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2014

Autor: JHONNATAN

Valor Creativo

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INTRODUCCION
Las enzimas son molculas orgnicas capaces de catalizar reacciones bioqumicas mediante
la disminucin de la energa de activacin que se requiere para que la reaccin se lleve a
cabo. Sin las enzimas, los procesos metablicos que se llevan a cabo dentro de las clulas
tardaran mucho tiempo y por lo tanto los perodos de respuesta de adaptacin al medio
extracelular seran muy largos y tal vez incluso incompatibles con la vida. Muchas enzimas
obedecen la teora de la cintica enzimtica propuesta en 1913 por Leonor Michaelis y Maud
Menten.

En ella se establece que durante una reaccin catalizada por una enzima, sta reacciona
reversiblemente con el sustrato para formar un complejo enzima-sustrato. Posteriormente este
complejo participa en una reaccin como reactante para dar origen a un producto y a la
enzima libre y activa, lista para participar en una nueva reaccin. Uno de los factores ms
importantes que afecta la velocidad de una reaccin enzimtica es precisamente la
concentracin de sustrato. Sin embargo, estudiar este efecto en el laboratorio se torna difcil
dado que la concentracin de sustrato vara durante el curso de la reaccin. Un mtodo que
simplifica la realizacin de experimentos de cintica es medir la velocidad inicial o V0 donde la
concentracin de sustrato es

mucho mayor que la concentracin de la enzima. Bajo estas

condiciones, cambios en la concentracin del sustrato son nfimos y por lo tanto se considera
que la concentracin de sustrato se mantiene constante con respecto a la enzima. Cuando la
concentracin de enzima se mantiene constante, el efecto que tiene una concentracin
variable de sustrato (controlada por el experimentador).

Grfico que demuestra el efecto de la concentracin del sustrato sobre la velocidad inicial
de una reaccin enzimtica. Vmax: velocidad mxima, Km: concentracin de sustrato a la
cual se alcanza la mitad de la Vmax.
A concentraciones relativamente bajas de sustrato, la velocidad de la reaccin aumenta en
forma proporcional a la concentracin de sustrato, obtenindose una relacin de tipo lineal.
Sin embargo, a concentraciones ms altas de sustrato, la relacin proporcional no se
cumple ya que al aumentar la concentracin de sustrato, la velocidad no aumenta
considerablemente. Es entonces cuando la velocidad de reaccin alcanza un valor mximo
Vmax, en el cual aunque se aumente la concentracin de sustrato, la velocidad de la
reaccin no vara.
En la prctica del da de hoy, observaremos este efecto en la reaccin de la glucosa oxidasa
y la glucosa. El principio de esta reaccin fue revisado en la prctica 2. La glucosa oxidasa
reconoce especficamente a una de las formas anomricas de la D-glucosa, la forma beta
glucopiranosa. Esta enzima, en presencia de glucosa, oxgeno y un amortiguador de pH,
genera gluconolactona y perxido de hidrgeno.

El perxido de hidrgeno es a su vez sustrato de otra enzima, la peroxidasa, la cual en

presencia de fenol y una amina aromtica (en nuestro caso, la amino-4-antipirina) genera
un compuesto de color rosado y agua. Por lo tanto, cuando la reactiva vira de incoloro ha
rozado, se demuestra la presencia de glucosa en la muestra. La cantidad de color medido a
492nm

es

proporcional

la

cantidad

de

glucosa

en

la

muestra.

Objetivos
Demostrar mediante la realizacin de una reaccin enzimtica clsica,
el efecto que tiene la concentracin de sustrato sobre la velocidad de la
reaccin. Adems, comprobar que la reaccin enzimtica a realizar
concuerda con los postulados de Michaelis y Menten. Para ello, el
estudiante deber comprender y determinar valores de Km y Vmax.
Integrar los conceptos de cintica enzimtica con el metabolismo, en
particular el metabolismo de los carbohidratos.

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PRACTICA DE CINTICA ENZIMTICA

Materiales:
Probeta
Vaso de precipitacin 100ml y 50 ml
Varilla de vidrio
Balanza
Algodn
Alcohol
Aguja esterilizada

Reactivos:

Agua oxigenada
Sangre

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Procedimiento DE la CINTICA
ENZIMTICA
1.- Preparar 5 vasos de precipitacin de 50ml esterilizados.

2.- Desinfectar y pinchar el dedo.

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3.- Echar de 1 a 2 gotas en cada vaso.

4.- Agregar agua oxigenada en las 5 muestras.

1 MUESTRA

1 ml

2 MUESTRA

2ml

3 MUESTRA

3ml

4 MUESTRA

4ml

5 MUESTRA

5m

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5.- Espera y controlar en que tiempo obtenemos el resultado en las muestras.

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CONCLUSIONES

Obtuvimos una preparacin satisfactoria de la prctica de cintica enzimtica

En ella se establece que durante una reaccin catalizada por una enzima,
sta reacciona reversiblemente con el sustrato para formar un complejo
enzima-sustrato.