Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
So Cristvo,
2014.2
1a Prtica
Medidas de segurana, vidraria do laboratrio e regras para
elaborao do relatrio
1. Objetivos:
aumentada, j que se ter dificuldade em manter o olho aberto para que seja feita sua
limpeza;
Rotule imediatamente qualquer reagente ou soluo preparada, isso evita
dvidas ou desperdcios na hora de realizar os experimentos;
Nunca retorne aos frascos restos da soluo que deles foram retirados ,
pois voc pode contaminar o reagente original;
Antes de usar uma pipeta, certifique-se de que ela esteja limpa;
No use a mesma pipeta para pipetar solues diferentes, isso evita a
contaminao dos reagentes;
O uso de pipetas absolutamente individual. Aps o uso, elas devem ser
depositadas com o bocal virado para baixo nas provetas (contendo uma soluo
detergente), distribudas ao longo das bancadas;
Nunca cheire diretamente qualquer frasco, diversos reagentes do laboratrio
so txicos ou nocivos, muitos podendo mesmo causar srios danos as mucosas nasal,
ocular e oral. Muitos compostos em uso no laboratrio podem comprometer o sistema
respiratrio;
Antes de retirar uma soluo de um frasco, agite-o suavemente para
homogeneizar o contedo;
A tampa do frasco no deve ser colocada sobre a bancada, pois poder ser
contaminada com alguma substncia que tenha respingado sobre ela. Segure-a numa das
mos e recoloque-a no frasco imediatamente aps a retirada do material;
Tendo qualquer dvida, solicite ao professor os devidos esclarecimentos;
Acostume-se a ter apreo pelas coisas pblicas, pois elas so um
patrimnio da comunidade;
Finalmente lembre-se de que o laboratrio um lugar em que se desenvolvem
trabalhos srios e no um ambiente para brincadeiras ou bate-papos . Tenha conscincia
desse comportamento no s para o laboratrio de Bioqumica, mas em qualquer
laboratrio que voc venha a freqentar durante seu curso universitrio e carreira
profissional.
2.1 Socorros de emergncia
Em qualquer acidente no laboratrio, identifique a causa e procure
imediatamente assistncia mdica.
a) Substncias qumicas nos olhos:
Soluo alcalina (bsica): lavar imediatamente com bastante gua e depois com
soluo saturada de cido brico 2% ou de cido pcrico 1%.
Soluo cida: lavar abundantemente com gua e depois com uma soluo de
cido brico 2%. O cido brico usado em queimaduras por causa de suas aes
bactericida e fungicida.
b) Queimaduras:
Pelo calor: tratar a queimadura com lcool ou com soluo de cido pcrico 1%.
Por cidos: lavar rapidamente com uma soluo de bicarbonato de sdio 5% e
depois com gua.
Por bases: lavar rapidamente com uma soluo de cido actico 5% ou cido
brico 2% ( gua boricada) e depois com gua.
Estas regras de segurana no devem ser vistas como um manual de proibies,
mas como orientaes que devem ser observadas para um melhor desempenho do aluno
no laboratrio.
3. Vidraria de laboratrio
de fundamenta importncia para quem trabalha em laboratrio distinguir e
usar convenientemente cada vidraria. A vidraria de laboratrio pode ser usada para
armazenar material slido ou lquido, preparar solues, fazer reaes, medir lquidos,
etc.
Antes de passarmos ao conhecimento dos recipientes de vidro do laboratrio,
necessrio conhecer o significado de trs termos freqentemente aplicados a eles, quais
sejam, calibrado, volumtrico e graduado.
Pictograma
Letra
Corrosivo
Inflamvel
Txico
Irritante
Xi
Nocivo
Xn
Explosivos
Comburentes
Perigosa
para o ambiente
(1)
(3)
(2)
(4)
(6)
(5)
(7)
(9)
(8)
(10)
(13)
(12)
(11)
(14)
(15)
Figura 1 Vidraria comum no laboratrio de Bioqumica. 1- Grau e pistilo; 2Pregador ou pina de madeira; 3- Balo de fundo chato; 4- Balo volumtrico; 5Becker; 6- Bureta; 7- Erlenmeyer; 8- Suporte para tubos, bancada ou grade; 9- Proveta;
10- Tubo de ensaio; 11- Funil de Buchner;12- Funil de vidro; 13- Pisseta; 14- Vidro de
relgio; 15- Suporte.
