Tilmann Módulo 4 - Análise de Sementes

ESPECIALIZAO POR TUTORIA A DISTNCIA ABEAS/UFV
Curso: Cincia e Tecnologia de Sementes
PS-GRADUAO LATO SENSU POR TUTORIA A DISTNCIA

Especializao em Cincia e Tecnologia de Sementes
Mdulo 4 Anlise de sementes
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Mdulo 4 Analise de Sementes
1

DIRETORIA DA ABEAS
Presidente
Jos Geraldo de Vasconcelos Baracuhy
Universidade Federal de Campina Grande - UFCG
1 Vice-Presidente
Ricardo Antonio de Arruda Veiga
Universidade Estadual Paulista - UNESP/Botucatu
2 Vice-Presidente
Helmut Forte Daltro
Universidade Federal do Mato Grosso - UFMT
1 Tesoureiro
Pedro Roberto Azambuja Madruga
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
2 Tesoureiro
Raimundo Pinheiro Neto
Universidade Estadual de Maring - UEM/PR
1 Secretrio
Geraldo Andrade de Arajo
Universidade Federal de Viosa - UFV
2 Secretrio
Moacir Cerqueira da Silva
Universidade Federal Rural da Amaznia UFRA
COORDENAO DE CURSOS DA ABEAS

Coordenao Geral
Eng. Agr. Ronaldo Pereira de Sousa
Coordenao Pedaggica
Prof. Thelma Rosane de Souza
Esp. em Educao a Distncia
APOIO AO CURSO
Universidade Federal de Viosa - UFV
Universidade Federal de Campina Grande - UFCG
Universidade Federal de Pelotas - UFPel
Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz - ESALQ/USP/Piracicaba
Universidade de Braslia - UnB
Pontficia Universidade Catlica do Rio Grande do Sul - PUC/RS
Conselho Federal de Engenharia, Arquitetura e Agronomia - CONFEA
Caixa de Assistncia dos Profissionais do Sistema CONFEA/CREAs - MTUA
Associao Nacional de Defesa Vegetal - ANDEF
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CINCIA E TECNOLOGIA DE SEMENTES
Mdulo 4
Anlise de sementes
Tutores:
Profa. Dr. Maria ngela Andr Tillmann (FAEM/UFPel)
Prof: Eng. Agr. MSc. Denise Meza de Miranda (FAEM/UFPel)
Associao Brasileira de Educao Agrcola Superior ABEAS

Universidade Federal de Pelotas UFPel
Faculdade de agronomia Eliseu Maciel FAEM
Departamento de Fitotecnia D.Ft.
Brasilia DF
2007
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3

Ficha Catalogrfica
Associao Brasileira de Educao Agrcola Superior ABEAS
Anlise de sementes. Tutores: Maria ngela Andr Tillmann, Denise Meza de Miranda.
Braslia, DF: ABEAS; Pelotas, RS: Universidade Federal de Pelotas/Departamento de
Fitotecnia, 2007.
102p. il. (ABEAS. Curso de Cincia e Tecnologia de Sementes. Mdulo 4).
1. Anlise - de sementes. 2. De sementes - anlise. I. Tillmann Maria ngela Andr. II.
Miranda, Denise Meza. III. T.
proibida a reproduo total ou parcial deste mdulo
Direitos reservados a ABEAS e ao autor
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4

Pr-Teste
Indique se a afirmativa verdadeira (V) ou falsa (F):

1. Os principais testes realizados em laboratrio, para o controle de qualidade de um lote de
sementes, so o de pureza fsica e o de germinao ( ).
2. Os testes de laboratrio so padronizados para que os resultados obtidos em um mesmo lote, em
diferentes laboratrios, possam ser comparados entre si ( ).
3. O objetivo da amostragem de um lote obter uma quantidade de sementes representativa do
mesmo e com peso suficiente para a realizao das anlises ( ).
4. A amostra simples aquela obtida no LAS, por homogeneizao e reduo da amostra mdia
at o peso mnimo requerido, nunca inferior ao estabelecido nas RAS ( ).
5. Independentemente da espcie de sementes, a amostragem de um lote dever ser sempre
realizada por meios mecnicos ( ).
6. O objetivo da anlise de pureza determinar a qualidade de um lote de sementes quanto a sua
pureza varietal ( ).
7. Na anlise de pureza, consideram-se trs componentes: semente pura, outras sementes e
material inerte ( ).
8. O teste limitado o indicado para a realizao do exame de sementes nocivas no teste de
determinao de outras sementes por nmero ( ).
9. As 400 sementes utilizadas no teste de germinao so provenientes da frao semente pura da
anlise de pureza ( ).
10. O teste de germinao realizado em laboratrio, sob condies ambientais favorveis, de
modo a permitir informaes sobre o potencial mximo de germinao de um lote de sementes ( ).
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5

11. Quando temperaturas alternadas e luz so recomendadas para o teste de germinao, a luz
aplicada durante o regime de temperatura mais elevada ( ).
12. O teste de tetrazlio determina a viabilidade de um lote de sementes atravs da diferena de
colorao entre os tecidos vivos da semente que se colorem e os tecidos mortos que permanecem
descoloridos ( ).
13. No teste de verificao de espcies e cultivares, a determinao pode ser realizada sobre as
sementes, plntulas ou plantas cultivadas no laboratrio, casa-de-vegetao, cmaras de
crescimento ou no campo ( ).
14. O grau de umidade das sementes um dos fatores mais importantes a ser considerado para a
conservao da qualidade da mesma ( ).
15. O mtodo da estufa a 105C o mais utilizado no Brasil, sendo indicado para todas as espcies
de sementes, utilizando sementes modas ( ).
16. O resultado do grau de umidade das sementes obtido atravs da mdia de duas repeties por
amostra ( ).
17. O peso de 1000 sementes permite a obteno de dados para fins de densidade de semeadura (
).
18. Testes de vigor so usados, principalmente, para fornecer um ndice menos sensvel da
qualidade da semente que o teste de germinao ( ).
19. Na conduo dos testes de vigor, utilizam-se sementes provenientes da amostra mdia (
).
20. O teste de envelhecimento acelerado est baseado na relao existente entre o vigor de sementes
e a integridade do sistema de membranas celulares ( ).
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6

Sumrio
Introduo, 9
1. Amostragem, 10
1.1. Objetivo e importncia,10
1.2. Definies, 11
1.3. Homogeneidade do lote de sementes, 13
1.4. Peso mximo dos lotes, 14
1.5. Obteno de amostras representativas, 14
1.6. Tipos de amostradores e mtodos para amostragem dos lotes, 15
1.7. Intensidade da amostragem, 17
1.8. Pesos mnimos das amostras submetidas ou mdias, 18
1.9. Embalagem, identificao, selagem e remessa da amostra, 18
1.10. Obteno das amostras de trabalho, 18
1.11. Armazenamento das amostras, 20
2. Anlise de pureza, 21
2.1. Objetivo, 21
2.2. Definies, 21
2.3. Equipamentos e materiais, 22
2.4. Procedimento, 23
3. Determinao de outras sementes por nmero, 25
3.1. Objetivo, 25
3.2. Definies, 25
3.3. Informao dos resultados, 26
4. Verificao de espcies e cultivares, 27
4.1. Objetivo, 27
4.2. Princpios gerais, 27
4.3. Exame das sementes, 28
4.4. Exame em plntulas, 30
4.5. Exame das plantas em casa-de-vegetao ou cmara de crescimento, 31
4.6. Exame das plantas em parcelas de camp, 31
4.8. Mtodos para deteco e quantificao de sementes geneticamente modificada ,32
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7

5. Teste de germinao, 35
5.1. Objetiv, 35
5.2. Definio, 35
5.3. Condies para a germinao, 35
5.4. Materiais e equipamentos, 38
5.5. Condies sanitrias, 41
5.6. Metodologia, 42
6. Testes rpidos para determinar a viabilidade das sementes, 52
6.1. Teste de tetrazlio, 52
6.2. Teste de embries expostos, 58
6.3. Teste de raio X, 59
6.4. Teste do pH do exsudato, 60
7. Determinao do grau de umidade, 62
7.1. Objetivo e importncia, 62
7.2. Formas de gua na semente, 62
7.3. Mtodos para a determinao do grau de umidade, 63
8. Determinao do peso de 1000 sementes, 69
8.1. Objetivo, 69
8.2. Metodologia .69
9. Determinao do peso volumtrico, 71
9.1. Definio ,71
9.2. Procedimento, 71
9.3. Clculo e informao dos resultados, 71
10. Tolerncias, 73
11. Vigor, 74
11.1. Limitaes do teste de germinao, 74
11.2. Definies de vigor, 78
11.3. Objetivos bsicos dos testes de vigo, 79
11.4. Vigor e desempenho de sementes, 80
11.5. Testes de vigor, 86
12. Boletim de anlise de sementes, 92
12.1. Definies, 92
13. Laboratrio de anlise de sementes, 94
13.1. Definies, 94
13.2. planejamento e organizao, 94
Literatura consultada, 100
Respostas do Pr-Teste, 102
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8

Introduo
A anlise de sementes consiste em procedimentos tcnicos utilizados para avaliar a

qualidade e a identidade da amostra representativa de um lote de sementes, entendendo-se como
qualidade, o conjunto de atributos de natureza gentica, fsica, fisiolgica e sanitria.
Os resultados obtidos na anlise apresentam diversas finalidades, tais como, avaliar o
potencial de um lote de sementes; determinar o valor de lotes para a semeadura; fornecer dados para
etiquetar a embalagem; servir de base para a fiscalizao do comrcio e normatizao da produo;
servir de base para a compra, venda, beneficiamento, armazenamento, distribuio e descarte de
sementes; identificar problemas de qualidade e suas causas; alm de aferir a tecnologia empregada
ao longo de todo processo produtivo.
Assim, o Laboratrio de Anlise de Sementes o centro do controle de qualidade de uma
empresa de sementes, onde atravs dos diferentes testes realizados, adquire-se informaes sobre as
culturas quando estas esto em multiplicao, produo ou ainda por ocasio da colheita, secagem,
beneficiamento, tratamento e armazenamento das sementes (Figura 1).
Os procedimentos para a anlise de sementes foram estabelecidos tendo em vista
metodologias que apresentassem resultados seguros, precisos e uniformes.
As Regras para Anlise de Sementes (RAS) apresentam instrues para a realizao dos
testes para avaliar a qualidade das sementes: pureza fsica, verificao de espcies e cultivares,
determinao do nmero de outras sementes, germinao, tetrazlio, umidade, determinaes
adicionais, teste de sanidade e anlise de sementes revestidas. Tambm estabelecem o tamanho
mximo para os lotes de sementes e o peso mnimo das amostras mdias e de trabalho para a anlise
de pureza e determinao do nmero de outras sementes. As RAS objetivam a padronizao desses
procedimentos, de modo a permitir a comparao dos resultados dos testes entre diferentes
laboratrios e analistas, dentro de determinados limites de tolerncia.
As RAS devem ser utilizadas, obrigatoriamente, na avaliao da qualidade das sementes
produzidas e colocadas venda no comrcio do pas e, tambm, utilizadas na aplicao das leis
nacionais no controle de qualidade das sementes. A legislao prev a aplicao das Regras da
Associao Internacional de Anlise de Sementes (ISTA) quando se tratar de comrcio
internacional.
Este mdulo est baseado nas metodologias das Regras para Anlise de Sementes
regulamentada no Brasil e nas Regras da Associao Internacional de Anlise de Sementes, em
razo das intensas discusses entre os tecnologistas de sementes do pas sobre a possibilidade de
adoo das regras internacionais.
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PRODUO
ARMAZENAMENTO
COLHEITA
LABORATRIO
DE SEMENTES
TRATAMENTO
SECAGEM
BENEFICIAMENTO
COMRCIO
FISCALIZAO
DO COMRCIO
Figura 1 - Laboratrio de Anlise de Sementes como centro de controle de qualidade.
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1. Amostragem
1.1. Objetivo e importncia

O objetivo da amostragem de um lote de sementes obter uma amostra de tamanho
adequado que permita a realizao dos diferentes testes e que tenha na mesma proporo os
componentes do lote.
Como a amostra obtida muito pequena em relao ao tamanho do lote, essencial que sua
coleta se proceda segundo mtodos preestabelecidos e rigorosamente seguidos. Nos Boletins de
Anlise de Sementes fornecidos pelos LAS, os resultados refletem as caractersticas da amostra que
foi testada. Os ndices de qualidade das amostras sero correspondentes aos dos lotes de sementes
de onde elas foram obtidas, na mesma relao em que essas amostras representarem os respectivos
lotes. A porcentagem de sementes puras e de germinao obtidas de pequenas amostras, 500g e 400
sementes, respectivamente, iro informar sobre a qualidade de um lote de 25.000kg, se este for
homogneo (Figura 2). Se o lote no for homogneo ou se houver erro na amostragem, haver com
certeza informaes incorretas e comprometedoras, que podero beneficiar ou prejudicar os
interessados.
Amostragem em sementes de soja
Lote de 25.000kg = 200.000.000 sementes
Amostra mdia 1.000g = 8.000 sementes
Anlise de pureza 500g = 4.000 sementes
Teste Germinao com 400 sementes = 50g
Lote
AM
AT Outras
sementes
AM
Amostra de
Arquivo
AT
Pureza
Umidade
Semente pura
TZ
Germinao
Vigor
Peso 1000 Sanidade
Figura 2 - Esquema representativo da importncia da amostragem na anlise de um lote de sementes, onde AM amostra
mdia, AT amostra de trabalho e TZ teste de tetrazlio.
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11

1.2. Definies
1.2.1. Lote
Quantidade definida, identificada e homognea de sementes com atributos fsicos e
fisiolgicos semelhantes.
1.2.2. Amostras (Figura 3)
Amostra simples - cada pequena poro de sementes retirada por meio de

amostrador ou com a mo, de diferentes locais do lote, obedecendo intensidade de
amostragem.
Amostra composta - formada pela combinao e mistura de todas as amostras
simples retiradas do lote. Essa amostra usualmente bem maior que a necessria
para os vrios testes, necessitando ser reduzida antes de ser enviada ao laboratrio.
Amostra submetida ou mdia - aquela recebida pelo LAS para ser submetida
anlise e deve ter, no mnimo, o peso especificado no padro para a espcie em
questo (Tabela 1). , geralmente, resultante da homogeneizao e reduo da
amostra composta, podendo ser a prpria quando seu peso estiver de acordo com o
exigido.
Amostra de trabalho - obtida no LAS, por homogeneizao e reduo da amostra
submetida ou mdia, at o peso mnimo requerido, nunca inferior ao prescrito no
padro para os testes (Tabela 1).
Amostra de arquivo a amostra armazenada no laboratrio para eventual
reanlise ou elucidao de dvidas.
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12

LOTE
25.000kg (peso mximo)
Amostras simples
Amostra composta
Amostra mdia
Peso mnimo de 1000g
Amostra de trabalho
Peso mnimo de 500g
Outras
sementes
Semente
pura
Amostra de arquivo
Material
inerte
Figura 3 - Esquema representativo das etapas do processo de amostragem de um lote de sementes de soja.
1.3. Homogeneidade do lote de sementes

Um lote de sementes nunca perfeitamente homogneo. Mesmo que todas as sementes de
um lote provenham de uma nica lavoura, poder haver grande desuniformidade no mesmo, pois
nos campos de produo existem variaes no estande da cultura e, conseqentemente, variaes
nas quantidades de sementes de invasoras nocivas e de outras espcies cultivadas. Ou, ainda, a
colheita pode ser intercalada com perodos chuvosos, o que pode determinar modificaes nas
caractersticas da semente. Variaes no grau de umidade, na fertilidade do solo e na topografia do
terreno podem, tambm, propiciar variaes no desenvolvimento das sementes nas diferentes partes
do campo.
A homogeneidade de um lote de sementes determinada, principalmente, pelos cuidados
com que os produtores separam as sementes com caractersticas diferentes e na forma com que
manejado o equipamento de limpeza, classificao e secagem. Se um lote excessivamente
heterogneo e as diferenas entre as amostras de diversos sacos so visveis ao amostrador, a
amostra mdia obtida de acordo com as RAS no ser representativa e a amostragem desse lote
deve ser recusada. A transilagem, o rebeneficiamento e a reduo do tamanho do lote so medidas
empregadas para melhorar a homogeneidade do lote.
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13

1.4. Peso mximo dos lotes

O peso mximo de um lote de sementes no deve exceder ao indicado nas Regras
Internacionais (Tabela 1) para as espcies especificadas, sujeitas a uma tolerncia de 5%.
Lotes com quantidades maiores do que as indicadas devem ser subdivididos e receber outra
identificao antes de serem amostrados. As regras limitam o tamanho dos lotes de acordo com a
espcie e tamanho das sementes, na tentativa de se obter lotes mais homogneos.
Tabela 1 - Exemplos da tabela das Regras Internacionais onde constam os pesos mximos
dos lotes, pesos mnimos das amostras mdias, das amostras de trabalho para anlise de pureza e
determinao do nmero de outras sementes.
Espcie
Allium cepa
Avena sativa*
Brachiaria decumbens
Daucus carota
Glycine max*
Gossypium hirsutum*
Lolium multiflorum*
Medicago sativa
Oryza sativa*
Phaseolus vulgaris*
Sorghum bicolor*
Triticum aestivum*
Zea mays*
Peso mximo do lote

(kg)
10.000
25.000
10.000
10.000
25.000
25.000
10.000
10.000
25.000
25.000
10.000
25.000
40.000
Amostra mdia
(g)
80
1.000
100
30
1.000
1.000
60
50
400
1.000
900
1.000
1.000
Amostra de
Amostra de trabalho
trabalho para para determinao do
anlise de pureza no de outras sementes
(g)
(g)
8
80
120
1.000
10
100
3
30
500
1.000
350
1.000
6
60
5
50
40
400
700
1.000
90
900
120
1.000
900
1.000
* As indicaes para estas espcies esto em conformidade com os padres nacionais de sementes
institudos pela instruo normativa n 25 de 16/12/2005.
1.5. Obteno de amostras representativas

A amostragem de acordo com as Regras Internacionais deve ser executada por pessoas
treinadas, reconhecidas individualmente pelo LAS. O amostrador deve possuir um certificado de
proficincia na amostragem, reconhecido pelo chefe do laboratrio.
No Brasil, segundo o Sistema Nacional de Sementes e Mudas, a amostragem de sementes
para fins de certificao, ser efetuada por amostrador credenciado no Registro Nacional de
Sementes e Mudas RENASEM e quando exercida pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento ser executada por Fiscal Federal Agropecurio.
Durante a amostragem, o proprietrio do lote de sementes deve fornecer todos os dados para
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14

complementar a identificao do mesmo e disp-lo de tal modo que cada recipiente ou local do lote
possa ser amostrado. Se for evidente que o lote no homogneo, a amostragem no deve ser
efetuada.
No caso do proprietrio solicitar amostras extras para guardar, as mesmas sero retiradas por
ocasio da amostragem oficial, sendo lacradas e assinaladas com a palavra Duplicata.
As amostras simples devem ser retiradas do lote por meio de instrumentos apropriados, os
amostradores.
Quando a amostragem for realizada em sementes que deslizam com dificuldade nos
amostradores, como acontece com algumas gramneas e sementes com muita quantidade de
impurezas, a amostra poder ser extrada de forma manual.
Quando o lote est em recipientes (incluindo sacos), esses devem ser amostrados ao acaso e
as amostras simples devem ser retiradas da parte superior, mediana e inferior dos recipientes, mas
no necessariamente de mais de uma posio do mesmo recipiente.
Em lotes de sementes a serem embalados em recipientes pequenos (sacos de papel,
polietileno, latas), prefervel que a amostragem seja realizada antes da embalagem das sementes.
Para sementes j acondicionadas, um nmero suficiente de recipientes deve ser aberto e amostrado
e novamente fechado.
Em sementes armazenadas a granel, as amostras simples devem ser retiradas de diferentes
pontos do lote e em profundidades diferentes.
1.6. Tipos de amostradores e mtodos para amostragem dos lotes

1.6.1. Amostrador do tipo duplo
Consiste em dois cilindros ocos de metal que se ajustam perfeitamente um dentro do outro,
com uma extremidade slida e afilada, providos de aberturas ou janelas iguais que podem ser
justapostas, por meio da rotao do cilindro interno.
Ao amostrar sementes em sacos, os seguintes tamanhos de amostradores so apropriados:
para trevo e outras sementes pequenas que deslizam facilmente, 76,2cm de comprimento, com
dimetro externo de 1,27cm e nove aberturas; para cereais, 76,2cm de comprimento com dimetro
externo de 25,4cm e seis aberturas.
Amostradores para sementes a granel so mais longos, de 1,5 a 2,0m de comprimento,
3,8cm de dimetro e 6 a 9 aberturas.
O amostrador deve ser inserido diagonalmente na massa de sementes, em ngulo de 30
graus com a superfcie na posio fechada, isto , com as aberturas dos cilindros desencontradas e,
uma vez aberto, deve ser girado algumas vezes at que fique completamente cheio de sementes. Em
seguida, deve ser fechado e retirado do saco, despejando-se as sementes em recipiente apropriado.
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1.6.2. Amostrador do tipo simples - Amostrador Nobbe

Este tipo de amostrador serve para coletar amostras de sementes acondicionadas em sacos e
pode ser construdo em diferentes dimenses, de acordo com as espcies de sementes.
Consiste em um cilindro afilado, suficientemente longo para alcanar o centro da
embalagem, com uma abertura oval prxima extremidade afilada e com um cabo perfurado, por
onde as sementes so descarregadas.
O comprimento total do amostrador deve ter 50cm, incluindo o cabo de 10cm e a ponta de
cerca de 6cm, ficando livre cerca de 34cm do cilindro, suficientes para alcanar a parte central do
saco. Para os trevos e sementes semelhantes, o dimetro interno do cilindro dever ter 1,0cm e para
os cereais, em geral, 1,5cm.
Ao utilizar esse tipo de amostrador, deve-se ter o cuidado de introduzi-lo diagonalmente no
saco, com a abertura voltada para baixo.
No permitido o uso desse tipo de amostrador quando seu comprimento total no
ultrapassa 25cm, pois suas caractersticas no preenchem as exigncias da amostragem, sendo o
mesmo denominado de ladro ou furador.
1.6.3. Recipiente para amostragem durante o beneficiamento
A amostragem tambm pode ser realizada durante o processo de beneficiamento de um lote,
utilizando-se recipientes que podem ser movimentados manual ou mecanicamente atravs da
corrente de sementes. As amostras devem ser coletadas em intervalos regulares durante todo o
processo.
Outra forma de amostragem pode ser realizada durante o ensaque das sementes, utilizandose um dispositivo que automaticamente retira pores de sementes em determinados intervalos de
tempo.
1.6.4. Amostragem manual
As espcies de sementes que no deslizam com facilidade, como as gramneas palhentas,
algodo com lnter, amendoim com casca, lomentos de Stylozanthes e algumas sementes de
espcies arbreas, devem ser amostradas manualmente.
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1.7. Intensidade da amostragem

1.7.1. A granel ou no fluxo
Tabela 2 - Intensidade da amostragem em funo do peso do lote, em produto a granel ou no fluxo.
Peso do lote (kg)
N. de amostras simples
At 50
3 (mnimo)
51 a 500
5 (mnimo)
501 a 3.000
1 a cada 300kg, no menos que 5
3.001 a 20.000
Acima de 20.000
1.7.2. Em sacos, tambores ou outros recipientes

