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EVALUACION DE LA CAPACIDAD
ANTIOXIDANTE EN HOJAS DE PEPINO
(Cucumis sativus L.)
TESIS
Para Obtener el Grado de:
INGENIERO AGROINDUSTRIAL
Presenta:
Vctor Enrique Lozano Maldonado
Docente
Iris O. Ruiz Yance.
Pucallpa, 2013
NDICE
INTRODUCCIN.04
CAPTULO 1: DATOS INFORMATIVOS........................................................05
1.1. Institucin................................................................................................05
1.2. Carrera profesional.................................................................................05
1.3. Titulo.........................................................................................................05
1.4. Investigador..............................................................................................05
1.5. ..Asesor......................................................................................................05
1.6. Duracin....................................................................................................05
CAPTULO 2: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA......................................06
1.1. Planteamiento del Problema...................................................................06
1.2. Formulacin del Problema......................................................................06
1.3. Objetivos..................................................................................................07
1.3.1. Objetivo General............................................................................07
1.3.2. Objetivos Especficos....................................................................07
1.4. Justificacin de la Investigacin............................................................07
1.5. Limitaciones de la Investigacin............................................................07
CAPTULO 3: MARCO TERICO...................................................................08
2.1. Antecedentes de la Investigacin..........................................................08
2.2. Bases Tericas.........................................................................................14
2.3. Hiptesis...................................................................................................23
2.4. Sistemas de Variables.............................................................................24
CAPTULO 4: METODOLOGA.......................................................................26
4.1. Tipo y Nivel de Investigacin.................................................................26
INTRODUCCIN
La formacin de radicales libres mediante procesos naturales conduce a la
oxidacin de biomolculas, dando lugar a diversas enfermedades. Los
organismos fotosintticos estn expuestos a ambientes muy oxidativos, por lo
que poseen un sistema antioxidante muy eficaz. Presentamos en este trabajo
un sencillo mtodo para la extraccin y evaluacin de la capacidad antioxidante
de los polifenoles DE PEPINO (Cucumis sativus L.). La concentracin de
polifenoles se determina siguiendo el mtodo de Folin-Ciocalteu, y la medicin
de la actividad antioxidante se realiza por el mtodo del DPPH.
El estudio de plantas medicinales se ha venido realizando desde hace
dcadas, por causa de su uso potencial como fuente de sustancias con
propiedades biolgicas. Cucumis sativus L. ha presentado algunas aplicaciones
medicinales, por lo que surge la necesidad de indagar su eventual capacidad
antioxidante. 1
Los nuevos conceptos fisiolgicos, farmacolgicos y clnicos, han devenido en
investigaciones que han demostrado el rol en diferentes patologas, de las
especies reactivas del oxgeno que se generan como producto de nuestro
metabolismo. Como consecuencia, en los ltimos aos se actualiz el tema de
los antioxidantes biolgicos y se ha incrementado la investigacin en bsqueda
de nuevos antioxidantes, principalmente de origen natural. Considerando las
perspectivas que, a la par de los nuevos descubrimientos de la accin de las
especies reactivas del oxgeno, se generarn requerimientos de nuevas
fuentes de agentes o sustancias antioxidantes. 2
1.1. Institucin
Ingeniera agroindustrial
1.3. Titulo
EVALUACION
DE
LA
CAPACIDAD
1.5. Asesor
1.6. Duracin
de estas
2.3. OBJETIVOS
GENERAL:
Evaluar la capacidad antioxidante de la hoja de Pepino.
ESPECIFICOS:
1. Determinar la CUANTIFICACIN DE LA VITAMINA C.
2.
2.4.
peruanas
medicinales:
Cinnamomum
zeylanicum
canela,
Calophyllum
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peltatum L.
La composicin fitoqumica del extracto crudo demostr que estos extractos
son ricos en compuestos fenlicos, con una menor presencia de compuestos
terpenoides.
En el potencial antioxidante de las fracciones fue considerablemente ms alto
que el extracto crudo. Por otro lado, la EC 50 estuvo en el intervalo de 4,7 a 87,1
mg extracto/mol DPPH. Lo anterior sugiere que la fraccin 1 puede contener
los compuestos con mayor capacidad antioxidante.
