Gentica Bacteriana

Mg. Mara Elena Salazar Salvatierra

CROMOSOMA BACTERIANO
Sinnimo: genforo
1 slo y contiene
todos los genes

Es circular en
la mayora de
bacterias

*Algunas excepciones:

Borrelia burgdorferi
Streptomyces lividans

Escherichia coli
Mycoplasma genitalum

4.7 x106 pb
580000pb

Codifican 470 genes

Linearizado
alcanza 1 mm.

Hay un superenrollamiento del ADN, adoptando una forma

mucho ms compacta que el circular.
En E. coli existen unos 50 dominios superenrollados que son
estables debido a su asociacin con protenas estables.
Giro
hacia la
derecha

Giro hacia la
izquierda. Ej.
arqueas

Etapas en la Decodificacin del Genoma

REPLICACIN

ADN

TTT

GTT

AAT

CAG

CAT

CTT

AAA

CAA

TTA

GTC

GTA

GAA

CAU

CUU

His

Leu

TRANSCRIPCIN

ARN

UUU

GUU

AAU

CAG

TRADUCCIN

PROTENA H2N-

Fen

Val

Asn

Gln

-COOH

Algunas diferencias
CLULA
EUCARITICA
Gen X
ADN

EXON

INTRON

EXON

INTRON

EXON

transcripcin
ARN sin
procesar

EXON

INTRON

EXON

INTRON

EXON

Procesamiento del ARN

ARN
maduro

Transporte al citoplasma
ARNm

Traduccin

PROTENA

Protena X

CLULA
PROCARITICA

ADN

GEN A

GEN B
Transcripcin

ARNm
policistrnico

Regin codificadora A

Regin codificadora B
Traduccin

Protena

PROTENA A

PROTENA B

DUPLICACIN DEL ADN

Llamada REPLICACIN, la doble

hlice se desenrolla y cada una
de las cadenas parentales sirve
como un molde para la sntesis de
una cadena complementaria nueva.
Se dice que es semiconservadora
puesto que cada duplex descendiente
contiene una cadena de la
estructura parental.

Secuencia especfica
de 300 bases

La replicacin es
frecuentemente
bidireccional

DUPLICACIN DEL ADN

REPLICACIN
Sintetiza cebadores (cadenas cortas)

Se mueven en direccin
3 5
Mantienen a las cadenas separadas

GENES:
Estructurales de tipo proteico (cistrones)
Del ARN ribosmico
Hay genes que se expresan en forma continua : GENES
CONSTITUTIVOS
Hay genes que son inducidos por sustratos especficos:
GENES INDUCIBLES
Tambin hay otras secuencias de nucletidos que controlan
la expresin de un gen:
Promotores
Operadores

Se estn realizando estudios comparativos

de los cromosomas de bacterias.
Bacterias estrechamente relacionadas tienen
una disposicin similar de los genes.
Incluso la disposicin de los genes en un
mismo opern en dos bacterias diferentes
puede ser diferente.
Pero en el origen y regin trmino de la
sntesis de ADN la organizacin es muy
similar en todo el Dominio.

La disposicin gentica puede brindar datos sobre

la evolucin del cromosoma.

OPERON
Es una unidad completa de expresin gnica.
Comprende un grupo de genes que codifican varios
polipptidos en un ARNm policistrnico.
Estn bajo el control de los mismos elementos reguladores.
** Los operones que poseen numerosos genes estructurales se
llaman policistrnicos.

