pupas nas fezes

Crianas negligenciadas

Idosos negligenciados

Como se deu a morte

Onde a morte ocorreu


Cidade

Campo

Mesembrinella bellardiana

- Quando a morte ocorreu (IPM)


H quanto tempo o indivduo um cadver???

.... NA MEDICINA LEGAL, TEMOS:

Tanatologia Forense
Conceito - A Tanatologia mdico-legal ou forense
o ramo da medicina legal que estuda o morto e
a morte, assim como os fenmenos dela
decorrentes.

Rigidez cadavrica
-Msculos mandibulares

Instalao

-Msculos do pescoo

- Msculos do trax
- Membros superiores
- Msculos do abdome
- Membros inferiores

Livores cadavricos e hipstases

Putrefao - Fase da colorao

Putrefao - Fase gasosa


(Enfizematosa)

Putrefao - Fase gasosa


(Enfizematosa)

Circulao ps-morte

Putrefao - Fase gasosa


(Enfizematosa)

Circulao ps-morte

Putrefao
Fase coliquativa

Putrefao
Fase de esqueletizao

.... GRANDE PROBLEMA na Medicina Legal

VARIAO ENORME DO INTERVALO DE


CADA ESTGIO
Diversos fatores influenciam:
- Local, clima, vegetao e umidade;
- Idade e tamanho da vtima;
- Proporo corporal;
- Hbitos da vtima;

Quanto maior o tempo de morte, menor a


fidelidade do resultado.

Vantagens do IPM com a Entomologia Forense

VARIAO MUITO MENOR

Quanto maior o tempo de morte, maior a


fidelidade do resultado.

Classificao da fauna associada a Cadveres


Necrfagos: Dpteros Muscides (Moscas) e Colepteros (Besouros);

Onvoros: Himenpteros (Formigas e Vespas) e alguns Colepteros ;

Parasitas e Predadores: Himenpteros, Colepteros, Dpteros


Muscides e Dermpteros (Tesourinha);

Acidentais: Aracndeos, Quilpodes, entre outros .

Holometabolia: metamorfose completa


(mais de 80% das espcies)

Ovo Larva Pupa - Adulto


Ex: Lepidoptera (mariposas); Coleoptera (besouros)
Diptera (moscas); Hymenoptera (vespas)

Principal entomofauna cadavrica


- Principais ordens de interesse forense

2 ORDENS

Diptera (moscas)

Coleoptera (besouros)

Famlias principais de Diptera


Caliphoridae

Sarcophagidae

Muscidae

Ordem Diptera
Famlia Caliphoridae (a mais importante)
Chrysomya megacephala

Chrysomya albiceps

Chrysomya putoria

Mesembrinella bellardiana
Hemilucilia segmentaria

Sarconesia chlorogaster

Ordem Diptera
Famlia Sarcophagidae

Ordem Diptera
Famlia Sarcophagidae
- Segunda famlia de maior importncia forense.
Ravinia sp.
Sarcophaga sp.

Oxysarcodexia sp.

Peckia sp.

Ordem Diptera
Famlia Muscidae
Graphomya sp
Musca domestica

Atherigona orientalis

Synthesiomya nudiseta
Ophyra aenensces

Morellia sp.

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO


MUSEU NACIONAL
Pesquisa de doutorado (2010-2014)

Recuperao e Identificao de DNA humano Y-STR, in vitro e


in situ, a partir de imaturos das principais espcies de moscas
encontradas em cadveres no Brasil e no sul dos EUA
Carlos Augusto Chamoun do Carmo
Mrcia Souto Couri
Janyra Oliveira Costa

INTRODUO
Entomologia Forense
Aplicao de conhecimentos sobre insetos em casos judiciais
Gentica Forense
Estudo do DNA e tcnicas moleculares aplicados a anlises
de vestgios biolgicos relacionados rea judicial

Entomogentica Forense

RELEVNCIA DO ESTUDO
- 1 em 14 mulheres estuprada no mundo (Abrahams et al. 2014).
- Anurio de Segurana Pblica: em 2011 foram 43.869 mulheres
estupradas e em 2012 51.121 estupros.

- RJ, 2012: 6.029 notificaes, ou seja, 36,9 por 100 mil habitantes
- SSP de SP: 1 estupro a cada 40 minutos.
- IPEA: entre 2009 e 2011 quase 17 mil feminicdios no Brasil, ou
seja, 5.664 por ano (um em cada 90 minutos) .
- Muitas vtimas de estupro so assassinadas e encontradas dias
depois, j em decomposio
- Vtimas em decomposio: quase no se encontram provas
- Muitos suspeitos inocentes (grande exposio social)

OBJETIVOS
- Contribuir com a Percia Oficial do Brasil para a
materializao de provas contra autores de crimes sexuais

- Contribuir para a formao de um Procedimento


Operacional Padro (POP) nas polcias cientficas do Brasil
e de outros pases.

