FACULTAD DE QUMICA

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA

CURSO DE BIOQUMICA
(CLAVE 1508)
Licenciaturas de QFB y QA
Prof. Laura Carmona Salazar
Grupos: 03
Semestre: 13-I
Este material es exclusivamente para uso educativo y no de lucro

ESTRUCTURA Y FUNCIN DE
LAS PROTENAS
6. Funciones de las protenas

REACCIN QUMICA
EL EQUILIBRIO DEPENDE DEL G

P
Y LA VELOCIDAD DE LA ENERGA LIBRE
DE ACTIVACIN

EN UNA REACCIN CATALIZADA POR UN ENZIMA,

STA MODIFICA LA VELOCIDAD

FACTORES FSICOS O FISICOQUMICOS QUE

PUEDEN AFECTAR LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

1.
2.
3.
4.

pH
TEMPERATURA
FUERZA INICA
CONSTANTE DIELCTRICA DEL MEDIO

Efecto de la temperatura en la actividad enzimtica

Temperatura ptima

Actividad
de la
enzima

20 C

30 C

60C

Efecto del pH en la actividad enzimtica

pH ptimo

Tripsina
A
C
T
I
V
I
D
A
D

8
pH

Pepsina

Colinesterasa

pH

pH

Papana

pH

CINTICA ENZIMTICA.- Disciplina que se encarga de

estudiar el mecanismo de una reaccin catalizada
enzimticamente.

OBJETIVO.- Determinar la velocidad de la reaccin y

evaluar como se ve modificada sta en
respuesta a cambios en los parmetros
experimentales
VELOCIDAD= Cantidad de sustrato desaparecido o
producto formado por la enzima por unidad de tiempo
Por tanto sus unidades son
cantidad de compuesto sobre unidad de tiempo:
moles
moles
nmoles
gramos
miligramos
gramos

hora
minuto
segundo

E+S

ES

E+P

ESTADO
PRE-ESTACIONARIO
1) ESTADO PRE-ESTACIONARIO = HAY EXCESO DE SUSTRATO Y AUMENTA
LA CONCENTRACIN DE ES
(ES RPIDO, DURA MICROSEGUNDOS)

2) ESTADO ESTACIONARIO = LA CONCENTRACIN ENZIMA-SUSTRATO

PERMANECE APROX. CONSTANTE

VELOCIDAD DE LA REACCIN

Concentracin del sustrato

MODELO DE Leonor MICHAELIS -Maud MENTEN

E + S

k1

[ES]

k2

E + P

K-1
Relaciona velocidad de la reaccin con [S] y [E]
Vo = k2 [ES]

Queremos saber cunto ES se forma

Velocidad de formacin de ES = k1 [E][S] 3
Velocidad de desaparicin de ES = (k-1 + k2) [ES]

En el estado estacionario, las velocidades de formacin y desaparicin

de [ES] son iguales, donde [ES] es constante, mientras que [Reactivos] y
[Productos] cambian
k1 [E] [S] = (k2 + k3) [ES]
[ES] = [E] [S]
(k2 + k3)/k1

Definimos una nueva constante: (para el denominador)

Km = constante de Michaelis
Km = k2 + k3
k1

Km es independiente de la concentracin del enzima

y la de sustrato

Sustituimos en

[ES] = [E] [S]

Km

Asumiendo que ponemos un gran exceso de S con respecto a E, entonces [S]

va a ser tericamente la inicial o sea el total de [S].
Con respecto a [E], sta se va a estar combinando con l. Va haber tambin E libre.
[E] = [Etotal] - [ES] 9
Sustituyendo para [E] en 8
[ES] = ([Etotal] - [ES] ) [S]
10
Km
[ES] = [Et] [S] / Km
1 + [S] / Km

11

[ES] = [Et]

12

[S]______
[S] + Km

Vo = k2 [ES]

V = k2 [Et]