La actividad de las muestras de las hojas de P. peltatum sobre el reactivo de
FRAP. Se observa que la absorbancia para las fracciones 1, 2 y 3 aument por
causa de la formacin del complejo Fe 2+-TPTZ con el incremento de la
concentracin de los extractos. De la misma manera como sucedi con el
ensayo de DPPH, la fraccin 1 present la actividad reductora ms promisoria.
El estado estacionario de la reaccin entre el DPPH y las diferentes fracciones,
el cual fue en todos los casos menor que 5 min. En este estudio preliminar
tanto el extracto crudo como las fracciones presentaron buena actividad
antirradical.
3.2. Bases Tericas
3.2.1. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE
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CENTRO DE ORIGEN
Asia y en particular la India es considerado el centro de origen del pepino,
debido a la frecuente ocurrencia de especies silvestres de Cucumis con
nmero cromosmico n=7, adems de la existencia de vestigios del cultivo de
hace 3000-4000 aos, y aunque algunos autores sealan que el centro de
origen es frica tropical, la mayora de los trabajos sealan un origen
totalmente asitico. 4
CENTRO DE DIVERSIFICACIN DE LA ESPECIE
El centro de diversificacin primario de la especie es la zona sur y este del
Himalaya en la India y de ah fue trasladado para Grecia e Italia y despus a
China considerado como el segundo centro de diversificacin. Posteriormente
esta especie fue introducida a Francia en el siglo IX, a Inglaterra en el siglo XIV
y a Norte Amrica a mediados del siglo XVI.5
Cucumis sativus
INFORMACIN TAXONMICA
REINO : Plantae
DIVISIN : Magnoliophyta
CLASE : Magnoliopsida
ORDEN : Violales
F AMILIA : Cucurbitaceae
GNERO : Cucumis L., 1753
ESPECIE : sativus L., 1753
SINNIMOS
Cucumis esculentus Salisb., 1796
Cucumis muricatus Willd., 1805
Cucumis sativus chiar Forssk., 1775
CARACTERSTICAS ECOGEOGRFICAS
Bisognin, 2002, p.718; Krstkov et al., 2003, p.14-15; InfoAgro: Pepino; AgroNet; Report of the
cucurbit working group.
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Bisognin, 2002, p.718; Krstkov et al., 2003, p.14-15; InfoAgro: Pepino; AgroNet.
4
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INTERVALO ALTITUDINAL
Esta especie se cultiva primordialmente en zonas con climas clidos, desde el
nivel del mar a 1500 (-2000) msnm6.
HBITAT
Se encuentra en cultivares, agrosistemas y en huertos familiares, generalmente
abarcando climas clidos7.
VEGETACIN
Cuando es escapada al cultivo, forma parte de vegetacin secundaria y ruderal,
derivados de
bosques tropicales, aunque tambin se encuentra en matorrales, vegetacin de
dunas costeras, bosques de galera, pastizales y bosques de encino 8.
SUELO
El pepino puede cultivarse en cualquier tipo de suelo de estructura suelta, bien
drenado y con
suficiente materia orgnica. Es una planta medianamente tolerante a la
salinidad (algo menos que el meln), de forma que si la concentracin de sales
en el suelo es demasiado elevada las plantas absorben con dificultad el agua
de riego, el crecimiento es ms lento, el tallo se debilita, las hojas son ms
pequeas y de color oscuro y los frutos obtenidos sern torcidos. Si la
concentracin de sales es demasiado baja el resultado se invertir, dando
plantas ms frondosas, que presentan mayor sensibilidad a diversas
enfermedades. El pH ptimo oscila entre 5,5 y 7 9.
CARACTERSTICAS DE LA ESPECIE
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DESCRIPCIN DE LA ESPECIE
Hierbas anuales, postradas. Tallos angulosos, hspidos. Zarcillos simples,
densa o esparcidamente hispdulos. Hojas pecioladas, pecolos 4.0-7.0 cm
largo, hspidos; lminas 8.0-12.0 cm largo, 6.0-11.0 cm ancho, cordadotriangulares, angulosamente 3-5-lobadas, el lbulo Terminal triangular,
acuminado, ambas superficies hspidas10.
