Manual Prácticas Fisiología

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
MANUAL DE LABORATORIO DE
FISIOLOGA GENERAL PARA BILOGOS
Dr. Ivn Villanueva Becerril

Dr. Toms Fregoso Aguilar
Academia de Fisiologa General para Bilogos
NORMAS DE LABORATORIO
1. EL trabajo prctico y la asignacin de material se hace por equipos de 3 a 4 personas.

2. Cada equipo ocupa una mesa que ser la misma durante todo el curso.
3. Los alumnos deben usar bata en las sesiones prcticas.
4. Cada equipo debe traer a las sesiones prcticas un estuche de diseccin que contenga, al
menos:
Tijeras quirrgicas de punta fina
Pinzas quirrgicas finas
Aguja de diseccin
Bistur con navaja
Hilo y aguja convencionales
5. Durante todo el curso cada alumno debe traer a las sesiones una franela, un marcador
indeleble y una calculadora con funciones estadsticas.
6. Al terminar la sesin prctica cada mesa debe estar limpia y los bancos acomodados en
su lugar. Los animales sacrificados deben colocarse en una bolsa de plstico en el lugar
designado por los profesores.
7. El material roto, descompuesto o extraviado debe ser repuesto en las siguientes dos
semanas de haber ocurrido el percance. De no ser as, los integrantes del equipo no
tendrn derecho a asistir a las sesiones posteriores.
8. Slo se tendr derecho a calificacin si se ha cumplido con un mnimo de 80% de
asistencias tanto a las sesiones de teora como a las de prctica. Se tomar como retardo
la llegada dentro de los 15 min. siguientes a la hora de entrada a la clase. Tres retardos
constituyen una falta.
9. Dentro del laboratorio no se permite la ingestin de alimentos ni fumar. As mismo, tanto
en el laboratorio como en las clases tericas, queda estrictamente prohibido el uso de
telfonos celulares.
La parte prctica del curso de Fisiologa General tiene como propsito el presentar y
familiarizar al alumno con la metodologa experimental bsica que se utiliza para generar,
establecer e incluso reexaminar los conceptos tericos de la fisiologa en todos sus niveles.
Las actividades dentro de cada prctica incluyen la planeacin de un experimento en funcin
de una hiptesis, la realizacin del experimento, el anlisis exhaustivo de los resultados, la
emisin de conclusiones y la presentacin del trabajo al pblico, tanto por un reporte escrito
como por una presentacin oral.
El presente manual propone una serie de experimentos ya diseados para comprobar ciertos
conceptos fisiolgicos aceptados. Note, sin embargo, que la informacin terica provista por
este manual no es suficiente para sustentar el objetivo ni el anlisis de los resultados de los
experimento propuestos, por lo que es necesario que consulte fuentes de informacin ms
especficas, como las que se proponen al final de cada prctica.
Las actividades que debe realizar el alumno en cada experimento son las siguientes:
1. Antes de presentarse a la sesin prctica debe comprender el experimento, la finalidad
de ste (objetivo), los factores de variacin que aplicar, las variables que medir y los
posibles resultados.
2. Realizar el experimento segn las instrucciones.
3. Reunir los datos de su equipo y, en su caso, del grupo.
4. Calcular las medidas estadsticas bsicas (media y error estndar) y presentar los datos
en grficas o tablas.
5. Hacer los contrastes estadsticos pertinentes (prueba de t, ANOVA o equivalentes no
paramtricos).
6. Junto con su equipo, reunir la informacin terica que sustente el objetivo y que
explique los resultados obtenidos.
7. Junto con su equipo, redactar el reporte segn los lineamientos que se anexan
(siguiente pgina).
8. Junto con su equipo, organizar una presentacin oral con la misma informacin que el
reporte.
CMO REPORTAR UN TRABAJO CIENTFICO

El reporte de un trabajo cientfico debe estar redactado en un lenguaje claro y conciso, con uso de
tecnicismos slo cuando sea necesario. Debe ser lo suficientemente explcito como para que cualquier
persona adulta al leerlo se forme una idea general del propsito y las aportaciones del trabajo.
Un reporte cientfico debe incluir los siguientes puntos: 1) cartula, 2) resumen, 3) introduccin, 4)
objetivos, 5) materiales y mtodos 6) resultados, 7) discusin, 8) conclusiones y 9) referencias
bibliogrficas. A continuacin se abundar un poco en cada uno de ellos:
CARTULA
Este apartado debe incluir el ttulo del trabajo (o prctica), los nombres de los integrantes en orden
alfabtico y comenzando por el apellido paterno. Se debe incluir el equipo al que pertenecen, as como
la institucin en donde se realiz el trabajo.
RESUMEN
Es un texto de no ms de 250 palabras en el cual se describe brevemente el trabajo realizado. El
resumen debe (i) establecer los principales objetivos del trabajo, (ii) describir brevemente la
metodologa empleada, (iii) resumir los resultados y (iv) establecer las conclusiones principales. Este
captulo es importante porque sirve como una gua rpida cuando se quiere obtener informacin sobre
algn tema y no se tiene tiempo para leer con detalle el reporte completo.
INTRODUCCIN
El propsito de este captulo es describir brevemente el problema terico que se quiere abordar, de
manera que el lector tenga la suficiente informacin para justificar la realizacin del trabajo, comprender
por qu se emplea esa metodologa y evaluar la importancia del estudio.
En la introduccin se suelen incluir observaciones de otros autores que han estudiado previamente el
tema, y que sirven de apoyo al trabajo. En este caso se incluye la cita entre parntesis con el apellido(s)
del(os) autor(es) que estudiaron el tema y el ao en que se public su trabajo. Por ejemplo: es
probable que el caf causara nusea. Sin embargo, se ha demostrado que la cafena causa inhibicin del
vmito en gatos (lvarez y Smith, 1998). Cada cita incluida en el texto debe anotarse completa en la
seccin de REFERENCIAS, al final del reporte (vase ms adelante).
Para el curso de Fisiologa General para la carrera de Bilogo, la introduccin deber abarcar entre una
cuartilla y una cuartilla y media.
OBJETIVOS
En esta seccin se debe establecer, en trminos muy concretos, lo que se pretende obtener al realizar
los experimentos planteados, de acuerdo con la exposicin del problema que se hizo en la introduccin.
Por ejemplo, si se est estudiando la fisiologa del msculo esqueltico, un objetivo podra ser:
determinar los cambios en la fuerza de contraccin al aplicar un estmulo elctrico prolongado. Note
que:
a) el objetivo es la pregunta concreta que el experimentador se compromete a contestar mediante
el experimento, y que debe contribuir a aclarar el problema que se expuso en la introduccin.
b) Se debe cuidar que el objetivo no sea ambiguo o engaoso, como el siguiente caso: ... el
objetivo es conocer la fisiologa del msculo esqueltico.
MATERIALES Y MTODOS
Este captulo debe incluir los materiales, animales y equipo utilizados en el trabajo, as como describir
brevemente la metodologa empleada, de tal forma que algn lector familiarizado con el problema pueda
repetir los experimentos solamente con esta informacin. Esta descripcin no debe ser un instructivo,
sino una exposicin breve de los principales pasos del mtodo experimental, aunque especificando
claramente las variantes particulares utilizadas, por ejemplo, dosis de los frmacos administrados,
temperatura y tiempo de incubacin, volumen de lquido inyectado, tiempo e intensidad de estimulacin,
etc.
Tambin se debe incluir en los materiales y mtodos el tipo y la cantidad de sujetos de experimentacin
que se utilizaron. En el caso de animales de laboratorio, se debe indicar el gnero y, de ser posible, la
especie (ejemplo: Rattus norvegicus, que es la rata de laboratorio).
Esta seccin tambin debe incluir el tipo de anlisis estadstico que se utiliz para comparar los datos
obtenidos y el valor de la probabilidad alfa que se emple (ejemplo: media y error estndar, prueba t de
Student, prueba de Ji cuadrada, anlisis de variancia, etc.).
RESULTADOS
Este captulo consiste en la presentacin de los datos obtenidos. La presentacin se hace en forma de
una figura (una tabla o una grfica) acompaada de una descripcin escrita de los efectos o tendencias
generales que se observan en ella.
FIGURAS. Salvo que sea estrictamente necesario, las tablas o grficas no deben mostrar datos
individuales, sino estadsticos de tendencia central (generalmente media) y de desviacin (generalmente
error estndar).
Cada figura debe incluir:

a) un pie de figura donde se explique muy brevemente el tratamiento aplicado para obtener esos
resultados.
b) Los resultados del anlisis estadstico.
c) Un nmero de figura con el que debe ser citada en el texto.
En la seccin de RESULTADOS no se debe interpretar o discutir los resultados, nicamente se describen.
Observe el ejemplo:
Durante el periodo del ensayo, los animales mantenidos

con la dieta comercial aumentaron su peso corporal en ms
de 60 g. Los grupos alimentados con dietas de alto
contenido de carbohidratos y de lpidos tuvieron aumentos
significativamente mayores que el grupo control (P<0.05),
que no fueron diferentes entre s (figura 3).
Ganancia de peso (g)
120
CH
LIP
90
60
30
0
CTL
Figura 3. Ganancia de peso en un periodo de 3

meses de un grupo de ratas alimentadas con una
dieta control (CTL), rica en carbohidratos (CH) o
rica en lpidos (LIP). Los datos son medias E.E.
(n=6). *: P<0.05 vs. dieta control.
DISCUSIN
La discusin de los resultados es la parte del reporte en donde el experimentador da su interpretacin
de los datos y analiza su hiptesis en funcin de ellos. Este anlisis debe tener como base el fondo
terico que se expuso en la introduccin para dar una explicacin terica lgica de los resultados
obtenidos. Por ltimo el anlisis debe contestar cmo los resultados responden al objetivo y, si no lo
hacen, debe exponer las razones lgicas de ello.
La discusin de resultados suele consistir esencialmente de razonamientos del autor apoyados en citas
bibliogrficas adicionales, es decir, en datos extrados de trabajos previos en el tema y que ayudan a
explicar el caso presente. Por ejemplo, si en el trabajo se estudiaron caractersticas de la sinapsis, una
parte de la discusin podra estar redactada as: nuestros resultados indican que en la sinapsis
interviene una sustancia qumica que ayuda en el proceso de transmisin de informacin entre una
clula y la otra, lo cual coincide con las propiedades descritas para la acetilcolina (Anderson y cols.,
1983).
CONCLUSIONES
En este captulo se escriben en forma concisa (no ms de dos renglones por experimento) los principales
hallazgos obtenidos del trabajo experimental y cmo responden al objetivo planteado al inicio.
Se da por entendido que el experimento fue hecho para cumplir el objetivo, y por lo tanto no debe
escribirse en la seccin de conclusiones: se cumplieron los objetivos propuestos; esto no es una
conclusin.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS (BIBLIOGRAFA)