[S]__
[S] + Km

13

Ya que la velocidad mxima (Vmax) se alcanza cuando los sitios de la enzima

estn saturados con sustratos, o sea cuando [S] >> Km, y entonces
[S]____ Se aproxima a 1
[S] + Km
entonces
Vmax = k2 [Et]
sustituyendo 14

14
en

Km = [S] a la cual la velocidad de la reaccin tiene

la mitad de su valor mximo
13

V = Vmax ___[S]
___
[S] + Km

VELOCIDAD DE LA REACCIN

V = Vmax ___[S]
___
[S] + Km

Concentracin del sustrato

GRFICA DE DOBLES RECPROCOS O DE LINEWEAVER-BURK

(TRANSFORMACIN DE LA ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN)
Vo = Vmax ___[S]
___
[S] + Km

INVERSO

1 = Km + [S]
Vo
Vmax [S]
Pendiente

1 =
Km
Vo
Vmax [S]

1 =
Km
Vo
Vmax [S]

[S]
Vmax [S]

1
Vmax

Ecuacin de Lineweaver-Burk

SIGNIFICADO DE LA KM Y VMAX
La KM es un valor de concentracin que resulta muy til
para asegurar una catlisis efectiva.
Puede ser considerada como una medida de la afinidad de
un enzima por su sustrato

La VMAX es la mxima velocidad que se alcanza cuando

en el medio de reaccin todos los enzimas tienen los sitios
activos ocupados

Kcat
Es una constante de velocidad que describe la velocidad
limitante de cualquier reaccin en condiciones de
saturacin

Kcat = NMERO DE RECAMBIO

Equivale a expresar el nmero de molculas de sustrato
convertidas en producto por unidad de tiempo en una sola
molcula de enzima cuando esta se encuentra saturada

Kcat= Vmax / [E]t= Nmero de recambio en el sitio cataltico por seg

Kcat/ Km= Medida de la eficiencia cataltica si [S]<<<Km

En esta condicin, la velocidad de la enzima est slo
controlada por la difusin de S al sitio cataltico
Algunos enzimas tienen una kcat/Km en el intervalo 108-109 M-1seg-1, es

decir transforman al sustrato apenas llega

Actividad especfica
La actividad de una enzima se puede expresar en trminos
de la velocidad por la cantidad de la enzima

La actividad especfica es la velocidad de una enzima

expresada en trminos de la cantidad de enzima que
produce esa velocidad
Unidades de
velocidad

Unidades de
cantidad de enzima

Actividad especfica = mmoles / min / mg

moles / min / mg
nmoles / min / mg
mg (de producto) / min / mg
g (de producto) / min / mg

LOS ENZIMAS PUEDEN SER INHIBIDOS

Los inhibidores enzimticos son agentes moleculares que

Interfieren en la catlisis, haciendo ms lentas o
deteniendo las reacciones.

Pueden ser reversibles o irreversibles

INHIBIDORES COMPETITIVOS

INHIBIDORES ACOMPETITIVOS

INHIBIDORES MIXTOS

Ki o constante de inhibicin
La Ki es la constante de equilibrio de fijacin de un inhibidor a una enzima
Es otra de las constantes cinticas
Su clculo depende del tipo de inhibicin de que se trate y por tanto del
inhibidor y de la enzima
1/V

1/S
INHIBICIN ACOMPETITIVA
INHIBICIN COMPETITIVA

INHIBICIN MIXTA

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Mecanismos fisiolgicos para aumentar o disminuir la actividad enzimtica

* ALOSTERISMO
MODIFICACIONES
SOBRE LA ENZIMA
EXISTENTE

*REGULACIN COVALENTE

a) FOSFORILACIN
b) PROTELISIS

ISOENZIMAS
a) EXPRESIN DEL GENE
MODIFICACIONES
PARA CAMBIAR
LA CANTIDAD DE
ENZIMA

* SNTESIS

b) SNTESIS DE LA PROTENA
EN EL RIBOSOMA

* DEGRADACIN

DIFERENTES MECANISMOS

ALOSTERISMO (CAMBIA DE FORMA)

