Extraccin, cuantificacin, identificacin y determinacin de la

actividad enzimtica de la bromelina contenida en el tallo del cultivo

de Ananas comosus, comnmente conocido como pia.
Antecedentes
En la actualidad el mundo globalizado ha trado como consecuencia graves problemas como desempleo,
falta de vivienda, contaminacin ambiental y el resurgimiento de enfermedades del pasado que se crean
erradicadas, tales como la viruela, el sarampin, la tuberculosis entre otras, de igual manera el surgimiento de
enfermedades que no mostraban tanta frecuencia tales como la diabetes mellitus, obesidad, bulimia, anorexia,
cncer, depresin, estrs y adems enfermedades cardiovasculares, por lo que es fundamental en la
actualidad llevar a cabo la investigacin de principios activos de origen vegetal que contrarresten estos
problemas de salud pblica, en base a estudios realizados en diferentes pases se ha encontrado que la pia
presenta un amplio espectro de propiedades teraputicas sobre el tratamiento de enfermedades como el cncer
as como sus efectos antispticos y antitromboticos, se ha encontrado que estas propiedades se deben a un
principio activo de naturaleza proteica contenido en la pia que recibe el nombre de bromelina, misma que
tambin se utiliza como ablandador de carnes y es as como surge la curiosidad y a la vez necesidad de llevar
a cabo la realizacin de esta investigacin.

Objetivo
Extraer, cuantificar, identificar y determinar la actividad enzimtica de la bromelina contenida en el cultivo de
pia.

Marco terico
Las protenas son molculas formadas por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno y la mayor parte de ellas
tambin contiene azufre, estn formadas por cadenas de alfa aminocidos que se encuentran unidas entre s
mediante enlaces peptdicos, las protenas exhiben una gran diversidad funcional ya que pueden ser
estructurales, protectoras, toxicas, hormonales, mensajeras, contrctiles, transportadoras y enzimticas. Las
enzimas son protenas producidas por clulas vivas que se encargan de catalizar reacciones bioqumicas
termodinmicamente espontneas, esta funcin la llevan a cabo mediante su sitio activo el cual es la porcin
de aminocidos que se une al sustrato para que se lleve a cabo la reaccin, la funcin de las enzimas es
dependiente de una temperatura y pH ptimos, mismos que son especficos para cada enzima, en algunas
ocasiones las enzimas requieren de la ayuda un cofactor o coenzima para llevar a cabo su funcin (Lehninger,
1995)
Las enzimas se clasifican en oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerazas y ligasas (J. I.
routh, 1977)
La bromelina es una enzima perteneciente a las proteasas, se encuentra contenida en el cultivo de pia y
dentro de sus usos se ha encontrado que se utiliza para mejorar la digestin, como antitrombotico,
antitumoral, antisptico entre otros ( Revista Venemedica, 2004)
El cultivo de pia (Ananas comosus) pertenece a la familia de las bromelaseas, es una planta arbustiva que
se adapta a diversos microclimas preferentemente en zonas tropicales y subtropicales, requiere de una
precipitacin que va de 800 hasta 1200mm y se puede encontrar en altitudes hasta de 800m sobre el nivel del
mar, completa su ciclo vegetativo de 1 a 1.5 aos de acuerdo a la variedad y de 3 a 5 meses en la maduracin
del fruto, las hojas del cultivo maduras son ricas en slice y el peso promedio de los tallos va de los 250 a
400g (Jess Fernndez, 2005).
Metodologa experimental

Metodologa experimental
Extraccin
Una vez realizadas varias pruebas con la finalidad de obtener la mejor mezcla de extraccin que
proporcionara el mejor rendimiento, se trabaj de la siguiente manera: primeramente se hizo una seleccin
aleatoria del cultivo de pia, posteriormente se realizaron cortes finos de la muestra (tallo, fruto y follaje por
separado), se pes 2g de muestra la cual se coloc en un mortero de porcelana con pistilo para su maceracin,
se adicion 5mL de agua destilada, una vez llevado a cabo el macerado se decanto a un tubo de ensayo y se
coloc en un bao de hielo durante 5 minutos y se agreg 5mL de acetona fra (0-1oC) dejndose reposar
hasta observar un precipitado blanco.

