RESUMEN

La realizacin de este trabajo se llev a cabo luego de la bsqueda de

establecimientos donde se comercializa y proporcionan compost orgnico,
dichos establecimientos son el Mercado de Las Flores, La UNALM y la UNI.
Debido a que el objetivo central de proyecto es el control de calidad de
compost elaborados en distintos lugares de Lima: el Mercado de Las Flores,
La UNALM y la UNI, se procedi a el anlisis microbiolgico para Determinar
los tipos de hongos y bacterias existentes en las tres diferentes muestras de
compost y comparar la cantidad de colonias de microorganismos presentes
en los diferentes medios de cultivo.
Para empezar el proyecto, se acudi a cada establecimiento y se obtuvo el
compost respectivo, el precio oscilaba entre S/. 1.00 y S/. 2.00. Para iniciar el
anlisis microbiolgico, nos proporcionaron el laboratorio de la Facultad de
Ingeniera Ambiental con los materiales requeridos para cada paso del
anlisis.
Se inici con la preparacin de los medios de cultivo:
AGAR SABOURAUND DEXTROSA
AGAR ENDO
AGAR SS

I)

II)
III)

Paso seguido se realiz la preparacin de las placas Petri con la

esterilizacin respectiva:
Con el AGAR SABOURAUND DEXTROSA, ENDO y SS es el mismo
procedimiento:
- Se calienta el agar preparado en el matraz hasta volverlo lquido, luego
se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura aproximada de 45C
- Se realiza el vertido del medio en las placas Petri en presencia de un
mechero encendido para evitar posible contaminacin.
- Se dejan enfriar las placas hasta que el medio se torn slido de
nuevo.

Con el AGAR MAC CONKEY:

- Se realiza la compra de 100ml de Agar Mac Conkey preparado en estado
solido
- Se calienta el envase en una cocinilla elctrica hasta lograr el cambio de
estado
- Se realiza el vertido del medio en las placas Petri en presencia de un
mechero encendido para evitar posible contaminacin.
IV)

Siembra e Incubacin:

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Para estudiar adecuadamente a los microorganismos siempre se hace

necesario, como requisito previo, el poder hacerlos crecer en condiciones
de laboratorio.
El cultivo ser pues necesario para la identificacin de las bacterias,
hongos, levaduras, etc.
V)

VI)

Tincin y vista microscpica:

Para la visualizacin de la morfologa y disposicin se realiz una
tincin simple (colonias de agar sabouraud) o una tincin diferencial
Gram.

Luego del anlisis macroscpico y microscpico se procedi a el

estudio de los resultados obtenidos:
Segn los resultados analizados; el compost n 1 (del mercado Las Flores)
es el que posee un mayor control de calidad a comparacin con los otros dos.

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Comparacin en del control de calidad del

compostaje elaborado en diferentes lugares de
Lima: el mercado las Flores, UNALM y la UNI.
1. Marco Terico
COMPOST
El compost, compostaje, composto o abono orgnico es el producto que se obtiene
de compuestos que forman o formaron parte de seres vivos en un conjunto de
productos de origen animal y vegetal; constituye un grado medio de descomposicin
de la materia orgnica que ya es en s un magnfico abono orgnico para la tierra,
logrando reducir enormemente la basura.
El compostaje se forma de desechos orgnicos como: restos de comida, frutas y
verduras, aserrn, cscaras de huevo, restos de caf, trozos de madera, poda de jardn
(ramas, csped, hojas, races, ptalos, etc.). La materia orgnica se descompone por
va aerbica o por va anaerbica. Llamamos compostaje al ciclo aerbico (con alta
presencia de oxgeno) de descomposicin de la materia orgnica. Llamamos
metanizacin al ciclo anaerbico (con nula o muy poca presencia de oxgeno) de
descomposicin de la materia orgnica.
El compost es obtenido de manera natural por descomposicin aerbica (con oxgeno)
de residuos orgnicos como restos vegetales, animales, excrementos y purines (parte
lquida altamente contaminante que rezuma de todo tipo de estircoles animales), por
medio de la reproduccin masiva de bacterias aerbicas termfilas que estn presentes
en forma natural en cualquier lugar (posteriormente, la fermentacin la continan otras
especies de bacterias, hongos y actinomicetos). Normalmente, se trata de evitar (en lo
posible) la putrefaccin de los residuos orgnicos (por exceso de agua, que impide la
aireacin-oxigenacin y crea condiciones biolgicas anaerbicas malolientes), aunque
ciertos procesos industriales de compostaje usan la putrefaccin por bacterias
anaerobias.
La composta se usa en agricultura y jardinera como enmienda para el, aunque tambin
se usa en paisajismo, control de la erosin, recubrimientos y recuperacin de suelos.

