I.

OBJETIVOS:
1.1. Comprender la tcnica de cultivo in vitro de hojas.
1.2. Establecer in vitro secciones de hoja de diferentes especies.
1.3. Evaluar la respuesta del explante en condiciones controladas in vitro.
1.4.
Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad,
cooperacin y perseverancia.
II. MARCO TERICO:
En el avance logrado por las ciencias biolgicas en las ltimas dcadas se han desarrollado tcnicas
que posibilitan el estudio de las plantas a nivel celular y molecular. Estos nuevos enfoques,
conocidos colectivamente como biotecnologa, se estn convirtiendo en herramientas poderosas para
el mejoramiento de las plantas y el progreso de la agricultura. La Biotecnologa vegetal experimenta
hoy una evolucin rpida que ha suscitado gran inters en la mayor parte de las naciones del
mundo. El cultivo de tejidos es importante no slo porque es el rea de la biotecnologa que tiene
actualmente mayor aplicacin prctica en la agricultura, sino por ser una herramienta verstil para el
estudio de los problemas bsicos y aplicados de la biologa de las plantas; constituye, en efecto, el
puente necesario para llevar las manipulaciones genticas desde el laboratorio hasta el campo.
Cultivo in vitro:
El cultivo in vitro comprende un heterogneo grupo de tcnicas mediante las cuales un explante
(fracciones de un tejido u rgano que se extrae de la planta con fines de cultivo in vitro) se cultiva
aspticamente en un medio de composicin definida y se incuba en condiciones ambientales
controladas.
Los objetivos perseguidos con la utilizacin del cultivo in vitro de tejidos vegetales son
numerosos y diferentes: Micropropagacin, conservacin de germoplasma, mejoramiento gentico y
obtencin de plantas libres de virus y patgenos.
Micropropagacin:
La Micropropagacin es la tcnica que ha trascendido con xito de los mbitos experimentales a la
aplicacin prctica.

La Micropropagacin es la multiplicacin masiva in vitro cuyo fundamento es la totipotencialidad de la

clulas o la capacidad de una clula vegetal de dar lugar al desarrollo de una planta completa, es
decir las clulas totipotentes son clulas somticas que han retenido su capacidad de dividirse y
diferenciarse en una planta madura si se coloca en el medio adecuado.
En la actualidad, la Micropropagacin se practica con xito en especies hortcolas, ornamentales y
ms recientemente en especies leosas. En algunas especies, esta metodologa ha mostrado
importantes ventajas en comparacin con los sistemas convencionales de propagacin las ms
importantes son:
Incremento acelerado del nmero de plantas derivadas por genotipo. Reduccin del
tiempo de multiplicacin.
Posibilidad de multiplicar grandes cantidades de plantas en una
superficie reducida, a bajos costos y en tiempos econmicamente costeables.
Mayor control sobre la sanidad del material que se propaga.
Facilidad para transportar el material in vitro de un pas a otro, con menos
restricciones aduaneras.
Posibilidad de multiplicar rpidamente una variedad de la cual slo
existen pocos individuos.
Los pasos fundamentales para micropropagar eficientemente una especie son: Establecimiento
asptico del cultivo in vitro, multiplicacin o crecimiento del explante, enraizamiento de los brotes y la
preparacin para su trasplante al suelo.
Establecimiento asptico del cultivo in vitro:
Una vez seleccionado el mejor explante se requiere desinfectarlo superficialmente, porque en el
medio de cultivo pueden crecer microorganismos, principalmente bacterias y hongos, que
competirn ventajosamente con el explante. La seleccin y concentracin de los desinfectantes y el
tiempo de desinfeccin se determinan, en gran medida, por las caractersticas del explante.
El explante debe responder eficientemente bajo las condiciones in vitro, sin embargo se debe
considerar el hecho que el aislamiento de un tejido u rgano del resto de la planta provoca un estado
de estrs que altera su metabolismo celular y, en forma importante, su balance hormonal. Un
buen explante es aquel cuyas clulas sobreviven, en una alta proporcin y que luego responde
eficientemente
a
las
condiciones
in
vitro.