En esta seccin se deben anotar completas las referencias bibliogrficas que se citaron a lo largo del
texto de la introduccin y la discusin, pues pueden ser del inters del lector para profundizar en el
tema del trabajo.
Aunque existen diferentes formas de escribir una referencia bibliogrfica, por consenso se ha optado por
la siguiente:
Si la cita se obtuvo de una revista cientfica:
Anderson D.C., King S., Parsons S.M. (1983). Pharmacological characterization of the acetylcholine
transport system in purified Torpedo synaptic vesicles. Mol. Pharmacol. 24: 42 48.
Note que:
a) Los autores se anotan todos como apellido paterno seguido de las iniciales del nombre.
b) El ttulo se escribe todo en minsculas exceptuando los nombres propios y las palabras cuya
notacin requiera el uso de maysculas (Mel-1, PACAP, GRP, VIP, c-Fos, ACTH, etc.).
c) Se abrevia el nombre de la revista y se omite el nmero; slo se anota el volumen: pginas.
Si la cita es de un libro:
Katzung B.G. (1996). Farmacologa bsica y clnica. El Manual Moderno. 6 ed. Mxico, D.F. 111 127.
Note, adems, que:
a) Se subraya el nombre de la editorial, omitiendo la palabra editorial.
b) Si la edicin es 1 no se anota, y edicin se abrevia ed.
PRCTICA No. 1
INTRODUCCIN AL MANEJO DE DATOS
ACTIVIDADES PROPUESTAS
1. Determine la estatura (cm), el peso (kg) y la frecuencia cardiaca (lat/min) de todos los compaeros del
grupo y construya con estos datos una tabla que incluya tambin el gnero de la persona (M, F).
Para determinar la frecuencia cardiaca: coloque las yemas de sus dedos medio
e ndice sobre la cara interna de la mueca del brazo izquierdo, presionando
suavemente hasta que sienta las pulsaciones. Cuente el nmero de pulsaciones en
30 segundos y multiplquelo por 2 para reportarlo en latidos/minuto.
2. Utilizando herramientas estadsticas compare los grupos obtenidos y conteste las siguientes
preguntas:
El gnero de las personas induce diferencias en el peso corporal?
El gnero induce diferencias en la estatura?
El gnero induce diferencias en la frecuencia de latido del corazn?
La estatura induce diferencias en el peso corporal?
La estatura induce diferencias en la frecuencia cardiaca?
El peso induce diferencias en la frecuencia cardiaca?
y, adems:
Qu tipo de informacin arroja una prueba estadstica? Cmo se interpreta?
3. Reporte sus resultados como grficas en las que represente la variacin dentro de los grupos y los casos
en los que la diferencia sea estadsticamente significativa (probabilidad < 0.05).
4. Discuta sus resultados tomando en consideracin los siguientes puntos. No olvide citar sus fuentes
de informacin.
Qu relacin existe entre el gnero, el peso corporal y la estatura en humanos?
Qu relacin existe entre el peso (tamao) corporal y la frecuencia cardiaca?
Qu relacin existe entre la estatura (efecto de la gravedad) y la frecuencia cardiaca en

mamferos?
Prctica 1. Manejo de datos
Gnero
(M, F)
Estatura
(cm)
Peso
(kg)
Frec.card.
(lat/min)
Gnero
(M, F)
B
10
Estatura
(cm)
Peso
(kg)
Frec.card.
(lat/min)
7 Para hacer una comparacin estadstica por prueba t de Student:

a) calcule las medidas descriptivas de cada uno de los grupos de datos (media y error estndar).
media = X =
xi
error estndar = e.e. =
donde:
n-1
desviacin
= estndar
muestral
n-1
xi2 - ( xi )2 / n
n -1
b) Calcule la diferencia entre los grupos en trminos de un nmero t, con la siguiente frmula:
t =
Xa - Xb
(e.e.a)2+(e.e.b)2
y calcule tambin los grados de libertad correspondientes:
Grados de libertad = df = na+ nb -2

c) Compare el valor obtenido con el valor lmite que aparece en las tablas de la distribucin
de t. Los valores de probabilidad estn representados en la parte superior de la tabla.
Sitese en el valor de probabilidad de 0.05 (es decir, 5%) y encuentre el valor de t
correspondiente de acuerdo con los grados de libertad de sus datos.
Note que para un cierto nmero de grados de
libertad, al aumentar el valor de t (es decir, a mayor
diferencia entre los grupos) la probabilidad es
menor.
Si el valor de t de sus datos es igual o mayor que el de la tabla (esto es, una
probabilidad menor de 5%) podr suponer que los grupos que est comparando son
diferentes entre s.
Si la probabilidad es mayor de 0.05 (5%), se considera que todos sus datos
pertenecen a una misma poblacin y que las diferencias entre ellos no son debidas al
tratamiento aplicado, sino a la variacin normal entre individuos.
11
Bibliografa sugerida:
Schmidt-Nielsen K. Animal Physiology. Adaptation and Environment. Cambridge University

Press, 1997.
Eckert R y Randall D. Fisiologa Animal. Mecanismos y Adaptaciones. Interamericana-McGraw

Hill, 1989.
Steel DG y Torrie JH. Bioestadstica. Principios y Procedimientos; 2 ed. McGraw-Hill, Mxico,

1988.
12
PRCTICA No. 2
CONCEPTOS BSICOS EN HOMEOSTASIS
ACTIVIDADES
Experimento 1.
El experimento est basado en la caracterstica de los animales endotermos-
homeotermos de regular su temperatura corporal. Por lo tanto, pueden ser considerados como sistemas
biolgicos de regulacin de la cantidad de calor. En este experimento se aplicarn perturbaciones de tipo

trmico a dos de estos sistemas: la rata y el humano, y se analizar la manera en que cada uno enfrenta
la perturbacin, considerando que los dos sistemas son diferentes entre s (al menos en el tamao). Se
aplicarn perturbaciones en ambos sentidos, es decir, tanto hacia arriba (que tiendan a aumentar la
cantidad de calor) como hacia abajo (que la reduzcan) y se determinar el impacto de la perturbacin
sobre el sistema, esto es, el cambio en la temperatura de cada sistema. Las actividades propuestas son
las siguientes:
1a) Prepare tres cmaras en las que crear un ambiente de temperatura controlada. En la primera de
ellas la temperatura deber ser de ms de 30 C, en la segunda de menos de 12 C y en la tercera
la temperatura no ser alterada (es decir, quedar alrededor de 20 C). sta ser una situacin
testigo.
1b)
Prepare tres individuos de cada tipo (por equipo), cada uno de los cuales ir a una de las cmaras.
Mida su temperatura corporal antes de ingresar.
Para medir la temperatura de la rata: sujete al animal cubrindole la vista

con un trapo; unte un poco de vaselina en el bulbo del termmetro e
introdzcalo suavemente en el recto, aproximadamente 5 cm, y mantngalo
por 3 minutos o hasta que la lectura se estabilice.
1c) Mida la temperatura de cada individuo al momento de ingresar a la cmara (t=0) y cada 5 minutos
durante media hora. Al cabo de este periodo retire la perturbacin (regrese a los individuos a la
temperatura no alterada) y contine midiendo por 15 minutos ms. Registre los cambios
comportamentales ms evidentes durante la perturbacin.

1d) Haga los anlisis necesarios a fin de contestar las siguientes preguntas:
Existen diferencias en la temperatura corporal entre ratas y humanos?
Todos los grupos empleados tiene la misma temperatura basal?
Alguna de las perturbaciones altera la temperatura corporal de la rata o del humano?
13
Prctica 2. Homeostasis
Experimento 2. Algunos sistemas no biolgicos tienen capacidad de resistir los cambios inducidos por
perturbaciones ambientales (aunque esto no significa estrictamente que tengan capacidad de regulacin).
En este experimento se analizar la manera en que un sistema no biolgico sencillo resiste diferentes
tipos de perturbacin externa. Las actividades propuestas son las siguientes:
2a) Utilice un frasco con salida. Coloque una pinza Mohr en la manguera de entrada y otra en la
manguera de salida. Establezca un flujo constante de agua a travs del frasco y controle la entrada y
la salida de manera que el nivel de agua se estabilice, y mrquelo.
2b) Sobre el sistema estable aplique una perturbacin transitoria (por ejemplo, agregue o retire un cierto
volumen de agua) y observe los cambios en el nivel durante varios minutos hasta que se estabilice
nuevamente.
2c) Aplique ahora una perturbacin continua, primero sobre la entrada (abriendo o cerrando levemente la
pinza) y despus sobre la salida. Observe durante varios minutos y registre los cambios en cada caso.
J
Discuta sus resultados tomando en consideracin los siguientes puntos (no olvide citar sus fuentes de
informacin):
La diferencia entre los trminos regulacin y control.
Los elementos bsicos de un sistema de regulacin.
La relacin entre el tamao corporal y la temperatura en mamferos (y cmo se relaciona esto

con sus resultados).
Qu diferencias encuentra entre los dos tipos de sistema analizados, en cuanto a su naturaleza
y a su respuesta ante perturbaciones transitorias y continuas?
Qu ventajas y qu desventajas tiene la regulacin? Qu alternativas biolgicas existen a la

regulacin?
u
14
Rata
Temperatura colonal (C)

6
Observaciones
1
Humano
Temperatura alta ( 30C)
Observaciones
RESULTADOS
Experimento 1
15
16
Rata

6
Observaciones
1
2
Humano
Temperatura baja (< 10 C)
Observaciones
Rata

6
Observaciones
1
Humano
Temperatura no alterada ( 23 C)
Observaciones
17
Experimento 2.
Tipo de perturbacin aplicada
Respuesta del sistema
l
Material necesario (por equipo):
3 termmetros clnicos (prop. personal)
1 caja de plstico para rata, con tapa
1 regla de plstico transparente (prop. personal)
1 botella con salida
3 termmetros de laboratorio
2 pinzas Mohr
3 cronmetros
1 vaso de precipitados de 50 ml
Russek M. y Cabanac M. Regulacin y Control en Biologa. Instituto Politcnico Nacional, Mxico,

1990.
Schmidt-Nielsen K. Animal Physiology. Adaptation and Environment. Cambridge University

Press, 1997.
Eckert R y Randall D. Fisiologa Animal. Mecanismos y Adaptaciones. Interamericana-McGraw

Hill, 1989.
18
PRCTICA No. 3
SIMULACIN DEL POTENCIAL DE ACCIN
Prcticamente todas las clulas, independientemente de su complejidad, forman y mantienen gradientes

inicos a travs de su membrana plasmtica. Estos gradientes crean una diferencia de carga elctrica entre el
interior de la clula y el medio extracelular, lo que se conoce como potencial de membrana. Solamente
algunos tipos celulares (las llamadas clulas excitables) son capaces de modificar drsticamente su potencial
de membrana y recuperarlo despus. Esta inversin sbita y transitoria del potencial de membrana es
denominada potencial de accin (PA), y es un fenmeno electroqumico esencial para la comunicacin entre
neuronas y para la transmisin de seales de clula a clula.
Existen algunos modelos animales que, por las caractersticas que presentan sus axones, ofrecen una
oportunidad de estudiar las propiedades del PA; tal es el caso del axn gigante del calamar Loligo sp. A partir
de este invertebrado y de algunos vertebrados inferiores como la rana, se han establecido preparaciones
biolgicas y modelos de simulacin por computadora para comprobar la funcin de clulas excitables.
En el laboratorio se utilizar un modelo de simulacin por computadora del PA (programa AXOVACS), as
como una preparacin de nervio citico de rana. En ambos casos, se mide el potencial de la membrana de la
clula mientras se induce la generacin del PA aplicando estimulacin elctrica en forma de pulsos
cuadrados o comandos. Un comando es una descarga de corriente elctrica que se aplica a una
preparacin con una intensidad (A) y una duracin (milisegundos: ms) definidas.
Tome en consideracin que un estmulo elctrico es una inyeccin de cargas a la clula, y por lo tanto
produce un cambio proporcional en la distribucin de cargas en la membrana. Este cambio de cargas se
registra como la respuesta pasiva o electrotnica. En algunos casos, cuando este cambio es suficientemente
grande, lleva a la apertura de canales dependientes de voltaje y genera entonces una respuesta elctrica
activa, que es el potencial de accin (figura 1).

voltmetro
(registro)
estimulador
+
ojo: la respuesta pasiva vara

segn el estmulo, mientras
que el PA es siempre igual
I
+30
Duracin (ms)
0
++
+ +
+
Intensidad (A)
-60
t
Un pulso cuadrado o comando.
I
t
Fig. 1. Preparacin experimental para el estudio del PA.
19
Prctica 3. Potencial de accin
PARTE A. Simulacin del potencial de accin en computadora:

