FUNDAMENTO DE LA TCNICA DE ANLISIS

ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA/VISIBLE (U/V).

La absorcin de radiacin ultravioleta o visible proviene de la excitacin
de los electrones enlazantes y como consecuencia, las longitudes de
onda de los picos de absorcin pueden correlacionarse con los tipos de
enlaces que existen en las especies en estudio. La espectroscopia de
absorcin molecular es por tanto valiosa para la identificacin de los
grupos funcionales de una molcula. Sin embargo, son ms importantes
las aplicaciones de la espectroscopia de absorcin ultravioleta y visible
para la determinacin cuantitativa de compuestos que contienen grupos
absorbentes o tambin llamados cromforos. De hecho la aplicacin
ms

generalizada

de

relevancia

biolgica

es

la

medida

de

concentraciones de protenas, NADH y cidos nucleicos, porque en la

mayora de los casos hay una relacin directa y simple entre el nmero
de molculas presentes y la absorcin. No obstante, en algunos casos la
absorcin depende notablemente del entorno molecular; as los cambios
en el espectro con cambios de entorno pueden interpretarse en
trminos

de

procesos

tales

como

fusin

de

cidos

nucleicos,

interacciones protena-ligandos (ensayos de actividad enzimtica,

enzima-cofactor, activador, inhibidor), etc. El espectro UV/V de un
biopolmero es una huella dactilar y como tal puede usarse en ocasiones
para identificarlo. La gran utilidad de tales medidas radica en la alta
sensibilidad, la sencillez de la medida y el hecho de hacerse en
disolucin; aunque no es posible estas medidas en sistemas biolgicos
intactos, es decir in vivo, tales como tejidos debido a que esta radiacin
es fuertemente dispersada.
Transiciones electrnicas que implican electrones , y n
Los orbitales moleculares asociados a los enlaces sencillos se designan
como orbitales

sigma, , y los electrones correspondientes son los

1

electrones . La distribucin de densidad de carga de un orbital sigma

es rotacionalmente simtrica alrededor del eje del enlace. Aqu, la
densidad de carga negativa promedio que surge de la localizacin de los
dos electrones del enlace alrededor de los dos ncleos positivos se
indica por la intensidad del sombreado.

El doble enlace en una

molcula orgnica contiene dos tipos de orbitales moleculares;

un

orbital sigma () correspondiente a un par de electrones enlazantes y un

orbital molecular pi, , asociado al otro par. Los orbitales pi se forman
por la superposicin paralela de orbitales atmicos p. Su distribucin de
carga se caracteriza por un plano nodal (una regin de baja densidad de
carga) a lo largo del eje del enlace y una densidad mxima en las
regiones por encima y por debajo del plano. Adems de los orbitales
moleculares enlazantes citados existen los orbitales sigma y pi
antienlazantes, que se designan por * y *.
Muchos compuestos orgnicos contienen electrones no enlazantes.
Estos electrones que no participan en enlaces se designan por el
smbolo n. Las energas de los diferentes tipos de orbitales moleculares
difieren significativamente. Generalmente, el nivel de energa de un
electrn no enlazante est entre los de los orbitales enlazantes y
antienlazantes y . Son posibles cuatro tipos de transiciones: *,
n *, n * y *.
Transiciones *: En estas transiciones, un electrn de una molcula
en un orbital enlazante es excitado al correspondiente orbital
antienlazante * por absorcin de radiacin. Respecto a otras posibles
transiciones, la energa necesaria para provocar una transicin * es
grande y corresponde a radiaciones de frecuencias en la regin del
ultravioleta de vaco. El mximo de absorcin debido a transiciones
* nunca se observa en la regin del ultravioleta accesible ordinario; por
esta razn, no se tratar este tipo de absorcin.
Transiciones n *: Los compuestos saturados que contienen tomos
con pares de electrones no enlazantes son capaces de dar transiciones n
2

