CXG DIRECTRICES SOBRE BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO EN EL ANÁLISIS DE RESIDUOS DE PLAGUICIDAS CAC/GL 40-1993 - 040s

CAC/GL 40-1993
Pgina 1 de 41
DIRECTRICES SOBRE BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO EN EL ANLISIS DE

RESIDUOS DE PLAGUICIDAS
CAC/GL 40-1993
ndice
PREFACIO ....................................................................................................................................................................... 1
1.
INTRODUCCIN................................................................................................................................................... 2
2.
EL ANALISTA........................................................................................................................................................ 2
3.
RECURSOS BSICOS .......................................................................................................................................... 2

3.1
3.2
4.
EL LABORATORIO ............................................................................................................................................. 2
EQUIPO Y SUMINISTROS .................................................................................................................................... 3
EL ANLISIS ......................................................................................................................................................... 4
4.1.
4.2
4.3
4.4
4.5
4.6
4.7
4.8
4.10
EVITAR LA CONTAMINACIN ............................................................................................................................ 4

RECEPCIN Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS ....................................................................................... 5
PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS NORMALIZADOS .............................................................................................. 5
VALIDACIN DE MTODOS ............................................................................................................................... 5
VERIFICACIN DEL RENDIMIENTO .................................................................................................................... 8
ENSAYOS DE CONFIRMACIN ........................................................................................................................... 9
ESPECTROMETRA DE MASAS .......................................................................................................................... 10
DERIVACIN ................................................................................................................................................... 11
EXPRESIN DE LOS RESULTADOS .................................................................................................................... 12
GLOSARIO..................................................................................................................................................................... 35
SIGLAS ........................................................................................................................................................................... 41
PREFACIO
La finalidad de estas Directrices es ayudar a garantizar la fiabilidad de los resultados analticos cuando se
intenta comprobar el cumplimiento de los lmites mximos de residuos en alimentos que son objeto de
comercio internacional. Unos resultados analticos fiables son esenciales para proteger la salud de los
consumidores y facilitar el comercio internacional.
Adems de las presentes directrices, el Comit del Codex sobre Residuos de Plaguicidas (CCPR) ha
elaborado otras recomendaciones del Codex pertinentes en la esfera de la aplicacin de los lmites mximos
del Codex para residuos de plaguicidas, a saber:
1
2
3
4
5
Mtodos de muestreo recomendados para la determinacin de residuos de plaguicidas a efectos del

cumplimiento de los LMR (CAC/GL 33-1999).
Parte del producto a la que se aplican los lmites mximos del Codex para residuos y que se analiza
(CAC/GL 41-1993).
Lista sobre los lmites mximos del Codex para residuos de plaguicidas (los lmites mximos para residuos de
plaguicidas adoptados por la Comisin del Codex Alimentarius estn disponibles en: http://www.codexalimentarius.net).
Mtodos recomendados para muestreo de residuos de plaguicidas (CODEX STAN 229-1993).
Clasificacin del Codex de Alimentos y Piensos (CAC/MISC 4-1993).
Revisin 2003. Enmienda 2010.
CAC/GL 40-1993
1.
Pgina 2 de 41
INTRODUCCIN
Se ha considerado que la consecucin del objetivo de unas prcticas leales en el comercio internacional
depende, entre otras cosas, de la fiabilidad de los resultados analticos. Esto depende a su vez,
particularmente en el anlisis de residuos de plaguicidas, no slo de la disponibilidad de mtodos analticos
fiables, sino tambin de la experiencia del analista y de la observancia de unas buenas prcticas en el
anlisis de plaguicidas.
Estas Directrices definen dichas buenas prcticas analticas y pueden dividirse en tres partes relacionadas
entre s:
El analista (prr. 2);
Recursos bsicos (prr. 3);
El anlisis (prr. 4).
Los requisitos relativos a las instalaciones, gestin, personal, garanta y control de la calidad, documentacin
de los resultados y datos no elaborados y otros temas pertinentes, que se consideran requisitos previos para
obtener unos resultados fiables e identificables, se describen de forma general en la norma ISO/IEC 17025
(1999) y en una serie de documentos de orientacin de la OCDE sobre buenas prcticas de laboratorio, as
como en las leyes y reglamentos nacionales correspondientes. Estas Directrices del Codex, que no pretenden
ser exhaustivas, esbozan los principios y prcticas ms esenciales que deben aplicarse en el anlisis de
residuos de plaguicidas.
2.
EL ANALISTA
2.1
El anlisis de residuos consiste en una cadena de procedimientos, la mayora de los cuales conocidos
o fcilmente comprensibles, aplicados por un qumico capacitado; sin embargo, dado que las concentraciones
de las sustancias analizadas son del orden de g/kg a mg/kg y que los anlisis pueden ser difciles, es
imprescindible prestar atencin a los detalles. El analista encargado debe estar convenientemente calificado y
poseer experiencia y competencia en anlisis de residuos. El personal debe poseer una slida formacin y
experiencia en el uso correcto de los equipos y la aplicacin de las tcnicas de laboratorio apropiadas.
Adems, cada analista que utilice el mtodo por primera vez debe completar las pruebas especificadas en las
secciones 4.4.5 del Cuadro 4 para demostrar que es capaz de utilizar el mtodo dentro de los parmetros de
rendimiento previstos, establecidos durante su validacin, antes de realizar el anlisis de muestras. El
personal ha de comprender los principios del anlisis de residuos de plaguicidas y las exigencias de los
sistemas de garanta de la calidad analtica. Debe conocer la finalidad de cada etapa del mtodo y entender la
importancia de que los mtodos se sigan exactamente en la forma prescrita, y sealar todas las desviaciones
en que sea forzoso incurrir. Asimismo, el personal debe estar capacitado para evaluar e interpretar los datos
obtenidos. Deber llevarse un registro en el que conste la formacin y experiencia de todo el personal del
laboratorio.
2.2
Cuando se crea un laboratorio para anlisis de residuos, el personal debe pasar parte de su perodo de
capacitacin en un laboratorio de prestigio donde se disponga del asesoramiento de expertos y de medios de
capacitacin. Si el laboratorio tiene que analizar una amplia de variedad de residuos de plaguicidas, podr ser
necesario que el personal adquiera experiencia en ms de uno de estos laboratorios especializados.
3.
RECURSOS BSICOS
3.1
EL LABORATORIO
3.1.1 El laboratorio y sus instalaciones deben estar proyectados de forma que las distintas tareas se
efecten en zonas bien determinadas, con la mxima seguridad y la mnima posibilidad de contaminacin de
las muestras. Los laboratorios debern estar construidos y equipados con materiales resistentes a las
sustancias qumicas que probablemente se utilizarn entre ellos. Lo ideal sera que dispusieran de salas
independientes para recibir y almacenar la muestra, para la preparacin, extraccin y purificacin y para los
instrumentos utilizados en la etapa de determinacin. La zona utilizada para extraccin y purificacin deber
cumplir las especificaciones impuestas a los laboratorios en materia de disolventes, y todas las instalaciones
CAC/GL 40-1993
Pgina 3 de 41
de extraccin de humos debern ser de alta calidad. La recepcin, el almacenamiento y la preparacin de las
muestras debern efectuarse en zonas dedicadas exclusivamente a la determinacin de niveles de residuos.
Los requisitos prioritarios son que se garantice la integridad de la muestra y se cuente con normas adecuadas
en materia de seguridad del personal.
3.1.2 La seguridad del laboratorio se debe considerar tambin desde el punto de vista de lo que es
necesario o deseable, ya que hay que reconocer que las rigurosas condiciones de trabajo exigidas en los
laboratorios de residuos en algunas partes del mundo no seran en absoluto realistas en otras. No deber
permitirse fumar, comer, beber ni utilizar cosmticos en la zona de trabajo. En sta slo debern almacenarse
pequeos volmenes de disolventes, debindose conservar la mayor parte de ellos en locales separados, lejos
de la zona de trabajo principal. En la medida de lo posible, el uso de disolventes y reactivos muy txicos
deber reducirse al mnimo. Todos los disolventes sobrantes debern almacenarse en lugar seguro y
eliminarse de forma inocua y sin causar daos al medio ambiente tomando en cuenta, cuando se disponga de
ella, la reglamentacin nacional especfica.
3.1.3 La zona de trabajo principal deber estar diseada y equipada de modo que pueda utilizarse una
gama apropiada de disolventes analticos. Todo el equipo (luces, maceradores, refrigeradores, etc.) deber
ser antichispa o a prueba de explosiones. Las operaciones de extraccin, purificacin y concentracin
debern efectuarse en una zona bien ventilada, preferiblemente en campanas de gases.
3.1.4 Debern emplearse pantallas de seguridad cuando se utilice material de vidrio en vaco o a presin.
Deber haber un suministro abundante de gafas, guantes y ropa de proteccin, servicios de lavado de
urgencia y equipos para tratar los materiales derramados. Se deber disponer de un equipo adecuado contra
incendios. El personal deber ser consciente de que muchos plaguicidas presentan una toxicidad aguda o
crnica, por lo que hay que tener gran cuidado al manipular los compuestos estndar de referencia.
3.2
EQUIPO Y SUMINISTROS
3.2.1 El laboratorio necesitar un abastecimiento eficiente y fiable de electricidad y agua. Es