El programa AXOVACS (Axovacs electrophisiology computer lab. vers. 10 , 1987. Axon Instruments,
Inc.) simula la respuesta elctrica de un axn gigante de calamar, como ocurrira en una preparacin en la
que se insertaran en la clula electrodos de estimulacin y de registro. El programa permite controlar las
caractersticas del estmulo aplicado (tanto intensidad como duracin) y observar la respuesta sobre una
escala de tiempo.
1. Umbral (OPCIN 4): El objetivo de este experimento es encontrar la intensidad mnima (umbral)
que debe tener un estmulo para generar la respuesta activa del axn.
1a) Con un valor de potencial de membrana de 60 mV y una duracin de 0.1 ms, encuentre la menor
intensidad de estmulo (en A) que es necesaria para desencadenar un PA. Comience con valores
bajos (por ejemplo, 30 A) y si no observa la forma clsica del potencial de accin, realice varias
corridas aumentando la intensidad de estimulacin. Considere que el valor mximo de estimulacin
en este modelo es de 2000 A. Observe la respuesta pasiva y difernciela del PA.
1b) Una vez encontrado el valor umbral, reduzca la duracin del estmulo (por ejemplo a 0.05 ms) y
observe la respuesta. Si es necesario, encuentre el nuevo valor umbral.
1c) Reduzca nuevamente la duracin y encuentre el umbral correspondiente. Pruebe ahora valores
mayores (por ejemplo, 1 o 2 ms) y haga lo propio. Rena 10 pares de valores duracinintensidad. Considere que la duracin puede ser tan breve como 0.001 ms o tan grande como 10
ms.
1d) Con los datos reunidos construya una grfica en la que las abscisas sean los valores de duracin y
las ordenadas los de intensidad necesaria (curva duracin-intensidad).
Observe el trazo del PA en la pantalla. En qu momento se

abren y cierran los conductos dependientes de voltaje para
los iones Na+ y K+? Se relaciona este hecho con la forma
del PA?.
h Cmo es el PA cuando se aplica un estmulo subumbral, uno

umbral y uno supraumbral?
h Qu significa el hecho de que la curva duracin-intensidad

sea asinttica (es decir, que nunca toca los ejes)?
20
Duracin
(ms)
Intensidad
(A)
h En la siguiente representacin del PA, seale:

a. la variable representada en cada eje,
b. el momento en que se aplica el estmulo,
c. las fases de despolarizacin, repolarizacin e
hiperpolarizacin,
d. el momento en que aumenta la
conductancia de Na+,
e. el momento en que aumenta la

conductancia de K+,
f. el potencial de reposo,
g. el potencial de equilibrio (Nernst) del Na+,
h. el potencial de equilibrio (Nernst) del K+,
i. la despolarizacin pasiva,
j. el umbral de apertura de los canales.
I
2. Periodo refractario absoluto (PRA) y periodo refractario relativo (PRR)
(OPCIN 6):
Cuando es estimulada, una clula excitable cambia su potencial de membrana solamente un momento e
inmediatamente despus recupera su estado inicial. Por lo tanto, si a un axn se le aplica un estmulo
prolongado (como en la figura 2) no permanece despolarizado todo este tiempo, sino que sufre slo una
pocas despolarizaciones rpidas. Es evidente que, despus de una PA, el axn cae en un estado en el que no
es capaz de disparar nuevamente aunque est siendo estimulado. El tiempo en el que el axn es resistente o
refractario a la estimulacin (es decir, no genera un

nuevo PA) es llamado periodo refractario, y dura slo
V (mV)
unos pocos milisegundos. Este periodo refractario
+30
puede ser visto como un periodo de recuperacin del
periodo refractario
axn antes de disparar nuevamente. Al inicio del

periodo refractario, el axn es resistente a cualquier
estmulo, por intenso que sea (periodo refractario
absoluto), pero a medida que pasa el tiempo la

resistencia disminuye y entonces el axn s puede
responder pero slo si el estmulo es bastante ms
intenso (periodo refractario relativo).
-60
estmulo
prolongado
I (A)
5
10
15
t (ms)
Fig. 2. Cambios en el potencial de membrana

durante estimulacin continua
21
Seleccione la opcin 6 del programa. Aplique un primer estmulo umbral o ligeramente supraumbral
de 0.1 ms de duracin que comience en 1 ms. Aplique 20 ms despus un segundo estmulo de la
misma intensidad y duracin, y observe. Comience a acercar el segundo estmulo y, en cuanto
desaparezca la segunda respuesta, aumente la intensidad al doble. Qu es lo que observa? Contine
aproximando el segundo estmulo al primero, hasta que desaparezca, y aumente nuevamente la intensidad.
Considere que la intensidad mxima que puede aplicar es de 2000 A, y que un estmulo de estas
caractersticas produce una respuesta pasiva y un artefacto muy grandes.
Encuentre la duracin del periodo refractario absoluto y del periodo refractario relativo.
Aplicacin de un segundo estmulo

fuera del periodo refractario
+30
+30
-60
-60
I
primer
estmulo
2o.
estmulo
Aplicacin de un segundo estmulo

dentro del periodo refractario
ojo: slo aparece

la respuesta pasiva
PRA:
PRR:
Duracin total del PR:
3. Suma de estmulos subumbrales:

Cada estmulo aplicado a una clula produce en sta una respuesta pasiva. La respuesta pasiva puede ser
vista como un cambio de cargas en la clula producido por el estmulo aplicado. En un estmulo umbral o
supraumbral, la respuesta pasiva es suficientemente intensa para desencadenar un PA. Si el estmulo es poco
intenso (subumbral) se producir la respuesta pasiva pero sta no inducir PA. En algunos casos se pueden
sumar las respuestas pasivas inducidas por dos estmulos diferentes.
3a) Seleccione la misma opcin 6 del programa. Elija valores de un estmulo subumbral (que por s mismo
produzca respuesta pasiva pero no llegue a desencadenar PA; por ejemplo 50 A con 0.1 ms de
duracin) y aplique uno a los 10 ms (start: 10) y otro igual a los 20 ms. Observe la respuesta pasiva
inducida por cada uno.
3b) Sin modificar la intensidad ni la duracin, acorte gradualmente el tiempo entre los estmulos, hasta que
las respuestas se sobrepongan. Qu sucede cuando se suman las respuestas pasivas? Cmo explica
esto?
22
4. Canales dependientes de voltaje (OPCIN 7):

El programa AXOVACS permite simular la adicin de dos drogas especficas a la preparacin de axn, y
observar su efecto sobre el PA. Las drogas en cuestin son la saxitoxina (STX) y el tetraetilamonio (TEA), que
bloquean cada una un tipo especfico de canal dependiente de voltaje. Seleccione la opcin 7 del programa,
con una escala de 10 ms y pruebe por separado cada droga, en diferentes concentraciones, de la siguiente
manera:
4a) Aplique un estmulo de las caractersticas que sugiere el programa (intensidad de 320 A; duracin
0.1 ms), pero que comience en 1 ms (start: 1). Realice una corrida de simulacin bsica del PA.
4b) Sobreponindola a la anterior (superimpose: yes) haga una nueva corrida de las mismas
caractersticas pero aplicando ahora una concentracin baja de saxitoxina (por ejemplo, 1 nM).
Deje la concentracin de TEA en 0.
4c) Sobre el mismo trazo sobreponga corridas aumentando gradualmente la concentracin de STX
(como sugerencia, utilice 2, 5, 7, 10 y 20 nM). Observe el comportamiento del PA en cada caso. Note
tambin el comportamiento de las conductancias (G) de cada uno de los iones, en la parte inferior de la
grfica.
4d) Borre los trazos anteriores (superimpose: no) y pruebe ahora el efecto del tetraetilamonio (como
sugerencia, utilice concentraciones de 1, 2, 5, 7, 10, 20, 50 y 100 mM).
Cules son los iones principales que intervienen en el PA y en qu fase interviene cada uno?
Qu efecto tiene la saxitoxina sobre el PA y a qu se debe esto? Cul es el efecto del
tetraetilamonio?
Qu puede decir sobre la potencia de los dos frmacos para alterar el PA?
e
5. Concentraciones inicas (OPCIN 8):
El PA depende del movimiento de ciertos iones a travs de los canales abiertos. Este movimiento de
iones, a su vez, depende de la diferencia de concentracin de ellos entre el interior y el exterior de la clula
(los llamados gradientes). Por lo tanto, al modificar los gradientes de iones debe modificarse la forma del PA.
23
Cuando se utiliza una preparacin de axn gigante de calamar, una manera de modificar el gradiente es
sumergir el axn en un lquido preparado con distintas cantidades de estos iones. Como resultado, se
modifica la diferencia entre el exterior y el interior y, por lo tanto, la forma del PA. El programa AXOVACS
permite aumentar o disminuir la concentracin extracelular de sodio o de potasio, para estudiar el PA en estas
condiciones. Note que la concentracin est expresada como la relacin exterior/interior, donde 1 = conc.
normal; 0.5 = conc. extracelular de la mitad de la normal; 2 = conc. extracelular del doble de la normal.
5a) Realice una corrida de simulacin bsica para una relacin de concentraciones externa/interna de 1
para Na+ y K+. Sobreponga a sta otra corrida aumentando la concentracin extracelular de Na+
al doble y reducindola despus a la mitad de lo normal. Qu sucede con el PA?
5b) Realice otra corrida en condiciones normales y modifique despus la concentracin extracelular
de K+, primero al doble y despus a la mitad. Observe la forma del PA.
Condicin
Efecto sobre el PA (respecto a la concentracin normal)
Conc. extracel. de Na+

doble de lo normal
Conc. extracel. de Na+
mitad de lo normal
Conc. extracel. de K+
doble de lo normal
Conc. extracel. de K+
mitad de lo normal
Qu efecto tiene el cambio de la concentracin extracelular de Na+ o de K+ sobre los

gradientes electroqumicos y sobre los potenciales de equilibrio de estos iones?
Cmo se modifica la forma del PA al aumentar o disminuir la concentracin extracelular de

Na+? Qu sucede al cambiar la concentracin de K+?
Cmo explica el hecho de que los cambios en Na+ y en K+ tengan distintos efectos sobre
la forma del PA?
24
6. Actividad marcapasos:
En la misma opcin 8 eleve ligeramente la concentracin extracelular de potasio (K conc ratio =
1.5) y seleccione la escala de 50 ms. Haga una corrida sin aplicar estmulo (seleccione intensidad 0
A). Observe la respuesta de la clula.
W
PARTE B. Potencial de accin compuesto en preparacin de
anfibio.
Utilice una preparacin de nervio citico de rana acoplado por un lado a un estimulador y por otro a un
osciloscopio. Esta preparacin permite el registro extracelular de los eventos elctricos de todo el nervio, por
lo que el PA tiene una forma diferente al registrado con electrodos intracelulares, y se denomina potencial de
accin compuesto. De modo similar a la parte A, determine:

a) Estmulos umbral y mximo.
El PA compuesto no tiene siempre la misma intensidad. Adems de la intensidad umbral, encuentre
el valor del estmulo que produce la respuesta mxima.
b) Velocidad de conduccin:
Despus de la estimulacin del nervio, la respuesta (el PA) no ocurre inmediatamente, sino unos
instantes despus. El tiempo que transcurre entre la aplicacin del estmulo y la aparicin de la
respuesta se conoce como periodo de latencia, y depende de la distancia entre los electrodos de
estimulacin y los de registro.
En su preparacin experimental encuentre la duracin del periodo de latencia y mida la
distancia entre los electrodos de estimulacin y los de registro. Con estos datos calcule la
velocidad de conduccin del nervio, expresada en m/s.

c) Suma de estmulos subumbrales:
Observe el efecto de la suma de dos estmulos
subumbrales tal como lo hizo con el programa AXOVACS.
Estmulo umbral:
Estmulo mximo:
Periodo de latencia:
ms
Distancia entre los

electrodos:
mm
encuentre la duracin de los periodos refractarios
Velocidad de conduccin:
m/s
absoluto y relativo.
PR Absoluto:
ms
PR Relativo:
ms
d) Periodos refractarios:
Siguiendo el mismo mtodo que en el programa,
25
Presentacin de resultados: Esquematice los trazos de las simulaciones realizadas en cada

experiencia, describiendo brevemente qu sucede en cada una.
Discuta tomando en consideracin los siguientes puntos:
Qu es excitabilidad y cules son las clulas excitables en el organismo?
Cmo son las concentraciones de externa e interna de los iones Na+ y K+ en una clula excitable?
Qu es un potencial de accin y cules son sus caractersticas?
A qu se refiere el trmino umbral?
Qu clase de estmulo fisiolgico puede generar un PA en una clula excitable?
Qu es el periodo refractario relativo y absoluto, y cmo se explica?
En que situacin fisiolgica ocurre suma de estmulos subumbrales?
Por qu se dice que un PA se autorregenera?
Qu caractersticas definen a un tejido marcapasos?
Qu diferencias existen entre un PA y un PA compuesto, y a qu se deben?
Cul es la velocidad de conduccin en un nervio de mamfero y por qu es diferente de la de

rana?
Qu factores morfolgicos determinan la velocidad con la que una fibra nerviosa conduce el PA?
Carpenter S.H. Neurofisiologa. Manual Moderno. Mxico, D.F., 1996.