2a Prtica
Uso da pipeta e medidas de volume usadas em bioqumica
1. Objetivos:
2. Fundamentao terica:
Uma das tcnicas mais comumente utilizadas nos laboratrios, a de pipetar
lquidos, ou seja, fazer transferncias quantitativas de lquidos de um recipiente para
outro, utilizando a pipeta. Sendo indispensvel o domnio dessa tcnica no laboratrio,
importante conhecer seus princpios, para um melhor desempenho das atividades
laboratoriais.
As pipetas so tubos de vidro com as extremidades afiladas, em que se recolhe,
por suco, um lquido, para medir-lhe com exatido o volume. Se a transferncia de
um volume especfico e acurado necessria, algum tipo de pipeta calibrada deve ser
usada. As pipetas calibradas so de dois tipos a saber, volumtrica e graduada.
3. Pipetas volumtricas. So tubos de vidro expandido cilindricamente na parte
central. Elas no so graduadas e trazem a marca de calibrao gravada na sua parte
superior, acima do bulbo (s vezes essa marca vem gravada no bulbo). So utilizadas
para transferncia de volumes especficos, em ensaios em que se necessitam de medidas
precisas de volumes. Essas pipetas podem transferir volumes em mililitros de: 1, 2 , 3,
4, 5, 10, 15, 20, 25, 50 e 100 mL. Para usar essa pipeta, deve-se introduzi-la no
recipiente que contm o lquido a ser transferido. Faz-se a suco com a boca ou com
um dispositivo de segurana ( pra ou bulbo de suco), a depender da substncia
que se vai pipetar, preenchendo-a com o lquido at 2 ou 3 cm acima da marca
0(zero), gravada na extremidade superior da pipeta. Deixe o lquido em excesso
escorrer at o menisco chegar a essa marca. Prenda a extremidade superior da pipeta
com seu dedo indicador para o lquido no escoar. Seque a ponta da pipeta com um
pedao de papel limpo (leno de papel), leve-a para o recipiente em que se deseja
transferir o lquido. Para deixar o lquido escorrer basta afrouxar o dedo indicador que
obstrui a extremidade superior da pipeta. Toque a ponta da pipeta no interior do
recipiente, para que a ltima gota escorra. Algum lquido pode ficar ainda na ponta da
pipeta, mas no necessrio sopr-la, pois a maioria das pipetas volumtricas vem
calibrada como TD (to deliver), que significa que o volume transferido j vem corrigido
para essa quantidade que resta na pipeta. O tempo de escoamento do lquido de 5 a 10
segundos.
4. Pipetas graduadas. So tubos cilndricos com uma escala numerada por todo o
tubo, de cima a baixo, at a sua capacidade mxima.. Podem ser tambm usadas para
transferir fraes de seu volume total. As pipetas graduadas so de dois tipos: Pipeta de
Mohr e pipeta sorolgica.
4.1 As pipetas de Mohr so encontradas de duas formas a saber, as de ponta
longa e as de ponta curtas. As de pontas longas so teis em transferncia de volumes
de um frasco de abertura estreita para outro de igual forma. Todas as pipetas de Mohr
so TD e tm capacidade para transferir lquidos de: (0,1-10,0mL). Elas podem ser
graduadas ao dcimo ( as subdivises so 0,1) ou ao centsimo ( as subdivises so
0,01). A escolha do tamanho da pipeta fundamental. Por exemplo, no tente pipetar
0,2 mL com uma pipeta de 5 ou 10 mL graduada ao dcimo.
Para pipetar volumes entre 0 e 1mL, deve-se usar pipetas de 1mL graduada ao
centsimo.