 *. En general, estas transiciones requieren menos energa que las

del tipo * y pueden producirse por radiacin de la regin entre
150 y 250 nm, apareciendo la mayora de los picos de absorcin por
debajo de 200 nm. La energa de tales transiciones dependen en primer
lugar del tipo de enlace atmico y en menor extensin de la estructura
de la molcula. Las absortividades molares (concepto que explicaremos
en breve) asociadas con este tipo de absorcin son de baja a intermedia
magnitud y el intervalo usual es entre 100 y 3000 L cm-1 mol-1
Los mximos de absorcin para estas transiciones tienden a desplazarse
hacia longitudes de onda ms cortas en presencia de disolventes polares
como el agua y el etanol. El nmero de grupos funcionales orgnicos
con picos n * en la regin ultravioleta fcilmente accesible es
relativamente pequeo.

Transiciones n * y *. La mayora de las aplicaciones de la

espectroscopia de absorcin a compuestos orgnicos se basa en
transiciones de electrones n o al estado excitado *, ya que las
energas que se requieren para estos procesos conducen a picos en una
3

regin espectral conveniente experimentalmente (200 a 700 nm).

Ambas transiciones requieren la presencia de un grupo funcional que
suministre los orbitales . Hablando estrictamente, es a estos centros
absorbentes insaturados a los que se les aplica el trmino cromforo.

REACCIONES QUMICAS

Cada vez que se midi la absorbancia A o la longitud de onda , la

lmpara de deuterio que emite la radiacin electromagntica ultravioleta,
daba la siguiente reaccin: donde se produca un fotn ultravioleta
D2 + energa elctrica D2* D' + D'' + h
Luego, toda

transicin electrnica por absorcin de radiacin

ultravioleta por la especie molecular M consta de un proceso

de 2

etapas:
Primera: excitacin electrnica
M

hv

M*

Estado fundamental

Estado excitado

Segunda: relajacin
M*

Estado excitado

hl vl o calor

Estado fundamental

REACCIONES DEL FENOL EN DIFERENTES MEDIOS

FENOL EN MEDIO ACIDO (pH1)
Se encuentra como fenol, no disociado Ar-OH, no hay reaccin.

HCl

FENOL EN MEDIO BASICO (pH 12)

La especie predominante es la ionizada (ion fenoxido Ar-O-)
5

+ NaOH

DESCRIPCION DEL MTODO DE ANLISIS

EXPERIENCIA A:
INFLUENCIA DEL MEDIO EN EL ESPECTRO UV DE LA MOLECULA DEL
FENOL EN HCl 2 M Y NaOH 2M:
Reactivos:
- Fenol
- HCl 2M
- NaOH 2M
Procedimiento:
Se prepar soluciones de HCl y NaOH ambas 2M. Luego se pes 0.0499g
de fenol, se disolvi en agua destilada y se enraz en una fiola de 50
mL. De esta fiola se tom una alcuota de 5 mL y se verti en otra fiola
de 50 mL y se enraz. La solucin resultante fue de 100 g /mL.
De la solucin anterior se tom 2 alcuotas de 5 mL cada una y se
vertieron en fiolas de 50 mL, enrazndose una con HCl 2M y la otra con
NaOH 2M.
Se us como blancos para las soluciones HCl 2M y NaOH 2M
EXPERIENCIA B:
INFLUENCIA DEL EFECTO SOLVENTE EN EL ESPECTRO UV DE LA ACETONA
Reactivos:
- Acetona
- hexano
- etanol
Procedimiento:

Se prepar 3 soluciones de acetona aadiendo en cada fiola de 10 mL

una gota de acetona y enrazando con diferentes solventes. La primera
se enraz con agua, agitando bien, la segunda se enraz con hexano y
la tercera, con etanol. Se us como blancos: acetona, agua y etanol
respectivamente.