Cultivo in vitro de hojas:

Un cultivo de rganos tiene el objetivo de alcanzar, a partir de una estructura organizada, la
morfologa y la fisiologa que lo identifican con los rganos de su especie.
El cultivo in vitro de rganos muy inmaduros, como son las secciones de hojas tiene el objetivo de
conocer hasta donde se llega en el desarrollo normal de dicho rgano en condiciones in vitro y que
propiedades del medio contribuyen a su desarrollo, sin embargo an se tienen grandes incgnitas o
interrogantes sobre los nutrientes y los estmulos hacia el rgano in situ y lo que puede ser dado o
asimilado en el cultivo in vitro.
El problema se ha enfocado sustancialmente hacia que tan rpido se inicia una hoja en posicin y se
convierte en una hoja verdadera, sin importar que tan grande emerja la hoja en s.
III. MATERIALES:
3.1. Material vegetal:
Hojas de

(Nombre cientfico).

3.2. Medios de cultivo:

Medio de Murashige y Skoog, suplementado con ANA,
GA3,
.
3.3. Material de vidrio: Beakers,
250 mL. Matraz, 100
mL. Tubo de ensayo.
3.4. Insumos:
Agua destilada estril.
3.5. Reactivos:
Etanol (70%).
Hipoclorito de sodio (2.5%).
3.6. Instrumentos: Bistures.
Mechero Bunsen.
Pinzas.

BAP,

3.7. Otros:
Algodn
. Ligas.
Papel secante estril.
Plastic wrap.
3.8. Equipos:
Autoclave.
Cmara de flujo laminar.
Estufa.
IV. METODOLOGA:
4.1. Preparacin para el cultivo in vitro:
Los instrumentos como pinzas y bistures se envuelven en papel craft antes de ser
sometidos a la esterilizacin en el autoclave.
La cristalera, adems de poder ser esterilizada en autoclave, tambin puede ser
esterilizada por calor seco en una estufa a 150C durante 2 o 3 horas.
La superficie de la mesa de trabajo, paredes y techo de la cmara de flujo laminar deben
limpiarse con un pao humedecido con Hipoclorito de sodio al 2.5% y despus con etanol
al 70%.
Encender la cmara de flujo laminar y colocar el mechero Bunsen, 15
min. Antes de iniciar el trabajo.
Evitar la interrupcin o inversin del flujo de aire.
El operador debe llevar una bata de laboratorio limpia, adems debe lavarse las manos
y brazos con jabn carblico y despus con etanol al 70%.
Introducir todos los materiales necesarios para el cultivo in vitro en la
cmara de flujo laminar, previamente esterilizados con etanol al 70%.
4.2. Desinfestacin del material vegetal:
Recolectar hojas jvenes y sanas.
Lavar cuidadosamente el haz y el envs de las hojas con agua corriente.
En un matraz, colocar el material vegetal en inmersin con etanol al
70% durante 30 segundos.
Eliminar por decantacin el etanol al 70%.
Colocar en inmersin con Hipoclorito de sodio al 2.5% por 3 min.

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Antes de finalizar los 3 min, introducir el matraz con el material vegetal inmerso
en el Hipoclorito de sodio en la cmara de flujo laminar.
4.3. Aislamiento de los explantes:
En la cmara de flujo laminar, decantar el Hipoclorito de sodio y proceder a realizar tres
enjuagues con movimientos rotatorios utilizando agua destilada estril.
Las pinzas y bistures se mantienen sumergidos en etanol al 70% hasta el
momento de su uso, y se esterilizan conforme se van empleando, por medio de
frecuentes inmersiones en alcohol, seguidas por flameo y enfriamiento.
Despus de la esterilizacin y utilizando las pinzas colocar el explante sobre placas de
vidrio estril o papel secante estril.
Utilizando un bistur estril retirar el peciolo y todo el margen de la hoja, as como las
superficies cortadas que han estado en contacto con leja.
Eliminar la nervadura central y cortar la lmina en secciones de aproximadamente
1 cm2.
4.4. Inoculacin de los explantes:
Durante la inoculacin, el cuello del recipiente que contiene el medio slido debe ser
flameado rpidamente.
Las secciones de hojas se colocan ligeramente en el agar de manera que el envs se
ponga en contacto con el medio de cultivo.
Colocar cinco secciones de hoja por frasco de cultivo.
Tapar el frasco con plastic wrap, sujetndolo con ligas a la boca del frasco.
Reponer el papel secante sobre el cual se trabaj y dejar los
instrumentos inmersos en etanol al 70%.