UN ENZIMA ALOSTRICA SE DISTINGUE POR SU
RESPUESTA A LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO Y
POR SU SUSCEPTIBILIDAD
DE REGULACIN POR OTRAS MOLCULAS
SE CARACTERIZAN POR TENER MLTIPLES
CENTROS FUNCIONALES
(CENTROS ACTIVOS)
Y
CENTROS REGULADORES
(CENTROS ALOSTRICOS)

ENZIMA ALOSTRICA

SUSTRATO

SITIO CATALITICO

ENZIMA
SITIO REGULADOR

Ligando o efector o regulador

alostrico

LA UNIN DEL REGULADOR INDUCE

CAMBIOS CONFORMACIONALES
QUE SE TRANSMITEN AL SITIO ACTIVO

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

ALOSTERISMO
SITIO CATALITICO

SUSTRATO

ENZIMA
Sitio Regulador

Ligando o
Regulador o
Efector alostrico
(especfico)

Ligando o efector o regulador

alostrico + o -

Sitio alostrico
(es especfico)

Actividad enzimtica

Sitio alostrico
(es especfico)

Actividad enzimtica

ENZIMA ALOSTRICA

SUSTRATO

SITIO CATALITICO

ENZIMA
SITIO REGULADOR

Ligando o efector o regulador

alostrico

LA ACTIVIDAD DE UN CENTRO
FUNCIONAL AFECTA A LOS DEMS
POR TANTO PRESENTAN
COOPERATIVIDAD

VELOCIDAD

LOS ENZIMAS REGULADOS ALOSTRICAMENTE NO SIGUEN LA CINTICA

DE MICHAELIS-MENTEN
Conforme se le une su sustrato
est en estado relajado

LA TRANSICIN DE T a R
POR LA UNIN DE SU SUSTRATO,
TAMBIN AUMENTA LA ACTIVIDAD

Sin sustrato el enzima

esta en estado tenso

SUSTRATO

TRANSICIN DEL ESTADO T AL R EN LA HEMOGLOBINA

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

ALOSTERISMO
SITIO CATALITICO

SUSTRATO

ENZIMA
Sitio Regulador

Ligando o
Regulador o
Efector alostrico
(especfico)

Ligando o efector o regulador

alostrico + o -

Sitio alostrico
(es especfico)

Actividad enzimtica

Sitio alostrico
(es especfico)

Actividad enzimtica

Eventos en la transicin alostrica

EFECTOR
ALOSTRICO
+ -

UNIN A LA ENZIMA
(SITIO ALOSTRICO)

INDUCCIN DE
CAMBIO
CONFORMACIONAL
TRANSMISIN A TRAVS
DE LA ENZIMA HASTA
EL SITIO CATALTICO

EXPRESIN DE
LA ACTIVIDAD
DE LA ENZIMA
(CATLISIS)

MODIFICACIN + CAMBIO EN LA
DE LA AFINIDAD POR
ESTRUCTURA DEL
EL PRODUCTO, CAMSITIO CATALTICO.
BIO REACTIVIDADES
DE RESIDUOS CRTICOS
EN LA CATLISIS.

REGULACIN ENZIMTICA
SUSTRATO

INHIBIDOR
COMPETITIVO

INHIBIDOR
NO COMPETITIVO

INHIBIDOR
ALOSTRICO
SITIO CATALITICO

SUSTRATO
ENZIMA

ENZIMA

ENZIMA

ENZIMA
Sitio Regulador

ALOSTERISMO: forma de regulacin de la actividad de una enzima

* Las enzimas alostricas NO siguen el comportamiento Michaeliano
(hiperblico). Su cintica de velocidad vs. [S] es sigmoidal.
* Estas enzimas tienen ms de un sitio de unin para el sustrato o para otro
efector.
* Este segundo sitio no es cataltico, pero al ser ocupado, transmite su efecto
al sitio cataltico, el cual aumenta o disminuye su afinidad por el sustrato
(SITIO ALOSTRICO)