Tabela 3 - Intensidade da amostragem em funo do nmero de recipientes constituintes de um
lote.
N. de recipientes do lote
At 5
6 a 30
31 a 400
Acima de 401
N. de recipientes amostrados
= amostras simples
Todos, pelo menos 5
1 a cada 3, pelo menos 5
1.7.3. Em pequenos recipientes

Recomenda-se que o peso mximo de 100 quilos seja tomado como unidade bsica e os
recipientes pequenos sejam combinados de maneira a formar essas unidades de amostragem da
seguinte forma:
- 20 recipientes de 5 quilos;
- 33 recipientes de 3 quilos;
- 100 recipientes de 1 quilo;
- 1.000 recipientes de 100g;
- 10.000 recipientes de 10g.
A amostragem realizada nas unidades bsicas deve ser realizada tomando-se recipientes
inteiros e fechados.
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1.8. Pesos mnimos das amostras submetidas ou mdias

Os pesos mnimos das amostras submetidas ou mdias a serem enviadas ao LAS acham-se
especificados nas Regras Internacionais (Tabela 1).
No caso da amostra ser menor do que a prescrita, o amostrador deve ser notificado e a
anlise suspensa at que semente suficiente seja recebida em uma nova amostra mdia. Exceo
para o caso de semente muito cara, cuja anlise pode ser completada tanto quanto possvel e a
seguinte declarao inserida no certificado: A amostra mdia pesou apenas .... gramas e no est
de acordo com as Regras.
1.9. Embalagem, identificao, selagem e remessa da amostra

O tipo de embalagem para a remessa das amostras mdias ao LAS deve ser de material
resistente, para que no se rompa durante o transporte e deve proteger as sementes contra calor,
umidade ou contaminao por doenas e pragas. O papel Kraft multifoliado, papelo, algodo, so
alguns tipos que podem ser utilizados. Cada amostra deve ser identificada de maneira que se possa
estabelecer sua conexo com o respectivo lote. No caso de amostras cujos resultados sero relatados
em Boletim, a embalagem dever ser selada.
Amostras destinadas ao teste de germinao devem estar acondicionadas em embalagens
permeveis. No caso de ser solicitada a determinao do grau de umidade e/ou peso hectoltrico, as
amostras devem ser remetidas separadamente, em embalagens impermeveis e hermeticamente
fechadas.
O rgo responsvel pela coleta das amostras deve envi-las sem demora ao LAS e, no caso
de amostras oficiais, essas no devem ser deixadas aos cuidados de pessoa no autorizada. Se as
sementes forem tratadas quimicamente (fungicidas ou inseticidas), devem ser fornecidos, junto com
a amostra, o nome do produto, ingrediente ativo e dosagem utilizada.
1.10. Obteno das amostras de trabalho

A amostra mdia, ao chegar ao LAS, deve ser protocolada e homogeneizada, pois durante o
transporte poder sofrer estratificao. Deve ser reduzida a uma ou mais amostras de trabalho (de
acordo com os testes a serem realizados), de peso igual ou ligeiramente maior que os estipulados
nas RAS.
Quando for requerida uma duplicata da amostra, essa deve ser retirada independentemente,
isto , depois de retiradas as amostras de trabalho.
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As sementes restantes da amostra mdia constituiro a amostra de arquivo e devem ser

armazenadas prontamente em locais apropriados, prova de umidade e calor.
Na reduo da amostra mdia so utilizados mtodos mecnicos e manuais.
1.10.1. Mtodo mecnico
Adequado para todas as sementes que deslizam com facilidade. Independente do aparelho
utilizado, o cuidado com sua limpeza interna de fundamental importncia antes de cada operao.
O uso de divisores mecnicos elimina o efeito da ao do analista no resultado da homogeneizao
e reduo.
A amostra mdia dever ser passada no mnimo duas vezes pelo divisor para ser
homogeneizada e recomposta antes da diviso propriamente dita, que realizada por meio de
repetidas passagens das sementes pelo divisor removendo-se, em cada vez, metade da poro. O
processo de divises sucessivas repetido at que se obtenha a amostra de trabalho de peso
aproximado, mas nunca inferior ao exigido para a espcie.
a) Divisor cnico (tipo Boerner) - confeccionado em dois tamanhos, um maior para
sementes iguais ou maiores que as de trigo e um menor para sementes menores. Consiste de uma
moega cnica ou alimentador, de um cone invertido e de uma srie de lminas separadoras que
formam canais iguais na largura e no comprimento. Uma vlvula na base da moega retm as
sementes, as quais devem ser despejadas no centro da moega. Ao abrir a vlvula, as sementes caem
por gravidade sobre o cone, sendo distribudas para os canais, alternadamente, e conduzidas para
duas bicas opostas situadas na base do aparelho. Pode causar danos mecnicos para algumas
espcies de sementes e apresenta dificuldades para sua limpeza, sendo essa facilitada pelo uso do ar
comprimido.
b) Divisor centrfugo (Gamet) - utiliza a fora centrfuga. A amostra inteira colocada no
alimentador e, aps, o aparelho acionado. As sementes caem da moega para um receptculo de
borracha em forma de taa, o qual, girando a determinada velocidade, atravs de um motor eltrico,
atira as sementes para um compartimento cilndrico fechado. Esse compartimento fixo e dividido
em duas partes iguais. Uma metade conduz as sementes a uma bica e a outra metade para outra bica.
A amostra dividida em duas pores aproximadamente iguais. O divisor pode dar resultados
variveis, se no estiver corretamente nivelado por meio dos ps regulveis.
c) Divisor de solo - confeccionado em dois tamanhos, sendo as sementes conduzidas por
gravidade. Consiste de uma moega com canais alternados dispostos em direes contrrias, um
suporte para a moega e trs ou cinco recipientes iguais que servem para a coleta e retorno das
sementes ao divisor. de fcil limpeza e apresenta grande facilidade no transporte. As sementes
devem ser uniformemente despejadas por toda a extenso da moega, usando-se um dos recipientes
de comprimento igual ao da mesma para que as sementes, por gravidade, distribuam-se
simultaneamente por todos os canais. Esse divisor adequado para espcies de sementes palhentas.
________________________________________________________________________________________________________________________
19

1.10.2. Mtodo manual

Na impossibilidade do uso de mtodos mecnicos, a reduo da amostra mdia deve ser
realizada manualmente, respeitando o princpio das divises sucessivas em que so baseados os
divisores.
a) Mtodo modificado da separao ao meio - consiste em um tabuleiro quadrado ou
retangular, dividido em nmero par de compartimentos quadrados e iguais que so, alternadamente,
providos de fundo. Depois de manualmente homogeneizada, a amostra mdia uniformemente
esparramada sobre o tabuleiro e esse, ao ser levantado, retm aproximadamente metade da amostra,
deixando a outra metade sobre a mesa. Desse modo, a amostra repetidamente dividida at a
obteno do peso desejado.
b) Mtodo manual da separao ao meio - restrito s sementes palhentas, com ganchos,
espinhos ou alas (exemplos: Andropogon, Arrhenatherum, Astrebla, Brachiaria, Oryza) e para
alguns gneros de rvores e arbustos. Aps a homogeneizao da amostra mdia, essa colocada
sobre uma mesa limpa, formando um amontoado, o qual dividido ao meio. Cada metade
novamente dividida, resultando quatro pores, as quais so novamente divididas e separadas em
duas fileiras de quatro. Conservam-se na mesa duas pores de cada fileira, que so combinadas
alternadamente, sendo as demais removidas. Esse procedimento repetido tantas vezes quantas forem
necessrias.
1.11. Armazenamento das amostras

Antes e aps a anlise, todo o esforo deve ser feito para que a amostra recebida seja
conservada, mantendo-se inalterada, sendo tambm importante iniciar a anlise no dia da chegada
da amostra no LAS. Se isso no for possvel, necessrio reduzir ao mnimo o tempo transcorrido
entre a amostragem e a anlise.
Se houver necessidade de armazenamento da amostra antes da anlise, esse deve ser feito
em local adequado, de modo que no ocorram alteraes na qualidade das sementes, como no grau
de umidade, dormncia e germinao.
Aps a retirada das amostras de trabalho necessrias para os testes, as sementes
remanescentes da amostra mdia iro constituir a amostra de arquivo. As amostras analisadas,
especialmente as destinadas anlise oficial, devem ter suas amostras de arquivo correspondentes e
serem guardadas por um ano da data da emisso do Boletim.
As amostras devem ser armazenadas, preferencialmente, em locais com controle de
temperatura e umidade relativa. O LAS no pode, entretanto, ser responsabilizado pelo declnio da
porcentagem de germinao durante o armazenamento das amostras de arquivo.
________________________________________________________________________________
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2. Anlise de pureza
2.1. Objetivo
Entre os mais significativos testes para avaliar a qualidade fsica da semente esto o de
pureza fsica e ocorrncia de outras espcies cultivadas ou silvestres.
O objetivo da anlise de pureza determinar:
- a composio da amostra em exame e, conseqentemente, a do lote de sementes;
- a identidade das diferentes espcies e a natureza do material inerte que compem a
amostra.
Na anlise de pureza, consideram-se trs componentes: semente pura, outras sementes e
material inerte e a porcentagem de cada componente determinada pelo peso. Todas as espcies de
sementes e cada tipo de material inerte presente devem ser identificados tanto quanto possvel.
2.2. Definies
2.2.1. Sementes puras
So consideradas sementes puras todas as sementes da espcie em exame, indicada pelo
remetente ou identificada como predominante na amostra, devendo ainda ser includas nesta poro
todas as cultivares desta espcie.
Alm das sementes inteiras, maduras e no danificadas das espcies e cultivares em exame,
devem ser includas como puras as sementes que se encontrem nas seguintes condies:
- sementes inteiras de tamanho inferior ao normal, enrugadas, imaturas, trincadas, em incio
de germinao, desde que possam ser identificadas como sendo da espcie em exame;
- fragmentos de sementes quebrados, porm maiores do que a metade de seu tamanho
original;
- sementes levemente atacadas por molstias desde que seja possvel identific-las com
preciso como pertencentes espcie em exame.
As especificaes para as diferentes famlias e gneros esto descritas em detalhes nas RAS.
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2.2.2. Outras sementes

Todas as outras sementes (espcies cultivadas, silvestres, nocivas toleradas e proibidas) que
no sejam as da espcie em exame.
2.2.3. Material inerte
O material inerte compreende outros materiais que no sejam sementes, tais como,
partculas de solo e areia, pedras, palhas, pedaos de tegumento ou pericarpo, pedaos de plantas,
fragmentos menor ou igual a metade do tamanho original das sementes (sementes de leguminosas
partidas ao longo dos cotildones).
2.3. Equipamentos e materiais

Entre os equipamentos e materiais necessrios anlise de pureza, podem-se citar:
- divisores mecnicos do tipo Boerner, Gamet e divisor de solos;
- balanas de torso, analticas, eltricas, mecnicas ou digitais de diferentes capacidades e
sensibilidades;
- sopradores destinados a separar materiais leves, como palhas e antcios vazios de sementes
e pseudo-sementes de gramneas, das sementes mais pesadas, sendo que existem diferentes tipos de
sopradores, construdos em formatos e tamanhos diferentes; o soprador de sementes deve
proporcionar corrente de ar uniforme e meios para sua calibrao, alm de compartimentos para
reter todas as partculas separadas;
peneiras: um ou mais conjuntos com diferentes malhas;
diafanoscpio usado para algumas espcies de gramneas, permitindo verificar a
presena de endosperma na semente (cariopse protegida pelas glumas, lemas e
pleas) em qualquer estdio de desenvolvimento e isso pode ser conseguido fazendose passar a luz atravs da lema e plea e outras estruturas, quando presentes;
microscpio estereoscpico com diversos aumentos e, de preferncia, com objetiva
rotativa;
lupas de mesa com diferentes aumentos;
pinas (de ponta reta ou curva, fina ou grossa), esptulas, estiletes, pincis, coletores
de amostras, placas de Petri ou outros recipientes que facilitem a separao;
fichas de anlise e outros materiais para registro e clculo de resultados.
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2.4. Procedimento
2.4.1. Procedimento para uma amostra de trabalho inteira
Separao dos componentes - a mesa de trabalho dever estar completamente limpa e nela
a amostra deve ser conferida quanto autenticidade dos dados do remetente com relao espcie.
Quando se notar a presena de substncias inertes (palhas, p, antcios vazios de sementes e
pseudo-sementes de gramneas, sementes imaturas), de acordo com a espcie em exame, pode-se
usar peneiras de diversas malhas ou soprador para uma separao preliminar. Depois, com a ajuda
da esptula ou pina, inicia-se o exame criterioso e a separao em grupos distintos dos trs
componentes: sementes puras, outras sementes e material inerte.
Identificao - os laboratrios devem possuir mostrurios de sementes com amostras
devidamente catalogadas em famlias e, dentro dessas, por ordem alfabtica, em gneros e espcies.
Esse procedimento facilitar uma das mais importantes fases da anlise de pureza, que a
identificao das sementes encontradas. necessria tambm bibliografia especializada, com
chaves dicotmicas e fotografias ou outras ilustraes que permitam correta identificao das
sementes. Nessa identificao, dever ser indicada a espcie; se isso no for possvel, pelo menos o
gnero ou a famlia.
Registros na ficha de anlise - terminada a identificao, as outras sementes encontradas
so contadas e anotadas na ficha de anlise; se possvel, com o nome comum seguido do cientfico,
ou somente esse ltimo.
Pesagem - pesar os trs componentes separadamente: semente pura, outras sementes e
material inerte.
Clculo - a soma do peso total dos componentes (peso final) deve ser comparada com o
peso inicial da amostra, para verificar se no houve excessivo ganho ou perda de peso durante o
manuseio. Essa diferena no deve exceder a 5% do peso inicial. Se o ganho ou a perda for maior
do que 5%, nova anlise de pureza deve ser realizada.
A porcentagem em peso de cada componente deve ser informada com uma casa decimal. As
porcentagens devem ser baseadas na soma dos pesos dos componentes e no no peso original da
amostra de trabalho.
Componentes com menos de 0,05% devem ser considerados como trao e excludos do
clculo, as outras fraes devem somar 100%. Se a soma no igualar 100% (99,9 ou 100,1), ento
adicione ou subtraia 0,1 do maior valor (normalmente da frao semente pura).
Se uma correo maior do que 0,1% for necessria, deve ser observado se houve erro de
clculo.
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Exemplo: Trigo
g
Peso Inicial
120,5
///////
Semente Pura
119,0
98,8 (+ 0,1)
Outras Sementes
0,4
0,3
Material Inerte
1,0
0,8
Peso Final
120,4
100%
5%
6,0
. Comparao entre o peso inicial e o peso final da amostra

- 5% do peso inicial corresponde a 6,0;
- a diferena entre o peso inicial e o peso final :
120,5 - 120,4 = 0,1 < 6,0;
- portanto, no houve perda excessiva de peso durante a anlise de pureza.
Obs.: Se houver discrepncia maior do que 5% do peso inicial, novo teste deve ser
realizado e seu resultado informado.
. Clculo da porcentagem de pureza
120,4g __________ 100%
119,0g __________ x
x = 98,8%
. Clculo da porcentagem de outras sementes
120,4g __________ 100%
0,4g __________ x
x = 0,3%
. Clculo da porcentagem de material inerte
120,4g __________ 100%
1,0g __________ x
x = 0,8%
2.4.2. Informao dos resultados
As porcentagens de semente pura, outras sementes e material inerte devem ser informadas
com uma casa decimal.
Quando a porcentagem de algum componente for menor do que 0,05% deve ser anotada
como Trao e, se o resultado for zero, deve ser indicado como 0,0. A porcentagem de todos os
componentes deve totalizar 100, desconsiderando as fraes relatadas como Trao.
O nome cientfico da espcie em exame e das outras sementes encontradas, bem como o tipo
de material, deve ser informado.
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3. Determinao de outras sementes por nmero
3.1. Objetivo
O objetivo dessa anlise estimar o nmero de sementes de outras espcies definidas pelos
padres (outras espcies cultivadas, silvestres e nocivas).
3.2. Determinaes
3.2.1. Outras espcies cultivadas
Outras espcies cultivadas encontradas na amostra, diferentes da espcie em anlise. Essa
determinao realizada simultaneamente anlise de pureza.
3.2.2. Sementes silvestres
Sementes invasoras silvestres encontradas na amostra. Essa determinao realizada
simultaneamente anlise de pureza.
3.2.3. Nocivas toleradas
So aquelas cuja presena na amostra permitida dentro de limites mximos especficos e
globais estabelecidos por lei. O resultado obtido pela soma das sementes nocivas toleradas
encontradas na anlise de pureza com as obtidas na anlise da amostra complementar utilizada para
atingir o peso do padro para a determinao de Outras Sementes por Nmero.
3.2.4. Nocivas proibidas
So aquelas cuja presena no permitida nos lotes de sementes, sua presena na amostra
suficiente para a recusa do lote. O resultado obtido pela soma das sementes nocivas proibidas
encontradas na anlise de pureza com as obtidas na anlise da amostra complementar utilizada para
atingir o peso do padro para a determinao de Outras Sementes por Nmero.
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3.3. Informao dos resultados

Informar o nome e o nmero de sementes encontradas na determinao de outras sementes
por nmero. Relatar o nome cientfico da espcie em itlico ou sublinhado, bem como o nmero de
sementes encontradas entre parnteses. Exemplos:
a) Outras espcies cultivadas: Zea mays (1), Phaseolus vulgaris (3);
b) Sementes silvestres: Bidens pilosa (2), Cardiospermum halicacabum (1);
c) Nocivas toleradas: Chenopodium lbum (1), Anthemis cotula (3);
d) Nocivas proibidas: Rumex acetosella (1), Cuscuta sp..
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4. Verificao de espcies e cultivares
4.1. Objetivo
O objetivo determinar a extenso pela qual a amostra mdia de sementes est de acordo
com a espcie ou com a cultivar indicada. Essa determinao valida somente se o remetente da
mesma identifica a espcie e a cultivar, bem como se o laboratrio dispe de uma amostra padro autntica
para efetuar a comparao. Os caracteres a serem comparados podem ser morfolgicos, fisiolgicos,
citolgicos ou qumicos e usam outros mtodos no permitidos na anlise de pureza. Essa anlise dever ser
realizada sempre que os padres de qualidade da espcie incluir tolerncias mximas de outras espcies
e outras cultivares.
4.2. Princpios gerais

No Brasil, essa verificao realizada somente para soja, feijo e feijo caupi, conduzida
em conjunto com a anlise de pureza e o resultado expresso em nmero por peso da amostra de
trabalho.
A determinao pode ser realizada sobre as sementes, plntulas ou plantas cultivadas no
laboratrio, casa-de-vegetao, cmaras de crescimento ou em campo.
Para o caso de espcies e cultivares que sejam uniformes em um dos vrios caracteres de
identificao (espcies autgamas), efetua-se contagem das sementes, plntulas ou plantas noautnticas. Para espcies algamas, realiza-se contagem de todos os indivduos claramente atpicos e se
emite um resultado sobre a autenticidade da amostra em exame (Tabela 4).
Tabela 4 - Relao dos pesos mnimos das amostras mdias para os testes de laboratrio e de campo,
dos principais gneros cultivados.
Gnero
Glycine, Lupinus, Pisum, Phaseolus, Vicia, Zea e outros de tamanho semelhante
Avena, Hordeum, Secale, Triticum e outras de tamanho semelhante
Beta e outras de tamanho semelhante
Outros gneros
Laboratrio
(g)
1.000
500
250
100
Campo e
laboratrio
(g)
2.000
1.000
500
250
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4.3. Exame das sementes

Para determinar a porcentagem de sementes que est de acordo com a espcie e cultivar
indicadas, a amostra de trabalho dever ser de, no mnimo, 400 sementes (4 x 100) tomadas ao
acaso de uma amostra mdia, de acordo com as RAS.
Para observar os caracteres morfolgicos como tamanho e cor das sementes e do hilo (soja)
e forma da semente, base da lema, cor, pregas da lema e da plea (cereais), so necessrios
aparelhos adequados (lupas), a luz do dia ou a luz de um espectro limitado como, por exemplo, luz
ultravioleta. Em aveia e cevada, a cor das sementes quando observadas com luz ultravioleta , em
geral, til para sua identificao.
Para a observao das caractersticas qumicas, as sementes podero ser tratadas com um
reagente apropriado e a reao de cada semente anotada.
Teste do Fenol - as cultivares se diferenciam medida que suas sementes se colorem ao
serem tratadas com soluo de Fenol a 1%. A colorao se processa devido a algumas enzimas
presentes na superfcie externa da semente causarem oxidao do fenol, mostrando uma colorao
escura. A intensidade da oxidao caracterstica da cultivar e, por isso, a intensidade da colorao
varia de uma cultivar para outra. A reao do fenol muito importante para garantir a autenticidade
do trigo; mas, tambm pode servir para separar cultivares de aveia, centeio, cevada e algumas
forrageiras.
Nesse teste, as sementes so embebidas em gua e, a seguir, transferidas para papel secante
onde permanecem 40 a 60 minutos. Aps, so colocadas sobre papel filtro umedecido com 5ml de
soluo de cido fnico a 1% para trigo e 2% para cevada, por exemplo. A colorao das sementes
observada aps 4 a 24 horas de tratamento. Algumas espcies colorem rapidamente, enquanto que
outras no. A temperatura de 20-30C adequada para o trigo. Para cevada, necessria
temperatura mais alta. Antes da avaliao, as sementes necessitam ser lavadas e secas.
Teste de Lugol - utilizado para o gnero Lupinus. Sementes de algumas cultivares desse
gnero possuem um alcalide e sua presena constitui elemento de identificao de cultivares
quando as sementes so tratadas com lugol. O mtodo simples, primeiramente, as sementes so
embebidas em gua por 24 horas. A seguir, lminas delgadas dos cotildones so retiradas e
colocadas sobre superfcie branca e sobre elas, adiciona-se 1 ou 2 gotas da soluo de lugol. A
presena de colorao marrom avermelhado nessas lminas indica a presena do alcalide.
Teste de peroxidase - este teste bastante utilizado no Brasil. A identificao das diferentes
cultivares de soja em laboratrio muito difcil quando se trabalha apenas com os aspectos
morfolgicos da semente. A peroxidase uma enzima que est presente no tegumento das sementes
de soja e pode apresentar desde alta atividade (positiva) em algumas cultivares, at baixa atividade
(negativa) para outras.
O procedimento para esse teste simples. Separam-se, inicialmente, os tegumentos das
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sementes de cada cultivar em estudo e esses so colocados em tubos de ensaios separados.

