Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiologa 2011; 31:156-161

RSVM

Artculo original
Deteccin de norovirus y rotavirus en ostras comercializadas en Cuman, Venezuela
Zhorymar Zambranoa, Antonio Maldonadob,*, Jess Bastardob
a

Departamento de Biologa, Universidad de Oriente, Ncleo de Sucre, Cuman, estado Sucre, Venezuela. bPostgrado en Biologa
Aplicada, Universidad de Oriente, Ncleo de Sucre, Cuman, estado Sucre, Venezuela.
Recibido 8 de abril de 2011; aceptado 3 de septiembre de 2011

Resumen: Los brotes de gastroenteritis en humanos han sido frecuentemente asociados con el consumo de moluscos bivalvos. En este
estudio se analizaron 15 mezclas de muestras de tejido digestivo de ostras (Pinctada imbricata) comercializadas en la avenida Perimetral de
&XPDQiHVWDGR6XFUH9HQH]XHODPHGLDQWHGRVPpWRGRVGHSURFHVDPLHQWR\GRVPpWRGRVGHH[WUDFFLyQGHiFLGRVQXFOHLFRVFRQHOQGH
detectar por Transcripcin Reversa de la Reaccin en Cadena de la Polimerasa, el ARN de norovirus y rotavirus. Adems se utilizaron cinco
pares de oligonucletidos para seleccionar el mejor en la deteccin de los virus. Norovirus fue detectado en 13 de las 15 mezclas de muestras
con la combinacin de los mtodos de procesamiento A y de extraccin de cidos nucleicos B utilizando el par de oligonucletidos JV12
\-9(VWDFRPELQDFLyQGHPpWRGRVUHVXOWyVHUODPiVHFD]SDUDODGHWHFFLyQGHQRURYLUXVPHGLDQWH573&51RREVWDQWHURWDYLUXV
no se detect en el tejido digestivo de las ostras analizadas con ninguna de las combinaciones de mtodos, ni con ninguno de los pares de
oligonucletidos utilizados. La elevada presencia de norovirus en las ostras mostr su potencial de servir como vehculo de infecciones por
virus entricos.
Palabras clave: norovirus, rotavirus, deteccin, ostras.

Norovirus and rotavirus detection in oysters commercialized in Cumana, Venezuela

Abstract: Gastroenteritis outbreaks in humans have been often associated with the ingestion of bivalve mollusks. In this study, 15 mixtures
of samples of the digestive tissue of oysters (Pinctada imbricate), commercialized at the Avenida Perimetral in Cumana, Sucre State,
Venezuela, were analyzed through two processing methods and two nucleic acid extraction methods, with the purpose of detecting norivirus
and rotavirus RNA by the Polymerase Chain Reverse Transcription Method. Five pairs of oligonucleotids were also used, to select the best
one for virus detection. Norovirus was detected in 13 of the 15 mixtures of samples using a combination of processing method A and nucleic
H[WUDFWLRQPHWKRG%DQGWKH-9DQG-9ROLJRQXFOHRWLGSDLU7KLVFRPELQDWLRQRIPHWKRGVUHVXOWHGDVWKHPRVWHIFLHQWIRUQRURYLUXV
detection through PCR-RT. Nevertheless, rotavirus was not detected in the digestive tissue of any of the oysters analyzed with any of the
combination of methods, or any of the oligonucleotid pairs used. The high presence of norovirus in the oysters showed their potential for
serving as carriers of enteric virus infections.
Keywords: norovirus, rotavirus, detection, oysters.
* Correspondencia:
E-mail: mcheo@yahoo.com

Introduccin
Los productos extrados del mar, como peces y moluscos,
constituyen una proporcin muy importante de los recursos
alimenticios a escala mundial [1]. Sin embargo, las constantes
descargas de aguas residuales en las zonas costeras han
trado como consecuencia la disminucin de la calidad
sanitaria del agua donde se desarrollan estos organismos,
contaminndolos con patgenos humanos como bacterias
o virus [2-4]. Esta situacin constituye un riesgo potencial
para la salud pblica derivado del consumo directo de los

organismos marinos como moluscos bivalvos, que por

VHU RUJDQLVPRV OWUDGRUHV \ SRVHHU XQ HOHYDGR ULWPR GH
bombeo, pueden convertirse en verdaderos concentradores
biolgicos capaces de acumular virus muy rpidamente
[2,5].
Entre los virus patgenos para el humano, que pueden ser
transmitidos por los moluscos bivalvos, se encuentran los
virus entricos (hepatitis A, poliovirus, rotavirus, norovirus,
astrovirus), los cuales son muy resistentes al ambiente
cido del estmago, a las condiciones bsicas del intestino
delgado y a las enzimas proteolticas [6]. De igual modo son