imprescindible disponer de un suministro adecuado de reactivos, disolventes, gas, material de vidrio,
material para cromatografa, etc., de calidad adecuada.
3.2.2 El equipo de cromatografa, las balanzas, los espectrofotmetros, etc., debern revisarse y calibrarse
con regularidad para comprobar que su funcionamiento es correcto, y se llevar un registro de todas las
revisiones o reparaciones que se efecten a cada uno de los aparatos. En el caso de los instrumentos de
medicin, la calibracin es fundamental. Puede ser suficiente el empleo de curvas de calibracin y la
comparacin con patrones.
3.2.3 Slo se deber proceder a la calibracin y recalibracin peridica de los instrumentos de medicin
cuando el posible cambio en el valor nominal pueda contribuir en medida importante a la incertidumbre de la
medicin. Deben calibrarse regularmente las balanzas y pipetas/dispensadores automticos o instrumentos
similares. La temperatura de funcionamiento de los refrigeradores y congeladores se controlar
constantemente o bien a intervalos especificados, actualizndose y mantenindose todos los registros
correspondientes.
3.2.4
El equipo utilizado deber ser idneo para realizar el trabajo requerido.
3.2.5 Todos los laboratorios debern disponer de patrones de referencia de plaguicidas, de pureza conocida
y convenientemente elevada. Debern tener patrones analticos de todos los compuestos originarios cuyas
muestras se controlan en el laboratorio, as como de los metabolitos incluidos en los LMR.
3.2.6 Todos los patrones analticos, las soluciones concentradas y los reactivos deben etiquetarse
debidamente indicando la fecha de preparacin, la identificacin del analista, el disolvente utilizado y las
condiciones de almacenamiento aplicadas, y aquellos compuestos cuya integridad pueda ser afectada por
procesos de degradacin debern etiquetarse claramente con la fecha de caducidad y almacenarse en las
condiciones adecuadas. Los compuestos de referencia se mantendrn en las condiciones que reduzcan al
mnimo su tasa de degradacin: temperatura baja, exclusin de humedad, oscuridad. Asimismo es importante
que durante el almacenamiento las soluciones estndar de plaguicidas no se descompongan por efecto de la
luz o el calor o se concentren por la evaporacin del disolvente.
CAC/GL 40-1993
4.
Pgina 4 de 41
EL ANLISIS
Los mtodos aplicados para la determinacin de los residuos de plaguicidas debern, en general,
satisfacer los criterios indicados en el Cuadro 3.
4.1.
EVITAR LA CONTAMINACIN
4.1.1 Uno de los aspectos importantes en los que el anlisis de residuos de plaguicidas difiere
notablemente del macroanlisis es el relacionado con la contaminacin y la interferencia. Las trazas de
contaminacin en las muestras finales utilizadas en la etapa de determinacin del mtodo pueden dar lugar a
errores tales como falsos resultados positivos o negativos y a una prdida de sensibilidad, que puede impedir
la deteccin de los residuos. La contaminacin puede provenir prcticamente de todos los materiales
empleados o relacionados con el muestreo, el transporte y almacenamiento de las muestras, y los anlisis. El
material de vidrio, los reactivos, los disolventes orgnicos y el agua debern ser comprobados antes de su
utilizacin para evitar la presencia de posibles contaminantes que puedan interferir, para lo cual se analizarn
mediante un reactivo testigo.
4.1.2 Las sustancias limpiadoras, las cremas protectoras, los jabones que contengan germicidas, los
rociados contra insectos y los perfumes y cosmticos pueden causar interferencias que resultan
especialmente importantes cuando se utiliza un detector de captura de electrones. No hay ninguna solucin
efectiva al problema fuera de prohibir su uso por el personal dentro del laboratorio.
4.1.3 Los lubricantes, los obturadores, los plsticos, los cauchos naturales y sintticos, los guantes de
proteccin, el aceite de las conducciones corrientes de aire comprimido y las impurezas de fabricacin en los
conos de la extraccin, papeles filtrantes y algodn pueden tambin provocar contaminacin.
4.1.4 Los reactivos, adsorbentes y disolventes qumicos generales de laboratorio pueden contener,
adsorber o absorber compuestos que interfieren en el anlisis. Puede ser necesario purificar los reactivos y
adsorbentes y, en general, se deben utilizar disolventes redestilados. El agua desionizada es frecuentemente
sospechosa, por lo que es preferible el agua redestilada, aunque en muchos casos bastar agua corriente o de
pozo.
4.1.5 El material de vidrio, las jeringas y las columnas de la cromatografa de gases puede contaminarse
por el contacto con muestras o extractos anteriores. Todos los objetos de vidrio debern limpiarse con
solucin detergente y ser enjuagados cuidadosamente con agua destilada (u otra agua limpia) y, a
continuacin, enjuagados de nuevo con el disolvente que ha de utilizarse. El material de vidrio que se utilice
en el anlisis de trazas deber guardarse por separado, y no se utilizar para ningn otro fin.
4.1.6 Los patrones de referencia de plaguicidas debern almacenarse siempre a la temperatura adecuada,
en una sala separada del laboratorio principal de residuos. Las soluciones y extractos analticos concentrados
estndar no se guardarn en la misma zona de almacenamiento.
4.1.7 Se deber desconfiar de los aparatos que contengan cloruro de polivinilo (PVC) y, si se demuestra
que son fuente de contaminacin, deber prohibirse su uso en los laboratorios de residuos. Tambin habr
que tener cuidado con otros materiales que contengan plastificadores, si bien el PTFE y los cauchos
silicnicos son, por regla general, aceptables y otros pueden serlo en determinadas circunstancias. Los
recipientes en que se almacenan las muestras pueden provocar contaminacin; quizs se necesitan botellas de
vidrio con tapones de vidrio esmerilado. Lo ideal es que los instrumentos utilizados en los anlisis se
almacenen en una sala aparte. La naturaleza y la importancia de la contaminacin pueden variar segn el tipo
de tcnica de determinacin que se utilice y segn el nivel de residuos de plaguicida que deba determinarse.
Por ejemplo, algunos problemas de contaminacin que son importantes cuando se trata de mtodos que
utilizan la cromatografa de gases o la cromatografa lquida de alto rendimiento pueden serlo menos cuando
se utiliza la espectrofotometra, y viceversa. Cuando los niveles del residuo son relativamente altos, la
interferencia de fondo de los disolventes y otros materiales puede ser insignificante en comparacin con la
cantidad de residuo presente. Muchos problemas pueden resolverse utilizando detectores especficos. Si el
contaminante no interfiere con el residuo que debe determinarse, su presencia puede ser admisible.
4.1.8 Se debern utilizar laboratorios distintos para los anlisis de residuos y los de formulacin. La
preparacin y manejo de las muestras deben mantenerse separados de todas las dems actividades del
laboratorio de residuos con el fin de impedir una posible contaminacin recproca.
CAC/GL 40-1993
4.2
Pgina 5 de 41
RECEPCIN Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS
4.2.1 Todas las muestras que se reciban en el laboratorio debern ir acompaadas de informacin completa
sobre el origen de la muestra, el anlisis requerido y los posibles peligros que puede entraar la manipulacin
de la muestra en cuestin.
4.2.2 Al recibirse una muestra se le adjudicar inmediatamente un cdigo de identificacin nico que
deber llevar durante todas las fases del anlisis y hasta la comunicacin de los resultados. Deber aplicarse
un sistema apropiado de control de la eliminacin de las muestras y se mantendrn todos los registros
pertinentes.
4.2.3 El tratamiento de las muestras y el submuestreo debern efectuarse empleando procedimientos para
los que previamente se haya demostrado que no repercuten en la concentracin de los residuos presentes en
las muestras.
4.2.4 Si no es posible analizar las muestras inmediatamente pero su anlisis ha de efectuarse con rapidez,
stas deben almacenarse a 1-5 C, sin exponerlas a la luz solar directa, y ser analizadas en el plazo de pocos
das. Sin embargo, las muestras que se reciben congeladas deben mantenerse a -16 C hasta el momento del
anlisis. En algunos casos puede ser necesario almacenar las muestras por perodos ms largos antes de
proceder a su anlisis. En tales ocasiones, la temperatura de almacenamiento deber ser de 20 C
aproximadamente, dado que a dicha temperatura la degradacin de los residuos de plaguicidas por la accin
de enzimas suele ser sumamente lenta. Si es inevitable un almacenamiento prolongado se debern comprobar
los efectos del mismo analizando muestras enriquecidas que hayan sido almacenadas en las mismas
condiciones durante un perodo similar. Se encontrar informacin til sobre la estabilidad de los residuos de
plaguicidas en el almacenamiento en la publicacin anual de la FAO titulada: Pesticide Residues
Evaluations que prepara la JMPR de la FAO y la OMS, as como en la documentacin presentada por los
fabricantes para apoyar el registro de sus plaguicidas.
4.2.5 Cuando haya que congelar las muestras, es recomendable que se tomen las porciones de las mismas
que han de analizarse antes de proceder a la congelacin, para reducir al mnimo el efecto de separacin del
agua en forma de cristales de hielo durante el almacenamiento. No obstante, es necesario asegurarse de que
en el anlisis se emplea toda la porcin extrada para tal fin.
4.2.6 Los envases no debern tener prdidas. Los envases utilizados para el almacenamiento y sus tapas o
tapones debern impedir la entrada de la sustancia o sustancias analizadas en el compartimiento de
almacenamiento.
4.3
PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS NORMALIZADOS
4.3.1 Se aplicarn procedimientos operativos normalizados para todas las operaciones. Dichos
procedimientos comprendern instrucciones de trabajo completas as como informacin sobre la aplicacin,
el rendimiento previsto, los requisitos para el control de calidad interno (verificacin del rendimiento) y el
clculo de los resultados. Asimismo deber informar de todos los peligros que puedan derivarse del mtodo,
las sustancias patrn o los reactivos.
4.3.2 Todas las desviaciones de un procedimiento debern ser registradas y autorizadas por el analista
encargado.
4.4
VALIDACIN DE MTODOS 1
4.4.1 Se han publicado directrices para la validacin de los procedimientos analticos utilizados con
diversos fines. Los principios expuestos en esta seccin se consideran de carcter prctico, y adecuados para
la validacin de mtodos de anlisis de residuos. Esta orientacin no es normativa. El analista deber decidir
cul es el grado de validacin necesario para demostrar que el mtodo resulta adecuado para cumplir la
finalidad prevista, y producir en consecuencia los datos de validacin necesarios. Por ejemplo, las exigencias
Esta seccin se basa en las recomendaciones elaboradas por una Consulta AOAC/FAO/OIEA celebrada en Miskolc,
Hungra, en 1999. El documento completo est disponible en www.iaea.org/trc y en A. Fajgelj & A. Ambrus Principles
and Practices of Method Validation, Royal Society of Chemistry, 2000.
CAC/GL 40-1993
Pgina 6 de 41
pueden ser muy diferentes segn se trate de comprobar el cumplimiento de LMR o de proporcionar datos
para un clculo de la ingestin.
4.4.2 Un mtodo de anlisis es la serie de procedimientos que se aplican desde la recepcin de la muestra
hasta la produccin del resultado final. La validacin es el proceso mediante el cual se verifica la idoneidad
del mtodo para cumplir la finalidad prevista. El mtodo puede desarrollarse internamente, extraerse de la
literatura u obtenerse de terceros de alguna otra manera. Podr luego adaptarse o modificarse para que se
ajuste a los requerimientos y capacidades del laboratorio y/o al propsito para el que ha de utilizarse.
Habitualmente la validacin se efecta una vez que se ha terminado de desarrollar el mtodo y se supone que
se han establecido de manera satisfactoria requisitos como la calibracin, la idoneidad del sistema, la
estabilidad del analito, etc. En la validacin y utilizacin de un mtodo de anlisis se debern efectuar
mediciones comprendidas en la escala calibrada del sistema de deteccin que se emplee. Por lo general la
validacin preceder la aplicacin prctica del mtodo de anlisis de las muestras, aunque la verificacin
posterior del rendimiento debe constituir un aspecto constante e importante del proceso. Los requisitos para
los datos de verificacin del rendimiento constituyen un subconjunto de los exigidos para la validacin del
mtodo.
Cuando es viable la realizacin de ensayos de aptitud (u otros procedimientos de verificacin entre
laboratorios), stos constituyen un instrumento importante para verificar la precisin general de los
resultados generados por el mtodo, y brindan informacin sobre la variabilidad de los resultados entre los
distintos laboratorios. Sin embargo, por lo general los ensayos de aptitud no comprueban la estabilidad u
homogeneidad de los analitos ni su extractabilidad de la muestra procesada.
Cuando se necesitan datos sobre la incertidumbre, stos deben incluir informacin sobre la verificacin del
rendimiento y no deben basarse nicamente en datos sobre la validacin del mtodo.
4.4.3 Siempre que un laboratorio desarrolle un nuevo mtodo o modifique un mtodo ya existente,
debern determinarse los efectos de las variables analticas, por ejemplo mediante una prueba de rugosidad.
Debern aplicarse estrictos controles en relacin con todos los aspectos de la metodologa que puedan influir
en los resultados, como pueden ser: tamao de la muestra; volmenes de reparto; variaciones en el
rendimiento de los sistemas de purificacin empleados; estabilidad de los reactivos o de los derivados
preparados; efectos de la luz, la temperatura, los disolventes y el almacenamiento en los analitos de los
extractos; efectos de los disolventes, los sistemas de inyeccin, la columna de separacin, las caractersticas
de la fase mvil (composicin y velocidad de flujo), la temperatura, el sistema de deteccin, las sustancias
utilizadas en la extraccin, etc., en el sistema de determinacin. Es muy importante que se establezcan
claramente las relaciones cualitativas y cuantitativas entre la seal medida y la sustancia que se trata de
analizar.
4.4.4 Se dar preferencia a mtodos que puedan aplicarse a varios tipos de residuos o a varios tipos de
matrices. El empleo de analitos o matrices representativos es importante para la validacin de los mtodos.
Para este fin los productos debern diferenciarse suficientemente, pero no ms de lo necesario. Por ejemplo,
algunos productos estn disponibles en una vasta gama de variantes manufacturadas, o variedades cultivadas,
o razas, etc., con diferencias menores. Por lo general, aunque no invariablemente, se podr considerar que
una nica variante de un producto particular representa a otras variantes del mismo producto, aunque, por
ejemplo, no se debe considerar que una sola especie de frutas u hortalizas represente a todas las frutas u
hortalizas (Cuadro 5). Cada caso se considerar con sus circunstancias especficas, teniendo en cuenta las
situaciones en que se sabe que determinadas variantes de un producto difieren de otras en cuanto a su efecto
en el rendimiento del mtodo; ser necesario analizar esas variantes. Pueden existir diferencias considerables
entre las distintas especies en cuanto a la exactitud y precisin de los mtodos, especialmente con respecto a
la fase de determinacin.
4.4.4.1 Si la experiencia indica que en matrices de productos/muestras generalmente similares se obtiene un
rendimiento similar en la extraccin y la purificacin, ser posible adoptar un criterio ms sencillo de
validacin del rendimiento. Se podr seleccionar del Cuadro 5 un producto representativo de cada grupo de
productos con propiedades comunes, y utilizarlo para la validacin del procedimiento o el mtodo. En el
Cuadro 5, los productos estn clasificados con arreglo a la Clasificacin del Codex 2 .
2
CAC/GL 40-1993
Pgina 7 de 41
He aqu algunos ejemplos que ilustran en qu medida los datos de validacin pueden extenderse a otros
productos:
cereales: la validacin relativa a los granos enteros no puede aplicarse al salvado o el pan, pero
la validacin del trigo en grano puede aplicarse a la cebada en grano o la harina de trigo;
productos animales: no se debe considerar que la validacin relativa al msculo sea aplicable a
la grasa o los despojos comestibles, pero la validacin efectuada para la grasa de pollo podr
aplicarse a la grasa de vacuno;
frutas y hortalizas: la validacin relativa a un producto fresco entero no debe considerarse

aplicable al producto desecado, pero la referente a las coles podr aplicarse a las coles de
Bruselas.
4.4.4.2 Para evaluar el rendimiento de un mtodo se podrn utilizar analitos de representatividad similar. Se
pueden seleccionar compuestos que comprendan propiedades fsicas y qumicas de los analitos que se intenta
determinar con el mtodo. La seleccin de los analitos representativos debe efectuarse en funcin de la
finalidad y el alcance del anlisis, teniendo en cuenta lo siguiente.
a)
Los analitos representativos seleccionados deben:

i)
poseer una gama de propiedades fsico-qumicas suficientemente amplia como para incluir la
de los analitos representados;
ii)
ser los que con toda probabilidad se detectarn regularmente o que sern objeto de decisiones
crticas sobre la base de los resultados obtenidos.
b)
En la medida en que sea viable, todos los analitos incluidos en el proceso de validacin inicial
deben ser aqullos que han de someterse a ensayo regularmente y que pueden ser determinados
simultneamente por el sistema de determinacin empleado.
c)
La concentracin de los analitos utilizados para caracterizar un mtodo debe seleccionarse de