importante salientar que nenhum pedao do embrio ou dos cotildones deve permanecer aderido
aos tegumentos.
Em cada um dos tubos de ensaio que contenham os tegumentos, colocam-se 10 gotas de
soluo de guaiacol a 0,5% por 10 minutos e, em seguida, 1 gota de soluo de perxido de
hidrognio (H2O2) de 40 volumes. Aps 1 minuto, realiza-se a avaliao. A reao ser considerada
positiva (+) se colorao pardo-escura for formada e negativa (-) se no ocorrer nenhuma alterao
de cor.
Eletroforese - dentro das tcnicas de laboratrio para identificao da pureza varietal, a
eletroforese tem demonstrado ser de grande aplicao prtica e excepcional versatilidade, alm da
rapidez dos resultados.
A grande maioria dos estudos sobre molculas de interesse bioqumico e biolgico e seu
regime de separao, envolve pelo menos uma das vrias formas de eletroforese. O interesse nos
mtodos eletroforticos para identificao de espcies e cultivares aumentou nos ltimos anos, pois
atravs desse mtodo, tem sido possvel identificar as diferentes cultivares ou grupos de cultivares
em laboratrios, as quais tinham anteriormente que ser levadas a testes de campo por no ser
possvel sua identificao apenas atravs da prpria semente.
Esse mtodo est baseado no fato de que molculas como as de DNA, RNA e protenas so
eletricamente carregadas e, portanto, hbeis de se deslocar quando colocadas em campo eltrico.
Diferentes cargas eltricas tm sido usadas para separar essas substncias individuais, possibilitando
a caracterizao, por exemplo, das protenas que so polmeros de aminocidos sintetizados
biologicamente nas clulas e que funcionam como enzimas, componentes estruturais e de materiais
de reserva. Essa caracterizao ocorre pela formao de bandas que so estveis e especficas em
sua distribuio e intensidade para cada cultivar. Geralmente, cada cultivar possui um nico padro
eletrofortico das protenas ou enzimas, os quais devem ser observados por colorao ou
espectrofotometria. Os procedimentos de colorao so acessveis a grande nmero de enzimas
promovendo, assim, uma visvel observao das bandas ou zimogramas que caracterizam as
diferentes cultivares.
Para o sucesso do mtodo de eletroforese, necessrio que a amostra representativa da
cultivar seja colocada em meio estvel que no reaja com a mesma, ou retarde os movimentos das
molculas de protenas ou enzimas para a formao das bandas. Esse meio quimicamente inerte o
gel de poliacrilamida.
Os processos eletroforticos mais empregados pelos diferentes pesquisadores so os de
"forma de placas" (horizontal ou vertical) ou de "forma de disco". Nesse processo, o composto
usado para a formao do gel de acrilamida polimerizado entre duas placas de vidro de formato
retangular. Antes da polimerizao, um perfurador em forma de pente colocado sobre uma das
extremidades da placa inferior, o qual ir moldar os tubos no gel onde ocorrer o processo
eletrofortico. Aps a polimerizao, esse pente removido, deixando os tubos perfeitamente
modulados na acrilamida. A vantagem dessa tcnica que vrias amostras de diferentes cultivares
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29

podem sofrer o processo de eletroforese ao mesmo tempo, em uma nica placa de acrilamida e
dentro de um nico processo eletrofortico. Aps a leitura ou observao das bandas, o gel por
inteiro pode ser plastificado e, assim, guardado por um determinado perodo de tempo.
J para o de forma de disco, a tcnica mais trabalhosa, requer mais tempo e mais
onerosa. realizada em equipamento onde o processo eletrofortico das diferentes cultivares ocorre
em tubos de ensaios individualizados. O princpio bsico o mesmo para ambos os processos,
mudando apenas a tcnica de preparo do teste. A vantagem desse mtodo permitir melhor
observao das bandas, possibilitando refazer apenas uma das amostras em caso de dvidas (no
sendo necessrio gastar muito gel) e de conservao, pois o processo como um todo, para cada
cultivar, pode ser armazenado por mais de um ano, sem qualquer alterao dentro do prprio tubo
de ensaio.
H pelo menos trs mtodos para avaliao das bandas de eletroforese: anlise
espectrofotomtrica, determinao do valor de Rf e zimogramas.
Nas Regras Internacionais consta, atravs da eletroforese, o mtodo padro de referncia
para a identificao de variedades de trigo, cevada, ervilha, azevm e milho.
4.4. Exame em plntulas

A amostra de trabalho para este exame dever ser tambm de, no mnimo, 400 sementes
obtidas de forma idntica para o exame em sementes.
As sementes sero colocadas a germinar em 4 repeties de 100. Quando as plntulas
alcanarem estdio de desenvolvimento adequado, sero examinadas em parte ou em sua totalidade,
com ou sem tratamento adicional.
Entre os cereais, alguns deles podem ser classificados quanto cor de seus coleptilos que
podem variar da cor verde violeta, dependendo da quantidade de antocianina presente. Essa
caracterstica mais comum em trigo, porm variaes genticas podem tambm ocorrer no
centeio. A colorao pode ser intensificada pelo umedecimento do substrato com soluo de HCl ou
NaCl 1% ou iluminando-se as plntulas com luz ultravioleta por 1 a 2 horas, antes de efetuar-se a
observao.
Algumas cultivares de beterraba podem ser classificados pela cor da plntula.
Plntulas de soja apresentam diferenas de cor no hipoclito, conforme a cultivar.
Para as Brassicas spp (nabo e nabo forrageiro), pode-se distinguir as cultivares de polpa
branca das de polpa amarela pela cor dos cotildones. As sementes, nesse caso, so colocadas a
germinar no escuro a 20-30C por 5 dias. A seguir, so transferidos os cotildones para placas de
Petri contendo lcool a 85-96% e colocados sobre uma superfcie branca. Quatro horas depois, a
observao da cor pode ser realizada.
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Na maioria das cultivares de Lolium multiflorum, os traos de razes das plntulas mostram
fluorescncia sob a luz ultravioleta, enquanto que para as cultivares de Lolium perene isso no
ocorre.
4.5. Exame das plantas em casa-de-vegetao ou cmara de crescimento

A amostra de trabalho constituda de um nmero suficiente de sementes para produzir,
pelo menos, 100 plantas. As sementes devem ser semeadas em recipientes apropriados e mantidos
sob condies necessrias para o desenvolvimento dos caracteres de diagnstico. Quando as plantas
atingem estdio de desenvolvimento adequado, as caractersticas especficas devem ser observadas
em cada planta e anotadas.
4.6. Exame das plantas em parcelas de campo

No campo, a amostra mdia deve ser semeada, ao todo ou em parte, com pelo menos duas
repeties junto s parcelas utilizadas como referncia. As repeties devero situar-se em campos
diferentes ou em diferentes pontos do mesmo. As parcelas podero ser de qualquer tamanho, mas a
distncia entre linhas e entre plantas dever ser observada para permitir o completo
desenvolvimento das caractersticas que se quer observar.
As observaes dos caracteres das plantas devero ser realizadas durante todo o perodo de
desenvolvimento das mesmas. Entretanto, no perodo que se segue ao espigamento (cereais) ou ao
comeo da florao (outras espcies) que se manifestam mais claramente as diferenas entre as
plantas que pertencem a cultivares diferentes. Nessa ocasio, deve ser realizada contagem das
plantas que se reconheam como pertencentes outra cultivar, outra espcie ou aquelas que
apaream como aberrantes.

No Boletim de Anlise os resultados devem ser informados sob Outras Determinaes.
Para laboratrio, casa-de-vegetao ou cmara de crescimento, o nmero de sementes,
plntulas ou plantas examinadas deve ser declarado.
O resultado do exame de sementes e/ou plntulas deve ser informado como porcentagem de
sementes ou de plntulas estranhas.
O resultado do exame da parcela de campo, quando possvel, deve ser informado como
porcentagem de cada outra espcie, cultivar ou aberrante encontrado. Se a proporo de plantas de
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outras cultivares presentes em uma amostra exceder 15%, a informao deve adicionar que a
amostra consiste de uma mistura de diferentes cultivares.
Se, excepcionalmente, uma amostra de controle de autenticidade no foi testada para
comparao, tambm deve ser declarado.
4.8. Mtodos para deteco e quantificao de sementes geneticamente modificada

A presena constante de sementes de plantas GM em lotes de sementes convencionais
tornou-se um crescente problema para o comrcio internacional e, em alguns casos, acarretando em
srias conseqncias para as empresas exportadoras que comercializam estas sementes. Por isso,
importante que tenhamos em mos, metodologias para diferenciar esses produtos, objetivando
atingir as exigncias do mercado.
A Instruo Normativa n25 de dezembro de 2005, que apresenta os novos padres de
sementes de algodo, estabelece a porcentagem mxima de 1% da presena adventcia de
organismo geneticamente modificado em amostras de sementes convencionais.
Na deteco de sementes de plantas geneticamente modificadas podem ser utilizados vrios
mtodos: teste de ELISA (Enzime Linked Immunosorbant Assay) que detecta protenas especficas
contidas nas sementes de plantas GM; tcnicas de PCR (Polimerase Chain Reaction) que emite
resultados qualitativos mediante a deteco da presena de seqncias especficas de DNA; kits,
testes rpidos desenvolvidos para detectar a protena CP4 EPSPS na folha ou gro e bioensaios que
avaliam caractersticas fenotpicas das plntulas.
A ISTA credencia os laboratrios baseado no seu desempenho (Performed Based
Approach), tendo como princpio que mesmo utilizando diferentes metodologias, resultados
verdadeiros e reproduzveis podem ser alcanados entre diferentes laboratrios em nvel
internacional. Para conferir se o laboratrio est avaliando adequadamente o lote de sementes, o
certificador prepara amostras com distintas contaminaes e as envia ao laboratrio para sua
determinao; e, independentemente do(s) mtodo(s) que este utilizar, se sua determinao estiver
correta, ser credenciado. Assim, o credenciamento do laboratrio baseado no seu desempenho e
no na capacidade de seguir um protocolo universal previamente estabelecido, como as Regras para
Anlise de Sementes.
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Bioensaios
Sero abordadas apenas as metodologias dos bioensaios indicadas para soja. O bioensaio
um mtodo de resultados diretamente quantificveis, fundamentado na caracterizao fenotpica das
plntulas, constituindo-se em alternativa prtica para uso em rotina no Laboratrio de Anlise de
Sementes por ser conduzido de forma similar ao teste de germinao..
As sementes so expostas ao herbicida durante o teste de germinao, permitindo que na
avaliao as plntulas originadas de sementes convencionais apresentem sintomas no
desenvolvimento, comprimento, cor ou outra caracterstica que as distinguem das geneticamente
modificadas. O glifosato causa anormalidade em plntulas de soja no geneticamente modificada.
As plntulas apresentam engrossamento, estrias longitudinais e amarelecimento gradativo do
hipoctilo, inibio do desenvolvimento da raiz primria e da emisso de razes secundrias, sendo
o hipoctilo proporcionalmente maior do que a raiz primria.
Podem ser conduzidos das seguintes metodologias: substrato umedecido, imerso das
sementes em soluo de herbicida, pr-embebio em substrato com herbicida, pulverizao de
plntulas em casa-de-vegetao e em sistema hidropnico.
a) Pr-embebio das sementes em substrato umedecido com soluo de herbicida
As amostras (duas subamostras de 50 sementes) so pr-embebidas em papel germitest
umedecido com soluo herbicida por 16 horas a 25C. Aps, so transferidas para substrato
umedecido com gua destilada e mantidas em germinador regulado a 25C. Este procedimento no
afeta o desenvolvimento das plntulas de soja GM e permite facilmente a diferenciao dos
gentipos GM e no-GM atravs das caractersticas morfolgicas das plntulas (Figura 4).
Plntulas
no-GM
Plntula
GM
Figura 4 - Diferenciao entre plntula de soja GM e no-GM.
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33

b) Substrato umedecido com soluo de herbicida

As amostras so semeadas diretamente no substrato umedecido com soluo herbicida,
permanecendo nesta condio durante todo o perodo do teste, em germinador a 25C.
c) Imerso das sementes em soluo de herbicida
As sementes so imersas em soluo herbicida por uma hora a 25C. Depois, lavadas em
gua corrente, semeadas em substrato umedecido com gua destilada e mantidas em germinador,
regulado a 25C. O mtodo de imerso no se mostrou eficiente na distino entre os gentipos GM
e no-GM.
d) Pulverizao das plntulas com herbicida em casa-de-vegetao
Semear em areia colocada em bandejas plsticas, com profundidade suficiente para permitir
o desenvolvimento das plntulas. O umedecimento do substrato consiste em 60% de sua capacidade
de campo. As bandejas so mantidas em casa-de-vegetao com ambiente controlado e, aps quinze
dias da instalao do experimento, aplica-se a soluo de herbicida glifosato sobre as plntulas. A
avaliao realizada com o aparecimento dos sintomas da aplicao do herbicida.
O produtor pode realiz-lo em canteiros, sem a necessidade de ambiente controlado e de
submeter suas sementes anlise laboratorial.
e) Sistema hidropnico
O protocolo recomendado para deteco de sementes de soja GM em sistema hidropnico
a permanncia das sementes em contato com a soluo do herbicida por quatro horas, seguido da
transferncia das sementes para soluo nutritiva at completar cinco dias, utilizando como
parmetro de avaliao o comprimento de plntulas e a presena de razes secundrias das plntulas
de soja GM.
f) Mtodo colorimtrico baseado na atividade da enzima peroxidase
As sementes de soja so submetidas ao tratamento de pr-embebio por 16 horas em
soluo de herbicida e mantidas em germinador temperatura de 25C por seis dias. A seguir,
realizada a extrao de protenas totais do sistema radicular das plntulas. Aps o processo de
extrao, adiciona-se guaiacol e depois de 10 minutos, gua oxigenada.
possvel a diferenciao visual das amostras atravs da colorao marrom avermelhada
presente nas amostras provenientes da cultivar GM. Na cultivar no-GM possvel observar a
ausncia total de colorao nas amostras.
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34

5. Teste de germinao
5.1. Objetivo
O objetivo do teste de germinao determinar o potencial mximo de germinao de um
lote de sementes, o qual pode ser usado para comparar a qualidade de diferentes lotes e estimar o
valor da semente para a semeadura.
A metodologia empregada pelos laboratrios padronizada, onde condies controladas de
alguns ou de todos os fatores externos permitem a obteno de uma germinao mais rpida, regular
e completa dentro do menor perodo de tempo para a maioria das amostras de sementes de
determinada espcie. A utilizao dessas condies padronizadas, consideradas timas, permite
tambm a obteno, reproduo e comparao dos resultados nos diferentes laboratrios.
5.2. Definio
Germinao, em teste de laboratrio, a emergncia e o desenvolvimento da plntula at
determinado estdio, onde o aspecto de suas estruturas essenciais indica se a mesma ou no capaz
de se desenvolver posteriormente em planta normal, sob condies favorveis de campo. Assim, o
resultado de germinao, relatado no Boletim de Anlise, corresponde porcentagem de sementes
que produziram plntulas normais.
5.3. Condies para a germinao

Para que uma semente germine so necessrias condies adequadas de umidade, aerao,
temperatura e luz.
5.3.1. Umidade e aerao
O fornecimento de gua condio fundamental para que a semente inicie e desenvolva
normalmente o processo de germinao. O aumento das atividades respiratrias da semente, em
nvel capaz de sustentar o crescimento do embrio, com o fornecimento suficiente de energia e de
substncias orgnicas, depende do grau de hidratao de seus tecidos. H um teor de gua que a
semente deve atingir, o qual varia com a espcie, permeabilidade do tegumento, disponibilidade de
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35

gua, temperatura, presso hidrosttica, rea de contato semente/gua, foras intermoleculares,

composio qumica e condio fisiolgica da semente.
O substrato utilizado para a germinao deve, portanto, estar suficientemente mido durante
todo o perodo do teste, a fim de proporcionar s sementes quantidade necessria de gua para sua
germinao, mas no deve ser to molhado a ponto de formar uma pelcula de gua em torno da
semente, restringindo sua aerao.
A quantidade de gua a ser adicionada no substrato no incio do teste depende de sua
dimenso e natureza e da espcie de semente. A quantidade tima deve ser determinada por
experimentao. Para o clculo da quantidade de gua a ser adicionada ao substrato de papel, por
exemplo, pode ser utilizada a relao volume de gua (ml) por peso de substrato (g). Resultados de
pesquisa mostram que, para a maioria das sementes de gramneas, deve ser adicionado volume de
gua em quantidade equivalente a 2-2,5 vezes o peso do substrato. Para a maioria das sementes de
leguminosas, essa relao de 2,5-3,0.
J o substrato de areia, depois de peneirado, quando usado para sementes maiores
(leguminosas e milho) deve ser umedecido a 60% de sua capacidade de reteno, enquanto que para
as sementes de cereais menores, a 50% de sua capacidade de reteno.
A adio subseqente de gua deve ser evitada tanto quanto possvel, visto que aumenta a
variabilidade entre repeties e entre testes.
A fim de evitar a perda de gua por evaporao e manter o substrato mido durante todo o
perodo do teste, a umidade relativa ao redor das amostras (dentro do germinador) deve ser de 90 a
95%, utilizando-se para isso, umidificadores automticos ou quantidade suficiente de gua na cuba
do germinador. J a perda de umidade nos testes com solo ou areia pode ser evitada utilizando-se
caixas de germinao (gerbox) com tampa ou cobertura com plstico ou papel toalha umedecido.
Cuidados quanto circulao de ar podem ainda ser necessrios sempre que o germinador
estiver sobrecarregado com espcies de germinao rpida e muito vigorosa, ou quando houver
excessiva condensao de umidade sobre as plntulas. Condies de pouca aerao podem
dificultar a germinao ou ocasionar a deteriorao das plntulas.
5.3.2. Temperatura
A germinao da semente compreende diversas fases, as quais so afetadas individualmente
pela temperatura, mas em geral, o que se observa o efeito global da mesma no desenvolvimento e
crescimento da plntula. O uso da temperatura adequada um dos fatores mais importantes para
que ocorra a germinao de uma semente. Ainda que no exista um valor especfico, geralmente, trs
pontos crticos podem ser identificados:
- Temperatura mnima - aquela abaixo da qual no h germinao visvel em perodo de
tempo razovel;
- Temperatura mxima - aquela acima da qual no ocorre a germinao;
- Temperatura tima - aquela na qual ocorre o mximo de germinao dentro do menor
________________________________________________________________________________
36

perodo de tempo.
A maioria das sementes de espcies cultivadas germina sob limites relativamente amplos de
temperatura, enquanto que outras apresentam exigncias mais restritas. Em geral, a temperatura
considerada tima para cada espcie est situada sempre mais prxima temperatura mxima. A
soja, por exemplo, pode germinar de 8C a 40C, mas sua temperatura tima est situada entre
os 25 e 30C.
As temperaturas especificadas nas RAS para o teste de germinao foram estabelecidas
atravs de pesquisas, determinadas de acordo com a espcie. Observa-se que a maioria das sementes
germina bem em temperatura constante de 20C ou em temperaturas alternadas de 20-30C. Em
ambos os casos, constantes ou alternadas, elas devem permanecer to uniformes quanto possvel no
interior do germinador. No caso de temperatura constante, a variao devida ao termostato no deve
ser maior do que 1C em cada perodo de 24 horas. Para as alternadas, a temperatura mais baixa
deve ser mantida durante 16 horas (perodo noturno) e a mais alta por 8 horas (perodo diurno).
Quando a temperatura alternada a indicada para uma espcie de semente no dormente, uma
mudana gradual de at 3 horas considerada satisfatria. J para as sementes que apresentam
dormncia, essa mudana deve ser rpida, no mximo em 1 hora. Se o tipo e/ou qualidade do
termostato no permitir essa mudana rpida de temperatura, recomenda-se a troca diria das
amostras entre dois germinadores previamente regulados nas temperaturas desejadas.
5.3.3. Luz
A maioria das espcies de sementes germina tanto em presena de luz como no escuro,
sendo necessria para a germinao das sementes de muitas espcies de gramneas forrageiras e
hortalias, principalmente as recm-colhidas. Mesmo quando no indicada nas RAS, a iluminao
durante o teste, seja de fonte natural ou artificial, geralmente recomendada, a fim de favorecer o
desenvolvimento das estruturas essenciais das plntulas, facilitando sua avaliao. Com o uso da
luz, pode-se ainda evitar o aparecimento de plntulas estioladas e hialinas mais sensveis ao ataque
de microrganismos, bem como detectar certos defeitos como a deficincia de clorofila. Entretanto,
ainda que o uso da luz seja necessrio para a germinao de muitas espcies de sementes, h
tambm algumas poucas espcies, como Phacelia tanacetifolia, que podem apresentar inibio da
germinao quando em presena da luz.
A luz, quando prescrita para a germinao, deve ser bem distribuda por toda a superfcie do
substrato e empregada durante 8 horas a cada ciclo de 24 horas e, quando fornecida sob o regime de
temperaturas alternadas, deve ser proporcionada conjuntamente com a temperatura mais alta.
Podem ser utilizadas tanto a luz natural como a artificial, desde que no provoquem
alterao da temperatura dentro do germinador ou secagem excessiva do substrato. A luz
fluorescente fria e branca (com alta emisso de radiao vermelha) promove a germinao mais
efetivamente do que a luz solar ou proveniente de filamentos incandescentes (lmpada comum) que
contm radiao vermelho extrema, prxima ao infravermelho, a qual inibidora da germinao.
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37

A intensidade da luz de 750 a 1250lux satisfaz as exigncias de todas as sementes sensveis

luz. Para as no-sensveis, a intensidade da luz pode ser de 250lux.
5.4. Materiais e equipamentos