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resistentes a las condiciones adversas del medio ambiente

(p.e. temperatura, luz, humedad) [7]. La gastroenteritis
viral aguda es una enfermedad muy comn que puede ser
ocasionada por el consumo de ostras contaminadas con
virus entricos, fundamentalmente norovirus y/o rotavirus.
/RV QRURYLUXV KDQ VLGR LGHQWLFDGRV WDQWR HQ DJXDV
recreacionales como en tejidos de crustceos marinos
y los brotes de gastroenteritis en humanos han sido
frecuentemente asociados con el consumo de ostras crecidas
en aguas contaminadas por estos virus [7-10]. Por su parte,
ORVURWDYLUXVVHKDQGHWHFWDGRHQODVXSHUFLHGHODVDJXDV
en todo el mundo y tambin en moluscos bivalvos [11]. A
nivel mundial se han realizado estudios para detectar la
presencia de ambos virus en moluscos bivalvos [11-14] y en
Venezuela se han realizado estudios sobre deteccin de los
mismos, pero en muestras de heces de humanos y animales
[15-24]. Sin embargo, en el estado Sucre no existe reporte
alguno referente a la presencia de estos agentes virales en
muestras de organismos marinos.
Actualmente, la tcnica estndar ms utilizada en la
deteccin de virus en muestras de moluscos bivalvos ha sido
la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas
en ingls), que sin embargo, a pesar de su sensibilidad y
HVSHFLFLGDGSXHGHVHUDIHFWDGDSRULQKLELGRUHVSUHVHQWHV
en esas muestras [25]. Algunos investigadores han dedicado
estudios a la bsqueda de metodologas que permitan
eliminar estos agentes inhibidores, sin embargo, an no
se ha podido desarrollar un nico mtodo que sea fcil y
HFLHQWH SDUD P~OWLSOHV YLUXV >@ /DV PHWRGRORJtDV
desarrolladas hasta el momento estn basadas en procesos
VLFRTXtPLFRV TXH SHUPLWHQ FRQFHQWUDU \ SXULFDU ORV
virus a partir de la muestra de tejido y bsicamente constan
de tres etapas: 1) liberacin de los virus de los tejidos, 2)
concentracin de las partculas virales y 3) extraccin del
cido nucleico (ARN) [29].
Debido a la falta de informacin en esta regin del pas
sobre la presencia de norovirus y rotavirus en organismos
marinos, se realiz una investigacin en ostras, por ser
moluscos que normalmente se consumen crudos. Para ello se
investig molecularmente la presencia del ARN de norovirus
y rotavirus en tejido digestivo de ostras expendidas para
el consumo humano en la avenida Perimetral de Cuman,
estado Sucre, Venezuela y se compar la efectividad de
diferentes mtodos para el procesamiento de las muestras y la
extraccin de los cidos nucleicos de los virus estudiados.
Materiales y mtodos
Obtencin de muestras: Las ostras (Pinctada imbricata) se
obtuvieron crudas, por docenas, en los puestos de consumo
ubicados en la avenida Perimetral, sector El Monumento
de Cuman, donde fueron desbulladas y servidas por los
mismos expendedores. Las muestras fueron trasladadas
en envases de vidrio estriles bajo refrigeracin, en cava,
al laboratorio, donde se procedi a obtener por diseccin
los estmagos y divertculos digestivos. Cada 2 g de estos
tejidos represent una muestra, utilizando para este estudio

