Pruebas bioqumicas para Escherichia Coli y Salmonella Tiphy

Nombre de la
prueba

Prueba
indol:

de

Determina la habilidad del

organismo de romper el
indol del triptfano.

Por lo tanto la E. colli

rompe el indol del
triptfano y salmonella
no lo hace.

Rojo de metilo:
Detecta la fermentacin
cido-mixta.
Se
acumulan
cidos
(actico, frmico, etc.),
relativamente fuertes y
bajan el pH del medio
hasta 4-5. Dicho cambio
de pH se detecta
aadiendo un indicador
(rojo de metilo) al cultivo

Voges Proskauer:
Detecta la fermentacin
butanodilica.
En
esta
fermentacin se
producen menor cantidad
de cidos que en la
fermentacin cido-mixta,
y una gran cantidad de
butanodiol. Mediante un
reactivo, (alfa-naftol y KOH
al 40%), se detecta la
presencia de un precursor
del
butanodiol
(acetilmetilcarbinol
o
acetona). La acetoina en
presencia de oxgeno se
oxida a diacetilo. El
diacetilo
origina
una
coloracin
roja
al
reaccionar con los restos
guanidnicos de algunos
aminocidos de la peptona
del medio (Ej. Arginina).

CITRATO
SIMMONS:

DE

Se determina la utilizacin
del citrato como nica
fuente de carbono y
energa. La prueba emplea
un medio definido (Koser)
con citrato como nica
fuente
carbonada
(se
detecta
turbidez).
Alternativamente se utiliza
el medio de Simmons:
utiliza un medio slido con
citrato sdico y un
indicador cido-base (azul
de bromotimol). En este
caso
se
detecta
la
alcalinizacin del medio
por el consumo del citrato.

TSI:
Es una prueba usada para
la fermentacin de la
glucosa, lactosa y sacarosa
y la produccin de H2S por
parte de la bacteria
sumndole produccin de
gas. El cambio de color
rojo-anaranjado (color
inicial del medio) a amarillo
indica fermentacin. Si se
fermenta nicamente la
glucosa el cambio de color
del
medio
ocurre
solamente en el fondo
debido a que se encuentra
10
veces
menos
concentrada
que
la
sacarosa y la lactosa,
adems los radicales libres
no son suficientes para
hacer virar el medio.

HIDROLASA
UREA:

DE

Los microorganismos que

poseen la enzima Ureasa
tienen la capacidad de
hidrolizar la urea contenida
en el medio con produccin
de amoniaco, para esta
prueba se utiliza el caldo
urea de stuart o agar urea
de christensen. El caldo
stuart est estabilizado con
sales de fosfato a un pH de
6.8. el microorganismo en
estudio
debe
producir
cantidades
relativamente
grandes a fin de superar el
sistema estabilizador del
medio y elevar el pH del
medio los suficiente como
para virar el indicador (por
encima de 8.0)

FENILALANINA
DESAMINASA:
En el medio de cultivo, el
extracto
de
levadura
aporta
los
nutrientes
necesarios
para
el
adecuado
desarrollo
bacteriano.
El aminocido fenilalanina
sufre la desaminacin
oxidativa catalizada por la
enzima
fenilalanina
desaminasa
(es
una
flavoprotena),
para
producir cido fenilpirvico
y amonaco.

SIM:

El indol, es uno de los

productos de la
degradacin metablicas
del amino acido triptfano.
Las bacterias que producen
la enzima triptofanasa son
capaces de hidrolizar y
desaminar el triptfano
con produccin de Indol,
cido piruvico y amoniaco.
La prueba del indo est
basada en la formacin de
un complejo rojo cuando el
Indol reacciona con el
grupo aldehdo pdimetilaminobenzaldehido.
Este es el principio activo
del reactivo de Kovacs.

Prueba
Oxidasa:

de

la

trata de un enzima que

oxida el citocromo C de
la cadena transportadora
de e-. Este se detecta
utilizando el tetra para
fenilendiamina:
el
reactivo
de
oxidasa
contiene este compuesto
que va a ser oxidado por
la citocromo C oxidasa.
En estado reducido es
incolora, pero cuando se
oxida vira a prpura.

(-)

AGAR XLD:
la degradacin a acido a
partir de la Xilosa,
lactosa
y
sacarosa
producen un viraje a
amarillo del indicador
Rojo
de
fenol.
El
tiosulfato y sal de hierro
revelan la formacin de
H2S por la precipitacin
del sulfuro de hierro
negro en las colonias.
Las
bacterias
que
descarboxilan la lisina,
producen cadaverina, se
reconocen
por
la
presencia de un color
rojo-purpreo debido al
aumento
de
pH
alrededor
de
las
colonias.
El
efecto
inhibidor es muy dbil.

Fermentacin
dulcitol

Fermentacin de sorbitol

FERMENTACION DE
ARABINOSA

Un resultado positivo indicando la

fermentacin de los carbohidratos se
muestra mediante un cambio de color
amarillo.

de

Un resultado positivo indicando la

fermentacin de los carbohidratos se
muestra mediante un cambio de color
amarillo.
Un resultado negativo se muestra
mediante un color azul

Un resultado positivo indicando la

fermentacin de los carbohidratos se
muestra mediante un cambio de color
amarillo.
Un resultado negativo se muestra
mediante un color azul

MIO Medio:
Por su composicin, es
posible
detectar
3
reacciones en un mismo
tubo: movilidad, presencia
de ornitina decarboxilasa e
indol.
La movilidad se demuestra
por un enturbiamiento del
medio o por crecimiento
que difunde ms all de la
lnea
de
inoculacin.
La reaccin positiva a la
ornitina est dada por un
color prpura del medio.
Debido a la fermentacin
de la glucosa se reduce el
pH
produciendo
una
condicin
cida
y
originando que el indicador
de
pH
prpura
de
bromocresol
vire
al
amarillo. La presencia de
acidez, otorga condiciones
ptimas para la actividad
de la enzima ornitina
decarboxilasa,
la
cual
decarboxila la ornitina
presente.
Por
decarboxilacin,
se
alcaliniza el medio, con el
consecuente viraje del
indicador hacia el color
prpura.