Eckert R., Randall D. y Augustine G. Fisiologa Animal: Mecanismos y Adaptaciones. 3 Ed.
Interamericana McGraw-Hill. Madrid, 1990.
Ganong F.W. Fisiologa Mdica. 17a Ed. Manual Moderno, Mxico, D.F., 2000.
Kandel E.R., Schwartz J.H. y Jessell T.M. Neurociencia y Conducta. Prentice Hall, Madrid, 1997.
Muoz-Martnez J. y Garca X. (eds.). Fisiologa. Clulas, rganos y sistemas, Unidad I. Fondo de
Cultura Econmica, Mxico, D.F:, 1998.
Nobak R.C. y Demarest R.J. El Sistema Nervioso: Introduccin y Repaso. 4 Ed. Interamericana
McGraw-Hill. Mxico, D.F., 1980.
26
PRCTICA No. 4
RECEPTORES SENSORIALES
ACTIVIDADES
Experimento 1. Receptores cutneos. En este experimento se evaluar la importancia del vello
corporal en la percepcin de estmulos mecnicos aplicados sobre la piel.
1a) Seleccione dos reas sobre la piel del dorso de la mano del sujeto, una con vello y otra sin l. Trace
sobre cada rea una cuadrcula con 25 subdivisiones de 4 mm2 (utilice el sello disponible en el almacn).
1b) Sin que el sujeto observe, aplique estmulos iguales con el
estesimetro sobre la cuadrcula en orden aleatorio, de
modo que cada subdivisin sea tocada 2 veces. Registre el
Estmulos percibidos
Dorso de la mano c/ vello
- despus de rasurar
nmero de estmulos percibidos por el sujeto en cada
Dorso de la mano s/ vello
regin.
1c) Elimine el vello del rea que lo tena y repita la operacin.
Compare con reas sin vello en el cuello y la parte alta de la
Cuello
Espalda
espalda del mismo sujeto.
Experimento 2. Capacidad de discriminacin tctil. Capacidad de discriminacin se refiere a

la precisin con que los receptores de una regin del cuerpo son capaces de reconocer o diferenciar un
estmulo de otros semejantes. En este experimento se compararn las capacidades de discriminacin de
diferentes regiones de la piel.
2a) Sobre la piel de la espalda aplique dos estmulos mecnicos (las
dos puntas de un comps) lo ms cercanos posible uno del otro, y
vyalos separando hasta que el sujeto perciba los dos estmulos.
Registre la distancia mnima que deben tener las puntas para que
el sujeto las perciba como dos estmulos diferentes.
Distancia mnima (cm)

Espalda
Cuello
Yema del dedo ndice
2b) Obtenga y compare los valores correspondientes para regiones del
Dorso de la mano
cuello, la yema del dedo ndice, el dorso de la mano y la cara
Cara
(cerca de los labios).
I
Experimento 3. Sensibilidad propioceptiva. La propiocepcin se refiere a la formacin de una
imagen mental sobre la posicin de los miembros en el espacio y de unos respecto a otros. Este
experimento pretende poner de manifiesto la participacin de la sensibilidad propioceptiva en la ejecucin
de un movimiento sencillo: juntar ambos dedos ndice. Puesto que la vista juega un papel muy importante
en el ajuste y la correccin del movimiento, se evitar la influencia visual.
27
Prctica 4. Receptores sensoriales
Estando el sujeto de pie, con los brazos ligeramente flexionados y
Sujeto 1
los ojos cerrados, intentar juntar las puntas de sus dedos ndice
con un movimiento rpido. Registre el nmero de intentos
Al frente
necesarios para lograrlo, primero frente a s y despus por
Arriba
encima de su cabeza.
Sujeto 2
a
Experimento 4. Termorreceptores.
4a) Prepare 3 vasos conteniendo agua fra (10 C), agua caliente (37 C) o agua a temperatura ambiente.
4b) Introduzca los dedos ndice uno en el agua fra y el otro en el agua caliente, y mantngalos as por un
minuto. Registre las sensaciones percibidas.
4c) Retire ambos dedos e introdzcalos en el agua de temperatura intermedia. Registre las sensaciones
percibidas en cada mano.
Cmo interviene la adaptacin de los receptores en la percepcin de la temperatura?
N
Experimento 5. Postimgenes.
5a) Utilice una tarjeta con cuadros de colores distintos (primarios). Registre la
distribucin que tienen los colores en la tarjeta.
5b) Fije la vista en el centro de la tarjeta y mantngala durante un minuto. Al cabo
de este tiempo dirija la vista a una hoja blanca y registre la imagen percibida.
En qu es diferente esta imagen de la distribucin de los colores en la tarjeta?
Cmo lo explica?
1
Experimento 6. Campo visual. La capacidad de percepcin de formas y colores por el ojo depende de la
distribucin de las clulas sensibles a la luz en la retina. El campo visual es una representacin del rea en la
que un ojo percibe un cierto color, y puede ser diferente entre individuos y de un ojo respecto al otro. Como
actividad, construya la representacin del campo visual de cada uno de los ojos de un sujeto.
6a) Pegue en la pared un pliego de papel bond en el que se haya trazado un plano cartesiano de 4 cuadrantes
con divisiones a 45 y a 90. Coloque al sujeto a 20 cm del plano y con la vista a la altura del centro de ste.
28
6b) Mientras el sujeto se cubre un ojo y con el otro enfoca el centro del plano, acerque por cada una de las
lneas una tarjeta de color y registre:
1. la distancia (del centro) a la que el sujeto percibe el movimiento de la tarjeta
2. la distancia a la que percibe el color de la tarjeta.
Utilice alternativamente, al azar, las lnea del plano y los colores de las tarjetas, hasta construir un mapa
completo para cada uno de los siguientes colores: rojo, azul, amarillo y verde. Conteste:
Qu tipo de receptor percibe el movimiento y cul el color?

Cuando se percibe el movimiento de un objeto pero no su color de qu color parece ser?
Si la percepcin del color depende de un tipo de receptor por qu los campos visuales son
diferentes para los distintos colores?
^
Experimento 7. Receptores gustativos. En mamferos existen al menos cinco tipos de receptores
gustativos, que responden a ciertas caractersticas qumicas de los compuestos con los que entran en
contacto. En la lengua de los humanos los diferentes tipos de receptores gustativos no se distribuyen al azar,
sino siguiendo un patrn que, segn se cree, podra estar moldeado adaptativamente. Este experimento tiene
el propsito de mostrar el patrn de distribucin de cuatro de los tipos de receptores gustativos en la lengua
de los humanos.
7a) Identifique sobre la lengua del sujeto las cuatro regiones siguientes:
7b) Usando un hisopo de algodn, aplique en cada una de las regiones
IV
cada una de las siguientes soluciones:

1. bisulfato de quinina 0.25%
2. sacarosa 5%
3. cido ctrico 2%
4. cloruro de sodio 2%
III
(estas soluciones le sern

proporcionadas durante
la prctica)
II
diferentes hbitos alimentarios y con fumadores.
II
I
Registre qu regin es ms sensible a cada uno de los

sabores. Compare (dentro del grupo) con sujetos de
III
Sujeto
Regin
I
II
Tenga la precaucin de enjuagar con agua y secar con

gasa la lengua del sujeto antes de cada prueba.
III
IV
Hbitos
29
7c) Seque bien la lengua con gasa, coloque un cristal

Sujeto
de sacarosa sobre la regin ms sensible al sabor

dulce y registre el tiempo que tarda el sujeto en
Regin
percibir el sabor. Compare este valor con el tiempo
que tarda en percibirlo si la lengua est hmeda.
II
Cmo interviene la formacin de soluciones
III
en la percepcin de seales qumicas por los
IV
Hbitos
receptores gustativos?
Por qu es diferente de la percepcin de

seales qumicas por el olfato?
o
Experimento 8. Umbral gustativo. El trmino umbral se refiere a la intensidad mnima que debe tener
un estmulo para despertar una respuesta. En este experimento se determinar el umbral de los receptores a
un sabor y se analizarn factores que podran alterarlo.
Sobre la regin de la lengua ms sensible al sabor dulce, aplique con un hisopo las siguientes
soluciones de sacarosa, comenzando con la ms diluida:
0.03%
0.25%
0.062%
0.5%
0.125%
1%
(estas soluciones le sern

proporcionadas durante la prctica)
2%
Registre la menor concentracin a la que se percibe el sabor. Compare (dentro del grupo) con sujetos:
1. que gusten de los alimentos dulces
2. que gusten de las bebidas calientes
3. que fumen.
Qu concluye sobre los efectos de estos factores en el umbral de percepcin del sabor dulce?
Nuevamente cuide de enjuagar con agua y secar con gasa la lengua del sujeto antes de cada prueba.
30
Discuta sus resultados tomando en consideracin los siguientes puntos:
La funcin de los receptores sensoriales como parte de los mecanismos de control.

El concepto de propiocepcin y las caractersticas que la distinguen de las dems modalidades sensoriales.
Los conceptos de unidad sensorial, campo sensorial y homnculo sensorial.
Los procesos que permiten la codificacin de la informacin sensorial en el tejido nervioso.
Los mecanismos de adaptacin de los receptores sensoriales.
Las observaciones particulares de cada experimento.
9
1 rasuradora desechable (personal; llevarla al laboratorio el da de la prctica)
2 planos cartesianos trazados en pliegos de papel bond (llevarlos al laboratorio el da de la prctica)
1 regla escolar de 30 cm (personal; llevarla al laboratorio el da de la prctica)
1 estesimetro
1 comps
1 termmetro de laboratorio
1 juego de tarjetas de colores
6 vasos de precipitados de 50 ml
1 cronmetro.
Carpenter S.H. Neurofisiologa. Manual Moderno. Mxico, D.F., 1996.