V. PROCEDIMIENTO DETALLADO:
5.1. Preparacin para el cultivo in vitro:
Primero se realiz la esterilizacin en la autoclave forrando antes con papel craft los
instrumentos metlicos y de vidrio
Luego se limpi las paredes de la cmara de flujo laminar o la caja que sirvi como
sustitucin a esta con un trapo con Hipoclorito de sodio al 2.5% y despus con otro trapo
baado con etanol al 70%.
Despus se encendi la cmara de flujo laminar y se coloc el mechero que fue
desinfectado con etanol antes junto con los instrumentos necesarios que fueron esterilizados
anteriormente pero antes de ello se lavaron las manos o hasta la parte que entro en la
cmara con cido carblico y luego con etanol 70%

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

4.2. Desinfestacin del material vegetal:

Se encogieron hojas jovenes y sanas de las plantas que se trajeron, primero se lavaron las
hojas con agua, luego se coloco en un envase en el cual se agrego etanol al 70% durante
aproximadamnet unos 30 segundos suego se elimino el etanol y se coloco el hipoclorito de
sodio al 2.5 por unos aproximadamente tres minutos y luego se coloco en la camara de flujo
laminar
4.3. Aislamiento de los explantes:
Se elimin el hipoclorito de sodio y luego se enjuago con agua destilada, las pinzas y bistures
se mantuvieron en el etanol 70 % hasta que se usaron y luego se esterilizo cada vez que se us
colocndolo en etanol 70% y luego por un flameo luego de la esterilizacin se coloc el explante
en papel estril con ayuda de la pinzas y luego se retir con el bistur los mrgenes de las hojas
y las superficies que estuvieron en contacto con el hipoclorito de sodio

4.4. Inoculacin de los explantes:

Posteriormente se colocaron las hojas en el agar ya sea echado o parado, se colocaron
de 2 a 3 hojas luego se sell el frasco con plastic wrap

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

VI. RESULTADOS Y DISCUSIN:

Se guardaron los envases junto con los explantes y se dejaron en los estantes

Se observ despus de dos semanas el desarrollo de las plntulas en la mitad de los frascos pero en la otra
mitad se observo la proliferacin de lo que parece ser hongos y bacterias

VII. RECOMENDACIONES:

Tener ms cuidado al momento e esterilizar cada vez que se usa los instrumentos
Lavar bien las hojas con agua despus de que estas se sumergieron en el hipoclorito de sodio

VIII. CONCLUSIONES:
El cultivo in vitro de hojas es muy til, sencillo y fcil de realizar y una de sus aplicaciones es la
micropropagacin para cierto grupo de plantas pero tambin en general
IX. CUESTIONARIO:

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Enumera cinco especies vegetales micropropagadas por la tcnica de cultivo in vitro de

hojas.

Caa de azucar (Saccharum officinarum L.)

Hojas cotiledones de Citrus sinensis (L.) Osb.
Begonias
Violeta africana
Peperonias

Describe y comenta la importancia del proceso de obtencin de shikonina a partir del

cultivo de clulas vegetales.
La shikonina es un pigmento que se extrae de las races de lithospermum erythrorhyzon, una planta
perenne nativa de Japn, China y el sureste asitico, donde crece en forma silvestre. Esta planta est
sufriendo una rpida disminucin de su poblacin, y adems su rendimiento en shikonina depende de la
distribucin geogrfica y del clima, lo que hace muy variable la disponibilidad de este pigmento. Aunque
esta se puede sintetizar qumicamente, el proceso es econmicamente impractible,ya que se requiere de
12 pasos y tiene un rendimiento final de solo 0.7%
La biosntesis de shikonina por medio de cultivos de cultivos celulares de L.erythrorhyson e el mejor
ejemplo que se puede dar sobre la aplicabilidad de la tecnologa para la produccin de metabolitos
secundarios. Por un lado, las dificultades para la obtencin y la sntesis qumica del pigmento
caracterizan el tipo de problemas que el cultivo in vitro puede resolver, y por otro, la metodologa
empleada ejemplifica el uso de las tcnicas. La shikonina ya entro en la etapa de produccin en gran
escala: la produce la compaa petroqumica Mitsui del Japn y constituye el primer producto industrial
de esta tecnologa
La estrategia para la produccin de shikonina por clulas cultivada en vitro consisti primero en el
desarrollo de un sistema de cultivo de dos fases, una de rpido crecimiento celular y otra de produccin
de pigmento; las dos fases dieron como resultado un incremento cuatro veces mayor que el obtenido en
el sistema de una sola fase. Luego se hizo la optimizacin de las condiciones del medio de cultivo de
cada fase, lo que aumento 13 veces la productividad. Posteriormente, se hizo la seleccin de las lneas
celulares derivada de protoplastos, cuyas elevadas velocidades s de crecimiento y produccin de
shikonina incrementaron an ms la productividad
La optimizacin de la oxigenacin de los cultivos ( a nivel de planta piloto) para alcanzar una densidad
celular elevada constituyo el ltimo paso en un proceso de optimizacin que produce cantidades de
shikonina 800 veces superiores a las obtenidas de la plata natural. Segn investigadores de Mitsui, la
cantidad de pigmento producido en un fermentador de 759 litros en 14 das equivale a la podra
extraerse de las plantas en una superficie de aproximadamente 18 ha.
La shikonina producida in vitro se est vendiendo actualmente a US$4000 por Kilogramo
En la actualidad se encuentran desarrollados a escala industrial de produccin los procesos para
obtencin de shikonina por cultivo de clulas de Lithospermunerythrohizon, puesto a punto por la
Industrias Petroqumicas Mitsui