manera que comprenda los lmites aceptados (LA, vase el Glosario) de todos los analitos que se
planea buscar en todos los productos. Por consiguiente los analitos representativos seleccionados
deben incluir, entre otros, aqullos con LA altos y bajos. Esto significa que los niveles de
enriquecimiento utilizados en ensayos de rendimiento con analitos representativos/productos
representativos no necesariamente correspondern a los LA efectivos.
4.4.5. Cuando ya se dispone de datos apropiados quizs no sea necesario que el analista efecte todos los
ensayos. Sin embargo, los registros de validacin deben incluir, directamente o mediante referencias, toda la
informacin requerida. El Cuadro 1 ofrece un panorama general de los parmetros que deben evaluarse en la
validacin de los mtodos, segn la situacin del mtodo que deba validarse. Los parmetros y criterios
especficos que se han de evaluar se enumeran en el Cuadro 2. Se evaluarn nicamente aquellos parmetros
que resulten apropiados tanto para el mtodo como para la finalidad con la que ha de aplicarse ese mtodo
particular. En muchos casos ser posible obtener simultneamente, mediante un nico experimento, las
caractersticas de rendimiento relacionadas con varios parmetros. El empleo de pruebas en las que se
modifican varios factores diferentes al mismo tiempo (experimentos de diseo factorial) puede ayudar a
reducir al mnimo los recursos requeridos. El rendimiento del mtodo analtico deber comprobarse tanto en
la fase de elaboracin del mismo como durante su uso posterior, tal como se indica en la seccin 4.5, con
arreglo a los criterios indicados en el Cuadro 3.
4.4.6 Los mtodos individuales (para un solo residuo) debern validarse por completo con todos los
analitos y materiales de muestras especificados para ese fin, utilizando matrices de muestras representativas
de los que ha de analizar el laboratorio.
4.4.7
Los mtodos especficos para ciertos grupos se debern validar inicialmente para uno o ms
productos representativos y para un mnimo de dos analitos representativos seleccionados del grupo.
4.4.8 Los mtodos para residuos mltiples (MRM) podrn validarse con productos representativos y
analitos representativos.
CAC/GL 40-1993
4.5
VERIFICACIN DEL RENDIMIENTO
4.5.1
Los objetivos principales de la verificacin del rendimiento son:
Pgina 8 de 41
seguir de cerca el rendimiento del mtodo en las condiciones efectivas en que se emplea;
tomar en cuenta el efecto de las inevitables variaciones provocadas, por ejemplo, por la
composicin de las muestras, el funcionamiento de los instrumentos, la calidad de las sustancias
qumicas, la aptitud variable de los analistas y las condiciones ambientales en el laboratorio;
demostrar que las caractersticas de rendimiento del mtodo son generalmente similares a las
establecidas en el momento de su validacin, lo que prueba que el mtodo se halla
estadsticamente bajo control, y que la precisin e incertidumbre de los resultados son
comparables a los previstos para el mtodo. Con este fin los datos obtenidos en la validacin del
mtodo podrn actualizarse con informacin recabada de la verificacin de su rendimiento
durante el empleo regular del mtodo.
Los resultados del control interno de calidad proporcionan una informacin esencial sobre la
reproducibilidad a largo plazo y otras caractersticas del rendimiento del mtodo, incluidos los analitos y
productos que se hayan incorporado durante la extensin del mtodo.
Las caractersticas esenciales de rendimiento que han de comprobarse y los procedimientos de ensayo
apropiados se describen en el Cuadro 2.
Para que la verificacin del rendimiento sea eficaz, el anlisis de las muestras se efectuar simultneamente
con los anlisis apropiados de control de calidad (determinaciones de material testigo y de la recuperacin,
materiales de referencia, etc.). Se podrn utilizar grficos de control para comprobar las tendencias del
rendimiento del mtodo y garantizar el mantenimiento del control estadstico.
4.5.2
Construccin y utilizacin de grficos de control
4.5.2.1 Los grficos de control pueden ser un instrumento til para demostrar el rendimiento de un mtodo y
la reproducibilidad del parmetro seleccionado. Un ejemplo de ello son los grficos de control utilizados
para las recuperaciones. Su aplicacin depender de las tareas de laboratorio; cuando se analiza un nmero
elevado de muestras del mismo tipo con los mismos ingredientes activos, el grfico de control se basar en la
recuperacin media y las desviaciones estndar obtenidas en el uso regular del mtodo. Si, en cambio, el
anlisis se efecta en un nmero pequeo de muestras de cada tipo para una gran variedad de muestras y un
nmero considerable de analitos, aplicando un procedimiento de residuos mltiples, los grficos de control
no podrn utilizarse de la manera habitual. En tales casos inicialmente se construir un grfico de control con
la recuperacin promedio (Q) de los analitos representativos en matrices representativas y el coeficiente tipo
de variacin de la reproducibilidad dentro del laboratorio (CVAtp), obtenido por el procedimiento descrito
ms abajo. Cuando el promedio de los datos de las recuperaciones y su coeficiente de variacin obtenidos en
la validacin del mtodo para los distintos analitos/matrices de la muestra no son estadsticamente diferentes,
cada uno de ellos podr considerarse como una estimacin de la recuperacin efectiva y de la precisin del
mtodo; combinndolas de manera apropiada se podr establecer la recuperacin tpica (Qtp) y el coeficiente
de variacin (CVAtp) del mtodo, que se utilizarn para construir el grfico de control inicial. Los lmites de
control y de adopcin de medidas sern, respectivamente, Qtp 2*CVAtp*Q y Qtp 3*CVAtp*Q.
4.5.2.2 Si el mtodo se aplica regularmente para analizar diversas combinaciones de analitos y matrices
representadas durante la validacin, se trazarn en el grfico las distintas recuperaciones. La reproducibilidad
del mtodo en su uso normal podr ser algo mayor a la obtenida durante la validacin del mtodo. Por
consiguiente, si algunas de las recuperaciones quedan fuera de los lmites de control o superan
ocasionalmente los lmites de adopcin de medidas, pero estn comprendidas dentro de las escalas calculadas
a partir de los valores de la CVA especificados en el Cuadro 3, no ser necesario adoptar medidas
particulares.
4.5.2.3 Sobre la base de los 15-20 ensayos de recuperacin adicionales efectuados durante el uso regular del
mtodo como parte de la verificacin de su rendimiento, se volvern a calcular el valor medio o recuperacin
tpica y el CVA y se construir un nuevo grfico de control que reflejar la reproducibilidad a largo plazo de
la aplicacin del mtodo. Los nuevos parmetros establecidos debern formar parte de las gamas de valores
aceptables especificadas en el Cuadro 3.
CAC/GL 40-1993
Pgina 9 de 41
4.5.2.4 Si esto no puede lograrse, por ejemplo en el caso de analitos particularmente problemticos, se
deber notificar que los resultados recabados de las muestras tienen una exactitud o una precisin inferiores a
las que se asocian normalmente a la determinacin de residuos de plaguicidas.
4.5.2.5 Durante el uso regular del mtodo, si el promedio de los primeros 10 ensayos de recuperacin para
una matriz particular de analito/muestra resulta significativamente diferente (P=0,05) de la recuperacin
promedio obtenida de las matrices representativas del analito/muestra, no sern aplicables la Qtp ni el CVtp.
En este caso se calcularn nuevos lmites de control y de adopcin de medidas para esa matriz particular del
analito/muestra, aplicando el nuevo promedio de recuperacin y los valores del CV obtenidos.
4.5.2.6 Si los datos de la verificacin del rendimiento exceden reiteradamente los lmites de control (es
aceptable que una de cada 20 mediciones exceda el lmite), se debern verificar las condiciones de aplicacin
del mtodo, se identificarn las fuentes de los errores, y se adoptarn las medidas correctivas necesarias antes
de seguir utilizando el mtodo.
4.5.2.7 Si los datos de la verificacin del rendimiento exceden los lmites de adopcin de medidas, afinados
segn se estipula en las secciones 4.5.2.1 a 4.5.2.3, deber repetirse el ensayo en el lote analtico en cuestin
(o por lo menos en las muestras en que se encuentran residuos 0,7 LA o 0,5 LA respectivamente, para los
analitos que se detecten en forma regular y ocasional).
4.5.2.8 Un nuevo anlisis de la porcin analtica de las muestras que den resultados positivos es otro
instrumento de gran utilidad para verificar el rendimiento del mtodo. Los resultados de este procedimiento
pueden utilizarse para calcular la reproducibilidad global del mtodo dentro del laboratorio (CVLtp), en
general o para una matriz particular de analito/muestra. En este caso, el CVLtp incluir tambin la
incertidumbre del procesamiento de la muestra, pero no indicar si hay prdida del analito durante el
proceso.
4.6
ENSAYOS DE CONFIRMACIN
4.6.1 Cuando se llevan a cabo anlisis con fines de vigilancia o aplicacin reglamentaria, es especialmente
importante que se generen datos de confirmacin antes de dar un informe sobre muestras que contienen
residuos de plaguicidas normalmente no asociados con el producto, o cuando parece que se han superado los
LMR. Las muestras pueden contener sustancias qumicas que interfieren en el anlisis, que se han
identificado errneamente como plaguicidas. En la cromatografa de gases son ejemplos de esto las
respuestas de los detectores de captura de electrones a los steres de ftalatos, y las que se obtienen de los
detectores selectivos de fsforo con compuestos que contienen azufre y nitrgeno. Como primera medida, si
al principio se haba analizado una sola porcin analtica, deber repetirse el anlisis utilizando el mismo
mtodo. As se obtendr una prueba de la repetibilidad del resultado en caso de que se confirme el residuo.
Cabe sealar que la nica prueba de la ausencia de residuos detectables la proporcionan los datos de
verificacin del rendimiento.
4.6.2 Los ensayos de confirmacin pueden ser cuantitativos o cualitativos, pero en la mayor parte de los
casos se necesitarn ambos tipos de informacin. Se plantean problemas particulares cuando se deben
confirmar residuos en el lmite de determinacin o prximos al mismo, pero aunque en este nivel es difcil
cuantificarlos es imprescindible que se confirme su nivel e identidad.
4.6.3 La necesidad de ensayos de confirmacin puede depender del tipo de muestra o de su procedencia
conocida. En algunos cultivos o productos se encuentran con frecuencia determinados productos. Tratndose
de una serie de muestras de origen similar que contengan residuos del mismo plaguicida, quizs baste con
confirmar la identidad de los residuos en una pequea parte de las muestras, tomada al azar. De igual forma,
cuando se sabe que se ha aplicado un determinado plaguicida al material de la muestra no hay mucha
necesidad de confirmar la identidad, si bien deber confirmarse una parte de los resultados seleccionada al
azar. Cuando se dispone de muestras de control, habr que utilizarlas para comprobar la presencia de
posibles sustancias que interfieran en el anlisis.
4.6.4 En funcin de la tcnica de determinacin utilizada inicialmente, quizs sea necesario aplicar un
procedimiento alternativo, que podra ser una tcnica de deteccin diferente, a efectos de verificar la
cantidad. Para la confirmacin cualitativa (identidad) es conveniente emplear datos del espectro de masas o
una combinacin de tcnicas basadas en distintas propiedades fsico-qumicas (vase el Cuadro 6).
CAC/GL 40-1993
Pgina 10 de 41
4.6.5 Las operaciones necesarias para una identificacin positiva dependen del criterio del analista,
debiendo prestarse atencin particular a la eleccin de un mtodo que reduzca al mnimo los efectos de
compuestos que interfieren en el anlisis. Las tcnicas que se elijan dependern de la disponibilidad de
aparatos y conocimientos adecuados en el laboratorio de ensayo. En el Cuadro 6 se proporcionan algunos
procedimientos alternativos de confirmacin.
4.7
ESPECTROMETRA DE MASAS
4.7.1 Los datos sobre residuos obtenidos mediante espectrometra de masas pueden ofrecer pruebas
definitivas; cuando se dispone del equipo necesario, es la tcnica de confirmacin preferible. Esta tcnica
puede utilizarse tambin para el cribado de residuos. Generalmente el anlisis de residuos mediante
espectrometra de masas se aplica conjuntamente con una tcnica cromatrogrfica de separacin, con el fin
de obtener simultneamente datos sobre el tiempo de retencin, la relacin masa/carga en los iones y la
abundancia de los mismos. La tcnica de separacin concreta, el espectrmetro de masas, la interfaz y la
variedad de plaguicidas que se han de analizar son interdependientes, por lo que no hay una combinacin
nica que sirva para el anlisis de todos los compuestos. La transmisin cuantitativa de analitos lbiles a
travs del sistema cromatogrfico y su interfaz plantea problemas semejantes a los que se presentan con otros
detectores. La confirmacin ms definitiva de la presencia de un residuo se consigue mediante la formacin
de su espectro completo de masas mediante ionizacin por impacto electrnico (en la prctica,
normalmente, desde m/z50 hasta ms all de la regin de iones moleculares). Al confirmar la identidad del
residuo, se ha de tener especialmente en cuenta la abundancia relativa de los iones en el espectro y la
ausencia de iones que interfieran. Este mtodo de anlisis es uno de los menos selectivos, por lo que deber
ponerse el mximo cuidado para evitar la interferencia de contaminantes que puedan entrar en el sistema
durante la elaboracin y el almacenamiento de los extractos. Los sistemas de datos de espectrometra de
masas permiten la supresin de las seales de interferencia de fondo (causadas, por ejemplo, por prdidas en
la columna) mediante una sustraccin de dichas interferencias, pero esta tcnica debe emplearse con
cautela. Normalmente, se puede lograr una mayor sensibilidad mediante la exploracin dentro de una escala
de masas delimitada o mediante el control de determinados iones, aunque cuanto menor es el nmero de
iones controlados (sobre todo cuando su masa es pequea) menos concluyentes son los datos obtenidos. Se
puede conseguir una confirmacin complementaria i) utilizando adems otra columna cromatogrfica; ii)
utilizando otra tcnica de ionizacin (por ejemplo ionizacin qumica); iii) controlando otros productos de
reaccin de determinados iones mediante espectrometra doble de masas (EM/EM o EMn); o iv) controlando
otros iones con una masa mayor de resolucin. En lo que respecta a la cuantificacin, los iones que se
controlen debern ser los ms especficos del analito, los que sufran menos interferencias y en los que la
relacin seal/ruido sea buena. Las determinaciones por espectrometra de masas debern satisfacer unos
controles de calidad analtica anlogos a los que se aplican a otros sistemas.
4.7.2 La confirmacin de los residuos detectados tras la separacin por cromatografa lquida de alto
rendimiento (CLAR) suele ser ms problemtica que la cromatografa de gases. Si la deteccin se efecta por
absorcin de rayos UV, la produccin de un espectro completo puede proporcionar una prueba adecuada de
la identidad. Sin embargo, los espectros UV de algunos plaguicidas no son muy tiles para el diagnstico por
ser anlogos a los producidos por muchos otros compuestos que poseen grupos funcionales o estructuras
similares, y la elucin simultnea de compuestos que provocan interferencia puede determinar otros
problemas. Los datos sobre la absorcin UV obtenidos con diversas longitudes de onda pueden apoyar o
refutar la identificacin, pero en general por s solos no son suficientemente caractersticos. Se pueden
emplear datos de fluorescencia para apoyar los obtenidos por absorcin UV. El empleo de cromatografa de
lquidos-espectrometra de masas (CL-EM) puede proporcionar datos justificativos adecuados, pero
considerando que habitualmente los espectros generados son muy simples y presentan una escasa
fragmentacin caracterstica es improbable que los resultados obtenidos mediante CL-EM sean definitivos.
Una tcnica ms potente es la aplicacin de CL-EM/EM, ya que combina selectividad y especificidad y a
menudo ofrece pruebas adecuadas de la identidad del compuesto. Las tcnicas de CL-EM tienden a estar
sujetas a los efectos de las matrices, especialmente la supresin, y por consiguiente para confirmar la
cantidad puede hacerse necesaria la adicin de compuesto tipo, o compuestos tipo marcados por istopos.
Asimismo se podr recurrir a la derivacin para confirmar los residuos detectados por CLAR (prr. 4.6.5.4).
CAC/GL 40-1993
Pgina 11 de 41
4.7.3 En algunos casos ser muy conveniente confirmar mediante cromatografa en capa fina (CCF) los
resultados de la cromatografa de gases. La identificacin se basa en dos criterios: valor fR y reaccin de
visualizacin. Los mtodos de deteccin basados en bioensayos (por ejemplo con enzimas, proliferacin
fngica, inhibicin del cloroplasto) resultan particularmente idneos para la confirmacin cualitativa puesto
que son especficos de cierto tipo de compuestos, sensibles, y normalmente son muy poco afectados por los
coextractos. La literatura cientfica contiene numerosas referencias a esta tcnica; en el informe sobre
plaguicidas de la UIQPA (13) (Btora, V., Vitorovic, S.Y., Thier, H.-P. y Klisenko, M.A.; Pure y Appl.
Chem., 53, 1039-1049 (1981)) se examina la tcnica en cuestin y se ofrece una introduccin adecuada a la
misma. Sin embargo, los aspectos cuantitativos de la cromatografa en capa fina son limitados. Una
extensin ulterior de esta tcnica implica la eliminacin de la superficie de la placa correspondiente al fR del
compuesto de inters, seguida de elucin del material de la capa y de un nuevo anlisis qumico o fsico de
confirmacin. Habr que poner siempre en la placa, junto al extracto de la muestra, gotas de una solucin del
plaguicida estndar para evitar problemas de no repetibilidad del fR. Echando sobre el extracto gotas del
plaguicida estndar tambin se puede obtener informacin til. Las ventajas de la cromatografa en capa fina
son la rapidez, el bajo costo y la aplicabilidad a materiales sensibles al calor; las desventajas consisten en que
normalmente es menos sensible que las tcnicas instrumentales de deteccin cromatogrfica y exige una
purificacin ms eficiente cuando la deteccin se basa en las reacciones cromticas de las sustancias
qumicas.
4.8
DERIVACIN
Esta forma de confirmacin puede considerarse bajo tres amplios epgrafes:

a) Reacciones qumicas
Se han utilizado frecuentemente reacciones qumicas en pequea escala que originan productos de
degradacin, adicin o condensacin de plaguicidas, seguidas de un nuevo examen de los productos por
tcnicas cromatogrficas. Las reacciones dan origen a productos que tienen tiempos de retencin y/o
respuesta al detector distintos de los del compuesto de origen. Hay que tratar una muestra de plaguicida
estndar juntamente con el residuo sospechado a fin de poder comparar directamente los respectivos
resultados. Deber incluirse tambin un extracto enriquecido para probar que la reaccin ha tenido lugar en
presencia de material de la muestra. Cuando los derivados se detectan gracias a las propiedades del reactivo
del que se derivan, pueden producirse interferencias. Cochrane, W.P., ha publicado una resea de las
reacciones qumicas utilizadas para fines de confirmacin (Chemical derivatisation in pesticide analysis,
Plenum Press, NY (1981)). Las reacciones qumicas tienen la ventaja de ser rpidas y fciles de realizar, pero
es necesario comprar o purificar reactivos especializados.
b) Reacciones fsicas
Una tcnica til es la alteracin fotoqumica de un residuo de plaguicida para obtener uno o ms productos
de patrn cromatogrfico reproducible. Hay que tratar siempre de igual manera una muestra del plaguicida
estndar y extracto enriquecido. Las muestras que contienen ms de un residuo de plaguicida pueden
plantear problemas en la interpretacin de los resultados. En tales casos, puede efectuarse antes de la
reaccin una separacin previa de residuos especficos mediante CCF, cromatografa de alto rendimiento o
fraccionamiento en columna.
c) Otros mtodos
Muchos plaguicidas pueden degradarse o transformarse por la accin de enzimas. En contraposicin a las
reacciones qumicas normales, estos procesos son muy especficos y generalmente consisten en oxidacin,
hidrlisis o desalquilacin. Los productos de la conversin poseen caractersticas cromatogrficas distintas
de las del plaguicida de origen, y pueden utilizarse a efectos de confirmacin si se comparan con los
productos de reaccin utilizando plaguicidas estndar.
4.9
EL CONCEPTO DE NIVEL CALIBRADO MS BAJO (NCMB)
4.9.1 Cuando el objetivo del anlisis consiste en controlar y verificar el cumplimiento de LMR u otros
lmites aceptados (LA), los mtodos aplicados a los residuos deben ser suficientemente sensibles para
determinar de manera fiable los que probablemente estarn presentes en un cultivo o una muestra ambiental
en niveles equivalentes al LMR o LA o cercanos a los mismos. Sin embargo, no es preciso que tengan una
sensibilidad que permita determinar cantidades de residuos dos o ms veces inferiores. Los mtodos
CAC/GL 40-1993
Pgina 12 de 41
desarrollados para la medicin de residuos a niveles bajos resultan, en general, muy caros y difciles de
aplicar. El uso del nivel calibrado ms bajo (NCMB, vase el Glosario) tendra la ventaja de disminuir las
dificultades tcnicas que plantea la obtencin de los datos, al tiempo que se reduciran los costos. Los NCMB
para diversas muestras que se proponen a continuacin podran ayudar al analista de residuos en el diseo de
mtodos apropiados.
4.9.2 Cuando se trata de ingredientes activos registrados para los que se han acordado LMR, los NCMB
podrn especificarse como una fraccin del LMR. Para facilitar el anlisis esta fraccin variar, pudiendo
ser:
LMR (mg/kg)
5 o ms
de 0,5 a 5
de 0,05 a 0,5
menos de 0,05
NCMB (mg/kg)
0,5
0,1 aumentando hasta 0,5 en los LMR ms elevados
0,02 aumentando hasta 0,1 en los LMR ms elevados
0,5 x LMR
Cuando el LMR est fijado en el lmite de determinacin del mtodo analtico, el NCMB se fijar tambin en
dicho nivel.
4.10
EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
A efectos reglamentarios, slo debern comunicarse los datos comprobados, que se expresarn tal como se
definen en los LMR. Se considerarn valores nulos los inferiores al nivel calibrado ms bajo, y no los
inferiores a un nivel calculado por extrapolacin. En general los resultados no debern corregirse en funcin
de la recuperacin; slo se podrn corregir si sta difiere considerablemente del 100%. En caso de que los
resultados se notifiquen corregidos de acuerdo con la recuperacin, debern proporcionarse tanto los valores
de la medicin como los valores corregidos. Tambin deber notificarse la base adoptada para la correccin.
En caso de resultados positivos obtenidos mediante determinaciones repetidas (por ej. en distintas columnas
de CG, con diferentes detectores o sobre la base de iones diferentes de los espectros de masa) de una misma
porcin de ensayo (submuestra), se deber notificar el valor ms bajo que se haya obtenido. Si los resultados
positivos derivan del anlisis de varias porciones de ensayo, se notificar la media aritmtica de los valores
ms bajos que se han obtenido en cada porcin de ensayo. Considerando, en general, una precisin relativa
de 20-30%, los resultados deben expresarse nicamente con dos cifras significativas (por ej.: 0,11; 1,1; 11 y
1,1 x 102). Puesto que a concentraciones ms bajas la precisin podr ser del orden de 50%, los valores de
los residuos inferiores a 0,1 debern expresarse con una cifra significativa solamente
CAC/GL 40-1993
Pgina 13 de 41
Figura II.1. Cuadro general de la validacin del mtodo

MTODO ANALTICO
Validado para el fin
especfico
No validado para el fin

especfico
Identificacin del parmetro, Cuadro 1
No
Rendimiento
verificado
Validacin del mtodo

S
Modificacin
del mtodo
No
No idneo para el
fin especfico
Actualmente idneo para el fin

especfico (confirmar regularmente
mediante control de calidad)
Figura II.2. Verificacin de la estabilidad del analito
Estabilidad del analito en el disolvente
Desconocida
Conocida
S
Deteminar estabilidad
S
No
ESTABILIDAD DEL ANALITO EN EXTRACTOS Y MUESTRAS
Conocida
Desconocida
Modificacin de
la condicin
No idnea para el fin

especfico
S
Determinar estabilidad
Verificacin del
rendimiento o
validacin
completa del
mtodo
No
Modificacin de la
condicin
No idnea para el fin especfico
CAC/GL 40-1993
Pgina 14 de 41
Cuadro 1 Resumen de los parmetros que deben evaluarse para validar el mtodo
Parmetros que deben

comprobarse
Mtodo analtico existente, del que ensayos anteriores con el parmetro han demostrado la validez para
una o ms combinaciones de analitos/matrices
Verificacin Matriz
Analito adicional
Concentracin mucho ms
Otro laboratorio
del
adicional
baja del analito
rendimiento
*
Modificacin de
un mtodo
existente
Mtodo
nuevo, an no
validado
S. Pueden
necesitarse
controles
rigurosos si el
sistema de
determinacin
es diferente o
es incierta la
magnitud de
las
interferencias
de las
matrices, en
comparacin
con mtodos
existentes.
S
Especificidad,
(demuestra que la seal
detectada se debe al
analito y no a otro
compuesto)
No (si se
cumplen los
criterios
sobre
matrices
testigo y
confirmaci
n del analito)
S, si el
control de
la calidad
evidencia
interferencias de la
matriz
S, si el control de calidad
evidencia interferencias de la
matriz
No se necesitan
controles rigurosos si
el rendimiento del
sistema de
determinacin es
similar o mayor
S o no. Podran
requerirse
controles
rigurosos si el
sistema de
determinacin
es fundamentalmente diferente
o es incierta la
magnitud de las
interferencias de
la matriz
Escala analtica,
recuperacin mediante
extraccin,
purificacin, derivacin
y medicin
Escala de calibracin
para la determinacin
del analito
No
No
S, para analitos
representativos
S, para analitos
representativos
S, para
analitos
representativos
Tipos de
experimentos
que pueden
combinarse
Escala de
calibracin
Escala analtica
LD/LC
Efecto de la
matriz
Linealidad,
reproducibilidad
y seal/ruido
CAC/GL 40-1993
Pgina 15 de 41
Parmetros que deben

comprobarse
Verificacin Matriz
Analito adicional
Otro laboratorio
del
adicional
baja del analito
rendimiento
*
LD y LC
No
Lmite de notificacin,
NCMB
Estabilidad del analito
en extractos de las
muestras =
Modificacin de
un mtodo
existente
Mtodo
nuevo, an no
validado
S, (parcial
si la matriz
proviene
de una
clase
representa
da)
No
S, parcial para
analitos represen
tados
No
No
No
No
No
No
S, salvo
que la
matriz
provenga
de una
clase
representa
da
S, salvo que el
analito est representado
No
No, salvo que la

extraccin/disol
vente final sea
diferente o la
purificacin sea
menos rigurosa

en el almacenamiento
de las muestras
Preferiblemente s
No
No
S, si la
extraccin/dis
olvente final
es diferente de
un mtodo
existente, o la
purificacin es
menos
rigurosa en
comparacin
con los otros
mtodos
empleados
No
Eficiencia de la
extraccin
No
Preferiblemente s
Preferiblemente s
Preferiblemente s
No
No, salvo que se

empleen
condiciones de
extraccin
diferentes
S, salvo que
se emplee un
procedimiento
de extraccin
comprobado
anteriormente
Tipos de
experimentos
que pueden
combinarse
Nivel calibrado
ms bajo y datos
de recuperacin
de material
enriquecido a
nivel bajo
CAC/GL 40-1993
Pgina 16 de 41
Parmetros que deben

comprobarse
Verificacin Matriz
Analito adicional
Otro laboratorio
del
adicional
baja del analito
rendimiento
*
Homogeneidad de las
muestras analticas
No, salvo
que la
matriz sea
sustancial
mente
distinta
No
No

en el procesamiento de
la muestra
No
S, salvo
en matriz
representa
da
S, salvo para
analito
representado
Preferiblemente s
Modificacin de
un mtodo
existente
Mtodo
nuevo, an no
validado
Tipos de
experimentos
que pueden
combinarse
No, salvo que haya

cambiado el equipo
No, salvo que

haya cambiado
el equipo
Vase ms abajo
No
No, salvo que el

procedi-miento
comporte una
temperatura ms
elevada, un
tiempo mayor,
una trituracin
ms gruesa, etc.
S, salvo que
se emplee un
procedimiento
ya
comprobado
para procesar
la muestra
No, salvo que
el
procedimiento
comporte
temperatura
ms elevada,
tiempo mayor,
trituracin
ms fina, etc.
que los
procedimientos validados
Repetibilidad,
reproducibilidad
Control de calidad constante.

Si no se dispone de informacin pertinente
Los analitos representativos podrn elegirse por sus caractersticas de hidrlisis, oxidacin y fotolisis.
Los datos de estabilidad en el interior o la superficie de productos representativos deberan proporcionar informacin suficiente. Se necesitarn ensayos adicionales, por
ejemplo, cuando:
a
las muestras se almacenan durante un perodo ms prolongado que el que se comprueba (por ej., estabilidad comprobada hasta cuatro semanas con prdidas
mensurables del analito durante este perodo, pero las muestras no se analizan antes de seis semanas)
b
ensayos de estabilidad efectuados a -18 o C, almacenamiento de las muestras en el laboratorio a
5 o C;
c
muestras almacenadas normalmente a 15o C, pero la temperatura de almacenamiento se eleva hasta +5 o C).
La informacin sobre la eficacia de la extraccin puede obtenerse del fabricante o la empresa que registra el compuesto.
Ocasionalmente con anlisis repetidos de porciones de ensayo de muestras positivas.
CAC/GL 40-1993
Pgina 17 de 41
Cuadro 2 Parmetros que deben evaluarse en la validacin de los mtodos en diversas circunstancias
Parmetro
Niveles
N de anlisis o tipo de ensayo

requerido
Criterios
Mtodo cuantitativo
1.Rendimiento del mtodo optimizado en el laboratorio (un solo laboratorio)
Ningn cambio
1.1 Estabilidad En LA, 5: se repite a intervalos
significativo en la
del analito en
o con
temporales apropiados (tiempo
concentracin del analito
extractos y
residuos
cero inclusive) y para cada
en extractos y soluciones
soluciones
claraanalito/producto representativo.
analticas estndar
estndar
mente
Enriquecer los extractos de la
detectabl muestra testigo para comprobar la almacenados (P=0,05)
es
estabilidad de los residuos.
Comparar la concentracin del
analito en soluciones estndar
almacenadas y recin preparadas.
1.2 Funcin de
calibracin
Efecto de la
matriz
NCMB a
2 (3)
veces el
LA
Comprobar las funciones de

respuesta de todos los analitos
incluidos en el mtodo con 2
repeticiones en 3 niveles del
analito ms la muestra testigo.
Para respuestas no lineales,
determinar la curva de la
respuesta en 7 niveles y 3
repeticiones.
Comprobar el efecto de la matriz
con todos los analitos y matrices
representativos. Aplicar los
compuestos estndar preparados
en disolvente y sacar muestras
aleatorias de los extractos.
Calibracin lineal:
coeficiente de regresin
de las soluciones
analticas estndar (r)
0,99.
DE de residuales (Sy/x)
0,1
Para la funcin
polinmica (r) 0,98.
El efecto de la matriz se
confirma si la diferencia
es significativa en
P = 0,05.
Observaciones
Mtodo de cribado
Al final del perodo de
almacenamiento hay residuos
aadidos detectables en el NCMB
Para calibracin lineal:

coeficiente de regresin (r)
0,98. DE de los residuos 0,2
Para la funcin polinmica (r)
0,95
Ser necesario comprobar la estabilidad en los

extractos si la aplicacin del mtodo analtico se
suspende durante el proceso de determinacin y es
probable que el material se almacene durante un
perodo ms prolongado que el necesario para
determinar la precisin, o si se obtuvieron
recuperaciones bajas durante la optimizacin del
mtodo. Si los extractos de recuperacin se almacenan,
durante la optimizacin del mtodo la recuperacin se
medir con respecto a patrones de calibracin viejos
y recin preparados. El tiempo de almacenamiento
debe comprender el perodo ms prolongado ha de
requerirse probablemente para completar el anlisis.
Los parmetros de la calibracin pueden establecerse
durante la optimizacin del procedimiento o en la
determinacin de la precisin o la capacidad de
deteccin. Preparar soluciones de calibracin en
diferentes concentraciones.
Para los MRM realizar la calibracin con mezclas de
analitos (mezcla estndar) que pueda separar
adecuadamente el sistema cromatogrfico.
Utilizar patrones estndares analticos ajustados a la
matriz para efectuar nuevos ensayos si el efecto de la
matriz es significativo. La validacin del mtodo
podra no dar una informacin concluyente sobre los
efectos de la matriz puesto que stos cambian en
funcin del tiempo, la muestra (a veces), la columna,
etc.
CAC/GL 40-1993
Pgina 18 de 41
Parmetro
Niveles

requerido
1.3 Escala
analtica,
exactitud,
fidelidad y
precisin,
lmite de
deteccin
(LD), lmite
de cuantificacin (LC)
NCMB a
2 (3)
veces el
LA*
Analizar combinaciones de
matrices de analitos
representativos: 5 porciones
analticas enriquecidas en los
niveles: 0, NCMB, LA y 3
repeticiones en el nivel de 2-3
LA. Las pruebas de recuperacin
deben repartirse entre los analistas
que utilizarn el mtodo y los
instrumentos que han de
emplearse en el anlisis.
Criterios
Mtodo cuantitativo
El LC debe ser idneo
para el fin especfico.
Recuperacin mediana y
CVA; vase el Cuadro 3.
El valor mediano de los
residuos* medido en el
material de referencia no
difiere en medida
significativa del valor de
consenso (P = 0,05).
Mtodo de cribado
Todas las recuperaciones son
detectables en el NCMB
Observaciones
Los analistas deben demostrar que el mtodo es idneo
para determinar la presencia del analito en el LA
apropiado, con errores mximos (falso negativo y falso
positivo) especificados.
Para los MRM, el nivel de enriquecimiento de las
muestras testigo debe comprender los LA de los
analitos representados. Por consiguiente estos podran
no corresponderse con los LA efectivos de los analitos
representativos.
Enriquecer las porciones analticas con mezclas
estndar.
Las escalas de exactitud y precisin determinadas para
las combinaciones representativas de analitos y
matrices pueden considerarse tpicas del mtodo, y se
utilizarn como criterios de aplicabilidad para su
extensin a nuevos analitos y productos y para una
orientacin inicial con respecto al control interno de
calidad del mtodo.
Notificar los resultados sin corregir, el valor medio de
recuperacin y el CVA de las repeticiones. El CVA
equivale a la reproducibilidad del anlisis de las
muestras dentro del laboratorio.
* Corregir los resultados de la recuperacin media si
difieren considerablemente del 100%.
Si el mtodo no permite calcular la recuperacin, la
exactitud y precisin sern las de la calibracin.
1.4
Especificidad
y selectividad
de la deteccin
del analito
En el
nivel de
calibraci
n ms
bajo
(NCMB)
Identificar mediante
espectometra de masas, una
tcnica de especificidad similar, o
la combinacin apropiada de las
tcnicas de separacin y deteccin
disponibles. Analizar 5 muestras
testigo de cada producto
representativo, obtenidas
La respuesta medida se
debe exclusivamente al
analito. Los residuos
medidos en dos
columnas diferentes
deben estar dentro de la
escala crtica de
determinaciones
Normalmente la tasa de muestras

con resultados negativos falsos
(error ) en el LA ser < 5%.
Se aplica nicamente a una combinacin especfica de

tcnicas de separacin y deteccin. En lugar de
muestras sin tratar podrn emplearse muestras con un
historial de tratamiento conocido, para analitos
distintos de los aplicados durante el tratamiento. La
madurez de las matrices de la muestra podr afectar
considerablemente la respuesta de la muestra testigo.
Los valores testigo tambin debern comprobarse
CAC/GL 40-1993
Parmetro
Pgina 19 de 41
Niveles

requerido
preferiblemente de fuentes
diferentes. Notificar el
equivalente del analito en la
respuesta del ensayo testigo.
Determinar y notificar la
selectividad () del detector y los
relativos factores de respuesta
(fRR) de analitos representativos
con los detectores especficos
empleados.
.
1.5
Selectividad
de la
separacin
En el LA
Determinar los valores de tRR de

todas las sustancias que deben
analizarse con el mtodo (no slo
los compuestos de referencia).
Cuando se utilizan tcnicas
cromatogrficas sin deteccin
espectomtrica, aplicar principios
de separacin diferentes y/o
determinar los tRR en columnas
de polaridad diferente.
Determinar y notificar la
resolucin (RS) y los factores de
cola (fC) de los valores crticos.
Criterios
Mtodo cuantitativo
cromatogrficas
repetidas.
El valor mximo ms
cercano debe estar
separado del valor
mximo designado del
analito por lo menos por
un ancho entero en el
10% de la altura mxima,
o bien se requiere una
deteccin ms selectiva
de todos los analitos.
Observaciones
Mtodo de cribado
Identificacin provisional de
todas las sustancias sometidas al
anlisis. (No es necesario separar
todos los analitos)
regularmente durante la verificacin del rendimiento