5.4.1. Substrato
So escolhidos considerando-se o tamanho das sementes avaliadas, sua exigncia quanto
umidade, sensibilidade luz e facilidade para o desenvolvimento das plntulas at o estdio para a
avaliao correta do teste.
Os tipos de substrato mais comumente usados so: papel (papel toalha, papel mata-borro e
papel filtro), areia e solo.
Papel toalha - empregado em forma de rolo (RP rolo de papel) o mais indicado para
espcies de sementes como soja, milho, feijo, arroz e aveia, variando seu tamanho de acordo com o
tamanho das sementes.
Papel mata-borro - utilizado para espcies de sementes de tamanhos menores, como as de
forrageiras e olercolas. A designao de SP (sobre papel) e EP (entre papel), indicada pelas RAS,
est diretamente relacionada s espcies mais ou menos sensveis luz, respectivamente.
Papel filtro - o menos utilizado nos testes comuns de germinao e, quando isso acontece,
emprega-se para sementes de forrageiras, olercolas e algumas florestais e/ou ornamentais
pequenas.
O importante nesses tipos de substratos que devem ser isentos de substncias txicas
solveis em gua, fungos e bactrias que possam interferir na germinao; apresentar poder de
absoro e reteno de gua adequados e ndice de pH de 6,0 a 7,5. Sua estrutura deve ser tal que as
razes se desenvolvam sobre e no atravs de sua superfcie.
A avaliao da qualidade desse tipo de substrato feita comparando-se sempre um estoque
antigo, de qualidade conhecida e aceitvel, com a nova partida, observando-se o desenvolvimento
do sistema radicular das plntulas durante a primeira contagem, quando os efeitos so mais visveis.
Espcies como Phleum pratense, Agrostis gigantea, Eragrostis curvula so conhecidas por serem
sensveis ao papel txico, podendo ser usadas para a avaliao da qualidade do mesmo.
Pano - nas Regras Internacionais este substrato no indicado, embora no Brasil seja
recomendado para espcies de sementes de tamanho grande como amendoim, algodo e caf. Esse
substrato pode apresentar dificuldades na avaliao do teste, pois se as malhas do tecido no forem
suficientemente fechadas, sero atravessadas tanto pelas razes como pela parte area das plntulas.
Outro inconveniente a necessidade de lavagem, esterilizao e secagem para que possa ser
reutilizado.
Areia - deve ser isenta de substncias txicas e microrganismos, previamente lavada,
esterilizada e peneirada (passar por peneira com orifcio de 0,8mm de dimetro e ficar retida em
________________________________________________________________________________
38

outra de 0,05mm). Apesar de indicada para algumas espcies, no utilizada rotineiramente devido
s dificuldades para instalao do teste, por ocupar grande espao no interior do germinador e
apresentar problemas de manuteno da limpeza do laboratrio. , entretanto, recomendada sua
utilizao quando houver dvidas em algum teste, principalmente quanto toxidez (reanlise).
Deve ainda apresentar pH 6,0 a 7,5, ser lavada e esterilizada antes de sua utilizao. A areia
pode ser utilizada diversas vezes, mas antes de ser reutilizada, deve ser lavada, seca e reesterilizada.
Solo - pode substituir a areia, isto , ser utilizado em casos de dvidas nos testes normais.
Deve ser de boa qualidade, livre de partculas grandes, outras sementes, fungos, bactrias,
substncias txicas e nematides que possam interferir na germinao, crescimento e avaliao das
plntulas. Deve tambm apresentar pH 6,0 a 7,5 e no ser reutilizado. Esse tipo de substrato apresenta
dificuldade de padronizao, sendo dificilmente empregado pelos analistas.
Obs.: Nos testes com areia ou solo as sementes no devem ser cobertas, apenas comprimidas
contra o substrato.
5.4.2. gua
A gua utilizada nos testes deve ser livre de impurezas orgnicas e inorgnicas e apresentar
pH 6,0 a 7,5. Pode ser utilizada gua destilada ou deionizada. Quando for utilizada a gua destilada,
maior aerao das sementes necessria devido deficincia de oxignio da mesma.
5.4.3. Contadores de sementes
Normalmente dois tipos de contadores so encontrados nos laboratrios: tabuleiro contador
(placas perfuradas) e contador a vcuo.
Tabuleiro contador - utilizado para sementes maiores, como feijo, milho e soja. Seu
tamanho aproxima-se ao tamanho do substrato a ser usado e pode conter 100, 50 ou 25 orifcios de
tamanho e forma semelhantes espcie de semente a ser analisada.
Contador a vcuo - utilizado para espcies cujas sementes possuem forma regular e so
relativamente lisas, como as de cereais e espcies de Brassicas e Trifolium. As placas desse tipo de
contador contm 50 ou 100 orifcios, cujo dimetro deve estar em correspondncia com o tamanho
da semente e do vcuo aplicado.
5.4.4. Germinadores
Embora bastante variveis quanto ao tamanho, sistema empregado para acomodao das
amostras, dispositivos adotados para controle de temperaturas, luz, umidade relativa do ar interna e
outros detalhes, os germinadores mais usados na grande maioria dos laboratrios so:
Germinador de cmara - composto de uma cmara de paredes adequadamente isoladas
para diminuir as variaes bruscas da temperatura interna e um conjunto de bandejas. Seu fundo
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39

serve como depsito para gua destilada que deve ser mantida em nvel adequado, proporcionando
umidade relativa interna de 90-95%.
Os modelos mais simples possuem apenas um sistema de aquecimento constitudo de
resistncia eltrica ligada ao termostato, o qual permite o controle de temperatura interna. Os mais
modernos consistem de uma ou duas cmaras com autonomia de isolamento, dotadas de sistema de
aquecimento, refrigerao e circulao de gua e/ou ar no seu interior. Possuem sistema de
iluminao e mecanismo para controle automtico de alternncia da temperatura. Podem
permanecer no ambiente do laboratrio e proporcionar maior diversificao de testes devido aos
seus sistemas de iluminao, controle de temperatura e circulao de gua.
Germinador de sala - seu princpio de construo e funcionamento pode ser semelhante
aos do tipo cmara, diferindo apenas na sua dimenso, podendo permitir, inclusive, a entrada de
pessoas. As amostras so colocadas em prateleiras laterais ao longo de uma passagem central e alm
do sistema de controle de temperatura e luz, equipado com sistema de ventilao e
umidificadores, proporcionando uniformizao da temperatura e umidade relativa interna elevada.
Alternativamente, as amostras podem ser colocadas em carrinhos com rodas, os quais so
empurrados para dentro do germinador durante o perodo do teste.
Germinador de cmara x sala - a combinao dos dois tipos citados anteriormente, de
modo geral, tem grande capacidade e preo mais acessvel, comparado aos germinadores automticos.
A sala construda com isolamento trmico e o ambiente mantido por meio de ar
condicionado e/ou compressores temperatura constante correspondente a mais baixa normalmente
usada nos testes de germinao, geralmente entre 15-20C. No seu interior, so colocados os
germinadores tipo cmara (modelo simples), regulados a diferentes temperaturas desejadas. Nesse
sistema, alm da temperatura constante, o mtodo da temperatura alternada pode ser empregado
pela simples troca das amostras entre dois germinadores individuais, previamente regulados s
temperaturas desejadas.
Campnula vtrea ou aparelho de Jacobsen (tanque de Copenhague) - este aparelho
consiste de um prato de germinao sob o qual os substratos de papel de filtro com sementes so
colocados. O substrato mantido continuamente mido atravs de um pavio, o qual se estende para
baixo atravs de aberturas ou orifcios no prato de germinao at um recipiente de gua.
5.4.5. Destilador de gua
Alm do umedecimento do substrato e preparo de solues (na ausncia de gua potvel de
boa qualidade), a gua destilada deve ser usada nos germinadores (umidade relativa interna) para
manter o bom funcionamento dos mesmos.
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5.4.6. Outros materiais e equipamentos

Caixas plsticas - de diferentes tamanhos: maiores para testes com areia e/ou solo e
menores (gerbox) para papel mata-borro ou de filtro;
Termmetros de mxima e mnima - para controle das temperaturas nos germinadores;
Cmaras de refrigerao - para o tratamento de outras espcies que apresentam
dormncia;
Lupas manuais e microscpio estereoscpico - para auxlio na interpretao dos testes;
Autoclave - para esterilizao de substratos;
Vidraria - sortimento variado de copos de Becker, frascos de Erlenmeyer, vidros para
solues qumicas, provetas e buretas graduadas, vidros de relgio, depsito para gua destilada,
placas de Petri;
Pinas - necessrias para remoo das plntulas e sementes durante as contagens.
Preferencialmente, devem ser com ponta mediana para no romperem o substrato.
Alm desses citados, pias devem ser instaladas prximas mesa de semeadura e mesas
individuais com frmica ou ao inoxidvel, cadeiras com assento e encosto ajustvel devem ser
usadas. Mesinhas de rodas para transporte das amostras, lpis, atilhos de borracha, fichas de anlise,
baldes plsticos, entre outros, so tambm indispensveis.
Um estoque de produtos qumicos como giberelinas, nitrato de potssio (KNO3), etileno,
cido sulfrico concentrado (H2SO4), destinados aos tratamentos para superao de dormncia so
recomendados.
5.5. Condies sanitrias

Os substratos e todos os utenslios usados no teste de germinao devem ser conservados
rigorosamente limpos e preservados de contaminao. Os substratos devem ser guardados em lugar
seco, arejado e protegidos de p. Utenslios como caixas plsticas, placas de Petri e recipientes
usados para testes de solo e areia devem ser cuidadosamente lavados com gua e sabo.
Os germinadores merecem especial ateno, aps limpezas peridicas (15 em 15 dias) ou
sempre que necessrio, com gua e sabo, devendo ser realizada desinfeco onde poder ser
utilizado formol a 0,5%, lcool, lysoform, germitil, formaldedo, entre outros. Cada um desses
produtos dever ser usado na concentrao indicada na embalagem. Aps a limpeza, a gua dos
germinadores deve ser trocada. Cuidados pessoais devem ser tomados devido toxidez de alguns
dos produtos mencionados.
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5.6. Metodologia
5.6.1. Amostra de trabalho
So utilizadas 400 sementes, tomadas ao acaso da poro semente pura da anlise de
pureza, semeadas em 4 repeties de 100 sementes, 8 de 50 ou 16 de 25. O nmero de repeties
depende da espcie em exame e/ou do tamanho das sementes x tamanho do substrato.
As sementes multigrmicas, como glomrulos de beterraba e espinafre da Nova Zelndia,
no so separadas para o teste de germinao, porm so testadas como se fossem sementes
individuais.
5.6.2. Semeadura
As Regras para a Anlise de Sementes especificam o procedimento mais adequado para a
conduo dos testes de germinao, procurando estabelecer condies extremamente favorveis
espcie testada. Essas condies permitem que, aps a germinao inicial das sementes, o
desenvolvimento das plntulas ocorra normalmente at um estdio que possibilite sua correta
interpretao.
O analista deve examinar cuidadosamente as instrues encontradas nas Regras
Internacionais (Tabela 5) para a espcie de semente a ser analisada e adotar aquelas mais
condizentes com as condies de seu laboratrio. Quando a tcnica adotada apresentar falhas, o
teste deve ser repetido, usando-se um dos outros mtodos alternativos propostos.
Citando exemplos prticos, primeiramente com a espcie soja, apresentada para o teste de
germinao, a seguinte metodologia nas Regras Internacionais:
Substrato: RP; EA
Temperatura: 20-30; 25C
Contagens: 5-8 dias
Em teste normal: Em caso de dormncia: Na prtica, tal recomendao quer dizer que 8 repeties de 50 sementes devero ser
semeadas aleatoriamente em substrato de papel em forma de rolo (RP) e colocadas a germinar
temperatura alternada de 20-30C por at 8 dias. Sero utilizadas para a semeadura 4 folhas de
papel substrato (3 de base e 1 de cobertura), previamente umedecidas e de tamanho adequado
(observando-se a relao tamanho de substrato x tabuleiro contador x espaamento), em cada 8
repeties de 50 sementes. As repeties (em forma de rolos) sero identificadas, individualmente e
respectivamente, com as letras A, B, C ... e H e agrupadas formando uma amostra que, aps a
identificao correspondente ao seu nmero de registro, ser colocada em posio vertical no
________________________________________________________________________________
42

germinador, previamente regulado na temperatura desejada.

As contagens ou avaliaes da amostra sero realizadas no quinto e oitavo dia. No quinto
dia, apenas as plntulas consideradas como normais sero retiradas do teste e anotadas na ficha de
anlise. Devero ser retiradas, tambm nesse dia, sementes mortas ou apodrecidas que estiverem
proliferando fungos. No oitavo dia, ser realizada a avaliao final da amostra, onde sero contadas
as plntulas normais, anormais, sementes duras (se houver) e sementes mortas.
Tabela 5 - Tipos de substrato, temperaturas, dias de contagem e tratamentos especiais para superao
de dormncia para algumas espcies de sementes (ISTA, 2004).
Espcie
Allium cepa
Andropogon
gayanus
Avena sativa
Brachiaria
humidicola
Daucus carota
Glycine max
Lolium multiflorum
Medicago sativa
Oryza sativa
Substrato
Temperatura
(C)
Contagens (Dias)
1a
Final
SP;RP;EA
SP
20;15
20-35
06
07
12
14
RP;EA
20
05
10
SP
20-35
07
21
SP;RP
RP;EA
SP
SP;RP
SP;RP;EA
20-30;20
20-30;25
20-30;15-25;20
20
20-30;25
07
05
05
04
05
14
08
14
10
14
20-30;25;20
20-30;25
20-30;25;20
05
04
04
09
10
07
Phaseolus vulgaris RP;EA

Sorghum bicolor SP;RP
RP;EA
Zea mays
Instrues adicionais incluindo

recomendo.
p/superao da dormncia
Pr-esfriamento
Luz; KNO3 (embeba extremidade
basal)
Pr-aquecimento
(30-35oC);
presfriamento
KNO3
Pr-esfriamento; KNO3
Pr-esfriamento
Pr-aquecimento (50oC); embebio
em gua ou HNO3 (24h)
Pr-esfriamento
-
Para espcies de sementes como trigo, arroz, sorgo, entre outras de tamanho semelhante, o
procedimento para a montagem do teste parecido. Quatro repeties de 100 sementes so
semeadas com contador a vcuo, em substrato de papel (RP) de tamanho que corresponda metade
do tamanho do substrato utilizado para a soja. Na conduo desses testes, devem ser observados o
umedecimento adequado dos substratos e as recomendaes quanto temperatura, dias de
contagem e outras possveis exigncias da espcie.
Por outro lado, as espcies de sementes pequenas que exigem ambiente mido e no so
sensveis luz so colocadas para germinar entre duas ou mais camadas de papel mata-borro (EP),
em placas de Petri ou caixas plsticas incolores e transparentes (gerbox). Quando sensveis luz,
so semeadas da mesma forma, s que sobre uma ou mais camadas de papel, sem cobertura (SP).
A utilizao do papel mata-borro exige cuidado por parte do analista para verificar a
necessidade do reumedecimento durante a conduo do teste, principalmente aquelas espcies que
requerem altas temperaturas e muitos dias para a completa germinao das sementes. Ex: Paspalum
notatum var. Pensacola.
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43

5.6.3. Durao do teste e contagens

A durao do teste, para cada espcie, corresponde ao nmero de dias estabelecidos para a
contagem final. Geralmente, duas contagens so efetuadas: a primeira contagem e a contagem final.
Na primeira contagem so removidas do substrato apenas as plntulas normais bem desenvolvidas,
para evitar o risco de entrelaamento de razes e as sementes podres e/ou as plntulas infeccionadas,
para evitar contaminao. As plntulas com pouco desenvolvimento, consideradas como anormais,
mais sementes no-germinadas ou apenas com incio de germinao devem permanecer no
substrato at o dia da contagem final, onde sero avaliadas e computadas adequadamente.
O tempo para a primeira contagem aproximado, mas deve ser suficiente para permitir que
as plntulas atinjam o estdio de desenvolvimento, que possibilite uma avaliao precisa. Os
tempos indicados referem-se s temperaturas mais altas; se temperatura mais baixa escolhida, a
primeira contagem pode ser adiada. Para testes em areia, com durao no superior a 7-10 dias, a
primeira contagem pode ser omitida.
Contagens intermedirias podem ser necessrias quando o perodo para a germinao
relativamente longo, as plntulas apresentam contaminao excessiva, e para sementes mltiplas,
como os glomrulos de beterraba e acelga, flsculos mltiplos de capim-de-Rhodes, aveia perene,
Dactylis spp., entre outras, cujas unidades so constitudas por duas ou mais sementes verdadeiras.
Para o ltimo caso, embora possa germinar mais de uma plntula para cada unidade, seu conjunto
considerado como uma semente simples, ou seja, de cada semente apenas uma plntula normal
considerada. Contagens peridicas, nesse caso, permitem manter a identificao das vrias plntulas
provenientes de uma mesma semente. As contagens intermedirias devem ser mantidas a um
mnimo, para reduzir o risco de danificar quaisquer plntulas que no tenham se desenvolvido
suficientemente.
No final do perodo do teste, se algumas sementes apenas iniciaram a germinao, o teste
pode ser estendido por mais 7 dias ou por at a metade do perodo indicado para testes mais longos.
Se, por outro lado, a germinao mxima da amostra tenha sido obtida antes do final do perodo do
teste, esse pode ser encerrado.
5.6.4. Interpretao do teste
A interpretao do teste de germinao consiste em fazer a separao de plntulas normais
capazes de produzir plantas normais em condies favorveis, plntulas anormais incapazes de
gerar plantas normais no campo, sementes duras, sementes dormentes e sementes mortas.
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Plntulas normais
Plntulas intactas - so aquelas que apresentam todas as suas estruturas essenciais bem
desenvolvidas, completas, proporcionais e sadias. Apresentam sistema radicular bem formado,
hipoctilo desenvolvido e intacto e/ou epictilo no lesionado, presena de um ou dois cotildones
quando se tratar de mono ou dicotiledneas, respectivamente. Devem apresentar crescimento
proporcional entre a parte area e o sistema radicular, com exceo para certas espcies florestais,
cujas razes so muito longas. Em caso de desenvolvimento desigual, o analista deve examinar as
plntulas com maior cuidado (Figura 5).
Plntulas com pequenos defeitos - so tambm consideradas como normais, as plntulas
que apresentam algumas deficincias, como: ausncia de raiz primria, mas com razes secundrias
ou adventcias vigorosas e em nmero suficiente para as leguminosas, malvceas e cucurbitceas;
leso superficial (no atingindo os vasos condutores) no hipoclito, epiclito ou cotildones;
ausncia de um cotildone, desde que o restante esteja sadio e haja uma gema normal; plmula com
comprimento maior do que a metade do coleptilo, inserida nesse, desde que o mesmo se apresente
intacto para as gramneas (Figura 6 e 7).
Plntulas com infeco secundria - plntulas atacadas por fungos ou bactrias, mesmo que
seriamente infeccionadas, se for evidente que a prpria semente no a causa da infeco (infeco
secundria) e as mesmas apresentem todas as estruturas essenciais presentes e normais.
TRIGO
SOJA
Gema apical
Folha primordial
Folha primria
Coleptilo
Epictilo
Cotildones
Hipoctilo
Raiz primria
Raiz secundria
Raizes Seminais
Figura 5 - Plntulas normais de monocotiledneas (trigo) e de dicotiledneas (soja).

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a)
b)
d)
c)
Figura 6 - Plntulas normais de dicotiledneas: a e b) cotildones apodrecidos, mas com metade intacta;
c) um cotildone ausente; d) sem raiz primria, mas com razes secundrias bem
desenvolvidas.
a)
b)
Figura 7 - Plntulas normais de monocotiledneas: a) razes seminais bem desenvolvidas; b) razes seminais presentes,
porm fracas.
Plntulas anormais
Plntulas danificadas apresentam danificaes como: ausncia de cotildones, leses
profundas afetando os tecidos condutores, ausncia de raiz primria (quando esta estrutura
essencial), ou sem raiz primria e com as secundrias ou adventcias muito fracas (Figura 8).
Plntulas deformadas em conseqncia do desenvolvimento geral fraco e desequilibrado
das estruturas essenciais, tais como, plmulas, hipoctilos torcidos em espiral ou atrofiados, hipoclito
e/ou coleptilos curto e engrossado, plmulas fendidas ou pouco desenvolvidas (menos da metade
do tamanho do coleptilo), coleptilo vazio, plntulas hialinas ou vtreas (Figura 9).
Plntulas deterioradas com uma ou todas as estruturas essenciais infeccionadas ou
apodrecidas por causas internas (infeco primria) (Figura 10).
De modo geral, a ocorrncia de anormalidades em plntulas pode ser causada por danos
mecnicos, ataque de microrganismos ou de insetos, vitalidade em declnio (deteriorao), danos
por produtos qumicos, danos por geadas, toxidez de substrato, contaminao do equipamento (uso de
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bandejas de cobre soldadas com cido durante os testes) e outras deficincias prprias das sementes
(Figura 11).
a)
b)
Figura 8 - Plntulas anormais danificadas em dicotiledneas: a) hipoctilo com fendas se estendendo aos tecidos
condutores, com constrio e com leses estriadas; b) folhas primordiais ausentes.
a)
b)
c)
Figura 9 - Plntulas anormais deformadas em dicotiledneas: a) engrossamento do hipoctilo; b) hipoctilo fraco, torcido
e enrolado; c) razes secundrias bem desenvolvidas, porm voltadas para cima ou para os lados.
Figura 10 - Plntulas anormais deterioradas em dicotiledneas, com os cotildones apodrecidos, atingindo a plmula.
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47

a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
Figura 11 - Anormalidades em plntulas de trigo: a) ausncia de raiz seminal, razes seminais curtas e fracas, delgadas ou
hialinas; b) parte area curta e engrossada; c) parte area apodrecida ou apodrecimento do ponto de insero entre a plntula e o
endosperma; d) coleptilo sem folhas primordiais ou hialinas; e) plntula danificada com coleptilo estriado e parte area espiralada
ou torcida; f) folhas primordiais curtas, atingindo apenas metade da altura do coleptilo; g) folhas primordiais partidas ou fendidas
longitudinalmente.
- Sementes mltiplas so unidades de sementes capazes de produzir mais de uma plntula.
- Sementes no germinadas
Sementes duras permanecem sem absorver gua at o final do perodo do teste.
Apresentam-se intactas, isto , no-intumescidas. Esse fenmeno motivado pela impermeabilidade
do tegumento das sementes gua, sendo considerado como um tipo especial de dormncia que
ocorre em determinadas espcies, principalmente nas famlias Leguminosae e Malvaceae.
Ao final do teste de germinao, as sementes duras so contadas e relatadas como tal no
Boletim de Anlise. Quando uma maior informao requerida e algum tratamento especial
essencial, esse pode ser aplicado antes do incio do teste de germinao ou nas sementes duras que
permanecerem aps o perodo do teste.
Quando solicitado pelo interessado, o laboratrio poder usar um dos tratamentos
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especficos para superar a dureza das sementes, tais como, escarificao mecnica, escarificao
com cido sulfrico concentrado (H2SO4) ou embebio direta em gua por perodo de 24 a 48
horas.
Sementes dormentes - as sementes de muitas gramneas forrageiras, de alguns cereais e
crucferas e de muitas espcies florestais e frutferas, embora vivas, no germinam quando
submetidas a condies consideradas timas para sua germinao. Apenas absorvem gua e
intumescem, apresentam aspecto sadio e no apodrecem.
Muitas so as causas desse fenmeno e as mais comuns so:
- envoltrios do embrio ou da semente (pericarpo) impermeveis ao gs carbnico ou ao
oxignio (arroz);
- envoltrios demasiado duros que impedem a expanso do embrio e emergncia da raiz
(florestais e frutferas);
- embries fisiologicamente imaturos (gramneas forrageiras e alguns cereais);
- presena de substncias inibidoras nos frutos (acelga e beterraba).
So vrios os mtodos que podem ser utilizados para a superao da dormncia das
sementes favorecendo a germinao durante o teste.
Quando for utilizado algum desses mtodos, ele deve ser mencionado no Boletim de
Anlise. Os mais empregados so armazenagem a seco, pr-esfriamento, pr-aquecimento, luz,
nitrato de potssio (KNO3), cido giberlico (GA3) e envelopes de polietileno lacrados.
Sempre que aparecerem no teste de germinao sementes dormentes, necessrio fazer um
reteste, usando mtodos para superar a dormncia.
Se forem encontradas sementes dormentes a uma taxa de 5% ou mais, deve-se verificar se
essas sementes possuem o potencial de produzirem plntulas normais; isso pode ser feito atravs do
teste de tetrazlio, retirada do embrio ou raio X. Se existir qualquer dvida se a semente
dormente ou morta, ento deve ser classificada como morta.
J no caso de sementes de essncias florestais, todas as sementes no-germinadas devem ser
cortadas e verificado o nmero de sementes vazias, sem embrio ou danificadas por insetos.
Sementes mortas - so as sementes que ao final do teste se apresentam intumescidas, mas
no germinadas, moles e/ou apodrecidas, s vezes contaminadas por microrganismos. Se for
observado que uma semente produziu qualquer parte de uma plntula, essa contada como plntula
anormal.
Outras categorias - em algumas circunstncias, sementes vazias e no-germinadas podem
ser classificadas e relatadas em Outras Determinaes, no Boletim de Anlise.
5.6.5. Clculo
O clculo do teste de germinao realizado obtendo-se a mdia das quatro repeties de
100 sementes utilizadas, observando-se o limite mximo de variao permitido entre as mesmas em
tabelas de tolerncia contidas nas RAS.
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Exemplo: Quando forem utilizadas 4 subamostras de 100 sementes.