Para pipetar volumes entre 1e 2 mL, deve-se usar pipetas de 2 mL graduada ao
centsimo.
Para pipetar volumes entre 2 e 5 mL, deve-se usar pipetas de 5 mL graduada ao
dcimo.
Para pipetar volumes entre 5 e 10 mL, deve-se usar pipetas de 10 mL graduada
ao dcimo.
O lquido no interior da pipeta forma menisco. A leitura deve ser feita na parte
inferior do menisco e na altura dos olhos.(ver figura )
O uso da pipeta de Mohr idntico ao da pipeta volumtrica. Para preench-la
com lquido, deve-se introduzi-la no recipiente que contm o lquido a ser transferido.
Faz-se a suco com a boca ou com um dispositivo de segurana ( pra), a depender da
substncia que se vai pipetar, preenchendo-a com o lquido at 2 ou 3 cm acima da
marca 0 (zero) gravada na extremidade superior da pipeta. Deixe o lquido em
excesso escorrer at o menisco chegar a essa marca. Prenda a extremidade superior da
pipeta com seu dedo indicador para o lquido no escoar. Seque a ponta da pipeta com
um pedao de papel limpo (leno de papel), leve-a para o recipiente em que se deseja
transferir o lquido. Para deixar o lquido escorrer basta afrouxar o dedo indicador que
obstrui a extremidade superior da pipeta. No preencha a pipeta de forma que a soluo
medida ultrapasse a ltima marca graduada na parte inferior da pipeta. Para que a ltima
gota escorra, no necessrio soprar. Toque a ponta da pipeta no interior do recipiente.
4.2 Pipetas sorolgicas. so graduadas at a ponta da pipeta. So encontradas na
forma TD, que no precisam ser sopradas no final da titulao e na forma TC, calibrada
para ser soprada no final da pipetagem. Para preench-la com o lquido deve-se usar o
mesmo procedimento usado na pipeta de Mohr. Se a pipeta no for TD, deve-se deixar
escoar o lquido que restou na pipeta e soprar aps 15 a 20 segundos do lquido ter
escorrido.
5 Pipetas Pasteur. Utilizadas para transferncia no quantitativa de uma pequena
quantidade de volume de lquido( 1 a 10mL) de um recipiente para outro. As pipetas
Pasteur so disponveis em dois tamanhos ( 15 e 23cm). Elas transferem cerca de 2
mL, sendo conveniente para transferncia de quantidades no medidas de um tubo de
ensaio para outro. Como as pipetas Pasteur tm uma ponta de vidro muito longa e fina,
conveniente usar uma proteo de borracha nela para evitar que ela se quebre. Deve-se
usar tambm uma pra no bocal para fazer a suco e o escoamento do lquido.
6. Pipetas automticas. Utilizadas em transferncias quantitativas de lquidos,
principalmente transferncias idnticas de pequenos volumes. Essa pipeta permite
transferncias acuradas, precisas e rpidas de volumes de 1 a 10.000l. As pipetas
automticas podem ser de dois tipos:
6.1 Volume fixo. Calibradas para medir um volume determinado. Por exemplo
um pipeta de 10l s ir medir 10l.
10
6.2 Volume ajustvel Calibradas para medir volumes variveis, dentro de uma
faixa pr-determinada. Por exemplo uma pipeta de 200l usada para se medir volumes
de 20l a 200l.
7. Uso da pipeta automtica
Para pipetar lquidos com uma pipeta automtica necessrio acoplar uma
ponteira de plstico (tip) na parte inferior da pipeta e pressionar o mbolo localizado na
parte superior da pipeta quando ela estiver imersa no recipiente contendo o lquido que
se vai pipetar. O mbolo deve ser apertado de uma s vez para a suco do lquido.
Durante a suco solta-se lentamente o boto. Para transferir o lquido pipetado da
ponteira para um tubo de ensaio, por exemplo, deve-se pressionar o mbolo mais uma
vez, at sentir que ele chega a um obstculo. Dessa forma o lquido vai escoar da
ponteira para o tubo de ensaio.