Ganong F.W. Fisiologa Mdica. 17a Ed. Manual Moderno, Mxico, D.F., 2000.
Noback R.C. Demarest R.J. El Sistema Nervioso: Introduccin y Repaso. 4 Ed. Interamericana
McGraw-Hill. Mxico, D.F., 1980.
31
PRCTICA No. 5
SINAPSIS NEUROMUSCULAR
En los vertebrados y otros organismos el movimiento de las extremidades y el desplazamiento del cuerpo
dependen de un tipo particular de tejido contrctil, el msculo esqueltico. Al igual que el tejido nervioso, el
tejido muscular es excitable (es decir, que su membrana es capaz de invertir momentneamente su potencial
para luego recuperar su estado inicial), y este cambio de potencial de la membrana (potencial de accin) es la
seal que desencadena la contraccin de los filamentos. Como es lgico suponer, la actividad del msculo
esqueltico es voluntaria, es decir que se origina en el sistema nervioso central y es transmitida al msculo a
travs de fibras nerviosas. Es por esto que la actividad del msculo esqueltico es considerada neurognica, en
contraste con la actividad espontnea (miognica) presente en otros tipos de msculo.
La estructura fsica en la que un nervio estimula la clula muscular esqueltica es conocida como unin
neuromuscular o placa motora. En esta estructura las membranas de las dos clulas (nerviosa y muscular) no
estn en contacto directo, sino separadas por una hendidura sinptica de alrededor de 30 nm de anchura. El
estmulo pasa del nervio al msculo en forma de un mensajero qumico o neurotransmisor, la acetilcolina (ACh),
que es liberada por el botn sinptico de la clula nerviosa y difunde libremente en la hendidura sinptica.
Eventualmente la ACh entra en contacto con los receptores especficos presentes en la membrana de la clula
muscular. Estos receptores (conocidos como receptores colinrgicos de tipo nicotnico) son canales inicos
dependientes de ligando, es decir, son complejos proteicos que atraviesan la membrana y que, al entrar en
contacto con una molcula especfica (ligando), abren un poro que permite el paso de diversos iones. Al abrirse el
poro del canal nicotnico, iones Na+ entran a la clula mientras que iones K+ salen de ella, impulsados por sus
gradientes respectivos. Puesto que entran ms cargas positivas (Na+) que las que salen (K+), la membrana
muscular tiende a despolarizarse con una intensidad que depende del nmero de canales activados y de la
cantidad de ACh liberada. Esta despolarizacin graduada recibe el nombre de potencial de placa terminal (PPT).
Note que la regin de la placa motora no tiene canales dependientes de voltaje y, por lo tanto, no genera
potenciales de accin, sino potenciales graduados, que van reducindose con la distancia. Sin embargo, las
cargas positivas que entraron a la clula en este punto se dispersan en todas direcciones y pueden alcanzar los
canales dependientes de voltaje situados en las regiones vecinas a la placa. Si la despolarizacin graduada es
suficientemente intensa, se generan potenciales de accin que se propagan por toda la membrana de la clula
muscular y desencadenan la contraccin.
El receptor nicotnico para acetilcolina (tomado de Kandel et al., 1997)
32
Prctica 5. Sinapsis neuromuscular
Vesculas
Vesculas de
de
acetilcolina
acetilcolina
Hendidura sinptica
impulso
nervioso
Clula
nerviosa
Ca++
Unin neuromuscular. El impulso nervioso (1)

induce la apertura de canales dependientes de
voltaje para iones calcio (2), y la entrada de ste
permite la fusin de las vesculas de acetilcolina con
la membrana presinptica, y la expulsin del
neurotransmisor (3). La ACh difunde libremente en la
hendidura sinptica y alcanza y estimula los
receptores nicotnicos (4). La ACh es inactivada por la
enzima acetilcolinesterasa, presente en la hendidura
sinptica. Adaptado de Karp, 1996.
acetil
colinesterasa
Clula muscular
Los experimentos que se proponen tienen como objetivo poner de manifiesto diferentes caractersticas del
mecanismo de activacin del msculo esqueltico y de la placa neuromuscular. Para ello se emplear la
preparacin citico-gastrocnemio practicada en rata. El
gastrocnemio es uno de los msculos superficiales ms grandes
de la cara posterior (caudal) de la pata de la rata. Est formado
por dos grupos de fibras, el medial y el lateral, que se extienden
paralelos desde la articulacin de la rodilla hasta el taln. Es
homlogo de los gemelos en los humanos. El citico (o
ischiadicus) es un haz nervioso grueso, formado por varios
nervios que van del plexo sacro (junto a la columna vertebral, a
nivel L-IV) a diferentes msculos en las porciones proximal y
distal de la pata, incluido el gastrocnemio. La preparacin citicogastrocnemio permite estudiar la respuesta del msculo cuando
se estimula el nervio que hace sinapsis con l.
ACTIVIDADES
1. Preparacin citico-gastrocnemio.
Observe la figura. En esta preparacin se sujeta un
extremo del msculo gastrocnemio y se le conecta a un
transductor de fuerza. El transductor transforma la fuerza
recibida en seales elctricas que son amplificadas,
interpretadas y graficadas por un analizador (dispositivo
de registro). Por otro lado, se coloca un par de electrodos
de estimulacin directamente sobre el nervio citico, de
modo que la estimulacin elctrica de ste inducir la
contraccin del gastrocnemio.
33
La respuesta que se mide en el dispositivo de registro es la fuerza de contraccin del msculo, y las variables
pueden ser las condiciones de estimulacin (intensidad, duracin, frecuencia) o la presencia de drogas que
modifican la conductividad en la sinapsis o el proceso de contraccin muscular.
Tome
la figura,
estmulos
vertical, y
en consideracin que el movimiento de un msculo consiste slo en su acortamiento. En el modelo de

el msculo produce movimiento horizontal, pero el transductor est diseado para responder a
aplicados en sentido vertical. La polea tiene la finalidad de transformar el movimiento horizontal en
mejorar as la sensibilidad del sistema de registro.
1a) Utilice ratas de ms de 300 g de peso, de gnero indistinto. Anestesie al animal con una inyeccin
intraperitoneal de 35 mg/kg de pentobarbital sdico. Para acelerar la absorcin puede agregar 0.2 - 0.4 ml
de solucin salina. Esta dosis mantiene al animal anestesiado por cerca de una hora.
1b) Fije, estirada, una de las patas posteriores y corte la piel hasta descubrir toda la cara posterior, desde el
muslo hasta el taln.
1c) Localice el gastrocnemio y el tendn que lo une al taln. Con hilo grueso amarre firmemente el tendn y
seprelo de su unin al hueso (utilice un trozo largo de hilo unos 30 cm, pues le servir despus para
unirlo al transductor).
1d) Levantando el tendn, separe el gastrocnemio de los dems msculos de la pierna, pero slo a lo largo de la
parte distal del msculo (la mitad de su longitud, aproximadamente). No fije an el hilo al transductor.
Para hallar el nervio citico:

1e) Con unas pinzas gruesas levante el msculo glteo mayor (gluteus maximus) y haga un corte pequeo en su
parte media. Introduzca las dos puntas de unas tijeras y, separndolas, fuerce el corte para hacer una
abertura mayor. Esto reduce el dao al tejido. Cuide de no lesionar los tejidos situados por abajo del
msculo glteo.
1f) Aplique iluminacin suficiente y, empleando los manipuladores de vidrio, localice el nervio citico a travs de
la abertura. Considere que el nervio va de la columna vertebral a la pata, y que es bastante grueso (lo ver
como un cordn amarillo plido de alrededor de 2 mm de grueso). No toque el nervio con instrumentos
metlicos, slo de vidrio.
1g) Con los manipuladores de vidrio levante cuidadosamente el
nervio y haga pasar por abajo, rodendolo, la funda de los
electrodos, como se observa en la figura.
1h) Coloque los electrodos dentro de la funda y en contacto directo
con el nervio. Esto permitir aplicar descargas elctricas en el
nervio sin que el estmulo pase a otros tejidos.
1i) Conecte las terminales de los electrodos a las salidas del
estimulador.
N
1j) Utilizando pesas de valor conocido (se recomienda usar 10 g), calibre el sistema de registro para obtener las
mediciones en gramos fuerza.
1k) Sujete el hilo del gastrocnemio al transductor (haga un amarre que pueda deshacer fcilmente), acomode las
poleas que sean necesarias y tense el hilo moderadamente.
34
2. Estmulo umbral y respuesta mxima.

2a) En el estimulador elija una duracin de estmulo de 0.2 ms e intensidad muy baja. Aplique estmulos nicos
aumentando gradualmente la intensidad, hasta obtener la respuesta de contraccin (sacudida simple).
Registre la intensidad umbral.
2b) Aplique estmulos supraumbrales cada vez ms intensos, y observe el aumento
gradual en la fuerza de contraccin. Encuentre y registre la intensidad del
estmulo que produce la mxima respuesta del msculo.
8 Conteste lo siguiente:
Si
en la preparacin se estimula el nervio y se mide la respuesta del msculo, y si ambos
tejidos tienen canales dependientes de voltaje y, por lo tanto, un voltaje umbral a cul de
ellos corresponde el estmulo umbral que se determin?
Si la clula muscular produce potenciales de accin, y si los potenciales de accin son idnticos
entre s por qu aumenta la intensidad de la contraccin al aumentar la intensidad del
estmulo? (tome en cuenta que se aplicaron estmulos nicos de duracin corta).
Qu sucede durante la respuesta mxima, y por qu no puede ser ms intensa?
M
3. Sumacin de contracciones (ttanos). El potencial de accin de la membrana muscular es
relativamente breve (dura slo algunos milisegundos, incluido su periodo refractario). En comparacin con
ste, la contraccin de las miofibrillas se inicia con retardo, aumenta ms lentamente y se mantiene por ms
tiempo, adems de que no tiene periodo refractario. Como consecuencia, el potencial de accin en la
membrana termina antes de que haya terminado la contraccin que indujo, y la membrana se recupera del
periodo refractario antes de que la fibra se relaje completamente. Si se estimula la membrana con frecuencia
alta, se puede inducir una nueva contraccin cuando la anterior no ha terminado an, y el resultado es que
ambas se suman. El ttanos es la condicin en la que el msculo se mantiene contrado completamente
durante un periodo prolongado, por efecto de la estimulacin elctrica de frecuencia alta.
3a) Seleccione una intensidad de estimulacin para producir una respuesta submxima (por encima del umbral,
pero sin llegar a la mxima).
3b) Con esta intensidad, aplique estimulacin continua con frecuencia baja (0.1 a 0.5 Hz) y registre.
3c) Sin detener el registro, aumente gradualmente la frecuencia de estimulacin hasta llegar a 100 Hz, y observe
la respuesta.
Si
la respuesta mxima representa la mxima intensidad con la que se puede contraer una fibra
por qu durante el ttanos el msculo puede desarrollar bastante ms fuerza?
35
Cul es la diferencia entre el potencial de accin y el mecanismo de contraccin que permite

que este ltimo no tenga periodo refractario?
Cmo podra modificarse el mecanismo de excitacin/contraccin del msculo para evitar que
las contracciones se sumaran?
e
4. Acetilcolina / acetilcolinesterasa. Despus de transmitir la seal, la acetilcolina (ACh) liberada al
espacio sinptico continuara activando los canales postsinpticos de no ser por dos mecanismos que
detienen su accin: la difusin simple fuera de la zona de la sinapsis y la hidrlisis que sufre por accin de la
enzima acetilcolinesterasa, presente en todo momento en el espacio sinptico. Algunos frmacos derivados
del carbamato, como la fisostigmina y la neostigmina, tienen una estructura qumica que es de algn modo
similar a la ACh y se unen al sitio activo de la enzima pero se hidrolizan a una velocidad mucho menor
(incluso horas), lo que inhabilita temporalmente a la enzima y retarda la degradacin de la ACh. En este
experimento se evaluar el efecto del bloqueo de la acetilcolinesterasa sobre la fuerza de contraccin del
msculo.
4a) Prepare una jeringa con 0.1 ml de solucin de fisostigmina (1.5 mg/ml) y otra con 0.1 ml de solucin de ACh
(0.0001%).
4b) Haga un registro basal: aplique estmulos ligeramente supraumbrales (duracin de 0.2 ms) en la modalidad
de estimulacin continua, con frecuencia de 1 Hz (esto es, 1 estm/seg). Registre al menos durante 15
segundos.
4c) Sin dejar de registrar detenga la estimulacin e inyecte 0.1 ml de fisostigmina en la regin de la placa
neuromuscular (esto es, la parte media de la masa del msculo); observe la reaccin durante los siguientes
30 segundos.
4d) Todava sin estimular inyecte 0.1 ml de ACh en la misma zona y observe la reaccin durante 30 segundos.
4e) Por ltimo, restituya la estimulacin continua y compare la amplitud de la contraccin con las del periodo
basal.
Cul es el efecto de la administracin de fisostigmina sobre la fuerza de contraccin? Cmo lo

