XII CURSO DE LA SUBCOMISION DE ANTIMICROBIANOS

CARACTERIZACION FENOTIPICA Y GENOTIPICA

DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS
ANTIMICROBIANOS

Resistencia a Macrlidos
Principales mecanismos en cocos Gram positivos.
Caracterizacin genotpica
Dra. Marta Mollerach
Ctedra de Microbiolog
Microbiologa
Facultad de Farmacia y Bioqu
Bioqumica
Universidad de Buenos Aires

1952: Descubrimiento de la eritromicina a partir de una

cepa de Streptomyces erithraeus
Compuestos por un anillo de lactona de tama
tamao variable
(14 15 o 16 C) unido por enlaces glucos
glucosdicos a uno o
mas az
azcares
Clasificafi
n seg
Clasificafi
segn el n
nmero de tomos de Carbono

ESTRUCTURA QUIMICA
ERITROMICINA

CLARITROMICINA

AZITROMICINA

Macrlidos, azlidos, lincosamidas,

cetlidos y estreptograminas:
grupo MALKS

Distinta estructura qu
qumica

Mecanismo de accin:
Se une a la subunidad 50S del ribosoma: 23S rRNA
Inhiben la s
sntesis de prote
protenas

30S

50S

Macrlidos: 1G, 2G, 3G, 4G

14C: eritromicina
sustituciones que mejoran la estabilidad
claritromicina (metoxi en 6)
roxitromicina (etiloxima en 9)
15C: azitromicina (az
azlido)
lido) (metilo en 9)
16C: espiramicina
josamicina
midecamicina
Cet
Cetlidos:
lidos: telitromicina (14C, con grupo cet
cetnico en posici
posicin
3)

Estreptograminas:
Estreptograminas: quinupristina (A),
(A), dalfopristina (B)

Espectro de accin

Cocos gramgram-positivos (principalmente estafilococos

y estreptococos)

Bacilos gramgram-positivos

Microorganismos intracelulares (Chlamydia,

Chlamydia, Rickettsia)
Rickettsia)

Bacilos gramgram-negativos: resistencia intr

intrnseca

(excepto Bordetella,
Bordetella, Helicobacter, Haemophius,
Haemophius, Legionella)
Legionella)

Indicacin clnica
Tratamiento emprico de infecciones
respiratorias

Infecciones de piel y partes blandas

Infecciones de la comunidad por S. pyogenes
o S. aureus

NAC atpicas

Faringitis y otitis en alrgicos a penicilina

Resistencia a MALKS
Mecanismos bioqumicos de
resistencia:
Modificacin del sitio blanco: (amplio
espectro de R)

metilaci
metilacin del 23S rRNA,
rRNA,
mutaciones en 23S rRNA,
rRNA,
mutaciones en genes que codifican prote
protenas ribosomales

Eflujo
Enzimas modificadoras del antibitico

Metilacin Ribosomal
Codificada por una variedadad de genes erm

(erythromycin ribosome methylase)

ethylase)
Macrlidos (ej., eritromicina)
Lincosamidas (ej., clindamicina)
Streptogramin B

Sntesis
proteica

erm
Metilasa

Ribosoma

CH3

Macrlidos
Lincosamidas
Streptogramin B

Diferentes clases de genes erm

Las clases principales descritas en bacterias
patgenas
ermA y ermC: frecuentes en estafilococos
ermB: estreptococos y enterococos
ermF: Bacteroides

ermTR (subclase de ermA): en estreptococos

-hemolticos

El determinante ms frecuente en
estreptococos es ermB y ha sido hallado
en distintos elementos genticos

Varaldo, Antimicroial Agents and Chemotherapy, 2009

El determinante ermTR es frecuente

en estreptococos -hemolticos

Distintos fenotipos MLS: expresin

inducible o constitutiva


cMLS: la bacteria produce metilasa activa

en ausencia de inductor
iMLS: Ls bacteria produce un mRNA que
codifica la metilasa pero es INACTIVO en
ausencia de inductor

Bases moleculares de la induccin:

Conformaciones alternativas del mRNA

mRNA inactivo

INDUCTOR (14
o 15 Md)
No L ni Md 16 C

mRNA activo

Modificaciones del sitio blanco

23S rRNA

Mutaciones en el dominio V


Mutacin en A2058 (M. intracellulare)

intracellulare)