TIPOS DE REGULACIN ALOSTRICA

REGULACIN POR PRODUCTO

El producto de la catlisis, al alcanzar ciertas concentraciones,
se une a la enzima, inhibindola (interaccionando en el sitio alostrico,
no en el sitio activo)

A+B

REGULACIN POR FEEDBACK (RETROALIMENTACIN )

Es una inhibicin alostrica que se presenta para regular vas metablicas

Enz A
Sustrato A

Sustrato B

Enz B

Enz C

Sustrato C

Enz D

Sustrato D

Sustrato E

REGULACIN POR MODIFICACION COVALENTE :

La actividad de la enzima se regula, ya sea + o por la adicin o
substraccin de un grupo qumico o de una parte de la molcula
de enzima.
a) Fosforilacin (regulacin reversible) :
Pi (FOSFORILASA O CINASA)
FORMA INACTIVA

ENZIMA
DEFOSFORILADA
FORMA ACTIVA

FOSFOENZIMA O
ENZIMA FOSFORILADA

Pi (FOSFATASA)

ALGUNOS TIPOS DE MODIFICACIONES COVALENTES

MODIFICACIN

Fosforilacin
Acetilacin
Miristilacin
ADP-ribosilacin
Farnesilacin
-Carboxilacin
Sulfatacin
Ubiquitinacin

EJEMPLO DE
PROTENA
MODIFICADA
Piruvato cinasa
Histonas
Src
RNA polimerasa
Ras
Trombina
Fibringeno
Ciclina

Las cinasas o fosforilasas toman el Pi del ATP, al que hidrolizan

en ADP+Pi y este Pi es transferido a la enzima que es sustrato de la cinasa
ATP

ENZIMA
DEFOSFORILADA

ADP+ Pi

CINASA o
FOSFORILASA
Pi

Pi

Sitio de fosforilacin

ENZIMA FOSFORILADA

ACTIVA

Pi
FOSFATASA

INACTIVA

El Pi se esterifica a un grupo hidroxilo de la protena, por lo que los

aminocidos que se fosforilan en una protena son la SERINA,
TREONINA y TIROSINA
El Pi queda unido de una manera covalente a la enzima, pero esta
fosforilacin puede ser reversible gracias a una FOSFATASA

REGULACIN COVALENTE
b) PROTELISIS (REGULACIN IRREVERSIBLE)
ZIMGENOS. Protenas inactivas que tiene un tamao mayor
al de la enzima madura y que son procesados hasta la forma
madura, que es ms pequea
proteasa

NH2

NH2
COO-

COOH

+ NH2

PROCESAMIENTO

PRECURSOR
(INACTIVO)
O
PROTENA INMADURA

ZIMGENO

COOH

FORMA MADURA
(ACTIVA)

ISOFORMAS O ISOENZIMAS O ISOZIMAS

Son variaciones estructurales de una misma enzima
Las isoformas pueden ser de un 70-98 % idnticas entre s
Las isoformas de una misma enzima catalizan la misma reaccin, pero
con ligeras variaciones en la velocidad, la Km, el pH ptimo,
sensibilidad a inhibidores, a reguladores alostricos, etc.
Esas pequeas diferencias no son suficientes para que la reaccin que
catalizan sea diferente
Por eso, las isoenzimas son otras formas de expresar una actividad
enzimtica regulada
La isoforma que exista en un tejido o en un momento de
desarrollo particulares es justamente la que se necesita ah por sus
caractersticas particulares de cintica o de regulacin

Una isoforma puede ser especfica de un tejido o de una

edad del tejido, porque despliega justamente la
actividad que demanda este tejido

As, el organismo modula una misma actividad

enzimtica en diferentes tejidos, expresando
diferentes formas de la enzima