Captulo II

Marco Terico

Marco Terico

1.- Antecedentes de la investigacin:

Jos Luis Corts Romero (2008). Realiz el proyecto CLULAS
MADRE EMBRIONARIAS: ASPECTOS TICO-LEGISLATIVOS Y
DESARROLLO DE UNA NUEVA METODOLOGA PARA LA
DERIVACIN DE LNEAS CELULARES EMBRIONARIAS (ESCs)
el cual se bas en agrupar, clasificar y definir los tipos de mtodos
existentes con clulas madres(stem cells) en este caso embrionarias,
para lograr crear una derivacin de lneas celulares embrionarias.
Esta investigacin tiene como objetivo desarrollar una nueva
estrategia basada en la combinacin de la tcnica de cultivo directo
del blastocisto, seguida de la destruccin de las clulas del
trofoectodermo adyacentes a la ICM utilizando la tecnologa lser,
buscando mejorar la eficiencia tanto en el aislamiento de la ICM
como en el establecimiento de las lneas celulares.
Corts Romero concluy que En base a los resultados obtenidos el
mtodo de cultivo directo del blastocisto es globalmente ms efectivo
respecto
al aislamiento de la ICM que el empleo del disector lser (70% vs.
52%; p<0.05), independientemente de la superficie de crecimiento
utilizada. Teniendo en cuenta que se ha utilizado el lser para los
blastocistos de buena calidad, y que la nica desventaja del cultivo
directo de blastocistos es que las clulas del trofoectodermo
escondan las de la ICM, se debe de seguir perfeccionando la tcnica
de empleo de lser, donde las clulas del trofoectodermo son
destruidas para que no interfieran en la adhesin de la ICM a la
superficie de crecimiento utilizada. Por otra parte, con independencia
del mtodo de aislamiento de la ICM utilizado, obtenemos mejores
tasas de adhesin, por parte de los blastocistos, empleando como
soporte la monocapa de MEFs frente a la utilizacin de una capa de
gelatina (40% vs. 30% en cultivo directo; 38% vs. 14% con lser). Si
el propsito es no tener que depender del cultivo e inactivacin de
MEFs para realizar los cultivos de clulas troncales, es necesario
investigar ms en profundidad el uso de matrices extracelulares
como soporte. Adems, este estudio debe completarse evaluando los

datos de seguimiento de dichas colonias primarias, as como el

posterior establecimiento de lneas de mESCs.
Cecilia Corrales (2008) Ingeniera tisular: Aplicacin de clulas
madre en reparacin de defectos epidrmicos. Este trabajo de
investigacin hace nfasis en que una adecuada cicatrizacin de las
heridas de la piel es clave en el desarrollo favorable de numerosos
cuadros patolgicos y se han descrito un gran nmero de
complicaciones mdicas o quirrgicas que pueden ser atribuidas a
deficiencias en la cicatrizacin de las heridas, existiendo un amplio
abanico de enfermedades y entidades patolgicas (insuficiencia
venosa
perifrica,
isquemia
arterial,
diabetes,
cncer,
inmunodepresin), que influyen de forma negativa sobre la
reparacin de las heridas, siendo la causa de una parte importante
de la morbilidad e indirectamente, de la mortalidad, que encontramos
a nivel hospitalario. Mencin especial merecen por su frecuencia y
por el gran impacto sanitario y socioeconmico que acarrean sus
potenciales secuelas, las lceras por decbito y/ vasculares.
Y se plantea como hiptesis de trabajo, si las clulas madre
musculares (muscle derived stem cells, MDSC) podan representar
una alternativa eficaz para la reparacin de defectos cutneos
excisionales. Para verificar esta hiptesis, se propusieron dos
objetivos:
-Aislamiento, caracterizacin y eleccin del momento para el
transplante de las MDSC.
-Aplicacin de las MDSC como terapia celular sobre un modelo
experimental de defecto excisional cutneo.
Los resultados obtenidos permitieron formular las siguientes
conclusiones:
1.- La poblacin aislada a partir de msculo esqueltico, posee
las propiedades inherentes a una poblacin de clulas
indiferenciadas y con gran capacidad de proliferacin y
autorrenovacin como lo demuestran los resultados comparados con