157

un total de 120 muestras, de las cuales se utilizaron 60 en

cada uno de los mtodos de procesamiento empleados.
Todas las muestras se mantuvieron a -70 C (Nuaire Ultralow
Freezer, Kyongkido, Korea del Sur) hasta el momento de la
deteccin del ARN viral.
Deteccin de ARN de rotavirus y norovirus: Para el anlisis
de las muestras de ostras se utilizaron diferentes mtodos
de procesamiento y de extraccin del cido nucleico,
VHJXLGRV GH OD DPSOLFDFLyQ SRU 573&5 \ YLVXDOL]DFLyQ
con electroforesis en geles de agarosa.
Procesamiento de muestras para ambos virus:
Mtodo A: Cada muestra se coloc en el envase de un
homogeneizador manual tipo Dunce (Potter Elvehjem
Dunce, Sigma, EUA) que contena 10 mL de buffer fosfato
salino (PBS; pH 7,4) y se homogeneiz a la mxima
velocidad (2.400 min-1) en un equipo IKA, modelo RW 20
DZM.n, EUA. El tejido se coloc en tubos de centrfuga
de 50 mL y luego se agregaron 6 mL de una solucin de
FORURIRUPREXWDQRO  YROYRO \  / GH &DW)ORF
T (Sigma). Se agit por inversin durante 5 minutos y se
dej reposar por 15 minutos a temperatura ambiente. Se
centrifug a 13.500 xg (centrfuga refrigerada IEC, modelo
B-22M, EUA) durante 15 minutos a 4 C, para luego
recuperar la fase acuosa y agregarle 6,5 mL de una solucin
de polietilenglicol PEG 6.000 (24%) con cloruro de sodio
(1,2 mol L-1). Seguidamente se agit por 1 hora a 4 C y
se centrifug durante 20 minutos a 11.000 xg a 4 C. Se
descart el sobrenadante y se resuspendi el precipitado en
3 mL de agua destilada [25].
Mtodo P: Cada muestra se homogeneiz en 10 mL
de buffer glicina estril 0,25 mol L-1, pH 10, en un
homogeneizador manual. La mezcla resultante se coloc en
frascos de vidrio estriles y se agit con magneto durante 10
PLQXWRV/DVPLVPDVVHWUDQVULHURQDWXERVGHFHQWULIXJD
de 50 mL y se centrifugaron a 2.500 xg por 5 minutos. Se
recuper el sobrenadante y se ajust a pH 7,4 [2].
Extraccin de cidos nucleicos (ARN):
Mtodo A: Se tomaron 1,5 mL de la muestra procesada y
VHDxDGLySURWHLQDVD.JP/-1, Sigma) en buffer PK,
dejndola actuar durante 30 minutos a 56 C. Los cidos
nucleicos fueron extrados con una solucin de fenol-aguacloroformo (68:18:14) y luego precipitados con etanol 100%
fro y acetato de sodio (3 mol L-1, pH 5,2). Se dej por 12
KRUDVD&\XQDYH]QDOL]DGRHVWHSURFHVRVHFHQWULIXJy
durante 30 minutos a 15.000 xg a 4 C. El precipitado
obtenido se resuspendi en agua a 56 C y se agreg
bromuro de cetil trimetil amonio (CTAB, por sus siglas en
ingls) (Sigma) y cloruro de sodio (NaCl) a concentraciones
QDOHV GH  \  PRO /-1, respectivamente. Esta
mezcla se incub a temperatura ambiente por 15 minutos
y luego se centrifug a 15.000 xg durante 30 minutos a 25
C. El nuevo precipitado se resuspendi en NaCl (1 mol
L-1) y fue sometido a una ltima precipitacin, para lo cual
se le agreg etanol 100% fro y acetato de sodio (3 mol

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L-1, pH 5,2). Se dej reposar durante 12 horas a -40 C y

se centrifug a 14.000 xg durante 30 minutos a 4 C. El
precipitado fue lavado con etanol 70% fro y se recuper
por centrifugacin. Se dej secar durante 15 minutos con
ORVWXERVDELHUWRV\VHUHVXVSHQGLyHQ/GHDJXDOLEUH
de nucleasas [25].
Mtodo B: Se prepararon tubos de reaccin colocando
 / GH EXIIHU / WLRFLDQDWR GH JXDQLGLQD 7ULV+&O
('7$\7ULWyQ[\/GHVtOLFDHVWpULODORVTXHVH
DJUHJDURQ/GHODPXHVWUDVHDJLWDURQYLJRURVDPHQWH
por 5 segundos y se dejaron por 10 minutos a temperatura
ambiente. Se agitaron de nuevo y se centrifugaron por 15
segundos a 13.500 xg. Luego se realizaron 5 lavados: dos
veces con buffer L2 (tiocianato de guanidina y Tris HCl),
dos con etanol al 70% fro y una vez con acetona 100% fra.
Luego se descart la solucin de lavado y los tubos abiertos
se dejaron secar a 56 C en un bao de agua circulante (SWB
5050 Shaking Water Bath, Labnet, National Company,
(8$ SRU  PLQXWRV 6H DJUHJDURQ  / GH DJXD OLEUH
de nucleasas para resuspender el precipitado, los tubos
cerrados se agitaron y se incubaron a 56 C en un bao de
agua. Se centrifugaron a 13.500 xg durante 2 minutos a 4 C
y se conserv el sobrenadante [30].
RT-PCR: 3DUD OD DPSOLFDFLyQ GH ORV iFLGRV QXFOHLFRV
extrados se utilizaron varios pares de oligonucletidos
>@GHSHQGLHQGRGHOYLUXVDLGHQWLFDUORVFXDOHV
UHFRQRFHQ\DPSOLFDQGLIHUHQWHVUHJLRQHVGHOJHQRPDGH
cada uno de ellos (Tabla 1). Debido a que se utilizaron varios
mtodos de procesamiento y de extraccin, se prepararon
GRVORWHVGHPH]FODVGH/TXHFRQWHQtDQ/GHFDGD
PXHVWUDPXHVWUDVPH]FODVFRQHOQGHUHGXFLUHOQ~PHUR