explica?
36
Cmo modifica la fisostigmina el efecto de la ACh cuando hay y cuando no hay estimulacin?
5. Receptores colinrgicos.
El receptor nicotnico, que causa la despolarizacin de la membrana
muscular en la regin de la placa motora, tiene un sitio de unin especfico para ACh. Aparentemente, el
reconocimiento est basado en la presencia de un grupo amino cuaternario en la molcula. Otras sustancias
que contengan este grupo pueden unirse a este sitio y bloquear el receptor, sin estimularlo. Tal es el caso de
la tubocurarina, que es un alcaloide contenido en el curare, un extracto vegetal (de Strychnos toxifera)
empleado por los nativos del Amazonas en sus actividades de caza. En este experimento se analizar la
respuesta del msculo a la administracin de tubocurarina.
5a) Haga un registro basal con estimulacin continua de 1 Hz e intensidad supraumbral (el periodo final de
estimulacin del experimento anterior puede funcionar como registro basal para ste).
5b) Sin detener la estimulacin ni el registro inyecte 0.1 ml de solucin de tubocurarina de la menor
concentracin (10 g/ml) en la regin cercana a la placa motora y observe la respuesta durante 1 minuto.
5c) Sin modificar las condiciones, inyecte ahora el mismo volumen de la concentracin siguiente (20 g/ml) y
observe durante 2 minutos. Si no observa efecto sobre la contraccin, administre la concentracin ms alta
(50 g/ml) y observe nuevamente.
5d) Por ltimo, y sin detener todava el registro ni la estimulacin, inyecte en la misma zona 0.1 ml de ACh.
Registre durante 30 a 60 segundos ms.
Qu efecto tiene sobre la contraccin del msculo la administracin de un bloqueador de

canales nicotnicos? Cmo lo explica?
Cmo se modifica este efecto por la aplicacin de ACh?
6. Fatiga muscular. Durante la actividad prolongada, la eficiencia de la contraccin del msculo se reduce
gradualmente, a causa de diversos factores. En este experimento se analizar la importancia de la irrigacin
sangunea en la prevencin de la fatiga muscular.
6a) Si el nmero de su equipo es par, anude fuertemente un cordn grueso alrededor de la pata de la rata, tan
cercano al tronco como sea posible. Aplique estimulacin supraumbral continua a 1 Hz y registre los cambios
en amplitud de la contraccin durante los siguientes 10 minutos.
Si su equipo tiene nmero non, estimule en las mismas condiciones pero sin amarrar la pata de la rata, y
registre de la misma manera.
6b) Rena los datos de los registros con y sin amarre y comprelos.
Cmo
participa la irrigacin sangunea en la contraccin del msculo? (considere tanto entrada
como salida de sustancias)
Qu efecto tiene la interrupcin del flujo sanguneo en la eficiencia de la contraccin?

El efecto es significativo? Cmo lo explica?
37
1 Por ltimo, sacrifique a la rata por exceso de anestesia (aplique una inyeccin intraperitoneal de
ms de 100 mg/kg de pentobarbital sdico).
Reporte sus resultados haciendo una descripcin y anexando segmentos representativos del registro, junto
con los valores encontrados y los pies de figura correspondientes.
Discuta los resultados de cada actividad tomando como base las respuestas que dio al final de los
experimentos. No olvide citar sus fuentes de informacin.
M
9 1 ESTUCHE DE DISECCIN (prop. personal)
9 polea simple
9 1 diskette 3.5 nuevo (prop. personal)
9 1 soporte con base de media luna
9 1 aguja de costura (prop. personal)
9 1 cronmetro
9 2 pinzas dobles
9 1 juego de electrodos
9 2 disectores de vidrio
9 1 estimulador SMI con cables
9 2 tablas de diseccin
9 1 vaso de precipitados de 50 ml
9 1 caja con tapa para rata
9 3 jeringas insulnicas
Material por grupo (le ser proporcionado al momento de la prctica):

algodn
solucin salina fisiolgica (NaCl 0.9%)
hilo grueso
solucin de pentobarbital sdico (se le indicar la concentracin)
hilo de costura
solucin de acetilcolina 0.0001% (1:10000)
solucin de fisostigmina o neostigmina 1.5 mg/ml
soluciones de curare 50, 100 y 200 g/ml
cordn
transductor de fuerza
sistema de registro
Carpenter S.H. Neurofisiologa. El Manual Moderno. Mxico, D.F., 1996.

Karp G. Cell and Molecular Biology. John Wiley & Sons, 1996.
Katzung B.G. Farmacologa Bsica y Clnica, 6 ed. El Manual moderno, Mxico, D.F., 1996.
38
PRCTICA No. 6
MENSAJEROS QUMICOS
La comunicacin a distancia entre clulas, es decir, el envo de mensajes entre regiones diferentes del
organismo, se da por dos diferentes mecanismos: por transmisin nerviosa (despolarizaciones a travs de un
cableado axnico) o por comunicacin hormonal (sustancias qumicas transportadas de un sitio a otro por el
torrente sanguneo). En ambos mecanismos, incluso en la transmisin nerviosa, el mensaje que se est
transmitiendo toma en algn momento la forma de una molcula qumica mensajero que atraviesa un
cierto espacio y estimula a la clula receptora. Para poder captar el mensaje, la clula blanco debe poseer
receptores especficos para el mensajero, que son complejos proteicos capaces de reconocer cierta porcin de
la estructura qumica de ste y activar alguna respuesta dentro de la clula. La respuesta de la clula
depende de los procesos intracelulares a los que est acoplado el receptor (por ejemplo, el mensajero puede
inducir la despolarizacin de la clula, o desencadenar la hidrlisis de glucosa o de triglicridos, o activar la
sntesis de alguna otra protena, una enzima, un canal, un transportador, otro receptor, etc.). De este modo,
aunque la clula entre en contacto con una gran diversidad de mensajeros, sta responder slo a aquellos
para los que tiene receptores especficos, y esto activar solamente algunos procesos particulares.
En el caso concreto del intestino de mamferos, la actividad de contraccin (peristaltismo) est controlada,
en primera instancia, por clulas marcapasos y por una red neuronal (plexo mientrico) incluidas dentro de la
pared del rgano, lo que permite que las clulas musculares se despolaricen y se contraigan rtmicamente sin
necesidad de estimulacin externa. Sin embargo, esta actividad intrnseca est sujeta a modulacin por
mensajeros provenientes de otras regiones (neurotransmisores u hormonas). De estos mensajeros,
sobresalen por su importancia los que producen la rama simptica (noradrenalina/adrenalina) y la rama
parasimptica (acetilcolina) del sistema nervioso autnomo. As, las clulas de msculo liso de la pared
intestinal poseen en su membrana receptores adrenrgicos (especficos para noradrenalina/adrenalina) de
tipos tanto como , y receptores colinrgicos (sensibles a acetilcolina) de tipo muscarnico, principalmente
M3.
En el msculo liso, los receptores adrenrgicos activan la sntesis de AMPc o de IP3/DAG, y ambas
cascadas pueden estimular la entrada de Ca++ al citoplasma. La presencia de Ca++ favorece la interaccin
actina-miosina y por lo tanto aumenta la fuerza de contraccin muscular, pero en el msculo liso
gastrointestinal, adems, activa canales de K+ dependientes de Ca++ (que estn ausentes en otros tipos de
msculo), con lo cual la clula se hiperpolariza y detiene su actividad contrctil. Por otro lado, los receptores
colinrgicos M3 inhiben directamente la sntesis de AMPc y, por lo tanto, tienen un efecto anti-adrenrgico.
Los experimentos que se proponen aqu tienen como propsito simular el efecto de la estimulacin
simptica y parasimptica (a travs de la administracin de sus mensajeros) sobre la actividad de contraccin
del msculo liso intestinal, y registrar los efectos en cada caso. Adems, se analizarn algunas otras
caractersticas del proceso contrctil del msculo liso.
39
Prctica 6. Mensajeros qumicos
ACTIVIDADES
1. Montaje de la preparacin.
La contraccin del msculo liso intestinal requiere el mantenimiento de condiciones ptimas de pH,
concentracin de electrolitos, disponibilidad de nutrientes, disponibilidad de oxgeno y temperatura. Por lo
tanto, los valores adecuados de estas variables debern se mantenidos cuidadosamente a lo largo de la
prctica. Las concentraciones de electrolitos y combustibles sern aseguradas mediante el empleo de una
solucin de composicin y pH controlados (solucin Tyrode), que le ser proporcionada. Ud. deber
aplicar
aireacin
constante
mantener
la
temperatura de la solucin tyrode en 37 C. Para

facilitar el control de la temperatura se utilizar un
sistema de bao mara.
1a) Llene con agua de la llave el contenedor de acrlico
y monte dentro de l un soporte de media luna
sosteniendo la cmara de rgano aislado, como se
muestra en la figura. La manguera de drenaje de la
cmara deber llevar el lquido fuera del bao.
1b) Encienda el calentador elctrico y, con un
termmetro, verifique que la temperatura del agua
se mantenga en 37 C. Encienda y apague el
calentador segn se requiera.
1c) Prepare un dispensador de Tyrode con un matraz Erlenmeyer, un tapn horadado y dos tubos de
vidrio. Al aplicar aire a presin por uno de los tubos (por ejemplo, soplando), la solucin saldr por el
otro. Llene al dispensador con solucin Tyrode fresca y
sumrjalo en el bao mara para mantenerlo a la
temperatura adecuada.
1d) Con una pinza Mohr cierre la manguera de drenaje de
la cmara y llene sta con Tyrode. Conecte la manguera
de aireacin de la cmara a la bomba de aire y ajuste el
flujo para tener 2 burbujas/segundo, aproximadamente.
1e) Fije el transductor de fuerza (tensin) por encima de la
cmara de vidrio; conctelo al sistema de registro y
calbrelo con alta sensibilidad (no ms de 5 g).
u
1f) Sacrifique un conejo por dislocacin cervical. Corte
inmediatamente la pared abdominal y localice la porcin
Al sacrificar el conejo, extraiga un fragmento
duodenal del intestino. Extraiga un segmento de 20 a 30
grande de intestino delgado y mantngalo
cm de longitud y colquelo en un vaso con Tyrode aireado
sumergido en sol. Tyrode CON AIREACIN
(la temperatura no es crtica en este caso).
40
IMPORTANTE
durante toda la prctica.
1g) Corte un fragmento de intestino de 1 cm de longitud y lmpielo de la grasa y del

contenido en una caja de Petri con Tyrode aireado.
1h) Con ayuda de una aguja de costura perfore los extremos del fragmento y fije en cada
uno un trozo largo de hilo delgado. Procure que los amarres queden en lnea uno con
el otro, como se muestra en la figura.
1i) Monte el fragmento de intestino en la cmara de rgano aislado, como sigue: amarre
uno de los hilos a la varilla inferior, de modo que quede lo ms corto posible.
Haga salir el otro hilo a travs del orificio superior y sujtelo al transductor.
Tense cuidadosamente el hilo. Cuide que este hilo no roce con otro objeto en
ningn punto.
Disposicin final del

sistema de registro
2. Estimulacin simptica.
2a) Realice un registro basal de las contracciones, durante al menos 30 segundos.
2b) Sin detener el registro, aplique 1 gota de solucin de adrenalina (100 g/ml) en el lquido dentro de la
cmara de vidrio, y registre durante 30 a 60 segundos.
2c) Detenga el registro y lave 2 veces el tejido, drenando el lquido de la cmara y sustituyndolo con
Tyrode fresco del dispensador. Despus de lavar observe la respuesta de contraccin. Lave nuevamente
si es necesario.
2d) En el registro determine la frecuencia (ondas/minuto) y la amplitud (gramos fuerza) de las ondas de
contraccin y el tono del msculo en el periodo de accin de la adrenalina, y comprelo con las
mediciones correspondientes del periodo basal y despus del lavado.
3. Estimulacin parasimptica.
3b) Sin detener el registro aplique una gota de solucin de acetilcolina (100 g/ml) en la cmara y
registre. Finalmente detenga el registro y lave al menos 2 veces.
3c) Determine el efecto de la acetilcolina sobre la frecuencia, la amplitud y el tono de la contraccin
muscular comparando las mediciones con los periodos basal y despus del lavado.
41
Qu diferencias importantes encuentra entre la contraccin del msculo liso y la del msculo
esqueltico (recuerde la prctica de sinapsis neuromuscular)?
Cmo
explica el hecho de que un fragmento de intestino, sin nervios que lo estimulen, se
contraiga rtmicamente?
Qu es y de qu depende el tono del msculo liso?