. Nmero de plntulas normais determinados aps a contagem final :
Repetio
Plntulas normais
A
85
B
79
C
87
D
83
. Clculo da porcentagem de germinao:

X=
(85 +79 + 87 + 83)

= 83,50
4
X = 84%
Uso da tabela de tolerncia: a variao mxima permitida entre as 4 repeties, quando a

mdia de germinao 84%, de 14, ao redor de 2,5% de probabilidade; logo, como a variao
entre a repetio de maior valor e a de menor valor no teste de 8, os resultados so considerados
vlidos, sendo informado os 84% de germinao no Boletim de Anlise.
Quando o resultado de um teste considerado insatisfatrio, esse no dever ser relatado no
Boletim e um segundo teste dever ser realizado utilizando o mesmo mtodo ou outro mtodo
alternativo, nas seguintes situaes:
- suspeita de dormncia (sementes dormentes no-germinadas);
- resultado no confivel devido fitotoxicidade ou disseminao de fungos ou
bactrias;
- dificuldade na avaliao correta do nmero de plntulas;
- evidncia de erro nas condies do teste, avaliao ou contagem das plntulas;
- amplitude das repeties de 100 sementes exceder a tolerncia mxima permitida.
5.6.6. Informao de resultados no Boletim de Anlise
As porcentagens de plntulas normais, sementes duras, plntulas anormais, sementes
dormentes e mortas so relatadas em nmeros inteiros, fazendo-se a aproximao para o nmero
mais alto se a frao for 0,5 ou maior e, para o nmero imediatamente inferior, quando for menor
do que 0,5.
Exemplo:
84,50 85%
84,25 84%
Se algum desses valores for igual a zero, ele deve ser anotado com -0,0-.
A soma das porcentagens de plntulas normais e anormais e de sementes no-germinadas
deve ser de 100.
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As seguintes informaes podem tambm ser relatadas:

- temperatura e substrato usados;
- qualquer tratamento especial ou mtodo utilizado para promover germinao;
- a porcentagem de germinao obtida dentro do tempo prescrito, se o perodo de
germinao for estendido alm do indicado;
- o segundo resultado obtido quando testes em duplicatas so indicados.
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6. Testes rpidos para determinar a viabilidade das sementes
Apesar do teste de germinao ser rotineiramente utilizado para determinar a qualidade

fisiolgica das sementes para fins de identificao e comercializao de lotes, requer perodos de
tempo relativamente longos, dependendo da espcie para sua realizao, impedindo assim, maior
eficincia nas operaes de colheita, processamento, armazenamento e comercializao.
Os testes para a avaliao rpida de viabilidade ou do vigor de sementes constituem
importantes ferramentas para fundamentar a pronta tomada de decises, durante etapas da produo
de sementes, especialmente entre a fase de maturao e a futura semeadura. Representam
importantes componentes em programas de controle de qualidade de sementes, permitindo agilizar
a obteno de informaes, mediante o descarte de lotes de qualidade inferior durante a fase de
recepo na unidade de beneficiamento e a racionalizao do manejo, com a utilizao mais
eficiente da infra-estrutura disponvel.
Portanto, o desenvolvimento de mtodos seguros e rpidos para determinar o potencial
fisiolgico de um lote de sementes em perodo de tempo relativamente curto, assume grande
importncia no programa de controle de qualidade. Desta forma, foram desenvolvidas metodologias
para esse fim, como o teste de tetrazlio, embries expostos, tcnica do raio X e do pH do exsudato.
6.1. Teste de tetrazlio

Considerado como uma alternativa promissora, devido a sua rapidez e eficincia em
determinar a viabilidade, vigor, deteriorao por umidade, danos mecnicos e danos por insetos de
um lote de sementes, alm do julgamento individual da semente em casos de ocorrncia de
dormncia durante o teste de germinao. Conhecido desde a dcada de 40 e j com padronizao
de sua metodologia para muitas espcies de sementes, as quais podem ser encontradas nas RAS,
tem seu emprego ainda bastante limitado para a grande maioria das mesmas. Para soja, feijo e
milho, entretanto, sua aplicao tem sido mais ampla, devido a um intenso trabalho de treinamento
e publicao de manuais de avaliao dos testes, especficos para essas espcies.
um teste bioqumico, que estima a viabilidade das sementes com base na alterao de
colorao dos tecidos vivos do embrio pela reduo de um indicador no interior dos mesmos. Essa
alterao de colorao reflete a atividade de sistemas enzimticos, no caso, das enzimas
desidrogenases envolvidas no processo normal de respirao das sementes que catalisam a reao
de reduo do sal de tetrazlio nas clulas vivas. Quando a semente imersa na soluo de
tetrazlio, a qual difusvel, incolor e inodora, essa se difunde atravs dos tecidos, ocorrendo nas
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clulas vivas a reao de reduo que resulta na formao de um composto vermelho, no difusvel,
conhecido como formazan.
SOLUO DE TETRAZOLIO + H+
(incolor difusvel)
desidrogenases
FORMAZAN
(vermelho no difusvel)
Como essa reao se processa no interior das clulas e onde o pigmento se fixa, ocorre
uma ntida separao entre o tecido vivo que respira do tecido morto que no respira e que mantm
sua cor natural.
um teste rpido e como tal, cuidados especiais devem ser tomados quanto aos fatores que
podem afetar a velocidade da reao:
- pH da soluo - deve estar entre 6,5 a 7,5. Solues cidas retardam a reao;
- temperatura do teste - a reao favorecida entre os 30-40C, no devendo ultrapassar os
40C para que no ocorra a degradao das protenas;
- presso atmosfrica e luz - a vcuo e no escuro a reao mais rpida;
- pr-condicionamento da semente - o corte para expor o embrio realizado mais rpido e
facilmente em sementes previamente embebidas.
6.1.1. Material e equipamentos
Para a realizao do teste, so necessrios:
- o reagente sal de tetrazlio - o mais empregado o 2,3,5 Trifenil Cloreto de Tetrazlio;
- vidrarias tais como placas de Petri, copos de Becker e frascos de vidro de cor mbar para
armazenar a soluo;
- lminas ou bisturi para cortes e/ou estiletes para perfurar as sementes para expor o embrio
ao do TZ;
- estufas ou germinador com controle de temperatura entre 30-40C para o desenvolvimento
mais rpido da colorao;
- lupas ou binoculares com aumento de 5 a 10 vezes e com iluminao fluorescente,
principalmente em se tratando de sementes pequenas;
- refrigerador para armazenar as sementes aps a colorao e antes da avaliao;
- substrato de papel para o pr-acondicionamento das sementes.
6.1.2. Metodologia
a) Preparo da soluo
Pode ser preparada diretamente na concentrao desejada ou pode ser feita uma soluo
estoque a 1% de concentrao, misturando-se 10g de sal de tetrazlio em 1000ml de gua destilada.
Essa soluo estoque deve ser rigorosamente mantida em frasco de vidro de cor mbar e em local
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fresco e escuro para evitar a auto-oxidao. Quando necessrio, partes da mesma podem ser diludas
pela aplicao de mais gua em quantidade suficiente para atender as concentraes desejadas. Com
base em experincia e devido ao alto custo do sal de tetrazlio, sugere-se o uso de concentraes de
0,075% para sementes de soja e feijo-vagem. Algumas sementes, como as de essncias florestais,
ornamentais e fruteiras requerem concentraes de 0,5%, embora para a maioria das espcies as
RAS da ISTA indicam a concentrao de 1%.
b) Amostragem e preparo das sementes
Pr-umedecimento das sementes - As sementes provenientes da poro de sementes puras
(4 x 100) so pr-acondicionadas. O pr-umedecimento necessrio preliminarmente colorao
de algumas espcies e altamente recomendado para outras. Esse procedimento provoca a ativao
do sistema enzimtico, o amolecimento das sementes, facilitando seu preparo (cortes) e o
desenvolvimento de uma colorao mais ntida e uniforme. As sementes podem ser pracondicionadas, atravs do umedecimento lento ou da embebio direta em gua.
A tcnica do umedecimento lento deve ser utilizada para aquelas espcies que so mais
propensas a sofrer fraturas se submersas diretamente na gua. Sementes velhas e secas de diversas
espcies podem, tambm, beneficiar-se desse tipo de umedecimento. As sementes so colocadas
entre duas folhas de papel substrato previamente umedecidas e mantidas em germinador a 20oC por
perodo, geralmente, de 16 horas.
Na embebio direta em gua, as sementes devem ser completamente imersas e deixadas at
a sua embebio completa. Se o perodo de embebio for maior do que 24 horas, a gua deve ser
trocada.
Preparo das sementes - O mtodo de preparo das sementes vai depender das caractersticas
da espcie em exame, sendo que os mais utilizados so: a) corte longitudinal, corte transversal ou
inciso transversal das sementes para expor o embrio diretamente ao do tetrazlio ou facilitar a
penetrao do mesmo atravs do endosperma at o embrio sendo que esse procedimento comum
para sementes de gramneas e conferas e a posio do corte vai depender do tamanho da semente e
da facilidade de sua execuo e posterior interpretao do teste; b) perfurao - geralmente
empregado em sementes de gramneas muito pequenas, onde a tentativa de um corte pode ocasionar
o esmagamento do embrio; c) remoo dos tegumentos - efetuada aps o pr-condicionamento de
forma manual ou com auxlio de pinas, para semente de algumas espcies de leguminosas
(amendoim) e sementes das famlias das compostas e cucurbitceas e d) exciso do embrio - pode
ser usada para Hordeum, Secale e Triticum. O embrio retirado (com o escutelo), se solta do
endosperma e transferido para uma soluo de tetrazlio.
Obs.: No Brasil, para sementes de soja, ervilha e feijo, utilizado o mtodo da colorao
direta; nesse mtodo, as sementes, aps o pr-condicionamento inicial, so colocadas diretamente
na soluo, sem nenhum preparo adicional.
c) Colorao
O processo de colorao se d pela imerso das sementes na soluo de tetrazlio
temperatura de 30C, no escuro. O tempo requerido para a colorao varia com a espcie, e mesmo
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entre sementes de uma mesma amostra. A colorao mais rpida em solues de TZ com
concentraes mais fortes, temperaturas mais altas e no escuro. A cada 10C de aumento na
temperatura, dobra-se a velocidade da reao. Observa-se que as sementes que apresentam os
tegumentos danificados, colorem-se mais rpida e profundamente; portanto, o contato das sementes
com a soluo no deve ser excessivo, pois h a possibilidade dos tecidos mais fracos assumirem
colorao mais escura, dificultando a avaliao. Esse comportamento observa-se tambm em
sementes com incio de deteriorao ou mais deterioradas, pois as membranas celulares nesse
estdio se tornam mais impermeveis, permitindo a entrada de quantidade maior da soluo de TZ.
Essa quantidade maior de soluo dentro das sementes somada a um processo de respirao mais
intenso (tecidos em incio de deteriorao) ocasiona reduo da soluo em proporo bem maior
no interior das clulas, originando colorao mais intensa comparada quela observada nos tecidos
sadios. Esse fator considerado inclusive como parmetro para medir o vigor dos diferentes lotes
de sementes. Durante o processo de colorao, pode ocorrer a formao de espuma rsea na
superfcie da soluo ou, ainda, um precipitado vermelho no fundo do recipiente. O primeiro caso
indica reao do sal com o exsudato das sementes ou com os microrganismos e o segundo,
evidncias de um perodo excessivo de contato entre as sementes e a soluo de tetrazlio.
Alcanada a colorao ideal, a soluo drenada e as sementes so lavadas com gua, sendo
mantidas submersas at o momento da avaliao. Se a avaliao no ocorrer de imediato, as
sementes submersas em gua podem permanecer no refrigerador por perodo de tempo de at 24
horas.
d) Interpretao
A interpretao do teste exige do analista conhecimento das estruturas essenciais das
sementes, as quais so as responsveis pelo desenvolvimento de uma plntula normal. As estruturas
da semente e da plntula de feijo e de milho so mostradas nas Figura 12 e 13. A distribuio entre
tecidos vivos deteriorados e mortos nessas reas a base para a avaliao do teste sendo, portanto, a
colorao um dos fatores que deve ser cuidadosamente observado. Ela deve permitir uma
diferenciao precisa entre os diferentes padres de colorao em que se encontram os tecidos e
identificar a possvel natureza das injrias.
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55

2
7
1
1
II
2
III
Figura 12 - Estruturas da semente e da plntula nas dicotiledneas (feijo). I - Vista externa, tegumento removido; II Vista interna com um cotildone removido; III - Plntula: 1 - cotildone; 2 - radcula; 3 - plmula; 4 - epictilo; 5 - folha primria; 6 ponta de crescimento; 7 - hipoctilo.
1
3
5
6
7
1
2
I
8
II
9
8
III
Figura 13 - Estruturas da semente e da plntula nas gramneas (milho). I - Vista externa da cariopse; II - Vista seccionada
da cariopse; III - Plntula: 1 - pericarpo; 2 - embrio; 3 - endosperma; 4 - escutelo; 5 - coleptilo; 6 - plmula; 7 - raiz seminal; 8 radcula; 9 - coleorriza.
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Os tecidos vivos e sadios apresentam colorao vermelha ou rosa brilhante, limpa e

uniformemente distribuda. O analista deve estar atento para relacion-la (vermelho ou rosa)
concentrao da soluo utilizada, tempo de exposio das sementes ao do tetrazlio e turgncia
dos tecidos.
Os tecidos deteriorados podem apresentar coloraes que variam do vermelho gren a rosa
leitoso, dependendo do grau de deteriorao dos mesmos. O primeiro caso indica incio de
deteriorao dos mesmos. O rosa leitoso indica um processo avanado de deteriorao, prximo
morte do tecido. Alm da intensidade da colorao e da textura ou turgncia dos tecidos, o analista
deve estar atento presena ou no de fraturas, leses ou necroses localizadas em regies vitais das
sementes, eixo embrionrio, bem como a extenso das mesmas.
J quanto aos tecidos descoloridos, dois casos podem ocorrer: a) permanncia da cor natural
associada a um tecido trgido - ocorre freqentemente na parte interna dos cotildones de uma
semente de soja vigorosa, perfeitamente colorida externamente. Isso indica semente vivel e de alto
vigor, pois a no colorao interna deve-se a maior impermeabilidade das membranas celulares
passagem da soluo; b) tecido descolorido (branco) flcido ou hialino que se desmancha se
pressionado. Essa condio indica a morte do mesmo.
Alm da determinao da viabilidade e vigor esse teste permite, atravs de observao
cuidadosa, diagnosticar alguns problemas que a semente pode apresentar, os quais podem interferir
no desenvolvimento de uma plntula normal, tais como: danos mecnicos causados por impactos e
abrases originando fraturas de localizao e profundidade varivel as quais so facilmente
observadas (Figura 14); danos por insetos, como a picada de percevejo; danos por umidade, que no
caso das sementes de soja caracteriza-se por estrias vermelho gren ou esbranquiadas, localizadas
nas costas ou na superfcie dos cotildones, oposta ao eixo embrionrio ou nesse mesmo eixo. O
aparecimento dessas estrias deve-se ao enrugamento dos tegumentos que pressionam os cotildones
devido s sucessivas hidrataes e desidrataes da semente durante sua permanncia no campo;
danos por resfriamento, observado em sementes de milho e causados pela exposio das sementes a
baixas temperaturas quando ela apresenta ainda alto teor de gua durante a maturidade, o qual se
caracteriza por apresentar a regio das folhas primrias esbranquiadas, hialinas e com os tecidos
flcidos, sendo que a maior parte do embrio apresenta cor rsea opaca.
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Figura 14 - Corte longitudinal de duas sementes de feijo-vagem, mostrando danos no eixo embrionrio.
e) Informao dos resultados

Aps computado o nmero de sementes viveis em cada uma das repeties do teste,
calculada a mdia em percentagem, e esse resultado expresso em nmeros inteiros. As variaes
mximas permitidas entre as repeties so observadas pela mesma tabela de tolerncia empregada
no teste de germinao.
O resultado relatado no Boletim de Anlise de Sementes em Outras Determinaes da
seguinte forma: Teste de tetrazlio ... porcentagem de sementes viveis.
f) Limitaes do teste
Consideram-se como limitaes o fato do teste no permitir que seja diagnosticado a
presena ou no de sementes dormentes e danos causados por produtos qumicos, alm de exigir
conhecimentos tcnicos (estruturas das sementes), treinamento, maior nmero de horas de trabalho
humano quando comparado ao teste de germinao.
6.2. Teste de embries expostos

O objetivo determinar, rapidamente, a viabilidade de sementes. Empregado para aquelas
espcies que germinam lentamente, como essncias florestais, ornamentais e frutferas ou, ainda,
em casos de dormncia. No vlido para sementes germinadas e no deve ser aplicado em
amostras que contenham sementes germinadas j secas. Nesse teste, os embries so extrados e
mantidos sob condies prescritas apropriadas para a germinao de cada espcie, por determinado
perodo de tempo suficientemente longo para que os sinais de no-viabilidade se desenvolvam.
Quatrocentas sementes (4 x 100 ou 8 x 50) oriundas da poro semente pura so embebidas
por 1 a 4 dias, at seu completo intumescimento. O processo de embebio deve ser feito em gua
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58

morna que no exceda 25oC e a gua deve ser trocada 2 vezes por dia, para retardar o crescimento
de fungos ou bactrias e a acumulao de exsudato da semente. Aps a embebio das sementes, os
embries so extrados com bisturi ou lmina, em condies mais asspticas possveis, sendo
recomendado soluo aquosa com 70% de etanol, para esterilizar os instrumentos e a mesa de
trabalho. Aps sua extrao (no devem ser danificados pelo processo e tocados o mnimo
possvel), os embries so colocados sobre papel filtro previamente umedecido e a mantidos
temperatura de 20 a 25C, por perodo de at 14 dias, com mnimo de 8 horas de luz, diariamente.
Durante esse perodo, avaliaes dirias devem ser feitas, considerando-se como viveis os
embries que apresentarem as seguintes caractersticas: a) embries germinando; b) embries com
um ou mais cotildones apresentando crescimento ou colorao esverdeada; c) embries firmes,
ligeiramente aumentados, brancos ou amarelos, de acordo com a espcie. Os considerados como
no viveis se apresentam: a) deteriorados ou envolvidos por fungos; b) deformados ou
degenerados, com forte colorao marrom, preta, de aparncia cinza ou branco hialina. Nessa
classe, so tambm computadas as sementes vazias (sem embries).
O resultado expresso em porcentagem de sementes viveis em nmeros inteiros. A
porcentagem de germinao baseada no nmero total de frutos ou sementes testadas e no no
nmero de embries extrados, sendo determinada pela frmula:
% G = nmero de embries viveis X 100
nmero de sementes testadas
6.3. Teste de raio X

O teste de raio x permite uma anlise rpida, no destrutiva e eficiente da morfologia interna
de sementes, possibilitando a deteco de danos e anormalidades em embries, sem destru-los.
utilizado em laboratrios para a verificao da qualidade de sementes de espcies olercolas e
florestais, alm de numerosos estudos para seu emprego na anlise de sementes de grandes culturas.
O mtodo baseia-se no princpio da obteno de imagens com o emprego do raio x, a
radiografia. Quando os raios x atravessam uma semente, a radiao absorvida em vrios graus
dependendo da espessura, densidade e composio da semente e do comprimento de onda da
radiao, criando assim uma imagem permanente no filme radiogrfico.
A qualidade da radiografia caracterizada pelo contraste (relao entre claro e escuro),
densidade (quantidade de luz transmitida) e definio da imagem (habilidade de resoluo para o
estabelecimento de formatos e detalhes).
Para a anlise de sementes, os mtodos radiogrficos utilizados consistem em radiografia
direta, onde a imagem radiogrfica projetada e analisada em tela, filme ou foto; radiografia de
contraste, sendo as sementes submetidas a pr-tratamento com agente contrastante (gua, solues
aquosas de cloreto de brio, nitrato de prata, iodeto de sdio, iodeto de potssio e clorofrmio na
forma gasosa, entre outros) para auxiliar a visualizao de danos ou tecidos mortos; radiografia
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tridimensional que utiliza a tomografia computadorizada.

O mtodo de raio x vem sendo adotado no acompanhamento do desenvolvimento de
sementes, na deteco de danos internos especficos, em estudos de vigor, na seleo de embries
haplides, na visualizao de danos mecnicos e causados por insetos e decorrentes de outros
fatores adversos de pr e ps-colheita, anlises das sementes no germinadas no final do teste de
germinao, podendo ser usado tambm no isolamento de embries mutantes, na seleo da frao
de sementes puras e em estudos da morfologia de sementes submetidas ao condicionamento
fisiolgico.
Os resultados so expressos em porcentagem de sementes cheias, vazias, danificadas
fisicamente ou por insetos e informados no Boletim em Outras Determinaes, da seguinte forma:
Resultados do raio x ...% danificadas fisicamente ... % cheias ... % vazias ... % danificadas por
insetos.
6.4. Teste do pH do exsudato

O objetivo deste teste determinar a viabilidade das sementes em perodo de tempo
relativamente curto. Baseia-se na diferena de pH de sementes viveis e no viveis.
A avaliao da viabilidade est relacionada a eventos de deteriorao, tais como, a
permeabilidade das membranas e a lixiviao de solutos.
Quando a semente embebe gua, ocorre a liberao de acares, cidos orgnicos e ons
(inclusive H+) que contribuem para a acidificao do meio, provocando diminuio do pH do
exsudato das sementes, sendo que as mais deterioradas apresentaro maior lixiviao e
conseqentemente, exsudatos com maior poder tampo; as sementes menos deterioradas, por sua
vez, tero menor lixiviao, ocasionando menor poder tampo na gua de embebio. Para
diferenciar sementes vivas e mortas, deve-se explorar a caracterstica do poder tampo
desenvolvido durante o processo de embebio que mais intenso nas sementes mortas, devido a
maior lixiviao.
O teste tem sido amplamente utilizado e apresentado bons resultados para a cultura da soja.
6.4.1. Metodologia para sementes de soja
a) Preparo da soluo indicadora:
2,5g de Na2CO3 por litro de gua destilada e fervida;
Fenolftalena a 0,5% dissolvida em 50% de lcool e 50% de gua;
Misturam-se ambas as solues na proporo de 1:1.
________________________________________________________________________________
60

b) Procedimento
Utilizar bandeja com 100 compartimentos individuais, cada um com capacidade para
2,5ml;
Colocar gua destilada e fervida na bandeja;
Colocar uma semente em cada compartimento da bandeja;
Deixar as sementes embeberem gua por 30 minutos temperatura de 20-25C;
Aps a embebio, colocar uma gota da soluo nos compartimentos da bandeja com
gua e semente (Figura 15);
Mexer bem o exsudato e, aps 15 segundos, mexer novamente;
Fazer imediatamente a avaliao.
Figura 15 - Teste de pH do exsudato em sementes de soja.
c) Avaliao
O exsudato rosa forte de semente vivel, enquanto que o exsudato incolor ou rosa muito
fraco de semente morta.
d) Precaues
Deixar um compartimento sem colocar semente para servir como referncia.
Colocando uma gota de soluo na gua a mesma deve tornar-se rosa forte, caso isso no ocorra,
a gua no de boa qualidade (deve ser destilada e fervida por 5 minutos);
Usar conta gotas de tubinhos plsticos.
________________________________________________________________________________________________________________________
61

7. Determinao do grau de umidade
7.1. Objetivo e importncia

O objetivo dessa anlise determinar o teor de gua das sementes por mtodos adequados
para o uso em anlise de rotina.
A viabilidade das sementes e, conseqentemente, sua maior ou menor longevidade depende
da interao de vrios fatores, entre os quais o teor de gua ocupa lugar de indiscutvel destaque. O
grau de umidade influencia no comportamento da semente quando ela submetida s mais
diferentes situaes que acompanham todas as etapas de produo, da colheita comercializao.
Portanto, determinaes freqentes do grau de umidade so necessrias para estabelecer e adotar
procedimentos adequados para evitar ou, pelo menos, minimizar os danos que freqentemente
ocorrem nas sementes.
7.2. Formas de gua na semente

A semente higroscpica tendo, portanto, a propriedade de perder ou absorver gua,
dependendo da umidade do meio em que se encontra. A gua nas sementes pode se apresentar sob
diferentes formas, tais como: a) gua absorvida ou gua livre: encontra-se aderida ao sistema
coloidal das sementes por meio de foras capilares, ocupando os espaos intercelulares e poros do
material; b) gua adsorvida: presa ao sistema pela ao molecular, retida por adeso de suas
molculas ao material slido e c) gua de constituio e/ou de composio: faz parte da estrutura
molecular, encontrando-se quimicamente presa aos componentes das sementes e fazendo parte
integrante das molculas que constituem as substncias de reserva.
Portanto, a gua retida na semente com variado grau de fora, desde a gua livre at a
quimicamente presa. Durante a secagem, a gua livre removida rapidamente e facilmente pelo
calor, enquanto a gua adsorvida to fortemente retida que somente removida com altas
temperaturas, que podem causar a volatilizao e decomposio de outras substncias integrantes da
semente.
indesejvel remover a gua de constituio, pois envolve quebra de estrutura qumica,
dando valor irreal na determinao do grau de umidade.
________________________________________________________________________________
62

7.3. Mtodos para a determinao do grau de umidade

Para a determinao do grau de umidade da semente, existem vrios mtodos classificados
em bsicos, diretos ou de preciso e rpidos, indiretos ou expeditos.
A amostra mdia, para a determinao do grau de umidade, deve ser enviada em recipientes
prova de vapor d'gua, hermeticamente fechados e completamente cheios, de modo a evitar trocas
do contedo de umidade das sementes com a do ar externo.
7.3.1. Mtodos bsicos, diretos ou de preciso
So usados principalmente em laboratrios de anlise de controle de qualidade, oferecem
resultados mais precisos, porm de processamento mais demorado. So tambm utilizados para
calibrar e aferir determinadores que operam por mtodos indiretos.
Nesses mtodos, a umidade retirada da semente por aquecimento e medida pela perda de
peso ou por processos qumicos.
Mtodos
Estufa
Estufa a 105oC/24 horas

Estufa alta temperatura - 130C/1 a 4 horas
Estufa baixa temperatura - 103C/17 1 hora
Brown Duvel e Pipoqueiro
Destilao
Tolueno
Karl Fischer
Qumicos
Pentxido de fsforo
- Mtodos de estufa
Os mtodos de estufa baseiam-se na secagem de uma amostra de sementes de peso conhecido e no
clculo da quantidade de gua, atravs da perda de peso da amostra.
Os mtodos de estufa baixa e alta temperatura so adotados pelas Regras Internacionais.
Duas repeties por amostra devero ser analisadas, sendo que a variao mxima permitida entre
elas de 0,2%. Caso a variao ultrapasse esse valor, duas novas repeties devem ser avaliadas.
Esses mtodos so indicados com moagem obrigatria para algumas espcies relacionadas nas RAS
________________________________________________________________________________________________________________________
63

e a passagem por peneiras de diferentes crivos.

