"AO DE LA PROMOCIN DE LA INDUSTRIA RESPONSABLE Y DEL

COMPROMISO CLIMTICO"

CICLO: IV.
FACULTAD: CIENCIAS.
ESCUELA: BIOTECNOLOGA.
CURSO: BIOCATALISIS.
TEMA: ACTIVIDAD ENZIMATICA - AMILASA VEGETAL
FECHA: 05/01/15.
INTEGRANTES:

CACHAY SALINAS SAYURI.

CACERES VALLEJOS BENJAMIN.
CURA ROJO LUCIA.
DAVILA ESCUDERO YEIK.
MORALES VERGARAY MILAGROS.
PEA AYALA RENZO.
PUPPI CONTRERAS NORA.
SANTAMARIA CURIBANCO VANIA.
SARMIENTO PARIACHI KATHERINE.

NUEVO CHIMBOTE PER

2014
I.

INTRODUCCIN

En toda reaccin qumica se produce una transformacin de unas sustancias

iniciales, denominadas reactivos o sustratos (S), en unas sustancias finales
o productos (P). Esta transformacin no se verifica directamente, ya que es
necesario un paso intermedio en el cual el reactivo se active, de forma que
sus enlaces se debiliten y se favorezca su ruptura. Este paso intermedio
recibe el nombre de complejo activado y requiere un aporte de energa,
generalmente en forma de alor, que se conoce como energa de activacin.
Las enzimas pueden actuar de dos formas: unas, fijndose mediante
enlaces fuertes (covalentes) al sustrato, de modo que se debiliten sus
enlaces y que no haga falta tanta energa para romperlos; y otras, atrayendo
a las sustancias reaccionantes hacia su superficie de modo que aumente la
posibilidad de encuentro y que la reaccin se produzca ms fcilmente. Las
enzimas, una vez que han realizado la transformacin del sustrato o
sustratos en productos, se liberan rpidamente de ellos para permitir el
acceso a otros sustratos.
La clasificacin de los enzimas comerciales se puede hacer de diferentes
formas. Una de ellas sera considerar los enzimas y ver las funciones que
desempean en los diversos campos de aplicacin y otra, que es en la que
me voy a basar para la realizacin de este seminario, sera ir viendo las
aplicaciones y dentro de cada una, los enzimas que pueden intervenir.
Son las enzimas que permanecen asociadas con la celula y no son
normalmente excretadas al medio. En algunos casos, como en el caso de
lipasa e inver tasa, el que la enzima sea intracelular o extracelular depende
del microorganismo utilizado. Pocas enzimas intracelulares son producidas a
gran escala y las ventas de estas enzimas representan solo un pequeo
porcentaje del total de ventas. Sin embargo, la produccin de enzimas
intracelulares es de gran inters
por varias razones. Con los avances en las tcnicas de inmovilizacin, el uso
de enzimas y clulas inmovilizadas est en aumento. Por ejemplo, se han
establecido procesos comerciales para la produccin de jarabes de
fructosa usando glucosa iso-merasa.
Enzimas Extracelulares
Los microorganismos producen una amplia variedad de enzimas
potencialmente tiles, muchas de las cuales son excretadas al medio. La
mayora de las enzimas
extracelulares son producidas por organismos per tenecientes a dos
gneros: Bacillus y Aspergillus. y que en su mayora son del tipo hidroltico.
Estabilidad de las Enzimas
La frgil naturaleza proteica de las enzimas, que conlleva a una estabilidad
limitada de su estructura y funcionalidad, constituye un aspecto impor tante
en un contexto tecnolgico. Se considera que una enzima es apropiada para
una aplicacin comercial, si su estabilidad es suficiente para dicha
aplicacin.

II. MATERIALES Y METODOS:

MATERIALES:
- Buffer
- HCl 0.5%
- Almidon
- Lugol
- React. Biuret
- Placas Petri
- Horno
- Tubos de ensayo
- Pipetas.
METODOS:
a) Colocar quince semillas de tres das de germinacin en un
placa Petri, luego triturarlas, agregar 4 veces su volumen de
buffer + CaCl en un tubo de ensayo, reposar por tres horas,
luego filtrar y extraer el extracto crudo.
b) Agregar un ml de almidon en cuatro tubos de ensayo, luego
incubar por 5 minutos a 30, luego dejar el tubo 1 igual, al
tubo 2 agregar 0.2 ml de enzima (extracto crudo), 0.1 en el
tubo 3 y 0.05 en el tubo 4, mezclar e incubar los 4 tubos a 30
por 15 minutos.
c) Agregar 1.0 ml de H2O destilada al primer tubo. 0.8 al
segundo tubo, 0.9 al tercer tubo y 0.5 al cuarto tubo.
d) Luego incubar a 37 por 20 minutos.
Repetir el procedimiento y agregar finalmente 4 ml de biuret a
cada tubo. Finalmente enviar al espectrofotmetro las dos series
de tubos para q sea leda a 540 nm.
III. RESULTADOS:

Lugol
540n.m
1.602
0.254
0.931
0.543

1
2
3
4

620 n.m
1.382
0.644
0.558
0.303

540 nm

Chart Title
0.18
0.16
0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0.5

1.5

2.5

3.5

4.5

620 nm

Chart Title
0.18
0.16
0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0.5

1.5

1
2
3
4

2.5

Biuret
540 n.m
0.46
0.245
0.115
0.070

3.5

620 n.m
0.080
0.153
0.138
0.098

4.5

540 nm

Chart Title
0.18
0.16
0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0.5

620 nm

1.5

2.5

3.5

4.5

Chart Title
0.18
0.16
0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0.5

1.5

2.5

3.5

4.5

IV. DISCUSION:
Almonte (2010): El alfa-amilasa se encuentra ampliamente distribuida en el
reino vegetal, particularmente en las semillas con reservas de hidratos de
carbono como el trigo, la cebada, de donde ha sido posible aislarla en forma
pura. Su peso molecular es alrededor de 60.000, esta se secreta al
endospermo amilceo de las semillas de cereales por dos tejidos, el cotiledn y
la capa de aleurona, degradando las macromolculas de amilosa y amilo
pectina en pequeos fragmentos de 6 a 7 unidades de glucosa.
(Barbado, 2001) La amilosa se colorea de azul en presencia de yodo, debido a
la absorcin o fijacin del yodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo
cual solo ocurre en frio. Es conveniente aclarar que este proceso no es una
reaccin qumica, ya que no se producen sustancias nuevas, como reactivo
para identificar el almidn se usa una solucin denominad lugol.

Foster (1998): La amilasa es una de las enzimas ms estudiadas debido a su

rol de degradacin del almidn, ya que permite una germinacin de las
semillas, el cual es degradado por los enlaces 1-4 del interior (endoamilasa)en
diferentes dextrinas, que debido a su disminucin en tamao puede ser
hidrolizada por la B-amilasa, sin embargo la -amilasa es una enzima que se
encuentra regulada tanto por hormonas, o diferentes factores, tales como la
temperatura y el pH, adems posee un peso molecular de 50 Kda
aproximadamente .La germinacin se lleva con la hidratacin y posterior
liberacin de giberelinas, las cuales inducen la sntesis de las enzimas
hidrolticas, que hidrolizan el almidn que se encuentra el endosperma,
produciendo glucosa que es transportada por difusin, para generar energa.
Lopez (2006): La prueba del Lugol se realiza para identificar la presencia de
polisacridos, si despus de aadir los digeridos a los tubos de lugol se
observa que tiene un color azul, eso significa que hay presencia de almidn por
lo tanto la reaccin no tuvo lugar, por otro lado si la reaccin da un color
amarillo intenso, eso quiere decir que no hay presencia de almidn por lo tanto,
hay si tuvo lugar la actividad de la enzima.
Tinoco (2003): El almidn es un polisacrido constituido principalmente por
largas cadenas de glucosa, en su forma nativa esta constituido por -amilasa y
amilopectina. Es el principal polisacrido de reserva de origen vegetal, es ms
abundantemente en semillas de cereales y tubrculos. Se pueden dividir en
tres grupos: a-amilasas (E.C. 3.2.1.1), las cuales rompen al azar los enlaces en
el interior del sustrato (endoamiladas); b-Amilasas (E.C.3.2.1.2) las cuales
hidrolizan ordenadamente unidades de maltosa a partir de los extremos no
reductores del sustrato (exoamilasas) y glucoamilasas que liberan unidades de
glucosa a partir de los extremos no reductores del sustrato.
Las b-amilasas hidrolizan el almidn atacndolo nicamente por su extremo no
reductor y produce molculas de maltosa y dextrinas bsicamente; debido a
que no hay una inmediata destruccin de la estructura polimrica del almidn,
la b-amilasa reduce la viscosidad de las dispersiones de almidn en forma muy
lenta, a las a-amilasa se la designa como enzima licuante ya que al hidrolizar
los enlaces qumicos del almidn en una forma al azar, reduce rpidamente la
viscosidad de las dispersiones de este polmero, el producto de esta hidrlisis
son dextrinas, maltosa y glucosa, por lo que el poder reductor de las
dispersiones de almidn aumenta considerablemente.

V. CONCLUSIONES:
Logramos determinar la actividad enzimtica en las dos experiencias realizadas
con semillas germinadas de trigo y cebada, en los cuatro tubos pudimos notar
la formacin de anillos y tambin la formacin de precipitado en pequeas y
grandes cantidades.
Identificamos y obtuvimos de los ndices de absorbancia con la ayuda del
espectrofotmetro en el caso del trigo fueron de 0.872; 1.860 entre otros y en el

caso de la cebada fueron de 0.063; 1.587, estos datos nos indican un

comportamiento similar de la actividad enzimtica en ambas semillas.
Logramos determinar la actividad especfica del preparado enzimtico del trigo,
y esto lo pudimos notarlo por la formacin de anillos de color anaranjado
oscuro y de color azul fuerte que se present en el primer tubo. Aprendimos el
procedimiento que se debe utilizar para extraer la amilasa de vegetales, en
nuestro caso fue con las semillas de trigo y cebada, donde utilizamos las races
de las semillas adicionadas con reactivos que permitieron obtener el preparado
enzimtico para trabajar.

IX. BIBLIOGRAFIA:
Almonte.Carlos, Manual de Quimica Organica, Quinta Edicion, 2010.
Benech-Arnold, R. and Sanchez, Biologia
PrimeraEdicion, Editorial Bermejo . 2004.

de

las

Plantas,

Barabado.Oscar, Microbiologia Alimentaria, Tercera Edicion,2001.

Foster, N; Burchett, L and Paulsen, Bioqumica, Editorial Reverte,
Espana,G. 1998.
Tinoco, Juan. Produccin, Purificacin y Caracterizacin Bioqumica de
las Amilasas Extracelular e Intracelular de Streptococcus Bovis.
Universidad politcnica de Madrid, Espaa, Primera edicin, 2003