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Produccin de shikonina por suspensiones celulares de Lithospermum erythrorhizon

Planta entera
-La extraccin se realiza en plantas de aproximadamente 3 aos.
Suspensiones celulares
-2,4-D estimula el crecimiento pero no la produccin.
-Las bajas concentraciones de nitrgeno y la elicitacin inducen la produccin de shikonina.
Proceso para la produccin de shikonina a partir de clulas de Lithospermum erythrorhizon por Mitsui
Petrochemical Ind.

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Se utilizan fermentadores de agitacin mecnica y tambor rotatorio.

La productividad de shikonina es 840 veces superior a la de planta entera.

IX. BIBLIOGRAFA:
AYERBE, L. Cultivo in vitro de las plantas superiores. Ediciones Mundi- Prensa. Espaa. 1990.
HURTADO, D., MERINO, M. Cultivo de tejidos vegetales. Editorial Trillas.
Mxico. 2000.
RENNEBERG, R. Biotecnologa para principiantes. Editorial Revert. Espaa.
2008.
ROCA, W., MROGINSKI, L. Cultivo de tejidos en la agricultura. Fundamentos y aplicaciones.
Centro internacional de Agricultura Tropical (CIAT). Colombia. 1993.
X. ANEXOS:

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

http://www.unne.edu.ar/unnevieja/Web/cyt/com2004/5-Agrarias/A-007.pdf
http://www.mag.go.cr/rev_meso/v08n01_074.pdf
https://docs.google.com/document/edit?id=18AtFKKBI2uB9oVunQ6BlyKLVPxULOjjrNRYbn2fHeg&hl=es&pli=1}
file:///C:/Users/Downloads/Tema%2011Biorreactores1.pdf
http://books.google.com.pe/books?id=EXijYNw55DUC&pg=PA229&lpg=PA229&dq=shikonina&so
urce=bl&ots=0_un99YDEw&sig=sk2UBs7kcFopEXiNiT3ej7xU89w&hl=es&sa=X&ei=yzZIVKfSFseQ
gwTVxIHYBQ&ved=0CBoQ6AEwAA#v=onepage&q=shikonina&f=false

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

I. OBJETIVOS:
1.1.
Comprender la tcnica de cultivo in vitro de yemas vegetativas y segmentos nodales.
1.2. Establecer in vitro yemas vegetativas y segmentos nodales.
1.3. Evaluar la respuesta del explante en condiciones controladas in vitro.
1.4.
Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad,
cooperacin y perseverancia.
II. MARCO TERICO:
A partir de la dcada del 60, se inici la era comercial del cultivo de tejidos, desde entonces pices
caulinares, meristemos, segmentos nodales y yemas axilares, han sido utilizados en este propsito.
El principio estriba en hacer crecer una planta a partir del explante inicial o quebrar la dominancia
apical mediante la aplicacin de citoquininas, estimulando la formacin de brotes laterales.
Cultivo in vitro de yemas vegetativas:
Yemas vegetativas, responsables del crecimiento vertical:
Las plantas durante su ciclo vital continan creciendo y originando nuevos rganos en ciertas pocas
del ao, para lograrlo la planta posee zonas especializadas que poseen tejidos de crecimiento,
llamados meristemos, ubicados en distintos puntos del vegetal.
El crecimiento vertical se produce por la actividad de meristemos primarios, tambin llamados
apicales por estar ubicados en los pices caulinar y radical.
En el tallo, el meristemo primario se ubica en el interior de las yemas o brotes, protegido por los
primordios foliares.
Los tallos presentan dos clases de yemas:
Yemas terminales o apicales: Ubicadas en el pice caulinar o extremo del tallo y de las ramas. Al
desarrollarse
producen
el
largo
de
los
mismos

