GUIA DE PRUEBAS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO

DE LEISHMANIASIS
Realizada por: Nubia Ponce. Bacteriloga, MSc.
OBJETIVO
Realizar una gua de consulta para el conocimiento y la elaboracin de las
pruebas de laboratorio empleadas en el diagnstico de leishmaniasis.

La leishmaniasis es una zoonosis de amplia distribucin mundial que representa un

problema de salud pblica en muchos pases del Tercer Mundo. El parsito Leishmania
produce las tres formas clnicas principales de la enfermedad: la forma cutnea, la
forma mucosa y la forma visceral. En Colombia, la enfermedad es endmica y se
encuentra en 91% de todo el territorio ubicado bajo los 1 750 m sobre el nivel del mar.
Durante el perodo de 1985 a 1996, se inform de 55888 casos de leishmaniasis, entre
los que predomin la forma cutnea (95%).
LEISHMANIASIS CUTANEA
Las formas de presentacin de la leishmaniasis cutnea varan desde lesiones cerradas
como ppulas, ndulos y placas que pueden ser de aspecto verrugoso hasta las formas
abiertas como la lcera franca y la lcera vegetante. La lcera tpica es redondeada, de
bordes elevados, eritematosos, acordonados, con centro granulomatoso, limpio y base
infiltrada. Cuando hay sobreinfeccin bacteriana se tornan dolorosas, de fondo sucio,
secrecin purulenta, recubiertas por costra de aspecto melisrico, eritema en su
periferia y signos inflamatorios locales. Ante la sospecha de un caso de leishmaniasis
cutnea es necesario visualizar el parsito para corroborar el diagnstico e iniciar el
tratamiento. La prueba de oro es el frotis directo.

http://www.acponline.org/bioterro/anthrax/cut_leis.htm
FROTIS DIRECTO PARA LEISHMANIASIS: la sensibilidad del mtodo
depende del tiempo de evolucin de la lesin, la toma y el proceso de la muestra y la
capacitacin del personal, vara de 85-90% en pacientes cuya evolucin no supera los 4
meses. Para aumentar la probabilidad de encontrar el parsito se recomienda tomar
muestra de varios puntos de la lesin (tanto del borde activo como del centro de la
lcera) y escoger siempre la lesin ms joven.

Procedimiento
1. Aplicar las normas de bioseguridad empleadas en el laboratorio clnico.
2. Realizar la limpieza de la lesin utilizando una gasa con alcohol, solucin
salina o jabn quirrgico y agua destilada.

3. Si hay costra remuvala cuidadosamente y limpie nuevamente con agua

destilada para retirar los excesos de sangre que se presenten.

Http://www.medicine.mcgill.ca/tropmed/txt/image13.jpg
4. Haga presin en la lesin hasta hacer isquemia y con el borde romo de una
lanceta realice suavemente un raspado sobre los puntos elegidos para la
toma de la muestra.
5. NO realice incisin en la lesin porque el paciente puede quedar con una
cicatriz peor.
6. La linfa obtenida del raspado se extiende sobre una lmina de vidrio
previamente desengrasada (pasar las lminas nuevas por etanol y agua
destilada y por ltimo secarlas con una tela que no suelte mota, este
procedimiento para eliminar los excesos de grasa que pueden tener la
lminas)
7. En cada lmina debidamente rotulada se pueden realizar 3 extendidos de
acuerdo al siguiente diagrama

8. Dejar secar las lminas a temperatura ambiente

9. Fijar con metanol siempre y dejar secar
10. Realizar la coloracin de Giemsa (1:10), Wright o Field con tiempo y
concentracin de acuerdo a lo estandarizado al inicio del lote.
11. Para evitar la presencia de precipitados filtre el colorante previamente a su
uso y realice la coloracin en una placa invertida
12. Cumplido el tiempo de coloracin juague suavemente la placa con agua de
chorro
13. Djela secar a temperatura ambiente
14. Realice la lectura en el microscopio con el objetivo de 100X. Identifique el
estado de amastigote: formas redondeadas u ovaladas que presentan un
ncleo y un kinetoplasto (es una barra) en su citoplasma, estas estructuras
toman una coloracin lila, segn fotografa. Los parsitos son intracelulares
pero por la manipulacin de la muestra se pueden observar formas
extracelulares libres.

http://www.socalemi.org/atlas_parasitos.htm
Reporte: Se informa Frotis Directo Positivo para leishmaniasis cuando se
observa al menos un amastigote al recorrer TODOS LOS EXTENDIDOS
Se informa Frotis Directo Negativo para leishmaniasis cuando no se observan
amastigotes al recorrer TODOS LOS EXTENDIDOS
Cuando el paciente presenta una lesin cerrada se realiza un aspirado de la
lesin con jeringa de tuberculina, debe evitarse al mximo hacer incisiones.