Cul es el efecto de la adrenalina y la acetilcolina sobre la frecuencia y la fuerza (amplitud) de
las contracciones rtmicas del msculo intestinal? Cmo explica esto?
e
4. Receptores muscarnicos.
4b) Sin detener el registro aplique dentro de la cmara una gota de solucin de atropina (1 mg/ml) y
observe durante 30 a 60 segundos.
4c) Lave 2 veces y realice un registro basal.
4d) Sin detener el registro, aplique 1 gota de acetilcolina y despus de 30 segundos agregue 1 gota de
atropina, y observe durante 30-60 segundos. Al terminar lave 2 veces.
4e) Determine el efecto de la acetilcolina en la actividad contrctil (compare la frecuencia, amplitud y
tono vs. el periodo basal) y describa enseguida cmo se modifica este efecto por adicin de
atropina. Por ltimo, describa los efectos de la atropina sola, sin adicin de acetilcolina.
conteste:
Qu efecto tiene la atropina sobre la frecuencia y la amplitud de las contracciones inducidas por la
acetilcolina? Cmo lo explica?
Si
la atropina solamente bloquea el efecto de la acetilcolina Cmo explica el hecho de que la
administracin de atropina sola, sin acetilcolina, altere las contracciones basales?
Por qu emple la atropina en combinacin con la acetilcolina y no con la adrenalina?

El
tubo digestivo es capaz de actividad endgena y sin embargo tiene receptores para los
mensajeros del sistema nervioso autnomo. Qu papel juega la inervacin autonmica en la

actividad intestinal?
42
5. Efecto de la hipoxia.
5a) Realice un registro basal de las contracciones, durante 10 segundos.
5b) Sin detener el registro interrumpa la aireacin de la cmara. Observe cuidadosamente las
contracciones hasta que vea un descenso evidente en la amplitud. Apague el registro, restituya la
aireacin y mantngalo hasta que se recupere la fuerza de contraccin basal.
5c) Determine el efecto de la aireacin comparando las caractersticas de la contraccin (frecuencia,
amplitud, tono) entre el periodo basal, el momento de mayor afectacin y la recuperacin total.
A
6. Efecto de la temperatura.
6a) Coloque una pequea cantidad de Tyrode (alrededor de 50 ml) en un bao de hielo.
6b) Realice un registro basal de las contracciones, durante 20 segundos.
6c) Drene una buena parte del tyrode de la cmara y sustityalo con el Tyrode fro. Registre
inmediatamente la temperatura dentro de la cmara.

6d) Registre las contracciones hasta que la temperatura de la cmara alcance nuevamente los 37 C.
Describa las modificaciones graduales en la actividad contrctil de acuerdo con la temperatura.
Qu efecto tiene la hipoxia sobre la frecuencia y la amplitud de las contracciones? Cmo lo

explica?
Por qu el msculo liso no trabaja en condiciones anaerbicas, como otros tipos de msculo?
Qu importancia tiene esto en su papel fisiolgico?
Qu efecto tiene la temperatura (fro y calor) sobre la actividad contrctil del msculo liso?
Cmo lo explica?
I
7. Efecto de la tensin.
7a) Haga un registro basal durante 30 segundos.
7b) Detenga el registro y desplace el transductor hacia arriba, de manera que se tense ms el hilo y
el fragmento de intestino se alargue 50-100%.
7c) Registre las contracciones durante 30 a 60 segundos. Describa cmo se afecta la contraccin
(amplitud y frecuencia) por al aumento de la tensin y cmo responde a esto el msculo.
43
conteste:
El msculo estriado muestra una relacin estrecha entre la longitud de la fibra y la fuerza que
desarrolla (su curva longitud-tensin tiene forma aproximada de una campana) Cmo es la
relacin longitud-tensin para el msculo liso? Cmo explica esto?
Qu
importancia tiene esto en el papel fisiolgico del msculo de la pared de los rganos
huecos?
)
Para reportar incluya una descripcin de los resultados, junto con segmentos representativos
del registro de cada actividad, los valores descriptivos (frecuencia y amplitud de las contracciones)
y los pies de figura correspondientes. De ser posible aplique una prueba estadstica (pero
recuerde que la muestra de ser representativa de la poblacin estadstica).
Discuta sus resultados tomando como base las respuestas a las preguntas planteadas. No
olvide citar sus fuentes de informacin.

9 1 ESTUCHE DE DISECCIN (prop. personal)
9 1 termmetro industrial
9 1 resistencia (calentador)
9 1 aguja de costura (prop. personal)
9 1 cmara de rgano aislado
9 1 pinza Mohr
9 1 matraz Erlenmeyer de 500 ml con tapn, tubos de

vidrio y mangueras
9 1 pinzas para refrigerante
9 1 bomba de aireacin
9 2 pinzas dobles
9 1 caja de Petri
9 1 contenedor de acrlico
9 3 pipetas Pasteur con bulbo
9 1 soporte con base de media luna
hilo de algodn
solucin de adrenalina 100 g/ml en salina (1:10000)
transductor de fuerza
solucin de acetilcolina 100 g/ml en salina (1:10000)
sistema de registro
solucin Tyrode
solucin de atropina 1 mg/ml en salina (1:1000)
1 conejo con ayuno de 24 horas
44
Composicin de la sol. Tyrode (g/L):

NaCl
KCl
0.2
CaCl2 anh.
MgCl2
0.24
0.01-0.05
NaHPO4
0.05
NaHCO3
Dextrosa
pH: 7.2 - 7.4
Eckert R y Randall D. Fisiologa Animal. Mecanismos y Adaptaciones. Interamericana-McGraw Hill, 1989.

Ganong F.W. Fisiologa Mdica. 17a Ed. El Manual moderno, Mxico, D.F., 2000.
Goodman L., Limbird L., Milinoff P., Ruddon R., Gilman A., Hardman J. (eds.). Goodman & Gilmans: The
Pharmacological Basis of Therapeutics, 9a ed. McGraw-Hill, E.U.A., 1996.
Katzung B.G. (ed.). Farmacologa Bsica y Clnica, 6 ed. El Manual moderno, Mxico, D.F., 1996.
45
PRCTICA No. 7
REGULACIN DE LA PRESIN ARTERIAL
En los organismos con sistema circulatorio cerrado, la fuerza que propulsa la sangre por el sistema de
conductos proviene esencialmente del trabajo del corazn. Esta fuerza permite el avance del lquido a lo largo
de los vasos, pero tambin su salida hacia el espacio intercelular. Es este cambio continuo de lquido lo que
permite que las clulas mantengan el intercambio de compuestos entre su medio interno y el lquido
extracelular. Como otras variables, el flujo de la sangre dentro de los vasos puede cambiar por efecto de
perturbaciones, principalmente por cambios en la fuerza de propulsin o en la resistencia de los vasos
sanguneos al flujo. Una manera de asegurar que el flujo de sangre sea continuo es mantener constante el
valor de la presin arterial, como una variable regulada. La disposicin de los sistemas circulatorios cerrados
permite ejercer control directo sobre la resistencia de los vasos (resistencia perifrica) y sobre el trabajo del
corazn (gasto cardiaco), con lo que se corrigen las variaciones en la presin arterial. De este modo,
condiciones fisiolgicas diversas como el reposo, la actividad fsica, la situaciones de alarma, el periodo
postprandial o simples cambios de postura inducen cambios transitorios en la circulacin que son
compensados rpidamente mediante cambios en la actividad de contraccin del msculo cardiaco y mediante
cambios en el calibre de los vasos sanguneos, tanto arteriales como venosos.
En los mamferos, la actividad cardiaca y el dimetro vascular son controlados mediante estimulacin de
las ramas simptica (noradrenalina, adrenalina) y parasimptica (acetilcolina) del sistema nervioso autnomo.
A su vez, estas eferencias son activadas en la formacin reticular del bulbo raqudeo y la protuberancia, en
dos grupos neuronales poco delimitados conocidos como regin presora (su activacin eleva la presin
sangunea) y regin depresora (su activacin reduce la presin). Estos centros corrigen las variaciones de la
presin que son percibidos y enviados a ellos por una serie de receptores perifricos, entre los que destacan
los barorreceptores del seno carotdeo y los del arco artico, situados en las paredes de arterias importantes.
La conexin funcional de estos receptores en particular con los centros presor y depresor, y de stos con las
eferencias autonmicas al corazn y los vasos, forma el llamado reflejo barorreceptor.
ACTIVIDADES
1. Efecto de la postura corporal sobre la presin arterial
El flujo de sangre a lo largo de los vasos es relativamente rpido si el lquido se mueve entre dos puntos
situados a la misma altura, pero requerir mayor fuerza de propulsin si el lquido debe ascender, venciendo
su propio peso, a un punto de mayor altura. Por lo tanto, la orientacin de los vasos sanguneos principales
(horizontal o vertical) de una persona puede inducir diferencias en el flujo de sangre a travs de ellos y, como
consecuencia, diferencias en la fuerza de propulsin que se requiere. En este experimento se determinar si
la posicin del cuerpo (orientacin horizontal o vertical del flujo) modifica de algn modo la presin arterial de
un individuo, y si esto afecta el trabajo cardiaco.
46
Prctica 7. Presin arterial
1a) Elija a una persona de su equipo. Mantngala de pie durante al menos 2 minutos y mida su presin
arterial (presiones sistlica y diastlica) y su frecuencia cardiaca. Mida tambin la frecuencia cardiaca
tomando el pulso de la persona, tal como lo hizo en la prctica nmero 1.
1 Para medir la presin arterial utilice el mtodo auscultatorio:

a) coloque el brazalete alrededor del brazo izquierdo de la persona, ligeramente por encima del codo.
Coloque la membrana del estetoscopio por abajo del brazalete, contra la piel de la cara interna del
brazo.
b) Cierre la vlvula de la bomba y llene el brazalete hasta que la presin del aire sobrepase los 150
mmHg.
c) Abra levemente la vlvula de manera que el aire del brazalete escape y la presin disminuya
lentamente.
d) Escuche atentamente; en cuanto detecte el flujo de sangre en la arteria del brazo registre la presin
del brazalete. ste es el valor de la presin sistlica.
e) Contine escuchando mientras la presin disminuye. La intensidad de los sonidos deber aumentar y
disminuir despus. En cuanto desaparezcan los sonidos registre la presin del brazalete. ste es la
valor de la presin diastlica.
f) Calcule la presin media como el promedio de la presin arterial durante todo el ciclo cardiaco, es
decir, sumando dos veces el valor de la presin diastlica y una vez el de la sistlica, y dividendo esta
cifra entre tres.
1b)
Haga a la persona sentarse y, despus de al menos 2 minutos, registre sus presiones sistlica y
diastlica y su frecuencia cardiaca.
1c) Haga a la persona acostarse sobre una mesa y repita las mediciones despus de al menos dos minutos.
1d) Rena en una tabla los datos de al menos 5 personas y deles tratamiento estadstico para determinar si
la postura corporal (parado, sentado o acostado) modifica la presin arterial y la frecuencia cardiaca de
las personas. Como sugerencia, aplique una prueba de anlisis de varianza unifactorial y, en su caso,
una prueba post hoc.