8. Medidas de segurana no uso de pipetas
O uso do bulbo de suco (ou pra) no necessrio para pipetar substncias
inofensivas sade, como por exemplo, uma soluo de NaCl 0,15M. Nesses casos, o
lquido pode ser aspirado com a boca. Entretanto, como precauo e por uma questo de
hbito, deve-se incentivar o uso do bulbo de suco nas prticas de laboratrio.
H situaes em que o uso de um dispositivo de segurana indispensvel
quando for usar a pipeta, por isso deve se usar uma pra ou uma pipeta automtica
quando estiver trabalhando com as seguintes substncias:
1. Lquidos biolgicos que oferecem riscos de contaminao como por exemplo,
o sangue de animais e urina, quando ingeridos.
2. cidos e bases fortes, pois so corrosivos, e quando aspirados pela boca pode
causar leses no trato digestivo, se ingeridos.
Exemplo: H2SO4 98% , HCl 38%, NaOH, KOH, etc.
3. Metais pesados, como o chumbo, mercrio, entre outros, podem causar
intoxicao, quando ingeridos. Exemplo : acetato de chumbo.
4. Radioistopos. Eles podem causar radiaes ionizantes em clulas humanas.
Exemplo: Fsforo 32 (32P).
Tabela 1: Unidades de volume
Unidades de
volume
Litro
Decilitro
Mililitro
Microlitro
Abreviatura
L
dL
mL
L
Fator de multiplicao
( relativo ao litro)
1
10-1
10-3
10-6
11
3a Prtica
Preparo de solues e diluies
1. Objetivos:
2. Solues
As solues so, provavelmente, o mais comum dos sistemas qumicos
encontrados em laboratrios. As solues so definidas como misturas homogneas de
duas ou mais substncias puras, em geral, o componente de uma soluo presente em
maior quantidade chamado de solvente e o que est em menor quantidade, de soluto.
Entretanto, esses termos podem ser trocados quando for necessrio. Este o caso das
solues de slidos em lquidos, em que o lquido tomado, comumente, como solvente
e o slido como soluto, independente das propores relativas de cada um. Assim,
podemos ter solues de sacarose em gua a 10% e 60%, e em ambos os casos, a gua
considerada como solvente e a sacarose como soluto.
3 Maneiras de expressar a concentrao das solues
A concentrao de uma soluo pode ser expressa em funo da quantidade de
soluto num volume definido de soluo, ou como a quantidade de soluto numa massa
definida de soluo ou solvente. As convenes mais comuns so definidas abaixo:
3.1 Molaridade (M) o nmero de moles de soluto por litro de soluo, ou seja,
o nmero de moles igual ao peso (em grama) do soluto/ PM. O Peso Molecular(PM)
a soma de todos os pesos atmicos dos tomos da molcula.
Concentraes molares so normalmente expressas entre colchetes, por
exemplo, a concentrao molar do on hidrognio representada dessa forma, [H +].
Solues diludas so representadas em termos de milimolaridade,
micromolaridade, nanomolaridade, picomolaridade, etc.
1 mmol = 10-3 moles
1 mol = 10-6 moles
1 nmol = 10-9 moles
1 pmol = 10-12 moles
Portanto:
1 mM = 10-3 moles = 1mmol/litro = 1mol/mL
1 M = 10-6 moles = 1Mol/litro = 1nmol/mL
1 nM = 10-9 moles = 1nmol/litro = 1pmol/mL
3.2 Normalidade(N) o nmero de equivalentes do soluto por litro de soluo.
Para calcular a normalidade precisamos conhecer o peso do soluto dissolvido e seu
12
Abreviatura
Quilograma
Grama
Kg
g
Fator de multiplicao
( relativo ao grama)
103
1
Miligrama
Micrograma
Nanograma
Picograma
mg
g
ng
pg
10-3
10-6
10-9
10-12
13
4. Diluio
Diluio uma tcnica utilizada para preparar solues, em que se adiciona um
diluente a uma soluo estoque, para diminuir a sua concentrao. Soluo estoque
uma soluo com concentrao conhecida e a partir dela pode-se preparar outras.