Cuantificacin
Se realiz una curva de calibracin con disoluciones estndar de albmina srica bovina a diferentes
concentraciones mediante el mtodo de Biuret agregando los contenidos como se indica en el cuadro nmero
1:

Tubo

B
1
2
3
4
5
6

Volumen
de
disolucin estndar de
albmina srica bovina
(mL)
0
0.3
0.4
0.6
0.8
1.2
2

Concentracin de la Volumen
disolucin estndar reactivo
(mgmL-1)
Biuret (mL)
0
0.3
0.4
0.6
0.8
1.2
2

de Volumen de agua
de destilada
(mL)

3
3
3
3
3
3
3

2
1.7
1.6
1.4
1.2
0.8
0

Al mismo tiempo que se elaboraba la curva de calibracin, a 10 tubos de ensayo con extracto se les agreg
3mL del reactivo de Biuret, para despus de 20 minutos hacer la interpolacin y obtener la concentracin de
protena en el extracto.
Determinacin de la actividad enzimtica
Para la determinacin de la actividad enzimtica se rotul 3 tubos de ensayo y a uno de estos se les adicion
disolucin de caseina, a otro extracto y disolucin de caseina y al ltimo se le agreg nicamente extracto, en
las cantidades mostradas en el cuadro nmero 2:

Tubo

Volumen de extracto (mL)

Volumen
de Volumen
de
disolucin
de disolucin buffer
casena al 0.5% de fosfatos de
(mL)
(pH=6.5-6.7)(mL)

1
2
3

0
5
5

4
4
4

2
2
2

Volumen de
cido actico
de
concentracin
1molL-1 (mL)
0
2
2

El cido actico se adicion sobre los tubos 2 y 3 despus de 25 minutos, con la finalidad de evaluar la
actividad enzimtica del extracto, repitiendo el experimento a 5, 15, 25, 37 y 40 oC.
Resultados
Cuantificacin
El grafico 1 muestra los resultados obtenidos como promedio de 3 curvas de calibracin efectuadas de manera
independiente para protena total mediante l mtodo de Biuret.

0.2000

Curva de calibracin para protena total

mediante el mtodo de Biuret

Absorbancia

0.1500
0.1000
y = 0.0726x - 0.0007
R = 0.9992

0.0500
0.0000
-0.0500

0.5

1
1.5
Concentracin
(mgmL-1)

2.5

Concentracin media para el extracto del tallo: 1.006 0.0177 mgmL-1

Concentracin media para el extracto de follaje: 0.249 0.0066 mgmL-1
Concentracin media para el extracto de fruto: 0.524 0.01273 mgmL-1
El cuadro nmero 5 muestra los resultados obtenidos para la cantidad de bromelina por gramo de
muestra

Muestra
Tallo
Follaje
Fruto

Concentracin de bromelina (mg/g)

7.55
1.87
3.93

El cuadro nmero 6 muestra los intervalos de confianza del 95% para la concentracin media de
bromelina en cada uno de los extractos para n-1 grados de libertad.

Muestra
Tallo
Follaje
Fruto

Concentracin de bromelina (mg/g)

1.006 0.0439
0.249 0.0164
0.524 0.0316

El grfico nmero 2 muestra los resultados obtenidos como promedio de tres determinaciones independientes en
cuanto a la dependencia de la actividad enzimtica del extracto con respecto a la temperatura a pH constante .

0.018
Actividad (mgmL-1min-1)

0.016
y = -0.0003x + 0.0171
R = 0.7167

0.014
0.012
0.01

0.008
0.006
0.004
0.002
0
0

10

20
30
Temperatura
(C)

40

50

Conclusin

Se llevo a cabo la extraccin, la cuantificacin, la identificacin y la determinacin de la actividad enzimtica de la

bromelina contenida en el cultivo de pia (Ananas comosus).
Las concentraciones medias en los extractos de tallo, fruto y follaje son significativamente diferentes por lo que se
acepta la primera hiptesis nula.
Algunos de los aminocidos presentes en la bromelina y con los que se trabaj en ste proyecto, si pueden ser
identificados mediante reactivos especficos y cromatografa en papel por lo que se rechaza la segunda hiptesis nula.
En virtud del coeficiente de correlacin obtenido en la curva de calibracin mediante el mtodo de Biuret para
protena total, se puede cuantificar bromelina contenida en muestras del cultivo de Ananas comosus de manera
confiable, por lo que se rechaza la tercer hiptesis nula.
En base a los resultados arrojados por el grfico nmero 2 se observa que la casena es un buen sustrato para
determinar la capacidad enzimtica de la bromelina, as mismo se observa que la temperatura es un factor
determinante en la evaluacin de la misma por lo que la cuarta y la quinta hiptesis nula se rechazan.

Bibliografa
Obesidad; J. Gonzlez McGraw- Hill, Mxico 2003,
Sndrome metablico y enfermedad cardiovascular; A. Gonzalez, F. la Valle y J. Ros (intersistemas SA. De C.V, Mxico 2004)
Qumica orgnica y bioqumica; Donald J. Burton y Joseph I. Routh; McGraw-Hill, Interamericana de Mxico SA de CV, 1997
Anatomia y Fisiologa CP. Anthony, G.A. Thibodeau, McGraw-Hill, Interamericana de Mxico SA de CV, 1983
Venemedica, Acerca de la bromelina Rapha Health network Internacional news paper, volume 1, ao 3, mayo de 2004
Vitaminas, minerales, y suplements herbales una nueva visin teraputica medica; Dr. Alberto Guzman, MD, MS, PhD.