la poblacin de fibroblastos utilizados como control de celulas

diferenciadas.
2.- Tras 14 das de cultivo, la poblacin de MDSC es
indiferenciada, proliferativa
y
muy adherente,
por lo que
consideramos que son caractersticas idneas para ser
transplantadas como terapia celular sobre un defecto cutneo
excisional.
3.- Los defectos sometidos a terapia celular durante dos
semanas, mostraron una significativa disminucin del rea de
contraccin del defecto creado, as como una significativa
aceleracin de la
reepitelizacin con respecto al grupo sin
tratamiento alguno.
Las conclusiones anteriores, nos permiten elevar nuestra
hiptesis a categora de tesis y afirmar que:
Las clulas derivadas de clulas musculares indiferenciadas
MDSC aisladas por nosotros y tras 14 das de cultivo, cumplen los
requisitos exigidos para su uso como terapia celular, tanto en nmero
como caractersticas de adhesin, proliferacin y diferenciacin.

2.- Bases Tericas:

La clula madre segn Wikipedia (2002) es una clula que tiene la
capacidad de autorrenovarse mediante divisiones mitticas o bien de
continuar la va de diferenciacin para la que est programada y, por
lo tanto, producir clulas de uno o ms tejidos maduros, funcionales
y plenamente diferenciados en funcin de su grado de
multipotencialidad.1 Por ende estas clulas tienen la capacidad de
dividirse sin perder sus propiedades y pueden diferenciarse en otras
clulas. La mayora de tejidos de un individuo adulto poseen una
poblacin especfica propia de clulas madre que permiten su
renovacin peridica o su regeneracin cuando se produce algn
dao tisular. Algunas clulas madre adultas son capaces de
diferenciarse en ms de un tipo celular como las clulas madre

mesenquimales y las clulas madre hematopoyticas, mientras que

otras son precursoras directas de las clulas del tejido en el que se
encuentran, como por ejemplo las clulas madre de la piel o las
clulas madre gonadales (clulas madre germinales). Es comn que
en documentos especializados se las denomine stem cells, en ingls,
donde stem significa tronco, traducindolo lo ms a menudo como
clulas troncales.
Las clulas madre embrionarias son aquellas que forman parte de la
masa celular interna de un embrin de 4-5 das de edad. stas son
pluripotentes lo cual significa que pueden darle origen a las tres
capas germinales: ectodermo, mesodermo y endodermo. Una
caracterstica fundamental de las clulas madre embrionarias es que
pueden mantenerse (en el embrin o en determinadas condiciones
de cultivo) de forma indefinida, formando al dividirse una clula
idntica a ellas mismas, y manteniendo una poblacin estable de
clulas madre. Existen tcnicas experimentales donde se pueden
obtener clulas madre embrionarias sin que esto implique la
destruccin del embrin. Son clulas indiferenciadas que tiene la
capacidad de dividirse indefinidamente sin perder sus propiedades.
Por otro lado segn Corts Romero (2008) Existen cuatro tipos de
clulas madre:
Las clulas madre totipotentes: pueden crecer y formar un organismo
completo, tanto los componentes embrionarios (como por ejemplo,
las tres capas embrionarias, el linaje germinal y los tejidos que darn
lugar al saco vitelino), como los extraembrionarios (como la
placenta). Es decir, pueden formar todo los tipos celulares.
Las clulas madre pluripotentes: no pueden formar un organismo
completo, pero s cualquier otro tipo de clula correspondiente a los
tres linajes embrionarios (endodermo, ectodermo y mesodermo), as
como el germinal y el saco vitelino. Pueden, por tanto, formar linajes
celulares.
Las clulas madre multipotentes: son aquellas que slo pueden
generar clulas de su misma capa o linaje de origen embrionario (por
ejemplo: una clula madre mesenquimal de mdula sea, al tener

