UNIVERSIDAD

NACIONAL DE JAN
TECNOLOGA MDICA
CICLO:
VI
CURSO:
VIROLOGIA
TEMA:
INOCULACION INTRACRANEANA
DOCENTE:
Blgo. Mlgo. Enrique Polo Zavala
ALUMNA:
- Yajahuanca Gaytan Shirley
03 de Diciembre de 2014

PRCTICA DE LABORATORIO: INOCULACION INTRACRANEAL DE VIRUS ACTIVO

MARCO TEORICO:
Se inocula animales de laboratorios (ratones, conejos, cobayos, etc.)
susceptibles a la infeccin por el agente viral cuya presencia se sospecha.
Este se multiplicar en el hospedador experimental con la produccin de
diferente sintomatologa, hasta en algunos casos puede causarle la muerte.
El animal mayormente utilizado es el ratn blanco; depende del virus
por estudiar se utilizan adultos o recin nacidos. Los ratones adultos se
utilizan principalmente, en el estudio de virus neutropicos y algunos arbovirus.
La inoculacin es usualmente intracerebral con un inoculo de hasta 0.03 ml.
Las inoculaciones tambin pueden ser subcutneas, intramusculares,
intraperitoneales, donde se pueden administrar dosis mayores del inoculo.
La inoculacin es un mtodo sencillo, sensible y rpido aunque son
pocos los virus animales de nuestro inters que poseen huspedes de
laboratorio susceptibles. No obstante, constituye una importante tcnica en
la identificacin y caracterizacin de agentes (diagnstico diferencial).
PARAMETROS A TOMAR EN CUENTA:
El sitio de inoculacin
La especie y edad del animal
La patologa que se produce
VENTAJAS DEL USO DE LOS ANIMALES EN LABORATORIO:
El sistema permite aislar algunos virus que no crecen en otros sistemas
de cultivo viral o son sistemas ms sensibles.
Sirven como modelos para estudiar patognesis viral
Son un medio para estudiar el efecto de antivirales
Permiten la produccin de vacunas contra alguna virosis como
sarampin, fiebre, rabia. Entre otras.
Inoculacin de Ratn Lactante
a)

Va Intracerebral: el punto de inoculacin es la interseccin de dos

lneas una que va desde el ojo a la oreja y la otra perpendicular a
esta lnea y cortndole por el centro. Se utiliza aguja y jeringa de
tuberculina con dosis menor a 0,02 ml.

OBJETIVOS
En albinos lactantes, definir las fontanelas en el crneo, para luego realizar la
inoculacin de solucin salina:
1. Obtener diversos estados y reacciones, mediante la inoculacin.
2. Determinar el porqu de las reacciones y su grado de letalidad en los
albinos lactantes
MATERIAL BIOLOGICO:

Ratn Albino Adulto

Ratones Albinos lactantes
Solucin Salina.

Material de Laboratorio:

Bistur.
Tijera Quirrgica.
Cloroformo.
Algodn.
Cartulina.
Tijeras.
Frasco de vidrio.

PROCEDIMIENTOS:
IDENTIFICACIN DE PARTES DEL CRNEO EN RATN ADULTO.
Armar el frasco letal: colocar algodn empapado
con cloroformo dentro del frasco de vidrio, sobre
esto

colocar

una

cartulina

circular

con

perforaciones a medida del ancho del frasco,

para finalmente poner su respectiva tapa de
cierre.
Introducir el ratn adulto en el frasco letal, y esperar su deceso.
Retirar el ratn ya muerto del frasco letal y con ayuda de un bistur
realizar biopsia de la cabeza del animal, con el objetivo de obtener
el crneo.
Hacer reconocimiento de las seis fontanelas del crneo, ubicando
el sitio de inoculacin para el ratn lactante.