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Yemas laterales o axilares: Ubicadas entre el ngulo formado entre el peciolo de la hoja y el
tallo, su desarrollo origina ramas laterales.
Este es el mtodo ms natural de propagacin vegetativa de las plantas in vitro. Cuando se
utiliza el mtodo de yemas, se asla un pice del vstago sobre un medio nutritivo, bajo la
influencia de una concentracin relativamente alta de citoquininas, intentndose as su desarrollo
in vitro. sta elevada concentracin de citoquininas frena la dominancia apical y permite el
desarrollo de las yemas axilares.
La velocidad de propagacin depende del nmero de yemas disponibles; si este nmero es
pequeo la velocidad de multiplicacin resultar lenta. Cuantas ms hojas se inicien, habr mayor
nmero de yemas disponibles, y, por lo tanto, la propagacin ser ms rpida.
El cultivo in vitro de yemas es el mtodo de propagacin in vitro ms importante, por las siguientes
razones:
El mtodo resulta generalmente ms simple que otros mtodos de multiplicacin.
La velocidad de multiplicacin es relativamente alta. Generalmente
se mantiene la estabilidad gentica.
El crecimiento de las plantas obtenidas es muy bueno, quiz debido a la juvenilizacin y/o
falta de infecciones.
Los explantes utilizados se encuentran determinados para el crecimiento
vegetativo y se desenvolvern naturalmente en plantas integras.
Cultivo in vitro de segmentos nodales:
Se conoce as al aislamiento de una yema junto con una porcin de tallo, para obtener un vstago a
partir de la yema. Cuando se obtiene un nmero suficientemente grande de vstagos, stos son
enraizados y finalmente se realiza la transferencia al suelo.
III. MATERIALES:
3.1. Material vegetal:
Segmentos de tallos con yemas vegetativas de clavel (Dianthus caryophyllus) o
rosa (Rosa spp.)
3.2. Medios de cultivo:
Medio de Murashige y Skoog, suplementado con ANA,
GA3,
.

Ing. Cinthia Crdova Barrios

BAP,

Mgter. Roxana Bardales lvarez

3.3. Material de vidrio: Beakers,

250 mL. Matraz, 100
mL. Tubo de ensayo.
3.4. Insumos:
Agua destilada estril.
3.5. Reactivos:
Agua destilada estril.
Etanol (70%).
Hipoclorito de sodio (2.5%).
3.6. Instrumentos: Bistures.
Mechero Bunsen.
Pinzas.
3.7. Otros: Algodn.
Ligas.
Papel secante estril.
Plastic wrap.
3.8. Equipos:
Autoclave.
Cmara de flujo laminar.
Estufa.
IV. METODOLOGA:
4.1. Desinfestacin del material vegetal:
Recolectar segmentos de tallos con yemas axilares o apicales de rosa o clavel.
Seleccionar segmentos nodales de aproximadamente 3 cm, con una o dos yemas
axilares o apicales.
Eliminar las hojas dejando solo la base de los peciolos o cubierta que rodea las yemas
vegetativas.
Lavar cuidadosamente los segmentos de tallos con agua corriente.
En un matraz, colocar el material vegetal en inmersin con etanol al
70% durante 30 segundos.

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Eliminar por decantacin el etanol al 70%.