(vase la Seccin 5 infra).
Notificar los valores extremos presentes habitualmente
en los extractos de las muestras testigo. Es preferible
que el NCMB sea 0,3 LA, excepto cuando este
ltimo se haya fijado en el lmite de cuantificacin o en
torno a l.
El ensayo puede realizarse combinndose con la
determinacin del lmite de adopcin de decisiones y
de la capacidad de deteccin, y tambin proporcionar
informacin sobre los tiempos de retencin relativa
(tRR) y fRR de los compuestos.
Alterar las condiciones cromatogrficas si la respuesta
de la muestra testigo interfiere con el analito, o utilizar
un sistema de deteccin alternativo. La combinacin
idnea de detectores selectivos aumenta la
especificidad al crecer la cantidad de informacin sobre
el analito.
A menos que se combinen la separacin
cromatogrfica y la deteccin espectromtrica,
notificar los valores de tRR en columnas de polaridad
diferente, para permitir la separacin (R 1,2 como
mnimo) de todos los analitos sometidos a ensayo.
El ensayo puede combinarse con la determinacin de la
funcin de calibracin y el efecto de la matriz (vase
1.7)
CAC/GL 40-1993
Parmetro
Pgina 20 de 41
Niveles

requerido
1.6
Homogeneida
d del analito
de la muestra
analtica
En el LA
o
residuos
claramente
detectables
Analizar 5 porciones idnticas

de la muestra de ensayo de un
producto representativo de cada
grupo (Cuadro 5), despus del
procesamiento. Determinar el
coeficiente de variacin en el
procesamiento de la muestra
(CVpm) mediante anlisis de la
varianza. Se deber controlar la
homogeneidad del analito con
analitos que se sabe que son
estables
1.7 Estabilidad
del analito en
el procesamiento de la
muestra
En torno
al LA
Enriquecer los productos con

cantidades conocidas de los
analitos antes de procesar la
muestra. Efectuar 5 repeticiones
con cada producto, despus del
procesamiento. Aplicar un
compuesto marcador tericamente
estable junto con los analitos que
se someten al ensayo. Para MRM
y mtodos para grupos especficos
es posible analizar al mismo
tiempo varios analitos que puedan
separarse adecuadamente.
3
4
Criterios
Mtodo cuantitativo
CVpm 10%
Mtodo de cribado
CVpm 15%
Para los mtodos de cribado
puede ser conveniente tomar una
porcin en la que puedan
esperarse residuos ms altos (por
ej. cscara de ctricos) y quizs no
sea necesario lograr la
homogeneidad
No es necesario
especificar la estabilidad
del analito cuando el
promedio de la
recuperacin total del
analito aadido antes del
procesamiento de la
muestra (incluida la
recuperacin del
procedimiento) y el CVA
se hallan dentro de los
lmites especificados en
el Cuadro 3.
Cuantificar la estabilidad
El analito aadido en el NCMB

sigue siendo detectable despus
del procesamiento
Wallace, D. y Kratochvil, B., analytical Chemistry, 59, 1987, 226.

Ambrus, A., Solymosn, E.M. y Korss, I., J. Environ. Sci. and Health, B31, 1996, 443.
Observaciones
Utilizar de preferencia productos con residuos
superficiales estables, o tratar la superficie de una
pequea parte de las unidades naturales (<20%) de la
muestra de laboratorio antes de cortarla o picarla para
representar la peor hiptesis de procesamiento de la
muestra. Procesamiento validado para el empleo con
cualquier procedimiento subsiguiente. Validacin
aplicable a otros productos con propiedades fsicas
similares, e independiente del analito. El ensayo puede
combinarse con la comprobacin de la estabilidad del
analito (vase la Seccin 1.7 de este cuadro).
Determinar la constante de muestreo 3,4 para calcular el
tamao de la porcin analtica necesaria a fin de
satisfacer los criterios de calidad del CV 10%
especificado.
Si el CVL de los residuos no aadidos a la muestra se
encuentra dentro de los lmites especificados en el
Cuadro 2, quizs no sea necesario determinar por
separado el CVpm .
La temperatura de la muestra durante el procesamiento
puede ser crtica. Procesamiento validado para el uso
con cualquier procedimiento subsiguiente. La
validacin puede ser especfica para el analito y/o la
matriz de la muestra. Para comprobar la estabilidad
determinar la recuperacin mediana y el CVL de
compuestos marcadores inestables y estables. Utilizar
estos compuestos en las pruebas internas de calidad
(vase la Seccin 5). Expresar la proporcin entre la
concentracin promedio de los compuestos inestables y
estables para indicar la estabilidad de los residuos. Los
CV de los compuestos estables indicarn tambin la
repetibilidad dentro del laboratorio.
CAC/GL 40-1993
Parmetro
1.8
Eficiencia de
la extraccin
Pgina 21 de 41
Niveles
En el LA
o
residuos
de fcil
medicin

requerido
Analizar 5 porciones idnticas

de muestras o material de
referencia con presencia de
residuos no aadidos. Comparar
el procedimiento de referencia (o
diferente) con el que es objeto del
ensayo.
En caso de MRM es preferible
que los analitos sometidos al
ensayo tengan una vasta gama de
coeficientes de reparto
octanol/agua. Se determinarn
utilizando nicamente los
residuos no aadidos.
Criterios
Mtodo cuantitativo
en caso de que la
recuperacin global y la
recuperacin del
procedimiento difieran
considerablemente
(P=0,05)
Para las muestras con
presencia de residuos no
aadidos, la media de los
resultados obtenidos con
el procedimiento de
referencia y el
procedimiento que es
objeto de la
comprobacin no debe
presentar diferencias
significativas en el nivel
P=0,05, aplicando el
CVL en el clculo. O
bien, el valor de
consenso del material de
referencia y la media de
los residuos no deben
presentar diferencias
significativas en el nivel
de P=0,05 si el clculo se
efecta con el CVA del
mtodo examinado. En
caso de que el CVA del
mtodo sea mayor de
10%, ser necesario
incrementar el nmero de
repeticiones del anlisis
para mantener el error
estndar relativo de la
media <5%. De lo
Observaciones
Mtodo de cribado
Los residuos medios no aadidos

que se sabe que estn presentes en
el lmite de cuantificacin o el
NCMB o en torno a los mismos
son efectivamente detectables en
las muestras.
La temperatura del extracto, la velocidad del mezclador

o Ultra Turrax, el tiempo de extraccin y la proporcin
solvente/agua/matriz pueden influir considerablemente
en la eficiencia de la extraccin. Es posible medir el
efecto de estos parmetros mediante una prueba de
rugosidad. Las condiciones optimizadas deben
mantenerse tan constantes como sea posible.
En general la validacin es aplicable a los productos
pertenecientes a un mismo grupo y los analitos
representados con propiedades fsicas y qumicas
similares. La validacin es independiente de los
procedimientos subsiguientes del mtodo.
La recuperacin promedio de cada mtodo se
determinar a partir de porciones analticas
enriquecidas. Ajustar los resultados a la recuperacin
promedio del anlisis si sta difiere considerablemente
del 100%.
De acuerdo con ciertos reglamentos es necesario
comprobar la capacidad de los equipos de cribado para
detectar un resultado positivo con un 95% de
confianza.
CAC/GL 40-1993
Parmetro
1.9 Estabilidad
del analito
durante el
almacenamiento de la
muestra
Pgina 22 de 41
Niveles
En torno
al LA

requerido
Analizar muestras que acaban de

homogeneizarse y contienen
residuos no aadidos, o bien
homogeneizar y enriquecer
muestras testigo (tiempo 0) y
luego analizar las muestras
almacenadas con arreglo a los
procedimientos habituales del
laboratorio (por lo general a 18C). El tiempo de
almacenamiento debe ser que el
intervalo ms largo previsto entre
el muestreo y el anlisis. Efectuar
5 repeticiones en cada momento
elegido. Cuando las porciones
almacenadas se analizan en 4
ocasiones, examinar 2 porciones
y 1 porcin testigo enriquecida
en el momento del anlisis.
Criterios
Mtodo cuantitativo
contrario se deber
cuantificar y notificar la
eficiencia de la
extraccin (excluyendo
la recuperacin de la fase
analtica despus de la
extraccin).
No hay prdidas
significativas de analito
durante el
almacenamiento
(P=0,005)
Observaciones
Mtodo de cribado
El analito aadido en el nivel de

calibracin ms bajo (NCMB)
sigue siendo detectable despus
del almacenamiento.
El almacenamiento se validar para su uso con

cualquier procedimiento subsiguiente. La validacin es
especfica para el analito. Sin embargo, en general los
datos sobre la estabilidad en el almacenamiento
obtenido con matrices de muestras representativas
podrn considerarse vlidos para matrices similares.
Las matrices se seleccionarn tomando en cuenta la
estabilidad qumica (por ej. hidrlisis) del analito y el
uso previsto de la sustancia. Se encontrar informacin
til sobre la estabilidad en el almacenamiento en las
evaluaciones de la JMPR 5 o la documentacin
presentada para el registro de los compuestos. Notificar
la concentracin inicial del residuo, la concentracin
del residuo restante y la recuperacin del analito en el
procedimiento. Para evitar un almacenamiento
innecesario de las muestras se efectuar una
planificacin cuidadosa del muestreo y el anlisis
consiguiente, por medio de arreglos administrativos
que no forman parte del mtodo de anlisis.
FAO, Residuos de plaguicidas en los Alimentos Evaluaciones, publicado anualmente en la serie de documentos de la FAO: Produccin y proteccin vegetal
CAC/GL 40-1993
Parmetro
Pgina 23 de 41
Niveles

requerido
Criterios
Mtodo cuantitativo
2. Extensin del mtodo validado

2.1 Estabilidad Vase
1.1, 1.2 y
del analito
1.9
durante el
almacenamiento de las
muestras, el
procesamiento, y en
los extractos y
soluciones
estndar
2.2 Funcin de NCMB a Calibracin en tres puntos que
calibracin,
2(3)
comprenden el LA con y sin
efecto de la
veces el
patrones analticos ajustados a la
matriz
LA
matriz
2.3 Exactitud,
precisin, LD,
LC
En el LA
Si se programa por anticipado:

a) Analizar 3 porciones analticas
de matrices de muestras
representativas de inters
enriquecidas en el LA.
Si se encuentran de manera
imprevista:
Enriquecer 2, o preferiblemente 3
porciones adicionales de la
muestra analtica
aproximadamente en el nivel del
nuevo analito. Calcular la
recuperacin del analito aadido.
Utilizar una matriz de una
muestra similar para la prueba de
Observaciones
Mtodo de cribado
Solamente si an no se dispone de informacin sobre la
estabilidad en las condiciones de elaboracin y sobre la
matriz representativa
Para la calibracin lineal:

para las soluciones
analticas estndar (r)
0,99. DE de las
residuales relativas (Sy/x)
0,1
Para la funcin
polinmica (r) 0,98.
Los residuos recuperados
no deben exceder los
lmites de repetibilidad
del mtodo:
3 porciones: Cmx-Cmn
3,3 CVAtpQ
Dos porciones:
Cmx-Cmn2,8*CVAtpQ
CAtp es el coeficiente de
variacin tpico de la
repetibilidad del mtodo
que ha de adaptarse.
Q=recuperacin
promedio del nuevo
analito; debe ajustarse a

coeficiente de regresin (r) 0,98.
DE de las residuales relativas
0,2
Para la funcin polinmica (r)
0,95.
La validacin del mtodo podra no proporcionar

informacin concluyente sobre los efectos de la matriz,
ya que stos cambian con el tiempo, la muestra (a
veces), la columna, etc.
Los analitos aadidos a las

muestras testigo en el nivel de
notificacin estipulado deben ser
mensurables en todos los ensayos.
Utilizar el CVAtp establecido durante la validacin del

mtodo.
El mtodo deber ensayarse nicamente con productos
que representen el uso previsto (uso errneo posible)
del analito.
CAC/GL 40-1993
Parmetro
2.4
Especificidad
y selectividad
de la deteccin
del analito
Pgina 24 de 41
Niveles
En el
NCMB

requerido
recuperacin si no se dispone de
una cantidad suficiente de
muestra analtica.
Identificar mediante
espectrometra de masas o la
combinacin apropiada de las
tcnicas de separacin y deteccin
disponibles.
Si se programa por anticipado:
a) analizar una muestra testigo
representativa de cada grupo de
productos de inters (en los que
sea probable la presencia del
nuevo analito).
Analizar una nueva matriz con
compuestos representativos.
Deteccin imprevista:
b) Comprobar la respuesta de la
muestra testigo (si est
disponible) o demostrar que la
respuesta obtenida corresponde
exclusivamente al analito,
utilizando la mejor tcnica
disponible en el laboratorio.
Comprobar y el fRR de la
deteccin, as como los tRR de
analitos representativos.
Comparar el tRR y la respuesta
del nuevo analito con otros
analitos examinados durante la
validacin del mtodo y con las
respuestas testigo obtenidas
durante la extensin del mismo y
en su validacin previa.
Criterios
Mtodo cuantitativo
lo estipulado en el
Cuadro32.
La respuesta que se mide
se debe exclusivamente
al analito. El sistema de
deteccin utilizado debe
tener un detector de
rendimiento igual o
superior al utilizado en la
validacin del mtodo.
Los residuos medidos en
dos columnas diferentes
deben estar dentro de la
gama crtica de valores
de determinaciones
cromatogrficas
repetidas. La retencin
relativa de los analitos
representativos que se
miden, obtenidos durante
la validacin del mtodo,
debe estar entre el 2%
para la cromatografa en
pelcula delgada y 5%
para la determinacin por
CLAR.
Observaciones
Mtodo de cribado
La proporcin de muestras con