http://www.skinatlas.com/RUSSIAN/leishmania1_ru.htm
1. Realizar la limpieza de la lesin
2. Tomar 0.1ml de gentamicina (100ug/ml) o solucin salina estril con la
jeringa de tuberculina (esta solucin no se inyecta en la lesin, solo ayuda a
homogenizar la muestra que se va a recoger)
3. Realice una puncin en el borde de la lesin y haga movimientos de rotacin
que favorezcan el desplazamiento del material a travs de la jeringa, sino se
obtiene material aspire suavemente con el mbolo.
4. Una vez obtenido el material colocarlo sobre la lmina y continuar el
procedimiento anteriormente descrito.
De acuerdo a los lineamientos del Ministerio de la Proteccin Social es necesario
tomar a todo caso probable de leishmaniasis hasta 3 veces el frotis directo antes
de solicitar una biopsia al paciente.
REACCION DE MONTENEGRO: Es una prueba de hipersensibilidad retardada a
los antgenos del parsito, que en la mayora de los pacientes se hace positiva
hacia la cuarta semana despus de la exposicin. Un resultado positivo slo
indica contacto previo con el parsito pero no la enfermedad activa. Se utiliza
como prueba diagnstica complementaria y para estudios epidemiolgicos.

www.lung.ca/.../ 100_tuberculin_needle.jpg
LEISHMANIASIS MUCOSA
En algunas personas, algunas especies del parsito se diseminan y producen lesiones de
las mucosas, incluso aos despus que ha curado la lesin cutnea primaria. Estas
secuelas, que afectan los tejidos nasofarngeos, se caracterizan por destruccin tisular
progresiva y pueden ser muy desfigurantes.
En las mucosas la cantidad de parsito es muy baja por lo que el frotis directo no tiene
utilidad, para realizar el diagnstico el mdico debe basarse en el cuadro clnico, los
antecedentes epidemiolgicos, la prueba de montenegro, la inmunofluorescencia
indirecta y la biopsia de la mucosa nasal.

http://www.hhmi.ucla.edu/C168/Leishmaniasis.html
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: Es una prueba que se utiliza para
detectar los anticuerpos circulantes en el suero del paciente. La muestra requerida es
suero y es positiva cuando hay ttulos iguales o mayores a 1/32. La realizacin del IFI
en pacientes con leishmaniasis cutnea no tiene utilidad.
LEISHMANIASIS VISCERAL
La leishmaniasis visceral es una enfermedad crnica generalizada. Se caracteriza por
fiebre, hepatoesplenomegalia, linfadenopata, anemia, leucopenia, trombocitopenia y
debilidad progresiva que si no es tratada, por lo comn culmina con la muerte.

Su diagnstico siempre debe confirmarse con la identificacin parasitolgica en todo

paciente con antecedentes epidemiolgicos y cuadro clnico caracterstico. Los exmenes
diagnsticos indicados son el examen parasitolgico de aspirado de mdula sea y/o de
aspirado de bazo, procedimientos que se deben realizar por personal con
entrenamiento. Y la deteccin de anticuerpos por IFI con antgenos de Leishmania
chagasi especie causante de la leishmaniasis visceral.
La Reaccin de Montenegro se encuentra siempre negativa durante la fase activa de la
enfermedad y generalmente se hace positiva entre 3 y 6 meses despus de terminado
el tratamiento. Es una prueba til para el seguimiento del paciente y se recomienda
aplicarla tanto antes de iniciar el tratamiento como en el seguimiento posterior
Otros mtodos diagnsticos utilizados con menos frecuencia en el diagnstico de
leishmaniasis son cultivos, inoculacin en animales de laboratorio y pruebas de biologa
molecular como la PCR.
BIBLIOGRAFIA
1. Isaza, D.M., Restrepo, B.N., Arboleda, M., Casas, E., Hinestroza, H. Yurgaqui, T.
La leishmaniasis: conocimientos y prcticas en poblaciones de la costa del
Pacfico de Colombia. Rev Panam Salud Pblica vol.6 n.3. Septiembre 1.999
2. Ministerio de Salud Instituto Nacional de Salud. Guas de Promocin de la salud
y Prevencin de Enfermedades en Salud Pblica. 2007

Ante cualquier duda frente a la lectura de las lminas, el Laboratorio Departamental

tambin puede orientarlos.

Nubia Constanza Ponce Z.

Tel: 3002045053

e-mail: nubia99@gmail.com