naturaleza mesodrmica, dar origen a clulas de esa capa como

miocitos, adipocitos u osteocitos, entre otras).
Las clulas madre unipotentes: pueden formar nicamente un tipo de
clula particular.
Estudios recientes indican que existen diferentes tcnicas para la
obtencin directa de clulas madre embrionarias y tcnicas basadas
en la reprogramacin celular:
Embriones crioconservados: La criopreservacin o crioconservacin
es un mtodo que utiliza nitrgeno lquido (-196 C) para detener
todas las funciones celulares y as poderlas conservar durante aos.
Estos embriones son procedentes de los tratamientos de
reproduccin humana asistida, que cuando se fecundan ms de los
necesarios pueden ser donados por los pacientes que se someten a
este tratamiento. Estos embriones criopreservados en fase de
blastocisto pueden conservarse durante cinco aos, segn lo
reglamenta el R.D. 413/1996 [2].
Blastmeros individuales: Con esta tcnica, probada primero en
ratones y despus en humanos, se consigue no destruir el embrin.
Se utilizaron vulos fecundados de ratn que se dejaron crecer hasta
que tuviesen de 8 a 10 clulas. una de estas clulas se extrae y se
cultiva. Con esta tcnica se ha logrado obtener dos lneas celulares
estables que mostraban un cariotipo normal y presentaban
marcadores caractersticos de pluripotencialidad. El embrin del que
se obtiene esta clula es completamente viable por lo que se puede
implantar en un tero y seguir un desarrollo normal.
Activacin de ovocitos por transferencia nuclear somtica : consiste
en extraer un ncleo de un vulo no fertilizado y sustituirlos por el
ncleo de una clula somtica adulta. Al encontrarse en un ambiente
propicio, el citoplasma del vulo, este ncleo es capaz de
reprogramarse. Una ventaja de esta tcnica es obtener clulas
madre que contengan la misma dotacin gentica que el paciente y
evitar as problemas de rechazo. Esta tcnica slo se ha realizado en
animales, no en humanos. Las mutaciones producidas en el ADN de
estas clulas adultas hace que se produzcan problemas durante la
desdiferenciacin.

Partenognesis: Este proceso reproductivo no se da en mamferos.

Sin embargo, la partenognesis puede ser inducida en mamferos
mediante mtodos qumicos o fsicos in vitro. Como resultado de esta
activacin, se obtiene una masa celular denominada partenote de las
que se pueden aislar clulas pluripotenciales. Esta tcnica slo es
aplicable en mujeres.
Investigaciones recientes llevadas a cabo por el doctor Shin'ya
Yamanaka, de la Universidad de Kyoto, han demostrado que es
posible desdiferenciar clulas adultas hasta clulas madre mediante
el tratamiento con factores de transcripcin insertados en las clulas
mediante retrovirus. Este procedimiento, conocido como
Reprogramacin celular, facilitara obtener clulas madre de
cualquier individuo en cualquier momento, aunque se han detectado
posibles efectos colaterales, como el carcter canceroso de las
clulas resultantes.
Las clulas madre del cordn umbilical se consideran como clulas
madres adultas. stas son clulas hematopoyticas, sea que crean
clulas de la sangre y del sistema inmunolgico. Son mucho ms
fciles de obtenerse en comparacin con las clulas de la mdula
sea. A pesar de que las clulas de la mdula sea actan ms
rpido que las clulas del cordn umbilical, las clulas del cordn
umbilical no necesitan una compatibilidad al 100% con el paciente en
cambio las clulas de la mdula sea s. Otras ventajas de las
clulas de cordn umbilical son que su extraccin no es dolorosa, se
pueden usar con otros miembros de la familia sin ningn problema y
son inmunolgicamente inmaduras, es por esto que no necesitan una
compatibilidad al 100% con el paciente.2
Gracias a los ltimos avances cientficos se demostr que el lquido
amnitico contiene clulas de tejidos embrionarios y extra
embrionarios diferenciadas y no diferenciadas derivadas del
ectodermo, del mesodermo y del endodermo [3]. La tipologa y las
caractersticas de las clulas del lquido amnitico varan segn el
momento de la gestacin y en funcin de la existencia de posibles
patologas fetales. Recientemente, se ha tenido constancia de
experimentos que demuestran la presencia de clulas madre fetales
mesenquimales con potencial diferenciador hacia elementos
celulares derivados de tres hojas embrionarias, por ejemplo . Las