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NORMA DE CALIDAD DEL COMPOST

DEFINICIONES:
COMPOST DE CLASE A: producto de alta calidad que cumple con las exigencias para
compost clase A en todos los parametros especificados en esta normativa. El producto no
presenta ninguna restricciom de uso debido a que se ha sometido a un proceso de humificacion
pudiendo ser aplicado a macetas directamente sin mezclarse.
COMPOST DE CLASE B: producto de calidad que cumple con las exigencias para compost
clase B en todos los parametros especificados en esta normativa. El producto presenta algunas
restricciones de uso. Para ser aplicado a macetas, requiere ser mezclado con otros elementos
adecuados.
COMPOST INMADURO: es una materia organica que ha pasado por las etapas mesofilica y
termofilica del proceso de compostaje donde ha sufrido una descomposicion inicial pero no ha
alcanzado las etapas de enfriamiento y maduracion requeridas para obtener un compost clase
A o B. Es un producto que se debe mezclar para ser aplicado y no debe producir hambre de
nitrogeno.
COMPOST MADURO: sinonimo de compost.
CARACTERSTICAS DEL COMPOST
PARRAFO 1 Parmetros sanitarios
ARTICULO 1 REDUCCION DE PATOGENO:
Todos los tipos de compost, es decir Clase A, clase B e inmaduro, debern cumplir
copulativamente con los siguientes requisitos:
1) Tener una densidad de coliformes fecales menor a 1.000 Numero ms probable
(NMP) por gramos de compost, base seca.
2) Tener una densidad de salmonella sp, menor a 3 NMP en 4 gramos de compost,
base seca
3) Tener un contenido de huevos de helmintos menor a 1 en 4 gramos de compost,
base seca
Como alternativa al requisito nmero 3 se entender el cumplimiento de alguno de los
siguientes requisitos:
4) Tener una densidad mxima de virus MS-2 menor a 1 Unidad de formacin de
Placas (UFP) en 4 gramos de compost, base seca.
5) Si se aplica el mtodo de compostaje de apilamiento esttico con aireacin forzada,
la temperatura dl compost deber mantenerse 55C o ms, por tres das.
6) Si se aplica el mtodo de compostaje de apilamiento con volteos, la temperatura del
compost deber mantenerse a 55C o ms, por un periodo a lo menos de 15 dias.

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Durante dicho periodo, las pilas debern ser volteadas un mnimo de 5 meses.
Alternativamente, la temperatura del compost se debe mantener por sobre los 70C
por un periodo superior a 30 minutos.
ARTICULO 2 OLORES
El compost no debe presentar olores fuertes (compuestos de sulfuro, mercaptanos,
gases TRS) a excepcin de un aroma caracterstico a bosque.
ARTICULO 3 HUMEDAD
Para todo tipo de compost producido y comercializado en el pas (clase A, B e
inmaduro) el contenido de humedad no debe ser menor que 30% en peso.
PARRAFO 2 Parmetros ambientales
ARTICULO 4 METALES PESADOS
Todo compost producido en el pas (clase A. clase B o inmaduro) deber cumplir con los
requisitos establecidos en la tabla N1 respecto a la concentracin de metales pesados:

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ESCHERICHIA COLI
Escherichia coli es un bacilo corto Gram- negativo, catalasa-positivo,oxidasa-negativo y
anaerobio facultativo. La mayoria de las cepas fermentan la lactosa, aunque algunas
son fermentadoras lentas de este azucar y algunas son anaerogenicas. Tipicamente, la
especia es rojo metilo positiva, Voges-Proskauer negativa y no crece en el medio de
citrato de Simmons, produciendo indol la mayoria de las cepas.
Las cepas de E.coli se pueden diferenciar serologicamente en relacion a los antigenos
somaticos(O), flagerales (H) y capsulares (K). Ademas, pueden hallarse fimbrias y
estructuras emparentadas que desempean un papel en la patogenia.
En funcion del sindrome que provocan, se reocnocen actualmente cinco grupos de
E.coli productores de diarrea, cuyas diferencias estan codificadas por plasmidos.