falsos negativos (error ) en el
lmite concertado debe ser <5%.
Si se planea extender el mtodo a un nuevo analito,

habr que comprobar su aplicabilidad para todas las
matrices de muestras representativas en las que la
sustancia pueda estar presente. Si un analito se detecta
de manera imprevista, la prueba de rendimiento podr
efectuarse para la matriz concreta nicamente.
Vase tambin 1.4.
Las respuestas de las muestras testigo no deben
interferir con los analitos que probablemente han de
medirse en la muestra. Notificar los valores mximos
que se detecten habitualmente en los extractos de la
muestra testigo. El ruido de fondo de un extracto de
una matriz nueva debe hallarse dentro de la gama
obtenida para matrices de productos/muestras
representativas.
Si la selectividad de la deteccin no elimina la
respuesta de la matriz, usar una combinacin apropiada
de columnas cromatogrficas que permita separar los
analitos de los valores mximos de la matriz. Vanse
otras opciones en el Cuadro 6.
CAC/GL 40-1993
Parmetro
2.5
Selectividad
de la
separacin
2.6
Eficiencia de
la extraccin
Pgina 25 de 41
Niveles

requerido
Criterios
Observaciones
Vase
1.5
Vase 1.5
Mtodo cuantitativo
Vase 1.5
Mtodo de cribado
Vase 1.5
Vase 1.5. nicamente si no se dispone de informacin
Vase
1.8
Vase 1.8
Vase 1.8
Vase 1.8
Vase 1.8. nicamente si no se dispone de informacin
Ninguna respuesta de
interferencia superior a
0,3 NCMB
interferencia superior a 0,5 AL
Algunos de los problemas ms comunes para la

transferencia de mtodos se relacionan con diferencias
en la seleccin de los reactivos, disolventes y medios
cromatogrficos, o en la capacidad del equipo. Siempre
que sea posible intente confirmar qu materiales y
equipos concretos ha utilizado el elaborador del
mtodo, si tal informacin no se proporciona con el
mtodo o la publicacin recibidos. Cuando el mtodo
ya est funcionando en su laboratorio puede tratar de
efectuar sustituciones.
Podr omitirse esta comprobacin si junto con el
mtodo se proporciona informacin completa sobre la
estabilidad del analito, o si el mtodo reemplaza a otro
que se empleaba anteriormente para el mismo analito y
la informacin sobre la estabilidad del mismo se haba
proporcionado para el mtodo anterior.
Vase 1.2
3. Adaptacin del mtodo validado en otro laboratorio

3.1
Comprobar la solucin testigo y la
Pureza e
aplicabilidad de los ad(ab)
idoneidad de
sorbentes y reactivos.
Efectuar la derivacin con y sin la
las sustancias
muestra.
qumicas,
reactivos y
ad(ab)
sorbentes
3.2 Estabilidad
del analito en
extractos y
soluciones
estndar
Vase
1.10
Vase 1.1
Vase 1.1
Vase 1.1
3.3 Funcin de
calibracin
Efecto de la
matriz
NCMB a
2(3)
veces el
LA
Comprobar las funciones de

respuesta de analitos
representativos incluidos en el
mtodo y 3 niveles del analito
ms el testigo. Para la respuesta
no lineal, determinar la curva de
respuesta en 7 niveles y 3
repeticiones.
Comprobar el efecto de la matriz
con analitos y matrices
representativos.

de soluciones analticas
estndar (r) 0,99. DE de
las residuales relativas
(Sy/x) 0,1.
Para la funcin
polinmica (r) 0,98.

coeficiente de regresin (r) 0,98.
DE de las residuales relativas
0,2. Para la funcin polinmica
(r) 0,95.
CAC/GL 40-1993
Pgina 26 de 41
Parmetro
Niveles

requerido
3.4 Escala
analtica
Exactitud y
precisin,
lmite de
deteccin,
lmite de
cuantificacin
Extracto
testigo o
LA
3.5
Especificidad
y selectividad
de la deteccin
del analito
En el LA
3.6
Homogeneid
ad del analito
En torno
al LA o
residuos
claramente
detectabl
es
Analizar combinaciones de
analitos/matrices representativos:
5 porciones analticas de cada
una de las muestras testigo
enriquecidas en 0 y el LA, y tres
porciones enriquecidas en 2 LA.
Las pruebas de recuperacin
deben repartirse entre los analistas
que usarn el mtodo y los
instrumentos que participarn en
el anlisis.
Comprobar las caractersticas de
rendimiento de los detectores
utilizados y compararlas con las
especificadas en el mtodo.
Comprobar la respuesta de un
testigo de cada producto
representativo, o bien realizar la
prueba como se describe en la
seccin 1.4.
Analizar dos productos
representativos de naturaleza
diferente
3.7 Estabilidad
del analito en
extractos y
soluciones
estndar
Vase
1.1
Vase 1.1
Criterios
Observaciones
Mtodo cuantitativo
La recuperacin
promedio y el CVA
deben estar dentro de los
lmites indicados en el
Cuadro 3.
Mtodo de cribado
Todas las recuperaciones sern
detectables en el NCMB.
Materiales de referencia en el LA:
analito detectado.
La respuesta que se mide

se debe nicamente al
analito. El rendimiento
del detector (sensibilidad
y selectividad) debe ser
igual o mejor que el
especificado en el
mtodo. Vase la seccin
1.4
CVpm <10%
La proporcin habitual de
muestras con falsos negativos
(error ) en el LA debe ser <5%.
La respuesta relativa de los detectores especficos

puede variar considerablemente de un modelo a otro.
Una comprobacin apropiada de la especificidad de la
deteccin es fundamental para obtener resultados
fiables. Comparar la respuesta testigo observada con
los valores mximos tpicos notificados en extractos
testigo. Vanse otras observaciones en la seccin 1.4
CVpm <15%
Para los mtodos de cribado
puede ser conveniente tomar una
porcin en la que puedan
esperarse los residuos ms altos
(por ej. cscaras de ctricos), y
quizs no sea necesario lograr la
homogeneidad
Vase 1.1
Las pruebas se efectan para confirmar la analoga de

las condiciones de aplicacin y la aplicabilidad de los
parmetros obtenidos mediante la validacin del
mtodo en el laboratorio. Cuando el ensayo indica
CVpm similares, las condiciones de procesamiento de la
muestra podrn considerarse anlogas y no se
requerirn otros ensayos para la validacin del mtodo.
Vase 1.1
Vanse las observaciones en 1.3.
Esta comprobacin podr omitirse si junto con el

mtodo se proporciona informacin completa sobre la
estabilidad del analito o bien el mtodo sustituye a otro
utilizado previamente para el mismo analito y la
informacin sobre la estabilidad del mismo se ha
proporcionado para el mtodo anterior.
CAC/GL 40-1993
Pgina 27 de 41
Cuadro 3. Criterios para validar en el laboratorio los mtodos de anlisis de residuos de plaguicidas
Concentracin
Repetibilidad
Reproducibilidad
Fidelidad2,
CVA% 3
CVL%4
CVA% 3
CVL%4
Escala de porcentajes
medios de recuperacin
1 g/kg
35
36
53
54
50120
> 1 g/kg 0,01 mg/kg
30
32
45
46
60120
> 0,01 mg/kg 0,1 mg/kg
20
22
32
34
70120
> 0,1 mg/kg 1 mg/kg
15
18
23
25
70110
10
14
16
19
70110
> 1 mg/kg
1.
En el caso de los mtodos para residuos mltiples, podr haber ciertos analitos para los que no pueden
cumplirse estrictamente estos criterios cuantitativos de rendimiento. La aceptabilidad de los datos
producidos en estas condiciones depender de la finalidad de los anlisis; por ejemplo, al comprobar el
cumplimiento de los LMR los criterios indicados debern respetarse en la medida en que sea
tcnicamente posible, mientras que todos los datos muy inferiores al LMR podrn ser aceptables con
la incertidumbre ms elevada.
2.
Estas escalas de recuperacin son apropiadas para los mtodos aplicables a residuos mltiples. Para
ciertos fines se requerirn criterios ms estrictos, como en el caso de los mtodos para analitos
indivuales o residuos de medicamentos veterinarios (vase Codex Vol. 3, 1996).
3.
CVA: Coeficiente de variacin para el anlisis, excluido el procesamiento de la muestra. El parmetro

puede calcularse a partir de ensayos efectuados con materiales de referencia o porciones analticas
enriquecidas antes de la extraccin. En ausencia de materiales de referencia certificados se podr
emplear un material de referencia preparado en el laboratorio.
4.
CVL: Coeficiente global de variacin del resultado en un laboratorio, que permite hasta un 10% de
variabilidad de los residuos entre las porciones analticas (CVSp ). Nota: La variabilidad de los residuos
entre porciones analticas puede calcularse a partir de la incertidumbre de la medicin de porciones
repetidas de muestras (CVL) que contienen los residuos: CVL2= CVSp 2+CVA 2
CAC/GL 40-1993
Pgina 28 de 41
Cuadro 4. Requisitos para la verificacin del rendimiento

Parmetro
Niveles

requerido
4. Control de calidad (verificacin del rendimiento)

4.1 Mtodos empleados regularmente
4.1.1
Para cada nuevo lote:
Idoneidad de
comprobacin de la solucin
las sustancias
testigo, aplicabilidad de los
qumicas,
ad(ab)- sorbentes y reactivos.
absorbentes y
Efectuar la derivacin sin muestra
reactivos
4.1.2
Se podr utilizar la calibracin en
Calibracin y
un solo punto con mezclas
escala
estndar si la interseccin de la
analtica
funcin de calibracin es cercana
a 0.
Aplicar calibracin en puntos
mltiples (3x2) para la
confirmacin cuantitativa.
4.1.3
Exactitud y
precisin
Dentro
de la
escala
analtica
Incluir en cada lote analtico 1

una muestra enriquecida con
mezcla estndar, o efectuar un
nuevo anlisis en una porcin
idntica de una muestra positiva.
Criterios
Observaciones
Mtodo cuantitativo
Mtodo de cribado
interferencia 0,3
NCMB.
interferencia 0,5 LA.
Como alternativa, en caso de que la prueba con

solucin testigo, la calibracin y la recuperacin sean
satisfactorias se confirmar la idoneidad de los
reactivos, etc.
Se puede considerar que

el lote analtico se halla
bajo control estadstico si
se inyectan
alternativamente las
soluciones estndar y
extractos de la muestra y
la DE de residuales
relativas es 0,1.
El analito se detecta en el NCMB.
La solucin estndar y las muestras deben inyectarse

alternativamente.
El escalonamiento con inyecciones del compuesto tipo
apropiado puede ser una alternativa a la calibracin en
puntos mltiples que permite ahorrar tiempo, sobre
todo si no se dispone de un muestreador automtico.
Puesto que la respuesta del sistema cambia
frecuentemente, la calibracin en puntos mltiples debe
efectuarse peridicamente para confirmar que la
interseccin es cercana a cero. No se requerir
calibracin en puntos mltiples para la confirmacin
cuantitativa si el calibrante tiene una concentracin
muy similar a la de la muestra.
Enriquecer la porcin analtica con mezcla o mezclas
estndar. Alterar las mezclas estndar en distintos lotes
para obtener las recuperaciones de todos los analitos de
inters a intervalos regulares. Efectuar alternativamente
estudios de recuperacin en el LA, en el NCMB y en el
doble del LA, segn proceda, para confirmar la
aplicabilidad del mtodo dentro de la escala analtica.
La frecuencia de los estudios de recuperacin en el LA
debe ser dos o tres veces mayor que en otros niveles.
El rendimiento del detector y la columna cromatogrfica

deber ser igual o mejor que el especificado en el mtodo.
Es preferible que todas las recuperaciones se mantengan
dentro del lmite de control del grfico de control diseado
con arreglo a la seccin 4.5.2. Durante una utilizacin
prolongada una de cada 20 o 100 muestras puede exceder los
lmites de control y de adopcin de medidas, respectivamente.
Habr que repetir el lote de anlisis si cualquiera de las
recuperaciones excede los lmites de adopcin de medidas, o
si los resultados de anlisis repetidos de la muestra positiva
exceden la gama de valores crticos.
Cmx- Cmn > 2.8*CVLtpQ
Q es el residuo promedio obtenido de las mediciones
Anlisis reiterados de muestras positivas pueden

sustituir la prueba de recuperacin en un lote particular.
Para los MRM preparar mezclas estndar especficas
CAC/GL 40-1993
Parmetro
Niveles
Pgina 29 de 41

requerido
Criterios
repetidas, mientras que el CVLtp da la medida de la
reproducibilidad dentro del laboratorio, que incluye la
incertidumbre combinada del procesamiento y el anlisis de la
muestra.
4.1.4
Selectividad
de la
separacin,
especificidad
de la
deteccin,
rendimiento
de los
detectores
Incluir en cada lote de

cromatografa una mezcla
apropiada para la prueba de
deteccin. Incluir en el lote
analtico el producto no tratado (si
est disponible). Aadir solucin
estndar si no se dispone de
muestras sin tratar (similares a las
analizadas en el lote).
Confirmar la identidad y cantidad
de cada analito presente en un
nivel de 0,7 LA.
Los valores de Rs y fC de
los compuestos
sometidos al ensayo, as
como el fRR y el valor
de la deteccin, deben
estar comprendidos en la
escala especificada.
La retencin relativa no
debe exceder el 2 % en la
CGL y el 5 % en las
determinaciones
mediante CLAR. El
rendimiento del detector
debe hallarse dentro de
los lmites especificados.
No debe haber sustancias
coextractivas de la
muestra que interfieran
con el analito en un nivel
0,3 NCMB. La
recuperacin de la
solucin aadida no debe
El rendimiento del detector debe

hallarse dentro de los lmites
especificados. El analito debe
observarse por encima del NCMB
o CC para los compuestos
prohibidos.
Observaciones
del producto/muestra a partir de los analitos que
pueden estar presentes en una muestra particular. La
seleccin de analitos para una mezcla debe garantizar
una separacin/deteccin selectiva exenta de
problemas.
Para la identificacin provisional: preparar lotes
analticos que contengan la mezcla apropiada para el
ensayo de deteccin, y las muestras.
Para la determinacin/confirmacin cuantitativa incluir
en el lote analtico la mezcla del ensayo de deteccin,
un nmero apropiado de mezclas de calibracin, una o
ms muestras testigo enriquecidas, o bien una muestra
positiva repetida y las nuevas muestras positivas.
Inyectar alternativamente las soluciones estndar y las
muestras.
sta se denomina tambin, a veces, prueba de
idoneidad del sistema. Preparar la mezcla de la
prueba de deteccin para cada mtodo de deteccin.
Seleccionar los componentes de la mezcla a efectos de
indicar los parmetros caractersticos de la separacin
cromatogrfica y la deteccin.
Ajustar la base de datos de la retencin relativa para los
compuestos de la mezcla de la prueba de deteccin y
los analitos empleados en la calibracin. Definir el
valor de fRR especfico del sistema de deteccin.
Efectuar la confirmacin cuantitativa con solucin
analtica preparada en extracto de la matriz testigo si el
efecto de la matriz es significativo.
CAC/GL 40-1993
Parmetro
4.1.5
Homogeneidad del
analito en la
muestra
procesada
Niveles
En una
concentracin
del
analito
claramente
detectable.
Pgina 30 de 41

requerido
Seleccionar al azar una muestra

positiva. Repetir el anlisis en una
o dos porciones analticas ms.
Criterios
exceder los lmites
aceptables de
recuperacin del analito.
Los residuos medidos en dos das diferentes no deben exceder
el lmite de reproducibilidad de las porciones analticas
repetidas:
Cmx- Cmn 2.8*CVLtpQ
repetidas; CVLtp es la incertidumbre combinada del
procesamiento y anlisis de la muestra obtenida durante la
validacin del mtodo.
4.1.6
Eficiencia de
la extraccin
4.1.7
Duracin del
anlisis
Las muestras, extractos etc. no deben almacenarse durante un

perodo ms prolongado que el adoptado durante la validacin
del mtodo para comprobar la estabilidad en el
almacenamiento. Se debern controlar y registrar con
regularidad las condiciones de almacenamiento.
4.2 Analito detectado ocasionalmente