A x G, C U

Mutaciones en G 2057 A

A 2059 G

Otorga R cuando existe bajo n

nmero de copias del
gen: Mycobacterium, Helicobacter, micoplasmas

Mutaciones en el dominio II
Mutaciones en genes que
codifican L4 y L22

EFLUJO
Codificada por genes mef en estreptococos y msrA en
estafilococos
Macrlidos (ej., eritromicina)

Sntesis
proteica
Ribosoma

mef
Macrlidos

Eflujo
Tipo

Resistencia a

ejemplo

genes

energ
energa

componente

R: 14C y 15C
S: L y Sb

S. pyogenes
S. pneumoniae

mefA
mefE

Fza
Protomotriz

MF

R: lincomisinas
/clindamicina

Streptomyces

lmrA

ABC

MF

R:
estreptogramina
A

S. aureus

vga
vgaB

ABC

MF

R: 14C
R: estrep B
S: 16C y L

S. epidermidis
S. aureus

msrA

ABC

S. fradiae
tlrC
S. thermotolerans carA
S. ambofacieus
smrB

ABC

MS

Actino
R: 16C
micete

MDR

AG, quinolonas,
quinolonas,
macr
E. coli
macrlidos,
fluorquinolonas,
fluorquinolonas,
sales de amonio, Corynebacterium
etc.

(parte de un
transp.
complejo)
MF
MF

mdfA

Fza
Protomotriz

crm

Tricomp :
MF, PFM,
porina

Modificacin enzimtica:
poco frecuente
Ejemplo

genes

lactonasa

efecto

descripto
en

Clivaje del
anillo

lactonasa

ereA, ereB eritromicina

ere like
14C y 16C
Estreptogramina B
vgbB

E. coli
S. aureus
S. cohnii

glicosilasa

mgt

Eritromicina

Glicosilaci
Glicosilacin
del macr
macrlido

S. lividans

fosforilasa

mphA
mphB
linA
lin A

14C
14C y 16C

Fosforilaci
Fosforilacin

E. coli

Lincosamida y
clindamicina

Uni
Unin a
Nucleotido

S.
haemolyticus
S. aureus

sat A
vat y vatB
vatC

Estreptogramina A

acetilaci
acetilacin

E. faecium
S. aureus
S. cohnii

LincosamideLincosamidenucleotide
aduct formation

acetilasas

resistencia

Clivaje del
anillo

19971997-98 (n=128)
EryR 9%

20002000-02 (n=134)
EryR 16%

17/21 aislamientos del 2do per

perodo:

Fenotipos prevalentes en
Streptococcus pneumoniae

Argentina, Chile,
Uruguay, USA y
Canad

mefE

MLS

Europa , excepto
Alemania (50%)

Streptococcus pyogenes
Fenotipo M
mefA
Fenotipo MLS
ermA (ermTR) (iMLS)
ermB (cMLS)
Resistencia de Streptococcus pyogenes a los
antibi
antibiticos. Experiencia de once a
aos en un hospital
pedi
peditrico de Buenos Aires*
Lopardo y col., Acta Bioq.
Bioq. Clin Latinoam.
Latinoam. 2004
R a Ery (1989(1989-2000)
0-2% al 9,9%
Fenotipo M fue el m
ms frecuente

Fenotipos y genotipos de resistencia a macrlidos

en S. pyogenes hallados en Argentina

Lopardo y col, Acta Bioq Clin Latinoam 2004

Streptococcus agalactiae
Fenotipo M
mefA
Fenotipo MLS
ermA (ermTR) (iMLS)
ermB (cMLS)
Fenotipo L
lnuB
Resistencia en Argentina
Vergara y col

12% Eritro 2% Clinda, Revista de CyT

Di Bartolomeo y col 6% Eritro 4% Clinda, Rev Argent Microbiol 2005

Perez, Suttich y col
2004

6% Eritro 4,5 % Clinda, Rev Argent Microbiol

Mollerach A

2,4% Eritro (n=7, 5 ermB, 2 mefA) Enferm Infecc

Microbiol Clinica, 2007

Staphylococcus aureus
Fenotipo MS
msrA
Fenotipo MLS
ermC
ermA

(iMLS)
(cMLS)

Screening GBS

CIM
LINCO 64 ug/ml
CLINDA 4 ug/ml
ERITRO 0,125 ug/ml

PCR
Negativo: erm,
erm, mef
Positivo lnuB

SECUENCIACI
SECUENCIACIN.
99% IDENTIDAD CON
lnuB E. faecium
Massa, ICAAC, 2008

Muchas Gracias!!