E.coli enteropatogeno (EPEC) : responsable de la diarrea acuosa de los

lactantes.Produce vomitos, fiebre y una diarrea acuosa, con mucus pero sin
sangre. Coloniza las microvellosidades de todo el intestino, produciendo la lesion
de adhesion y erosion en el ribete en cepillo de la membrana de la vellosidad.
Afecta a ninos menores de dos aos y a adulto, siendo el principal factor de
riesgo edades inferiores a dos aos.
E.coli enterotoxigenico (ETEC): responsable de la llamada vulgarmente diarrea
del viajero, causa una diarrea acuosa, como agua de arroz, y poca fiebre.
Coloniza la porcion proximal del intestino delgado. Afecta a adultos y a nios,
siendo el principal factor de riesgo los viajes al extranjero.
E. coli enteroinvasor (EIEC): origina fiebre y adiarrea profusa con heces que
contienen mucus y estrias sanguinolentas. Coloniza el colon y presenta un
plasmido de 120-140 mD, conocido como plasmido invasivo, que lleva a todos
los genes necesarios para la virulencia. Afecta a adultos siendo el principal fsctor
de riesgo los viajes al extranjero.
E. coli enterohemorragico (EHEC) : origina diarrea sanguinolenta, colitis
hemorragica, sindrome uremico hemolitico (SUH o SHU) y purpura
trombocitopenica. En este grupo se inlcuye E. coli verotoxigenico (VTEC)
serotipos O157, O26 y O111. Afecta principalmente a nios, siendo el principal
factor de riesgo el consumo de carne poco hecha. El termino E. coli
verotoxigenico (VTEC) califica las cepas de E. coli portadoras de al menos un
gen (stx) que codifica una toxina llamada vertoxina (STX). Estas toxinas pueden
provocar lesiones a nivel del colon, rion y cerebro. Poseer genes stx es
suficiente para calificar al microorganismo como verotoxigenico pero no es
suficiente para que el germen sea potencialmente patogeno para el hombre y
por tanto origine diarreas hemorragicas o el SHU. Para que un VTEC sea

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potencialmente patogeno debe de poseer al menos dos factores de virulencia: el

primero, que pueda adherirse a la mucosa intestinal y destruirla, para esto tiene
que sintetizar una proteina llamada intimina, que es codificada por el gen eae, y
el segundo, debe de producir una enterohemolisina, codificada por el gen ehx.
E. coli enteroagregativo(EaggEC), que constituye el grupo de E, coli diarreico
mas recientemnte descrito. Origina diarreas acuosas y vomitos. Afecta a todas
las edades desconociendose actualmente los factores de riesgo.

HONGOS
Los hongos son organismos que son incapaces de producir sus propios azucares ya
que carecen de clorofila y, por tanto, no pueden hacer fotosntesis. Se desarrollan a
partir de la energa que obtienen de los compuestos presentes en la materia de
animales y plantas mueras por o que se clasifican como organismos saprofitos.
Los hongos incluyen los mohos, las levaduras y las setas y colectivamente son
responsables de la descomposicin de muchas de las molculas complejas del
compost y del suelo. En las pila del compost, los hongos son importantes porque
descomponen materiales relativamente leosos, permitiendo la actuacin posterior de
las bacterias una vez que la mayora de la celulosa ha sido eliminada.
Los hongos se extienden y crecen vigorosamente produciendo muchas clulas y
filamentos y pueden atacar residuos orgnicos que son demasiado cidos, demasiado
secos, o demasiado bajos en nitrgeno para la actuacin de las bacterias
Las especies de hongos son numerosas tanto en la fase termofilica como en la
mesofilica del compostaje. La mayoria de los hongos viven en la zona superficial del
compost cuando las temperaturas son altas. Los mohos del compost son aerobios
estrictos que crecen tanto como filamentos invisibles, como en forma de colonias grises
o blancas, o con un aspecto difuso en las superficie del compost.
La presencia de setas en la pila de compost (frecuente si has aadido altas cantidades
de carton) es un buen indicador de que la temperatura de la pila ( al menos en esa
zona superficial) esta entre 21 y 26C, una excelente temperatura para las lombrices,
mientras que muy pocos hongos sobreviven a las temperaturas de los organismos
termofilos( a partir de 50C).
Con la excepcion de la presencia ocasional de una seta, la mayoria de hongos del
contenedor de compost tienen tres cosas en comun:

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a) Son microorganismos, no se ven a simple vista

b) Se alimentan de materiales que nosotros aadimos al contenedor pensando que
es lo que van a usar como alimentos los animales como las lombrices.
c) Ellos son uno de los principales alimentos de las lombrices.