APLICAR LAS PRUEBAS DESCRITAS EN 4.1, CON LAS SIGUIENTES
EXCEPCIONES:
4.2.1
En el LA Volver a analizar otra porcin
Los residuos medidos en dos das diferentes deben estar
Exactitud y
o en
analtica.
comprendidos en la siguiente zona crtica:
precisin
torno a l Recurrir a la adicin de solucin
Cmx- Cmn 2.8*CVLtpQ
estndar en el nivel del analito
medido.
repetidas, mientras que CVLtp se obtiene durante la validacin
del mtodo.
La recuperacin tras la adicin de solucin estndar no debe
exceder los lmites de adopcin de medidas.
4.3 Mtodos empleados a intervalos irregulares
Aplicar las pruebas descritas en 4.1, con las siguientes excepciones:
4..3.1
En el LA Incluir en cada lote analtico una
Dos recuperaciones como mnimo deben estar dentro del
Exactitud y
y el
muestra enriquecida en el NCMB lmite de control; una puede estar dentro del lmite de
Observaciones
Efectuar el ensayo en forma alternada para cubrir todos

los productos analizados. Comprobar la homogeneidad
al principio del perodo vegetativo, o al comenzar el
anlisis del tipo de muestra considerado.
Los resultados aceptables de la prueba tambin
confirman que era apropiada la reproducibilidad de los
anlisis (CVA).
La eficiencia de la extraccin no puede controlarse
durante el anlisis. Para asegurar una eficiencia
apropiada, el procedimiento de extraccin validado
debe llevarse a cabo sin cambios.
En el Cuadro 2 se proporcionan ejemplos de la
necesidad de pruebas de estabilidad adicionales.
Comprobar la exactitud si se detectan residuos 0,5

LA.
Los resultados aceptables prueban tambin la

idoneidad de las sustancias qumicas, adsorbentes y
CAC/GL 40-1993
Parmetro
Niveles
precisin
(repetibilidad)
NCMB
Pgina 31 de 41

requerido
y dos muestras en el LA. Recurrir
a la adicin de solucin estndar
si no se dispone de una muestra
no tratada (similar a las analizadas
en el lote).
Efectuar el anlisis en 2
porciones analticas.
4.4. Cambios en la aplicacin del mtodo

Cambio
Parmetros que deben comprobarse
4.4.1
Comprobar la selectividad de la separacin,
Columna
resolucin, calidad de inerte, valores de tRR.
cromatogrfic
a
4.4.2 Equipo
Homogeneidad de la muestra procesada;
de
estabilidad de los analitos.
procesamiento
de las
muestras
4.4.3 Equipo
Comparar los residuos no aadidos que se
de extraccin
detectan con el equipo viejo y con el nuevo en
5 repeticiones.
4.4.4
Comprobar la selectividad de la separacin y
Deteccin
la selectividad y sensibilidad de la deteccin
Criterios
adopcin de medidas.
Los residuos medidos en las porciones repetidas deben estar
dentro de la siguiente zona crtica:
Cmx- Cmn 2.8*CVLtpQ or Cmx- Cmn f(n)*CVLtpQ
repetidas; el CVLtp se obtiene durante la validacin del
mtodo; f(n) es el factor de clculo de la zona extrema, que
depende del nmero de muestras repetidas.
Observaciones
reactivos empleados.
Confirmar los residuos superiores a 0,5 LA.
Si no se satisfacen los criterios de rendimiento, el
mtodo se pondr en prctica y sus caractersticas de
rendimiento (Q, CVAtp, CVLtp) volvern a establecerse
durante su revalidacin parcial.
Mtodos de ensayo y criterios de aceptabilidad: vanse las secciones correspondientes del Apndice 1.
Las caractersticas de rendimiento no deben verse afectadas.
Aplicar mezclas de ensayo apropiadas para obtener
informacin sobre el rendimiento de la columna.
Se realizarn las pruebas descritas en 1.6 y 1.7, que deben dar
resultados conformes a los criterios pertinentes.
La media de los residuos no debe presentar diferencias

significativas en el nivel p=0,05.
Slo se requiere la prueba de homogeneidad cuando el

grado de desmenuzamiento y/o mezcla es inferior al
del equipo original. Ser necesario comprobar la
estabilidad de los analitos si el tiempo y la temperatura
de procesamiento aumentan considerablemente.
La prueba es necesaria si se utiliza un nuevo tipo de
equipo.
Las caractersticas de rendimiento deben ser iguales o mejores

que las especificadas en la descripcin del mtodo
Comprobar tambin por separado la detectabilidad con

los nuevos reactivos empleados en la deteccin
CAC/GL 40-1993
Parmetro
4.4.5 Analista
4.4.6
Laboratorio
Niveles

requerido
5 pruebas de recuperacin en cada nivel
(NCMB, LA y 2 (3) LA); analizar nuevamente
una muestra testigo y dos muestras positivas
(desconocidas para el analista)
Exactitud y precisin 3 pruebas de

recuperacin en cada nivel (NCMB, LA y 2
(3) LA) a cargo de (diferentes) analistas en
das distintos.
Pgina 32 de 41
Criterios
Todos los resultados deben estar dentro de los lmites de
control especificados para el mtodo en el laboratorio. Los
anlisis de muestras repetidas deben dar valores comprendidos
en la zona crtica
Todos los resultados deben estar dentro de los lmites de

control especificados para el mtodo en el laboratorio
Observaciones
Se trata de un requisito mnimo. Laboratorios que
trabajan con residuos en ciertas reas emplean un
protocolo ms detallado, que incluye: 1) el trazado de
una curva estndar dentro de los criterios de
aceptabilidad; 2) la realizacin de dos anlisis, como
mnimo, para cada matriz que contenga analitos
representativos enriquecidos por el analista a tres
niveles como mnimo en el duplicado; 3) la realizacin
de un anlisis, como mnimo, con muestras
enriquecidas o con residuos no aadidos, tres niveles
en el duplicado, desconocidas para el analista. Todos
los resultados deben satisfacer los criterios de
aceptabilidad, o bien repetirse.
Se deber establecer la reproducibilidad del mtodo en
las nuevas condiciones; esto debe hacerlo ms de un
analista, si est disponible.
CAC/GL 40-1993
Pgina 33 de 41
Cuadro 5. Productos/muestras representativos para la validacin de procedimientos analticos para

residuos de plaguicidas
Grupo de Propiedades comunes
producto
s
Productos vegetales
I.
Elevado contenido de
agua y clorofila
Clase de productos 6
Hortalizas brasicceas de
hoja
Hortalizas de hoja
Hortalizas leguminosas
espinaca o lechuga
brcoles, col, berza comn
frijoles verdes
II.
agua y contenido escaso o
ausencia de clorofila
Frutas pomceas
Frutas de hueso
Bayas
Frutas pequeas
Hortalizas de fruto
Races
III.
cido
Frutos ctricos
manzana, pera
melocotn (durazno), cerezas
fresa
uva
tomate, pimiento morrn, meln
hongos comestibles
patata, zanahoria, perejil
naranja, limn
IV.
azcar
aceite o grasa
V.
Especies representativas
uvas pasas, dtiles

Semillas oleaginosas
Nueces
aguacate (palta), semilla de

girasol
nuez de nogal, pacanas, pistachos
VI.
Materiales secos
Cereales
Productos de cereales
Productos que requieren

una prueba individual
trigo, arroz o maz en grano

salvado de trigo, harina de maz
p. ej., ajo, lpulo, t, especias,
arndanos
Productos de origen animal

Carnes
Despojos comestibles
Grasa
Leche
Huevos
Carne de bovino, carne de aves

Hgado, rin
Grasa de carne
Leche de vaca
Huevos de gallina
Nota: El mtodo debe validarse con plaguicidas representativos de cada grupo de productos. Los productos
difciles de analizar requerirn pruebas individuales.
CAC/GL 40-1993
Pgina 34 de 41
Cuadro 6. Ejemplos de mtodos de deteccin idneos para anlisis de confirmacin de sustancias

Mtodo de deteccin
Criterio
CL o CG y espectrometra de masas
Si se controla un nmero suficiente de iones de diagnstico
CL-DAD o exploracin mediante UV
Si el espectro UV es caracterstico
CL - fluorescencia
Combinado con otras tcnicas
2-D cromatografa en capa fina (espectrometra)
CG-DCE, DNF, DF
Slo si se combina con dos o ms tcnicas de separacin1
Derivacin
Si no es el mtodo de primera opcin
CL- inmunograma
CL-UV/VIS (una sola longitud de

onda)
1. Otros sistemas cromatogrficos (aplicando fases estacionarias o mviles diferentes) u otras tcnicas.
CAC/GL 40-1993
Pgina 35 de 41
GLOSARIO
Lmite aceptado (LA)
Valor de concentracin de un analito que corresponde a un lmite

reglamentario o valor de referencia que constituye la finalidad del
anlisis, por ej. LMR, LMP, norma comercial, lmite de concentracin
(evaluacin de la exposicin diettica), nivel de aceptacin (medio
ambiente), etc. Para una sustancia que no tiene LMR o est prohibida
puede no existir un LA (por ser ste igual a 0 o porque no hay lmite
alguno), o el LA puede ser la concentracin por encima de la cual es
necesario confirmar los residuos detectados (lmite de adopcin de
medidas o lmite administrativo).
Exactitud
Grado de conformidad entre el resultado de una prueba y el valor de

referencia aceptado.
Error alfa ()
Probabilidad de que la concentracin efectiva del analito en la muestra

de laboratorio sea inferior a un valor particular (por ej. el LA) cuando
las mediciones efectuadas en una o ms porciones analticas/de ensayo
indican que la concentracin supera ese valor (falso positivo).
Habitualmente los valores aceptados de esta probabilidad son del orden
del 1 al 5%.
Analito
La sustancia qumica buscada o determinada en una muestra.
Homogeneidad del analito (en la Uniformidad o dispersin del analito en la matriz. La variabilidad de
los resultados analticos derivados del procesamiento de la muestra
muestra)
depende del tamao de la porcin analtica. La constante de muestreo 7
describe la relacin entre el tamao de la porcin analtica y la
variacin prevista en una muestra analtica adecuadamente mezclada:
KS = w (CVpm) 8 , donde w es la masa de la porcin analtica y CVpm es
el coeficiente de variacin de la concentracin del analito en las
porciones analticas repetidas de w (g) que se retiran de la muestra
analtica.
Porcin analtica
Una cantidad representativa de material extrado de la muestra analtica,

de tamao adecuado para medir la concentracin del residuo.
Muestra analtica
El material preparado para el anlisis a partir de la muestra de

laboratorio separando la parte del producto que ha de analizarse y luego
mezclndola, triturndola, picndola finamente, etc., para extraer
porciones analticas con un error de muestreo mnimo.
Aplicabilidad
Los analitos, matrices y concentraciones para los que se ha demostrado

que un mtodo de anlisis es satisfactorio.
Error ()
Probabilidad de que la concentracin efectiva del analito en la muestra

de laboratorio sea superior a un valor particular (por ej. el LA) cuando
las mediciones efectuadas en una o ms porciones analticas indican
que la concentracin no excede ese valor (falso negativo). Por lo
general los valores aceptados de esta probabilidad van de 1 a 5%.
7
8
Wallace, D. y Kratochvil, B., Analytical Chemistry, 59, 226-232, 1987

Ambrus, A., Solymosn, E.. y Korss, I. J. Environ. Sci. Health, B31, (3) 1996
CAC/GL 40-1993
Pgina 36 de 41
Sesgo
Diferencia entre el valor mediano de la medicin para un analito y un

valor de referencia aceptado para la muestra. El sesgo es el error
sistemtico total, en contraposicin al error aleatorio. Puede haber uno
o ms componentes de errores sistemticos que contribuyen al sesgo.
Una diferencia sistemticamente mayor con respecto al valor de
referencia aceptado se traduce en un valor ms elevado del sesgo.
Grupo de productos
Grupos de alimentos o piensos con suficientes caractersticas qumicas

comunes que los hacen similares a efectos de su anlisis por un mtodo.
Las caractersticas pueden basarse en sus componentes principales (por
ej. agua, grasa, azcar, cidos) o en relaciones biolgicas, y pueden
estar definidas por la reglamentacin.
Mtodo de confirmacin
Mtodos que proporcionan una informacin completa o

complementaria que permite identificar el analito con un grado
aceptable de certidumbre [en el lmite aceptado o el nivel de inters].
En la medida de lo posible los mtodos de confirmacin proporcionan
informacin sobre el carcter qumico del analito, utilizando
preferiblemente tcnicas espectromtricas. Si una tcnica particular no
posee suficiente especificidad, la confirmacin podr efectuarse
mediante procedimientos adicionales que consisten en combinaciones
idneas de purificacin, separacin cromatogrfica y deteccin
selectiva. Los bioensayos tambin pueden proporcionar algunos datos
de confirmacin.
Adems de la confirmacin de la identidad de un analito, tambin se
deber confirmar su concentracin. Esto podr lograrse analizando una
segunda porcin de ensayo y/o volviendo a analizar la porcin de
ensayo inicial con un mtodo alternativo apropiado (por ej. columna y/o
detector diferente). La confirmacin cuantitativa y cualitativa tambin
podr efectuarse con el mismo mtodo, cuando sea apropiado.
Lmite de adopcin de
decisiones
(CC)
Lmite en el cual se podr decidir que la concentracin del analito

presente en una muestra efectivamente excede el lmite con una
probabilidad de error de (falso positivo). En el caso de sustancias con
LA igual a cero, el CC es el nivel de concentracin ms bajo en el que
un mtodo puede discriminar con una probabilidad estadstica de 1 -
la presencia del analito identificado. El CC es equivalente al lmite de
deteccin (LD) de acuerdo con algunas definiciones (habitualmente
para = 1%).
En el caso de sustancias con LA establecido, el CC es el valor de
medicin de la concentracin por encima del cual se puede decidir, con
una probabilidad estadstica de 1 - , que el contenido del analito
identificado efectivamente es superior al LA.
CAC/GL 40-1993
Capacidad de deteccin (CC)
Pgina 37 de 41
La concentracin efectiva del analito ms baja que se puede detectar,

identificar y cuantificar en una muestra con un error beta (falso
negativo). En el caso de sustancias prohibidas el CC es la
concentracin ms baja a la que un mtodo est en condiciones de
determinar el analito en muestras contaminadas con una probabilidad
estadstica de 1 - . En el caso de sustancias con LMR establecido, CC
es la concentracin a la que el mtodo est en condiciones de detectar
las muestras que exceden este LMR con una probabilidad estadstica de
1 - .
Cuando se aplica al nivel de concentracin ms bajo que puede
detectarse la finalidad de este parmetro es proporcionar una
informacin equivalente al lmite de cuantificacin (LC), pero el CC
se asocia siempre con una probabilidad estadstica especificada de
deteccin y por ello se prefiere con respecto al LC.
Mezcla de ensayo de deteccin
Mezcla de soluciones analticas estndar apropiada para comprobar las

condiciones de separacin y deteccin cromatogrfica. La mezcla de
ensayo de deteccin debe contener analitos que proporcionen
informacin sobre la selectividad y los factores de respuesta de los
detectores, la calidad de inerte (por ej. caracterizada por el factor de
cola fC) y la capacidad de separacin (resolucin, Rs) de la columna,
as como sobre la reproducibilidad del tRR. La mezcla de ensayo de
deteccin podr ser especfica para cada columna y detector.
Falso resultado negativo
Vase error beta
Falso resultado positivo
Vase error alfa.
Mtodo especfico para un grupo

de compuestos
Mtodo destinado a detectar substancias que tienen una fraccin comn

o una estructura qumica similar, por ejemplo cidos acticos fenoxi,
ditiocarbamatos, metilcarbamatos
Residuo no aadido
Residuos de un analito que han entrado en una matriz por la va prevista

habitualmente para las trazas de la sustancia, en contraposicin al
enriquecimiento de muestras en el laboratorio. Tambin: residuo
meteorizado.
Mtodo individual
Mtodo idneo para determinar uno o ms compuestos especificados.

