Propagacin in vitro

Cultivo de tejidos

Presupone el cultivo de plantas o partes de plantas (explantos) en

un medio de cultivo apropiado
El cultivo se desarrolla en condiciones de temperatura, humedad,
fotoperodo e irradiancia controlados.
La manipulacin se realiza en cabinas de flujo laminar

Esta tcnica es importante en la propagacin de especies de inters

agroforestal y agrcola: micropropagacin

Producen innumerables productos de importancia en la industria

farmacutica,
cosmtica
y
alimentaria,
como
alcaloides,
compuestos aromticos o pigmentos.
Los cultivos in vitro permiten obviar los inconvenientes derivados de
condiciones geogrficas, climticas y de tiempo de produccin.

Cultivo in vitro

Plasticidad

Totipotencialidad

Es la capacidad de una clula vegetal de dar lugar al desarrollo

de una planta completa. Las clulas totipotentes son clulas
somticas que han retenido su capacidad de dividirse y
diferenciarse en una planta madura si se coloca en el medio
adecuado.
Cultivo de clulas vegetales
Definicin

Cultivo asptico in vitro de cualquier parte de una planta en un

medio nutritivo.
Tipos de cultivos:

cultivo de clulas

cultivo de tejidos

cultivos de rganos

Cultivos vegetales

Cultivos agronmicos

Cultivos in vitro

Cultivos diferenciados ( races, tallos, embriones, races y

tallos transformados)

Cultivos indiferenciados ( callos, suspensiones)

Cultivos indiferenciados

Callos : en medio slido, crecimiento lento, gran heterogeneidad

celular,
Cultivos en suspensin: derivan de los anteriores, en medio
lquido de composicin adecuada, crecimiento ms rpido y
homogneo.
Composicin del medio de cultivo. Fuente de carbono, minerales,
vitaminas, fitohormonas (auxinas, citoquininas)

Callos

Tejidos no diferenciados ( a veces diferenciados), en divisin activa.

Frecuentemente se desarrollan a partir de heridas.

Medio de cultivo

Mezcla de sustancias en los que las clulas, tejidos y rganos

pueden dividirse y crecer.

Sustancias inorgnicas: N, P, K, Ca, Mg, Cl, Na

Cu, Zn, Mn, Fe, Bo, Mo, Co, I

Suplementos orgnicos complejos: leche de coco, extracto de

levadura.

Reguladores de crecimiento : hormonas.

Fuente de carbono: sacarosa

Con o sin agar: medio semi -slido o lquido.

Reguladores de crecimiento

Hormonas/ Fitohormonas:

Auxinas: grupo de hormonas vegetales (naturales o sintticas) que

inducen la elongacin, o en algunos casos la divisin celular.

Frecuentemente inducen races adventicias e inhiben la

formacin de tallos adventicios.

Cytokininas: grupo de hormonas vegetales (naturales o sintticas)

que inducen divisin celular y frecuentemente tallos adventicios y
en muchos casos inhiben la formacin de races adventicias.

Reglas generales para la accin hormonal:

Auxina : Cytokinina = ~1

Callo

Auxina : Cytokinina < 1

Tallo

Auxina : Cytokinina > 1

Son producidos por microorganismos

Races

Terminologa y tcnicas

1. Explanto: porcin de tejido u rgano que se separa de la planta

para iniciar el cultivo.

2. Esterilizacin:
microorganismos.

procedimiento

para

la

eliminacin

de

Autoclave: aparato en el que el medio, material d vidrio,

instrumental, etc., es esterilizado por vapor bajo presin
(121oC, 15 psi, 10-20 min.).
Requerimientos de asepsia: desinfeccin de superficie del
explanto: generalmente usando lavandina comercial diluido
para evitar el desarrollo de microorganismos.
Cabina de flujo laminar: rea de trabajo, mantenida estril por
el flujo continuo, no turbulento de aire estril.

Subcultivo: pasaje de clulas, tejidos, rganos, etc. Desde un

medio de cultivo agotado a otro medio fresco.
Micropropagacin: propagacin vegetativa in vitro de plantas.

Diferenciacin: desarrollo de clulas o tejidos con una funcin

especfica y/o regeneracin de rganos, estructuras tipo rganos
(races, tallos) o embriones.

Adventicios: desarrollo de rganos (races, yemas, tallos, flores,

etc.) o embriones (embryo-like structures) desde puntos de origen
no usuales, incluyendo callos.

Organognesis (formacin de rganos)

Formacin de tallos, races, flores, etc.
Regeneracin de una planta completa!!

Embriognesis (formacin de embriones)

Proceso mediante el cual se desarrolla un embrin a partir de una clula
huevo fertilizada o asexualmente desde un grupo de clulas somticas
(embriognesis somtica).

Embriognesis Somtica

Procedimiento para la regeneracin va embriognesis somtica

1. Iniciacin: callos embriognicos

2. Proliferacin: callos embriognicos, masas proembriognicas

(PEM)

3. Desarrollo y maduracin de embriones : embriones

4. Germinacin de embriones (Regeneracin)

Estados de desarrollo en dicotiledneas:

Masas proembriognicas

Estado globular

Torpedo

Embrin somtico

Semillas artificiales

Semillas sintticas (artificiales)

1. Produccin en masa de semillas genticamente mejoradas.

2. Procedimientos:

Encapsular en cpsulas de gel, recubrir con una cubierta adecuada,

almacenar

3. Encapsulacin de embriones somticos: proteccin, nutricin,

permeable al agua, biodegradable.
Polmeros: gel de alginato, gelatina, agar, goma, etc.
Variacin Somaclonal

Variacin fenotpica, gentica o epigentica en su origen.

Permite describir la variabilidad gentica observada en tejidos

regenerados a partir de cultivos in vitro
Es comn cuando se regeneran plantas a partir de callos, o cuando
los cultivos se establecen a partir de explantos que no contienen un
meristema pre-organizado.
En muchos casos, el grado de variacin es proporcional a la
duracin del cultivo in vitro.
Se aplica para mejora de cultivos
Aislamiento de protoplastos

Protoplasto: clula vegetal sin pared celular

Procedimiento:

(1). Digestin de la pared celular: celulasa, hemicelulasa, pectinasa.

Son producidos por microorganismos.
(2). Regeneracin de la pared celular: usualmente dentro de las 24
hrs.

(3). Divisin celular: la primera divisin ocurre dentro de las 24-48

hrs
(4). Proliferacin y diferenciacin

Protoplastos
Aislamiento, cultivo y fusin de protoplastos

Aplicaciones:

1. Remocin de pared para captacin de

electroporacin

DNA : Microinyeccin y

2. estudios de sntesis de pared celular, transporte de membrana,

citoesqueleto.
3. estudio de desarrollo de embriones somticos.

4. hibridizacin somtica (cybridizacin) de especies sexualmente

compatibles o incompatibles, por fusin de protoplastos se obtiene
un nuevo germplasma.

Aplicaciones

1. Mantenimiento del background gentico deseado:

micropropagacin.
2. Produccin en gran escala de cultivares apropiados:
embriognesis somtica

3. Sntesis de productos usando tcnicas de cultivo continuo.

4. Eliminacin de virus y otros patgenos.

5. Regeneracin de plantas obtenidas por ingeniera gentica.