DESARROLLO DE SUPLEMENTO PROBITICO PARA EL CULTIVO DE

TRUCHA

I.

ANTECEDENTES

El lago Titicaca, es uno de los recursos hdricos ms importantes para el desarrollo

de la pesquera en el Altiplano boliviano.
La actividad pesquera que se desarrolla en las reas circunlacustres e islas como
complemento a la actividad agropecuaria, contribuye en la solucin de problemas
socio-econmicos como el ingreso familiar, empleo y mejor alimentacin
(Bustamante, E., Trevio, Jl. 1976)
La acuicultura, no tiene una participacin importante en la economa de Bolivia,
por esto existen varios intentos para desarrollar el cultivo de trucha a nivel
comercial en la cuenca del Altiplano. En Bolivia la acuicultura es relativamente
nueva, encontrndose actualmente en plena etapa de desarrollo y organizacin.
El Gobierno Municipal del Departamento de La Paz apoya al cultivo,
procesamiento y comercializacin de la carne de trucha, actualmente Per y
Bolivia inauguraron una nueva planta truchcola de reproduccin de alevinos en el
lago Titicaca este apoyo por parte del Gobierno incrementar la produccin de la
trucha en nuestro pas (www.fmbolivia.tv).
Un problema en el desarrollo de la acuicultura en el Lago Titicaca es la gran
contaminacin que existe en este. Un foco de contaminacin microbiana puede
provocar un desequilibrio entre la proporcin de bacterias benficas y nocivas
dentro del intestino de los organismos acuticos en cultivo, lo que conlleva al
desarrollo de enfermedades infecciosas, y por consiguiente un perjuicio en la
produccin.
Los organismos acuticos como los peces, moluscos y crustceos son
susceptibles a una amplia variedad de patgenos bacterianos, dentro de los
cuales estn los gneros Aeromonas, Vibrio y Pseudomonas, que son
componentes de la flora normal del agua que les rodea y se muestran oportunistas
como respuesta a situaciones de estrs, a un fallo en el funcionamiento fisiolgico
de los organismos acuticos o a una mala calidad del agua. (Balczar, Jl., et al.,
2006; Lara-Flores, M., et al., 2010).
Por lo tanto, las enfermedades constituyen un factor limitante en el desarrollo de la
acuicultura en el mundo, al ocasionar grandes prdidas en la produccin
(Nikoskelainen et al., 2003; Avella et al., 2010).

Probiticos en acuicultura
El trmino probitico, naci a mediados del siglo pasado a partir de la
observacin de la influencia positiva de determinados microorganismos en la flora
intestinal. Este trmino fue empleado por primera vez por Lilly y Stillwell en 1965,
quienes describen a los probiticos como sustancias secretadas por un
microorganismo, que estimulan el crecimiento de otro. Actualmente los probiticos
son definidos por la FAO (2002), como microorganismos vivos que administrados
en cantidades adecuadas ejercen un efecto beneficioso sobre el husped
El trmino probitico en animales, se podra definir segn Fuller como un
suplemento alimentario microbiolgico vivo con efectos beneficiosos para el
hospedero animal.
Entre los probiticos ms utilizados se encuentran las bacterias lcticas,
bifidobacterias y las levaduras. Algunos probiticos ya se comercializan bajo la
forma de preparados, que contienen uno o varios microorganismos vivos, los
cuales han permitido mejoras en el crecimiento, sobrevivencia y resistencia a
enfermedades de diferentes organismos acuticos
Se describen una serie de caractersticas que deben presentar los
microorganismos para ser considerarlos probiticos (Kailasaphaty y Chin, 2000),
como son:
- Ser habitantes normales del tracto gastrointestinal.
- No ser patgeno, ni toxico.
- Tener un tiempo corto de reproduccin.
- Ser estables al contacto con bilis, cido, enzimas y oxgeno.
- Tener habilidad para adherirse a la mucosa intestinal.
- Mostrar potencial de colonizacin en el tracto gastrointestinal.
- Producir sustancias antimicrobiana
Entre los microorganismos que han presentado propiedades probiticas en peces
se encuentran los gneros: Carnobacterium, Pediococcus, Lactococcus,
Lactobacillus, Bacillus y Aeromonas, entre otras. Algunos de los probiticos
comercializados en el mercado para uso en acuicultura son: Mycolactor Dry
Probiotic, el cual corresponde a una mezcla de microorganismos
(Saccharomyces cervisiae, Enterococcus faecium, Lactobacillius acidophilus, L.
casei, L. plantarum y L. brevis); INVE Sanolife MIC, que incluye una mezcla de
cepas de Bacillus. Biogen, mezcla Bacillus licheniformis y Bacillus subtilis.
BACTOCELL (Pediococcus acidilactici), el primer probitico aprobado por la
Unin Europea para su uso en acuicultura, como aditivo en la alimentacin de
salmnidos y camarones.