Se podr necesitar un mtodo individual separado, por ejemplo, para
determinar algunos metabolitos incluidos en la definicin del residuo de
un plaguicida o medicamento veterinario particular.
Muestra de laboratorio
La muestra tal como se recibe en el laboratorio (sin incluir el

envasado).
Lmite de deteccin (LD)
Concentracin ms pequea en la que puede identificarse el analito. Se

define habitualmente como la concentracin mnima del analito en la
muestra objeto del ensayo que puede medirse con una probabilidad
establecida de que el analito est presente en una concentracin
superior a la de la muestra testigo. La UIPQA y la ISO han
recomendado la abreviacin LD. Vase tambin Lmite de adopcin de
decisiones.
Lmite de cuantificacin (LC)
Concentracin ms pequea del analito que es posible cuantificar. Se

define habitualmente como la concentracin mnima del analito en la
muestra objeto del ensayo que puede determinarse con precisin
(repetibilidad) y exactitud aceptables en las condiciones establecidas
del ensayo. Vase tambin Capacidad de deteccin.
CAC/GL 40-1993
Pgina 38 de 41
Nivel calibrado ms bajo

(NCMB)
Concentracin ms baja del analito detectada y medida en la calibracin

del sistema de deteccin. Puede expresarse como concentracin de la
solucin en la muestra objeto del ensayo o como masa, y no debe
incluir la contribucin del testigo.
Matriz
Material o componente muestreado para estudios analticos, excluido el

analito.
Matriz testigo
Material de la muestra que no contiene niveles detectables de los

analitos de inters.
Calibracin ajustada a la matriz
Calibracin que utiliza soluciones estndar preparadas en un extracto

del producto analizado (o de un producto representativo). El objetivo es
compensar los efectos de las sustancias coextractivas en el sistema de
determinacin. stos son a menudo imposibles de predecir, pero el
ajuste a la matriz puede ser innecesario si se demuestra que los efectos
de las sustancias coextractivas son insignificantes.
Mtodo
La serie de procedimientos aplicados desde la recepcin de una muestra

para su anlisis hasta la produccin del resultado final.
Validacin del mtodo
Proceso mediante el cual se verifica que el mtodo es idneo para la

finalidad prevista.
Mtodo para residuos mltiples,

MRM
Mtodo idneo para identificar y cuantificar una gama de analitos, por

lo general en diversas matrices diferentes.
Resultado negativo
Un resultado que indica que el analito no est presente en el nivel

calibrado ms bajo o en un nivel superior (vase tambin Lmite de
deteccin)
Verificacin del rendimiento
Series de datos de control de calidad generados durante el anlisis de

lotes de muestras para respaldar la validez de los anlisis en curso. Los
datos pueden emplearse para afinar los parmetros de rendimiento del
mtodo.
Resultado positivo
Un resultado que indica la presencia del analito con una concentracin

igual o superior al nivel calibrado ms bajo.
Precisin
Grado de conformidad entre resultados de ensayos independientes

obtenidos en ciertas condiciones estipuladas.
Mtodo cuantitativo
Un mtodo capaz de producir resultados, expresados como valores

numricos en unidades apropiadas, con exactitud y precisin idneas
para la finalidad prevista. El grado de precisin y exactitud debe
ajustarse a los criterios especificados en el Cuadro 3.
Recuperacin
Fraccin o porcentaje de un analito que se recupera tras la extraccin y

el anlisis de una muestra testigo a la que se ha aadido el analito en
una concentracin conocida (muestra enriquecida o material de
referencia).
Ensayo con solucin testigo
Anlisis completo efectuado sin incluir materiales de la muestra para

fines de control de calidad.
Material de referencia
Material o materiales en que las concentraciones del analito son

suficientemente homogneas y claras como para emplearse en la
evaluacin de un mtodo de medicin, o para asignar valores a otros
materiales. En el contexto de este documento el trmino material de
referencia no se refiere a los materiales empleados para calibrar los
aparatos.
CAC/GL 40-1993
Pgina 39 de 41
Mtodo de referencia
Mtodo analtico cuantitativo de fiabilidad probada que se caracteriza

por tener exactitud, especificidad, precisin y capacidad de deteccin
conocidas. Por lo general estos mtodos han sido objeto de estudios en
colaboracin, y suelen basarse en la espectrometra molecular. La
condicin de mtodo de referencia vale nicamente si el mtodo se
aplica dentro del rgimen apropiado de garanta de la calidad.
Procedimiento de referencia
Procedimiento de eficacia establecida. Si no est disponible, podr

adoptarse como procedimiento de referencia un procedimiento que en
teora se considere sumamente eficaz y que sea fundamentalmente
distinto del que es objeto del ensayo.
Repetibilidad
Precisin en condiciones de repetibilidad, es decir, condiciones en las

que se obtienen resultados de ensayos independientes mediante la
aplicacin del mismo mtodo en porciones analticas repetidas, en el
mismo laboratorio, a cargo del mismo analista y utilizando el mismo
tipo a intervalos de tiempo breves. (ISO 3534-1)
Analito representativo
Analito elegido para representar un grupo de analitos que

probablemente tendrn un comportamiento similar al aplicar un mtodo
de anlisis para residuos mltiples, como se deduce por sus propiedades
fsico-qumicas como estructura, hidrosolubilidad, Kow, polaridad,
volatilidad, estabilidad hidroltica, pKa, etc.
Analito representado
Analito con propiedades fsico-qumicas que forman parte de la gama

de propiedades de los analitos representativos.
Reproducibilidad
Grado de conformidad entre los resultados obtenidos con el mismo

mtodo en porciones analticas idnticas, por distintos analistas que
utilizan diferentes equipos (reproducibilidad dentro del laboratorio).
Anlogamente, cuando los ensayos se efectan en laboratorios
diferentes se obtiene la reproducibilidad entre laboratorios.
Producto representativo
Alimento o pienso utilizado para representar un grupo de productos a

los efectos de la validacin del mtodo. Un producto podr considerarse
representativo sobre la base de la composicin inmediata de la muestra,
por ejemplo contenido de agua, grasa/aceite, cido, azcar y clorofila o
por analogas biolgicas de los tejidos, etc.
Rugosidad
Capacidad de un proceso de medicin qumica de resistir a los cambios

en los resultados del ensayo cuando se producen cambios menores en
las variables ambientales y de procedimiento del mtodo, los
laboratorios, el personal, etc.
Preparacin de la muestra
Procedimiento empleado, cuando es necesario, para convertir la

muestra de laboratorio en muestra analtica, eliminando aquellas partes
(tierra, piedras, huesos, etc.) que no deben incluirse en el anlisis.
Procesamiento de la muestra
Procedimiento (s) (por ej. cortar, triturar, mezclar) empleado para dar a
la muestra analtica una homogeneidad aceptable con respecto a la
distribucin del analito antes de extraer la porcin analtica. El
componente de procesamiento en la preparacin de la muestra debe
disearse de tal modo que se evite inducir cambios en la concentracin
del analito.
CAC/GL 40-1993
Pgina 40 de 41
Mtodo de cribado
Mtodo empleado para detectar la presencia de un analito o una clase

de analitos en un nivel igual o superior a la concentracin mnima de
inters. Debe estar diseado para evitar resultados negativos falsos en
un nivel de probabilidad especificado (generalmente = 5%). Es
posible que sea necesario confirmar los resultados cualitativos positivos
mediante mtodos de referencia o de confirmacin. Vase Lmite de
adopcin de decisiones y Capacidad de deteccin.
Selectividad
Grado de probabilidad de que el analito se distinga de otros

componentes de la muestra, ya sea por separacin (por ej.,
cromatografa) o por la respuesta relativa del sistema de deteccin.
Especificidad
Medida en que un mtodo proporciona respuestas del sistema de

deteccin que se pueden considerar caractersticas exclusivas del
analito.
Adicin de solucin estndar
Un procedimiento mediante el cual se aaden cantidades conocidas del

analito a fracciones de un extracto de la muestra que contiene el analito
(para una concentracin X medida inicialmente), a fin de producir
nuevas concentraciones nominales (por ej. 1,5X y 2X). Se miden las
respuestas del analito producidas por las fracciones enriquecidas y el
extracto original, y se determina la concentracin del analito en el
extracto original (adicin nula de analitos) a partir de la pendiente y la
interseccin de la curva de la respuesta. Si la curva de la respuesta
obtenida no es lineal se requerir cautela para interpretar el valor de X.
Factor de cola
Medida de la asimetra del pico de la cromatografa; en el 10% de la

altura mxima del pico, proporcin entre su ancho en los segmentos
frontal y de cola separados por una lnea vertical que se traza a travs
del pico mximo.
Porcin de ensayo
Muestra de ensayo
Vase Porcin analtica

Vase Muestra analtica
Fidelidad
Grado de conformidad entre el valor promedio obtenido de una larga

serie de resultados de ensayos y un valor de referencia aceptado.
Incertidumbre de la medicin
Parmetro individual (habitualmente una desviacin estndar o un

intervalo de confianza) que expresa la posible gama de valores, en torno
al resultado de la medicin, dentro de la cual se prev que se encuentre
el valor efectivo con un grado establecido de probabilidad. Debe tomar
en cuenta todos los efectos reconocidos que influyen en el resultado, a
saber: precisin global a largo plazo (reproducibilidad dentro del
laboratorio) del mtodo completo; sesgo del mtodo; submuestreo e
incertidumbres de la calibracin; y cualquier otra fuente conocida de
variacin en los resultados.
CAC/GL 40-1993
Pgina 41 de 41
SIGLAS
Cmx
Cmn
CVAtp
CVLtp
CVsp
BPL
MEG
LMR
Residuo mayor detectado en

porciones analticas repetidas
Residuo menor detectado en
porciones analticas repetidas
Coeficiente tpico de
variacin de los residuos
determinados en una porcin
analtica
Coeficiente tpico de
variacin en anlisis de
porciones de una muestra de
laboratorio
Coeficiente de variacin de
residuos en porciones
analticas
Buenas prcticas de
laboratorio
Mtodo especfico para un
grupo
Lmite mximo de residuos
MRM
Mtodo para residuos mltiples
fRR
Factor de respuesta relativa
tRR
Valor del tiempo de retencin relativa de un

pico
Rs
Resolucin de dos picos cromatogrficos
DE
Desviacin estndar
Sy/x
Desviacin estndar de las residuales

calculada a partir de la funcin de calibracin
lineal
Organizacin Mundial de la Salud
OMS

CXG DIRECTRICES SOBRE BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO EN EL ANÁLISIS DE RESIDUOS DE PLAGUICIDAS CAC/GL 40-1993 - 040s

Caricato da

Informazioni sul documento

Titolo originale

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

CXG DIRECTRICES SOBRE BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO EN EL ANÁLISIS DE RESIDUOS DE PLAGUICIDAS CAC/GL 40-1993 - 040s

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

CAC/GL 40-1993

DIRECTRICES SOBRE BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO EN EL ANLISIS DE

RECURSOS BSICOS .......................................................................................................................................... 2

EVITAR LA CONTAMINACIN ............................................................................................................................ 4

Mtodos de muestreo recomendados para la determinacin de residuos de plaguicidas a efectos del

Revisin 2003. Enmienda 2010.

3.2.1 El laboratorio necesitar un abastecimiento eficiente y fiable de electricidad y agua. Es

El equipo utilizado deber ser idneo para realizar el trabajo requerido.

RECEPCIN Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS

PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS NORMALIZADOS

Clasificacin del Codex de Alimentos y Piensos (CAC/MISC 4-1993).

frutas y hortalizas: la validacin relativa a un producto fresco entero no debe considerarse

Los analitos representativos seleccionados deben:

La concentracin de los analitos utilizados para caracterizar un mtodo debe seleccionarse de

VERIFICACIN DEL RENDIMIENTO

Los objetivos principales de la verificacin del rendimiento son:

Construccin y utilizacin de grficos de control

Esta forma de confirmacin puede considerarse bajo tres amplios epgrafes:

EL CONCEPTO DE NIVEL CALIBRADO MS BAJO (NCMB)

EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

Figura II.1. Cuadro general de la validacin del mtodo

No validado para el fin

Validacin del mtodo

Actualmente idneo para el fin

Figura II.2. Verificacin de la estabilidad del analito

Estabilidad del analito en el disolvente

No idnea para el fin

No idnea para el fin especfico

Parmetros que deben

Parmetros que deben

No, salvo que la

Estabilidad del analito

No, salvo que se

Parmetros que deben

Estabilidad del analito

No, salvo que haya

No, salvo que

No, salvo que el

Control de calidad constante.

N de anlisis o tipo de ensayo

Comprobar las funciones de

Para calibracin lineal:

Ser necesario comprobar la estabilidad en los

N de anlisis o tipo de ensayo

Normalmente la tasa de muestras

Se aplica nicamente a una combinacin especfica de

N de anlisis o tipo de ensayo

Determinar los valores de tRR de

regularmente durante la verificacin del rendimiento

N de anlisis o tipo de ensayo

Analizar 5 porciones idnticas

Enriquecer los productos con

El analito aadido en el NCMB

Wallace, D. y Kratochvil, B., analytical Chemistry, 59, 1987, 226.

N de anlisis o tipo de ensayo

Analizar 5 porciones idnticas

Los residuos medios no aadidos

La temperatura del extracto, la velocidad del mezclador

N de anlisis o tipo de ensayo

Analizar muestras que acaban de

El analito aadido en el nivel de

El almacenamiento se validar para su uso con

N de anlisis o tipo de ensayo