EXPERIENCIA C:
ANLISIS CUANTITATIVO. CUANTIFICACIN DE CAFENA EXTRADA DEL
T USANDO CURVA DE CALIBRACIN EXTERNA
Reactivos:
- solucin Pb(CH3COO)2 al 10%

- cloroformo

- papel de filtro

- pera de separacin

- embudo

- tubo de prueba

- pipeta
- equipo para destilacin del cloroformo
Procedimiento:
Extraccin de la cafena del t
Se lav un tubo de prueba y se llev a secar a la estufa, se enfri y se
pes despus, obteniendo un peso de 29.6671 g
Se pes 5.0021 g de t y en un vaso de precipitado se adicion 100 mL
de agua destilada y se hirvi por 10 minutos. Despus se filtr y se
agreg 20 mL de la solucin de acetato de plomo y se sigui hirviendo
por unos 5 minutos, filtrndose luego y lavndose con agua destilada.
Se concentr el lquido hasta volumen pequeo y se dej enfriar.
Ya fro se extrajo 3 veces con 5 ml de cloroformo recibiendo las
porciones en el tubo de prueba. Se destil la solucin en un equipo ya
preparado para recuperar el cloroformo, se llev el tubo a secar a la
estufa y luego se pes (29.7918 g).
Preparacin de patrones:
Se pes 5 mg de patrn de cafena, se disolvi con agua destilada y se
enraz en fiola de 50 mL, tenindose una solucin de 100 g /mL. De
esta solucin se tom 25 mL y se enraz con agua en una fiola de 50
mL, obtenindose una solucin de 50 g /mL.

De la ltima solucin se tomaron alcuotas de 0.5, 1, 2, 4 y 6 ml para

preparar soluciones de 0.5, 1, 2, 4 y 6 g /mL respectivamente en fiolas
de 50 mL.
Preparacin de la muestra problema:
Del residuo seco extrado del t se pes 5 mg y se disolvi con agua
destilada en una fiola de 50 mL, obtenindose una concentracin de
100 g /mL. Se tom 5 mL de la solucin anterior y se enraz con agua
destilada en una fiola de 50 mL, obtenindose una concentracin de 10
g /mL.
Se tomaron 2 alcuotas de 15 mL cada una y se enrazaron con agua
destilada en fiolas de 50 mL.
Todas las soluciones preparadas en los pasos anteriores se llevaron al
espectrofotmetro UV-VIS 1700 marca Shimadzu, y se sigui los
siguientes pasos:
- Se enciende el supresor de picos y luego estabilizador
- Antes

de

encender

el

espectrofotmetro

ses

retira

del

compartimiento de muestra la bolsa que contiene la slica

- Se encendi el espectrofotmetro, se abri la pantalla y se esper
a que se realice la verificacin del instrumento.
- Se encendi la computadora
- Se presion en el espectrofotmetro F4 (PC control) y se cerr la
pantalla
- Se ingres al software UV PROBE haciendo clic en el cono UV
PROBE
- Se ingres al modo SPECTRUM (para anlisis cualitativo) y se
hizoclick en CONET, luego se seleccion BASELINE para hacer la
correccin de la lnea base (rango 190-1100)
- Se coloc en el compartimiento de muestra las celdas.

10

Se empez con la solucin de acetona en agua. Primero se coloc en

los dos compartimentos las dos celdas con agua, y se cre el mtodo en
el software UV PROBE indicando el rango de longitud de onda de 200 a
380 nm, luego se retir la celda de adelante y se coloc en su lugar la
celda con la acetona en agua y el software dio la grfica.
Se sigui los mismos pasos anteriores con el fenol en HCl y en NaOH en
el mismo rango de longitudes de onda; y por ltimo se trabaj con la
cafena tambin en el mismo rango.

11

DESCRIPCIN DEL INSTRUMENTO EMPLEADO

Espectrofotmetro UV-visible-1700 SHIMADZU

Especificaciones

(exactitud

espectral,

resolucin,

exactitud

fotomtrica, etc...) y funciones en conformidad con las farmacopeas

de EE.UU., Europea y Japonesa.

Validacin del hardware (9 tems) como estndar.

Soporte IQ/OQ*

Diseo compacto - modelo liviano de slo 17 kg que puede ser

transportado por una persona

Operacin

sencilla

con

teclas

especficas

para

funciones.