La microbiota intestinal de los organismos acuticos

El trmino microflora o microbiota intestinal hace referencia al ecosistema
microbiano que coloniza el tracto digestivo y constituye la principal superficie de
intercambio entre el medio externo y el medio interno de cualquier organismo.
Como resultado de la actividad metablica del intestino, el individuo obtiene tres
importantes beneficios: nutricin, por la digestin y absorcin de nutrientes;
defensa, por reconocimiento de microorganismos patgenos y rechazo de posibles
agresiones desde el medio exterior y funciones trficas que permiten la
diferenciacin del epitelio intestinal y modulacin del sistema inmune. Estos
beneficios dependen no slo de las estructuras propias del tubo digestivo (barrera
mucosa, glndulas secretoras, sistema inmune de las mucosas), sino tambin de
la presencia y actividad de las comunidades microbianas que lo colonizan (ref).
En el caso de los organismos acuticos, la flora intestinal es un ecosistema muy
complejo y en constante cambio a lo largo del ciclo de vida del organismo, que se
origina en algunos casos desde la eclosin, cuando las especies empiezan a filtrar
diversas partculas que se van adhiriendo al organismo y forman una pelcula
protectora aun cuando su tracto digestivo no se ha desarrollado. Posteriormente
con la diferenciacin del tubo digestivo, la actividad enzimtica y la alimentacin
exgena se da la colonizacin de diferentes comunidades microbianas, que
continuamente se ven afectadas por los cambios ambientales como la
temperatura, salinidad, contaminacin o por el uso de qumicos y antibiticos que
pueden eliminar la microbiota ya establecida, dejando libre la entrada para
cualquier microorganismo incluso aquellos potencialmente patgenos
Mecanismos de Accin de los probiticos
Dentro de los mecanismos de accin que se le han atribuido a las bacterias
probiticas, est su accin inhibitoria frente a bacterias patgenas y la modulacin
del sistema inmune del hospedero, estos aspectos son descritos a continuacin:
Inhibicin crecimiento de patgenos (in vitro)
La colonizacin del tracto digestivo por parte de las bacterias cido lcticas,
podra inhibir la multiplicacin de patgenos gracias a la produccin de
compuestos como cidos orgnicos, bacteriocinas o H2O2 (Ringo, E. y
Gatesoupe, F-P. 1998). Para comprobar dicho efecto, Villamil llev a cabo un
ensayo in vitro con 6 diferentes bacterias lcticas, Lactobacillus casei,
Lactobacillus brevis, Lactobacillus helveticus, Lactococcus lactis spp. lactis,
Leuconostoc mesenteroides spp. mesenteroides y Pediococcus acidilactici, de
las cuales obtuvo el sobrenadante de cultivo neutralizado y los contrast con
cido lctico. Observ que algunos stos sobrenadantes inhiban el crecimiento
del patgeno Vibrio alginolyticus, incluso ms que el cido lctico por s solo, lo
que sugerira un efecto sinrgico de los productos extracelulares de las bacterias
utilizada (Villamil, L., et al., 2003)