- Aproximar cada vez mais as reas pericial e acadmica

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA

2011 - EXPERIMENTO IN VITRO


NO BRASIL

ETAPA MOLECULAR
ETAPA ENTOMOLGICA

2012 - EXPERIMENTO IN SITU


NO BRASIL

ETAPA MOLECULAR
ETAPA ENTOMOLGICA

2013/14 - EXPERIMENTO IN VITRO


NOS EUA

ETAPA MOLECULAR

MATERIAL E MTODOS
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL
ETAPA ENTOMOLGICA
- Laboratrio de Diptera Museu Nacional/UFRJ (Dra. Mrcia Couri)
- Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE PC/RJ (Dra. Janyra)

ETAPA MOLECULAR
- Laboratrio de DNA do IPPGF PC/RJ (Dr. Rodrigo Grazinoli)

MATERIAL E MTODOS
EXPERIMENTO IN SITU NO BRASIL
ETAPA ENTOMOLGICA
- Laboratrio de Diptera Museu Nacional/UFRJ (Dra. Mrcia Couri)

-Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE PC/RJ (Dra. Janyra)


- rea de mata do Batalho CFA PM/ES

ETAPA MOLECULAR
- Laboratrio de DNA do IPPGF PC/RJ (Dr. Rodrigo Grazinoli)

MATERIAL E MTODOS
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA
ETAPA ENTOMOLGICA
- Laboratory of Forensic Entomology, Department of Biological

Science, Florida International University - FIU (Dr. Jeffrey Wells)


ETAPA MOLECULAR
- Crime Laboratory / CSI of Miami Dade Police (Dr. Jeffrey Johnson)

MATERIAL E MTODOS
DIPTERA UTILIZADO NAS ETAPAS ENTOMOLGICAS NO BRASIL
- Adultos e imaturos de Chrysomya albiceps

b
Larva (a) e adulto (b) de Chrysomya albiceps.

MATERIAL E MTODOS
DIPTERA UTILIZADO NAS ETAPAS ENTOMOLGICAS NO BRASIL
- Adultos e imaturos de Chrysomya albiceps

Predominncia

Voracidade

Fcil diferenciao

MATERIAL E MTODOS
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE, da Polcia Civil - RJ
- 600 g de carne moda + 3,0 mL de smen
- Estmulo oviposio em carne moda: potes protegidos da luz
- Coletas de imaturos a cada 24h de decomposio

Potes de plstico, com carne (e smen)


para oviposio das moscas

Potes de plstico no interior da gaiola

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE, da Polcia Civil - RJ
- Criao de adultos com gua ad libitum e mel (50%).

Gaiola para criao de moscas.

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE, da Polcia Civil - RJ
- Pote aps 192h (8 dias) de decomposio

Potes de plstico com larvas e pupas

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE, da Polcia Civil - RJ
- Coleta das larvas e pupas a cada 24 horas (a partir do 2 dia)

Frascos com lcool 70%, para armazenamento das larvas e pupas coletadas.

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE, da Polcia Civil - RJ
- Dissecao dos imaturos

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE, da Polcia Civil - RJ
- Material do trato digestrio dos imaturos

Frascos de Eppendorf com o trato gastrintestinal das larvas, em lcool 70%

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

TRS SEQUNCIAS FUNDAMENTAIS


1 Extrao do DNA

2 Amplificao do DNA

3 Eletroforese capilar

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

1 Extrao do DNA

Extrao de DNA pela tcnica de fenol-clorofrmio

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

1 Extrao do DNA
- Tcnica de fenol-clorofrmio

DNA

Eppendorf com partio do DNA na fase aquosa (superior)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ
APS A EXTRAO, FOI FEITA A QUANTIFICAO DE DNA TOTAL

Diluies para valores prximos de 1,0 ng/L

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

2 - Amplificao do DNA por PCR


1) DNA alvo (molde)
2) Primers (oligonucleotdeos)
3) dNTPs
4) DNA Polymerase termoestvel
5) Mg++ ions

6) Soluo tampo

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

2 - Amplificao do DNA por PCR


1. Adio de reagentes
DNA
Taq polimerase
Primers
Tampo
gua

dATP
dCTP
dGTP
dTTP
(nucleotideos)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