Facilidad en la operacin a travs de la amplia pantalla de cristal

lquido.

Funciones

completas

para

anlisis

cualitativo

cuantitativo

instaladas como estndar; se pueden agregar programas especiales

usando

tarjetas

IC.

Compatible con PC usando software bajo Windows.

Modo de medicin fotomtrica de mltiples longitudes de onda

(estndar).

*IQ/OQ contiene los siguientes detalles que son verificados y registrados

durante la instalacin del equipo. Son documentos fundamentales para
cumplir

con

las

pautas

de

la

FDA.

1. IQ (Calificacin de la Instalacin) Confirma que el instrumento fue

instalado correctamente en la configuracin original y en el ambiente
apropriado.
2. OQ (Calificacin de Operacin) Confirma que el instrumento alcanz el

12

desempeo original deseado.

Accesorios
Utilice el software UVProbe para controlar el UV-1700 mediante una
computadora personal. El paquete incluye funciones para mediciones
fotomtricas, espectrales y cinticas, adems de elaboracin de
informes.

Software UV Probe

Muy fcil de usar

Ms funciones

Multi-tarea real

Capaz de realizar todas las operaciones dentro del mismo

programa: informes, manipulacin de datos, etc...

Que cumpla con GLP y tenga funciones de seguridad

13

Caractersticas

Funcin de Ayuda (HELP) sensible al contexto

Adquisicin de datos en Background

Diseo de pantalla (layout) personalizado con restauracin

automtica del diseo previo

Cumplimiento GLP, incluyendo archivos histricos de varios items

Historia del Instrumento: seguimiento de la lnea de base, cero

automtico, inicializacin del instrumento, etc.

Seguridad: con privilegios individuales y para grupos de usuarios

TABLA DE RESULTADOS

EXPERIENCIA A:
INFLUENCIA DEL MEDIO EN EL ESPECTRO UV DE LA MOLECULA DEL
FENOL EN HCl 2 M Y NaOH 2M:
Fenol en HCl 2 M

Fenol en NaOH 2M
14

EXPERIENCIA B:
INFLUENCIA DEL EFECTO SOLVENTE EN EL ESPECTRO UV DE LA ACETONA
Acetona en agua

Acetona en hexano

Acetona en etanol

15

EXPERIENCIA C:
ANLISIS CUANTITATIVO. CUANTIFICACIN DE CAFENA EXTRADA DEL
T USANDO CURVA DE CALIBRACIN EXTERNA
Datos para el anlisis:
W t (g)

W residuo obtenido
(g)

W porcin del residuo

tomado para las diluciones
(g)

5.0021

0.1247

0.005

Hallando mx con una solucin estndar de cafena 2 ppm:

Espectro de una de las muestra de cafena

16

Datos para la curva de calibracin de los patrones de cafena:

Datos de la muestras de cafena

Nota: La concentracin se tiene en mg/L y la

en nm

Ejemplo de Clculos:
Para las muestras 1 y 2 se tiene la misma concentracin de cafena en
las muestras:
2.678 mg/L = 2.678 g/mL
17

Ahora se halla el peso de la cafena en los 50 mL:

2.678

= 133.9 g

Esta solucin se prepar de los 15 mL de la fiola de 50 mL, entonces en

los 15 mL habr esta misma cantidad de cafena y en la fiola de 50 mL
habr:
133.9

/15mL =446.33 g

Esta cantidad estaban en los 5 mL que se extrajo de la fiola de 50 mL,

entonces en estos 50 mL habr:
446.3 g

50 / 5 mL = 4463.3 g = 4.46 mg

Por lo tanto de los 5.3 mg del residuo extrado, no todo era cafena, por
lo que se procede a hallar la cantidad de cafena en todo el residuo:
5.0 mg

4.46 mg de cafena
124.7 mg

= 111.23 mg de cafena
Por ltimo se halla el porcentaje de peso en peso de la cafena:
% cafena en el t =