de reacciones de RT-PCR. Se utiliz el kit SuperScript

One Step RT-PCR with Platinum Taq (Invitrogen, EUA),
SDUD SUHSDUDU WXERV GH UHDFFLyQ FRQ  / GHO EXIIHU ;
5HDFWLRQ0L[/PRO/-1) de los oligonucletidos
VHQWLGR\DQWLVHQWLGR/GHOD573ODWLQXPTaq mix, 15
/GHDJXDOLEUHGHQXFOHDVDV\/GHODPXHVWUDGH$51
La reaccin de RT-PCR se llev a cabo en un termociclador
*HQH$03 3&5 6\VWHP  $SSOLHG %LRV\VWHPV
EUA) siguiendo el programa establecido para cada virus,
que consta de tres etapas: 1) retrotranscripcin (RT) a 48 C
durante 45 minutos (rotavirus) o 1 hora (norovirus) y 94 C
SRUPLQXWRVSDUDLQDFWLYDFLyQHQ]LPiWLFDDPSOLFDFLyQ
(PCR) la cual se llev a cabo realizando 35 ciclos a 94 C
por 30 segundos, 42 C (norovirus) o 55 C (rotavirus) por
VHJXQGRV\&SRUPLQXWRH[WHQVLyQQDOD
C durante 10 minutos [25].
(OFRQWUROSRVLWLYRSDUDQRURYLUXVVHSUHSDUyDPSOLFDQGR
PHGLDQWH573&5ODUHJLyQTXHFRGLFDODSROLPHUDVDGH
calicivirus de una muestra aislada en cerdos en el Laboratorio
de Biologa de Virus del Centro de Microbiologa y Biologa
Celular del Instituto Venezolano de Investigaciones
&LHQWtFDV,9,&XWLOL]DQGRORVFHEDGRUHV-9\19
>@/XHJRHVWHDPSOLFDGRIXHFORQDGRHQHOSOiVPLGR
S&57232 \ H[SDQGLGR HQ FpOXODV GH E. coli
WUDQVIRUPDGDVXWLOL]DQGRHOVLVWHPD72327$FORQLQJNLW
(Invitrogen; Carlsbad, CA, EUA). Dicho control recibi el
mismo tratamiento que las muestras. Como control negativo
se utilizaron clulas de E. coli no transformadas.
Electroforesis en gel de agarosa: /RVSURGXFWRVDPSOLFDGRV
para rotavirus y norovirus fueron analizados a travs de
electroforesis en gel de agarosa (Sigma) al 2% teido con

Tabla 1. Oligonucletidos utilizados para la deteccin de norovirus y rotavirus humanos en muestras de ostras mediante RT-PCR.
Oligonucletido

Secuencia (5-3)

Localizacin

JV12a

ATACCACTATGATGCAGATTA

4552-4572

JV13b

TCATCATCACCATAGAAAGAG

4858-4878

NVp36a

ATAAAAGTTGGCATGAACA

4487-4505

NVp35b

CTTGTTGGTTTGAGGCCATAT

49364956

GLPSG1a

GAIGGICTICCATCWGGITT

4715- 4737

GLPSG2

GARGGICTICCITCKGGIGTI

4715- 4737

ACIATYTCRTCATCICCRTA

4869- 4847

p289b

TGACAATGTAATCATCACCATA

4865-4886

p290

GATTACTCCAAGTGGGACTCCAC

4568-4590

CON1a

TTGCCACCAATTCAGAAT

666-685

CON2b

ATTTCGGACCATTTATAA

862-881

YGDD1

Amplicn
obtenido (pb)

Virus
DPSOLFDGR

Ref.