 Competencia por sitios de adhesin

La adhesin de las cepas probiticas al mucus intestinal sera importante para
asegurar la permanencia en el tracto intestinal del husped. Esta adhesin
podra ser til para entregar las sustancias antimicrobianas y tambin para
competir con los dems microorganismos. Se han presentado variados
ensayos que estudian la competencia existente entre probiticos y patgenos
por la adhesin en el tracto gastrointestinal de los seres vivos; Vine aisl de
pez payaso (Amphiprion percula) cinco candidatos a probiticos, en los cuales
evalu in vitro su capacidad para adherirse a mucus intestinal, junto a los
patgenos Aeromonas hydrophila y Vibrio alginolyticus. La adicin de los
probiticos despus de los patgenos, redujo la adhesin de estos ltimos,
sugiriendo que el probitico producira un desplazamiento del patgeno (Vine
N.G., 2004).
Del mismo modo, Balczar comprob que al exponer mucus intestinal de
truchas a bacterias cido lcticas (Lactococcus lactis subsp. lactis,
Lactococcus lactis subsp. cremoris y Lactobacillus curvatus), stas inhiban la
posterior adhesin de las bacterias patgenas Aeromonas salmonicida subsp.
salmonicida, Carnobacterium pisccola, Lactococcus garvieae, Vagococcus
salmoninarum, Yersinia ruckeri, Flavobacterium psychrophilum, Vibrio
anguillarum y Renibacterium salmoninarum (Balczar, J.L., et al.,2007).
Modulacin sistema inmune
Existen algunos estudios que sealaran cierta modulacin en el sistema
inmune de los peces por parte de bacterias probiticas. Por ejemplo, en
dietas suministradas a tilapia por 32 das, suplementadas con Pediococcus
acidilactici (1x107 bac./g almto.), se pudo observar un incremento en los
niveles de 17 leucocitos sanguneos y en la actividad de la lisozima en el suero
despus de 14 das de dieta, adems de una disminucin en la mortalidad de
los peces (Ferguson, R., et al., 2010).
Kim y Austin (2006) determinaron un aumento en la respuesta inmune a nivel
celular y humoral en trucha arcoris al ser alimentados durante 3 semanas con
Carnobacterium
maltaromaticum
y
Carnobacterium
divergens.
C.
maltaromaticum habra provocado un incremento en la actividad fagoctica de
los macrfagos del rin ceflico, mientras que C. divergens provoc un
incremento en el estallido respiratorio y la actividad de lisozima en el suero.
Ambas cepas aumentaron la actividad de la lisozima en la mucosa intestinal.
Por su parte, Salinas el at., ao administraron cuatro diferentes dietas a dorada
durante 3 semanas; dieta control (no suplementada), dieta suplementada con
Lactobacillus delbrueckii, otra con Bacillus subtilis y otra con ambas bacterias.
Se encontr que en rin, la actividad fagoctica se increment luego de 2
semanas de alimentacin con las bacterias administradas individualmente.
Adems se observ un aumento en la actividad citotxica en rin despus de
3 semanas con la dieta suplementada con las dos bacterias. En otro estudio, se
observ el efecto de la ingesta de bacterias acido lcticas (BAL) sobre la
respuesta humoral de trucha caf. Se administr dietas con tres diferentes

bacterias durante 2 semanas (L. lactis, L. sakei y L. mesenteroides), y se

observ un incremento significativo de la actividad alternativa del complemento
al final de la segunda semana para los tres grupos suplementados. Tambin
hubo un aumento en la actividad de lisozima en el suero al final de la tercera
semana en los grupos con L. lactis y L. mesenteroides. Adems se observ un
incremento en los niveles de inmunoglobulinas del plasma en los grupos
suplementados con las BAL.
Proteccin frente a patgenos
Otro de los beneficios que se le atribuyen a los probiticos es la proteccin que
brindaran frente a patgenos. Esto se vera reflejado en el estudio de Capkin y
Altinok (2009), en el cual suministraron dietas con dos cepas probiticas
(Enterobacter cloacae y Bacillus mojavensis) a trucha arcoris durante 60 das.
Pudieron observar que la ingesta de bacterias probiticas se asociaba con la
proteccin frente a una infeccin por el patgeno Yersinia ruckeri, adicionado
en el agua el da 20 del ensayo. Se observ que los peces tratados con los
probiticos mostraron mortalidades menores al 1%, mientras en el grupo
control la mortalidad alcanz el 65% Vendrell (2008), trat a truchas arcoris
durante 1 mes con dietas suplementadas con bacterias probiticas. Utiliz
dietas con Leuconostoc mesenteroides o Lactobacillus plantarum y compar
con una dieta sin bacterias. Luego del tratamiento, realiz un desafo
infectando las truchas por cohabitacin con el patgeno Lactococcus garviae.
La mortalidad de los peces disminuy desde 78% para el grupo control, a 54 %
para el grupo tratado con L. mesenteroides, y 46% para el grupo tratado con L.
plantarum. Por otra parte, Brunt et al. (2007), suministraron a trucha arcoris
(Oncorhynchus mykiss) una dieta suplementada con probiticos; Aeromonas
sobria GC2 o Bacillus sp. JB-1, ms una dieta control. Las dietas con
probiticos causaron un efecto protector en el pez frente a la infeccin con los
patgenos Aeromonas salmonicida, Lactococcus garvieae, Streptococcus iniae,
Vibrio anguillarum, Vibrio ordalii y Yersinia ruckeri.
II.

JUSTIFICACION

En la actualidad la produccin acucola en la regin del Lago Titicaca dentro de

Bolivia est creciendo debido al emprendimiento de pobladores para la
produccin de trucha y su comercializacin, sin embargo, an se tiene escasa
informacin acerca de los requerimientos nutricionales y sanidad animal que se
emplean para su explotacin, motivo por el cual el incremento de tamao de la
trucha es lento, como consecuencia de esto implica un costo de inversin ms
alto, y la susceptibilidad a diversas enfermedades, que empeora mucho ms
con la contaminacin de las aguas del lago, razones que ocasionaran prdidas
econmicas para el pequeo y mediano productor, y ms grave una prdida
para la poblacin ya que se trata de un alimento altamente nutricional.
Por esta razn una alternativa de adicin nutricional y salud para la trucha es el
uso de suplemento probitico durante su cultivo, lo que favorecera el equilibrio
inmune gastrointestinal, contra los patgenos, dando como resultado, el