Parado
Presin (mmHg)
EQUIPO
Diast.
Sist.
Media
Sentado
Frec.
Card.
Presin (mmHg)
Diast.
Sist.
Media
Acostado
Frec.
Card.
Presin (mmHg)
Diast.
Sist.
Media
Frec.
Card.
1
2
3
4
5
6
47
Conteste lo siguiente:
Alguna postura induce valores de presin ms altos o ms bajos que las otras?
Alguna postura induce cambios en la frecuencia cardiaca? Qu relacin tienen estos
Cmo lo explica?
cambios con los cambios en la presin?
Qu son las presiones diastlica y sistlica y qu mecanismos fisiolgicos las controlan?
Por qu se mide la presin en el brazo izquierdo?
Qu mecanismos podran intervenir en los cambios de presin sangunea?
Cmo esperara que fuera la presin sangunea de un organismo de gran estatura (por
ejemplo, una jirafa)?
z
2. Efecto del ejercicio sobre la presin arterial y la ventilacin pulmonar
La actividad muscular intensa induce, como primera consecuencia, cambios en numerosas variables,
principalmente la utilizacin de combustibles y oxgeno por las clulas musculares, su produccin de CO2,
lactato y calor y la resistencia de los vasos sanguneos que las irrigan. Esto tiende a modifica el valor de
ciertas variables reguladas, entre ellas las concentraciones sanguneas de CO2 y O2, el pH de los lquidos,
la presin arterial y la temperatura corporal. La informacin sensorial sobre estos cambios induce a su vez
respuestas compensatorias que tienden a corregir las variaciones, y que involucran los mecanismos de
intercambio de gases, de elevacin de la presin arterial y de eliminacin de calor. En el caso particular
del ejercicio, las respuestas compensatorias comienzan de manera anticipada a la deteccin de las
alteraciones por los receptores correspondientes, y el entrenamiento fsico mejora la capacidad del
organismo para anticipar y compensar estas alteraciones. En este experimento se caracterizarn las
respuestas compensatorias en respiracin y presin arterial al ejercicio fsico, y la manera en que son
modificados por el entrenamiento.
2a) Elija dos personas (por equipo), una con entrenamiento fsico y otra sin l. Excluya personas que tengan
problemas respiratorios o circulatorios.
2b) Siguiendo las instrucciones del profesor, prepare el sistema de registro en el equipo Biopac (Biopac
Student Lab, prctica No. 15 Exercise Physiology). Conecte los electrodos para electrocardiograma y el
transductor de respiracin, colquelos a uno de los sujetos y calibre el sistema.
48
El electrocardiograma (ECG o EKG) es un registro de los eventos

elctricos (despolarizaciones, repolarizaciones) de la masa muscular
del corazn, propagados por los lquidos corporales y detectados en la
piel del sujeto. Adems del EKG, el sistema registrar el ritmo y la
amplitud respiratorios. Usted deber registrar la presin sangunea
utilizando un baumanmetro, tal como hizo en la primera experiencia.
Onda T
Onda P
Complejo
QRS
Onda U
Trazo normal de
electrocardiograma y las
ondas principales
2c) Estando el sujeto sentado en un banco alto, haga un registro basal de todas las variables.
2d) Sin retirar los electrodos, pida al sujeto hacer 50 sentadillas sin detenerse hasta haber terminado.
2e) Inmediatamente despus de terminar, haga al sujeto sentarse y registre las variables durante al menos
15 segundos. Repita los registros cada 3 minutos hasta un periodo total de 21 minutos despus del
ejercicio.
2f) Haga las mismas determinaciones en el otro sujeto. Calcule para cada caso la frecuencia cardiaca, la
amplitud del complejo QRS, la frecuencia y amplitud respiratorias, y la presin arterial media. Rena los
datos del grupo, calcule los valores de la media y el error estndar y comprelos estadsticamente a fin
de determinar el efecto del ejercicio sobre cada una de las variables y cmo se modifica por el
entrenamiento.
Como sugerencia, aplique una prueba de anlisis de varianza (ANOVA) bifactorial (tiempo x
entrenamiento), para cada variable. Esta prueba le permitir evaluar el efecto de cada uno de los
factores y de la interaccin entre ellos. En su defecto, haga las comparaciones que juzgue pertinentes
mediante pruebas de t de Student.
Represente sus resultados en grficas e incluya los resultados de la prueba estadstica en el pie de
figura y/o en la descripcin de resultados.
Qu representa la amplitud (altura) de la ondas del electrocardiograma?

Qu
efecto tiene el ejercicio sobre el gasto cardiaco, la ventilacin pulmonar y la presin
arterial? Cmo lo explica?
Qu efecto tiene el entrenamiento fsico sobre las respuestas fisiolgicas al ejercicio?

Disee un diagrama de bloques en el que represente el sistema de regulacin de la presin
arterial y de la concentracin de CO2 durante el ejercicio, incluyendo los subsistemas de salida
y de entrada.
49
50
Presin media
Amplitud resp.
Frec. resp.
Amplitud QRS
Frec. cardiaca
EQ.
B
0
Sujeto no entrenado
9
12
15
18
21
Sujeto entrenado
9
12
15
18
21
Reporte sus resultados como grficas o tablas e incluya en ellas los resultados del anlisis
estadstico y los pies de figura correspondientes.

9 2 Cronmetros
9 1 Baumanmetro
9 1 Estetoscopio

Sistema de registro Biopac
Sistema de transduccin para EKG y electrodos
Alcohol 96

51
PRCTICA No. 8
APARATO EXCRETOR
La caracterstica ms importante que permite la vida de un organismo es la existencia de un medio interno
de composicin distinta de la del medio externo. La composicin de los lquidos internos y su osmoticidad son
variables crticas en los procesos vitales, ya que pueden modificar los gradientes en la membrana celular y la
estructura tridimensional de las protenas en el citoplasma. En los mamferos, el mantenimiento de los valores
de concentracin y el balance osmtico de los lquidos internos requiere mecanismos de regulacin, que
implican receptores hipotalmicos, varias hormonas y al rin como principal efector. Para esto, el rin posee
mecanismos especficos de transporte de sustancias entre la sangre y el lquido de excrecin, la orina, y con
esto es capaz de modificar la concentracin sangunea de solutos (iones, metabolitos, sales, molculas
endgenas) adems de la concentracin de agua. Si el organismo es sometido a un reto osmtico, el
mecanismo de regulacin detecta las variaciones y secreta hormonas (principalmente vasopresina y
aldosterona) que modifican la ingestin y la excrecin renal de sales y de agua. Como resultado, el lquido de
excrecin tiene caractersticas de composicin y concentracin que se ajustan a los requerimientos de la
regulacin.
El experimento que se propone consiste en la aplicacin de un reto osmtico a un organismo, y la
evaluacin de la respuesta compensatoria a travs de los cambios en la composicin del lquido de excrecin
renal.
ACTIVIDADES
Utilice las 3 ratas asignadas para crear 3 situaciones osmticas distintas: a) reto hiperosmtico con
posibilidad de beber agua, b) reto hiperosmtico sin posibilidad de beber agua, c) control. En cada
situacin deber determinar la cantidad de agua consumida y la cantidad y densidad de la orina emitida.
a) Inyecte a dos de las ratas 1.3 ml de una solucin concentrada de cloruro de sodio (NaCl 6%) por va
intraperitoneal (reto hiperosmtico). Inyecte a la rata restante (rata control) el mismo volumen pero de
una solucin fisiolgica de NaCl (NaCl 0.9%).
b) Coloque las ratas inyectadas en jaulas metablicas individuales para coleccin de orina. Pese los
bebederos y colquelos en las jaulas correspondientes: a) hiperosmoticidad con posibilidad de beber y c)
control. Mantenga a una de las ratas con hiperosmoticidad sin bebedero.
c)
Determine cada 30 minutos el volumen de agua ingerida. Recupere tambin toda la orina producida,
determine su volumen y su peso y calcule con esto su densidad ( = m/V). Repita las determinaciones
hasta los 120 minutos despus de la inyeccin.
d) Al trmino del periodo de registro retorne los animales a la jaula comn y permita que beban ad libitum.
t
52
Control
Hiperosmtico
agua
Hiperosmtico
EQ
30
60
90
120
CONSUMO DE AGUA (mL)

30
60
90
120
VOLUMEN DE ORINA (mL)

30
60
90
120
PESO DE ORINA (g)

30
60
90
120
DENSIDAD DE ORINA
(g/mL)
Prctica 8. Aparato excretor
53
Por qu la rata control recibi NaCl 0.9% en vez de agua pura?

Cul es el efecto de la administracin de NaCl concentrado sobre la osmolaridad de los lquidos
corporales?
Cul es la finalidad de no permitir que uno de los animales beba agua?

Cmo es la orina emitida, en cantidad y en densidad, de la rata en situacin hiperosmtica en
comparacin con la rata control? Cmo lo explica?
Qu hormonas intervienen en el mantenimiento de la osmolaridad en las ratas sometidas a un

reto osmtico?
Tericamente
Cmo participara la hormona aldosterona en el mantenimiento de la
osmolaridad en las ratas que presentaron reto osmtico? Recuerde que la aldosterona es una
hormona que participa en la reabsorcin renal de Na+.
Si un animal no tiene retos osmticos por qu contina orinando?
Calcule las medidas de tendencia central y de desviacin de los datos de todos los equipos.
Presente sus resultados como grficas comparativas de cada una de las variables medidas (ingestin
de agua, volumen y densidad de la orina) en las que se contrasten las 3 situaciones evaluadas,
colocando en el eje de las ordenadas el factor tiempo. Incluya en todas las grficas los resultados del
anlisis estadstico y los pies de figura correspondientes.
A
9 2 vidrios de reloj
9 1 balanza con canastilla para rata
9 1 probeta de 10 mL
9 2 jeringas insulnicas (1 mL) con aguja
54
balanza digital
jaulas metablicas
solucin de NaCl 0.9%
solucin de NaCl 6%

55
56

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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

Dr. Ivn Villanueva Becerril

1. EL trabajo prctico y la asignacin de material se hace por equipos de 3 a 4 personas.

Tijeras quirrgicas de punta fina

Pinzas quirrgicas finas

Bistur con navaja

Hilo y aguja convencionales

CMO REPORTAR UN TRABAJO CIENTFICO

Cada figura debe incluir:

En la seccin de RESULTADOS no se debe interpretar o discutir los resultados, nicamente se describen.

Durante el periodo del ensayo, los animales mantenidos

Ganancia de peso (g)

Figura 3. Ganancia de peso en un periodo de 3

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS (BIBLIOGRAFA)

Si la cita se obtuvo de una revista cientfica:

El gnero de las personas induce diferencias en el peso corporal?

El gnero induce diferencias en la estatura?

El gnero induce diferencias en la frecuencia de latido del corazn?

La estatura induce diferencias en el peso corporal?

La estatura induce diferencias en la frecuencia cardiaca?

El peso induce diferencias en la frecuencia cardiaca?

Qu tipo de informacin arroja una prueba estadstica? Cmo se interpreta?

Qu relacin existe entre el gnero, el peso corporal y la estatura en humanos?

Qu relacin existe entre el peso (tamao) corporal y la frecuencia cardiaca?

Qu relacin existe entre la estatura (efecto de la gravedad) y la frecuencia cardiaca en

Prctica 1. Manejo de datos

Prctica 1. Manejo de datos

7 Para hacer una comparacin estadstica por prueba t de Student:

error estndar = e.e. =

y calcule tambin los grados de libertad correspondientes:

Grados de libertad = df = na+ nb -2

Prctica 1. Manejo de datos

Schmidt-Nielsen K. Animal Physiology. Adaptation and Environment. Cambridge University

Eckert R y Randall D. Fisiologa Animal. Mecanismos y Adaptaciones. Interamericana-McGraw

Steel DG y Torrie JH. Bioestadstica. Principios y Procedimientos; 2 ed. McGraw-Hill, Mxico,

El experimento est basado en la caracterstica de los animales endotermos-

biolgicos de regulacin de la cantidad de calor. En este experimento se aplicarn perturbaciones de tipo

Mida su temperatura corporal antes de ingresar.

Para medir la temperatura de la rata: sujete al animal cubrindole la vista

comportamentales ms evidentes durante la perturbacin.

Existen diferencias en la temperatura corporal entre ratas y humanos?

Todos los grupos empleados tiene la misma temperatura basal?

Alguna de las perturbaciones altera la temperatura corporal de la rata o del humano?

La diferencia entre los trminos regulacin y control.

Los elementos bsicos de un sistema de regulacin.

La relacin entre el tamao corporal y la temperatura en mamferos (y cmo se relaciona esto

Qu ventajas y qu desventajas tiene la regulacin? Qu alternativas biolgicas existen a la

Temperatura colonal (C)

Temperatura colonal (C)

Temperatura alta ( 30C)

Temperatura colonal (C)

Temperatura colonal (C)

Temperatura baja (< 10 C)

Temperatura colonal (C)

Temperatura colonal (C)

Tipo de perturbacin aplicada

Respuesta del sistema

1 caja de plstico para rata, con tapa

1 regla de plstico transparente (prop. personal)

1 botella con salida

Russek M. y Cabanac M. Regulacin y Control en Biologa. Instituto Politcnico Nacional, Mxico,

Schmidt-Nielsen K. Animal Physiology. Adaptation and Environment. Cambridge University