3.2.2. Antioxidante
Los radicales libres son protagonistas de numerosas enfermedades que
provocan reacciones en cadena, estas reacciones solo son eliminadas por la
accin de otras molculas en estos procesos txicos en el organismo, los
llamados sistemas antioxidantes defensivos. Se ha demostrado que el
organismo posee un numero de mecanismos a travs de los cuales produce y
a la vez limita la produccin de especies reactivas de oxgeno. Un exceso de
radicales libres suele iniciar el dao de la pared vascular y en este proceso se
encuentra implicado el colesterol LDL; se ha demostrado en la incidencia de
enfermedades cardiovasculares con suplementos individuales de antioxidantes.
Un antioxidante es una molcula capaz de retardar o prevenir la oxidacin de
otras molculas. El sistema de defensa antioxidante est constituido por
compuestos de naturaleza enzimtica como: superxido dismutasa, catalasa,
glutation peroxidasa, y compuestos de naturaleza no enzimtica como:
vitamina E, beta-caroteno, vitamina C, glutation reducido, albmina, flavonoides
y metales de transicin como Se, Cu, Zn, entre otros.
El estrs oxidativo ha sido asociado a la patognesis de muchas enfermedades
humanas, es por ello que el uso de antioxidantes en farmacologa es estudiado
de forma intensiva, particularmente como tratamiento para accidentes
cerebrovasculares y enfermedades neurodegenerativas.
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16
Actualmente
existen
diversos
mtodos
para
determinar
la
actividad
libres;
sin
embargo
tambin
pueden
contener
sustancias
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oxidan al neutralizar al radical libre, por lo que la reposicin de ellos debe ser
continua, mediante la ingestin de los nutrientes que los contienen.
Tabla 1. Clasificacin de los antioxidantes segn el sitio donde ejercen su
accin
Intracelular
Membrana
Extracelular
Superxido dismutasa
Vitamina E
Ceruloplasmina
Catalasa
Betacarotenos Transferinas
Peroxidasa
Ubiquinol-10
Lactoferinas
DT-deafarasa
Albminas
GSH
Haptoglobinas
Vitamina C
Sistemas proteolticos
cido rico
Vitamina C
Vitamina E
Accin
1. Exgenos
Vitamina E
Vitamina C
Betacarotenos
Flavonoides,
Licopenos
2. Endgenos
Enzimticos
Superxido
dismutasa (SOD)
Cofactor
Cobre, sodio, manganeso
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Catalasa (CAT)
Glutatin
peroxidasa (GPx)
Hierro
Selenio
3. No enzimticos
Barreras fisiolgicas que enfrenta el
Glutatin
Coenzima Q
cido Tioctico
Transportadores
de
metales
(transferrina y ceruloplasmina)
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mtodo
usa
como
sustrato
estireno
como
radical
iniciador
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Mtodos in vivo
Las tcnicas ex vivo estn tomando importancia como alternativas a las
pruebas de toxicidad animal, ya que disminuye el uso de animales
experimentales y el costo, adems tienen gran especificidad y rapidez (Asensio
et al., 2007).
- Evaluacin de efecto citotxico.
Los ensayos de citotoxicidad miden las alteraciones inducidas por drogas en
rutas metablicas o integridad estructural, la cual puede o no ser relacionada
directamente a la muerte celular, sin embargo, los ensayos de supervivencia
miden el final de los resultados de tales perturbaciones metablicas los cuales
pueden ser tanto recuperacin celular o muerte celular. Tericamente el nico
ndice de supervivencia en la proliferacin celular es la demostracin de la
integridad reproductiva (Freshney, 1992).
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Las especies reactivas del oxgeno son mediadores importantes del dao
celular alterando membranas o actividad enzimtica. Los cidos grasos
poliinsaturados son particularmente susceptibles al ataque de radicales libres,
formndose hidroperxidos lipdicos, hidrxidos y aldehdos como productos de
la degradacin (El Haffidi y Baos, 1997).