TCNICA:

INOCULACIN DE RATN LACTANTE

Va Intracerebral: Se emplea embriones de 8 14 das, especficamente para

virus que producen alteraciones cerebrales, el punto de inoculacin es la
interseccin de dos lneas una que va desde el ojo a la oreja y la otra
perpendicular a esta lnea y cortndole por el centro, especficamente en la
fontanela esfenoidal. Se utiliza aguja y jeringa de tuberculina con dosis entre
0.01 0.02 ml.
Anestesia: No requerida
Material: Jeringa de tuberculina
Volumen mximo: 0.05 - 0.1 ml (ratn)
pH inoculacin: Consultar Anexo 2.
A. Inoculacin:
1. Pueden ser necesarias dos personas para el correcto procedimiento
de esta tcnica, una para sujetar al animal y otra para la
inoculacin.
2. Sujetar firmemente la cabeza del animal y proceder a la insercin de
la aguja en el sitio de inoculacin.
3. Aspirar ligeramente para asegurarse de que no se ha perforado
ningn rea funcional del cerebro.
4. El contenido de la jeringuilla debe ser expelido muy lentamente y la
zona de inyeccin masajeada cuidadosamente una vez realizada la
inoculacin.
5. Marcar el ratn inoculado.
6. Controlar, observar las reacciones, para percatarse si permanecen
vivos o muertos.

RESULTADOS:
RATONES ALBINOS LACTANTES
Dilucin

N de N
Ratn inoculacin

Muertos

Vivos

Total
muertos

Total
vivos

Relacin

0.01 ml
0.01 ml
0.01 ml
0.01 ml
0.01 ml
0.01 ml

1
1
1
1
1
1

1
1
1
0
0
0

0
0
0
1
1
1

3/6

Muertos

Vivos
1
0
0
1
1
1

Total
vivos
4

Relacin

0
1
1
0
0
0

Total
muertos
2

2
1
1
1
1
1

%
de
vida
50%

CUYES LACTANTES
Dilucin
0.01 ml
0.01 ml
0.01 ml
0.01 ml
0.01 ml
0.01 ml

N de
Cuyes
1
1
1
1
1
1

N
inoculacin
4
3
1
1
2
1

Dilucin N
de
animales
0.01 ml 6
0.01 ml 6

1/6

% de
vida
66,6%

N
Muertos Vivos Total
Total Relacin % de
inoculacin
muertos vivos
muerte
4
3
3
5
7
5/12
41%
3
2
4

La inoculacin intracerebral de ratones albinos y cuyes con solucin salina al

10% produce infeccin tpica. Los animales inoculados usualmente enferman
entre los 3 y 5 das, y una vez que muestran signos de enfermedad algunos de
ellos han logrado restablecerse.
A pesar que los ratones lactantes son los ms sensibles, se observan muertes
inespecficas causadas por trauma de inoculacin, toxicidad del inoculo, mala
praxis de la inoculacin en cuyo caso debera repetirse la prueba. Las muertes
que ocurrieron dentro del perodo de observacin han sido reportadas como
confirmatorias.

CARACTERISTICAS DE MUERTE:

CARACTERISTICAS DE MUERTE:

Ratn N 1: Hinchazn

CUY N1: parlisis

Ratn N 2: Epilepsia

CUY N2: Pata

izquierda morada

Ratn N 3: Disecada

posterior

FUNDAMENTOS:
PATOGENIA DE LOS VIRUS A NIVEL CEREBRAL:
El virus es inoculado y genera fases agudas despus de la cual aborda el
sistema nervioso central, donde
puede generar inflamacin difusa,
traumatismo craneal, congestin, hemorragias petequiales, infiltrado
linfocitico en meninges, inflamacin perivascular, degeneracin neuronal,
necrosis, neurofagia y formacin de ndulos gliales alrededor de neuronas
destruidas. Estos fenmenos fisiopatogenicos se presentan a nivel cerebral,
en corteza, tallo cerebral, ganglio basal, cerebelo y medula espinal. Tambin
invaden bazo, ganglios linfticos, hgado y pulmones entre otras
complicaciones.
LAS SOLUCIONES CRISTALOIDES ISOTNICAS respecto al plasma se van a
distribuir por el fludo extracelular, presentan un alto ndice de eliminacin
y se puede estimar que a los 60 minutos de la administracin permanece
slo el 20% del volumen infundido en el espacio intravascular.
La perfusin de grandes volmenes de estas soluciones puede derivar en
la aparicin de edemas perifricos y edema pulmonar.
SOLUCIN SALINA ISOTNICA (SUERO FISIOLGICO)
Composicin Suero Fisiolgico al 10 %
pH:
Osmolaridad:
Sodio:
Cloro:

308
154
154

5,5
mOsm/L
mEq/L
mEq/L

La solucin salina al 10 % tambin denominada Suero Fisiolgico, es la

sustancia cristaloide estndar, es levemente hipertnica respecto al
lquido extracelular y tiene un pH cido.

La normalizacin del dficit de la volemia es posible con la solucin

salina normal, aceptando la necesidad de grandes cantidades, debido
a la libre difusin entre el espacio vascular e intersticial de esta solucin.
Despus de la infusin de 1 litro de suero salino slo un 20-30% del lquido
infundido permanecer en el espacio vascular despus de 2 horas.
Como norma general es aceptado que se necesitan administrar entre 3
y 4 veces el volumen perdido para lograr la reposicin de los
parmetros hemodinmicos deseados.
La solucin salina al 10% se utiliza para el tratamiento del desequilibrio
hidroelectroltico donde se incluyen el cloro y el sodio; tratamiento de la
deshidratacin; como vehculo para frmacos inyectables.
ACCIN FARMACOLGICA
El cloro y el sodio son los principales iones extracelulares, ellos comprenden
ms del 90% de los constituyentes inorgnicos del suero sanguneo. Las
concentraciones promedio del suero son de 142 mEq para el sodio y 103 mEq
para el caso del cloro. El in sodio puede difundir y cruzar las membranas
celulares.
El control de la excrecin de agua y sal es un proceso muy complicado,
participan la filtracin gobernada por el glomrulo renal y el flujo sanguneo,
as como la reabsorcin por los tbulos de aproximadamente el 99% de la
carga filtrada. Las cantidades exactas excretadas dependen de los
requerimientos que prevalecen en el momento.
Los ajustes de los mecanismos de absorcin tubular estn influenciados por
interrelaciones osmticas entre el agua celular, el plasma y la orina, adems,
por la influencia hormonal y la regulacin de la excrecin de electrolitos y
agua.
Cuando la concentracin de sodio es baja, la secrecin de la hormona
antidiurtica por la pituitaria es inhibida; por lo tanto se previene la
reabsorcin de agua por los tbulos contorneados distales del glomrulo
renal. Por otro lado, la secrecin adrenal de aldosterona incrementa la
reabsorcin de suero sanguneo. Por estas razones, el in sodio juega un rol
primordial en el control total del agua y su distribucin.

PRESION INTRACRANEAL
Es una elevacin en la presin dentro del crneo que puede resultar de una
lesin cerebral o causarla.
Causas
El aumento en la presin intracraneal puede deberse a un aumento en la
presin del lquido cefalorraqudeo, que es el lquido que rodea el cerebro y
la mdula espinal. El aumento en la presin intracraneal tambin puede
deberse a una elevacin de la presin dentro del cerebro mismo. Esto puede
ser causado por una masa (como un tumor), sangrado dentro del cerebro o
lquido alrededor de ste, o inflamacin dentro del cerebro mismo.

Un aumento en la presin intracraneal es un problema grave. La presin

puede daar el cerebro o la mdula espinal, al ejercer presin sobre
estructuras cerebrales importantes y restringir el flujo sanguneo hacia el
cerebro.

HIPERNATREMIA
La hipernatremia supone una relacin sodio/agua plasmtica mayor
de la normal. Aunque el lmite superior normal de la natremia es 145 mEq/l,
en general solo se diagnostica hipernatremia cuando se superan los 150
mEq/l.; esto supone siempre aumento de la osmolaridad y de la tonicidad
plasmticas.
Las hipernatremias representan la gran mayora de los estados
hiperosmolares que se ven en clnica. Sin embargo, y como se ha indicado
anteriormente, la hipernatremia per se no permite valorar ni la cantidad total
de sodio ni el estado del volumen extracelular; ambos pueden ser altos,
normales o bajos.