CONSTITUYENTES

*Inductor
Gen Regulador
Elementos de control:
Operador
Promotor
Genes Estructurales

Hay OPERONES:

Inducibles
Represibles

CONTROL NEGATIVO
REPRESIN ENZIMTICA

promotor

operador

Gen 1

ARN
pol

Gen 2

INDUCCIN ENZIMTICA

Gen 3

La transcripcin
tiene lugar

promotor

operador

Gen 1

ARN
pol

Gen 2

Gen 3

La transcripcin
es bloqueada

Represor

promotor
ARN
pol

operador

Gen 1

Gen 2

Gen 3

La transcripcin
es bloqueada

promotor

operador

ARN
pol

correpresor

Gen 2

Gen 3

La transcripcin
tiene lugar

Represor

inductor

Gen 1

CONTROL POSITIVO
Sitio de unin
del activador

promotor

Gen 1

Gen 2

Gen 3

No hay
transcripcin

ARN
pol

En ausencia del inductor ni la

protena activadora ni la ARNpol
pueden unirse al ADN

Protena
activadora

promotor
ARN
pol

Gen 1

Gen 2

Gen 3

Hay transcripcin

Una molcula inductora se une a

la protena activadora que a su
vez se une con el sitio de
activacin, la ARNpol se une al
promotor y hay transcripcin

inductor

Un ejemplo de este tipo de control es el operon maltosa, pero como

una misma protena activadora funciona para varios operones se le
llama Reguln maltosa

OPERON Lac de E. coli

Medio con glicerol

La bacteria sintetiza pocas

enzimas para Lactosa

Medio con glicerol

+ lactosa

La bacteria sintetiza
rpidamente permeasas y
b-galactosidasa

OPERON Lac

INDUCCIN ENZIMTICA
No hay Lac

Si hay Lac

REPRESIN ENZIMTICA
No hay Trp

Operon
Trp

Si hay Trp

ELEMENTOS GENTICOS
EXTRACROMOSMICOS
PLSMIDOS

Secuencias de Insercin

ELEMENTOS
TRANSPONIBLES

1-2 Kb. Formas ms simples y no contienen

informacin gentica, slo la necesaria para
moverse.
Transposones
Son ms grandes y contienen varios genes. Se
replican como parte de una molcula
Algunos virus
Se integran en el genoma bacteriano sin
producir su muerte (estado lisognico).

Secuencias de Insercin IR
Secuencia de
corte

Secuencia de unin de la enzima

Tpasa

Regin interna que codifica

la Tpasa
Secuencias de reconocimiento de la
enzima transposasa (Tpasa)

Secuencia de
corte

TRANSPOSONES

Genes
que saltan, son elementos mviles que pueden
transferir ADN de una posicin a otra. Contiene genes extra,
que pueden codificar para algunas propiedades fenotpicas Ej.
Resistencia a gentamicina por Enterococcus sp.

Islas Genmicas

Las islas genmicas son segmentos de ADN presentes en el cromosoma de las bacterias
que difieren entre cepas estrechamente relacionadas. Ej. En dos cepas de E. coli, una que
posee una isla genmica que le confiere resistencia a un antibitico (cepa A) y otra que
no posee dicha isla (cepa B). Ambas son la misma especie, pero se diferencian en ese
segmento de ADN (isla genmica) que le confiere a la cepa A una ventaja adaptativa.
Pueden conferir, resistencia a antibiticos, patogenicidad, rutas de degradacin de
sacarosa y compuestos aromticos, resistencia al mercurio, sntesis de siderforos y
otros.

PLSMIDOS
Son elementos genticos pequeos que se replican
independientemente del cromosoma (replicones).
Casi todos son ADN bicatenario.
La mayor parte son circulares, pero tambin los hay lineales.

Tamao: varan de 1000 a ms de 1 milln de pb.

Normalmente son 1/20 del tamao del cromosoma.
Casi todo el ADN plasmdico est en una configuracin
superenrollada, que es la forma ms compacta.
Una simple rotura (nick) en una de las dos cadenas es
capaz de convertirlo en una forma circular abierta y si la
rotura es en ambas cadenas se vuelve lineal.

PLSMIDOS
Los plsmidos portan
informacin gentica, pero
que no son requeridos
para la vida bacteriana.
Pueden codificar:
Nivel alto de resistencia
a antibiticos.
Bacteriocinas.
Toxinas.
Determinantes de
virulencia.
Otros genes que
otorguen una ventaja
respecto al metabolismo
de ciertos sustratos.