4.1 Diluio de solues com concentrao expressa em molaridade
Para diluir solues cujas concentraes so expressas em molaridade, deve-se
usar umas das seguintes frmulas abaixo:
M1 x V1 = M2 x V2
Sendo:
M1 a molaridade da soluo estoque
V1 o volume que deve ser retirado da soluo estoque
M2 a molaridade da soluo que se quer preparar
V2 o volume da soluo que se quer preparar
4.2 Diluio de solues com concentrao expressa em normalidade
N1 x V1 = N2 x V2
Sendo:
N1 a normalidade da soluo estoque
V1 o volume que deve ser retirado da soluo estoque
N2 a normalidade da soluo que se quer preparar
V2 o volume da soluo que se quer preparar
4.3Diluio direta
Podemos obter diretamente diluies altas de uma soluo com concentrao
conhecida sem que seja necessrio fazer diluies seriadas ou sucessivas, como por
exemplo diluir uma soluo 100 vezes. Para isto basta pipetar 10l da soluo desejada
em 990l de gua.
14
b) HCl 2 M
15
c)H2SO4 5M
4a Prtica
A Qumica de pH e tampes
1. O produto inico da gua e pH
O qumico dinamarqus S. L. P. Sorenson props uma forma de representar a
concentrao de H+ de solues. Ele definiu o logaritmo negativo da concentrao de
hidrognio como pH.
(pH = - log[H+])
(1)
(4)
H2O H+ + OH-
(5)
Keq = [H ] [OH ]
[H2O]
+
[H ] [OH ]
7
55,5M
Nas equaes (6 e 7) o colchete significa concentrao molar. Como a
concentrao molar da gua 55,5M, ela pode ser substituda nessa equao:
Multiplicando os termos da equao 7 teremos:
55,5M x Keq = [H+] [OH-]
(8)
A constante de equilbrio da gua conhecida, sendo determinada a partir de
medidas da sua condutividade eltrica, dada pelos ons H+ e OH-. Portanto, a Keq = 1
x 10-18. Substituindo esse valor na equao 8 teremos:
Keq =
(9)
(10)
16
(11)
[H ] =
(18)
(21)
1 x 10-14
1 x 10-2
20
pH = 12
2. A Escala do pH
Solues que apresentam pH = 7,0 so neutras, as que apresentam pH abaixo de
7,0 so cidas e as que tm pH acima de 7,0 so alcalinas ou bsicas. A figura abaixo
descreve a escala de pH, destacando o valor de pH de algumas solues.
17
Bases conjugadas
CH3COO -(on acetato)
HCO- 3 (on bicarbonato)
NH3 (amnia)
4. Tampes e ao tamponante
Os fluidos celulares apresentam um pH constante e especfico, geralmente
prximo de 7,4. Nos organismos multicelulares, o pH dos lquidos extracelulares
(sangue, por exemplo) tambm estreitamente regulado atravs da ao dos tampes
biolgicos.
Tampes so misturas de cidos fracos e suas bases conjugadas, que evitam
variaes bruscas de pH de em solues, quando so adicionadas quantidades
relativamente pequenas de cido (H+) ou base (OH-). Por exemplo, quando se adiciona 1
mL de uma soluo de HCl 0,1N a 99mL de gua destilada o pH cai abruptamente Se
fizermos um outro experimento, adicionando 1mL de NaOH 0,1N a 99mL de gua
destilada, observaremos que o pH se elevar consideravelmente.
Se experimentarmos agora adicionar 1mL da soluo de HCl 0,1N a 99mL da
soluo tampo de acetato de sdio, que consiste de uma mistura de cido actico e
18
OH
CH3COOH
cido actico
(cido)
H2O
-
CH3COO
on acetato
(base conjugada)
22
O tampo bicarbonato nico, por que a forma cida dele eliminada pelos
pulmes na forma do gs carbnico CO2, como tambm a concentrao de CO2 e do on
bicarbonato podem ser reguladas na clula. Esses fatores explicam o fato desse ser o
mais importante tampo sangneo.