Colocar en inmersin con Hipoclorito de sodio al 2.5% por 3 min.
Antes de finalizar los 3 min, introducir el matraz con el material vegetal inmerso
en el Hipoclorito de sodio en la cmara de flujo laminar.
4.2. Aislamiento de los explantes:
En la cmara de flujo laminar, decantar el Hipoclorito de sodio y proceder a realizar tres
enjuagues con movimientos rotatorios utilizando agua destilada estril.
Las pinzas y bistures se mantienen sumergidos en etanol al 70% hasta el
momento de su uso, y se esterilizan conforme se van empleando, por medio de
frecuentes inmersiones en alcohol, seguidas por flameo y enfriamiento.
Despus de la esterilizacin, utilizando la pinza estril y fra, colocar el
explante sobre el papel secante estril.
Con las pinzas tomar el tallo principal y retirar cuidadosamente la base de los
pecolos o cubierta de las yemas.
Cultivo in vitro de yemas vegetativas:
Con el bistur estril, retirar cuidadosamente la yema, tratando de mantenerla en la
punta de ste.
Cultivo in vitro de segmentos nodales:
Con el bistur estril cortar y retirar los extremos de los segmentos nodales que han
estado en contacto con leja.
4.3. Inoculacin de los explantes:
Cultivo in vitro de yemas vegetativas:
La yema retenida en el bistur se coloca ligeramente en el agar manteniendo su
polaridad.
Cultivo in vitro de segmentos nodales:
Con la pinza tomar el tallo y colocarlo verticalmente en el agar manteniendo su
polaridad.

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Figura
N1: Cultivo in
vitro de segmentos nodales: Existen yemas axilares y apicales, las cuales despus
de su aislamiento (1,2), originan un vstago (3), el cual se regenera y enraza (4)
V. PROCEDIMIENTO DETALLADO:
5.1. Desinfestacin del material vegetal:
Se recolecto plantas de rosa de las cuales se extrajo los segmentos de tallo y
yemas axilares de unos aproximadamente 2 cm.
Se lavaron los segmentos con agua corriente
En un matraz se coloc los explantes y se agreg etanol al 70% durante unos 30
segundos y luego se elimino
Luego se coloc el hipoclorito de sodio 2.5% por unos 3 min despus antes de los 3
minutos se coloc en la cmara de flujo laminar

5.2. Aislamiento de los explantes:

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

 Se elimin el hipoclorito de sodio y luego se realiz los enjuagues con agua destilada
estril
Se dej las pinzas y todo el material metlico en alcohol hasta el momento que se us ,
luego se flameo y enfri y se us sosteniendo el explante este antes se cort de un
tamao relativamente pequeo y luego se coloc en el medio de cultivo de forma
vertical para mantener la polaridad

VI. RESULTADOS Y DISCUSIN:

Se guardaron los medios en los cuales se encontraban los segmentos nodales

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Se observ despus de dos semanas que la mayora de las explantes se haban desarrollado
correctamente y solo dos contenan hongos

VII. CONCLUSIONES:
La micropropagacion por medio de segmentos nodales y yemas vegetativas es una herramienta
muy til aplicada en la reproduccin de cierto tipo de plantas importantes como por ejemplo en vas
de extincin o que no se pueden reproducir mediante otras tcnicas

VIII. CUESTIONARIO:
Nombrar 4 especies que se obtienen mediante el cultivo in vitro de yemas
vegetativas y/o segmentos nodales. Definir la especie, caractersticas de la
planta donante, medio nutritivo utilizado, concentracin de reguladores de
crecimiento y las condiciones de incubacin de los cultivos.
Planta de yuca: presenta rosetas de hojas con forma de espadas y es una planta
sana y vigorosa, El medio de cultivo para la regeneracin de plantas a partir de
microestacas est compuesto por los nutrimentos necesarios para el crecimiento de
las plantas, principalmente macro y micronutrimentos, fuentes de carbono, vitaminas
y reguladores de crecimiento. Para la propagacin de los clones de yuca se utiliza la
composicin bsica del medio de cultivo Murashige y Skoog (1962), con las
siguientes modificaciones: las sales minerales se diluyen a un cuarto de su
concentracin, la tiamina a la mitad de su concentracin y se duplica la concentracin
de la solucin de hierro; se agrega como regulador de crecimiento una auxina
sinttica, el cido naftalenactico (ANA) 0,02 mg/l y agar 7 g/l.