Mapa Gentico del plsmido F (fertilidad)

de E. coli

Funcin de
transferencia

Indican tamao
del plsmido en
miles de pb

Origen de
replicacin

Tipos de Plsmidos

Replicacin del Plsmido

Bidireccional

Iniciacin de la replicacin
en un origen y luego en ambas
direcciones hasta completar
el crculo.

Unidireccional
Debido al pequeo tamao
del ADN en relacin
con el cromosoma.
La replicacin completa
ocurre rpidamente.

Las enzimas responsables de la replicacin

del plsmido son enzimas celulares normales.
La capacidad de 2 tipos diferentes de plsmido para
replicarse en la misma clula est controlado por
genes plasmdicos que controlan la replicacin del ADN.

REPLICACIN DE PLSMIDOS

La replicacin finaliza cuando las dos horquillas de

replicacin se encuentran a 180 desde el origen.

MUTACIONES
Cambio hereditarios en el genotipo:
Cepa original : tipo salvaje
Cepas con cambios: tipo mutante

Espontneos

Inducidos

MECANISMOS DE MUTACION

Sustitucin de
un nucletido
Purina por purina o pirimidina por
pirimidina: TRANSICIN
Purina por pirimidina o viceversa:
TRANSVERSIN

Delecin o
adicin de un
nucletido
Ej. Los transposones generan
mutaciones insercionales

MUTACIONES EN LOS
MICROORGANISMOS
Mutacin de transicin: Purina por Purina o
pirimidina por pirimidina.
Mutacin
por
transversin:
Purina
por
pirimidina o viceversa.
Mutacin silenciosa: modificacin de ADN que
no provoca cambios en la secuencia de aa de la
protena codificada.
Mutacin de sentido errneo: incorpora un aa
diferente en la protena (Mutac. conservadora).
Mutacin de desfase de lectura: altera el
sistema de lectura y aparece un pptido
absurdo y la interrupcin prematura de la
protena.

RESULTADOS DE LAS
MUTACIONES
Mutacin de
Sentido errneo

Mutacin Sin
Sentido
S

Mutacin de Error en
el Marco de lectura
UUA

CCU

CAU

Leu

Pro

His

UUA

ACC

Leu

Thr

UCA U..
Ser

Mutacin Letal

Mutacin Silenciosa
UUA

Leu

UUG

Leu

Mutacin Letal
condicional
Hasta
40C

*protena vital

No
ms de
35C

MECANISMOS DE REPARACIN
DEL ADN

Para minimizar los daos del ADN, las

bacterias
han
desarrollado
diversos
mecanismos de reparacin. Pueden ser:

1.

La reparacin directa del ADN consiste en

la eliminacin enzimtica del dao (Ej.
Dmeros de pirimidina)
La reparacin por escisin que rompe el
segmento de ADN que contiene las lesiones,
seguida de la sntesis de una nueva cadena de
ADN.

2.

A. Mecanismo de reparacin
por escisin generalizada
B. Mecanismo de reparacin
por escisin especializada

3.La
reparacin
posreplicacin
o
por
recombinacin, consiste en la recuperacin de la
informacin que falta mediante procesos de
recombinacin gentica.

4. La llamada respuesta SOS se caracteriza por la

induccin de numerosos genes tras la aparicin
del dao al ADN.
5. La reparacin propensa a error, es el ltimo
recurso de la bacteria antes de morir. Se usa
para llenar los espacios con una secuencia
aleatoria cuando no se dispone una plantilla de
ADN que oriente la reparacin.

Respuesta SOS

RecA: regulador positivo (coproteasa)

LexA: represor del sistema

IMPORTANCIA DE LAS MUTACIONES

El descubrimiento de la mutacin en un gen

puede ayudar a conocer la funcin de dicho gen.
Las mutaciones pueden ser dirigidas a una regin
decidida para
crear un mutante apropiado,
especialmente para producir vacunas.
Las mutaciones espontneas pueden resultar en
la emergencia de una bacteria resistente a un
antibitico.
Las mutaciones pueden resultar en cambios del
fenotipo tal como la apariencia de un nuevo
antgeno de superficie, cambio en la morfologa
de la colonia, exigencias nutricionales, etc.