6. Determinao potenciomtrica do pH
As medidas mais exatas na determinao do pH so feitas atravs de tcnicas
potenciomtricas, em que se utiliza o pH metro, instrumento que consiste de: um
eletrodo de referncia, um eletrodo de vidro, cujo pH depende da soluo em que ele
est imerso e um sistema para medida de voltagem, que capaz de medir diferenas
potenciais mnimas num circuito de resistncia extremamente elevada.
19
e
24
Ag
Cl
A equao 24 demonstra que o potencial de referncia dependente da
concentrao do on cloreto (Cl-). Para manter sua concentrao constante, em
condies instveis de umidade, uma soluo saturada de cloreto de potssio (KCl)
utilizada. Se a umidade diminuir, pode ocorrer evaporao do eletrodo do vidro ,
acarretando em precipitao do excesso de cloreto; por outro lado, se a umidade se
elevar, ocorrer pequeno aumento no volume da soluo e o cloreto de potssio se
dissolver.
A funo do eletrodo de vidro estabelecer um potencial eltrico que responda a
variaes na atividade do on hidrognio da soluo a ser testada. Ele consiste de um
tubo de vidro de alta resistncia, apresentando na extremidade um bulbo, cujo vidro
delgado e de baixa resistncia. Somente a poro do bulbo detecta variaes de pH. O
tubo preenchido por uma soluo de HCl 0,1N que entra em contato com o eletrodo de
referncia. Quando esse eletrodo imerso em uma soluo de concentrao hidrogenada
(H+) desconhecida, cria-se um potencial entre as solues interna e externa. Como a
voltagem do eletrodo de referncia constante, a diferena de potencial entre os dois
eletrodos diretamente relacionada com a concentrao de ons hidrognio da soluo
desconhecida.
Ag
20
8. Exerccios
1. Dada uma soluo de HNO3 0,002 M, responda as questes a baixo:
a) Qual a concentrao de H+?
b) Qual o pH da soluo-?
4. Calcule o valor de pH de uma soluo de HCl 0,1 M.
5. Qual o pH de uma soluo 0,5 N de HNO3?
7. Usando a equao de Henderson-Hasselbalch (pH = pKa + log [ aceptor H+]/ [doador H+])
calcule o pKa do cido lctico numa soluo pH 4,8 em que a concentrao de cido lctico
0,010M e a de lactato 0,087M.
8. Um tampo contm 0,010 mol de cido lctico (pKa = 3,86) e 0,050 mol de sodium lactato
por L. Calcule o pH deste tampo. Use a equao de Henderson-Hasselbalch
9. Calcular o pH de uma mistura de cido actico e acetato, sabendo que seu pKa = 4,7 , nas
seguintes condies:
a) [acetato] = 0,5 M e [ acido actico]= 5M
b) [acetato] = 0,5 M e [ acido actico]= 1M
10. Por que o pH desejado de uma soluo tampo deve ser o mais prximo possvel do pKa do
acido componente neste tampo? Qual a relao de concentrao da base e do cido de um
tampo quando o pH = pKa?
21
5a Prtica
Cintica Enzimtica
1 - Experimentos cinticos foram realizados com a enzima X que catalisa a transformao de
um nico substrato em produto (SP). A tabela abaixo demonstra a porcentagem de atividade
da enzima em diferentes temperaturas. Calcule graficamente o a temperatura tima e explique o
significado e importncia dessa informao.
Temperatura (oC)
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Porcentagem de
atividade (%)
0
10
40
75
98
90
30
20
10
0
[S]
mM
5
6,67
10
20
v0
(moles prod.min-1.ml-1)
333
400
500
667
5
5
5
5
5
6,67
10
20
250
286
333
400
10
10
10
10
5
6,67
10
20
200
222
250
286
22