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Cultivo in vitro y establecimiento de yemas de rosa (rosa spp)

Se sembr el explante en un frasco con medio MS enriquecido con BAP y AIA de
manera que las yemas en cada explante sembrado quedenorientadas hacia la boca del
frasco; se flamela boca del frasco y se sell el mismo conplstico adherente y una liga.
Se sembraron 2frascos, 2 explantes por frasco; se rotularon los frascos y se incubaron
en condiciones de oscuridad, se observaron los resultados despus de 7 y 14 das.
Bambusa vulgaris var Vittata (bambu)
Los segmentos nodales y las yemas apicales fueron cultivados en condiciones
ambientales controladas de luz y temperatura, en un medio de cultivo MS con reduccin
de los nitratos a la mitad y suplementado con cinco concentraciones de citoquinina (6BAP). En todos los ensayos se realizaron 40 repeticiones por tratamiento
Platano: las yemas paicales del vstago se cultivaron en el medio de mrehige y
skoog(MS), sales y viteminas, mas 30 g.L-1 de sacarosa, 50 mg.L-1 de acido
ascrbico,7g.L-1 de agara agar y Ba de concentraciones de 0, 2,5 y 5 mg L-1. El cultivo
se realizo en frascos de vidrio con 30 ml de medio , ph 5,8 antes de su esterilizacin a
temperatura de 121C y 1,1 Kgm-2 de presin por 15 min.los esplantes fueron
expuestos a luz blanca fluorescente continua( 35umol.m-2.s-1) a 25 C

Nombrar cuatro principios activos que se obtienen en un biorreactor a partir de

clulas vegetales.
Usando alginato de calcio, se inmovilizaron clulas de p. somniferumcapaces de
transformar codeionona en codena con una eficiencia edl 70.4% en suspensiones
agitadas; en un borreactor la eficiencia fue de 42%
Se han utilizado cultivos en suspensin de cannabis sativa L. para transformar el
cannabidiol en cannabielsoina y en un compuesto aun no identificado
La biotransformacion de B- metil digitoxina en B- meildogoxina por medio de clulas
de digitalis lanata inmovilizadas en alginato. En un treactor de 200 lt, estas clulas
levan a cabo la conversin, por mas de 170 dia, auna velocida constante; en un lapso
de 13 dias se pueden estraer 430 mg de B- metil digoxina por litro de cultivo, lo cual
representa el 70% del suatrato aadiso y la base para producir 800000 tabletas
cardivascukares
La 1-O-(1-14C)hexadecil-2-acetil-glicero-3-fodfolinaes una factor de activacin de las
plaquetas, que se emplea en la investigacin biomdica y que es extremadamente

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

difcil de sintetizar qumicamente. Aunque las plantas no producen esta clase de

compuestos, las clulas cultivas in vitro se pueden usar como biorreactores para
transformar sus presursores; se emplearon cultivos celulare de brassica napus para
convertir los 1-O-alquil-sn-gliceroles en us correspondientes 1-O-alquil-2-acil
glicero-3-fosfocolinas, con una eficiencia del 70-80% la hidrolisis lacalina y la
acetilacin posteriores producen el derivado final
IX. BIBLIOGRAFA:
AYERBE, L. Cultivo in vitro de las plantas superiores. Ediciones MundiPrensa. Espaa. 1990.
HURTADO, D., MERINO, M. Cultivo de tejidos vegetales. Editorial Trillas.
Mxico. 2000.
ROCA, W., MROGINSKI, L. Cultivo de tejidos en la agricultura. Fundamentos
y aplicaciones. Centro internacional de Agricultura Tropical (CIAT). Colombia.
1993.
X. GLOSARIO:
pice del vstago: meristemo del vstago, apical o terminal, o lateral que
contiene algunos primordios foliares o hojas.
pice radicular: Extremo de la raz, el cual se alarga distancindose cada vez ms
del cuello.
pice caulinar: Extremo del tallo, que contina el alargamiento de ste o
elevacin de su extremo.
Explante: Una porcin de tejido escindida, u rgano tomado de la planta, para iniciar un
cultivo.
Dominancia apical: Fenmeno por el que la yema terminal de un vstago impide
el crecimiento de las yemas axilares.
Meristemo: Conjunto de clulas en divisin en el pice de la raz o vstago, en el
cambium intercalar de las yemas, hojas y flores.
Polaridad: Antagonismo entre la parte superior e inferior del cuerpo del vegetal.
Se reconocen un polo caulinar y uno radical.

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez

Primordios foliares: Estado rudimentario de las hojas en una yema.

Segmentos nodales: Aislamiento de una yema, junto con una porcin de tallo, para
obtener un vstago a partir de la yema.
XI. ANEXOS:

Ing. Cinthia Crdova Barrios

Mgter. Roxana Bardales lvarez