18

GRFICOS DE LOS EXPERIMENTOS

EXPERIENCIA A:
INFLUENCIA DEL MEDIO EN EL ESPECTRO UV DE LA MOLECULA DEL
FENOL EN HCl 2 M Y NaOH 2M:
Fenol en HCl 2 M

FenolenNaOH 2M

19

EXPERIENCIA B:
INFLUENCIA DEL EFECTO SOLVENTE EN EL ESPECTRO UV DE LA ACETONA
Acetona en agua

Acetona en hexano

20

Acetona en

etanol

21

EXPERIENCIA C:
ANLISIS CUANTITATIVO. CUANTIFICACIN DE CAFENA EXTRADA DEL
T USANDO CURVA DE CALIBRACIN EXTERNA
Hallando mx con una solucin estndar de cafena 2 ppm:

Espectro de una de las muestra de cafena

22

Curva de calibracin de los patrones de cafena:

Datos de la muestras de cafena

23

24

DISCUSIN DEL MTODO EMPLEADO

La regin entre 200 y 400nm, llamada Ultravioleta cercana, es de gran

importancia para los qumicos y a pesar que el desarrollo de otros
mtodos ms potentes ha reducido el margen de aplicacin de esta
tcnica, esta permanece como mtodo vlido para detectar con rapidez
la presencia de insaturacin conjugada, aromaticidad o de ciertos
grupos insaturados con pares electrnicos libres (carbonilo, nitro) sin
presentar los serios inconvenientes del Ultravioleta lejano

o de vaco

100-200 nm ya que en esta zona absorben las molculas componentes

del aire y los solventes.
La espectroscopia de absorcin molecular UV es por tanto valiosa para
identificar grupos funcionales de una molcula sin embargo, son ms
importantes

sus aplicaciones

para la determinacin cuantitativa de

compuestos que contienen grupos absorbentes.

APLICACIN CUALITATIVA DE LA ESPECTROFOTOMETRIA UV
La absorcin de radiacin UV provoca la excitacin de los electrones de
enlace y, en consecuencia, los picos de absorcin pueden relacionarse
con los tipos de enlace que existen en las especies en estudio.
El espectro UV se ha convertido en una propiedad fsica de gran utilidad
para caracterizar un compuesto. Dada la facilidad experimental de
registro de un espectro UV no debe desecharse como elemento
corroborativo

de

una

estructura

propuesta. La espectroscopia UV es, por

tanto, valiosa para la identificacin de los
grupos funcionales de una molcula, sin
embargo presenta

limitaciones para el

anlisis cualitativo:
1. La energa usada (UV) para excitar los
electrones

tambin

provoca

cambios

vibracionales y rotatorios, entonces al solaparse los saltos electrnicos

25

con los vibracionales y rotatorios la consecuencia es un espectro

continuo con picos anchos en forma de campana y, por tanto, difcil de
interpretar. A pesar de ello el espectro UV puede dar informacin de la
presencia o ausencia de determinados grupos funcionales

que

absorben energa radiante (cromforos) en los compuestos orgnicos.

2. Las consideraciones que se tienen que hacer al elegir un disolvente
no son slo respecto a su transparencia (que no absorban en el rango
de trabajo del compuesto), sino tambin respecto a sus posibles efectos
sobre el sistema absorbente por eso hay que tener en cuenta que con
los disolventes polares tenemos menos detalles que con los apolares.
Los ms comunes para el UV son: agua, etanol, ciclohexano y dioxano.
3. Solo reconoce los cromforos (grupos funcionales que absorben
ENERGIA RADIANTE presentes en la estructura de la molcula mas no la
estructura propia de la molcula, por eso no es la tcnica ideal para
hacerlo de forma completa. Por ejemplo: en el efecto del solvente en el
espectro de la acetona se observ una banda dbil a cercana a 280
nm que se desplaz a ms cortas cuando se cambi el disolvente por
otro ms polar, entonces se afirma que se tiene un grupo carbonilo,
pero la absorcin que se observa en la regin UV para el grupo
carbonilo en la acetona es de la misma longitud de onda que la
absorcin del grupo carbonilo en la dietilcetona por eso se dice que solo
identifica cromforos mas no la estructura completa del compuesto.
Slo las molculas que tienen electrones o heterotomos con pares de
electrones de valencia no enlazados absorben luz en esta