MECANISMOS DE TRANSFERENCIA GENTICA

CONJUGACIN

Ocurre entre
2 bacterias
pertenecientes a una
misma especie o de
especies relacionadas.
Se han descrito en E.coli
Bacteroides, enterococos,
Estreptococo y
clostridios.

TRANSFORMACIN

Proceso mediante el
cual las bacterias
captan fragmentos
de ADN desnudo y
los incorporan
a sus genomas.

TRADUCCIN

Un fago transfiere
ADN desde la bacteria
en la cual se reprodujo
el virus a la bacteria
que infecta.

El fago debe tener

la caracterstica
de no producir lisis
del hospedero al cual
transfiere el
material gentico.

CONJUGACIN
La conjugacin es el
proceso por el que el
ADN pasa directamente
por contacto intercelular
durante el acoplamiento
de bacterias.
La
transferencia
es
unidireccional
de
una
clula donadora (Clula
F+) hasta una receptora
(clula F-) a travs del
pili sexual.
En
gram(+)
median
adhesinas.
En gram (-) slo se da
entre cepas de la misma
especie o especies muy
relacionadas.

 Depende de la presencia de un plsmido conjugativo

(plsmido F) pues lleva genes que median su propia
transferencia, Ej E. coli.
Los plsmidos conjugativos de mayor tamao
codifican generalmente colicinas o resistencia de Abs.

El ADN transferido por conjugacin no es una molcula

bicatenaria, sino monocatenaria.
El Gram (-) F+ tiene de 1-3 pilis sexuales que se unen
a las protenas de la membrana externa, luego los pilis
se contraen y unen a las dos clulas.
En las Gram (+) el F+ produce adhesinas.
En E. coli el proceso de conjugacin del total de su
genoma dura 90 minutos y pasan 3 millones
de pares de nucletidos.

TRANSFORMACIN
La clula receptora que
se encuentra en estado
fisiolgico de absorber e
incorporar este ADN de
la donadora se denomina
competente.
La competencia aparece al
final
de
la
fase
logartmica
de
crecimiento.

Mecanismo de transferencia del

ADN por transformacin en una
bacteria gram positiva:

a)

b)

c)

d)

Fijacin del ADN por una

protena de unin ligada a
membrana
Paso de 1 de las cadenas a la
clula, mientras que la otra
es degradada por una
nucleasa
La cadena simple dentro de
la clula se une a protenas
especficas y luego hay
recombinacin
Clula transformada

TRANSDUCCIN
Mediada por bacterifagos.
El ADN suministrado a las
clulas infectadas es luego
incorporado
al
genoma
bacteriano.
La Transduccin puede ser:
Especializada: se
transfieren genes especficos.
Generalizada: transferencia
aleatoria

TRANSDUCCIN
El fago lleva el ADN de la
bacteria donadora

El fago inserta el ADN

de la bacteria donadora
en la receptora

PROFAGO

Fase Ltica

Fase Lisognica

TRANSDUCCIN
ESPECIALIZADA
Sucesos lticos normales y
produccin
de
partculas
transductoras de genes
de
galactosa
en una clula de
Escherichia coli conteniendo
lambda, como profago.

Algunas Aplicaciones:
Ingeniera gentica:
Emplea tcnicas y mtodos desarrollados por especialistas en
gentica bacteriana con la finalidad de purificar, amplificar,
modificar y expresar secuencias genticas especficas.
Componentes Bsicos con los que cuenta la Ing. Gentica:

1. Vectores de Clonacin y expresin (plsmidos, fagos,

csmidos)
2. Secuencia de ADN
3. Diversas enzimas (Ej. De restriccin)
4. Ligasas de ADN

Clonar implica introducir un fragmento de ADN en un

vector.
Enzima de Restriccin: EcoRI

Vector: Plsmido

Enzimas: Ligasas

Algunas Aplicaciones:
Ampicilina

Medio +
Ampicilina