2 - Amplificao do DNA por PCR


1. Adio de reagentes
DNA
Taq polimerase
Primers
Tampo
gua

dATP
dCTP
dGTP
dTTP
(nucleotideos)

94C
DENATURAO
2. Alternncia de temperaturas
(Termociclador)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

2 - Amplificao do DNA por PCR


1. Adio de reagentes
DNA
Taq polimerase
Primers
Tampo
gua

dATP
dCTP
dGTP
dTTP
(nucleotideos)

94C

57C

DENATURAO ANELAMENTO
2. Alternncia de temperaturas
(Termociclador)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

2 - Amplificao do DNA por PCR


1. Adio de reagentes
DNA
Taq polimerase
Primers
Tampo
gua

dATP
dCTP
dGTP
dTTP
(nucleotideos)

94C

57C

72C

DESNATURAO ANELAMENTO EXTENSO


2. Alternncia de temperaturas
(Termociclador)
25-40 (35) CICLOS
http://www.roche.pt/portugal/index.cfm/produtos/equipamentos-de-diagnostico/products/molecular-diag/intro-pcr/

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

2 - Amplificao do DNA por PCR

Termociclador

Programa especfico Yfiler

2 - Amplificao do DNA por PCR

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

2 - Amplificao do DNA por PCR

Esquema mostrando amplificao do DNA

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

3 - Eletroforese capilar para anlise Y-STR

Analisador gentico ABI 3100 Avant

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF), da Polcia Civil- RJ

3 - Eletroforese capilar para anlise Y-STR

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NO BRASIL
3 - Eletroforese capilar para anlise Y-STR

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL
Nmero de imaturos dissecados
Tempo de Decomposio

TOTAL

Nmero de imaturos

48 horas (2 dia)

15 larvas e 00 pupas

72 horas (3 dia)

14 larvas e 00 pupas

96 horas (4 dia)

14 larvas e 00 pupas

120 horas (5 dia)

15 larvas e 00 pupas

144 horas (6 dia)

13 larvas e 00 pupas

168 horas (7 dia)

08 larvas e 12 pupas

192 horas (8 dia)

02 larvas e 13 pupas

8 dias

81 larvas e 15 pupas = 96

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL
Eletroferograma Y-STR/48h (2 DIA)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL
Eletroferograma Y-STR/72h (3 DIA)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL
Eletroferograma Y-STR/120h (5 DIA)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL
Eletroferograma Y-STR/144h (6 DIA)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL
Eletroferograma Y-STR/192h (8 DIA)

Alelos das Amostras

Locais

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NO BRASIL

Genticos 48h 72h 120h 144h 192h


DYS456

# 15 regies amplificadas em 16.

DYS389 I

16
14

DYS390

# Melhores resultados: amostras


de maior decomposio.

15

Questionado

Referncia

16

16

16

16

14

14

14

14

14

23

23

23

23

30

30

15

15

30

15

Hapltipo de

16

DYS389 II

DYS458

Hapltipo

15

15

16

DYS19

# Locais amplificados com total


compatibilidade allica com a
amostra de referncia
# No houve perfil de mistura

# Tcnica tem grande potencial


para aplicabilidade pericial

15

15

15

15

14

14

14

14

14

10

10

10

10

10

12

12

12

22

22

DYS385
DYS393

14

DYS391

10

14

DYS439
DYS635

22

22
12

12

12

12

11

11

11

11

11

15

15

15

15

15

15

DYS438

DYS448

20

20

20

20

DYS392
GATA H4
DYS437

15

20

MATERIAL E MTODOS
EXPERIMENTO IN SITU NO BRASIL

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Batalho CFA da PM-ES

Modelo animal: porca da espcie Sus scrofa

3 ou 4 disparos de arma de fogo no


animal, a curta distncia

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Batalho CFA da PM-ES

Seringa com smen

Dpteros pousando na carcaa


segundos aps a morte
Inoculao de 3,0 mL de smen na regio
anal e vaginal da porca (com 15kg)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Batalho CFA da PM-ES

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Batalho CFA da PM-ES

Jaula de metal, forrada com tela de pinteiro

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Batalho CFA da PM-ES
- Coleta de imaturos a cada 24h, at 14 dias de decomposio

Amostra 48h (2 dia de decomposio)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Batalho CFA da PM-ES

Amostra 288h (12 dia de decomposio)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Batalho CFA da PM-ES

Frascos com lcool 70%, para armazenamento das larvas e pupas coletadas.

