Dbora Santana

Erika Stefanny
Isabela Souza
Leilane Carvalho

TTULO: PREPARAO DE MEIO DE CULTURA

Objetivo: Reconhecer o benefcio do uso de EPP, EPI e assepsia na anlise
microbiana.

4. Introduo
a.

Descrever dois tipos de meios de cultura utilizados em microbiologia;

Os meios de cultura so preparaes qumicas, que possuem em sua formulao

nutrientes necessrios

para

que

os microrganismos possam

se

multiplicar

permitindo, entre outras funes, seu estudo e anlise. Para o cultivo de bactrias
podem ser utilizados meios lquidos, slidos ou semi-slidos.
Os dois tipos de meios de cultura utilizados em microbiologia so:

Crescimento em gar;

Crescimento em caldo.

O gar acrescentado aos meios para o crescimento, tornando-os slidos ou semislidos, e no tem valor como nutriente, pois, em geral, no utilizado pelas
bactrias. E o crescimento em caldo se d em um meio lquido.

b.

Descrever os cuidados que devem ser tomados no manuseio e

armazenamento dos meios de cultura;

necessrio que o meio de cultura a ser utilizado seja mantido desprovido de
qualquer organismo vivo contaminante. Para preveno de contaminaes durante a
manipulao dos meios recorre-se a tcnicas de assepsia. Alm da assepsia
importante deixar a tampa semiaberta no momento do aquecimento para sada de
ar, aps preparao o frasco deve ser tampado e o meio deve ser submetido
esterilizao, para eliminar qualquer organismo vivo contaminante, e ser mantido
sob refrigerao, at o momento de seu uso. No momento da utilizao do meio
imprescindvel que o manuseio seja feio em cmara de fluxo laminar esterilizada
para que no haja contaminao na inoculao.

c.

Descrever a importncia do uso do fluxo laminar, da autoclave e da

incubadora na preparao dos meios de cultura;

Cmara de fluxo laminar: EPP utilizado para proteger a amostra de contaminao
mantendo-a esterilizada;
Autoclave: Utilizada para esterilizao do meio de cultura;
Incubadora: Utilizada para manter o meio de cultura em condies ideais para o
crescimento dos microrganismos.

5. Materiais, reagentes e equipamentos.

Materiais

Frasco schott;

Chapa de aquecimento;

Balana;

Proveta;

Placas de petri;

Reagentes

Meio PCA(gar Plate Count);

gua destilada;

Equipamentos

Autoclave;

Cmara de fluxo laminar;

Contador de colnias;

6. Procedimentos

Parte I (1 aula)
- Realizou-se assepsia das mos com lcool 70%;
- Pesou-se 3,27g de PCA no frasco Schott;
- Adicionou-se 120 mL de gua destilada;

- Na chapa de aquecimento, fundiu-se o meio devagar at ficar translucido;

- Esterilizou-se em autoclave;

Parte II (2 aula)
- 3 membros da equipe realizaram a assepsia das mos com lcool 70% para fazer
os procedimentes, 1 membro manteve as mos sem assepsia para que fosse
realizado o procedimento de inoculao de uma das placas com mo sem lavar
(MSL);
- Refundiu-se o meio na chapa de aquecimento;
- Esterilizou-se a caneta com lcool 70% para nomear as placas de petri;
- Nomearam-se 6 placas de petri esterilizadas na cmara de fluxo laminar;
- Transferiu-se o contedo do frasco Schott para as placas;
- Esperou-se esfriar;
- Realizou-se a inoculao das placas sem EPI e com EPI; sem assepsia e com
assepsia.
- As placas de petri foram colocadas na incubadora 35C, por 48 horas;
- Armazenou-se na geladeira at contagem das colnias.

Parte III (3 aula)

- Retirou-se as placas da geladeira;
- Analisou-se a formao das bactrias nas placas;
- Realizou-se a contagem das colnias, com o auxilio do contador de colnias.

7. Resultados obtidos
Tabela 1 Quantidade de colnias que foram obtidas em aula prtica.
Mo lavada

5,7.10

Mo sem lavar

2,2.10

Com touca

0,9.10

Sem touca

1,9.10

Com mscara

0,3.10

Sem mscara

0,6.10

Observou-se que utilizando os EPIs e realizando a assepsia adequadamente

durante o manuseio da amostra, h menores fontes de erros e contaminao em
comparao a no utilizao EPI ou incorreta assepsia.

8. Fontes erros
Utilizao de EPI e assepsia, incorretos:
Aps a contagem das colnias obtidas observou-se que mesmo utilizando os EPIs e
realizando a assepsia h riscos de contaminao, principalmente se eles no
estiverem sendo utilizados de maneira correta. Comparando os dados obtidos entre
a mo lavada e a mo sem lavar, pode-se afirmar que a assepsia das mos lavadas
no foi adequada ou houve contaminao durante o tempo de secagem da mesma
pelo ar e/ou cabelo e/ou objetos contaminados. No h possibilidade de no haver
contaminao alguma na amostra, pois mesmo utilizando corretamente os EPIs e
correta assepsia sempre haver alguma contaminao, mas sua correta utilizao
previne maiores contaminaes.

Risco de formao de borres:

Durante o armazenamento em incubadora as placas de petri ficaram com a tampa
virada para baixo, para evitar que a gua evaporada no processo de incubao
retorna-se para o estado lquido caindo diretamente nas colnias formando borres,
ocasionando assim erros no resultado do ensaio.

Uso incorreto da cmara de fluxo laminar:

importante manusear a amostra dentro da cmara de fluxo laminar limpa e
esterilizada com raio UV, pois o manuseio fora da cmara ou dentro da cmara sem
esterilizao ocasionar a contaminao do meio.

Deixar tampa de frasco Schott aberta:

No momento de aquecimento do meio de cultura para fundio do mesmo dentro do
frasco Schott, importante deixar o frasco com a tampa semi rosqueada, para que...

9. Comentrios e discusso
Amostra mo sem lavar e mo lavada: Observou-se que houve uma diferena muito
grande entre os dois resultados obtidos...

10. Concluso

11. Auto Avaliao

Capacidades Sociais, organizativas e metodolgicas.
Nome do aluno

Trabalhar em equipe

Argumentar

TCP, tendo em vista a

tecnicamente

segurana, sade e meio

ambiente.

Dbora

10

Erika

10

Isabela

10

Leilane

10

12. Referncias

[1] RODOLPHO, Karen Baraco. Tcnicas Laboratoriais - Microbiologia. 2 edio.

So Paulo. SENAI, 2010.

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