Licenciatura en Biologa Lab. de Fisiologa Vegetal Br. Naiyulin Morales C.I.: 22151645 ACTIVIDAD FOTOQUMICA DE CLOROPLASTOS AISLADOS CUESTIONARIO 1.- Indique mediante un esquema qu parte del sistema fotoqumico se est midiendo.
En el esquema se muestra la parte del sistema fotosinttico a medir: (Fotosistema II;
Fotosistema I; Plastoquinonas; Citocromo). Las barras verdes indican la interrupcin del flujo fotosinttico de electrones por el DCMU, el cual acta entre QA y la QB (pool de quinonas); es decir, inhibe la reduccin de la QB por lo que impide adems la reoxidacin de QA, separando de esa manera el PS II del PS I. La flecha roja indica dnde acta el DCPIP como aceptor de electrones, este es un indicador de xidoreduccin que remplaza al NADP+, y, la aceptacin de protones se visualizar mediante el cambio de color: Azul en estado oxidado e incoloro en estado reducido. 2.- De qu manera las medidas realizadas son proporcionales a la cantidad de oxigeno liberado? Segn Hill los cloroplastos aislados son capaces de producir oxigeno al ser iluminados en presencia de un adecuado compuesto qumico aceptor artificial de electrones, tal como DCFIF. La reaccin produce la reduccin del DCFIF. Segn la ecuacin: 2H2O + 2 DCFIF (oxidado, azul) + Cloroplastos 2DCFIF (reducido, incoloro) + 0 2 Donde indica que la cantidad de O 2 es proporcional a la reduccin del colorante
DCFIF, es por ello que por espectrofotometra se puede evaluar la coloracin de la
solucin que ser proporcional a la cantidad de electrones recibidos es decir a la cantidad de oxigeno liberado ya que estos electrones proceden del rompimiento de la molcula de agua. 3.- Describa las evidencias experimentales de la existencia de dos sistemas fotoqumicos en plantas superiores Segn la hiptesis de Emerson, durante la etapa luminosa o fotnica de la fotosntesis que se realizan en los tilacoides, fotones de luz solar son absorbidos por las dos molculas cloroflicas de antena o centros de reaccin primaria , la P700 en el PSI y la P680 en el PSII, como en la etapa luminosa se sintetiza ATP. R. Emerson, alrededor de 1940, estableci la denominacin del PSI: P700 (pigmento), la cual se debe a que la mxima absorcin de luz solar se produce a los 700nm y que el PSII con otra molcula de clorofila de antena, la P680, absorbe las longitudes de onda de los colores azul y rojo a los 680nm y pierde un electrn de alta energa. En base a esta hiptesis y bajo ciertos experimentos, otros investigadores llegaron a la misma conclusin: la fotosntesis en las plantas superiores involucra la interaccin de dos fotosistemas separados. 4.- Qu productos de la reaccin fotoqumica de la fotosntesis espera obtener en un sistema de cloroplastos aislados en cada uno de estos casos? a) En presencia de DCFIF Los productos que se esperan obtener son O 2 y ATP, el primero como resultado de la fotlisis del H2O y el segundo mediante la accin de las enzimas ATP sintasas. Todo ello a travs de la fuerza protn motriz de los gradientes formados en el lumen tilacoidal. Cuado est presente el DCFIF no hay sntesis de carbohidratos ya que este, como aceptor final de e -, impide la reduccin de NADP+ a NADPH, los cuales son los utilizados en la fase de asimilacin de elementos. b) Ausencias de CO2 La ausencia de CO2 no influye de manera directa sobre la reaccin fotoqumica de la cadena transportadora de e-, por lo que se espera obtener los productos tpicos ATP, NADPH y Oxigeno, excepto carbohidratos, debido a que, en ausencia de este compuesto solo tiene lugar la fase de absorcin y transformacin de energa de la fotosntesis (Primera fase), por lo tanto la de luz visible adquirida es utilizada para producir poder reductor (NADPH), ATP y oxigeno. c) En presencia de una sustancia que oxide continuamente al P700 En este caso, se espera obtener O 2 y ATP pero en bajas concentraciones. Cuando se halla una sustancia que oxida continuamente al P700 no se produce la capacidad reductora suficiente para el transporte de e -, por lo que no funcionara de manera adecuada el Fotosistema I, originndose entones los productos nicos del Fotosistema II en menor cantidad.
5.- Explique cul es el efecto inhibitorio de DCMU en la cadena fotosinttica de
transporte de electrones. Qu aplicacin prctica podra tener un inhibidor de esta clase? Ciertos derivados de la urea, como el DCMU en este caso, actan como inhibidores bloqueando el transporte de electrones entre las plastoquinonas Q A y QB, lo que inhibe adems la reaccin de Hill en el Fotosistema II , por lo que no ocurre la fotolisis del agua as como tampoco la liberacin oxgeno. Las aplicaciones prcticas de estos inhibidores se realizan comnmente mediante herbicidas, se aplican en el suelo desplazndose hasta la planta, inhibiendo entonces el flujo de electrones entre ferrodoxina y el NADP, reduciendo adems el oxigeno a O2- (un radical superoxido), que produce la prdida de la actividad de los cloroplastos. 6.- Qu es la reaccin de Hill? Robert Hill, para el ao 1937 demostr que an en ausencia de CO 2, los cloroplastos aislados son capaces de producir oxgeno. Esta demostracin fue uno de los primeros indicios de que en las reacciones de fase clara, la fuente de electrones era el agua. En su sistema in vitro, Hill us un aceptor artificial de electrones, el 2,6 diclorofenol indofenol (un compuesto de color azul llamado DCPIP). La ecuacin general de la reaccin de Hill se puede sintetizar como: Luz H2O + A
AH2 + O2 Cloroplastos
Donde A es el aceptor artificial de electrones en su forma oxidada (DCPIP) y AH 2 es
su forma reducida. Formalmente la reaccin de Hill se describe como la foto reduccin de un aceptor artificial de electrones por los hidrgenos del agua, con liberacin de oxgeno.