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Batalho CFA da PM-ES

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE - RJ

Dissecao do imaturo

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN SITU NO BRASIL
Laboratrio de Entomologia Forense do ICCE - RJ

- Material do trato digestrio dos imaturos

TAMPO DE EXTRAO

Frascos de Eppendorf com o trato gastrintestinal das larvas

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN SITU NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF) - RJ

TRS SEQUNCIAS FUNDAMENTAIS


1 Extrao do DNA

2 Amplificao do DNA

3 Eletroforese capilar

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN SITU NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF) - RJ

- Alm da extrao por fenol-clorofrmio, tambm foi utilizada...

DNA

Eppendorf com partio do DNA na fase aquosa (superior)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN SITU NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF) - RJ

Resina magntica (Kit IQ)

Ultrafiltrao em Microcon

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN SITU NO BRASIL
Laboratrio de Gentica Forense (IPPGF) - RJ

APS A EXTRAO, FOI FEITA A QUANTIFICAO DO DNA

Diluies para valores prximos de 1,0 ng/L

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN SITU NO BRASIL

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN SITU NO BRASIL
Tempo de Decomposio

TOTAL

Nmero de imaturos

96 horas (4 dia)

51 larvas e 00 pupas

120 horas (5 dia)

53 larvas e 00 pupas

144 horas (6 dia)

76 larvas e 00 pupas

168 horas (7 dia)

28 larvas e 00 pupas

192 horas (8 dia)

32 larvas e 00 pupas

216 horas (9 dia)

48 larvas e 01 pupa

240 horas (10 dia)

11 larvas e 28 pupas

264 horas (11 dia)

00 larvas e 18 pupas

288 horas (12 dia)

00 lavras e 23 pupas

312 horas (13 dia)

00 larvas e 57 pupas

336 horas (14 dia)

00 larvas e 20 pupas

14 dias

289 larvas e 157 pupas =

446

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN SITU NO BRASIL
Eletroferograma Y-STR / 144h (6 dia)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN SITU NO BRASIL
Eletroferograma Y-STR / 288h (12 dia)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN SITU NO BRASIL
Eletroferograma Y-STR / 336h (14 dia)

Horrios e Alelos das Amostras

Locais

Genticos 144h 168h 192h 216h 240h 288h 312h 336h


DYS456

16

16

16

16
14

DYS389 I

Hapltipo
Questionado

Hapltipo de
Referncia

16

16

14

14
23

DYS390

30

DYS389 II
DYS458

15

15

15

30

30

15

15
16

DYS19

15

DYS385

15

15

DYS393

14

DYS391

10
12

DYS439
DYS635
DYS392

22
12

12

12

12

22

22

12

12

GATA H4

11

DYS437

15

DYS438

DYS448

20

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN SITU NO BRASIL
- Amplificao de 8 regies de interesse, na unio dos horrios
- Locais allicos amplificados compatveis com a amostra referncia

- No houve perfil de mistura


- CODIS tem exigncia mnima de 7 locais amplificados para Y-STR
- Dificuldades analticas bem maiores do que nos testes in vitro
- Necessidade de mais ajustes dos protocolos para uso in situ
- Tcnica tem grande potencial para aplicabilidade pericial

MATERIAL E MTODOS
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA

UNITED STATE OF AMERICA (USA) 2013 / 2014


- Florida International University (FIU)

Dr. Jeffrey Wels

UNITED STATE OF AMERICA (USA) 2013 / 2014


- Miami Dade Police: Crime Lab / CSI MIAMI

Dr. Jeffrey Johnson

113

MATERIAL E MTODOS
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA
- Espcie predominante em cadveres na regio: Chrysomya megacephala

a
Larva (a) e adulto (b) de C. megacephala

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NOS EUA
Laboratory of Forensic Entomology, Florida International University - FIU
- Estmulo oviposio em frascos especficos
- 600 g de carne moda + 3,0 mL de smen
- Coletas de imaturos a cada 24h de decomposio, por 14 dias.

Potes especficos para oviposio

Potes de plstico, com carne (e smen)


para onde os ovos foram transferidos

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NOS EUA
Laboratory of Forensic Entomology, Florida International University - FIU
- Uso de gaiolas entomolgicas

Gaiola entomolgica metlica, usada no laboratrio americano

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NOS EUA
Laboratory of Forensic Entomology, Florida International University - FIU
- Armazenamento dos imaturos de C. megacephala.

Larvas no tubos Falcon com


lcool 70%
Tubos Falcon com lcool 70%

MATERIAL E MTODOS
ETAPA ENTOMOLGICA IN VITRO NOS EUA
Laboratory of Forensic Entomology, Florida International University - FIU
- Retirada visceral dos imaturos de C. megacephala.