regin de

200-400 nm (cromforos).
APLICACIN CUANTITATIVA DE LA ESPECTROFOTOMETRIA UV
La Espectroscopia Ultravioleta es un mtodo de gran aplicacin en la
determinacin cuantitativa de sustancias. Por su sensibilidad, bajo costo
de los espectrofotmetros, la selectividad, rapidez y precisin.

26

Las aplicaciones de la espectroscopia UV en el anlisis cuantitativo de

los grupos que producen absorcin es muy importante. Su aplicacin se
basa en la ley de Lambert-Beer la que indica que la absorbancia A es
directamente proporcional a la anchura de la cubeta (b) y a la
concentracin de la muestra (c), siendo la constante de proporcionalidad
() un parmetro caracterstico denominado absortividad:
A=bc
Los mtodos analticos basados en esta ley tienen una gran difusin en
los laboratorios de control de procesos industriales y de anlisis clnico.
El cumplimiento de la relacin lineal entre absorbancia y concentracin
dada por dicha ley depende de determinadas condiciones que deben
satisfacerse:
1.-La ley de Lambert-Beer es una ley lmite vlida solo para soluciones
diluidas 0.01N.
2.-Debe utilizarse luz monocromtica.
Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se realiz la curva
patrn: absorbancia (A) en funcin de concentracin (c), para lo cual se
prepar soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se
midi la absorbancia a la longitud de onda de mxima absorcin de la
cafena.
As la determinacin de la concentracin de numerosos productos en
solucin mediante la espectroscopia

UV

solo

est limitada por la

necesaria absorcin en esta regin de la especie a determinar. Por eso

se pudo determinar la concentracin de cafena en el te, pues este
compuesto absorbe en la regin UV cercano cerca a los 272 nm y
presenta grupos absorbentes.

27

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

EXPERIENCIA A:
INFLUENCIA DEL MEDIO EN EL ESPECTRO UV DE LA MOLECULA DEL
FENOL EN HCl 2 M Y NaOH 2M:
Segn la bibliografa se tiene que el fenol absorbe a 211 nm (banda E2)
y a 270 nm (banda B), mismas longitudes de onda que se observan en la
grfica de fenol en HCl 2M, lo que indicara que el HCl no afecta la
estructura del fenol, ni interacciona con l para producir una variacin
en la longitud de onda. Pero cuando se cambia el medio a NaOH, el
fenol reacciona con ste, por ser un cido dbil por lo que se forma el
siguiente equilibrio desplazado hacia la derecha:

Por lo tanto ya se forma otro compuesto que absorbe a longitudes de

onda mayores.

La razn es la siguiente: El fenol tiene un par de

electrones libres en el tomo de oxgeno que interactan con los

electrones p del anillo y estabilizan el estado

, mientras que el

fenxidoal tener un par extra de electrones libres en el oxgeno que

contribuyen a la interaccin estabilizan an ms el estado

desminuyendo la energa de este nivel y bajando as la diferencia

energtica entre los niveles n y

lo que como consecuencia provoca

un aumento en la longitud de onda

de mxima absorcin (efecto

batocrmico).

28

EXPERIENCIA B:
INFLUENCIA DEL EFECTO SOLVENTE EN EL ESPECTRO UV DE LA ACETONA
Conforme se aumenta la polaridad del solvente, de hexano a etanol y al
agua, se puede observar que disminuye la longitud de onda, es decir
hay un efecto hypsocrmico debido a que cuando el medio es ms
polar, el par de electrones libres de la acetona est mejor solvatado,
formando puentes de hidrgeno como en el caso del etanol, en el caso
del agua hay 2 hidrgenos con los cuales puede formar pue3ntes de
hidrgeno por ello aumenta la solvatacin, y esto rebaja la energa del
orbital n, donde se encuentran el par de electrones libres aumentando
as el E de la transicin n

y por lo tanto disminuye la longitud de

onda al pasar al disolvente ms polar.