A moagem indicada para sementes grandes, a menos que seu alto contedo de leo torne
difcil essa operao. Exemplos de algumas espcies, para as quais a moagem obrigatria: soja,
algodo, arroz, feijo, girassol, sorgo, trigo, milho, ervilha.
A pr-secagem obrigatria nos testes com moagem em sementes com grau de umidade
acima de 17% (ou 10% no caso da soja e 13% para arroz). O objetivo da pr-secagem reduzir o
teor de gua das sementes para facilitar a moagem.
O mtodo da estufa a 105C no consta nas RAS internacionais, entretanto o mais
utilizado no Brasil, sendo indicado para todas as espcies de sementes utilizando sementes inteiras e
a diferena entre as duas repeties no deve exceder a 0,5%.
Para os mtodos de estufa, o peso requerido para as repeties depende do dimetro do
recipiente: dimetro menor que 8cm deve ser utilizado de 4 a 5g de sementes; dimetro de 8cm ou
maior 10g.
O clculo da porcentagem de umidade deve ser realizado utilizando a seguinte frmula:
U (%) = (Pu - Ps) x 100/(Pu - T)
onde:
T - Tara o peso em gramas da cpsula;
Pu - Peso mido o peso em gramas da cpsula mais a semente mida;
Ps - Peso seco o peso da cpsula mais a semente seca.
Quando for realizada a pr-secagem, o teor de gua calculado usando-se os resultados
obtidos no primeiro (pr-secagem) e segundo estgios do procedimento, pela frmula:
U (%) = U1 + U2 - U1 x U2
100
onde:
U1 a % de umidade perdida no primeiro estgio;
U2 a % de umidade perdida no segundo estgio;
A U1 e a U2 so calculados de forma semelhante determinao de umidade na primeira
frmula.
________________________________________________________________________________
64

Exemplo:
Identificao
da repetio
No da
cpsula
Peso da cpsula (T)
A
B
61
62
27,089
27,834
Peso da cpsula +
semente mida
(Pu)
31,666
31,929
Peso da cpsula +
semente seca (Ps)
Umidade
(%)
30,969
31,307
15,22
15,18
% de umidade (A) = (31,666 - 30,969) X
100
= 0,697 x 100 = 15,22
31,666 - 27,089 4,577
% de umidade (B) = (31,929 - 31,307) X
100
31,929 - 27,834
0,622 x 100 = 15,18

4,095
15,22 - 15,18 = 0,04 logo, a diferena entre as repeties no excedeu a 0,2%, portanto o
resultado a ser informado de 15,2%.
- Mtodo de destilao
Este mtodo recomendado para espcies que contm substncias extremamente volteis. A
operao simples, utilizam-se 100g de sementes inteiras, colocando-se essa poro de sementes no
frasco de vidro (Erlenmeyer), juntamente com determinada quantidade de leo de cozinha
(preferencialmente de soja), em quantidade suficiente que cubra as sementes, sob a qual se acende
uma fonte de calor (Figura 16). A gua volatilizada condensada e recolhida em proveta graduada.
Colocando-se 100g de sementes, a leitura direta do volume condensado fornece o grau de umidade
das sementes, em cerca de 20 minutos. Quando a temperatura do leo alcanar a temperatura
indicada para a espcie, desliga-se a fonte de aquecimento (Tabela 6).
________________________________________________________________________________________________________________________
65

3
7
8
2
10
1
11
Figura 16 - Determinador de umidade por destilao. 1 - Suporte para cmara de condensao; 2 - Cmara de condensao
(30 x 13cm); 3 - Tubo de condensao; 4 - Tubo de coneco; 5 - Tubo curvo; 6 - Termmetro (200C); 7 - Rolha de borracha; 8 Frasco Erlenmeyer (500ml); 9 - Fonte de calor; 10 - Suporte para a fonte de calor; 11 - Proveta graduada.
Tabela 6 - Temperatura de desligamento da fonte de aquecimento do destilador para determinadas

espcies.
Cereal
Feijo, girassol, soja
Cacau
Centeio
Caf beneficiado, cevada, trigo
Arroz sem casca, aveia, milho, sorgo
Amendoim com casca, amendoim descascado,
arroz em casca, caf em coco
Temperatura de desligamento
175oC
180oC
185oC
190oC
195oC
200oC
7.3.2. Mtodos prticos, indiretos ou expeditos

Os mtodos prticos no avaliam diretamente o teor de gua, so baseados em propriedades
das sementes relacionadas ao seu contedo de gua como, por exemplo, a condutividade eltrica e
as propriedades dieltricas.
Todos os mtodos, no entanto, levam em conta a temperatura das sementes no momento da
determinao, pois esse valor influi tanto na condutividade como nas propriedades dieltricas; a
correo pode ser feita automaticamente pelo prprio aparelho ou com a utilizao de tabelas. Ex.:
Universal, Steinlite, Dole 400, Burrows.
Geralmente, no so precisos, mas utilizados rotineiramente quando h urgncia para
________________________________________________________________________________
66

obteno dos resultados, isto , determinao do ponto de colheita, controle durante a secagem,
armazenamento, etc.
Esses determinadores apresentam como vantagens a rapidez, facilidade de operao e
permitem leitura direta. Como desvantagens, apresentam resultados menos precisos que os obtidos
com os mtodos bsicos e necessitam de constante aferio com um mtodo bsico para que os
resultados sejam confiveis, alm do alto preo do equipamento.
Os aparelhos baseados na condutividade eltrica mostram resultados satisfatrios quando
as sementes apresentam de 7 a 23% de umidade. Em nveis inferiores a 7%, a gua fortemente
retida pelos colides e, acima de 23%, a condutividade cresce consideravelmente, determinando
erros.
O determinador de umidade Universal baseado na condutividade eltrica e somente haver
indicao satisfatria da umidade quando essa estiver bem distribuda. Durante o processo de
secagem, se a umidade for determinada com as sementes ainda quentes, essas apresentam-se com a
superfcie seca e midas internamente e o determinador de umidade registra ento um baixo teor de
gua, visto que o aparelho mede a resistncia eltrica das superfcies mais secas da semente. Esse
erro ser evitado se as sementes forem mantidas em repouso por algum tempo.
Os aparelhos baseados nas propriedades dieltricas apresentam algumas vantagens sobre
aqueles baseados na resistncia eltrica. Esto menos sujeitos aos erros resultantes da m
distribuio do teor de gua nas sementes e podem testar com maior preciso as que possuem muito
alta ou muito baixa umidade.
Os fatores limitantes para o seu uso esto relacionados com o alto custo e a dificuldade na
regulagem e alinhamento entre os diversos tipos.
7.3.3. Aferio de determinadores de umidade
A aferio dos determinadores de umidade deve ser realizada em nvel de cada laboratrio e
para cada espcie, dentro da seguinte sistemtica:
- utilizar amostras com teores de gua diferentes, dentro dos limites observados, durante o
manejo das sementes (7 a 25%);
- os teores de gua podem ser obtidos atravs de secagem ou umedecimento;
- uniformizao da umidade, embalagem hermtica - 48-72 horas;
- realizar determinaes de umidade simultneas no equipamento a ser aferido e na estufa.
________________________________________________________________________________________________________________________
67

Exemplo: Aferio do determinador de umidade infravermelho METTLER LP 15

comparativamente ao mtodo da estufa a 105C/24 horas, para sementes de arroz.
Umidade obtida
na estufa (%)
8,0
10,6
13,9
16,2
18,2
22,4
Desvio mximo
Escala do aparelho infravermelho 12 (160C)

Desvio de umidade (%)
Diferena repeties (%)
+ 0,2
0,2
+ 0,1
0,3
+ 0,1
0,3
+ 0,3
0,1
- 0,1
0,2
- 0,4
0,1
0,4
________________________________________________________________________________
68

8. Determinao do Peso de 1000 Sementes
8.1. Objetivo
Esta avaliao determina o peso mdio de 1000 sementes que geralmente utilizado para o clculo
da densidade de semeadura e a determinao do peso da amostra de trabalho para anlise de pureza de
espcies novas que no constam ainda nas RAS. Fornece uma idia tambm do estado de maturidade e
sanidade das sementes.
8.2. Metodologia
Esta determinao pode ser realizada de duas maneiras:
a) Pesa-se diretamente toda a poro semente pura da anlise de pureza e conta-se a seguir
o nmero de sementes existentes nessa poro com o auxlio de uma mquina contadora. O peso
mdio de 1000 sementes, nesse caso, ento obtido atravs da frmula:
Peso de 1000 sementes = Peso da amostra x 1000
no total de sementes
b) Contam-se ao acaso, com contadores mecnicos, 8 repeties de 100 sementes provenientes da
poro semente pura. Pesam-se, a seguir, essas repeties em separado e calcula-se a varincia, o desvio
padro e o coeficiente de variao dos valores obtidos nas pesagens, como segue:
Varincia (V) = n ( x2) - ( x)2
n (n - 1)
Desvio padro (S) = variancia
S
Coeficiente de variao (C.V.) = _ x 100
X
onde:
x = peso de cada repetio
n = nmero de repeties
= somatrio
X = peso mdio de 100 sementes
Se o C.V. no exceder de 6% para sementes consideradas como palhentas ou 4% para as
________________________________________________________________________________________________________________________
69

no-palhentas, o resultado dessa determinao ser obtido multiplicando-se o peso mdio das 100
sementes por 10. Se, ao contrrio, exceder aos limites mencionados, pesam-se mais 8 repeties e
calculam-se novamente a varincia e o desvio padro, agora sobre 16 repeties. No necessrio
calcular novamente o coeficiente de variao. Aps o clculo da varincia e do desvio padro,
desprezam-se todas as repeties cujos pesos divergiram da mdia mais do que o dobro do desvio
padro obtido. Feito isso, calcula-se a nova mdia das repeties restantes e multiplica-se a mesma
por 10.
Exemplo: Feijo
Repeties
x1
25,23
Peso (g)
x2
25,71
x3
24,17
x4
25,00
x5
24,24
x6
24,92
x7
24,35
x8
23,83
Clculo do peso mdio de 100 sementes:

X = 197,47 = 24,68g
8
Clculo da varincia
V = 8 (4877,12) - 38.994,40 = 0,403
8 (8 - 1)
Clculo do desvio padro:
S = 0,403 = 0,635
Clculo do coeficiente de variao:
C.V. = 0,635 x 100 = 2,57% < 4%
24,68
(que o limite do coeficiente de variao para sementes no palhentas)
Portanto, o peso de 1000 sementes ser:
X x 10 = 24,68 x 10 = 246,8g

Para ambos os casos, o resultado expresso em gramas, com o nmero de casas decimais
usado na determinao e os resultados informados no Boletim de Anlise sob Outras
Determinaes.
________________________________________________________________________________
70

9. Determinao do peso volumtrico
9.1. Definio
Corresponde ao peso de determinado volume de sementes. Se esse volume for um hectolitro
e o peso for expresso em quilograma, essa determinao denominada de peso hectoltrico.
realizada em laboratrio, principalmente para trigo, centeio, cevada, triticale, arroz.
9.2. Procedimento
Como o peso hectoltrico de uma amostra varia de acordo com seu grau de umidade, deve-se
realizar essas determinaes simultaneamente.
A determinao do peso hectoltrico realizada com o auxlio da balana hectoltrica, cuja
capacidade pode ser de de litro (Figura 17) ou de 1 litro de sementes (Figura 18). Para o primeiro
caso, utilizam-se tabelas de converso, j no segundo a leitura direta. So usadas para essa anlise
duas repeties, retiradas da amostra mdia e enviadas ao laboratrio em recipiente hermtico.
J existem disponveis no mercado balanas eletrnicas digitais para medio do peso
hectoltrico; entretanto, devido ao alto custo do equipamento, as balanas manuais, ainda, so
bastante utilizadas.
9.3. Clculo e informao dos resultados

Aps a pesagem, se a diferena entre as duas repeties no exceder 0,5kg.hl-1, o resultado
ser a mdia das pesagens e expresso no Boletim de Anlise em kg.hl-1, com uma casa decimal.
Repetir a determinao se a diferena entre as repeties exceder 0,5kg.hl-1.
Exemplo: Amostra mdia de trigo.
- Balana de de litro.
Repetio
Peso (g)
Peso (kg.hl-1)
185,0
73,65
184,5
73,40
-1
Diferena entre 73,65 e 73,40 = 0,25kg.hl
________________________________________________________________________________________________________________________
71

Mdia das pesagens = 73,5kg.hl-1

Resultado a ser informado = 73,5kg.hl-1
- Balana de 1 litro (obtemos resultados mais precisos e reproduzveis).
Repetio
A
B
Peso (kg.hl-1)
77,0
76,5
Diferena entre 77,0 e 76,5 = 0,5kg.hl-1

Mdia das pesagens = 76,8kg.hl-1
Resultado a ser informado = 76,8kg.hl-1
Figura 17 - Balana hectoltrica de de litro.
Figura 18 - Balana hectoltrica de 1 litro.
________________________________________________________________________________
72

10. Tolerncias
Nos procedimentos de rotina de laboratrio, onde so realizadas anlises em amostras

representativas de lotes de sementes, uma variao entre seus resultados esperada e at admitida
quando se comparam os mesmos, obtidos com sementes oriundas de uma mesma amostra mdia ou
de diferentes amostras mdias de um mesmo lote, independentemente se os testes so realizados
dentro de um mesmo laboratrio, por um mesmo analista ou no. Entretanto, quando essa diferena
entre resultados estiver acima dos limites de variao estabelecidos para as condies em que foram
executados os testes, ela ser considerada como real e significativa. Tolerncia o limite mximo
de variao permitido entre duas determinaes realizadas em circunstncias especficas e, acima
do qual, a diferena considerada significativa.
As Regras para Anlise de Sementes apresentam inmeras tabelas para os mais diferentes
casos de comparao de resultados recomendando, para os procedimentos de rotina, comparao
com padres estabelecidos e ainda com a finalidade de manter maior homogeneidade nas
avaliaes.
________________________________________________________________________________________________________________________
73

11. Vigor
A avaliao da qualidade fisiolgica de sementes, para fins de semeadura e comercializao

de lotes, tem sido fundamentalmente baseada no teste de germinao. Este teste realizado em
laboratrio, sob condies timas, para proporcionar a mxima percentagem de germinao da
amostra analisada.
O teste de germinao tem sido criticado, pois frequentemente os resultados obtidos em
laboratrio no se relacionam aos da emergncia das plntulas em campo, onde as condies de
ambiente podem ser adversas. Porm, deve ser lembrado que, embora em certos casos, os resultados
no satisfaam os produtores, esse teste indispensvel, principalmente por apresentar metodologia
padronizada e seus resultados reproduzidos dentro e entre laboratrios. um teste seguro para a
fiscalizao do comrcio.
11.1. Limitaes do teste de germinao

a)
No avalia o processo de deteriorao
A deteriorao um processo determinado por uma srie de alteraes fisiolgicas,
bioqumicas, fsicas e citolgicas, com incio a partir da maturidade fisiolgica, em ritmo
progressivo, determinando a queda da qualidade e culminando com a morte da semente.
Os resultados do teste de germinao no permitem detectar o progresso da deteriorao das
sementes (Figura 19), indicando apenas os estgios finais do processo. A perda do poder
germinativo a conseqncia final do processo de deteriorao.
---------- MATURIDADE---------Degenerao das Membranas
Reduo das Atividades Respiratrias e Biossinttica
Germinao Lenta
Reduo do Potencial de Armazenamento
Reduo da Taxa de Crescimento e de Desenvolvimento
________________________________________________________________________________
74

Menor Uniformidade
Maior Sensibilidade a Adversidades
Reduo da Emergncia das Plntulas em Campo
Plntulas Anormais
Perda do Poder Germinativo
----------------------MORTE--------------------b) Resultados de emergncia das plntulas em campo so inferiores aos observados em
laboratrio
Quando as condies ambientais se desviam daquelas mais adequadas, os resultados de
emergncia das plntulas podem ser inferiores aos obtidos na germinao em laboratrio, conforme
mostra a Tabela 7.
Tabela 7 - Comparao entre resultados de germinao e de emergncia de plntulas em
campo, obtidos de 94 amostras de sementes de soja (Delouche, 1974).
Emergncia em campo
Germinao (%) N de amostras
N Total
90 - 94
85 - 89
80 - 84
90 100
05
00
00
05
80 89
09
12
00
21
70 79
10
14
06
30
60 69
02
08
04
14
50 59
03
06
06
15
40 49
00
03
02
05
40
00
04
00
04
N Total
29
47
18
94
Observa-se que todos os lotes avaliados apresentavam germinao superior a 80%. No

entanto, a emergncia de plntulas em campo, sob condies moderadamente desfavorveis de
ambiente, foi em geral inferior germinao; dos 94 lotes avaliados, 68 apresentaram emergncia
de plntulas inferior a 80% e, consequentemente, comportamento inferior ao determinado em
laboratrios. Pode-se imaginar a frustrao de um produtor que tenha adquirido um lote de
sementes com 90 a 94% de germinao e observado emergncia de plntulas inferior a 60%.
________________________________________________________________________________________________________________________
75

c) No avalia o potencial de armazenamento

O teste de germinao no sensvel para detectar a perda de qualidades das sementes ao
longo do perodo de armazenamento (Tabela 8). Os testes de vigor, comprimento de raiz, teste de
frio e emergncia das plntulas, evidenciaram o decrscimo da qualidade aps o armazenamento.
Tabela 8 - Comportamento de sementes de milho durante o armazenamento a 30C e 70%
de umidade relativa do ar, durante 10 meses.
Perodo de armazenamento (meses)
Parmetros
Germinao (%)
Comprimento de raiz (mm)
Teste de frio (%)
9
8
4
9
8
8
0
9
3
8
0
8
9
2
6
5
6
3
0
4
Emergncia de plntulas (%)

- 06 dias
- 13 dias
8
8
9
2
6
7
8
1
6
7
8
3
d) A percentagem de plntulas normais obtida no teste de germinao representa a

mxima percentagem de germinao da amostra analisada
e) Plntulas com deficincias (leguminosas com leses superficiais, apenas um
cotildone, problemas na raiz primria) so computadas como normais
f) No h diferenciao de lotes segundo a velocidade de germinao
g) No permite diferenciar o desempenho no campo e no armazenamento de lotes de
sementes com alta germinao
Quando o ambiente em campo ou no armazenamento favorvel, geralmente no h
preocupaes mais srias quanto fidelidade dos resultados obtidos em laboratrio. No entanto,
quando as condies de ambiente se desviam das mais adequadas, cresce a importncia da
consistncia da metodologia utilizada para identificao do potencial fisiolgico. O vigor se
expressa em condies subtimas que varivel de acordo com a espcie e a cultivar, que inclui
temperatura, umidade, caracterstica do solo e sanidade, alm de prticas de manejo. No h dvida
de que lotes vigorosos tm maior probabilidade de sucesso quando expostos a ampla variao das
condies ambientais.
Os exemplos abaixam ilustram o comportamento no campo e no armazenamento de quatro
lotes de sementes com alta percentagem de germinao.
________________________________________________________________________________
76

Campo Oryza sativa

Testes
Lotes
1
Germinao (%)
Emergncia em campo em condies
subtimas (%)
93
92
95
97
84
71
68
82
Armazenamento Glycine max

Testes
Germinao (%)
Emergncia em
subtimas (%)
campo
Lotes
em
condies
1
90
2
90
3
90
4
90
71
90
66
89
Portanto, os produtores de sementes no estavam completamente satisfeitos com as

informaes fornecidas pelo teste de germinao, realizado sob condies que geralmente
conduzem a superestimativa do potencial fisiolgico das sementes.
As informaes do teste de germinao no satisfaziam os produtores porque geravam
dvidas. As dvidas mais preocupantes eram:
Lotes com alta germinao x baixa emergncia;
Lotes com alta germinao x baixo potencial de armazenamento;
Lotes com germinao semelhante x desempenho diferente no campo e no
armazenamento.
O exemplo prtico das diferenas de vigor que podem ser observadas em dois lotes de
sementes, com mesma percentagem de germinao, apresentado na Tabela 9.
Tabela 9 - Germinao (%) e emergncia de plntulas (%) de dois lotes de sementes, sob
diferentes condies de campo.
Emergncia de plntulas (%)
Lote
A
B
Germinao (%)
90
90
Campo 1
88
87
Campo 2
80
60
Campo 3
70
40
Campo 1. (condies de campo, prximas das ideais) - os estandes de ambos os lotes de

baixo e alto vigor so similar percentagem de germinao;
________________________________________________________________________________________________________________________
77