El Fe(III) y Fe(II) catalizan reacciones de peroxidacin lipdica por la generacin
de especies reactivas del oxgeno, por lo que en este anlisis, se induce
peroxidacin lipdica por inyeccin intraperitoneal de hierro-dextan in vivo a
ratas. La peroxidacin se evala por el mtodo de sustancias reactivas del
cido tiobarbitrico en suero sanguneo (El Haffidi y Baos, 1997).
3.4. Hiptesis
3.4.1. Hiptesis General
Las hojas poseen componentes orgnicos como la vitamina C, que a su vez
esta vitamina posee actividad antioxidante. Por lo tanto es posible que la planta
de pepino Cucumis sativus posee capacidad antioxidante.
3.4.2. Hiptesis Especfico
Se podr cuantificar la capacidad antioxidante mediante el mtodo
espectofomtrico.
3.5. Sistemas de Variables
3.5.1. Variables dependientes
a. Solventes (etanol, metanol, agua destilada)
b. Tiempo de extraccin (30, 60 y 90 minutos)
c. Temperatura de extraccin (25, 50 y 75C)
Definicin Conceptual:
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LEYENDA:
S1, S2, S3
: Solvente 1, 2, 3
1, 2, 3 : Tiempo 1, 2, 3
T1, T2, T3 : Temperatura 1, 2, 3
4.6. Tratamiento Estadstico
Diseo completamente al azar (DCA) con arreglo factorial de 3x3x3.
SAS
Interpretacin de resultados
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- Tabuladores
- Programador de estadsticas
5.1.1.2. Personal Especializado
- Asesores
- consultoras
5.1.2. Recursos Materiales
5.1.2.1. Equipos
- Espectrofotmetro Smart Spectro
- Balanza Analtica
- Estufa
- Computadora
- Empacadora
5.1.2.2. Materiales
- Tamiz
- Matraces
- Fiolas
- Micropipetas
- Bolsas de polipropileno
- Vasos de precipitacin
5.1.2.3. Reactivos
- Etanol
- Metanol
- Colorante 2-6 diclorofenolindofenol
- Folin- Cicoalteu
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Unidades
de Medida
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Canidad
Precio
Monto
Unitario s/.
Total
* Reactivos
- Etanol
- Metanol
- Colorante 2-6
diclorofenolindofenol
- Folin- Cicoalteu
- 2,2- Diphenil-1picrilhidracil (DPPH)
3) Elaboracin del Informe
final
- Papel bond A4
- Impresiones
- Anillado
Total
5.3. Cronograma
Meses y Semanas
Octubre
Actividades
Elaboracin del Proyecto de
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Tesis
Recopilacin de Datos
Fuentes primarios
Recopilacin de Datos
Fuentes secundarios
Presentacin del Proyecto de
Tesis
Sustentacin del Proyecto de
Tesis
Recepcin de Materia Prima
Recepcin de Insumos y
Reactivos
Proceso de Cuantificacin de
actividad antioxidante, Vitamina
C y Compuestos Fenlicos
Recopilacin de Datos
Procesamiento de Datos
Anlisis de Datos
Elaboracin de Informe Final
Sustentacin de Informe Final
CAPTULO 6: BIBLIOGRAFA
1. Pratico D., Delanty N. (2000) Oxidative injury in diseases of the central
nervous system: focus on Alzheimers disease. Am. J. Med. 109: 577585
2. Silvia Klinar B., Artemio Chang C. y Jorge Chanllio L (2006) Silvia Klinar
B., Artemio Chang C. y Jorge Chanllio L. Evaluacin de la actividad
antioxidante de Lactuca sativa L. (Lechuga).
3. FITOICA, Ao 1- Nmero 1- Enero del 2006
4. Mara Serrano Maldonado. 2010. EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE PARA EL APROVECHAMIENTO DEL MURDAGO
QUE INFESTA LA ZONA CHINAMPERA DE XOCHIMILCO. Mxico,
D.F. julio
5. Bisognin, 2002, p.718; Krstkov et al., 2003, p.14-15; InfoAgro: Pepino;
AgroNet; Report of the cucurbit working group.
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