326

NV

32

470

NV

25

154

NV (GI)
NV (GII)
NV (GI y GII)

33

319 (NV)
300 (RV)

NV y RV

12

211

RV

31

sentido, bDQWLVHQWLGR19QRURYLUXV*,JHQRJUXSR,*,,JHQRJUXSR,,59URWDYLUXV5HIUHIHUHQFLDELEOLRJUiFD

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EURPXUR GH HWLGLR  J P/-1, Sigma). El marcador de

peso molecular utilizado fue 100 pb (Promega, EUA). La
corrida electrofortica se realiz a 85 V por 45 minutos.
Finalmente, los geles se colocaron en una cmara de luz
ultravioleta (Gel DocTM ;5 6\VWHP %LR5DG (8$ SDUD
REVHUYDU \ IRWRJUDDU ORV DPSOLFRQHV \ OXHJR IXHURQ
analizados para determinar el peso molar de cada uno por
comparacin con el control positivo y el marcador.
Resultados y discusin
Norovirus se detect en 13 de las 15 mezclas de muestras
analizadas por RT-PCR con la combinacin de los mtodos
de procesamiento A [25] y de extraccin B [30], utilizando
los oligonucletidos JV12 y JV13 (Figura 1), lo cual sugiere
que esta combinacin de mtodos pudo haber permitido una
mejor liberacin, concentracin y extraccin del ARN de
los virus presentes en las muestras de ostras (Tabla 2).

Figura 1. Productos de la RT-PCR para norovirus extrados con el mtodo

de procesamiento A y extraccin B, utilizando los oligonucletidos
JV12 y JV13. [carril 1, marcador de peso molecular; 3 al 17, mezclas de
muestras; 2 y 18, control positivo y negativo, respectivamente].
Tabla 2. Deteccin de norovirus en muestras de ostras mediante la
aplicacin de la RT-PCR, utilizando diferentes oligonucletidos y distintos
mtodos de procesamiento y extraccin.
Procesamiento

Extraccin

JV12JV13

NVp35NVp36

p289p290

GLPSYGDD1

A: Atmar et al. (1995), P: Pina et al. (1998), B: Boom et al. (1990).

El mtodo de procesamiento A tiene como caracterstica

principal la utilizacin de reactivos como el Cat-Floc y PEG
6000: el primero se utiliza para facilitar la eliminacin de
los restos de tejidos de la ostra mediante su aglutinacin,
mientras que el segundo es usado para precipitar protenas,
entre las cuales estn presentes las partculas virales. Con el
mtodo de procesamiento P [2], no se obtuvieron resultados
positivos, posiblemente debido a que muchas partculas
virales quedaron todava adheridas al tejido, reduciendo
as la concentracin necesaria de stas para la posterior
extraccin de su cido nucleico.
En cuanto a los mtodos de extraccin de cidos nucleicos,
el mtodo B [30] se bas en las propiedades de lisis e