2. Objetivos
GENERALES:
Determinar el control de calidad del compost elaborado en tres distintos lugares
de Lima:
- Mercado de Flores
- Universidad Nacional Agraria- La Molina
- Universidad Nacional de Ingeniera.

ESPECFICOS:
Comparar el tipo de hongos de los tres diferentes compost.
Comparar la cantidad de colonias de microorganismos presentes en los
diferentes medios de cultivo.

3. Materiales y mtodos
MATERIALES Y REACTIVOS UTILIZADOS:
Agar Mac Conkey
Es un medio de diferenciacin selectivo que se utiliza para el aislamiento de bacilos
Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite
diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa de agua y alimentos. Todas las especies
de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Agar Sabouraund Dextrosa
Es un medio recomendado para el crecimiento selectivo de especies patgenas y no
patgenas de hongos y levaduras. En su composicin se encuentran peptonas las
cuales son fuente de aminocidos y dextrosa, como una fuete de carbn y energa.
Agar SS
Es un medio selectivo empleado en el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir de
muestras de productos alimenticios u otros que pudieran contener estos grmenes.
Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citrato se consigue la inhibicin
de las bacterias Gram-positivas.

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Agar Endo
Es un medio ligeramente selectivo y de diferenciacin para el aislamiento y la
diferenciacin de la familia Enterobacteriaceae y diversos otros bacilos gram negativos
a partir de muestras clnicas y alimentos en general.

Asa de Kolle(x1)
Matraz de Erlenmeyer(x3)
Placa Petri(x12)
Mechero Bunsen(x1)
Papel Craft
Cordel
Algodn
Probeta(x1)
Compost del Mercado de las Flores C1(300g).
Compost de la UNALM(300g)
Compost de la UNI(300g)

EQUIPOS UTILIZADOS
Balanza
de
Precision
Son instrumentos de medicin que permiten determinar la masa de un objeto
con una precisin de al menos 0,01 g.
Cocinilla Elctrica
Autoclave
Es un dispositivo que sirve para esterilizar material mdico o de laboratorio,
utilizando vapor de agua a alta presin y temperatura. Las autoclaves funcionan
permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua pero restringiendo su
salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa, lo cual provoca que el
vapor alcance una temperatura de 121 grados centgrados. Un tiempo tpico de
esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15 minutos.
Incubadora
Es una cmara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos. Se
utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura ptima
de crecimiento (generalmente 35-37).
Refrigerador
Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como
microorganismos. Generalmente estn a una temperatura fija de 4C.
Microscopio
Optico
Permite la observacin de organismos que no pueden ser apreciados en detalle
a simple vista, es decir de los microorganismos.

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PROCEDIMIENTO
1) Preparacin de medios de cultivo
AGAR SABOURAUND DEXTROSA
- Se pes y agreg 6.5 gr de Agar Sabouraund al matraz, luego 100ml de agua
destilada, y se coloc algodn a manera de tampn en la boquilla del Erlenmeyer.
- Se calent el matraz en una cocina elctrica hasta el punto de ebullicin con agitacin
constante.
- Una vez disuelto el agar, se dej enfriar el matraz cubriendo la boca de ste con
papel craft y un trozo de cordel.
AGAR ENDO
- Se pes y agreg 3.6 gr de Agar Endo al matraz, luego se verti 98ml de agua con
2ml de etanol, cubriendo la boca del Erlenmeyer con algodn.
- Se procedi a calentar el matraz en una cocina elctrica hasta el punto de ebullicin
con agitacin constante.
- Una vez disuelto el agar, se dej enfriar el matraz, cubriendo la boquilla con papel
craft
- Se realiz el proceso de autoclavado y fue almacenado en un refrigerador para su
uso.