EXPERIENCIA C:
ANLISIS CUANTITATIVO. CUANTIFICACIN DE CAFENA EXTRADA DEL
T USANDO CURVA DE CALIBRACIN EXTERNA
Primero se compar la longitud de onda de mxima absorcin de la
solucin patrn de cafena de 2 ppm (
muestras (

con una de las

determinndose as que en efecto la muestra

contena cafena y para utilizar esta longitud de onda al medir las

absorbancias de las diferentes concentraciones de la solucin patrn de
cafena en la elaboracin de la curva de calibracin.

Esta curva se

elabor de modo que la muestra a medir cayera dentro de ese rango.

Las concentraciones de las muestras de cafena los proporcion el
espectrofotmetro y con estos datos se obtuvo la cantidad de cafena en
el residuo extrado con cloroformo y a partir de ste el % de cafena en
el t. Se hall tambin que no todo el residuo extrado con cloroformo

29

era cafena porque de los 5 mg pesados para preparar las soluciones

slo 4.43 mg eran cafena.

30

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Se observa un efecto batocrmico al cambiar el medio del fenol de

HCl a NaOH debido a que con el hirxido existe reaccin
formndose fenxido de Na, lo que rebaja la energa del orbital
desplazando la

de mxima absorcin a un valor mayor.

Se observa un efecto hypsocrmico al aumentar la polaridad del

medio de la acetona debido a la solvatacin del par de electrones
libres.

Se

verific

que

el

contiene

espectrofotomtrico UV siendo su

cafena

por

anlisis

mx absorcin igual a 272 nm

y se cuantific el contenido de cafena en el t siendo su

porcentaje peso en peso de 2.22% cayendo este valor dentro del
rango que se encuentra en la bibliografa (2-3.5%).
- Al extraer la cafena con cloroformo agitar bien para romper la
emulsin que se forma en la interfase y abrir la llave antes de
separar las fases para expulsar el aire.
-

Antes

de

encender

el

espectrofotmetro

verificar

que

el

compartimento de muestras est vaco.

-

Recordar que el equipo es de doble haz por lo que el ajuste a

cero se realiza colocando en la celda de atrs y en la del frente la
solucin de referencia.

- Tomar las celdas siempre de la parte esmerilada para evitar dejar

manchas de grasa de las manos por donde atraviesa la luz.
-

Procurar colocar las celdas siempre hacia el mismo lado.

Generalmente traen unas letras en la parte superior, stas pueden
tomarse como referencia para mantener siempre la misma
posicin.

- Nunca

introducir

las

celdas

en

el

portamuestras

del

espectrofotmetro con restos de lquido en la parte externa.

31

32

BIBLIOGRAFA

- http://upcommons.upc.edu/pfc/bitstream/2099.1/11148/2/Mem%C3%B2ria.p
df
- www.advmex.com/espectrofotometro_uv.htm
- http://quimica.ugto.mx/revista/TallerBasicoUvVis.pdf

- Anlisis Instrumental, Douglas Skoog, primera edicin, Nueva Editorial

Interamericana S.A de C.V, 1975
- http://www.jenck.com/productos/?idProducto=22
- http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0004-06222003000200001&script=sci_arttext
- http://www.ugr.es/~olopez/estruct_macromol/UV_V/UV_V.pdf
- http://books.google.com.pe/books?id=quC5Pr2rpoC&pg=PA144&dq=porcentaje+de+cafeina+en+el+te&hl=es&sa=X&ei=l
UuiUZDVCu754AOPk4DoCA&ved=0CEMQ6AEwBDgK#v=onepage&q=porcentaj
e%20de%20cafeina%20en%20el%20te&f=false

33