159

inactivacin de nucleasas que tiene el agente tiocianato

de guanidina, junto a las propiedades de unin al cido
nucleico que tienen las partculas de slica en presencia de
dicho agente. Por otra parte, el mtodo de extraccin A [25]
estuvo basado en la digestin de las protenas con proteinasa
K y SDS, la extraccin del cido nucleico con fenolcloroformo, eliminacin de posibles inhibidores con CTAB
\SUHFLSLWDFLyQFRQSRVWHULRUSXULFDFLyQGHOiFLGRQXFOHLFR
con etanol. Los resultados obtenidos en esta investigacin
permiten presumir que, el mtodo B de extraccin de cidos
QXFOHLFRV IXH PiV HFD] SRU FRQVXPLU SRFR WLHPSR GH
trabajo, mientras que el mtodo A, al constar de ms etapas,
es un proceso ms largo y laborioso, lo que podra favorecer
la degradacin o contaminacin del cido nucleico.
Los oligonucletidos utilizados en este estudio, que
UHVXOWDURQ PiV HFLHQWHV SDUD OD GHWHFFLyQ GH QRURYLUXV
en muestras de ostras, fueron JV12-JV13 en combinacin
con los mtodos de procesamiento A y el de extraccin B.
Cabe destacar, que en esta investigacin se utilizaron otros
pares de oligonucletidos para la deteccin de norovirus,
GLVHxDGRV SDUD DPSOLFDU VHFXHQFLDV GH OD UHJLyQ PiV
conservada del genoma: la ARN polimerasa viral [17]; sin
embargo, la seleccin de un solo par de oligonucletidos
capaz de detectar todas las cepas se ha hecho muy difcil,
debido probablemente a la diversidad gentica de estos
virus.
No se detectaron rotavirus con ninguna de las
combinaciones de mtodos, ni con ninguno de los pares
de oligonucletidos usados. Se conoce que el par CON1&21 IXH GLVHxDGR SDUD OD GHWHFFLyQ HVSHFtFD GHO
JHQ  GH URWDYLUXV TXH DPSOLFD XQD UHJLyQ GHO JHQRPD
de apenas 211 pb, mientras el par de oligonucletidos
p289-p290, que fue originalmente diseado para detectar
norovirus y sapovirus, tambin detecta rotavirus por
UHDFFLyQ FUX]DGD DO DPSOLFDU OD UHJLyQ FRUUHVSRQGLHQWH
al gen 1 con un tamao aproximado de 300 pb [12,19,31].
Con base en estas informaciones es importante destacar
que, para trabajos posteriores, deben utilizarse otros juegos
GH ROLJRQXFOHyWLGRV TXH DPSOLTXHQ UHJLRQHV FRQ PD\RU
nmero de pares de bases que los utilizados en este estudio,
ya que podran aportar resultados ms favorables [35,36].
No existen muchos reportes sobre deteccin de este agente
viral en moluscos bivalvos, por lo que algunos estudios
se han basado en la deteccin de rotavirus en muestras de
PROXVFRVFRQWDPLQDGDVDUWLFLDOPHQWH>@7DPELpQVH
ha reportado que, para la deteccin por RT-PCR del ARN
de doble cadena de rotavirus en moluscos, es necesario un
SDVRSRVWHULRUGHSXULFDFLyQGHOiFLGRQXFOHLFRHQFHOXORVD
granular CC41 despus de la extraccin con la proteinasa K
y SDS [11], que no se realiz en este estudio.
Es importante que en estudios posteriores se incluyan
otros moluscos y se determine la calidad sanitaria de las
aguas de captura y de los sitios de venta a orillas del Golfo
de Cariaco en la avenida Perimetral de Cuman. En estos
sitios las ostras tradas en sacos desde las zonas de captura se
venden crudas, desbulladas por los mismos expendedores,
quienes las mantienen vivas remojndolas frecuentemente

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en la costa. Esta es un rea marina costera, urbana, que

recibe descargas de aguas de lluvia y servidas no tratadas
por canales que atraviesan diversos sectores de la ciudad
de Cuman, lo que la convierte en una fuente potencial de
contaminacin para estos moluscos.

7.

8.

Conclusiones
El consumo de las ostras crudas comercializadas en la
avenida Perimetral de Cuman involucra una potencial
exposicin a los norovirus, que son agentes etiolgicos
importantes de gastroenteritis en humanos de todas las
edades.
La no deteccin de rotavirus pudo deberse a que no
estuvieron presentes en las muestras, a que no se utilizaron
ORVSDUHVGHROLJRQXFOHyWLGRVTXHDPSOLFDUDQXQDUHJLyQ
mayor del genoma, o a que las tcnicas usadas para el
procesamiento y extraccin de cidos nucleicos no fueron
efectivas para la liberacin, concentracin y extraccin del
ARN bicatenario.
Los resultados plantean la necesidad de realizar una
investigacin ms amplia, para dar respuesta a las mltiples
interrogantes de inters epidemiolgico y sanitario que
surgieron con este primer estudio.
Agradecimientos
Al Consejo de Investigacin de la Universidad de Oriente
SRU HO QDQFLDPLHQWR GH HVWD LQYHVWLJDFLyQ D WUDYpV GHO
proyecto N CI-2-010101-1273/06. Al Laboratorio de
Biologa de Virus del Centro de Microbiologa y Biologa
Celular del Instituto Venezolano de Investigaciones
&LHQWtFDV ,9,& SRU HO DVHVRUDPLHQWR HQ OD SUHSDUDFLyQ
de los controles positivo y negativo para norovirus.

9.

10.

11.

12.

13.

14.

15.

16.

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