AGAR SS
- Se verti 100ml de agua destilada en un matraz de Erlenmeyer
- Se pes y agreg 6 gr de Agar SS al matraz
- Se calent el matraz en una cocina elctrica hasta el punto de ebullicin con
agitacin constante.
- Una vez disuelto el agar, se dej enfriar el matraz
- Se coloc algodn a manera de tampn en la boquilla del matraz, luego se cubri la
boquilla con papel craft

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2) Preparacin de placas
Las placas Petri utilizadas fueron esterilizadas en la estufa a una temperatura de () por
()
AGAR SABOURAUND DEXTROSA, ENDO y SS
-

Se calienta el agar preparado en el matraz hasta volverlo lquido, luego se

deja enfriar hasta alcanzar una temperatura aproximada de 45C
Se realiza el vertido del medio en las placas Petri en presencia de un
mechero encendido para evitar posible contaminacin.
Se dejan enfriar las placas hasta que el medio se torn slido de nuevo.

AGAR MAC CONKEY

-

Se realiza la compra de 100ml de Agar Mac Conkey preparado en estado

solido
Se calenta el envase en una cocinilla elctrica hasta lograr el cambio de
estado
Se realiza el vertido del medio en las placas Petri en presencia de un
mechero encendido para evitar posible contaminacin.

3) Siembra e Incubacin
-

Se diluye 0.1 g de cada muestra de compost en 100 ml de agua destilada

para obtener una concentracin de 10^-3 g/ml.
Se realiza la siembra por agotamiento utilizando un asa de Kolle en presencia
de un mechero encendido para evitar contaminantes.
Las placas fueron puestas en la incubadora por 2 das

4) Tincion y vista microoscpica

- Se coloca una gotita de agua destilada sobre un portaobjeto limpio y seco
- Se calienta el asa de Kolle en el mechero hasta el rojo vivo, luego se extrae
una muestra de la colonia a observar y es diluida en la gotita del portaobjeto
- Se seca el agua del portaobjetos con la ayuda del mechero, calentndola hasta
que fastie el tacto, pero no queme la mano.
- Se realiza o bien una tincin simple (colonias de agar sabouraud) o una tincin
diferencial Gram

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Tincin Simple:
-

Se aplica una gota de Azul de Metileno a la muestra fijada

Se calienta ligeramente el portaobjetos para fijar el colorante
Finalmente, se enjuaga el portaobjetos con chorro de agua

Tincion Gram
Se aade cristal violeta, un colorante que tie todas las bacterias de color
prpura. Se debe dejar durante un minuto para que haga efecto.
Se lava la muestra coloreada con agua y se aade lugol. Es la parte ms
importante de la prueba, ya que si se deja demasiado tiempo se desteiran
todas las bacterias. Despus se lava de nuevo con agua para eliminar el
alcohol.
Se aade safranina, otro colorante que tie de rosa las bacterias que no se han
teido de color prpura. As se pueden observar al microscopio, aunque sern
gramnegativas.
AGAR SABOURAUND DEXTROSA

4. Resultados
Resultados

AGAR SS
Se obtuvieron las siguientes lecturas macroscpicas:

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Se compara lo observado con la tabla de control del agar:

Se obtiene:
Salmonella

Shigella

Compost 1

Negativo

Negativo

Compost 2

Negativo

Negativo

Compost 3

Positivo

Negativo

AGAR MAC CONKEY

Se obtuvo la siguiente tabla al realizar la vista macroscpica

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Se realiza la comparacin con la tabla control del agar

Compost 1

Compost 2

Agar Mac Conkey(0.001g/ml)

Color
Lactosa
Conclucion
Fucsia
Positivo
Negativ Precensia de
Marron
o
E.Coi
Rosado
Positivo
Negativ
Rosado amarillento
o
Precensia de
Fucsia
Positivo
E.Coi
Rosado

Compost 3

Blanca
Guindo

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Positivo
Negativ
o
Positivo

Precensia de
E.Coi

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AGAR ENDO
Las vistas macroscpicas de los 3 compost dieron positivo a E. Coli, pues presentaron
coloracin roja y un brillo metlico caracterstico.

5. Discusin

6. Conclusiones
Segn los resultados analizados; el compost n 1 (del mercado Las Flores) es
el que posee un mayor control de calidad a comparacin con los otros dos.
Se deduce, con la presencia de cocobacilos en las vistas microscpicas, que
nos indican supuestos Scherichia coli, por lo tanto el anlisis se realiz con un
90% de confiabilidad.
Segn las vistas microscpicas analizadas en los diferentes tipos de compost
existen mayormente bacilos gram -.
Cada uno de los compost posee el microorganismo patgeno Scherichia coli,
siendo el de mayor ndice el compost n 3 (Universidad Nacional de Ingeniera),
esto es con la certeza de un 90%.

7. Recomendaciones

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