Campo 2. (condies de campo levemente desfavorveis) - lotes de sementes com alta

germinao de laboratrio podem apresentar baixo vigor;
Campo 3. (condies de campo extremamente desfavorveis) - alto vigor da semente no
garante satisfatrio estande sobre todas as condies.
Como conseqncia das limitaes do teste de germinao, houve a necessidade de uma
estimativa mais segura do potencial fisiolgico das sementes. Diante disso, foram desenvolvidos
testes que retratam o comportamento das sementes sob ampla faixa de condies ambientais,
indicando com maior segurana o potencial fisiolgico dos lotes, denominados testes de vigor. As
informaes sobre o vigor iro complementar as obtidas no teste de germinao.
11.2. Definies de vigor

Vigor a soma total das propriedades da semente que determinam o nvel de atividade e
desempenho da semente ou do lote de sementes, durante a germinao e emergncia das plntulas.
As sementes que apresentam bom desempenho so chamadas vigorosas, enquanto as que
apresentam fraco desempenho so chamadas sementes de baixo vigor (Hampton e Tekrony,
1995).
Vigor de semente compreende as propriedades da semente que determinam o potencial para
emergncia e desenvolvimento rpidos e uniformes de plntulas normais, sob ampla diversidade de
condies ambientais (AOSA, 1983).
Portanto:
Lote de sementes de alto vigor aquele potencialmente capaz de um bom desempenho,
mesmo em condies sub ou supra-timas para a espcie.
Lote de sementes de baixo vigor aquele que apresenta alta germinao e somente
mostra bom desempenho em condies prximas a tima para a espcie.
Empresas tm utilizado estes conceitos, no controle interno de qualidade, para comercializar
as suas sementes. Aps o ranqueamento dos lotes em diferentes nveis de vigor, os menos vigorosos
so comercializados para regies de clima mais favorvel na poca de semeadura. J os lotes mais
vigorosos, para regies que apresentam maior amplitude climtica.
________________________________________________________________________________
78

11.3. Objetivos bsicos dos testes de vigor

a) Detectar diferenas na qualidade fisiolgica de lotes com alta germinao
De acordo com a relao entre a germinao e o vigor durante a deteriorao de sementes,
uma pequena diferena na percentagem de germinao representa grande diferena no progresso da
deteriorao (Figura 20). Nestas circunstncias, necessrio o uso de testes de vigor que permitem
maior sensibilidade na diferenciao no potencial de desempenho do lote.
Os pontos X e Y, indicados nas duas curvas, representam a diferena crescente entre a
germinao e o vigor, medida que progride a deteriorao, resultando em amplas variaes de
vigor entre lotes com germinao relativamente elevada. Observa-se tambm, a perda mais rpida
do vigor durante a deteriorao.
Deteriorao
Figura 20 - Relao hipottica entre a germinao e o vigor durante a deteriorao de sementes (Delouche e Caldwell,
1960).
b) Distinguir, com segurana, lotes de alto e baixo vigor

Geralmente, recomendada a determinao do vigor de lotes que apresentem, no mnimo,
80% de germinao, valor que predomina nos padres estabelecidos para a maioria das espcies
cultivadas. Na verdade, seria pouco interessante, do ponto de vista prtico, avaliar o vigor de lotes
com germinao inferior ao padro mnimo para a comercializao e quando sua baixa qualidade j
tenha sido detectada pelo teste de germinao. Paralelamente, totalmente irrelevante tentar
detectar diferenas de vigor entre lotes com diferenas acentuadas de germinao, pois nessa
situao, os resultados de qualquer teste de vigor pouco ou nada acrescentaria a essa informao.
A queda da viabilidade das sementes de uma populao segue uma curva sigmide, em que
se distinguem trs fases. Durante a Fase I, relativamente longa, poucas sementes morrem; a Fase II
caracterizada pelo declnio rpido da germinao e poucas sementes retm a viabilidade durante
________________________________________________________________________________________________________________________
79

este perodo; na Fase III, poucas sementes permanecem vivas (Figura 21).
Os melhores testes de vigor so os que permitem detectar diferenas na qualidade dos lotes
na Fase I (lotes de sementes com germinao superior a 80%). Na Fase II, onde ocorre perda rpida
da viabilidade, qualquer teste de vigor detecta a baixa qualidade do lote.
Figura 21 - Curva da perda da viabilidade.
c) Separao de lotes em diferentes nveis de vigor, de maneira proporcional

emergncia das plntulas em campo, potencial de armazenamento e resistncia ao transporte
Se os testes de vigor ranquearem os lotes em A, B, C e D, indicando o lote A como o mais
vigoroso e o D, como o menos vigoroso, espera-se na emergncia em campo o mesmo
comportamento.
11.4. Vigor e desempenho de sementes

a) Vigor x armazenamento
O potencial de armazenamento vai depender da qualidade inicial da semente e do ambiente
em que foram armazenadas. Sementes mais vigorosas comparadas s menos vigorosas, em
condies idnticas e moderadamente desfavorveis de armazenamento, devero no final do
perodo apresentar melhor qualidade.
________________________________________________________________________________
80

b) Vigor x produo
Porcentagem de emergncia das plntulas e produo;

A influncia do vigor das sementes sobre a emergncia das plntulas em campo, o
estabelecimento do estande e o desenvolvimento inicial das plantas tem sido consensual,
especialmente sob condies menos favorveis de ambiente.
O estabelecimento adequado do estande depende da utilizao de sementes com alto
potencial fisiolgico, capazes de germinar uniforme e rapidamente, sob ampla variao de
ambiente. A rapidez e o sincronismo so muito importantes porque permitem reduzir o tempo de
exposio das sementes e das plntulas a fatores adversos.
A emergncia reduzida e/ou desuniforme pode conduzir a atrasos no desenvolvimento,
problemas com controle de plantas invasoras, desuniformidade da cultura em diversos estdios
fenolgicos (inclusive maturao), interferncia na qualidade do produto e nas caractersticas da
planta relacionadas eficincia da colheita (altura das plantas, intensidade de ramificao, altura da
insero dos frutos, dimetro do caule, intensidade de acamamento). Portanto, o desempenho das
sementes, logo aps a semeadura, pode provocar efeitos diretos sobre a produo final.
O vigor da semente exerce grande influncia sobre o desenvolvimento do vegetal na fase de
plntula: velocidade e uniformidade de emergncia, estande, tamanho das plntulas, entre outros.
J a influncia do vigor da semente na fase de planta no to clara e definida. No incio da
fase de planta, o efeito do vigor ainda considervel. Entretanto, medida que o tempo passa, a
influncia residual do vigor cada vez menor.
Os resultados de pesquisa so contraditrios. Alguns autores consideram que as sementes
menos vigorosas emergem mais lentamente e, embora as diferenas no desenvolvimento inicial
possam se atenuar com o progresso do ciclo das plantas, o crescimento das plantas provenientes de
sementes de baixo vigor geralmente continua menor e elas apresentam maior sensibilidade a
adversidades do ambiente.
As culturas que visam explorao de rgos vegetativos tm mostrado, com freqncia
relaes entre vigor e produo. No caso de produo de gros e/ou sementes, os resultados de
pesquisa, sobre a influencia do vigor so escassos e contraditrios, havendo necessidade de maiores
estudos. Sero apresentados, a seguir, resultados de pesquisas que evidenciaram a importncia do
uso de sementes de alto vigor.
Sementes de soja de alto vigor produzem plntulas com maior tamanho inicial aos 21
dias aps a semeadura, em condies ambientais desfavorveis. Entretanto em condies
ambientais favorveis, no foram observadas diferenas na altura das plantas entre os lotes de alto e
baixo vigor, de acordo com a Tabela 10 (Scheeren, 2002).
________________________________________________________________________________________________________________________
81

Tabela 10 - Altura mdia de plantas (cm) aos 21 dias aps a semeadura, em resposta ao
vigor de sementes de soja, em dois anos de cultivo, com condies ambientais desfavorveis no ano
1 e favorveis no ano 2.
Ano
1
12,7
11,7
1
2
Lotes de alto vigor

2
3
13,3
13,3
12,3
13,0
Mdia
13,1A
12,3A
1
11,7
12,3
Lotes de baixo vigor

2
3
12,7
10,0
12,3
12,3
Mdia
11,4B
12,3A
* valores seguidos de letras iguais, em cada linha, indicam diferenas no significativas

A produtividade por rea dos lotes de alto vigor de sementes de soja pode ser 9%
superior aos de baixo vigor, em condies ambientais desfavorveis (Tabela 11) (Scheeren, 2002).
Tabela 11 - Produtividade da soja (kg.ha-1), cultivar Coodetec 202, em resposta ao vigor das
sementes em dois anos de cultivo, com condies ambientais desfavorveis no ano 1 e favorveis
no ano 2.
Ano
1
1
Lotes de alto vigor

1
2
3
3512
3494
3142
3512
3494
3142
Mdia
3383A
3383A

1
2
3
3020
3058
3184
3020
3058
3184
Mdia
3087B
3087B

O uso de sementes de soja de alto vigor proporciona acrscimos superiores a 35% no
rendimento de sementes, em relao ao uso de sementes de baixo vigor, onde o uso de somente
sementes de baixo vigor produziu 1674kg.ha-1, enquanto que a utilizao de somente sementes de
alto vigor, 2318kg.ha-1, segundo Figura 22 (Kolchinski et al., 2005).
Figura 22 - Rendimento de sementes de soja em funo de diferentes propores das sementes de alto vigor na populao.
________________________________________________________________________________
82

As plantas de soja provenientes de sementes de alto vigor so mais produtivas do que as

plantas provenientes de sementes de baixo vigor (Tabela 12) (Cervieri Filho, 2005).
Tabela 12 - Rendimento de sementes (kg.ha-1) de trs cultivares de soja, com dois nveis de vigor.
Cultivar
Vigor
Alto
Monsoy 8914
Monsoy 9350
Pintado
4559
2762
1405
Diferena no
rendimento (%)
Baixo
2296
1410
840
49,6
49,0
40,0
O rendimento de gros de arroz foi afetado pelo nvel de qualidade fisiolgica das
sementes (Tabela 13). O uso de sementes de alta qualidade fisiolgica proporcionou acrscimos no
rendimento de 8,2 e 9,0% nos anos 2000/2001 e 2001/20002, que corresponde a 622 e 660kg.ha-1,
respectivamente (Hofs et al., 2004).
Tabela 13 - Componentes do rendimento e produtividade de gros de arroz irrigado, em
funo de diferentes nveis de qualidade fisiolgica das sementes, em dois anos agrcolas.
Nveis Plantas/ Panculas/ Panculas/ Gros/ Massa
m-2
planta
pancula 1000
de
m-2
vigor
gros
2000/2001
163a
361
2,73b
76,6b
26,25a
Alto
135b
347
3,36a
81,6a
25,81b
Baixo
2001/2002
310a
466
1,64b
80,3a
26,08a
Alto
266b
432b
1,79a
85,3a
25,61b
Baixo
Produtividade de gros (kg.ha-1)
7588a
6966b
7346a
6686b
* valores seguidos de letras iguais, em cada coluna, indicam diferenas no significativas

As plantas originadas de sementes de arroz de alto vigor apresentam rendimento de gros
superiores a 12% aos das plantas originadas de sementes de baixo vigor (Figura 23) (Melo, 2005).
Figura 23 - Rendimento de gros das plantas de arroz em funo do percentual de sementes de alto vigor na amostra.
________________________________________________________________________________________________________________________
83

Em sementes de hortalias, como as de cebola, o efeito do vigor tambm notado na

emergncia de plntulas e na produo de mudas vigorosas (Tabela 14) (Piana et al., 1995).
Tabela 14 - Efeito do vigor de sementes sobre a emergncia de plntulas e a produo de mudas
vigorosas de cebola.
Lotes
Germinao
(%)
1
2
3
80
85
81
Envelhecime
nto
acelerado
(%)
24
20
58
Mudas vigorosas
Emergncia
de plntulas
(%)
Matria seca (g/planta)
50
37
74
35
23
52
6,86
4,50
9,88
rgo da planta explorado comercialmente e poca de colheita, em

relao ao ciclo da planta;
O efeito do vigor sobre a produo pode existir ou no, dependendo do rgo da planta que
explorado. No caso de hortalias, onde o rgo a ser explorado so folhas, razes e tubrculos, h
maior probabilidade do vigor afetar a produo, em virtude do efeito residual, assim o bom
desempenho inicial contribui para o melhor desempenho da planta adulta, principalmente para
espcies de ciclo curto.
Em relao poca de colheita, quanto mais cedo se proceder a colheita (ciclo curto) maior
a probabilidade de haver influncia do vigor.
Capacidade de compensao das plantas ou de adaptao ao espao

disponvel;
Deve ser reconhecida a capacidade de adaptao das plantas de varias espcies ao espao
disponvel, apresentando elevao da produo individual quando dispem de espao mais amplo
para o seu desenvolvimento.
A soja apresenta notvel habilidade para se adaptar ao espao disponvel, mediante o ajuste
da capacidade de ramificao e da produo individual; sob menores populaes, as plantas se
ramificam com maior intensidade e produzem maior nmero de vagens e de sementes por planta.
Em plantas que apresentam capacidade considervel de compensao, mesmo os possveis
atrasos no desenvolvimento podem no afetar a produo.
Ausncia de efeitos do vigor das sementes sobre a produo de gros de soja (Tabela 15)
(Frana Neto et al., 1984).
________________________________________________________________________________
84

Tabela 15 - Efeito do nvel de vigor da semente sobre o rendimento da soja.

Cultivar
Nveis de vigor
Emergncia (%)
Davis
Alto
Mdio
Baixo
91
79
61
Envelhecimento
acelerado (%)
81
50
13
Produo (kg.ha-1
1.999
1.926
1.994
Densidade de plantas;
Algumas pesquisas indicam que o ajuste da densidade de semeadura pode corrigir as
possveis deficincias do potencial fisiolgico do lote de sementes e a ocorrncia de falhas na
lavoura.
Quando o ajuste da densidade no realizado, a reduo do estande pode afetar
negativamente a produo final, mas tambm possvel que a produo individual seja beneficiada
porque as plantas encontrariam maior espao para se desenvolver.
Na soja, o estabelecimento do estande adequado obtido com lotes de alto vigor,
independente da densidade de semeadura adotada. Porm, em lotes de baixo vigor necessria a
correo da densidade (Tabela 16) (Scheeren, 2002).
Tabela 16 - Estande final de plantas por metro linear, em resposta ao vigor de sementes de soja,
semeadas em duas densidades de semeadura (1- sem correo e 2- com correo de 15%).
Densidade
1
2
1
14,7
16,0
Lotes de alto vigor

2
3
14,3
14,3
15,7
17,0
Mdia
14,4a
16,2a
1
13,0
15,3

2
3
13,0
12,3
14,0
15,7
Mdia
12,8b
15,0a
Grau de deteriorao das sementes utilizadas para a instalao da

cultura.
A utilizao de lotes menos vigorosos conduzem reduo da percentagem de emergncia
de plntulas e, portanto, da populao de plantas por rea. Vrias pesquisas demonstram a reduo
da percentagem das plntulas em campo medida que se intensifica a deteriorao ou decresce o
vigor, afetando a produtividade.
Mesmo em espcies que apresentam capacidade de compensao, o emprego de sementes
com baixa germinao (menor que 50%), dificilmente ira permitir que seja obtido o nmero de
plantas para igualar o estande.
________________________________________________________________________________________________________________________
85

11.5. Testes de vigor

O objetivo dos testes de vigor em sementes fornecer informaes sobre o potencial de
campo e/ou desempenho no armazenamento de lotes de sementes com germinao semelhante, uma
diferenciao que nem sempre pode ser identificada pelo teste de germinao. recomendada a
determinao do vigor de lotes que apresentem, no mnimo, 80% de germinao, valor que
predomina nos padres estabelecidos para a maioria das espcies cultivadas.
Quando as condies ambientais no campo ou no armazenamento so favorveis, no h
preocupaes mais srias quanto fidelidade dos resultados obtidos no teste de germinao. No
entanto, quando as condies ambientais se desviam das mais adequadas, cresce a importncia da
utilizao de testes de vigor para a identificao do potencial fisiolgico, recomendando-se a
realizao de um conjunto de testes. A utilizao de mais de um teste necessria para informar
sobre a qualidade das sementes, visto que esses avaliam caractersticas diferenciadas das sementes
(fsicas, fisiolgicas, bioqumicas e de resistncia), considerando-se sempre a finalidade do uso dos
resultados, pois nem sempre o teste mais indicado para avaliar o potencial de emergncia das
plntulas em campo o mais adequado para detectar diferenas entre o potencial de armazenamento
dos lotes de sementes de determinada espcie.
Estes testes no so utilizados para predizer o exato nmero de plntulas que iro emergir e
sobreviver no campo. Os resultados dos testes de vigor so comparativos. O resultado do teste de
frio de 85% no quer dizer que 85% das plntulas iro sobreviver no campo. Entretanto, informa
que o lote de sementes com 85% de germinao pelo teste de frio mais provvel apresentar boa
emergncia no campo sobre condies de estresse, que um lote de sementes com a germinao aps
o teste de frio de 70%.
Vrios testes esto disponveis e permitem diferenciar de maneira consistente, os lotes de
alto e os de baixo vigor, a dificuldade maior identificar os de nveis mdios. Dentre eles, o de
envelhecimento acelerado, deteriorao controlada, frio, condutividade eltrica, tetrazlio, primeira
contagem e classificao do vigor de plntulas podem ser considerados os mais utilizados em
programas de controle de qualidade.
Nas regras internacionais consta o protocolo para o teste de Envelhecimento Acelerado para
soja e o de Condutividade Eltrica para ervilha, com tabelas de tolerncias para comparao dos
resultados.
muito difcil a proposio de valores para identificar limites de diferenciao entre lotes
de alto e de baixo vigor, entretanto isso no impede que as empresas de sementes estabeleam
ndices prprios para seus programas internos de controle de qualidade.
Os testes de vigor tm apresentado uma grande contribuio ao sistema de produo de
sementes, quando seus resultados so utilizados em decises internas da empresa produtora de
sementes tendo em vista evitar o manuseio e comercializao de sementes de qualidade inadequada.
________________________________________________________________________________
86

Os testes de vigor podem ser teis em vrios aspectos:

- detectar diferenas de qualidade fisiolgica de lotes com germinao semelhante;
- seleo de lotes para semeadura;
- avaliao do potencial de emergncia das plntulas no campo;
- avaliao do potencial de armazenamento;
- avaliao do grau de deteriorao;
- controle de qualidade ps-maturidade;
- seleo de cultivares com qualidade fisiolgica elevada, durante programas de
melhoramento gentico;
- identificao ou diagnstico de problemas;
- marketing e promoo de vendas.
11.5.1. Princpios gerais

Na conduo dos testes de vigor, utilizam-se sementes da poro semente pura da anlise de
pureza.
Os testes de vigor requerem uma verificao mais rgida das condies do teste do que o de
germinao e necessita ter includo um lote de sementes testemunha, para proporcionar controle de
qualidade interno da uniformidade do teste de vigor. Variabilidade nos resultados do lote de
sementes testemunha fornece um indicativo de pequenas flutuaes nas condies do teste
(temperatura, umidade da semente) que podem afetar significativamente a segurana dos resultados.
A seleo da amostra controle tem que ser realizada anualmente para cada espcie, dever
apresentar alta germinao, mdio vigor e ser livre de danos fsicos e doenas.
Exemplos: Em milho, a amostra controle deve apresentar germinao 95% e
70-80% de vigor, baseado no teste de frio;
Em soja, a amostra controle deve apresentar germinao 90% e 70-80% de
vigor, baseado no teste de envelhecimento acelerado.
aconselhvel que os laboratrios possuam um Manual de Qualidade dos procedimentos,
para conduo dos testes de vigor, onde devero ser realizadas as anotaes referentes s condies
do teste e informao dos resultados. Tambm, necessrio o treinamento do pessoal visando
uniformidade dos procedimentos.
11.5.2. Teste de condutividade eltrica

O teste est baseado na relao existente entre o vigor de sementes e a integridade do
sistema de membranas celulares.
Durante o processo de embebio, h liberao de solutos citoplasmticos, cuja intensidade
depende do estado de desorganizao das membranas. Ainda durante esse processo, verifica-se a
________________________________________________________________________________________________________________________
87

habilidade de reorganizao e reparao de danos das membranas celulares, que influenciam na

quantidade de eletrlitos liberados pela semente. Quanto maior a capacidade de restabelecimento da
integridade da membrana celular, menor ser a quantidade de eletrlitos liberados. Quanto maior o
vigor das sementes, mais rapidamente essas iro reparar danos, inclusive de grande extenso, ao
contrrio das de baixo vigor. Assim, a liberao de eletrlitos de sementes de alto vigor ser menor
do que as sementes de baixo vigor.
O teste de condutividade proporciona rpida e objetiva medida do vigor da semente e pode
ser facilmente conduzido para a maioria das espcies rotineiramente analisadas nos laboratrios,
sem a necessidade de equipamentos complexos ou treinamento especial de pessoal.
O teste pode ser realizado de duas formas: atravs do sistema de condutividade de massa
(bulk) ou do emprego de clulas individuais. Na anlise de semente individual, o procedimento o
mesmo utilizado para o sistema de massa, com a diferena de que, nesse caso, as sementes so
colocadas numa bandeja com 100 clulas individuais, s quais adicionam-se de 2 a 3ml de gua
deionizada.
O teste de condutividade de massa conduzido com amostras de um nmero definido de
sementes (25, 50, ou 75), previamente pesadas, embebidas em volume conhecido (25 a 250ml) de
gua destilada a 20 ou 25C. O mtodo estabelece que a leitura da condutividade eltrica da soluo
deve ser efetuada aps 24 horas de embebio, em condutivmetro; os resultados so expressos em
mho.cm-1.g-1 de sementes ou em S.cm-1.g-1.
Matthews e Powell (1981) indicam os seguintes ndices para a interpretao dos resultados
de lotes de sementes de ervilha:
25s.cm-1.g-1 - nenhum indicativo de que o lote seja imprprio para semeaduras

precoces ou sob condies adversas.
25 a 29s.cm-1.g-1 - lote pode ser semeado precocemente, mas h risco de baixo

desempenho sob condies adversas.
30 a 43s.cm-1.g-1 - lote no prprio para semeaduras precoces, especialmente sob

condies adversas.
43s.cm-1.g-1 - lote imprprio para semeadura.