10

JUSTIFICACION:
El inoculo y genera fases agudas, hemorragias y alteraciones despus de
la cual aborda el sistema nervioso central.

La inoculacin intracraneal a ratones con solucin salina en ratones con

tejido cerebral daado por la mala inoculacin u otro, desarrollan en
cuestin de das parlisis flcida en las patas y mueren.

La deshidratacin del ratn N3 se debe a que la solucin salina al 10% es

aplicada en caso de hipernatremia, que hace referencia al incremento
de volumen en relacin sodio/agua, influyendo la Solucin salina en la
regulacin de este a travs de la deshidratacin.

Ratn N2 Las crisis convulsivas que se presentan despus de un traumacraneoenceflico se clasifican en convulsiones tempranas y en
convulsiones tardas. Las convulsiones tempranas postraumticas (CTP) se
definen como aquellas convulsiones que ocurren dentro de los primeros 7
das del trauma, mientras las convulsiones tardas ocurren despus de los 7
das y se les denomina tambin epilepsia postraumtica. Que puede
haberse desarrollado debido a un Hematoma intracerebral ocurrido
durante la inoculacin.
Generalmente se presenta una relacin inversa entre la concentracin
del sodio plasmtico y el volumen de agua corporal: las hiponatremias
son indicativas de aumento de agua corporal (sobre hidvelocidadcin) y
las
hipernetremias
de
la
disminucin
de
agua
corporal
(deshidvelocidadcin). Mientras que la hipernatremia, siempre se asocia
a hipertonicidad, la hiponatremia, puede ser asociada con una tonicidad
normal, baja o alta.
CONCLUSION:
La solucin salina, clnicamente, tiene resultados positivos, con efectos que logran
una disminucin de la presin intracraneal parecida a la que se obtiene con el
manitol. El efecto es transitorio, el uso adecuado de esta solucin puede traer
grandes beneficios, as como su mal uso grandes complicaciones a nivel cerebral.

11

BIBLIOGRAFIA
http://www.medynet.com/usuarios/jraguilar/Trauma%20Craneoencefalico.p
df
http://www.aibarra.org/apuntes/criticos/guias/endocrino/trastornos_del_sodi
o.pdf
http://tratado.uninet.edu/c050203.html
http://www.medwave.cl/link.cgi/Medwave/PuestaDia/Congresos/591
http://books.google.com.pe/books?id=tp4MbDTiW_YC&pg=PA150&dq=INO
CULACION+INTRACRANEAL++EN+RATONES&hl=es&sa=X&ei=lmJ_VM7bMMu_
ggSp04CoAg&ved=0CDAQ6AEwAw#v=onepage&q=INOCULACION%20INTR
ACRANEAL%20%20EN%20RATONES&f=false
http://www.jove.com/video/3157/una-gua-sencilla-mtodo-de-tornillo-paraintracraneal-estudios?language=Spanish
https://fundacionannavazquez.wordpress.com/hidrocefalia/

12

ANEXO 1:

ANEXO 2:
Se recomienda un rango de pH de trabajo de 4,5-8 (Waynforth and Flecknell,
1992) teniendo en cuenta que el grado de tolerancia de pH para las
diferentes vas de administracin es:
Va oral > Va intravenosa > Va intraperitoneal > Va intramuscular > Va
subcutnea Va intradrmica
El pH, por s solo, no es un indicador suficiente del potencial irritante ya que la
irritabilidad depende tambin de la concentracin y del punto de ionizacin
(pK) del compuesto. Estos factores, as como la solubilidad,
biocompatibilidad, viscosidad y esterilidad, debern ser valorados antes de
proceder a la inoculacin del compuesto en cuestin por cualquiera de las
vas mencionadas.