clulas madre de lquido amnitico se expanden fcilmente en

cultivo, mantienen la estabilidad gentica y se pueden inducir a la
diferenciacin (estudios de Paolo De Coppi, Antony Atala, Giuseppe
Simoni etc) tambin en clulas hematopoieticas[4]. [Por eso
representan una nueva fuente de clulas que podra tener mltiples
aplicaciones en ingeniera de los tejidos y en la terapia celular, sobre
todo para el tratamiento de anomalas congnitas en el periodo
perinatal.
Las clulas madre de lquido amnitico no presentan controversia
tica y pueden conservarse para uso propio.
Muchos descubrimientos mdicos, hacen creer que los tratamientos
con clulas madre tienen el sistema para cambiar la cara humana,
curar enfermedades y aliviar sufrimiento. Existen algunos
tratamientos con clulas madre, pero la mayora todava se
encuentran en una etapa experimental. Investigaciones mdicas,
anticipan que un da con el uso de la tecnologa, derivada de
investigaciones para las clulas madre adultas y embrionarias, se
podr tratar el cncer, diabetes, heridas en la espina dorsal y dao
en los msculos, como tambin se podrn tratar otras enfermedades.
Muchos prometedores tratamientos de serias enfermedades han sido
aplicados, usando clulas madre adultas. La ventaja de las clulas
madre adultas sobre las embrionarias es que no hay problema en
que sean rechazadas, porque normalmente las clulas madre son
extradas del paciente. Todava existe un gran problema tanto
cientfico como social rodeando de esta gran manera las
investigaciones de las clulas madre embrionarias.
En los ltimos aos se est investigando en la proliferacin In Vitro
de las clulas madre de cordn umbilical para aumentar el nmero
de clulas madre y cubrir la total necesidad para un trasplante. Estos
estudios son muy prometedores y pueden permitir en un futuro
utilizar clulas madre de cordn umbilical en terapia gnica:
podemos as tratar enfermedades causadas por la deficiencia o
defecto de un determinado gen. Introduciendo un determinado gen
en la proliferacin de las clulas madre In Vitro y trasplantar tales
clulas en el paciente receptor. El uso de otros tipos de clulas como
portadores de genes buenos en pacientes con enfermedades

causadas por deficiencias o dficits genticos, est siendo testeado

a nivel clnico.
Segn la NECBB (New England Cord Blood Bank) Hay clulas
madre en la sangre del cordn umbilical y son utilizadas
rutinariamente para luchar contra ms de 80 enfermedades de la
infancia y del adulto incluyendo cncer, leucemia, inmunodeficiencia
y enfermedades genticas. Es an ms impresionante el potencial
para su futuro.
Recientemente han sido utilizadas las clulas madre encontradas en
la sangre del cordn umbilical para tratar pacientes con cncer.
Durante la quimioterapia, la mayora de las clulas en crecimiento
mueren por los agentes cito txicos. El efecto secundario de la
quimioterapia es lo que los trasplantes de clulas madre tratan de
revertir; la sustancia que se encuentra sana dentro del hueso del
paciente, el tutano, es remplazada por aquellas perdidas en el
tratamiento. En todos los actuales tratamientos de clulas madre,
obtener clulas madre de un donante con el mismo tipo de sangre es
preferible a que usar las del paciente mismo. Solo si (siempre como
ltimo recurso y si no se encontr un donante con el mismo tipo de
sangre) es necesario para el paciente usar su propias clulas madre
y si el paciente no tiene guardada su propia coleccin de clulas
madre (sangre del cordn umbilical), entonces la sustancia
contenedora en los huesos ser removida antes de la quimioterapia,
y re inyectada despus.
Algunas razones por la que se debera almacenar la sangre del
cordn umbilical de los bebs son:
-Provee la potencialidad de salvar la vida de su beb o de otro
miembro de la familia.
-Ofrece una oportunidad nica en la vida; las clulas madre del
cordn umbilical pueden ser recolectadas de la sangre del cordn
umbilical slo inmediatamente despus del nacimiento.
-El procedimiento es simple e indoloro y sin riesgo.

-Mejora las probabilidades de encontrar una clula madre

compatible, especialmente para los hispanos, Indgenas Americanos,
Afroamericanos y personas de etnicidad mixta.
-Le da acceso a su familia a los beneficios de los avances mdicos
futuros que puedan usar las clulas madre de la sangre del cordn
umbilical para tratar las enfermedades ms devastadoras de la vida.
-Provee la mayor seguridad para personas con una historia familiar
de cncer o enfermedades genticas.
Segn las investigaciones cientficas con las llamadas clulas madre,
capaces de multiplicarse y dar origen a los ms variados tejidos del
cuerpo, estn entrando en una nueva era. En julio de 2010, el FDA
("Food and Drug Administration" por sus siglas en ingls), rgano
que regula los medicamentos y alimentos en los Estados Unidos,
aprob la realizacin de las primeras pruebas con clulas madre
embrionarias en seres humanos. Los beneficiarios son personas
afectadas por lesiones de mdula espinal. Ms recientemente, el
mismo rgano norteamericano autoriz pruebas en humanos para
tratar la ceguera. Y el futuro an nos depara muchas sorpresas.
Segn las previsiones de los investigadores, las prximas
generaciones conocern un mundo propio de un largometraje de
ciencia ficcin, en el que la medicina ser capaz de regenerar el
cuerpo humano y las largas esperas para recibir un trasplante de
rganos pertenecern al pasado.
De los pases de Amrica Latina, Brasil es el que ms destaca en
este tipo de estudios. La ley que autoriza investigaciones cientficas
con embriones para fines teraputicos fue aprobada en mayo de
2008, luego de un intenso debate. Y mucho antes de ello,
tratamientos experimentales con clulas madre adultas para combatir
enfermedades incurables, ya haban sido realizados con xito.
Investigaciones y tratamientos experimentales han ayudado a salvar
muchas vidas y a mejorar radicalmente las condiciones de pacientes
de dolencias neurolgicas y cardacas, adems de casos de ceguera
y diabetes. Y los estudios con cobayas, actualmente en curso en
Brasil, ofrecen esperanza a jvenes portadores de enfermedades
genticas degenerativas y vctimas de lesiones de mdula sea. Un