O valor obtido com o teste de condutividade de massa de sementes representa a mdia da
condutividade de quatro repeties de 50 sementes. Se uma nica semente apresentar dano mecnico
severo, essa causar excessiva liberao de eletrlitos, aumentando acentuadamente a condutividade
da amostra; assim, essa repetio poder ocasionar a sada das faixas de tolerncia, gerando a
necessidade de novo teste.
11.5.3. Teste de envelhecimento acelerado

O teste de envelhecimento acelerado foi inicialmente desenvolvido para estimar a longevidade de
sementes em condies de armazenamento. Pesquisas adicionais tm mostrado que esse teste de vigor
correlaciona-se, tambm, com a emergncia a campo, com o estabelecimento de estande para um grande
________________________________________________________________________________
88

nmero de espcies.
No teste de envelhecimento acelerado, as sementes so expostas a condies adversas de
alta temperatura (40 a 45C) e umidade relativa (prxima a 100%), por diferentes perodos,
dependendo da espcie, antes de submet-la ao teste de germinao (Tabela 17).
So utilizadas caixas plsticas como compartimentos individuais (minicmaras) para a
colocao das amostras; cada caixa possui, suspensa em seu interior, uma tela de alumnio onde as
sementes so distribudas de maneira a constiturem camada nica sobre a superfcie da tela (Figura
24). Pode-se efetuar a contagem das sementes antes de sua distribuio ou a distribuio das
sementes em camada uniforme ou a obteno de amostra de peso conhecido, de modo que contenha
pelo menos 220 sementes. Recomenda-se a conduo do teste com amostras uniformes quanto ao
tamanho das sementes, visando atenuar os efeitos do tamanho sobre a resposta das sementes ao
envelhecimento. Obtidas as amostras, so colocados 40ml de gua no fundo de cada caixa, para
garantir nvel de umidade relativa do ar prximo de 100% em seu interior. A seguir, cada
minicmara tampada e mantida em cmara, regulada entre 40 e 45C, onde permanecem durante o
perodo especificado para a espcie. Aps a retirada da cmara, conduzido teste de germinao, de
acordo com as RAS; as amostras de sementes mais vigorosas originam percentagens mais elevadas
de plntulas normais, em avaliao nica efetuada na data prevista para a primeira contagem do
teste de germinao.
Tabela 17 - Indicaes para o teste de envelhecimento acelerado (mtodo gerbox) (Tekrony,
1995).
Culturas
Peso sementes
Temperatura
Perodos
Soja
Alfafa
Feijo
Colza
Milho
Milho doce
Alface
Feijo mungo
Cebola
Pimenta
Trevo vermelho
Azevm
Sorgo
Girassol
Festuca
Fumo
Tomate
Trigo
(g)
42
3,5
42
1
40
24
0,5
40
1
2
1
1
15
20
1
0,2
1
20
(C)
41
41
41
41
45
41
41
45
41
41
41
41
43
45
41
43
41
41
(h)
72
72
72
72
72
72
72
96
72
72
72
48
72
72
72
72
72
72
Umidade das
sementes aps
envelhecimento1
(%)
27-30
40-44
28-30
39-44
26-29
31-35
38-41
27-32
40-45
40-45
39-44
36-38
28-30
23-27
47-53
40-50
44-46
28-30
O teste deve ser repetido quando as umidades das sementes forem superiores ou inferiores a essas.
________________________________________________________________________________________________________________________
89

Figura 24 - Caixas plsticas (gerbox) para o teste de envelhecimento acelerado.
11.5.4. Teste de emergncia em campo

Avalia o vigor relativo entre lotes, bem como a capacidade das sementes de produzirem
plantas em campo.
As condies de realizao do teste, adequadas espcie em questo, no que se refere
poca de semeadura, espaamento entre linhas e entre plantas e profundidade de semeadura
recomendada para a cultura, permitem uma estimativa da potencialidade dos lotes em estabelecer
um estande a campo. Nesse teste, so semeadas quatro repeties de 50 sementes e uma nica
avaliao das plntulas emergidas realizada aos 21 ou 28 dias aps a semeadura. Em espcies de
germinao rpida, pode-se fazer essa contagem aos 14 dias. O resultado final obtido a mdia das
repeties expressas em porcentagem. A partir da implantao desse teste, outras estimativas do
vigor podem ser obtidas conjuntamente, variando-se apenas o sistema de avaliao. Como exemplo,
cita-se a obteno de dados sobre a velocidade de emergncia de um lote (Tabela 18), onde so
realizadas contagens dirias das plntulas emergidas em cada dia, dividida pelo nmero de dias
decorridos entre a semeadura e a emergncia, bem como pode-se obter tambm informao sobre o
peso da matria verde e da matria seca do lote e a capacidade de sobrevivncia das plntulas
emergidas. Essa ltima informao obtida pela permanncia das plantas em campo e uma
avaliao feita aos 35 ou 40 dias aps a semeadura. Independentemente do resultado que se deseja
obter, cuidados quanto ao ataque de lagartas, insetos e outros animais devem ser observados, para
que apenas o vigor das sementes seja o responsvel pela populao emergida ou estabelecida.
________________________________________________________________________________
90

Tabela 18 - Teste de velocidade de emergncia de plntulas.

Dias aps a
semeadura
5
6
7
8
9
10
11
Total
No de plntulas
emergidas na linha
5
13
15
28
35
45
45
No de plntulas emergidas
no dia
5
(13 - 5) = 8
(15 - 13) = 2
(28 - 15) = 13
(35 - 28) = 7
(45 - 35) = 10
(45 - 45) = 0
ndice de velocidade
de emergncia
5 5 = 1,00
8 6 = 1,03
2 7 = 0,28
13 8 = 1,07
7 9 = 0,77
10 10 = 1,00
0 11 = 0,00
5,15
interessante salientarmos que o teste de emergncia em campo vem sendo utilizado por
um nmero cada vez maior de produtores de sementes na poca de comercializao dos lotes. A
visualizao dos estandes de campo permite ao comprador uma seleo mais adequada dos lotes,
bem como maior confiana no produto adquirido.
________________________________________________________________________________________________________________________
91

12. Boletim de anlise de sementes
12.1. Definies
12.1.1. Boletim de Anlise de Sementes BAS
Documento emitido por Laboratrio de Anlise de Sementes, credenciado pelo Ministrio
da Agricultura, Pecuria e Abastecimento MAPA, que expressa os resultados de anlise de uma
amostra (Figura 25).
12.1.2. Boletim Oficial de Anlise de Sementes BASO

Documento emitido por Laboratrio de Anlise de Sementes do MAPA ou por ele
credenciado, que expressa os resultados de anlise de uma amostra oficial.
________________________________________________________________________________
92

Figura 25 Modelo vertical do Boletim de Anlise
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93

13. Laboratrio de anlise de sementes
13.1. Definies
13.1.1. Laboratrio de Anlise de Sementes LAS
Aquele inscrito e credenciado no RENASEM (Registro Nacional de Sementes e Mudas) e
que foi submetido ao processo de avaliao e auditoria da CGAL (Coordenadoria Geral de Apoio
Laboratorial), por meio do qual recebe o reconhecimento formal de sua excelncia tcnica e de seu
Sistema de Gesto. Os resultados obtidos por meio das metodologias validadas e aprovadas tm
finalidade para controle de qualidade e identificao de lotes.
13.1.2. Laboratrio Oficial de Anlise de Sementes LASO

Aquele inscrito e credenciado no RENASEM, que se submeteu ao processo de avaliao e
auditoria da CGAL, por meio do qual recebe o reconhecimento tcnico formal de sua excelncia
tcnica e de seu Sistema de Gesto. Os resultados obtidos por meio das metodologias validadas e
aprovadas tm finalidade oficial para fiscalizao, certificao e outros fins.
13.2. Planejamento e organizao

Um dos fatores mais importantes a ser considerado em um programa de produo de
sementes o controle de sua qualidade e esse realizado no Laboratrio de Anlise de Sementes
que atua como centro de controle, onde so efetuados os mais diferentes testes de qualidade, os
quais formam a base determinante para as decises a serem tomadas nas diferentes fases da
produo e uso das sementes.
A anlise de sementes o trabalho de rotina do laboratrio e compreende a determinao
dos ndices de qualidade das amostras que representam os lotes de sementes, tais como pureza
fsica, germinao e umidade. A grande maioria dos laboratrios existentes tem como nica funo
a anlise de rotina, isto , a anlise de sementes para a identificao de lotes. Funcionam junto s
cooperativas, analisando as sementes de produo prpria e, em alguns casos, de outras
cooperativas. Outros, alm da anlise de rotina para a identificao de lotes, realizam as anlises da
certificao e da fiscalizao do comrcio de sementes e emitem boletins oficiais. Adicionalmente,
podem ainda realizar pesquisa, gerando novas tcnicas de controle de qualidade, bem como o
________________________________________________________________________________
94

treinamento do qual surgem novos tcnicos especializados, atravs de cursos ou estgios.

Em alguns pases e/ou regies, h necessidade crescente na estruturao de novos
laboratrios para atender a demanda dos programas de controle interno de qualidade de sementes.
Quando essa situao ocorrer, para o bom desempenho de todas as atividades de um laboratrio,
alguns itens e/ou critrios devem ser observados quando do seu planejamento e organizao,
principalmente, tais como:
sua finalidade especfica de atuao;

nmero de amostras e espcies de sementes a serem recebidas e analisadas por ano,
bem como a natureza dessas anlises.
A localizao e o tamanho da rea fsica, bem como o nmero de pessoal capacitado e os

equipamentos necessrios para o desenvolvimento de suas atividades esto diretamente
relacionados aos itens acima mencionados. bom lembrar que o nmero de salas no to
importante quanto distribuio das reas de servio. Ao se construir um laboratrio de anlise de
sementes, imprescindvel que a distribuio dessas reas siga o mesmo roteiro que seguem as
amostras submetidas anlise, uma vez que essa a nica maneira de fazer o servio de forma
racional, sem desperdcio de tempo e demasiado trnsito dos analistas pelo mesmo. conveniente,
entretanto, quando possvel, ter-se salas distintas para a execuo dos testes de pureza e germinao
daquelas utilizadas para o recebimento, protocolo, pesagem e preparo das amostras para os testes, j
que pode ocorrer grande incidncia de poeira quando da diviso das amostras.
Deve ser dada especial ateno orientao geogrfica do laboratrio, a fim de evitar a
incidncia direta dos raios solares sobre os locais onde sero realizados os testes sem, contudo,
inibir boa iluminao natural do ambiente. A sala destinada realizao da anlise de pureza, por
exemplo, deve dispor do maior nmero de janelas possveis, as quais devem ser baixas e largas, o
que ir proporcionar aos analistas o mximo de luz natural. O mesmo ocorre para o local onde sero
realizados os testes de germinao que, alm da luminosidade natural, dever dispor de mesas com
tampo prova de umidade (frmica ou azulejo), onde os testes sero preparados e/ou avaliados.
indispensvel, ainda, que nessa rea existam balces ou mesas com pias, para o umedecimento dos
substratos. Ambas as salas devero contar com todas as facilidades possveis para a execuo das
diferentes tarefas a que se destinam, tais como, mesas individuais ou no, adequadas para a
realizao dos diferentes testes, cadeiras de encosto e assentos ajustveis (maior conforto ao analista
evitar o cansao devido morosidade de alguns testes e proporcionar maior rendimento de
trabalho); equipamentos adequados: balanas, lupas estereoscpicas ou lupas manuais com luz,
mostrurio de sementes para identificao dos contaminantes das amostras, peneiras, sopradores de
sementes, contadores de sementes, destilador de gua, germinadores e equipamentos para realizao
de testes de vigor. Outros acessrios menores, como diferentes tipos de vidraria de laboratrio,
pinas, esptulas, caixas plsticas para germinao so tambm necessrios. O mesmo dever
ocorrer com outras reas destinadas a outros tipos de anlises. A sala da chefia dever estar
________________________________________________________________________________________________________________________
95

localizada prxima ao laboratrio para melhor assessoramento por parte do tcnico responsvel dos
analistas, quando frente a alguma dificuldade de realizao ou avaliao dos testes. Prximo a essa
dever estar localizada a rea administrativa, onde sero confeccionados os boletins de anlise.
Elementos como luz, fora e gua devem ser considerados tambm e a capacidade de
suprimento de cada um deles dever estar diretamente relacionada s necessidades atuais e futuras
do laboratrio. O emprego da luz fluorescente indicado, bem como a localizao estratgica do
maior nmero possvel de tomadas eltricas e interruptores em todos os setores, com vistas a
prevenir a aquisio de novos equipamentos. O piso do laboratrio dever ser de material
facilmente lavvel, o forro prova de som e as cores claras e repousantes, evitando-se assim
ambientes cansativos.
Especial ateno deve ser dada construo das cmaras frias (cmara seca para o
armazenamento de amostras e cmara de germinao). Na cmara seca necessrio controle de
temperatura e umidade relativa do ar (15 a 20C / 50% ou menos), para o armazenamento das
amostras durante certo perodo de tempo aps o teste de germinao, como garantia do resultado
fornecido pelo laboratrio. J para a cmara de germinao, apenas o controle da temperatura (
15C) necessrio. Nessa cmara, so colocados os germinadores a diferentes temperaturas, de
acordo com as exigncias especficas de cada espcie testada. O tamanho das mesmas ir variar de
acordo com as necessidades do laboratrio e devero ser construdas com paredes duplas,
isolamento trmico, sem janelas e com porta frigorfica.
O controle mecnico da umidade e da temperatura pode ser feito atravs de uma unidade
desumidificadora e uma de refrigerao, instaladas fora das cmaras (casa de mquinas), para evitar
o rudo dos motores no ambiente do laboratrio.
Em laboratrios pequenos, a utilizao do ar condicionado, como sistema de resfriamento,
tem sido satisfatria. ideal que ambas as cmaras sejam construdas uma ao lado da outra, para
melhor aproveitamento dos sistemas de refrigerao utilizados.
Quanto ao pessoal, da mais alta importncia a escolha do elemento humano que vai atuar
no laboratrio. Os trabalhos de rotina podem ser efetuados por analista com nvel de conhecimento
de grau mdio, mas que tenham passado por treinamento especializado. Reciclagem peridica
recomendada. O analista deve ter conhecimentos bsicos da morfologia dos frutos e sementes e
sobre fisiologia vegetal, bem como sobre alguns sintomas de doenas que podem ocorrer nas
plantas. Deve estar apto a desempenhar qualquer funo dentro do laboratrio, ser paciente,
meticuloso e com alto senso de responsabilidade, observao e honestidade. Possuir esprito de
trabalho em equipe fundamental. A chefia ou superviso do laboratrio e a pesquisa (quando for o
caso) devero estar a cargo de um tcnico de nvel superior, tambm com especializao na rea
(engenheiro agrnomo ou engenheiro florestal). Assim, como os analistas, ele dever reciclar-se
periodicamente, para manter-se atualizado nas diferentes metodologias empregadas na anlise de
sementes.
O desenvolvimento progressivo, por parte da iniciativa privada de programas de produo
de sementes tem demonstrado necessidade, cada vez maior, da estruturao e instalao de
________________________________________________________________________________
96

pequenos laboratrios de anlise de sementes. Esses laboratrios tm geralmente, como finalidade

especfica, o atendimento ao controle interno de qualidade de sementes de determinada empresa ou
cooperativa de produtores.
Cita-se aqui, como exemplo, um laboratrio com capacidade de atendimento a um sistema
de produo que envolve, em mdia, um total de 150 lotes de sementes de soja (750t), no perodo
de safra. O recebimento das anlises de avaliao da qualidade desses lotes realizado durante todo
o processo de produo, ou seja, do campo comercializao e, dentro desse perodo, so
realizadas, principalmente, as anlises de determinao do grau de umidade, pureza fsica, teste de
germinao e alguns testes de vigor e de danos mecnicos.
Considerando o pico mximo de atividade de trs meses (perodo de safra), so 60 os dias
reais de trabalho para a realizao dos testes em, pelo menos, 300 amostras de sementes (150 no
recebimento e 150 aps o beneficiamento). No recebimento, os lotes sero avaliados quanto ao seu
grau de umidade, pureza fsica, germinao e danos mecnicos. Aps o beneficiamento, essas
anlises sero mais completas envolvendo, alm das j citadas, a determinao do nmero de outras
sementes (exame de sementes nocivas) e algum teste de vigor (envelhecimento acelerado,
condutividade eltrica e/ou tetrazlio). Dentro desse enfoque, um analista est realizando 20
anlises por dia nas amostras de recebimento e 25 por dia em amostras de lotes j beneficiados, o
que considerado perfeitamente possvel para um tcnico treinado.
Alm dessa espcie, outras como trigo, milho, feijo e algumas forrageiras podero ser
analisadas nesse laboratrio, visto que o funcionamento do mesmo ocorrer durante todo o ano e os
perodos de produo de algumas delas serem em pocas distintas.
Para o planejamento e instalao desse tipo de laboratrio so considerados os seguintes
parmetros:
13.2.1. rea fsica

Uma rea fsica de, pelo menos, 20m2 satisfatria, adequando-se a mesma s condies de
orientao geogrfica j citadas (luminosidade ambiental) e a possibilidade de futuras ampliaes
da mesma, se conveniente. No necessria a separao da mesma em salas, exceto para o caso da
rea onde sero colocados os germinadores, a qual deve ser isolada do conjunto, devido
necessidade de controle da temperatura ambiental ( 20C). Essa rea funcionar como cmara de
germinao, devendo, portanto, sua construo atender ao isolamento trmico. Dentro desses 20m2,
pode-se separar uma pequena rea que poder funcionar como almoxarifado, onde estaro
localizados todos os materiais de apoio ao laboratrio como caixas de papel substrato para o teste de
germinao, placas de plstico ou Petri empregadas nesse mesmo teste, material de expediente,
compostos qumicos, entre outros.
________________________________________________________________________________________________________________________
97

13.2.2. Instalaes e equipamentos

A distribuio das diferentes reas de atuao do laboratrio (recepo e protocolo das
amostras, teste de pureza, de germinao e de umidade entre outros), dever ser observada, como o
j descrito anteriormente, para uma melhor distribuio dos equipamentos e racionalizao dos
trabalhos.
rea de recepo, protocolo e preparo das amostras - esta rea dever ser composta de
um balco com prateleiras e gavetas, onde sobre o qual estaro localizados os seguintes
equipamentos: uma balana automtica com capacidade de at 5kg; um divisor de amostras do tipo
GAMET e um divisor de solos adaptado para sementes de tamanho mdio. No balco, propriamente
dito, poder ser adaptado um sistema de arquivos para a localizao das fichas das amostras, dos
livros de registro.
rea de determinao do grau de umidade - tambm sobre um balco (este com espao
para o analista sentar) estaro localizados todos os equipamentos utilizados para esse tipo de teste.
Recomenda-se que o laboratrio disponha de uma estufa, determinadores de umidade expeditos que
se correlacionem com os mtodos da estufa e um pipoqueiro; uma balana automtica digital, para
pesagem das amostras, tambm poder ser necessrio.
rea para a determinao de pureza fsica - esta rea compe-se de uma mesa individual,
cadeira de encosto com assento ajustveis e uma estante ou armrio que funciona como mostrurio
de sementes. Adaptada a essa mesa, uma lupa de mesa com lmpada necessria para facilitar a
identificao dos contaminantes da amostra. Como equipamentos indispensveis para esse tipo de
teste, o analista dever contar, ainda, com um soprador de sementes, um jogo de peneiras e uma
balana digital de, no mnimo, trs casas decimais. Dentro do possvel, recomendvel a compra de
um microscpio binocular com zoom e uma amplitude de magnificao de at 25X. Pinas,
esptulas e vidros de relgio so, tambm, necessrios.
rea de germinao - esta rea poder ser a mesma empregada para o teste de pureza
(mesa e cadeira do analista). necessrio, entretanto, dispor de um balco com duas pias e tampo
de inox para o umedecimento dos substratos e preparo das amostras. Como equipamentos,
recomenda-se a compra de um contador de sementes a vcuo, que poder estar acoplado ao balco,
sendo que o motor do mesmo deve ser instalado do lado de fora do prdio (casa de mquinas), para
evitar rudos dentro do LAS, e um jogo de contadores de sementes manuais, com orifcios de
diferentes formas e tamanhos. Um destilador de gua e um refrigerador domstico (empregado para
superao de dormncia e para o teste de tetrazlio, quando no for possvel a avaliao do mesmo
no dia em que foi preparado), tambm so necessrios.
Sala de germinao - esta dever ser construda como j citado. Nessa sala, o emprego de
um ou dois condicionadores de ar so suficientes para a manuteno da temperatura ambiental em
torno de 20C. Um sistema de estrados poder sustentar dois germinadores, com capacidade para 40
________________________________________________________________________________
98

amostras completas de soja cada um.

Ainda, dentro dessa sala, um sistema de iluminao dos germinadores dever ser observado
(caso o laboratrio realize anlise em alguma espcie de forrageira que requeira luz para germinar).
Um conjunto de pequenos balces, tambm poder ser colocado para sustentar algum tipo de
balana de maior preciso, para anlise de pureza, uma cmara para o teste de envelhecimento
acelerado e um condutivmetro. Esses dois ltimos aparelhos so empregados em teste de vigor.
Alm do j descrito, convm salientar que o laboratrio dever dispor de um nmero
mnimo de caixas plsticas, para germinao, de acordo com o nmero de amostras de sementes
forrageiras que poder receber por ano e um carrinho com rodas para facilitar o transporte das
amostras.
13.2.3. Pessoal
Para esse tipo de laboratrio, suficiente a contratao de apenas um analista (bem
treinado), em tempo integral, que ir trabalhar sob superviso de um tcnico de nvel superior (RT),
encarregado tambm do sistema de produo. Caso necessrio poder ocorrer contratao
eventual de um auxiliar de laboratrio.
Dentro do planejamento aqui apresentado, tentamos de forma bastante simples apresentar, a
seguir, um esquema grfico do laboratrio em questo (Figura 26).
Entrada
Determinadores de gua
Recepo Amostra
Contador
a Vcuo
Balana
3.0
0m
Lavatrio
Mesa
Divisor
Divisor
de Solos
Destilador
de gua
Coleo
de sementes
Geladeira
Arquivo
Prateleiras
Germinador
Sala de
Germinao
o
20 C
Balana
de Preciso
Armazenamento
2.0
0m
Germinador
Cmara
Env. Precoce
2.50m
1.50m
Figura 26 - Planta baixa de um LAS. Escala 1:25.

________________________________________________________________________________________________________________________
99

Literatura consultada
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101

Respostas do Pr-Teste
Questes
01
02
03
04
05
06
07
08
09
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
Respostas
V
V
V
F
F
F
V
V
V
V
V
V
V
V
F
V
V
F
F
F
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102

Tilmann Módulo 4 - Análise de Sementes

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ESPECIALIZAO POR TUTORIA A DISTNCIA ABEAS/UFV

Curso: Cincia e Tecnologia de Sementes

PS-GRADUAO LATO SENSU POR TUTORIA A DISTNCIA

ESPECIALIZAO POR TUTORIA A DISTNCIA ABEAS/UFV

COORDENAO DE CURSOS DA ABEAS

Mdulo 4 Analise de Sementes

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CINCIA E TECNOLOGIA DE SEMENTES

Associao Brasileira de Educao Agrcola Superior ABEAS

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Indique se a afirmativa verdadeira (V) ou falsa (F):

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A anlise de sementes consiste em procedimentos tcnicos utilizados para avaliar a

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Figura 1 - Laboratrio de Anlise de Sementes como centro de controle de qualidade.

Mdulo 4 Analise de Sementes

ESPECIALIZAO POR TUTORIA A DISTNCIA ABEAS/UFV

1.1. Objetivo e importncia

Peso 1000 Sanidade

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Amostra simples - cada pequena poro de sementes retirada por meio de

Mdulo 4 Analise de Sementes

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1.3. Homogeneidade do lote de sementes

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1.4. Peso mximo dos lotes

Peso mximo do lote

1.5. Obteno de amostras representativas

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1.6. Tipos de amostradores e mtodos para amostragem dos lotes

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1.6.2. Amostrador do tipo simples - Amostrador Nobbe

Mdulo 4 Analise de Sementes

ESPECIALIZAO POR TUTORIA A DISTNCIA ABEAS/UFV

1.7. Intensidade da amostragem

1 a cada 300kg, no menos que 5

1 a cada 500kg, no menos que 10

1 a cada 700kg, no menos que 40

1.7.2. Em sacos, tambores ou outros recipientes

1.7.3. Em pequenos recipientes

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1.8. Pesos mnimos das amostras submetidas ou mdias

1.9. Embalagem, identificao, selagem e remessa da amostra

1.10. Obteno das amostras de trabalho

Mdulo 4 Analise de Sementes

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As sementes restantes da amostra mdia constituiro a amostra de arquivo e devem ser

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1.10.2. Mtodo manual

1.11. Armazenamento das amostras

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2.2.2. Outras sementes

2.3. Equipamentos e materiais