incremento de peso, tamao y mayor aprovechamiento del alimento consumido

y menor porcentaje de mortalidad por la presencia de patgenos.
El produccin de probioticos se realizar por mtodos biotecnolgicos, lo que
implica el empleo de biorreactores y diversas tcnicas que coadyuven al
desarrollo y produccin de probiticos. La mejor formulacin del suplemento
probioticos se escoger entre: extruido, suspendido, pelletizado. Este trabajo
de investigacin se llevar a cabo en el rea de Biotecnologa Industrial del
Instituto de Investigaciones Frmaco-Bioqumicas en las instalaciones de la
Facultad de Ciencias Farmacuticas y Bioqumicas

III.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
-

Desarrollar un suplemento probitico que se adecue a las condiciones

requeridas durante el cultivo de Trucha en la regin del Lago Titicaca.

OBJETIVOS ESPECFICOS
-

Realizar un estudio de cepas probiticas utilizadas en acuicultura de

trucha

Determinar la influencia del suplemento probitico en el cultivo de trucha

Considerar los beneficios /costos del desarrollo de suplemento probitico

en cultivo de trucha

IV.

HIPTESIS

La adicin de probiticos al alimento balanceado comercial para el cultivo de

truchas favorecer el equilibrio inmune gastrointestinal contra los patgenos,
mejorando la produccin de estos.
V.

PROTOCOLO

Produccin de probiticos
Recoleccin de la materia prima: grano de quinua de baja
calidad y suero de leche

Recoleccin

Cuantificacin

Separacin

Almacenamiento
-20 C

Anlisis composicional de la materia prima

El grano de quinua de baja calidad ser

caracterizado en cuanto su composicin

Determinacin del contenido de nitrgeno y

protenas totales de ambas materias

Determinacin del contenido de humedad,

slidos totales y slidos voltiles de la materia
prima

Pre tratamiento fsico y/o qumico de la

materia prima

Germinacin del grano de quinua

incrementando el contenido de glucosa
disponible para fermentacin e incremento
de biomasa probitica.
Produccin biotecnolgica de probiticos
adecuados para truchas

Se adquirirn el tipo especfico de bacterias

probiticas utilizadas en piscicultura, esto de
bancos de cepas catalogados

Optimizacin en la produccin de
probiticos

Optimizacin y establecimiento
de condiciones de cultivo,
estudiando diseos de reactores,
modos operacionales, efectos
fsicos y qumicos.

CRONOGRAMA

VI.

ACTIVIDAD

DURACIN

Recoleccin de la materia prima, grano de

quinua de baja calidad y suero de leche,
para la produccin de probiticos

Febrero/ 2015

Anlisis
prima

composicional

de

la

materia

Marzo/2015

Pre tratamiento fsico y/o qumico de la

materia prima

Abril/2015 a Mayo/2015

Produccin biotecnolgica de probiticos

adecuados para truchas

Junio/2015 a Septiembre /2015

Optimizacin
probiticos

Octubre/2015 a Noviembre/2015

VII.

en

la

produccin

de

MATERIALES

Para realizar el siguiente trabajo de investigacin dentro de laboratorio se

requerir lo siguiente:
-

Cmara de flujo laminar

pH metro

Autoclave

Microscopio

Mechero bunsen

Estufa bacteriolgica

Asas

Micropipetas

Medios de cultivo

Matraz Erlenmeyer

Vasos de precipitado

VIII.

METODOLOGIA

Para realizarse el anlisis composicional de la materia prima se

utilizar la metodologa basada en la estandarizacin del protocolo de
anlisis de biomasa de acuerdo a procedimientos internacionales de
laboratorio NREL, tambin se utilizar la metodologa de protocolos
estandarizados de Microkjehdahl, Lowry y Biuret, y la metodologa
proporcionada por APHA.

Para realizarse la
produccin biotecnolgica de probiticos
adecuados para truchas, la metodologa a seguir es el establecimiento
de reactores agitados en modo operacional Batch y condiciones
anaerobias.

PROCEDIMIENTO DE EVALUACION DE RESULTADOS

Se analizarn los resultados mediante el empleo de indicadores estadsticos como:
-

El porcentaje (%) el cual nos indica la proporcin porcentual de un total 100%.

La varianza (indicador de dispersin de datos)el cual nos mostrara el grado de
dispersin de nuestros datos, para obtener este indicador tambin se obtendr
la media aritmtica.
El coeficiente de varianza este nos indicara si se tiene una buena
representacin de nuestro conjunto de datos obtenidos.
Se realizaran comparaciones con patrones ya definidos.

IX.

BIBLIOGRAFA