escenario fascinante y polmico que desafa los lmites del ser

humano ante la vida y la muerte.
Dinmico y rico en elementos grficos, el programa acude a los
hospitales y a los avanzados centros de investigacin de So Paulo y
Rio de Janeiro para mostrar, por ejemplo, cmo las clulas madre se
convierten en valiosas clulas capaces de regenerar la crnea para
devolverle la visin a los pacientes con ceguera; y cmo esas clulas
tambin pueden ser inyectadas en el corazn para desobstruir las
arterias y ser utilizadas para tratar la diabetes tipo I.

3.- Definicin de trminos bsicos:

Tcnica: Es un procedimiento o conjunto de reglas, normas o
protocolos, que tienen como objetivo obtener un resultado
determinado, ya sea en el campo de la ciencia, de la tecnologa,
del arte, del deporte, de la educacin o en cualquier otra
actividad. Supone el razonamiento inductivo y analgico de que
en situaciones similares una misma conducta o procedimiento
produce el mismo efecto, cuando ste es satisfactorio. Es por
tanto el ordenamiento de la conducta o determinadas formas de
actuar y usar herramientas como medio para alcanzar un fin
determinado.
Clula Madre: es una clula que tiene la capacidad de
autorrenovarse mediante divisiones mitticas o bien de
continuar la va de diferenciacin para la que est
programada y, por lo tanto, producir clulas de uno o
ms tejidos maduros,
funcionales
y
plenamente
diferenciados en funcin de su grado de multipotencialidad
Parkinson: Es un trastorno neurodegenerativo crnico que
conduce con el tiempo a una incapacidad progresiva,
producido a consecuencia de la destruccin, por causas
que todava se desconocen, de las neuronas pigmentadas
de la sustancia negra. Frecuentemente clasificada como un
trastorno del movimiento, la enfermedad de Parkinson
tambin desencadena alteraciones en la funcin cognitiva,
en la expresin de las emociones y en la funcin autnoma.

Alzheimer: es una enfermedad neurodegenerativa, que se

manifiesta como deterioro cognitivo y trastornos
conductuales. Se caracteriza en su forma tpica por una
prdida progresiva de la memoria y de otras capacidades
mentales, a medida que las clulas nerviosas (neuronas)
mueren y diferentes zonas del cerebro se atrofian. La
enfermedad suele tener una duracin media aproximada
despus del diagnstico de 10 aos, aunque esto puede
variar en proporcin directa con la severidad de la
enfermedad al momento del diagnstico.
Angina del pecho: es un dolor, generalmente de carcter
opresivo, localizado en el rea retroesternal, ocasionado
por
insuficiente
aporte
de
sangre
(oxgeno)
a
las clulas del msculo del corazn
Cncer: es un conjunto de enfermedades en las cuales el
organismo produce un exceso de clulas malignas
(conocidas como cancergenas o cancerosas), con
crecimiento y divisin ms all de los lmites normales,
(invasin del tejido circundante y, a veces, metstasis).
Diabetes: es un desorden del metabolismo, el proceso que
convierte el alimento que ingerimos en energa. La insulina
es el factor ms importante en este proceso.
Embrin: es el trmino que se aplica hasta el final de la sptima
semana desde la concepcin (fecundacin).
Cordn Umbilical: es un tubo que une un embrin en vas de
desarrollo o feto a su placenta. Contiene arterias principales
y venas (las arterias umbilicales y vena umbilical) para el
intercambio
de
sustancias
nutritivas
y sangre rica
en oxgeno, entre el embrin y la placenta.
Desconocimiento: Es la falta de conocimientos que posee un
individuo o individuos acerca de un tema o temas.