Dissecao ventral postero-anterior de


C. megacephala

Transferncia das vsceras para frascos


Eppendorf com tampo de extrao

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NOS EUA
Crime Laboratory / CSI of Miami Dade Police

1 Extrao do DNA
2 Amplificao do DNA
3 Eletroforese capilar

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NOS EUA
Crime Laboratory / CSI of Miami Dade Police

1 Extrao do DNA
- Extrao baseada em partculas magnticas
Large Volum Protocol

Tubo especfico
20 l de proteinase K, mantida
em temperatura ambiente
Equipamento EZ1 Advanced XL, da Qiagen

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NOS EUA
Crime Laboratory / CSI of Miami Dade Police

Quantificao especfica DNA Y humano

Equipamento 7500 Real Time PCR System (Life Technologies)

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NOS EUA
Crime Laboratory / CSI of Miami Dade Police

Concentrao de DNA

Concentrao de DNA membrana ultrafiltrante Microcon

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NOS EUA
Crime Laboratory / CSI of Miami Dade Police

2 Amplificao do DNA por PCR

Termociclador GeneAmp PCR System 9700

MATERIAL E MTODOS
ETAPA MOLECULAR IN VITRO NOS EUA
Crime Laboratory / CSI of Miami Dade Police

3- Eletroforese capilar

Aparelho ABI 3130, para eletroforese capilar no Crime Lab

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA

TOTAL

Tempo de Decomposio

Nmero de imaturos

72 horas (3 dia)

15 larvas e 00 pupas

96 horas (4 dia)

16 larvas e 00 pupas

120 horas (5 dia)

16 larvas e 00 pupas

144 horas (6 dia)

18 larvas e 00 pupas

168 horas (7 dia)

17 larvas e 03 pupas

192 horas (8 dia)

15 larvas e 04 pupas

216 horas (9 dia)

16 larvas e 04 pupa

240 horas (10 dia)

15 larvas e 05 pupas

264 horas (11 dia)

08 larvas e 07 pupas

288 horas (12 dia)

11 larvas e 06 pupas

312 horas (13 dia)

06 larvas e 09 pupas

336 horas (14 dia)

00 larvas e 15 pupas

14 dias

155 larvas e 53 pupas =

208

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA
Eletroferograma Y-STR/72h (3 DIA)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA
Eletroferograma Y-STR/120h (5 DIA)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA
Eletroferograma Y-STR/168h (7 DIA)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA
Eletroferograma Y-STR/216h (9 DIA)

RESULTADOS E DISCUSSO
EXPERIMENTO IN VITRO NOS EUA
# 16 regies amplificadas em 16

# Extrao eficiente
# Compatibilidade allica com a
amostra de referncia
# Sem perfil de mistura

# Locais com menor e maior


amplificao
# Tcnica pode ser usada em
pases diferentes

HORRIOS E ALELOS DAS AMOSTRAS


LOCAIS
GENTICOS

72h
120h
168h
(3 dia) (5 dia) (7 dia)

216h
(9 dia)

Hapltipo Hapltipo de
Querstionado Referncia

DYS456

16

16

16

16

16

DYS389 I

14

14

14

14

14

DYS390

23

23

23

23

23

DYS389 II

30

30

30

30

DYS458

15

15

15

15

15

DYS19

16

16

16

16

16

DYS385

15

15

15

15

15

DYS393

14

14

14

14

14

14

DYS391

10

10

10

10

10

10

DYS439

12

12

12

12

DYS635

22

22

22

22

DYS392

12

12

12

12

12

GATA H4

11

11

11

11

11

DYS437

15

15

15

15

15

DYS438

DYS448

20

20

20

20

20

15

22

15

CONCLUSES DA PESQUISA DO DOUTORADO


A recuperao e identificao de DNA Y-STR humano, a partir de
imaturos de Diptera plenamente possvel.
Houve sucesso nas amplificaes nos trs experimentos realizados
nesse estudo: in vitro e in situ no Brasil e in vitro nos EUA.
Os resultados dos testes no Brasil e nos EUA, reforam a grande
potencialidade dessa tcnica na aplicao criminal.
necessria a continuidade dos estudos para o aprimoramento
da tcnica.
A quantidade mnima e mxima de imaturos coletados deve ser
alvo de mais pesquisas, adequando-se prtica pericial.

PERICIA CRIMINAL = PROVAS MATERIAIS

Sem provas no h inocentes nem culpados

OBRIGADO A TODOS
biochamoun@gmail.com

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